대한임상병리사회지 : 제 20 권제 l 호 1988 흰쥐춰 l 장소도세포의감별을위한 특수염색법의비교연구 이화대학부속병원조직병리과 황구연 1. 서론 훼장 (pancreas) 은외분비부 (exocrine poπion) 와내분 비부 (endocrine portion) 로구분

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1 대한임상병리사회지 : 제 20 권제 l 호 1988 흰쥐춰 l 장소도세포의감별을위한 특수염색법의비교연구 이화대학부속병원조직병리과 황구연 1. 서론 훼장 (pancreas) 은외분비부 (exocrine poπion) 와내분 비부 (endocrine portion) 로구분되어지며외분비부에 서는훼액 (pancreatic juice' 을분비하여훼관을통하여 십이지장으로내보내고, 특히지방성음식물의소화 작용에중요한역할을한다. ( 강, 1981). 를 이훼액중 amylase, lipase, trypsin과같은효소들의활성치는훼장염의이상결과를판정하는데중요한지 침이되며 ( 고문사, 1984), 내분비부는소화효소가아니 라호르몬을분비하는 Langerhans 씨소도세포로구성 되어있으며이는훼장의두부 (head) 나체부 (body) 보다미부 (tail) 에많이분포하고있다. Langerhans 씨소도는분비하는호르몬의종류에따 라 3 가지세포들로구성되어있는데 glucagon 을분비 하는 a 세포가약 30 %, insulin 을분비하는 β 세포는약 60 %, gastrin 이나 sαnatostatin 을분비하는 δ 세포가약 10% 를차지하고었으며이러한세포들의증감에따라 여러가지호르몬장애가초래될수있다. ( 제갈, 1986). 일반적으로훼장조직내의 Langerhans 씨소도세포 의염색은 hematoxylin and eosin(h&e) 염색에서는 a, β, δ 세포가동일하게염색되어구별이어려우나, 특 수염색 ( special stain ) 을해보면분비하는호르몬의종 류에따라각세포들이다르게나타난다. 특수염색의방법은 Tschassowikow 둥 (1889) 에의하 여 safranin 과 gentian vi 이 et 을사용한염색법이처음 으로소개되었다. 그후 Bayley ( 1937) 가여러가지실 험동물을이용한 fuchsin orange and hernatoylin 방법 을개발하여 a, β 세포를염색하였으며, 그후 gomori (1 939) 의 chromium hematoxylin 과 phloxin 을사용한 방법, Maldonado( Maldonado 뻐 d S 하 1 J e, 1967) 의 Azure 11 와 Phloxin 을사용한방법과, 그리고최근에 보고된 P AS -Trichrome 방법 (Sheehan and Hrapchak, 198 이둥이소개되었다. 이와같이여러사람에의해서훼장조직내소도의 a, β, ð세포를검출하기위한특수염색방법이발전되어왔으며, 훼장도 (pancreatic islet) 의염색에흔히사용되 는 Gomori (1939 ) 와 P AS-Trichrome 방법 (Sheehan and Hrapchak, 1980) 으로염색을실시할때사용되는 고정액은 10% 포르말린, Bouin, Helley 용액이주로 사용되고있으나, 각고정액마다고정시간과염색결과 의차이에대해서는논란의대상이되고있다. 이에저자는병리조직학적검사업무를수행하면서 어려움을겪었던바실험동물의일종인흰쥐에서신선 하게채취한훼장을고정액의종류및고정시간의차 이에따른변화를관찰하였다. 또한고정후 gomori (1939), Maldonado( Maldonado and San Jose, 1967), PAS-Trichrome(Sheehan 뻐 d Hrapchak, 1980) 의 3 가지방법으로훼장조직내 Langerhans 씨소도세포의특수염색을시행하여, 어떠한고정액 과고정기간및염색방법을사용하였을때광학현미경상에서 a, β, ð세포를인지하는데가장좋은염색결과 를얻을수있는가를밝히고앞으로업무를수행하는데도움을얻고자본연구를시도하였다. a. 연구재료 IT. 연구재료및방법 생후 14 주된위스타 (Wistar) 종건강한흰쥐 ( 체중약 360gm) 4 마리에서신선하게채취한훼장을두부, 체 부, 미부로구분하고, 각부분마다 3 둥분하여 10% 포 르말. 린용액, Bouin 용액, Helley 용액으로각각고정시 켜서흰쥐 1 마리에서 9 개의검체를얻었다. 똑같은방법으로얻은검체를 6 시간, 12 시간, 24 시간, 48 시간동으로고정시간을다르게하여 36 개의검체를 사용하였다. b. 고정액의제조방법 -78-

