Comparison of 9 Qualitative HBsAg Assays 179 에따르면, HBsAg 검사참여기관수가 2001년 376기관에서 2008년 702개기관으로계속증가하였으며, 이와더불어면역크로마토그래피법으로 HBsAg을검사한기관의비율도 2001 년 6.6%

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혜나 우
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1 Korean J Lab Med 2010;30: DOI /kjlm Original Article Diagnostic Immunology Comparison of Nine Different Qualitative HBsAg Assay Kits Jinyoung Yang, M.D. 1, Jong-Hyun Kim, M.D. 2, and Yeongsic Kim, M.D. 1 Departments of Laboratory Medicine 1 and Pediatrics 2, College of Medicine, The Catholic University of Korea, Seoul, Korea Background : Qualitative hepatitis B surface antigen (HBsAg) assay kits are still commonly used in Korea where hepatitis B virus (HBV) infection is endemic. The accurate determination of HBsAg plays a crucial role in the diagnosis and prevention of HBV infection, especially in endemic areas. The aim of this study was to compare the detection sensitivities of 9 qualitative HBsAg assay kits. Methods : Seven pooled sera with HBsAg concentration ranging from 0.14 IU/mL to IU/mL were prepared. The HBsAg concentration of each pooled serum was determined by a quantitative HBsAg assay, Architect HBsAg (Abbott Laboratories, Ireland). The fully automated immunoassay kits included Elecsys HBsAg (Roche Diagnostics, Germany) and Immulite 2000 HBsAg (DPC, USA) and the rapid tests included 5 immunochromatographic assay (ICA) kits and 2 reverse passive hemagglutination assay (RPHA) kits. Results : Elecsys HBsAg (Roche Diagnostics) showed positive result in pooled serum with HBsAg concentration of 0.14 IU/mL, but Immulite 2000 HBsAg (DPC) showed negative result in the same concentration. Although ICA kits showed variable results among different assay kits, all of them showed negative results in pooled sera with HBsAg concentration of 1.89 IU/mL. Two RPHA kits showed negative results in pooled sera with HBsAg concentration of 7.98 IU/mL. Conclusions : Although ICAs were more sensitive than RPHAs, they had variable sensitivities for HBsAg and were less sensitive than the automated immunoassay kits. Therefore, ICAs and RPHAs should be used with caution in the screening tests for HBsAg and their sensitivities need to be improved. (Korean J Lab Med 2010;30:178-84) Key Words : HBsAg, Immunochromatographic assay, Reverse passive hemagglutination assay 서 전세계적으로약 3억 5천명이 B형간염바이러스 (hepatitis B virus, HBV) 에감염되어있으며그중매년 1백만명이 B형 Received : December 16, 2009 Manuscript No : KJLM Revision received : February 2, 2010 Accepted : February 2, 2010 Corresponding authors : Yeongsic Kim, M.D. Department of Laboratory Medicine, The Catholic University of Korea, St. Vincent s Hospital, 93-6 Ji-dong, Paldal-gu, Suwon , Korea Tel : , Fax : yeongsik@catholic.ac.kr Jong-Hyun Kim, M.D. Department of Pediatrics, The Catholic University of Korea, St. Vincent s Hospital, 93-6 Ji-dong, Paldal-gu, Suwon , Korea Tel : , Fax : jh00mn@catholic.ac.kr * 본연구는보건복지부질병관리본부 2007-E 에의해이루어짐. 