특허청구의범위청구항 1 1~4년근도라지를 2~3월경수확하는단계 ; 상기수확한도라지를수세및정선한후, 도라지의잎또는뿌리를분리하여 50 이하의온도에서화력건조하고분말화하는단계 ; 및상기분말화된도라지로부터플라티코딘디를추출하는단계 ; 를포함하는특징으로하는플라티코딘디 (platyc

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1 (19) 대한민국특허청 (KR) (12) 공개특허공보 (A) (11) 공개번호 (43) 공개일자 2014년01월29일 (51) 국제특허분류 (Int. Cl.) A61K 31/704 ( ) A61K 36/34 ( ) A61K 8/97 ( ) A61Q 19/00 ( ) (21) 출원번호 (22) 출원일자 2012 년 07 월 18 일 심사청구일자 전체청구항수 : 총 12 항 2012 년 07 월 18 일 (54) 발명의명칭플라티코딘디를대량으로추출하는방법 (57) 요약 (71) 출원인 삼척시 강원도삼척시중앙로 296 ( 교동, 삼척시청 ) 강원대학교산학협력단 강원도춘천시강원대학길 1 ( 효자동 ) (72) 발명자 정명근 대구광역시수성구청호로 426, 103 동 1001 호 ( 범어동, 삼성쉐르빌 ) (74) 대리인 김정현 본발명은플라티코딘디 (platycodin D) 를대량으로추출하는방법에관한것으로, 보다상세하게는 1~4 년근도라지를 2~3 월경수확하는단계, 상기수확한도라지를수세및정선한후, 도라지의잎또는뿌리를분리하여 50 이하의온도에서화력건조하고분말화하는단계및상기분말화된도라지로부터플라티코딘디를추출하는단계를포함하는플라티코딘디를대량으로추출하는방법에관한것이다. 본발명에따르면, 도라지에함유된플라티코딘디를간단하고경제적인방법으로단시간에수득할수있어대량으로추출및생산하는방법으로유용하게이용할수있다. 대표도 - 도 6-1 -

2 특허청구의범위청구항 1 1~4년근도라지를 2~3월경수확하는단계 ; 상기수확한도라지를수세및정선한후, 도라지의잎또는뿌리를분리하여 50 이하의온도에서화력건조하고분말화하는단계 ; 및상기분말화된도라지로부터플라티코딘디를추출하는단계 ; 를포함하는특징으로하는플라티코딘디 (platycodin D) 를대량으로추출하는방법. 청구항 2 제1항에있어서, 상기플라티코딘디는도라지뿌리의코르크층으로형성된피층으로부터추출된것을특징으로하는플라티코딘디를대량으로추출하는방법. 청구항 3 제1항에있어서, 상기도라지뿌리의두께는최대 6mm인것을특징으로하는플라티코딘디를대량으로추출하는방법. 청구항 4 제1항에있어서, 상기건조는 72~80시간동안 ( 도라지의건물율 23~25%) 실시하는것을특징으로하는플라티코딘디를대량으로추출하는방법. 청구항 5 제1항에있어서, 상기플라티코딘디를추출하는단계는, 분말화된도라지에증류수, 에탄올, 메탄올, 부탄올, 아세톤, 에틸아세테이트및디클로로메탄중선택된어느하나이상의용매를사용하여 4 내지 80 에서 10분내지 48시간동안추출하는것을특징으로하는플라티코딘디를대량으로추출하는방법. 청구항 6 제5항에있어서, 상기추출은초음파추출법에의해수행되는것을특징으로하는플라티코딘디를대량으로추출하는방법. 청구항 7 제1항기재의방법으로추출된플라티코딘디를유효성분으로포함하는것을특징으로하는약학적조성물. 청구항 8 제7항에있어서, 상기플라티코딘디는약학적조성물에 0.05 내지 20중량 % 로포함되는것을특징으로하는약학적조성물. 청구항 9 제1항기재의방법으로추출된플라티코딘디를유효성분으로포함하는것을특징으로하는건강보조식품. 청구항

3 제9항에있어서, 상기플라티코딘디는건강보조식품에 0.05 내지 10중량 % 로포함되는것을특징으로하는건강보조식품. 청구항 11 제1항기재의방법으로추출된플라티코딘디를유효성분으로포함하는것을특징으로하는화장료조성물. 청구항 12 제11항에있어서, 상기플라티코딘디는화장료조성물에 0.01 내지 5중량 % 로포함되는것을특징으로하는화장료조성물. 명세서 [0001] 기술분야본발명은플라티코딘디 (platycodin D) 를대량으로추출하는방법에관한것으로, 보다상세하게는 1~4년근도라지를 2~3월경수확하는단계, 상기수확한도라지를수세및정선한후, 도라지의잎또는뿌리를분리하여 50 이하의온도에서화력건조하고분말화하는단계및상기분말화된도라지로부터플라티코딘디를추출하는단계를포함하는플라티코딘디를대량으로추출하는방법에관한것이다. [0002] [0003] [0004] [0005] [0006] [0007] 배경기술길경 ( 桔梗, Platycodi Radix) 은초롱과 (campanulaceae) 에속하는다년생도라지 (Platycodon grandiflorum A. De Candolle) 의뿌리부분을한약재로사용하는것으로, 대한약전에는도라지의뿌리부분을물로씻고가는뿌리를제거한후, 그대로또는 cork층을제거하여말린것을길경으로규정하고있다. 도라지는한국, 중국, 일본에서널리사용되어왔으며, 채소로도많이이용되고있다. 도라지의한방적효능은동의보감, 향약집성방, 신농본초경, 본초강목, 천금방등본처서또는한의학서에주로언급되어있으며, 도라지가배합되어있는한방처방수는방약합편 49건및동의보감에 287건의처방이수록되어있을정도로유용한생약제이다. 도라지는전통한약재로서진해및거담에널리이용되어왔으며, 이러한용도이외에도진정, 해열, 진통작용및항염증, 항궤양, 혈압강하, 항암작용등에도라지의추출액이작용하는것으로보고된바있다. 특히, 최등 (2001) 은쥐를이용한동물실험에서도라지물추출액이쥐의대식세포 (macrophage) 로부터산화질소 (nitric oxide) 와종양괴사인자 (tumor necrosis factor) 의생성을유도함으로서항암활성을유도한다는항암활성기작을제시한바있고, 한등 (2001) 은도라지로부터분리한다당류가 T cell이아닌 B cell과대식세포를선택적으로활성화시킴으로서면역증강효과를보여줌을보고하였다. 한편, 도라지는지방대사에도관여하여간지방축적을방지함으로서비만에도효과적임이보고된바있다. 도라지의주요약효성분으로는트리테르페노이드사포닌 (triterpenoid saponin) 인플라티코딘 (playtycodin) A, C 및 D 등이밝혀진바있으며, 이외에도이눌린 (inulin), 베툴린 (betulin), 스티그마스테롤 (stigmasterol) 등이주요성분으로함유되어있다. 도라지함유성분에대한연구는 Tsujimoto에의해 1940년처음으로사포닌의아글리콘 (aglycone) 인플라티코디게닌 (platycodigenin) 이보고된이래 1969년 Kubota 등, 1972년 Akiyama 등이트리테르페노이드 (triterpenoid) 계사포닌의구조를보고한바있다. 또한 1984년 Ishii 등이도라지로부터새로운 17종의사포닌의구조를보고한바있다. 한편, 생약의약효를대변하는성분으로서해당생약에만존재하고, 그생약의주요한활성을대표하는성분을 " 지표성분 " 이라칭하는데, 국내식품의약품안전청에서는 1997년한약재표준화사업의규격기준설정을위한성분분석법개발연구에서도라지의지표성분을 "platycodin D" 로설정하였다. Arai 등 (1997) 은도라지와감초의혼합열수추출액인길경탕이가장고질적인질병의하나인만성췌장염을완화시키는효과가있음을입증하였는데, 이들은길경탕의만성적인췌장염치료효능의주활성성분이플라티코딘디 (platycodin D) 임을보고하였고, platycodin D가콜레시스토키닌 (CCK; cholecystokinin) 같은위장내호르몬이십이지장에서분비되도록하는기능을하기때문에길경탕이췌장의위액분비를촉진하는것으로보고하였다. 한편 Ida 등 (1998) 은 platycodin D의분해되지않은완전한전체구조가췌장의외분비량증가를촉진하는 - 3 -