2 CD 10% 포르말린용액 증류수는 90 ml 에 40% 포르말련 10 ml 를넣어 100 ml Bouin 용액 Picric acid 포화수용액 75 ml 에 40% 포르말린 25 ml 를넣어 100 ml Helley 용액 A 용액 증류수 100ml 어 11 potassium dichromate 2.5 gm, mercuric chloride 5gm, sodium sulfate 1 gm 을넣고잘용해 시킨다.. B 용액 8. 증류수에행군다 % alcohol 에서탈수하고무수 alcohol 을거쳐서 xylene 을통과한후 permount 나 histoclad 둥으로봉입 한다. Weigert 의 iron hematoxylin 용액의제조볍 A. hematoxylin 용액 무수 alcohol 100 ml 에 hematoxylin 1 gm 을넣어잘 용해시킨다. B. iron 용액 증류수 95 ml에 30 % feric chloride 수용액 4ml와농염산 1 ml를혼합한다. C 사용액 A 용액과 B 용액을사용직전에동량혼합한다. 10% 포르말린 다. 사용액 A 용액 95 ml 와 B 용액 5 ml 를사용직전에혼합한 c. Gomori 법 파라핀절편을 Bouin 용액에 2 차고정후수세과정을 통하여 picricacid 를제거해야한다. chromium hematoxylin 용액으로 β 세포를, phloxin 용액으로 a 와 δ 세포를염 색한다. Gomori ( 1939 ) 의염색방법은다음과같다. 흰쥐 ( 체중약 360 gm) 에서신선하게채취한훼장을 각고정액에서시간을다르게하여고정시켰다. 고정시킨검체를 24 시간동안흐르는물에서수세를 한후통상적인조직처리과정을거쳐파라핀에포매 한다음 4-6 마이크론의두께로앓게박절하여각검 체마다 10 매씩의연속절편을취해서 Maldonado 볍 (Maldonado and San Jose, 1967), Gomori 볍 (Gomori, 198 이 PAS-Trichrome 볍 (Sheehan and Hrapchak, 198 이으로각각 2 회씩염색하였다. CD Maldonado 법 Weigert iron hematoxylin 용액을사용하여핵을염 색하고 phloxin 용액으로 a 세포를, Azure 1I 용액으로 β 와 6 세포를염색한다. Maldonado 의염색볍 (Maldonado and Jose, 1967) 은 다음과같다. 1. 파라핀절편을탈파라핀한후 1 % phloxin 용액에 약 10 분간넣어두면조직전체가적색으로된다. 2. 증류수에행군다 % phosphotungstic acid 용액에서 1 분간탈색시 킨다. 다. 4. 증류수에행군다 % Azure 1I 용액에 30 초간염색한다. 6. 증류수에행군다. 7. Weigert 의 iron hematoxylin용액에 1분간염색한 1. 파라핀절편을탈파라핀하고함수단계를거쳐서 증류수에행군다. 다. 2. Bouin 용액에약 24 시간동안 2 차고정한다. 3. picric acid 가제거될때까지흐르는물에수셰한 % potassium permanganate 용액에 1 분간산화 시킨다 % sodium thio sulfite 수용액으로탈색한다. 6. 흐르는물에약 10 분간수세한다. 7. chromium hematoxylin 용액에약 10 분간염색한다 % HCl-alcohol 용액에 1 분간탈색한다. 9. 조직절편이투명한청색이될때까지흐르는물에 수세한다 % phoxin 용액에 5 분간염색한다. 11. 증류수에행군다 % phosphotugstic acid 용액에 1 분간감별한다. 13. 흐르는물에 5 분간수세한다 % alcohol 에탈색하고 80% alcohol 에 초간행군다. 15. 무수 alcoh 이에탈수하고 xylene 을거쳐서 permount 나 histoclad 등으로봉업한다. Chromium hematoxylin 용액의제조법 1 % hernatoxy비1 수용액 50rnl와 3 % chromium potas외um sulfate 수용액 50 ml를혼합한후 potassium i, 여ate 0.1 gm 을첨가하여짙은청색이될때까지끓인다. 사용하기전에여과하여야한다. -79-

