172 Hyun Soo Kim, Cheol Hong Kim, Mina Hur, et al. 환자의림프구에서인터페론감마가분비되는지를항원항체반응원리를이용하여확인하는검사로결핵균항원에반응하는 T-림프구의대략적인정량측정이가능하다. 투베르쿨린검사와비교하였을때대부분의비결핵항산균이나

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1 Korean J Lab Med 2010;30:171-7 DOI /kjlm Original Article Diagnostic Immunology Clinical Usefulness of T-SPOT.TB Test for the Diagnosis of Tuberculosis Hyun Soo Kim, M.D. 1, Cheol Hong Kim, M.D. 2, Mina Hur, M.D. 3, In Gyu Hyun, M.D. 2, Min Jeong Park, M.D. 1, Wonkeun Song, M.D. 1, Ji-Young Park, M.D. 1, Hee Jung Kang, M.D. 1, and Kyu Man Lee, M.D. 1 Departments of Laboratory Medicine 1 and Internal Medicine 2, Hallym University College of Medicine, Seoul; Department of Laboratory Medicine 3, Konkuk University School of Medicine, Seoul, Korea Background : Tuberculosis-specific ELISPOT assay (T-SPOT.TB, Oxford Immunotec, UK) is a test that detects interferon-gamma producing T-cells after stimulating patient s lymphocytes with two kinds of tuberculosis-specific antigens (ESAT-6 and CFP-10). We evaluated clinical usefulness of T-SPOT.TB test in Korean adults with intermediate burden of tuberculosis and high rate of BCG vaccination at birth. Methods : T-SPOT.TB test was performed in 79 patients and 64 healthy volunteers and these patients and volunteers were classified into four groups: group 1, patients with active tuberculosis (n=30); group 2, patients with not-active tuberculosis (n=27); group 3, patients without tuberculosis (n=24); group 4, healthy volunteers without tuberculosis history (n=62). Positive rates and average spot counts of T-SPOT.TB test were obtained among these groups. Results : Positive rates of group 1 (96.4%) and group 2 (92.3%) were higher than those of group 3 (31.6%) and group 4 (27.4%) (P<0.0001). The sensitivity deduced from group 1 and specificity deduced from group 4 of T-SPOT.TB test were 96.4% and 72.6%, respectively. The average spot counts of group 1 and 2 were higher than those of group 3 and 4 (P<0.001). There was a tendency of increasing positive rate with increasing age. Overall agreement between T-SPOT.TB test and tuberculin skin test was 63.8% (kappa=0.29). Conclusions : T-SPOT.TB test would be a very useful screening and supplementary test for diagnosis of tuberculosis due to its high sensitivity. However, positive results of T-SPOT.TB should be cautiously interpreted because of high positivity in treated tuberculosis patients and healthy volunteers in Korea. (Korean J Lab Med 2010;30:171-7) Key Words : Tuberculosis, Interferon-gamma, ELISPOT 서 결핵은결핵균 (Mycobacterium tuberculosis) 의감염에의해서발생하므로결핵의확진은배양검사등으로환자의검체에서 Received : October 25, 2009 Manuscript No : KJLM Revision received : January 7, 2010 Accepted : January 18, 2010 Corresponding authors : Hyun Soo Kim, M.D. Department of Laboratory Medicine, Hallym University College of Medicine, Yeongdeungpo-dong, Yeongdeungpo-gu, Seoul , Korea Tel : , Fax : hskim0901@empal.com Cheol Hong Kim, M.D. Department of Internal Medicine, Hallym University College of Medicine, Yeongdeungpo-dong, Yeongdeungpo-gu, Seoul , Korea Tel : , Fax : kimch2002@hallym.or.kr 론 결핵균을증명해야한다. 그러나결핵균이배출되지않는잠복결핵 (latent infection) 이나폐외결핵, 객담배출이어려운소아환자에서의결핵진단은쉽지않아 X-ray 등다른여러가지검사와임상소견을종합하여판단해야한다. 전통적으로투베르쿨린검사가잠복결핵의유일한진단법이었으나비결핵항산균감염이나 BCG 접종에의한교차반응이있으므로국내에서와같이 BCG 접종률이높은경우는유용성이떨어지며, 감염, 영양결핍, 림프계를침범하는질환에서는위음성을초래할수있다 [1]. T-SPOT.TB 검사는잠복결핵의진단검사로최근 (2008년) 에미국 FDA 공인을받았으며활동성결핵의진단에도유용한것으로보고되고있다. 검사방법은 enzyme-linked immunospot analysis (ELISPOT) 기법을이용한다. 환자의림프구를분리하여일정수의림프구 (250,000 cells) 를 microwell에넣고 2종류의결핵균특이항원 (ESAT-6, CFP-10) 으로자극하여 171

2 172 Hyun Soo Kim, Cheol Hong Kim, Mina Hur, et al. 환자의림프구에서인터페론감마가분비되는지를항원항체반응원리를이용하여확인하는검사로결핵균항원에반응하는 T-림프구의대략적인정량측정이가능하다. 투베르쿨린검사와비교하였을때대부분의비결핵항산균이나 BCG 균주에는없고결핵균에만있는항원인 early secreted antigenic target 6-kDa (ESAT-6) 단백과 culture filtrate protein 10 (CFP-10) 을사용하여 BCG 접종에의한위양성을줄일수있으므로한국과같이 BCG 접종률이높은경우에유용한검사법으로생각된다. 또다른결핵균특이항원자극인터페론감마검사법인 QuantiFERON-TB Gold와비교하였을때내인성인터페론감마의영향을받지않으며, 환자의림프구수를일정하게맞추어반응시키므로림프구수가저하된면역억제환자에서유용하고결과의보존이가능하다는장점이있다. 그러나검사시간과노력이많이든다는단점을가지고있다 [1, 2]. T-SPOT.TB 검사에대한연구는다양한국가에서여러연구자에의해시행되었는데민감도는 % 로넓은범위에걸쳐보고되었으며, 대부분의연구에서 T-SPOT.TB 검사가 QuantiFERON-TB Gold (QFT-G) 검사보다민감도가높은것으로보고되었다 [2, 3]. 검사법의민감도와특이도는대상인구집단의특성에따라달라질수있으므로외국에서연구된민감도와특이도를국내에적용시킬수있을지는확인할필요가있다. 