론 간염질환으로사망하고있다 [1]. 만성보유자는 HBV 전파의주요감염원으로특히증상이없는임산부와헌혈자의 HBV 감염여부를파악하는것이 B형간염의전파를막는데매우중요하다고할수있다. 1983년 HBV 백신이한국에도입된이후 HBV의유병률이점차감소하였지만 1998년보건복지부에서시행한실태조사에의하면, 한국인 10세이상남자의 5.1% 와여자의 4.1% 에서 B형간염표면항원 (hepatitis B surface antigen, HBsAg) 이양성으로나타나아직도 B형간염환자가많은것으로나타나고있다 [2]. 유병률이높은지역에서 HBsAg 검사는 B형간염을선별하는데많이이용되고있는데여러가지검사방법들중에서면역크로마토그래피법 (immunochromatographic assay, ICA) 이나역수동혈구응집법 (reverse passive hemagglutination assay, RPHA) 과같은간이검사방법도많이이용되고있다. 최근대한임상검사정도관리협회면역혈청검사신빙도조사결과보고서 178

2 Comparison of 9 Qualitative HBsAg Assays 179 에따르면, HBsAg 검사참여기관수가 2001년 376기관에서 2008년 702개기관으로계속증가하였으며, 이와더불어면역크로마토그래피법으로 HBsAg을검사한기관의비율도 2001 년 6.6% 에서 2002년 11.8%, 2003년 15.8%, 2004년 18.7%, 2005년 20.9%, 2006년 20.3%, 2007년 21.8%, 2008년 21.9% 로점점더증가하는것으로나타났다 [3-10]. 그러나유병률이높은국내에서민감도가낮은간이검사를사용하는것은 B형간염을초기에진단하고그전파를막는데효율적이지않을수있다. 최근환자검체를대상으로면역크로마토그래피법이나역수동혈구응집법을이용한 HBsAg 검사를민감도가좋은효소면역검사법 (enzyme immunoassay, EIA) 이나화학발광면역검사법 (chemiluminescent immunoassay, CLIA) 과비교한연구들이발표되었다. 그러나그결과들이상이하여검사결과해석에어려움이있다 [11-14]. 최근 WHO는 HBsAg 검사결과를정확히판단하기위해검사결과단위를 IU/mL로보고하도록권고하고있다 [11]. 본연구는혼주혈청 (pooled sera) 을제조하여단계별 HBsAg 농도에따른면역크로마토그래피법, 역수동혈구응집법, 그리고여러자동화 CLIA법을이용한 HBsAg 검사들의진단적가치를비교해보고자하였다. 재료및방법 1. 혼주혈청의제조 2007년 7월부터 10월까지가톨릭대학교성빈센트병원진단검사의학과에의뢰된건강검진센터내원환자의혈액검체를선별하여혼주혈청제조에이용하였다. 육안상맑고노란색을띠며, HIV 음성, C형간염바이러스 (hepatitis C virus, HCV) 음성, Hb <30 mg/dl, total protein g/dl, bilirubin <1.5 mg/dl, glucose mg/dl을만족하는검체들 [15] 중 Architect HBsAg과 anti-hbs (Abbott Laboratories, Sligo, Ireland) 검사에서모두음성인검체 20개를선택하여 -70 에서냉동보관하였다. 이검체들은이후제조할 HBsAg 양성혼주혈청의희석시해동하여혼합하여사용하였다. 다양한항원을가진혼주혈청을만들기위해 Architect HBsAg (Abbott Laboratories) 검사에서양성으로판정된 15명의환자에서얻은혈청을혼합해서 18시간동안 4 에서교반기 (IKA Co., Staufen, Germany) 를이용하여느린속도로균질화시켜서혼주혈청을 1차로만들었다. 그리고여기에앞서언급한 HBsAg와 B형간염표면항체 (hepatitis B surface antibody, anti-hbs) 가음성인혈청을양을다양하게추가하여일곱가 지서로다른농도를갖도록하였다. 그런후 18 시간동안 4 에서교반기를이용해균질화시킨혈청을 0.2 mm DISMIC-25 cs filter (Advantec, Tokyo, Japan) 를이용하여여과시켜일곱가지농도의 HBsAg 혼주혈청을만든후 1.5 ml 튜브에분주하여검사를실시할때까지 -70 에서냉동보관하였다 [15]. 혼주혈청의균질성을확인하기위하여위와동일한방법으로두가지농도의혼주혈청을제조하여 20개로분주하여냉동보관하였다. 두가지농도의냉동보관된검체들을하루에한개씩해동하여정량검사인 Architect HBsAg (Abbott Laboratories) 으로반복검사하였고 20일동안검사한측정치에대한변이계수로그균질성정도를평가하였다. 2. 정량검사각혼주혈청의 HBsAg 농도를 Architect HBsAg (Abbott Laboratories) 을이용하여반복측정하여평균을구하였다. Architect HBsAg (Abbott Laboratories) 은화학발광미세입자면역검사법 (chemiluminescent microparticle immunoassay, CMIA) 을이용하여 HBsAg농도를측정하는데 HBsAg 농도는 WHO International Standard (Subtype ad; NIBSC code 80/549) 에의해결정된 calibration curve에의해계산된다 [16]. Architect HBsAg (Abbott Laboratories) 의정량 calibration은 6 point master calibration을이용해서설정된 4 parameter logistic curve 모델로각 calibrator당 95% 의신뢰구간불확실성을가지고있다. 본검사에서는 0.5 miu/ml 와 miu/ml 두레벨의 calibrator를사용하였으며 95% 신뢰구간에서각각 0.010과 3.85의불확실성을갖고있다. 기기회사에따르면 Architect HBsAg (Abbott Laboratories) 의검출한계는 0.05 IU/mL이며 250 IU/mL까지측정할수있다고제시하고있다. 3. 정성검사본연구에서평가된정성검사는총아홉가지로, 그중다섯가지는면역크로마토그래피법, 두가지는역수동혈구응집법, 한가지는화학발광면역검사법, 그리고나머지한가지는전기적화학발광면역검사법 (electrochemiluminescent immunoassay, ECLIA) 이었고이것들을사용해서각혼주혈청을반복측정하였다. 면역크로마토그래피법과역수동혈구응집법은각각동일한 lot를사용하여한검체당두번씩측정하였으며, 불일치한결과를보일경우에는한번더측정하여두번의결과가