3 @ PAS -Trichrome 법 Periodic acid 용액으로조직절편을산화시킨후 Schiff 시약에넣어두면분홍색으로변한다. Ponceau -orange G 용액으로 a 세포를, light green 용액으로 β 와 6 세포 를염색한다. P AS-Trichrome 염색법 (Sheehan and Hraκhak, 1980) 은다음과같다. 1. 파라핀절편을탈파라핀하고함수단계를거쳐증 류수에행군다 % periodic acid 용액으로 20 분간산화시킨다. 3. 흐르는물에 5 분간수세한다. 4. Schiff 시약에 20 분간반응시키면절편이분홍색 으로변한다. 5. sulfurose rinse 용액에 30 초씩 3 회처리한다. 6. 흐르는물에 10 분간수세한다. 7. Weigert 의 iron hematoxylin 용액에 10 분간염색 한다 % alcohol 로행구고 1 % HCl-alcohol 용액으로 탈색한다. 9. 흐르는물에 10 분간수세한다. 10 ponceau-orange G 용액에 2 시간염색한다. 11. 증류수에행군다 % phosphomolybdic acid 용액에교원섬유와세 포가무색이될때가지감별한다. 13. 증류수에행군다 % light green 용액에약 20분간염색한다 % acetic acid 용액에 1-2분간 3 회수세한다 % phosphomolybdic acid 용액에 3-5 분간감 별한다 % acetic acid 용액에 20 분간수세한다. 18. 무수 alcohol 에탈수하고 xylene 을거쳐야 rmount 나 histoclad 동으로봉입한다. Schiff 시약의제조볍 증류수 200ml 에 basic fuchsin 1 gm 을용해하고괴 는점까지가온한다. 50 "C 까지온도를내린후여과하 여 ln HCl 20 ml 를가한다. 완전히식힌후 sodium metabisulfite 1 gm을넣는다. Sulfurose rinse 용액의제조법 증류수 300ml 에 lnhcl15ml 와 10% 엉 ium metabisulfite 용액 18 ml 를사용직전에혼합한다. Ponceau -orange G 용액의제조법 증류수 100 ml 에 ponceau 2R 0.2 gm 과 orange G 0.1 gm 을혼합하여용해시킨후 glacial acetic acid 1 ml 를첨가한다. d. 성적판독법 Maldonado 염색법 (MaldQnado and San ]ose, 1967) 에서는 a 세포는자색, β 세포는보라빛청색, ð 세포는 밝은청색으로, Gomori (1 939) 의염색볍은 a 세포는빨강, β 세포는청색, δ 세포는분홍 ~ 적색으로 P AS-Trichrome 염색법 (Sheehan and Hrapchak, 198 이에서는 a 세포는 짙은오렌지색, β 세포는밝은녹색, a 세포는반투명한 독색등으로염색결과를판독하였다. 위의각방볍을염색도의정도에따라강한양성 ( ), 중등도양성 ( ), 약양성 (+), 국소적으로약양성 ( 土 ), 확인할수없음 (-), 염색되지않음 (None) 둥으로표 기하였다. ill. 결과 1) Maldonado 법 a 세포는자색, β 세포는보라빛청색으로염색되었 으며 6 세포는 β 10% 포르말린용액 6, 12, 24, 48 시간동에서전체적으로염색성이푸르 게보였으며 β 세포는약양성으로염색되고, β 세포는 국소적으로약하게염색되는부위가있었다 ð 세포는 알아볼수없었다. ( 표 Bouin 용액 6 시간에서 a 세포는약하게 β 세포는중둥도염색성 을보였으며 ( 표 1, 그림 2), 24 시간에서는 β 세포가중 둥도염색성을보였을뿐 a 와 6 세포는알아볼수없 었다 ( 표 1). 따라서 6 시간에서비교적좋은결과를얻 을수있었다. <C) Helley 용액 6 시간 12 시간에서 β 세포만이약하게염색되었을뿐 a 와 6 세포는확인할수없었으며, 24 시간과 48 시간에 서는절편이부스러지거나떨어져서염색성을관찰할 수없었다. ( 표 1) 위의설명을고정액의종류및고정시간별로정리하 여보면표 1 과같다. 2) Gomori 법 a 세포는빨강, β 세포는짙은청색으로염색되어 a 와 β 세포는뚜렷하게구별할수있었으나 6 세포는 a 세 10% 포르말린용액 -80-