한국은대부분의국민이출생시 BCG 접종을받고있으며국내결핵유병률은 2004년에인구 10 만명당 65.4명이신고되어과거에는결핵유병률이높은국가였으나현재는중등도의결핵유병률을보이는국가로분류되고있다 [4-6]. 국내 T-SPOT.TB test의유용성에관한연구로국외학회지에보고된 2개의연구가있는데민감도는각각 96.7% 와 92% 로보고된바있다 [2, 7]. 그러나한연구 [7] 는환자군만을대상으로한연구였으며또다른연구 [2] 는대조군으로 15-16세고등학생만을대상으로한연구였으므로국내성인에서의 T-SPOT.TB의양성률에대한국내자료는없는실정이다. 이에저자들은중등도의결핵유병률을가지며 BCG 접종률이높은국내에서기존연구의민감도를재확인하고국내성인을대상으로 T-SPOT.TB 검사의임상적유용성을알아보고자하였다. 대상및방법 1. 대상 2008년 12 월부터 2009년 4월까지한강성심병원진단검사의학과에 T-SPOT.TB 검사가의뢰되었던환자 79명과건강한 자원자 64명을대상으로하였다. 본연구는한림대학교한강성심병원의학연구심의위원회 (institutional review board) 의심의를통과하였다. 모든환자에서결핵균도말검사및배양검사, 흉부 X선검사가시행되었으며, 일부환자에서는 PCR 검사나결핵피부반응검사도시행되었다. 자원자는모두자발적으로연구에참여한다는동의서를제출하였으며설문조사와면담을통해결핵병력이나결핵균노출위험도를확인하였다. T-SPOT. TB 검사와결핵피부반응검사, 흉부 X선, 항-HIV 검사가시행되었으며모든자원자는흉부 X선소견정상이었고항-HIV 검사음성이었다. 대상군을미국흉부학회 (American Thoracic Society, ATS) 분류를참조하여 [8] 다음과같이 4개의군으로분류하였다 (Table 1). 1군 : 활동성결핵환자 ( 결핵균배양양성또는결핵이의심되어결핵치료를시작한경우 ) 2군 : 비활동성결핵환자 ( 과거결핵치료의병력이있거나방사선판독에서과거결핵또는비활동성결핵소견이기술된경우 ) 3군 : 병력지검토상결핵으로진단할만한소견이없는환자 ( 비결핵환자 ) 4군 : 결핵병력이없는건강한자원자 (4-1군, 병원근무자 ; 4-2군비병원근무자 ) 2. T-SPOT.TB 검사 T-SPOT.TB검사 (T-SPOT.TB, Oxford Immunotec Ltd, Abingdon, UK) 는제조사의지침대로다음과같이시행하였다. 헤파린채혈관에혈액 8 ml를채취하여비중액을이용하여단핵구를분리하고 250,000 cells/100 ml로세포부유액을준비하였다. 항-인터페론감마항체가결합되어있는 microplate Table 1. Grouping of patients and healthy volunteers Group Characteristics N Group 1 TB, active patients AFB culture positive 19 Clinically suspected, anti-tb therapy 11 Group 2 TB, not-active patients Past TB history 14 Old or stable TB description in radiological report 13 Group 3 Patients without history or evidence of TB 24 Group 4 Healthy volunteers without TB history Group 4-1 Hospital workers 36 Group 4-2 Non-hospital workers 26 Total 143 Abbreviation: TB, tuberculosis.

3 T-SPOT.TB Test for Tuberculosis 173 의 4개 well ( 음성대조 well, ESAT-6 well, CFP-10 well, 양성대조 well) 에해당시약 (medium alone, ESAT-6, CFP-10, phytohemagglutinin) 을넣고분리된세포를 250,000개씩넣은후37 에서 16-20시간배양하였다. 다음날 well을세척하고, conjugate 시약과기질을넣어 spot을발현시켰다. 각 well 의 spot 수를기록하고양성 / 음성을제조사의지침에따라판독하였는데 ESAT-6 또는 CFP-10을넣은 well의 spot 수가음성대조 well에비해 2배이상이면서 6개이상의차이를보이는경우양성 (reactive) 으로판정하고이기준보다작을경우는음성 (non-reactive) 으로판정하였다. 