3 180 Jinyoung Yang, Jong-Hyun Kim, and Yeongsic Kim 일치하는것으로준하였다. 자동화검사법인화학발광면역검사법과전기적화학발광면역검사법은각장비로두번씩측정하여평균값을구하였다. 면역크로마토그래피법은 nitrocellulose strip으로구성되어있으며환자의혈청에 HBsAg이존재하는경우 colloidal gold 를부착시킨 anti-hbs와반응하여면역복합체 (immune complex) 를형성한다. 이복합체는 membrane에고정된두번째항체에의해잡히게된다. 일정시간경과후대조선과검량선모두붉은선으로나타날때양성으로판단하였다. 이연구에서사용된면역크로마토그래피법은모두국내산으로 Biotracer HBsAg Rapid Card (BioFocus Co., Uiwang, Korea), Bioline HBsAg (Standard Diagnostics, Yongin, Korea), HBsAg Card (Humasis Co., Anyang, Korea), Genedia HBsAg Rapid Device (Green cross Life Sciences Co., Eumseong, Korea), Asan Easy Test HBs Strip (Asan Pharm. Co., Hwaseong, Korea) 이었다. 역수동혈구응집법의원리는적혈구에정제된 IgG anti-hbs 를코팅하여감작시킨후이감작혈구가환자혈청내에있는 HBsAg와반응하여일으키는응집반응을이용하는것이다. 응집이일어나는경우를양성으로판단하였다. 평가한역수동혈구응집법역시모두국내산으로 Mycell II HBsAg (Shinyang Chemical Co., Seoul, Korea) 과 Asan HBs (Asan Pharm. Table 1. Homogeneity of two pooled sera Pooled sera Mean (IU/mL) SD (IU/mL) *Measurements: twice a day, for 20 days. CV (%) Within-run Total 1 (N=20)* (N=20)* Co., Hwaseong, Korea) 이었다. Immulite 2000 HBsAg (DPC, Los Angeles, CA, USA) 은 CLIA로검체의 signal과 cutoff signal의비 (S/CO) 가 1 이상인경우를양성으로판단하며 1 미만인검체는음성으로간주하였다. Elecsys HBsAg (Roche Diagnostics, Mannheim, Germany) 는 ECLIA로 WHO 2nd International Standard (subtype adw2, genotype A, NIBSC code 00/588) 에의해결정된 calibration curve를측정에이용하였다. 이검사는결과단위로 cutoff index (COI) 를이용하고 COI가 1 이상이면 HBsAg 양성, 1 미만이면음성으로보고하였다. 결과제조된두가지농도의혼주혈청을 20일동안하루에한개씩해동하여오전과오후각각 2번측정한검사결과는다음과같았다 (Table 1). 두가지혼주혈청의농도는각각 1.80 IU/mL와 11.5 IU/mL HBsAg이었고, within-run CV 값은각각 3.57% 와 4.90% 이었으며, total CV 값은각각 4.98% 와 6.14% 이었다. Architect HBsAg (Abbott Laboratories) 의경우 0.23 IU/mL 와 4.68 IU/mL의농도에서 within-run CV가각각 4.6% 와 4.1%, total CV가각각 7.7% 와 7.2% 로제시되어있으므로이를고려했을때이번연구에제조된혼주혈청들은균질한것으로판단하였다. Architect HBsAg (Abbott Laboratories) 으로측정한혼주혈청의농도는 0.14, 0.47, 1.54, 1.89, 5.73, 7.98, IU/mL 이었다 (Table 2). Immulite 2000 HBsAg (DPC) 검사에서 0.14 IU/mL 농도의혼주혈청은음성으로측정되었으나, 0.47 IU/mL 농도이상부터는양성으로측정되었다. Elecsys HBsAg (Roche Table 2. Comparison of HBsAg results between different qualitative assay kits Pooled sera ARCHIT (IU/mL) Quantitative ELEC (COI) IMMUL (S/CO) Qualitative ICA RPHA BT BO HB GN AE MY AS P (0.47) N (1.55) N N N N N N N P (1.54) P (4.09) N N N N N N N P (2.84) P (12.07) N N N N N N N P (10.70) P (14.68) N N N N N N N P (16.55) P (51.19) P P N N N N N P (54.90) P (73.80) P P P N P N N P (129.00) P (293.60) P P P P P P N Abbreviations: ARCHIT, Architect HBsAg; ELEC, Elecsys HBsAg; IMMUL, Immulite 2000 HBsAg; ICA, immunochromatographic assay; RPHA, reverse passive hemagglutination assay; BT, Biotracer HBsAg Rapid Card; BO, Bioline HBsAg; HB, HBsAg Card; GN, Genedia HBsAg Rapid Device; AE, Asan Easy Test HBs Strip; MY, Mycell II HBsAg; AS, Asan HBs; P, positive; N, negative.