4 데필수적인것으로보고하였다. [0008] [0009] [0010] 한편 Saeki 등 (1999) 은일본에서유통되는중국산, 한국산, 일본산도라지및일본재배산과야생도라지에서 platycodin A, C 및 D의함량을분석비교한바있으며, Higashi 등 (1997) 도도라지의조제방법에따른품질을비교하고, platycodin D의함량을정량한바있다. 최근도라지의다양한생리활성을기반으로음료, 차, 사탕, 분말등몇몇식품들이개발되어유통되고있는실정이지만, 다양한연령대의소비자를대상으로하는제품군을형성하지못하고있는실정이다. 현재도라지의생육시기및생육년수에따른주약효성분이며, 지표성분인 platycodin D의함량변이에대한연구결과가전무한실정이므로, 성분면에서도라지의최적수확기설정이불가능하고, 도라지원료의품질고급화및균일화가어려운상황이다. 선행기술문헌 [0011] 특허문헌 ( 특허문헌 0001) 한국공개특허공보제 호 [0012] 비특허문헌 ( 비특허문헌 0001) Choi CY, Kim JY, Kim YS, Chung YC, Seo JK, and Jeong HG. (2001b). Aqueous extract isolated from Platycodon grandiflorum elicits the release of nitric oxide and tumor necrosis factoralpha from murin macrophages. Int. Immunopharmacol. 1 : ( 비특허문헌 0002) Han SB, Park SH, Lee KH, Lee CW, Lee SH, Kim HC, Kim YS, Lee HS, and Kim HM. (2001). Polysaccharide isolated from the radix of Platycodon grandiflorum selectively activates B cells and macrophages but not T cells. Int. Immunopharmacol. 1 : ( 비특허문헌 0003) Higashi A, Arimoto K, Iwata Y, Ujita K, Kawai T, Kobayashi Y, Sakurai K, Shimada Y, Takagi A, Taniyama T, Nakajima KI, Hisata Y, Hosoda K, Yamamoto K, Yamamoto Y, and Noguchi M. (1997). Studies on the effects of preparations methods of platycodon root on its quality. Natural Medicines 51(1) : 발명의내용 [0013] [0014] 해결하려는과제상기와같은종래기술의문제점을해결하고자, 본발명은플라티코딘디를대량으로추출및생산할수있는방법을제공하는것을목적으로한다. 또한본발명은도라지로부터플라티코딘디를간단하고경제적인방법으로단시간에수득할수있는방법을제공하는것을목적으로한다. [0015] [0016] [0017] [0018] 과제의해결수단상기목적을달성하기위하여, 본발명은 1~4년근도라지를 2~3월경수확하는단계 ; 상기수확한도라지를수세및정선한후, 도라지의잎또는뿌리를분리하여 50 이하의온도에서화력건조하고분말화하는단계 ; 및상기분말화된도라지로부터플라티코딘디를추출하는단계 ; 를포함하는것을특징으로하는플라티코딘디 (platycodin D) 를대량으로추출하는방법을제공한다. 상기플라티코딘디는도라지뿌리의코르크층으로형성된피층으로부터추출되는것이더욱좋다. 또한상기도라지뿌리의두께는최대 6mm인것이더욱바람직하다. 상기건조는 72 내지 80시간동안이루어지는것이좋으며, 이때도라지의건물율은 23~25% 인것이바람직하다

5 [0019] [0020] 상기플라티코딘디를추출하는단계는, 분말화된도라지에증류수, 에탄올, 메탄올, 부탄올, 아세톤, 에틸아세테이트, 디클로로메탄등을이용하여 4 내지 80 에서 10분내지 48시간동안추출하는것이좋다. 특히, 상기추출은초음파추출법에의해수행되는것이더욱바람직하다. 또한본발명은상기와같이도라지로부터추출된플라티코딘디를유효성분으로포함하는약학적조성물, 건강보조식품및화장료조성물을제공한다. [0021] 발명의효과본발명에따르면, 도라지에함유된플라티코딘디를간단하고경제적인방법으로단시간에수득할수있으며, 이에본발명의방법은고순도의플라티코딘디를대량으로추출및생산하는방법으로유용하게이용할수있다. [0022] 도면의간단한설명 도 1 은본발명의일실시예에따라생육시기별건물율및수축율을나타낸그래프이다. 도 2는본발명의일실시예에따라생육시기별플라티코딘디 (platycodin D) 의함량변화를나타낸그래프이다. 도 3은본발명의일실시예에따라생육시기별분석시료의 HPLC 크로마토그램을나타낸그래프이다. 도 4는본발명의일실시예에따라생육년수별건물율을나타낸그래프이다. 도 5는본발명의일실시예에따라생육년수별수축율을나타낸그래프이다. 도 6은본발명의일실시예에따라생육년수별플라티코딘디 (platycodin D) 의함량변화를나타낸그래프이다. 도 7은본발명의일실시예에따라생육년수별분석시료의 HPLC 크로마토그램을나타낸그래프이다. 도 8은본발명의일실시예에따라도라지의잎, 줄기및뿌리에함유된플라티코딘디 (platycodin D) 의함량을비교한결과를나타낸그래프이다. 도 9는본발명의일실시예에따라도라지원뿌리, 주심및피층에함유된플라티코딘디 (platycodin D) 의함량을비교한결과를나타낸그래프이다. 도 10은본발명의일실시예에따라도라지원뿌리, 주심및피층의 HPLC 분석크로마토그램을나타낸그래프이다. 도 11은본발명의일실시예에따라 10년근도라지의뿌리굵기에따른플라티코딘디 (platycodin D) 의함량을비교한결과를나타낸그래프이다. 도 12는본발명의일실시예에따라상온음건및 50 화력건조시건조소요시간을비교한결과를나타낸그래프이다. 도 13은본발명의일실시예에따라건조방법을각각달리하여건조한후, 건조방법에따른플라티코딘디 (platycodin D) 의함량변이를나타낸그래프이다. 도 14는본발명의일실시예에따라건조방법을각각달리하여건조한후, 건조방법에따른 HPLC/UVD 크로마토그램을나타낸그래프이다. [0023] [0024] [0025] [0026] 발명을실시하기위한구체적인내용이하본발명을상세히설명한다. 본발명은도라지의생육시기및생육년수별플라티코딘디의함량변이를구명하여성분적최적수확기를확립함으로서플라티코딘디를대량으로추출할수있는최적의방법을규명하고자하였으며, 이로부터향후도라지재배농가의우수원료생산을통한농가소득증대, 우수가공제품개발및품질관리에기여하고자하였다. 본발명의플라티코딘디 (platycodin D) 를대량으로추출하는방법은, 1~4년근도라지를 2~3월경수확하는단계, 상기수확한도라지를수세및정선한후, 도라지의잎또는뿌리를분리하여 50 이하의온도에서화력건조하고분말화하는단계및상기분말화된도라지로부터플라티코딘디를추출하는단계를포함한다. 이하에서는본발명의플라티코딘디 (platycodin D) 를대량으로추출하는방법을구체적으로설명한다