음성대조 (Nil control) spot 수가 10개이상이거나양성대조 spot 수가 20개이하일경우는불명확 (indeterminate) 으로판정하였다. Spot 수는 2명의판독자가각각판독하였으며 2명판독자의육안판독, 확대경판독, ELISPOT 판독기 (CTL-ImmunoSpot S4 analyzer, Cellular Technology Ltd, Shaker Heights, OH, USA) 결과를종합하여최종적으로 spot 수를결정하였다. 3. 결핵피부반응검사 ( 투베르쿨린검사 ) 투베르쿨린검사는 2TU PPD RT23 (Statens Serum Institut, Copenhagen, Denmark) 를피내주사하는 Mantoux법을이용하였고 48-72시간사이에경결의크기를측정하여 10 mm 이상인경우양성으로판정하였다. 4. 결과분석 Microsoft사의 Excel 프로그램 (Microsoft corporation, Redmond, WA, USA) 을이용하여각해당군의도수와양성률을구하였고, 민감도와특이도, 95% 신뢰구간은 MedCalc version 11 (MedCalc Software, Mariakerke, Belgium) 를이용하여구하였다. ESAT-6 또는 CFP-10 중한쪽에서만양성인경우는양성으로판독하였다. 각군별양성률차이는카이제곱검증을하였고각군별 spot수의평균과표준편차를구하고각군별 spot수차이는 ANOVA (Analysis of Variance) 를시행하였다. P값이 0.05 미만인경우유의한것으로판단하였다. 결핵피부반응검사와 T-SPOT.TB 결과의총일치율, 양성일치율, 음성일치율을 2 2 table을작성하여계산하였으며 [9] Cohen s kappa (k) 를구하여 k치가 0.75 이상이면매우높은일치율, 면중등도의일치율, 0.40 이하면일치율이좋지않은것으로판단하였다 [10]. 결과 1. 각군에서 T-SPOT.TB 양성률자원자중 2명이결핵치료를받았던과거력이있으므로이 2 명을건강한자원자군 (4군) 이아닌비활동성결핵환자군 (2군) 으로분류하였다. 총 143명중 8명 (5.6%) 에서불명확결과 (indeterminate) 를보여이결과는분석에서제외하였는데, 불명확한결과를보인대상은 2군 2명, 3군 1명, 4군 5명이었고모두음성대조에서 10개이상의 spot을보였다. ESAT-6 또는 CFP-10 항원중한항원에만양성을보이는환자는총 24명 (17.8%) 이있었으며 ESAT-6만양성인환자가 12명, CFP-10만양성인환자가 12명이었다. 이중활동성결핵 Table 2. Positive rate and diagnostic validity of T-SPOT.TB test in the different groups of patients and healthy volunteers Group N Sex (M:F) Age (yr) T-SPOT.TB T-SPOT.TB Mean (SD) positive negative Positive rate Group : (18.4) % Group : (15.8) % Group : (17.4) % Group : (7.8) % Group : (8.6) % Group : (5.9) % Total : (18.2) % Sensitivity deduced from group % (95% CI: ) Sensitivity deduced from group 1 & % (95% CI: ) Specificity deduced from group 3 & % (95% CI: ) Specificity deduced from group % (95% CI: ) Specificity deduced from group % (95% CI: ) Group 1, 2, 3, 4: See Table 1. Abbreviations: SD, standard deviation; CI, confidence interval.

4 174 Hyun Soo Kim, Cheol Hong Kim, Mina Hur, et al. 환자군 (1군) 에속하는 7명은모두 CFP-10만양성으로나타났고 (P<0.05) 다른군 (2-4군) 에서는 ESAT-6와 CFP-10 항원의양성률에서유의한차이가없었다. 각군별 T-SPOT.TB 양성률은 Table 2에나타내었다. 활동성결핵환자, 비활동성결핵환자에서의 T-SPOT.TB 양성률은각각 96.4%, 92.3% 로높았으나, 비결핵환자군과건강한자원자군에서의양성률은 31.6%, 27.4% 로낮았다 (P<0.0001). 활동성결핵환자군은결핵균배양양성환자와결핵이의심되어결핵치료를시작한환자가모두포함되었으므로결핵균배양양성환자만을대상으로 T-SPOT.TB 검사의양성률은 94.7% (18/19) 로나타났다. 