4 Comparison of 9 Qualitative HBsAg Assays 181 Immulite 2000 HBsAg (S/CO) y=4.37x+1.07 (R 2 =0.963) Elecsys HBsAg (COI) y=9.85x-2.72 (R 2 =0.999) Architect HBsAg (IU/mL) Fig. 1. Correlation between HBsAg results measured by Architect HBsAg (IU/mL) and by Immulite 2000 HBsAg (S/CO). Diagnostics) 검사에서는일곱가지혼주혈청모두에서양성으로측정되었다. Architect HBsAg (Abbott Laboratories) 으로측정한혼주혈청농도와 Immulite 2000 HBsAg (DPC) 으로측정한측정치 (S/CO 수치 ) 는좋은상관관계를나타내었다 (r=0.981). Architect HBsAg (Abbott Laboratories) 으로측정한혼주혈청농도와 Elecsys HBsAg (Roche Diagnostics) 으로측정한측정치 (COI 수치 ) 또한매우밀접한상관관계를보였다 (r=0.999) (Fig. 1, 2). 면역크로마토그래피법과역수동혈구응집법은각각동일한 lot를사용하여한검체당두번씩측정하였다. 그결과농도가 0.14 IU/mL, 0.47 IU/mL, 1.54 IU/mL, 1.89 IU/mL인네가지혼주혈청에서모두음성으로나타났다. 다섯가지면역크로마토그래피법중 Biotracer HBsAg Rapid Card (BioFocus Co.) 와 Bioline HBsAg (Standard Diagnostics) 은농도가 5.73 IU/mL 이상인혼주혈청에서양성을나타냈고, HBsAg Card (Humasis Co.) 와 Asan Easy Test HBs Strip (Asan Pharm. Co.) 은농도가 7.98 IU/mL 이상인혼주혈청에서양성을나타냈으며, Genedia HBsAg Rapid Device (Green cross Life Sciences Co.) 는농도가 IU/mL인혼주혈청에서만양성을나타냈다. 두가지역수동혈구응집법중 Mycell II HBsAg (Shinyang Chemical Co.) 은 IU/mL인혼주혈청에서만양성을나타냈고, 나머지 Asan HBs (Asan Pharm. Co.) 는 IU/mL인혼주혈청에서도음성을나타냈다. 고 HBsAg 검사는유병률이높은지역에서 B형간염을선별검사하는데자주이용되고있다. HBV 전파를막기위해민감도가 찰 Architect HBsAg (IU/mL) Fig. 2. Correlation between HBsAg results measured by Architect HBsAg (IU/mL) and by Elecsys HBsAg (COI). 높은검사시약으로 HBsAg을조기에검출하는것은중요한방법중하나이다. 지금까지여러연구에서정성검사의민감도를비교하였는데현재이용되고있는 HBsAg 검사들이각기다른단위로결과를보고하고있어여러장비간측정치를객관적으로비교하기어려웠다. 최근 WHO에서 HBsAg에대한네가지표준물질, 즉 WHO 2nd International Standard (IU/mL) 와 Paul Ehrlich Standard (ng/ml), French Standard (ng/ml), Abbott Standard (ng/ml) 를비교분석한결과 1 IU는 Paul Ehrlich Standard 0.43 ng/ml, French Standard 1.9 ng/ml, Abbott Standard 5.6 ng/ml에해당하는것으로보고하면서, ng/ml로표현된여러가지표준물질의농도가서로달라결과해석에큰차이를보이므로 HBsAg 농도단위를 IU로할것을권고하였다 [11]. 본연구에서혼주혈청 HBsAg의농도결정에사용한방법은 Architect HBsAg (Abbott Laboratories) 으로 calibration curve를 WHO International Standard (HBsAg subtype ad; NIBSC code 80/549) 를사용하여설정했기때문에측정단위가 WHO에서권장한 IU/mL와동일하고 0.05 IU/mL까지측정가능하며 [16, 17], 현재여러연구에서정량검사로이용되고있다 [18-20]. Architect HBsAg (Abbott Laboratories) 검사법으로 0.14 IU/mL로측정된혼주혈청이 Elecsys HBsAg (Roche Diagnostics) 에서도양성으로나타나두가지검사방법모두 0.14 IU/mL 이상의농도는측정하는것으로나타났다. 