6 [0027] [0028] [0029] [0030] [0031] [0032] [0033] [0034] [0035] [0036] [0037] [0038] [0039] [0040] [0041] [0042] 먼저, 생육년수가 1~4년근인도라지를선별하고, 이들을 2~3월경에수확하여도라지원료로사용한다. 본발명에서는도라지로부터플라티코딘디를대량으로추출할수있는최적의수확기를확립하기위하여, 동일한유전배경을가진도라지를동일한재배조건에서생육시킨 1~10년근의도라지를동일한날짜에수확하여시료로선별하고, 생육년수에따른플라티코딘디의함량변이를측정하여플라티코딘디를대량으로추출할수있는최적의생육년수를규명하였다. 또한, 동일한유전배경을가진도라지를동일한재배조건으로생육시킨 6년근의도라지를매달 (1~12월) 동일한날짜에수확하여시료로선별하고, 1년중생육시기에따른플라티코딘디의함량변이를측정하여플라티코딘디를대량으로추출할수있는최적의생육년수및생육시기를규명하였다. 즉, 본발명에서는플라티코딘디를고순도이며대량으로수득할수있는최적의생육년수와생육시기, 즉최적의수확기를확립하고, 이최적의수확기에수확된도라지를선별하여플라티코딘디의추출을위한시료로사용한것에특징이있다. 따라서, 본발명에서는플라티코딘디를대량으로추출하기위하여 1~4년근의도라지중 2~3월경수확된도라지를선별하여사용하는것이바람직하다. 상기선별된도라지는수세및정선한후, 도라지의여러부위중특히잎또는뿌리부분만을분리한다. 일반적으로도라지의플라티코딘디는뿌리의주성분으로평가되는데, 본발명에서는도라지의뿌리이외에다른부분에서도플라티코딘디가존재하는가를확인하기위하여지상부인잎, 줄기와지하부인뿌리를시료로사용하여플라티코딘디의함량을정량적으로평가한결과, 도라지의식물체부위중잎또는뿌리에플라티코딘디의함량이많이분포되었음을확인하였다. 따라서, 본발명에서는대량의플라티코딘디를추출하기위하여도라지의식물체부위중잎또는뿌리를시료로사용하는것이좋다. 특히, 상기도라지의뿌리부분중원뿌리의주심부를제외한피층부, 즉코르크층으로형성된피층부위를사용하는것이더욱좋다. 도라지의원뿌리중목질화된중심부위보다코르크층으로형성된피층부위를사용할경우더많은함량의플라티코딘디를추출할수있어더욱좋다. 또한상기도라지의뿌리는굵기가작을수록, 바람직하게뿌리굵기가 6mm이하, 더욱바람직하게는 2~6mm인것을사용하는것이플라티코딘디를다량으로함유하고있어더욱바람직하다. 상기도라지의잎, 뿌리부분을분리한뒤에는건조및분말화공정을실시한다. 일반적으로대한약전에는한약재로이용되는약용작물의경우특별한규정이없는한 60 이하의조건에서건조하는것으로기재되어있으며, 생약재의경우관행적방법으로는 25 이하에서상온음건하는것이가장보편화되어있다. 그러나, 본발명에서는도라지에함유된유용성분의손실없이건조에소요되는시간을최대로단축시킬수있도록 50 이하의온도에서화력건조하는것이바람직하다. 이때, 화력건조시온도가 50 를초과할경우에는도라지에함유된유용성분, 즉플라티코딘디가손실되어최종수득할수있는플라티코딘디의함량이감소될수있어본발명의목적에는적합하지않다. 상기와같이건조된도라지는이후분말화되는데, 이때도라지분말은 20 내지 300메쉬 (mesh) 인것이바람직하다. 도라지분말의크기가상기범위내일경우에는추출효율의향상및추출여과물의제거공정에있어더욱좋다. 이후에는상기분말화된도라지로부터플라티코딘디를추출한다. 구체적으로, 상기플라티코딘디는분말화된도라지의무게대비 10 내지 50중량 %(w/v) 의양으로도라지에증류수, 에탄올, 메탄올, 부탄올, 아세톤, 에틸아세테이트, 디클로로메탄등의저급알코올혹은중간극성유기용매등을추출용매로사용하여, 4 내지 80 에서 10분내지 48시간동안저온추출법, 상온추출법, 초음파추출법또는환류추출법등의통상의추출법을수행한후얻어진추출액을여과지로여과한후얻어진여과물을동결건조, 상온건조또는열풍건조를수행하는추출방법을통하여추출할수있다. 상기추출용매는증류수, 저급알코올및중간극성유기용매등을단독또는 2종이상혼합하여사용할수있으며, 특히증류수, 에탄올또는이들의혼합물을사용하는것이더욱좋다. 상기와같이추출한플라티코딘디는필요에따라다양한통상의분리방법을통하여고순도로분리할수있다. 이때에사용가능한분리방법으로는용매분배, 침전분리, 재결정및컬럼크라마토그라피등의분리방법을사용 - 6 -