결핵배양양성이면서 T-SPOT.TB 음성을보인환자가 1명있었는데 73세남자환자로다른원인으로내원하였다가흉부 X선에서결핵이의심되는소견이있어기관지경검사후기관지세척액에서결핵균이검출된경우였다. 건강한자원자를병원근무자와비병원근무자로분류했을경우병원근무자의양성률이 36.1% 였고, 비병원근무자는 15.4% 로낮았으나통계적으로유의한차이를보이지못했다. 활동성결핵환자군 (group 1) 으로부터계산된민감도는 96.4%, 활동성및비활동성결핵환자군 (group 1 & 2) 으로부터계산된민감도는 94.4%, 비결핵환자군과자원자군 (group 3 & 4) 으로부터계산된특이도는 71.6%, 건강한자원자군 (group 4) 으로부터계산된특이도는 72.6%, 건강한자원자이면서비병원근무자군 (group 4-2) 으로부터계산된특이도는 84.6% 이었다. 폐외결핵인환자는총 143명중 7명있었는데이중 5명 (1군 2명, 결핵성척수염 1명, 결핵성복막염 1명 ; 2군 3명, 결핵성수막염 1명, 결핵성심장막염 1명, 결핵성흉막염 1명 ) 은 T- SPOT.TB 결과양성을보였다. 결핵성수막염과결핵성흉막염을각각보인나머지 2명 (2군) 은불명확결과로판정되어본연구에서폐외결핵환자가음성으로판정된경우는없었다. 2. 연령에따른 T-SPOT.TB의양성률 T-SPOT.TB의양성률이연령에따라차이가있는지를보기위해서대상군을연령대별로분류하고양성률을구하였다 (Table 3). 연령이가장적은 20대의양성률이 27.3% 로가장낮았으며연령이증가할수록양성률이높아져 60대가 90.9% 로가장높은양성률을보였고 71세이상은 55.0% 로오히려감소하였다 (P<0.001). 각군에결핵환자가얼마나포함되었느냐에따라양성률이달라질수있으므로비결핵환자군 (3군) 과건강한자원자군 (4군) 만을대상으로연령에따른양성률을 Table 3 우측에표시하였다. 마찬가지로연령증가에따라양성률이증가하다가 61세이상에서감소하는양상을보였다 (P<0.05). 3. 각군에서 spot 수각군에서 ESAT-6, CFP-10 항원자극후 spot을형성하는세포수의분포를 Fig. 1에나타내었다. 각군의평균 spot 수비교및그래프산출을위해 spot수가 200 이상인경우는 200 으로기록하였으며 ESAT-6 well 또는 CFP-10 well 중 spot 수가많은쪽을선택하여기록하였다. 활동성결핵환자군 (1군, 96.7±73.3) 과비활동성결핵환자군 (2군, 83.8±73.9) 의평균 spot 수가, 비결핵환자군 (3군, 14.2±12.0) 이나건강한자원자군 (4군, 18.4±38.2, 병원근무자 21.1±36.6, 비병원근무자 14.6±40.7) 보다유의하게높았다 (P<0.001). 건강한자원자군중병원근무자와비병원근무자간에는통계적으로유의한차이가없었다. P< Table 3. Positive rate of T-SPOT.TB test according to the age Age N (Total) T- SPOT.TB positive Group 3, 4: See Table 1. Positive rate N (Group 3,4) T- SPOT.TB positive Positive rate % % % % % % % % % % > % % Total % % P < No. of spots TB, active TB, not-active Non-TB patients Hospital workers Non-hospital workers Fig. 1. The number of spot-forming cells of T-SPOT.TB test in the different groups of patients and healthy volunteers.

5 T-SPOT.TB Test for Tuberculosis 175 Table 4. Comparison of T-SPOT.TB test with tuberculin skin test (TST) TST (+) TST (-) Total T-SPOT.TB (+) T-SPOT.TB (-) Total Overall agreement 63.9% (95% CI: ), kappa=0.29 PPA 56.9% (95% CI: ) NPA 75.0% (95% CI: ) T-SPOT.TB (No. of spots) y=2.7698x R 2 =0.2843, P<0.001 TST positive: 10 mm Abbreviations: PPA, positive percent agreement; NPA, negative percent agreement; CI, confidence interval. 