그러나 Immulite 2000 HBsAg (DPC) 은 0.14 IU/mL HBsAg 농도의혼주혈청에서음성으로나타나 Architect HBsAg (Abbott Laboratories) 이나 Elecsys HBsAg (Roche Diagnostics) 에비해민감도가좋지않은것으로나타났다. 이런결과는 Weber 등 [21] 의연구와도일치하는데, 이들은 Paul Ehrlich Standard와 WHO International standard (HBsAg subtype

5 182 Jinyoung Yang, Jong-Hyun Kim, and Yeongsic Kim ad; NIBSC code 80/549) 를이용해서 Immulite 2000 HBsAg (DPC) 과 Elecsys HBsAg (Roche Diagnostics) 검사법을비교하였으며, Elecsys HBsAg (Roche Diagnostics) 의검출한계가 IU/mL로 0.1 IU/mL인 Immulite 2000 HBsAg (DPC) 보다민감도가더좋은것으로보고하였다. Architect HBsAg (Abbott Laboratories) 과 Elecsys HBsAg (Roche Diagnostics) 을비교분석한 Huh 등 [22] 의연구에서도두가지검사방법모두 IU/mL의최소검출농도를나타내어본연구의결과와비슷하였다. 본연구에서다섯가지면역크로마토그래피법중민감도가가장좋은것은 Biotracer HBsAg Rapid Card (BioFocus Co.) 와 Bioline HBsAg (Standard Diagnostics) 이었으며, 검출한계는두가지모두 IU/mL 사이에있는것으로나타났다. 또한 HBsAg Card (Humasis Co.) 와 Asan Easy Test HBs Strip (Asan Pharm. Co.) 의검출한계는 IU/mL 사이, Genedia HBsAg Rapid Device (Green cross Life Sciences Co.) 의검출한계는 IU/mL 사이에존재하여, 이다섯가지면역크로마토그래피법의민감도가 Architect HBsAg (Abbott Laboratories) 이나 Immulite 2000 HBsAg (DPC) 에비해훨씬못미치는것으로나타났다. 이러한결과는 4가지서로다른 HBsAg 농도를가진패널을구성하여여러개의 HBsAg 검사키트의민감도차이를분석한 WHO의연구결과와비슷하다. 그연구결과에따르면, Bioline HBsAg (Standard Diagnostics) 은 2.06 IU/mL까지양성으로, Asan Easy Test HBs Strip (Asan Pharm. Co.) 은 IU/mL 사이, Genedia HBsAg Rapid Device (Green cross Life Sciences Co.) 는 8.25 IU/mL까지양성으로측정되었다고보고하였다 [11]. 최근국내연구에서도면역크로마토그래피법들은낮은 HBsAg 농도에서음성을나타내는것으로보고하였다. Cha 등 [12] 의연구에의하면, 미세입자효소면역검사법 (Abbott Laboratories, Abbott Park, IL, USA) 으로검사한양성검체를대상으로했을때세가지면역크로마토그래피법시약은각각 S/N value 이하, 이하, 이하의검체들은음성으로판정하였다 ( 양성기준치는 S/N value 2.0 이상 ). 또한두가지면역크로마토그래피법시약을비교분석한 Whang 등 [13] 의연구에서도두가지모두 AxSYM HBsAg (Abbott Laboratories, USA) 검사상 S/N value 2와 10 사이의검체는모두음성으로나타났다. 본연구에서평가된다섯가지면역크로마토그래피법중 Biotracer HBsAg Rapid Card (BioFocus Co.) 와 Asan Easy Test HBs Strip (Asan Pharm. Co.) 은제조회사에서각각 1 ng/ml와 2 ng/ml의검출한계를제시하였으나그단 위가제조회사의임의적인단위이기때문에그수치로비교하기는어려운것으로판단되었다. 최근여러연구를보면면역크로마토그래피법을이용한 HBs- Ag 검사제품들의민감도가 95% 이상으로보고되고있는데이는평가에이용되었던검체중저농도 HBsAg 검체의비율이높지않았기때문으로판단된다 [13, 14]. 