7 할수있다. [0043] [0044] [0045] [0046] [0047] [0048] [0049] [0050] [0051] [0052] [0053] 특히, 분말화된도라지로부터초음파추출법, 구체적으로초음파추출법에의해 2시간동안추출하는것이최적의추출효율측면에있어더욱바람직하다. 일반적으로동일한조건에서동일한추출용매를사용하거나, 동일한추출용매를사용하여동일한추출방법과시간에따라추출한다하더라도추출하고자하는각성분에따라추출효율이각각상이하게나타나며, 본발명에서플라티코딘디의추출에기존알려진추출용매와추출방법을적용하였다하더라도도라지로부터플라티코딘디를다량추출하기위한최적의조건에대한연구는이전까지는전무하였으며, 특히최적의수확시기와이시기에수확된도라지로부터대량으로플라티코딘디를얻을수있는방법에대한것은어디에도찾아볼수없는기술이므로, 본발명은전혀예기치못한기술임은자명한것이다. 본발명에서는상기와같은방법으로도라지로부터추출된플라티코딘디의함량을 HPLC/UVD/MS 또는 ELSD 분석에의해평가하였다. 이때, 도라지함유플라티코딘디의분석을위한 HPLC 컬럼은역상 (C18) 크로마토그래피컬럼을사용할수있고, 이동상으로는아세토니트릴 (acetonitrile, ACN) 및포름산 (formic acid) 을사용할수있다. 따라서, 상기와같은본발명의추출방법에따르면도라지로부터플라티코딘디를대량으로추출할수있을뿐만아니라, 고순도의플라티코딘디를간단하고경제적인방법으로단시간에효율적으로추출, 분리할수있다. 본발명은상기와같이도라지로부터추출된플라티코딘디를유효성분으로포함하는약학적조성물을제공하는바, 상기플라티코딘디를유효성분으로포함하는약학적조성물은특히항산화, 항염증, 항비만및항고지혈증, 항암활성을가진다. 상기플라티코딘디는약학적조성물에 0.05 내지 20중량 % 로포함되는것이바람직하며, 더욱바람직하게는 0.05 내지 10중량 % 로포함되는것이다. 그함량이 0.05중량 % 미만일경우에는약학적조성물의효과가미미할수있으며, 20중량 % 를초과할경우에는사용량에대비약학적효과가상대적으로낮을수있다. 본발명의도라지로부터추출된플라티코딘디를유효성분으로포함하는약학적조성물은경구또는비경구투여가가능하다. 본발명의약학적조성물의투여경로는이들로한정되는것은아니지만예를들면, 구강, 정맥내, 근육내, 동맥내, 골순, 경막내, 심장내, 경피, 피하, 복강내, 비강내, 장관, 설하또는국소투여가가능하다. 이와같은임상투여를위해본발명의약학적조성물은공지의기술을이용하여경구투여, 비경구투여용, 주사용등의적합한제형으로제제화할수있다. 예를들어, 경구투여시에는불활성희석제또는식용담체와혼합하거나, 경질또는연질젤라틴캡슐에밀봉되거나또는정제로압형하여투여할수있다. 경구투여용의경우, 활성화합물은제제화에필요한통상의성분들과혼합되어섭취형정제, 협측정제, 트로키제 (troches), 로진지 (lozenge), 수용성또는유성현탁액, 조제분말또는과립, 에멀젼, 하드또는소프트캡슐, 엘릭시르 (elixirs), 서스펜션, 시럽, 웨이퍼등의형태로사용될수있다. 이때, 정제, 캡슐등의제형으로제제화하기위해락토오스, 사카로오스, 솔비톨, 만니톨, 전분, 아밀로펙틴, 셀룰로오스또는젤라틴과같은결합제 ; 디칼슘포스페이트와같은부형제 ; 옥수수전분또는고구마전분과같은붕괴제 ; 스테아린산마그네슘, 스테아린산칼슘, 스테아릴푸마르산나트륨또는폴리에틸렌글리콜왁스와같은윤활유등을혼합할수도있다. 캡슐제형의경우는상기에서언급한물질이외에도지방유와같은액체담체를혼합할수도있다. 또한, 비경구투여는피하주사, 정맥주사, 근육내주사, 흉부내주사주입방식과점막, 또는국소에적용되는데, 분산제, 좌제, 분제, 에어로졸 ( 비강스프레이또는흡입제 ), 겔, 현탁액제 ( 수성, 또는비수성액상현탁액, 수중유에멀젼또는유중수에멀젼 ), 용액제등비경구투여에적합한액상투여형태등에의한다. 비경구투여용제형으로제제화하기위해서는상기조성물을안정제또는완충제와함께물에서혼합하여용액으로제조하고, 이를앰플또는바이알의단위투여형으로제제화할수있다. 상기와같은본발명의약학적조성물의유효투입량은환자의연령, 신체적조건, 몸무게등의상태를고려하여임상의판단에따라필요한범위로조절될수있다. 일반적으로, 상기약학적조성물의유효투입량은성인환자체중 1kg 당 1 내지 20mg / 일이고, 바람직하기로는 5 내지 10mg / 일이며, 의사또는약사의판단에따라일정시간간격으로 1일수회, 바람직하기로는하루 2회내지 5회분할투여될수있다. 또한, 본발명은도라지로부터추출된플라티코딘디를유효성분으로포함하는건강보조식품을제공하는바, 본발명의건강보조식품은널리식용되는도라지로부터추출된플라티코딘디를유효성분으로포함하므로인체에 - 7 -

8 안전하여식품에첨가하여사용하기에적합하다. [0054] [0055] [0056] [0057] [0058] [0059] [0060] [0061] [0062] [0063] [0064] [0065] [0066] [0067] [0068] [0069] 상기플라티코딘디를유효성분으로포함하는건강보조식품은항산화, 항염증, 항비만및항고지혈증, 항암에활성을가지며, 이러한활성을가지는건강보조식품에본발명의플라티코딘디에적용되는것이특히바람직하다. 상기플라티코딘디는건강보조식품에 0.05 내지 10중량 % 로포함되는것이바람직하며, 더욱바람직하게는 0.05 내지 5중량 % 로포함되는것이다. 그함량이 0.05중량 % 미만일경우에는건강보조식품으로서의효과가미미할수있으며할수있으며, 10중량 % 를초과할경우에는첨가농도대비건강보조식품으로서의건강증진효과가상대적으로낮을수있다. 상기건강보조식품으로는그종류가한정되는것은아니나, 예를들어통상적인기호성식품즉, 라면, 생면등의면류, 두부, 시리얼, 빵류, 츄잉껌, 사탕, 과자류등에첨가하여통상적으로알려진방법에의하여각종식품으로제조할수있고, 식용가능한색소로서적용할수도있다. 또한, 정제, 과립제, 환제, 경질캅셀제, 연질캅셀제또는액제제형등일반적인제형으로제형화될수있으며, 생즙, 파우치, 음료, 또는다류등으로제조될수도있다. 상기한성분이외에다른성분은제형에따라당업자가적절하게선택하여배합할수있음은물론이다. 또한, 본발명의건강보조식품에포함되는플라티코딘디는산화에의해서일어나는식품의냄새나풍미의변화, 유지의산패, 그리고식품의변색을효과적으로방지할수도있어통상의각종식품류에배합함으로써이들식품류를보존하거나식품의신선도및품질을장기간에걸쳐유지하기위해사용할수도있다. 상기식품류로는전형적인식품뿐만아니라, 음료 ( 알콜성음료도포함함 ), 과실및그의가공식품 ( 예 : 과일통조림, 병조림, 잼, 마아말레이드등 ), 어류, 육류및그가공식품 ( 예 : 햄, 소시지콘비이프등 ), 빵류및면류 ( 예 : 우동, 메밀국수, 라면, 스파게이트, 마카로니등 ), 과즙, 각종드링크, 쿠키, 엿, 유제품 ( 예 : 버터, 치이즈등 ), 식용식물유지, 마아가린, 식물성단백질, 레토르트식품, 냉동식품, 각종조미료 ( 예 : 된장, 간장, 소오스등 ) 등을포함함은물론이다. 또한, 본발명은도라지로부터추출된플라티코딘디를유효성분으로포함하는화장료조성물을제공한다. 상기플라티코딘디는화장료조성물에 0.01 내지 5중량 % 로포함되는것이바람직하며, 더욱바람직하게는 0.01 내지 2중량 % 로포함되는것이다. 그함량이 0.01중량 % 미만일경우에는화장료로서의효과가미미할수있으며할수있으며, 5중량 % 를초과할경우에는첨가농도대비화장료로서의효과가상대적으로낮을수있다. 본발명에따라도라지로부터추출된플라티코딘디는항산화, 항염증, 항비만및항고지혈증, 항암활성을가지며, 특히화장료조성물에적용할경우항산화, 미백, 항알러지, 항염증등의용도로사용할수있다. 본발명의화장료조성물은상기플라티코딘디를그대로사용하거나또는필요에따라희석하여사용할수있다. 상기플라티코딘디는화장품분야에서통상적으로사용되는기제, 보조제및첨가제를사용하여액체또는고체형태로제조될수있다. 액체또는고체형태의화장품으로는예를들면, 이에한정되지는않으나화장수, 크림제, 로션제, 입욕제등의형태를포함할수있다. 화장품분야에서통상적으로사용되는기제, 보조제및첨가제는특별히제한되지않으며, 예를들면, 물, 알콜, 프로필렌글리콜, 스테아르산, 글리세롤, 세틸알코올, 유동파라핀등이있다. 상기와같은본발명의화장료조성물은피부의산화에의한손상, 예를들면, 반점 ( 갈색반 ), 주근깨, 피부균열, 자외선손상 ( 햇볕에탐 ) 등을예방하는데매우유용하며, 화장품자체의산화를방지함으로써화장품의품질을유지하는데도매우유용하게사용될수있다. 이하에서는실시예를들어본발명에관하여더욱상세하게설명할것이나. 이들실시예는단지설명의목적을위한것으로본발명의보호범위를제한하고자하는것은아니다. 실시예 1. 생육시기에따른플라티코딘디함량변이측정 (1) 건물율및수축율강원도삼척시의독농가가동일한유전적배경을가진도라지를동일한재배조건으로생육시킨 6년근도라지를 2011년 1월부터 12월까지매월 20일경생근을수확하여시료로사용하였다. 상기준비한시료를수세및정선한후 50 이하에서화력건조하고, 건물율및수축율을측정하였다. 그결과 - 8 -