또한 spot수가 50 이상인사람은 1군 67.9%, 2군 57.7% 로높은비율을차지하는반면에 3군은없었고 (0%) 4군은 4명 (6.5%) 이었다. 1군활동성결핵환자중 spot 수가 50 미만이면서양성인경우가총 8건이었는데결핵균이처음으로배양된초기결핵환자가 2건, 결핵균이배양되지않은경우로는 X-ray에서결핵이의심되어치료를시작한경우가 2건, 조직검사로진단된경우 2건, 결핵성수막염 1건, 속립성결핵 1건이었다. 한편과거에폐결핵으로진단되어치료받았다는환자는모두 18명이었으며 1명은불명확, 2명은음성, spot 수 50 미만의양성 3명, spot 수 50 이상 12명으로 66.7% (12/18) 에서 spot 수 50 이상을보였다. 4. 결핵피부반응검사와 T-SPOT.TB 와의일치율 27명의환자와 56명의자원자에서결핵피부반응검사 (TST) 결과가있었는데, T-SPOT.TB 검사결과와의일치 / 불일치정도를 Table 4에나타내었다. 전체적으로 TST의양성률이 61.4% (51/83) 로 T-SPOT.TB 44.5% (37/83) 보다높았다. T-SPOT.TB 검사와 TST와의총일치율은 63.9% (95% confidence interval [CI]: ) 로검사법간의일치율이낮은것으로나타났다 (k=0.29). T-SPOT.TB의 TST에대한양성일치율은 56.9% (95% CI: ) 였고음성일치율은 75.0% (95% CI: ) 였다. 결핵피부반응검사양성이고 T-SPOT.TB 음성인환자가 22명이었고, 결핵피부반응검사음성, T-SPOT.TB 양성환자가 8명이었는데이중 3명은결핵으로확진된환자였다. 두검사의정량적인관계를 Fig. 2에나타내었다. 고 찰 본연구는중등도의결핵유병률을보이는국내에서 T-SPOT TST (mm) Fig. 2. Correlation of tuberculin skin test (TST) results with T-SPOT. TB results in patients and healthy volunteers. TB 검사의유용성을알아보고자시행되었다. 활동성결핵환자군, 비활동성결핵환자군, 비결핵환자군, 건강한자원자군에서 T-SPOT.TB 검사의양성률은각각 96.4%, 92.3%, 31.6%, 27.4% 이었으며따라서민감도 96.4%, 특이도 72.6% 로나타났다. T-SPOT.TB 검사의민감도 96.4% 는국내폐결핵환자를대상으로한다른두연구의민감도 (96.6%, 92.0%) 와비슷한결과이므로 [2, 7] 한국인에서 T-SPOT.TB 검사는결핵균배양검사등에비해민감도가높은검사로생각되었다. T-SPOT.TB 검사의특이도는연구에따라다양하게보고되었는데이는대상군의특성과유병률의차이로생각되었다. 본연구에서는특이도 72.6% 로, 기존연구 [2] 인 15-16세한국고등학생을대상으로구한특이도 84.7% 에비해다소낮게나타났다. 그러나본연구에서도건강한자원자이면서병원에근무하지않는사람을대상으로하면특이도가 84.6% 로계산되므로한국인을대상으로한두연구결과에서매우유사한특이도를보여주었다고할수있겠다. 한편 T-SPOT.TB 검사의특이도를 47% 로보고한국내의한연구 [7] 는비결핵환자군으로부터계산된특이도였으므로본연구에서도비결핵환자군 (3군) 으로부터특이도를구해보면 68.4% 로특이도가더낮게나타나게된다. 또한유병률에따라서특이도가달라질수있는데유병률이낮은인구집단에서는특이도가높으나, 유병률이높은집단에서는결핵이아닌대상군을선택할때잠복결핵환자가포함될가능성이많으므로특이도가낮게나타날수있다. 한국은과거에결핵유병률이높았었고현재도중등도의유병률을보이고있으므로유병률이낮은미국이나유럽에비하여검사의특이도가낮게나타난것으로생각된다. 현재까지의검사법으로는결핵결핵균에감염되었으나발병하지않은잠복결핵과결핵균에노출된경험은있으나체내에결핵균이없는상태를구분할수없으므로, 즉결핵으로결핵균이체내에존재하는것을확진할수있는방