급성 B형간염환자와만성 B형간염환자의경우혈중 HBsAg 농도가대부분 100 IU/mL 이상이기때문에이환자들에서면역크로마토그래피법으로 HBsAg을측정하면양성으로나타날수밖에없다 [23-25]. 그러나급성 B형간염초기, 급성 B형간염감염후회복기, 그리고만성 B형간염환자중일부에서혈중 HBsAg 농도가 10 IU/mL 미만으로나타나고있고, 최근중국인 8,089명을대상으로 HBs- Ag 농도를측정한연구에서도 HBsAg 양성자 816명중 189명 (23.6%) 이 5 ng/ml 이하인저농도 HBsAg을가지고있는것으로보고되고있기때문에중국과 HBV 감염률이비슷한국내에서면역크로마토그래피법을이용한 HBsAg 검사제품을사용할때에는해석상주의가필요할것으로판단된다 [11, 26]. 본연구에서평가되었던두가지역수동혈구응집법중 Mycell II HBsAg (Shinyang Chemical Co.) 의검출한계는 IU/mL 사이, Asan HBs (Asan Pharm. Co.) 의검출한계는 IU/mL를초과하는것으로나타나역수동혈구응집법이다섯가지면역크로마토그래피법에비해민감도가좋지않은것으로나타났다. 이런결과는기존연구와도일치하였다 [12, 27]. 결론적으로면역크로마토그래피법은 HBsAg 농도가 1.89 IU/mL 이하인검체에서, 그리고역수동혈구응집법은 7.98 IU/ ml 이하인검체에서 HBsAg을검출할수없었기때문에이검사방법들을 HBsAg 선별검사로사용할때에는주의가필요할것으로판단된다. 요약배경 : B형간염바이러스유병률이높은한국에서아직도 B형간염표면항원 (hepatitis B surface antigen, HBsAg) 정성검사가많이사용되고있다. HBsAg의정확한검사는특히유병률이높은지역에서 B형간염을진단하고예방하는데중요한역할을한다. 본연구에서는아홉가지서로다른 HBsAg 정성검사의 HBsAg 검출민감도를비교평가하였다. 방법 : HBsAg 농도가 IU/mL 사이에있는일곱가지혼주혈청을자가제조하였다. 각혼주혈청의 HBsAg 농도는정량검사인 Architect HBsAg (Abbott Laboratories, Ireland) 을사용하여측정하였다. 자동화검사법은 Elecsys HBsAg

6 Comparison of 9 Qualitative HBsAg Assays 183 (Roche Diagnostics, Germany) 와 Immulite 2000 HBsAg (DPC, USA) 을이용하였고, 간이검사법으로는다섯가지면역크로마토그래피법제품과두가지역수동혈구응집법제품을이용하였다. 결과 : HBsAg 농도가 0.14 IU/mL인혈청에서 Elecsys HBsAg (Roche Diagnostics) 검사는양성이었으나, Immulite 2000 HBsAg (DPC) 은음성을나타냈다. 다섯가지면역크로마토그래피법의결과는제품에따라다양하였는데, HBsAg 1.89 IU/mL 이하의혈청에서는모두음성을나타냈으며, 두가지역수동혈구응집법은 7.98 IU/mL 이하의농도에서음성의결과를보였다. 결론 : 면역크로마토그래피법은역수동혈구응집법에비하여민감도는더우수하였으나제품에따라다양한민감도를보이며, 자동화검사법에비하여민감도가떨어지므로간이검사법들을 HBsAg 선별검사로사용할때에는주의해야하며, 이방법들의민감도개선이필요할것으로사료된다. 참고문헌 1. Lee WM. Hepatitis B virus infection. N Engl J Med 1997;337: Lee DH, Kim JH, Nam JJ, Kim HR, Shin HR. Epidemiological findings of hepatitis B infection based on 1998 National Health and Nutrition Survey in Korea. J Korean Med Sci 2002;17: Cha YJ, Kum DG, Kim SW, Kim TY, Kim JR, Kim HS, et al. Annual (2001). J Clin Pathol Qual Control 2002;24: ( 차영주, 금동길, 김성원, 김신규, 김재룡, 김현숙등. 면역혈청검사신빙도조사결과보고 (2001). 임상병리와정도관리 2002; 24: ) 4. Cha YJ, Kum DG, Kim SW, Kim TY, Kim JR, Kim HS, et al. Annual (2002). J Lab Med Qual Assur 2003;25: ( 차영주, 금동길, 김성원, 김신규, 김재룡, 김현숙등. 면역혈청검사신빙도조사결과보고 (2002). 