9 는도 1 및하기표 1 에나타내었다. 표 1 [0070] 생육시기 건물율 (%) 수축율 (%) 1월 월 월 월 월 월 월 월 월 월 월 월 [0071] [0072] [0073] [0074] [0075] [0076] 1월에서 12월까지생육시기별로수확한도라지저장근의건물율과수축율은도 1 및상기표 1에나타낸바와같이생육시기에따라뚜렷한차이를나타냄을확인할수있었다. 먼저, 건물율은도라지의지상부개화기, 즉지상부영양생장이최대에달하고, 생식생장으로전환되는시기인 7월부터월동후지상부의새로운새싹이출현직전인 2월까지약 22~23% 수준으로유사한양상을나타내지만, 지상부새싹출현후지상부생육이전개되면서독립적영양생장이충족되기전, 즉잎의완전한전개및형성이되기전인 4월까지는지하부저장근에축적된양분의소모에의해지상부의전개가이루어지므로 4월까지저장근의건물율은급격한감소양상을나타내어 4월에는 15.7% 수준으로가장낮게나타남을확인할수있었다. 이후점진적으로지상부의광합성능력향상에따라영양생장에필요한양분의소모외에여유양분의지하부축적이이루어져건물율도점진적으로향상되며, 5월에는 18.3%, 6월에는 19.3%, 7월에는 22.9% 수준으로거의최대에달하고, 이후의시기에는거의일정한건물율을나타냄을확인할수있었다. 이같은현상은도라지의지상부가생식생장으로넘어가고, 낙엽및지상부고사가이루어지므로신규양분의합성이불가능하거나, 합성이되더라도호흡등생명유지에필요한양분의소모가발생하므로지하저장근에물질축적이불가능하기때문일것으로예측할수있었다. 즉, 도라지의수확기결정시건조후중량만을고려할경우, 7월이후부터 2월까지는건물율이거의일정하므로수확후건조에따른중량감소에기인한수량감소는없을것으로판단되었다. 한편, 수축율또한 5월부터차년도 2월까지는변화가극히미미하며, 지상부새싹이출현하여독립적인생육이진전되기직전인 4월까지 (36.8%) 현저한수축율감소를나타내었으며, 이후지상부생육이최성기를이룬 5월이후부터감소되는경향을보였다. 4월에지하부건물율이가장낮았다는사실을감안하면 4월까지는지상부광합성동화산물이저장근으로축적되기보다는오히려저장근으로부터지상부생육에필요한양분의공급이이루어진것으로보이고, 이때저장근은지하부저장양분을지상부영양생장을위한공급으로인해심각하게수축되어가장높은수축율을나타낸것으로판단되며, 5월이후수축율이다시감소한것은지상부에의한광합성동화산물이저장근으로전이, 축적되어증가한것으로판단되었다. (2) 플라티코딘디 (platycodin D) 함량상기에서건조한도라지를 60메쉬의분말상태로제조한후이분말 1g에추출용매로증류수 30mL를첨가하여 40 조건의초음파추출기에서 2시간동안추출한후 Whatman No.2 여과지로 1차여과를수행하였고, HPLC 분석직전 syringe filter(0.45μm ) 로 2차여과를실시하였다. 상기플라티코딘디의함량은 HPLC/UVD/MS 또는 ELSD 분석에의해평가하였으며, HPLC 컬럼은역상 (C18) 크로마토그래피컬럼을사용하였고, HPLC/UVD/MS 및 ELSD는 Agillent 1200 series(usa) 및 6100 Quadrupole MS(USA) 를사용하였다. 분석조건으로유속은분당 1.0mL, 컬럼의온도는 30, 시료주입량을 20μL로제한하여사용하였다. HPLC 분석에이용된이동상조건은 2상 (two phase) 농도구배조건으로유기용매로는아세토니트릴 (ACN) 을사용하여선형농도구배법으로분석하였다. HPLC/MS 분석조건은하기표 2와같으며, 실험결과는도 2에나타내었다

10 표 2 [0077] LC/MS system Agilent 6110 Quadrupole LC/MS Column Imtakt C 18 (250ㅧ 4.6mm ID., 5μm, Japan) Column temp. 30 Mobile phase 0.1% formate-h 2 O : 0.1% formate-acn Flow rate 1.0mL/min Sample size 10μl Ionization ESI Negative-ion mode Gas temp. 350 Drying gas 10mL/min Capillary voltage 3.5kV Mass range(m/z) 500~1,500 [0078] [0079] [0080] [0081] 생육시기별건조된도라지시료를분말상태로제조한후도라지의주성분인플라티코딘디의함량을정량적으로평가한결과도 2에나타낸바와같이, 플라티코딘디의함량은전년도 10월이후부터즉, 차년도생육의시원체인맹아가형성된이후부터차년도 1월까지는함량의큰변화가없이 0.24~0.26% 수준을나타내었고, 지하부맹아가지상부싹으로생장하기시작하는준비단계인 2월부터 3월까지는플라티코딘디의함량이약 0.34% 수준으로급격히증가하는양상을나타내었으며, 1년중가장높은함량을나타내었다. 4월에지상부로완전히전개된초엽에도약 0.20% 수준의플라티코딘디가함유되어있는것으로보아아마도플라티코딘디는월동후 2월경부터맹아로부터지상부초엽의전개와관련된생리적식물생장과연관성이있을것임을유추할수있었다. 이후, 지상부생육이진전됨에따라 4월에는 0.31%, 5월및지상부최성기인 6월에는 0.24%, 개화기인 7월부터 9월까지는약 0.20% 수준으로지상부생육이진전됨에따라뚜렷한감소경향을나타내었으며, 특히개화기인 7 월부터생육이진전된 9월까지는연중가장낮은양상을나타내었고, 차년도시원체인맹아가형성되는 10월부터는다시 0.25% 수준을유지하는양상을나타내었다. 이상의결과로볼때도라지는연중관행적수확기인 10월부터이듬해 1월까지는저장근에함유된플라티코딘디의함량에큰차이가없고, 이듬해지상부싹이트기전 2월부터 3월사이저장근내에서급격히함량이증대되는양상을나타내므로, 수확기를결정할때건조, 차년도영양번식등의문제가없다면플라티코딘디의함량면에서는 2~3월경수확하는것이바람직할것으로판단되었다. 한편, 도라지생육시기별건조된도라지에함유된플라티코딘디의함량, 각생육시기별도라지의건물율등을환산하여도라지생근 100g에함유된플라티코딘디의함량을생육시기별로환산해보았으며, 그결과는도 3 및하기표 3에나타내었다. [0082] 생육시기 건조근함량 (%) 건물율 (%) 생근함량 ( mg /100g) 1월 월 월 월 월 월 월 월 월 월 월 월 표 3 [0083] 상기표 3 에나타낸바와같이, 2 월수확한생도라지 100g 에는플라티코딘디가약 69 mg이함유되어가장높은 함량을나타내었고, 생육시기가진전될수록실제생근에함유되어있는플라티코딘디의함량은감소하는양상 을나타내어개화기인 7 월부터 8 월에는약 42.5 mg으로가장낮은양상을나타내었다. 결론적으로, 도라지를건