6 176 Hyun Soo Kim, Cheol Hong Kim, Mina Hur, et al. 법이없으므로어떤검사법이든결핵진단용검사법의정확한민감도와특이도를구할수는없는실정이다. 본연구에서불명확결과를보인 8명 (5.6%) 은모두음성대조에서 10개이상의 spot을보였다. QuantiFERON-TB의단점으로지적되는불명확결과는대부분림프구수가저하된면역억제자에서양성대조가양성으로나타나지않은경우가많은데 [2] T-SPOT.TB는림프구수가감소된면역억제자의경우도림프구수를맞추어넣어주므로양성대조는양성으로잘나타나며오히려비특이반응으로음성대조 well에서 10개이상의 spot을보이는경우가많은것으로생각되었다. 본연구에서밝혀진새로운점으로첫째, 환자군에서뿐만아니라치료되었거나비활동성결핵환자에서도 T-SPOT.TB의양성률이매우높은것을확인하였다. 국외연구결과에서치료후시간경과에따라 T-SPOT.TB 결과가음전된다는보고도있었으나 [3] 중등도의유병률을보이는국내의상황에서는결핵균에지속적으로노출될확률이높으므로결핵균항원에반응하는 T세포가감소되어결과가음전되기는어려운것으로생각되었다. 따라서국내에서 T-SPOT.TB 양성결과는치료가필요한활동성결핵과치료가필요하지않은치료된결핵이나잠복결핵등을구분하지못하므로문진, 결핵균도말및배양결과, PCR, X-ray 등의소견을종합해서판단해야하겠다. 둘째로연령에따른 T-SPOT.TB 양성률을구했다는점을들수있다. 본연구에서연령증가에따라 T-SPOT.TB 양성률이증가하다가 60 세이후에서는오히려감소하는양상을보였다. 대상군의연령이증가함에따라결핵환자비율 (1군, 2군 ) 이증가하였으므로각연령대에서결핵환자를제외시키고 T-SPOT.TB의양성률을구하였는데, 마찬가지로연령증가에따라 T-SPOT.TB 양성률이증가하다가 60세이후에감소하는것으로나타났다. 이는높은결핵유병률로인해연령증가에따라그동안결핵균에노출되었을확률이증가하므로양성률이증가하며, 60세이후노인에서는림프구수와기능이감소되어 [11] T-SPOT.TB 양성률이낮아지는것으로해석하였다. 셋째로결핵유병률이중등도인국내인구집단에서국내성인을대상으로양성률을구했으며결핵노출위험이높은군과낮은군으로분류하였을때결핵노출위험이높은군에서비록통계학적인차이는없었으나양성률이더높고 spot수도많은경향이있음을보여주었다. 각군에서의 spot수분포를 Fig. 1에나타내었는데활동성결핵환자와비활동성결핵환자군에서는평균 spot 수가결핵이아닌군에비해서높게나타났으며, spot수가 50이넘는경우가활동성결핵환자군에서 67.9%, 비활동성결핵환자군에서 57.7% 으로, 비결핵환자군 (0%) 이나자원자군 (6.5%) 에비해많 은비율을차치하였다. 하지만건강한자원자중 4명에서 spot 수가 50 이상으로나타났으므로 spot수가많다고결핵으로진단하기는어려울것으로생각되었다본연구에서 T-SPOT.TB 검사와결핵피부반응검사와의일치율은 63.9% (k=0.29) 로낮게나타났다. 결핵피부반응검사양성이고 T-SPOT.TB 음성인환자가 22명이었는데결핵피부반응검사가비항산성결핵이나 BCG 접종에의해서도양성으로나타나기때문에결핵피부반응검사의위양성이많을것으로해석하였다. 또한결핵피부반응검사음성이고 T-SPOT.TB가양성이었던경우가 8명이있었는데불일치를보이는두검사중어느검사가정확한지는알수없었으나이중 3명은결핵으로확진된환자였으므로피부반응검사가위음성인것으로판명되었다. 국내한연구에서 T-SPOT.TB와 Quantiferon-TB gold의일치율은우수하였으나 (k=0.58), T-SPOT.TB와결핵피부반응검사와의일치율은본연구와마찬가지로낮은것으로 (k=0.27) 보고한바있다 [7]. 결론적으로 T-SPOT.TB 검사는결핵감염의진단에있어민감도가높아결핵의선별검사나보조검사로유용하게사용될것으로기대되었으며, 특히폐외결핵, 객담배출이어려운소아결핵, 림프구수가저하된면역억제자의경우에유용할것으로생각되었다. 그러나치료된환자에서의양성률이높고, 건강한자원자나비결핵환자군에서도양성률이높으며, 연령에따라양성률이증가하는경향이있고, 결핵균이체내에존재하는잠복결핵과결핵균이없어진결핵노출경험을구분하지못하므로양성결과의해석시이런점을고려하여판단하여야할것이다. 요약배경 : 결핵진단용 ELISPOT 검사 (T-SPOT.TB, Oxford Immunotec, UK) 는환자의림프구를 2종류의결핵균특이항원 (ESAT-6, CFP-10) 으로자극하여인터페론감마가분비되는지를확인하는검사이다. 본연구에서는중등도의결핵유병률을가지며 BCG 접종률이높은국내성인을대상으로 T-SPOT.TB 검사의임상적유용성을알아보고자하였다. 방법 : T-SPOT.TB 검사가의뢰되었던환자 79명과건강한자원자 64명에서 T-SPOT. TB 검사가시행되었다. 대상군을활동성결핵환자 (1군, 30 명 ), 비활동성결핵환자 (2군, 27 명 ), 비결핵환자 (3군, 24명 ), 결핵병력이없는건강한자원자 (4군, 62명 ) 의 4군으로분류하였고, 각군에서의 T-SPOT.TB 검사의양성률과결핵균특이항원에반응하는평균림프구수 (spot 수 ) 를조사하였다.