임상검사와정도관리 2003;25:51-71.) 5. Cha YJ, Kwon SY, Kum DG, Kim SW, Kim TY, Kim JR, et al. Annual (2003). J Lab Med Qual Assur 2004;26: ( 차영주, 권소영, 금동길, 김성원, 김신규, 김재룡등. 면역혈청검사신빙도조사결과보고 (2003). 임상검사와정도관리 2004;26:47-69.) 6. Cha YJ, Kwon SY, Kum DG, Kim SW, Kim TY, Kim JR, et al. Annual (2004). J Lab Med Qual Assur 2005;27: ( 차영주, 권소영, 금동길, 김성원, 김신규, 김재룡등. 면역혈청검사신빙도조사결과보고 (2004). 임상검사와정도관리 2005;27:37-57.) 7. Cha YJ, Kwon SY, Kim TY, Kim JR, Kim HS, Park MH, et al. Annual (2005). J Lab Med Qual Assur 2006;28: ( 차영주, 권소영, 김신규, 김재룡, 김현숙, 박명희등. 면역혈청검사신빙도조사결과보고 (2005). 임상검사와정도관리 2006;28:41-61.) 8. Cha YJ, Kwon SY, Kim TY, Kim JR, Kim HS, Park MH, et al. Annual (2006). J Lab Med Qual Assur 2007;29: ( 차영주, 권소영, 김신규, 김재룡, 김현숙, 박명희등. 면역혈청검사신빙도조사결과보고 (2006). 임상검사와정도관리 2007;29:45-64.) 9. Cha YJ, Kwon SY, Kim TY, Kim JR, Kim HS, Park MH, et al. Annual (2007). J Lab Med Qual Assur 2008;30: ( 차영주, 권소영, 김신규, 김재룡, 김현숙, 박명희등. 면역혈청검사신빙도조사결과보고 (2007). 임상검사와정도관리 2008;30:49-74.) 10. Cha YJ, Kwon SY, Kim TY, Kim JR, Kim HS, Park MH, et al. Annual (2008). J Lab Med Qual Assur 2009;31: ( 차영주, 권소영, 김신규, 김재룡, 김현숙, 박명희등. 면역혈청검사신빙도조사결과보고 (2008). 임상검사와정도관리 2009;31:49-72.) 11. WHO Working Group on Hepatitis and HIV Diagnostic Kits. Report of a WHO collaborative study to assess the suitability of a candidate replacement International standard for HBsAg and a reference panel for HBsAg and to calibrate the candidate standard in IU. WHO/BS/ Geneva: World Health Organization, Cha YJ, Yang JS, Chae SL. Evaluation of indigenously manufactured immunochromatographic assay systems for rapid detection of hepatitis B surface antigen and antibody. Korean J Lab Med 2006;26:52-7. ( 차영주, 양주석, 채석래. 국내에서생산되는면역크로마토그래피법을이용한 B형간염표면항원및항체검사제품의평가. 대한진단검사의학회지 2006;26:52-7.) 13. Whang DH and Um TH. Comparison of immunochromatography assays and quantitative immunoassays for detecting HBsAg and anti-hbs. Korean J Lab Med 2005;25: ( 황동희및엄태현. B형간염항원및항체검사를위한신속검사법과정량적효소면역법의비교. 대한진단검사의학회지2005;25: ) 14. Lau DT, Ma H, Lemon SM, Doo E, Ghany MG, Miskovsky E, et al. A rapid immunochromatographic assay for hepatitis B virus screening. J Viral Hepat 2003;10:331-4.