11 조하여유통할경우생근도라지의건물율즉, 건조뿌리의수량면에서는 7월이후차년도 1월까지어느시기에수확하여도수량에큰차이가없으나, 수확된생도라지의저장근에서추출할수있는플라티코딘디의함량을고려할때에는 2~3월의생근 100g당약 67mg이상으로가장높은양상을나타내므로, 가공용혹은플라티코딘디추출용으로사용할생근의최적수확기는 2~3월이가장최적임을알수있었다. [0084] [0085] [0086] [0087] [0088] 한편, 도라지의년중생육시기별분석시료의 HPLC 크로마토그램은도 3에나타낸바와같이, 생육시기의차이에따라특이성분의 peak가검출되거나소멸되는양상을확인할수없었으며, 단지성분적함량평가의척도가되는 peak의크기만차이가있을뿐기타특이점은발견되지않음을확인할수있었다. 실시예 2. 생육년수에따른플라티코딘디함량변이측정 (1) 건물율및수축율강원도삼척시의독농가가동일한유전적배경을가진도라지를동일한재배조건으로생육시킨 1~10년근도라지를 2011년 10월 13일각해당년수별로생근을수확하여시료로사용하였다. 상기준비한시료를수세및정선한후 50 이하에서화력건조하고, 건물율및수축율을측정하였다. 그결과는도 4~5 및하기표 4에나타내었다. [0089] 생육년수 생근 (g) 건조근 (g) 건물율 (%) 1년근 년근 년근 년근 년근 년근 년근 년근 년근 년근 표 4 [0090] [0091] [0092] [0093] [0094] [0095] [0096] 도라지각해당생육년수별시료의생근과건조근의평균무게를조사한결과는상기표 4 및도 4에나타낸바와같이, 생육년수별시료의평균건물율은 4년근이 26.8% 로가장높은양상을나타내었고, 9년근이 19.0% 로가장낮은양상을나타내었으며, 기타생육년수의시료들은 20~25% 범위를나타내어생육년수에따른일정한경향성을확인할수없었다. 한편, 도라지생근및건조근의평균무게변화를살펴보면생육년수가증가될수록무게가일정한경향으로증가되는양상을확인할수있고, 특히생육년수별건물율은거의유사한양상을나타내지만생육년수가높을수록상대적으로함유된수분의무게는더많아지는양상을확인할수있었다. 또한, 생육년수별시료의평균수축율은도 5에나타낸바와같이 1년근이 58.5% 로가장낮은양상을나타내었고, 기타생육년수의시료들은 60~71% 범위를나타냄을확인할수있었다. (2) 플라티코딘디 (platycodin D) 함량상기에서건조한도라지를 60메쉬의분말상태로제조한후이분말 1g에추출용매로증류수 30mL를첨가하여 40 조건의초음파추출기에서 2시간동안추출한후 Whatman No.2 여과지로 1차여과를수행하였고, HPLC 분석직전 syringe filter(0.45μm ) 로 2차여과를실시하였다. 상기플라티코딘디의함량은상기실시예 1과동일한방법으로평가하였으며, 실험결과는도 6에나타내었다. 생육년수별건조된도라지시료를분말상태로제조한후도라지의주성분인플라티코딘디의함량을 HPLC를이용하여정량적으로평가한결과도 6에나타낸바와같이, 도라지생육년수별플라티코딘디의함량은 1년근이 0.45% 로가장높았으며, 생육년수가진전됨에따라뚜렷한감소경향을나타내어 10년근이 0.21% 로가장낮은양상을나타내었다. 일반적으로도라지는한지역에파종후생육년수가증가함에따라뿌리썩음병이심각하게발생하므로 3년이상의생육이어려운것으로평가되고, 이에따라재배년수가오래된도라지는상대적으로귀하게여겨지며, 생

12 육년수가오래된도라지의약용적가치도높을것으로추정하여장생도라지즉, 재배년수가오래된도라지의가 치를높이평가하고있다. [0097] [0098] [0099] 그러나, 도라지주성분으로평가되는플라티코딘디의함량면에서는장기간생육한장생도라지에서함량이탁월하게높아지는양상을확인할수없었으며, 오히려생육년수가높아질수록플라티코딘디의함량이감소하는양상을확인할수있었다. 일반적으로뿌리를이용하는약용작물의주성분은뿌리의주심 ( 목질부 ) 보다피층즉, 코르크층에주성분이많이함유되어있는것으로알려져있는데, 상대적으로생육년수가낮은뿌리가전체부피대비주심에대한피층의비율이높으므로상대적으로피층의비율이높은즉, 생육년수가낮을수록플라티코딘디의함량이높음을확인할수있었다. 한편, 생육년수별도라지의플라티코딘디함량, 각생육년수별도라지의건물율등을환산하여도라지생근 100 g에함유된플라티코딘디의함량을생육년수별로평가한결과는하기표 5와같다. [0100] 생육년수 건조근함량 (%) 생근함량 ( mg /100g) 1년근 년근 년근 년근 년근 년근 년근 년근 년근 년근 표 5 [0101] [0102] [0103] [0104] [0105] [0106] [0107] [0108] [0109] 상기표 5에나타낸바와같이, 1년생생도라지 100g에는플라티코딘디가약 109mg함유되어가장높은함량을나타내었고, 생육년수가오래될수록실제생근에함유되어있는플라티코딘디의함량은뚜렷이감소하는양상을나타내어 10년근이 46.7mg으로가장낮은양상을나타내었다. 결론적으로플라티코딘디의함량은건조근및생근총괄하여 1~4년근사이가도라지에함유된플라티코딘디의함량이가장높은것으로평가되었다. 한편, 도라지생육년수별분석시료의 HPLC 크로마토그램은도 7에나타내었으며, 도 7에나타낸바와같이생육년수의차이에따라생육년수가진전되어도특이성분의 peak가검출되거나소멸되는양상을확인할수없었으며, 단지성분적함량평가의척도가되는 peak의크기만차이가있을뿐기타특이점은발견되지않았다. 실시예 3. 도라지부위에따른플라티코딘디의함량비교도라지뿌리의주성분으로평가되는플라티코딘디가뿌리이외의다른부위에도존재하는가를확인하기위하여, 6년근도라지를 6월에수확하여수세하고, 지상부의잎, 줄기와지하부뿌리를각각건조한후, 플라티코딘디함량을정량적으로평가하고, 그결과를하기도 8에나타내었다. 이때, 플라티코딘디의함량은상기실시예 1과동일한방법으로평가하였다. 도 8에나타낸바와같이, 플라티코딘디의함량은잎에 0.46% 로가장많이분포하였고, 줄기에는 0.04%, 뿌리에는 0.23% 가존재함을확인할수있었다. 한편, 6월에는꽃이개화하지않은상태이므로, 7월에꽃부위만추가분석한결과자색및흰색꽃모두에서플라티코딘디는검출되지않았다. 이같은결과를통하여, 도라지식물체부위중플리티코딘디는도라지의잎에다량함유되어있으며, 줄기에는극미량분포하고, 뿌리에서는비교적다량검출되는양상을나타내었으며, 이같은결과는생장기중잎에서합성되어줄기를통해뿌리로전이하며, 지하부뿌리에서는영속적으로저장되기때문인것으로유추할수있었다. 실시예 4. 도라지뿌리의부위에따른플라티코딘디의함량비교일반적으로뿌리를이용하는약용작물의주성분은뿌리의주심 ( 목질부 ) 보다피층즉, 코르크층에주성분이많이