7 T-SPOT.TB Test for Tuberculosis 177 결과 : T-SPOT.TB의양성률은 1군 (96.4%) 과 2군 (92.3%) 에서 3군 (31.4%) 과 4군 (27.4%) 에비해유의하게높았다 (P<0.0001). 1군과 4군으로부터구한 T-SPOT.TB 검사의민감도와특이도는 96.4%, 72.6% 였다. 1군과 2군의평균 spot 수는 3군과 4군에서보다유의하게높았다 (P<0.001). 연령이증가할수록 T- SPOT.TB의양성률이높아지는경향이있었으며결핵피부반응과 T-SPOT.TB의총일치율은 63.8% (k=0.29) 였다. 결론 : T-SPOT.TB 검사는결핵감염의진단에있어민감도가높아결핵의선별검사나보조검사로유용하게사용될수있을것으로생각된다. 그러나치료된환자나건강한자원자에서도양성률이높으므로양성결과의해석시이런점을고려하여야하겠다. 감사본연구를위해기술적도움을주신이윤경선생과검사실관계자분들, 시약을제공해주신ㄜ경일하이텍관계자분들, 그리고연구에참여해주신자원자분들께감사드립니다. 참고문헌 1. Lee JY and Shim TS. Diagnosis of mycobacterium tuberculosis infection using ex-vivo interferon-gamma assay. Tuberc Respir Dis 2006;60: ( 이정연및심태선. 체외 Interferon-gamma 검사를이용한결핵감염의진단. 결핵및호흡기질환 2006;60: ) 2. Lee JY, Choi HJ, Park IN, Hong SB, Oh YM, Lim CM, et al. Comparison of two commercial interferon-gamma assays for diagnosing Mycobacterium tuberculosis infection. Eur Respir J 2006;28: Domínguez J, De Souza-Galva)o M, Ruiz-Manzano J, Latorre I, Prat C, Lacoma A, et al. T-cell responses to the Mycobacterium tuberculosis-specific antigens in active tuberculosis patients at the beginning, during, and after antituberculosis treatment. Diagn Microbiol Infect Dis 2009;63: Dye C, Scheele S, Dolin P, Pathania V, Raviglione MC. Consensus statement. Global burden of tuberculosis: estimated incidence, prevalence, and mortality by country. WHO Global Surveillance and Monitoring Project. JAMA 1999;282: World Health Organization. Tuberculosis. (Updated on 2009). 6. Kang YA, Lee HW, Yoon HI, Cho B, Han SK, Shim YS, et al. Discrepancy between the tuberculin skin test and the whole-blood interferon gamma assay for the diagnosis of latent tuberculosis infection in an intermediate tuberculosis-burden country. JAMA 2005;293: Kang YA, Lee HW, Hwang SS, Um SW, Han SK, Shim YS, et al. Usefulness of whole-blood interferon-g assay and interferon-g enzymelinked immunospot assay in the diagnosis of active pulmonary tuberculosis. Chest 2007;132: American Thoracic Society. Diagnostic Standards and Classification of Tuberculosis in Adults and Children. This official statement of the American Thoracic Society and the Centers for Disease Control and Prevention was adopted by the ATS Board of Directors, July This statement was endorsed by the Council of the Infectious Disease Society of America, September Am J Respir Crit Care Med 2000;161: Clinical and Laboratory Standards Institute. User protocol for evaluation of qualitative test performance; Approved guideline-second edition. CLSI document EP12-A2. Wayne, PA: Clinical and Laboratory Standards Institute, Linnet K and Boyd JC. Selection and analytical evaluation of methods-with statistical technique. In: Burtis CA, Ashwood ER, et al., eds. Tietz textbook of clinical chemistry and molecular diagnostics. 4th ed. St. Louis: Elsevier Saunders, 2006: Provinciali M, Moresi R, Donnini A, Lisa RM. Reference values for CD4+ and CD8+ T lymphocytes with naïve or memory phenotype and their association with mortality in the elderly. Gerontology 2009; 55:

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