7 184 Jinyoung Yang, Jong-Hyun Kim, and Yeongsic Kim 15. National Committee for Clinical Laboratory Standards. Preparation and validation of commutable frozen human serum pools as secondary reference materials for cholesterol measurement procedures: approved guideline. NCCLS document C37-A. Wayne, PA: NCCLS, Deguchi M, Yamashita N, Kagita M, Asari S, Iwatani Y, Tsuchida T, et al. Quantitation of hepatitis B surface antigen by an automated chemiluminescent microparticle immunoassay. J Virol Methods 2004;115: Chen CH, Lee CM, Wang JH, Tung HD, Hung CH, Lu SN. Correlation of quantitative assay of hepatitis B surface antigen and HBV DNA levels in asymptomatic hepatitis B virus carriers. Eur J Gastroenterol Hepatol 2004;16: Chen J, Wang Z, Guo Y, Peng J, Sun J, Ahmed CS, et al. Serum HBsAg changes in HBeAg positive chronic hepatitis B patients with continuous viral load reductions during treatment with adefovir or peg-interferon-alpha-2a. Antiviral Res 2009;81: Muhlbacher A, Weber B, Burgisser P, Eiras A, Cabrera J, Louisirirotchanakul S, et al. Multicenter study of a new fully automated HBsAg screening assay with enhanced sensitivity for the detection of HBV mutants. Med Microbiol Immunol 2008;197: Moucari R, Mackiewicz V, Lada O, Ripault MP, Castelnau C, Martinot-Peignoux M, et al. Early serum HBsAg drop: a strong predictor of sustained virological response to pegylated interferon alfa-2a in HBeAg-negative patients. Hepatology 2009;49: Weber B, Dengler T, Berger A, Doerr HW, Rabenau H. Evaluation of two new automated assays for hepatitis B virus surface antigen (HBsAg) detection: IMMULITE HBsAg and IMMULITE 2000 HBs- Ag. J Clin Microbiol 2003;41: Huh HJ, Chae SL, Cha YJ. Comparison study with enzyme immunoassay and chemiluminescence immunoassay for hepatitis B virus surface antigen detection. Korean J Lab Med 2007;27: ( 허희진, 채석래, 차영주. 효소면역측정법과화학발광면역측정법을이용한 B형간염표면항원검사의비교. 대한진단검사의학회지 2007;27:355-9.) 23. Rodella A, Galli C, Terlenghi L, Perandin F, Bonfanti C, Manca N. Quantitative analysis of HBsAg, IgM anti-hbc and anti-hbc avidity in acute and chronic hepatitis B. J Clin Virol 2006;37: Chan HL, Wong VW, Tse AM, Tse CH, Chim AM, Chan HY, et al. Serum hepatitis B surface antigen quantitation can reflect hepatitis B virus in the liver and predict treatment response. Clin Gastroenterol Hepatol 2007;5: Kohmoto M, Enomoto M, Tamori A, Habu D, Takeda T, Kawada N, et al. Quantitative detection of hepatitis B surface antigen by chemiluminescent microparticle immunoassay during lamivudine treatment of chronic hepatitis B virus carriers. J Med Virol 2005;75: Chen Y and Wu W. Determination of low level HBsAg in serum by microparticle enzyme immunoassay. Hepatobiliary Pancreat Dis Int 2002;1: Sato K, Ichiyama S, Iinuma Y, Nada T, Shimokata K, Nakashima N. Evaluation of immunochromatographic assay systems for rapid detection of hepatitis B surface antigen and antibody, Dainascreen HBsAg and Dainascreen Ausab. J Clin Microbiol 1996;34:

면역크로마토그래피법을이용한 B 형간염표면항원및항체검사 53 여러패드를연속적으로통과하여반응이일어나고, 이를일정시간경과후대조선 (control bar) 과검량선 (test bar) 을관찰하여판독한다. 따라서 ICA법은한단계로모든검사를마치게되므로간편하고경제적인장점이있다. 이

면역크로마토그래피법을이용한 B 형간염표면항원및항체검사 53 여러패드를연속적으로통과하여반응이일어나고, 이를일정시간경과후대조선 (control bar) 과검량선 (test bar) 을관찰하여판독한다. 따라서 ICA법은한단계로모든검사를마치게되므로간편하고경제적인장점이있다. 이 대한진단검사의학회지제 26 권제 1 호 2006 Korean J Lab Med 2006;26:52-7 원저 진단면역학 국내에서생산되는면역크로마토그래피법을이용한 B형간염표면항원및항체검사제품의평가 차영주 양주석 채석래 1 중앙대학교의과대학진단검사의학교실, 동국대학교의과대학진단검사의학교실 1 Evaluation of Indigenously Manufactured