13 함유되어있는것으로알려져있다. 이에, 본실시예에서는도라지의경우도뿌리의주심부보다피층즉, 코르 크층에함유된플라티코딘디의함량이어떤차이를나타내는가를검증하기위하여도라지뿌리의부위에따른 플라티코딘디의함량을 HPLC 분석크로마토그램으로분석하여, 그결과를도 9 및 10 에나타내었다. [0110] [0111] [0112] [0113] [0114] 도 9 및 10에나타낸바와같이, 도라지를대상으로원뿌리, 주심및피층에함유된플라티코딘디의함량을조사한결과원뿌리가 0.30%, 주심부위가 0.28%, 피층부위가 0.34% 수준으로조사되어분명히목질화된주심부위보다코르크층으로형성된피층부위에서플라티코딘디의함량이높게나타남을확인할수있었다. 실시예 5. 도라지뿌리의굵기에따른플라티코딘디의함량비교한편, 동일개체내에서생장한도라지의뿌리굵기차이에따라플라티코딘디의함량은어떤차이를나타내는가를검증하기위하여, 10년생도라지를 6월에수확하여각각뿌리의굵기에따라 5그룹으로분류하고플라티코딘디의함량을정량적으로분석하고, 그결과를도 11에나타내었다. 도 11에나타낸바와같이, 뿌리가굵을수록플라티코딘디의함량은현저히낮아지는양상을나타내었으며, 가장가는뿌리인 2mm이하의뿌리가평균 0.49% 로가장높은양상을나타내었고, 다음은 2~6mm가 0.32%, 7~9mm가 0.28%, 10~15mm가 0.17%, 16~28mm가 0.12% 의순으로함량이극히낮아지는양상을나타내었다. 이같은양상은기타약물작용과유사한양상으로생육년수가낮을경우, 즉뿌리의굵기가작을수록플라티코딘디의함량이높게나타남을알수있었다. 또한, 10년근도라지의각뿌리굵기별분류시료를이용하여건조후건물율과수축율을비교, 조사한결과를하기표 6에나타내었다. [0115] 뿌리굵기 16~28mm 10~15mm 7~9mm 2~6mm 2mm이하 평균 건물율 (%) 조사불가능 19.8 수축율 (%) 조사불가능 57.9 표 6 [0116] [0117] [0118] [0119] [0120] [0121] [0122] 각뿌리굵기를정확한년수로판별하는것이불가능하므로각해당생육년수와의정확한직접비교는불가능하나, 상기표 6에나타낸바와같이개략적인생육년수의결과치와유사한양상을나타내었으며, 조사된결과의총평균건물율과수축율을상기 10년근의건물율및수축율과비교하였을때거의유사한양상을보임을알수있었다. 실시예 6. 도라지뿌리의건조방법에따른플라티코딘디의함량비교일반적으로대한약전에는한약재로이용되는약용작물의경우특별한규정이없는한 60 이하조건에서건조하는것으로기재되어있다. 생약재의경우관행적방법으로는 25 이하의조건에서상온음건을하는것이가장보편화되어있고, 최근빠른건조의목적으로화력건조를수행하기도한다. 따라서본실시예에서는생육시기별시료중관행적수확기인 10월시료를이용하여상온음건및 50 화력건조시건조에소요되는시간을비교검토하고, 그결과를도 12에나타내었다. 도 12에나타낸바와같이, 상온음건의경우건물율이 50% 가되는시기까지는건조후 14일이소요되었으며, 더이상의건물율변화가발생되지않는즉, 완전한건조가이루어진시기 ( 건물율 22.5%) 까지는건조시작후약 58일이소요되었다. 반면, 수축율은더이상의뿌리굵기가변하지않는시기까지로, 건조후약 55일이소요되었으며, 이시기의평균수축율은 59.4% 이었다. 한편, 50 화력건조의경우에는건물율이 50% 가되는시기까지는건조후약 19시간이소요되었으며, 완전한건조가이루어진시기 ( 건물율 23.7%) 까지는건조시작후 78시간 (3일 6시간 ) 이소요됨을확인할수있었다. 또한, 수축율은건조후 54시간 (2일 6시간 ) 만에완전건조가이루어져수축율의변화가발생되지않았으며, 이시기의평균수축율은 58.0% 이었다. 이같은결과로볼때, 상온음건조건에서도라지뿌리의완전한건조를위해서는최소 58일이소요되지만, 신속한건조를위해화력건조를이용할경우 50 조건에서는 3일 6시간 (78 시간 ) 이소요되므로, 본발명과같이 50 의온도에서화력건조를실시할경우약 55일이상의건조일수를단축할수있음을확인할수있었다. 한편, 건조방법에따른도라지주성분플라티코딘디의함량변이를검토하고자, 6년근도라지를이용하여동결건조, 상온음건, 50 및 80 화력건조, 121 증건법으로건조방법을각각달리하고, 도라지뿌리에함유된

14 플라티코딘디의함량을비교분석하고, 그결과를도 13 및 14 에나타내었다. [0123] [0124] [0125] [0126] [0127] [0128] [0129] [0130] [0131] [0132] [0133] [0134] [0135] [0136] [0137] 도 13 및 14에나타낸바와같이, 상온음건으로건조하였을경우플라티코딘디의함량이 0.23% 로가장높은함량을나타내었고, 다음으로 50 화력건조, 동결건조, 80 화력건조, 121 증건법의순으로플라티코딘디의함량이높게나타남을확인할수있었으며, 상온이상의온도에서는건조온도가높아질수록플라티코딘디의함량은뚜렷한감소양상을나타내었다. 상기건조소요일수비교실험에서 50 조건의화력건조는건조에소요되는시간을획기적으로단축시킬수있다는결과를도출하였고, 본건조방법에따른플라티코딘디의함량변이실험에서산술적으로는 50 화력건조가상온음건보다는낮은함량을나타내었지만, 통계적으로함량차이는인정되지않았으므로도라지생근의건조시화력건조가필요할경우 50 미만의화력건조를실시할경우획기적인시간단축과더불어성분보존측면에서이용하기에적합할것임을확인할수있었다. 이상과같은결과를통하여, 본발명과같이 1~4년근의도라지중 2~3월경수확한도라지를선별하고, 이들중잎또는뿌리부분을분리하여 50 이하의온도에서화력건조하고분말화한도라지로부터플라티코딘디를추출할경우, 고순도의플라티코딘디를간단하고경제적인방법으로단시간에대량으로추출및생산할수있음을확인할수있었다. 더불어, 본발명에따르면성분측면에서도라지의최적수확기를확립할수있어산업상이용가능성을기대해볼수있다. 제조예 1. 크림제조강원도삼척시의독농가가동일한유전적배경을가진도라지를동일한재배조건으로생육시킨 3년근도라지를 2월에수확하고, 상기수확도라지의뿌리를수세및정선하고, 50 이하에서 70시간동안화력건조하여완전히건조시킨후 60메쉬로분말화하였다. 상기도라지분말 200g에추출용매로증류수 6L를첨가하여 40 조건의초음파추출기에서 2시간동안추출하고, 같은방법으로총 3회추출하여추출된용액은모두합쳐 Whatman No. 2 여지를이용한 1차여과및 syringe filter(0.45μm ) 를이용한 2차여과후여과물을동결건조하였다, 건조된여과물을용매분배및 C18 컬럼크로마토그라피방법을이용하여고순도플라티코딘디를수득하였다. 상기수득한플라티코딘디 1.0중량 %, 아세틱에시드 2.2중량 %, 벤토나이트 2.8중량 %, 부틸렌글리콜 4.0중량 %, 페녹시에탄올 3.0중량 %, 트리에탄올아민 2.0중량 %, 메틸파라벤 1.5중량 %, 에틸파라벤 1.2중량 %, 부틸파라벤 1.2중량 %, 에칠파라벤 1.1중량 %, 이소부틸파라벤 1.0중량 %, 프로필파라벤 1.0중량 % 및잔량의정제수를혼합하여통상의방법에따라크림을제조하였다. 제조예 2. 팩제조상기제조예 1에서수득한플라티코딘디 0.5중량 %, 에틸알코올 3.0중량 %, EDTA-2Na 0.05중량 %, 프로필렌글리콜 5.0중량 %, 글리셀린 4.5중량 %, 카보폴 1.5중량 %, 폴리옥사이드 0.2중량 %, 미량의향과방부제및잔량의정제수를혼합하여통상의방법에따라팩을제조하였다. 제조예 3. 연고제제조상기제조예 1에서수득한플라티코딘디 2.0중량 %, 밀납 10중량 %, 폴리솔베이트 중량 %, 피이지 60 경화피마자유 2.0중량 %, 솔비탄세스퀴올레이트 0.5중량 %, 유동파라핀 10.0중량 % 및잔량의바셀린을혼합하여통상의방법에따라연고제를제조하였다. 제조예 4. 산제제조상기제조예 1에서수득한플라티코딘디 5.0중량 %, 글루코사민염 20.0중량 %, 콘드로이친황산 14중량 %, 콜라겐 10중량 %, 비타민C 1.0중량 %, 비타민A 0.1중량 % 및비타민E 0.1중량 % 를혼합하여통상의방법에따라산제를제조하였다. 제조예 5. 액제제조상기제조예 1에서수득한플라티코딘디 5.0중량 %, 글루코사민염 25.0중량 %, 콘드로이친황산 20.0중량 %, 콜라겐 10.0중량 %, 비타민C 5중량 %, 비타민A 0.5중량 %, 비타민E 0.5중량 %, 아스파탐 1중량 % 및잔량의정제수를혼합하여통상의방법으로액제를제조하였다. 제조예 6. 기능성음료제조상기제조예 1에서수득한플라티코딘디 2.0중량 %, 이성화당 15.33중량 %, 구연산 0.1중량 %, 비타민C 0.04중량 %, 향료 0.1중량 %, 상기실시예 2의조성물 15.0중량 % 및잔량의정제수를혼합하여통상의음료제조방법에따

15 라기능성음료를제조하였다. [0138] [0139] [0140] [0141] [0142] [0143] [0144] 제조예 7. 스킨로션상기제조예 1에서수득한플라티코딘디 0.5중량 %, 녹나무오일 2.5중량 %, 1,3-부틸렌글리콜 5.2중량 %, 올레일알코올 1.5중량 %, 에탄올 3.2중량 %, 폴리솔베이트 중량 %, 벤조페논-9 2.0중량 %, 카르복실비닐폴리머 1.0 중량 %, 글리세린 3.5중량 %, 미량의향과방부제및잔량의정제수를혼합하여통상의방법에따라스킨로션을제조하였다. 제조예 8. 밀크로션 ( 영양로션 ) 상기제조예 1에서수득한플라티코딘디 1.0중량 %, 세토스테아릴알코올 1.0중량 %, 글리세릴모노스테아레이트 0.8중량 %, 소르비탄모노스테아레이트 0.3중량 %, 포로필파라벤 0.1중량 %, 폴리솔베이트 중량 %, 미네랄오일 5.0중량 %, 사이크로메티콘 3.0중량 %, 디메티콘 0.5중량 %, 알란토인 0.1중량 %, 글리세린 5.0중량 %, 알코올 2중량 %, 프로필렌글리콜 3.0중량 %, 미량의향과방부제및잔량의정제수를혼합하여통상의방법에따라밀크로션 ( 영양로션 ) 을제조하였다. 제조예 9. 에센스상기제조예 1에서수득한플라티코딘디 0.5중량 %, 1,3-부틸렌글리콜 4.0중량 %, 글리세린 10중량 %, 알란토인 0.5중량 %, 판테놀 0.1중량 %, EDTA-2Na 0.01중량 %, 에탄올 2.0중량 %, 트리에탄올아민 1.5중량 %, 스쿠알란 2.0중량 %, 밀납 2.5중량 %, 폴리솔베이트 중량 %, 카르복실비닐폴리머 1.0중량 %, 솔비탄세스퀴올레이트 2.5중량 %, 미량의향과방부제및잔량의정제수를혼합하여통상의방법에따라에센스를제조하였다. 비록본발명이상기에언급된바람직한실시예로서설명되었으나, 발명의요지와범위로부터벗어남이없이다양한수정이나변형을하는것이가능하다. 또한첨부된청구범위는본발명의요지에속하는이러한수정이나변형을포함한다. 도면 도면

16 도면 2 도면 3a

17 도면 3b 도면

18 도면 5 도면

19 도면 7 도면

20 도면 9 도면

21 도면 11 도면

22 도면 13 도면

최민지 / 세계무역기구과 / :16:24-2 -

최민지 / 세계무역기구과 / :16:24-2 - - 2 - - 3 - - 4 - - 5 - - 6 - - 7 - - 8 - - 9 - - 10 - - 11 - - 12 - - 13 - - 14 - - 15 - - 16 - - 17 - - 18 - 안식향산안식향산나트륨안식향산칼륨안식향산칼슘 파라옥시안식향산메틸파라옥시안식향산에틸 0.6 이하 ( 안식향산으로서, 파라옥시안식향산에틸또는파라옥시안식향산메틸과병용할때에는안식향산으로서사용량과파라옥시안식향산으로서사용량의합계가

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