4 표 1. The result of Maldonado staining for pancreatic islet cell subtypes according to the various fixative solution and time. Fixaton time 6hrs 12hrs 23hrs 48hrs fixative solution aβδ aßδ aβδ aβδ 10 % formalin 土十 - 土 +- 土 +- 土 +- Bouin + - Helley None None : Moderate, + : Mild, 士 : Trace, - : unidentified, None: unstained cell types of islet 6 시간에서는 a 와 β 세포가중둥도염색성을보였으 나, 12, 24, 48 시간에서는 a 세포가약하게염색되고 β 세포는중동도염색성을보였다 ô 세포는알아볼수 없었다 ( 표 2). 3) PAS -Trichrome 법 a 세포는짙은오렌지색, β 세포는연한녹색, Ô 세포 는반투명한녹색으로염색되어 a, β, Ô 세포를뚜렷 10% 포르말린용액 6 시간에서는 a 와 β 세포가중동도염색성을보였으 며 6 세포는국소적으로약하게염색되었다. 12, 24, 48 시간에서는 a 세포가약하게염색되고 β 세포는중등 도염색성을보였으며, δ 세포는국소적으로약하게염 색되었다 ( 표 Bouin 용액 12 시간에서 a 와 β 세포는중둥도염색성을보였으며 β 세포는강양성으로염색되어가장좋은결과를얻을 수있었다 ( 표 3, 그림 4, 5). 6, 24, 48 시간에서는 a 와 β 세포는중동도염색성을보였으나 6 세포는약하게 염색되었다 ( 표 3). ~ Helley 용액 6, 12, 24 시간에서는 a 세포가약하게염색되고 β 세 포는중동도염색성을보였으며, δ 세포는국소적으로 약하게염색되었다. 48 시간에서는절편이부스러지거 나떨어져서염색성을관찰할수없었다 ( 표 3). 위의설명을고정액의종류및고정시간별로정리하 여보면표 3 과같다. N. 고찰 1889 년 Tschassowikow 등이훼장조직내소도의 a, β, δ 세포의염색법을처음으로보고 (Bayley, 1937) 한 후많은학자들 (Robert, 1980: Arimura, 1975: Hellerstrom, 1960) 에의하여발전되어왔다. Michael 둥 (1 975) 은면역형광학적인방법을사용하 였으며, Stemberg 등 (1 970) 이처음소개한면역조직화 학적방법인 peroxidase antiperoxidase (P AP) 방법 (Montero, 1981 : Hilds, 1982) 및 Lacy 등 (1 959) 의전 자현미경을이용한방법동으로훼장조직내소도의 a, β, δ 세포를구분하였다. 위방볍들중변역형광학적방볍과면역조직화학적 인 PAP 방법및전자현미경적방법은결과판독에는 우수한성적을얻을수있으나염색시약의가격이비 싸고유효기간및특수시설을갖추어야하므로병리조 직검사실에셔. 통상적으로사용하기에는문제점이많 다. 따라서이러한점을감안해볼때훼장조직내소도 의 a, β, ô 세포의구분을위해병리조직검사실에서 흔히사용되고있는특수염색방법중에서대표적인 Maldonado 볍 (Maldonado and San Jose, 1967), Gomori 법 (Gomori, 1939), PAS-Trichrome 볍 (Sheehan and Hrapchak, 1980) 을고정시간을서로다르게하여적절 한염색조건을찾는다는것은실무를수행하고있는 사람들에게많은도움이될것으로사료된다. 참조적으로실시한 Hematoxylin and eosin(h & E) 염색에서는오등 (1981) 의염색도감에서와같이각각 의세포들을구별할수없었다 ( 그림 1). Maldonado 염색법을이용하여염색한 Maldonado 등 ( 1967) 과 Preec(1959) 의연구결과를보면 a 세포는 자색, β 세포는보라빛청색, δ 세포는밝은청색으로염 -81-

5 표 2. The result of Gomeir staining for pancreaic islet cell sub types according ot the various fixative solution and time. Fixaton time 6hrs 12hrs 23hrs 48hrs fixative solution aβ6 aβ'ô qβδ aβδ 10 % formalin Bouin + - Helley 士 +- 土 +- 土 +- None : Moderate; + : Mild, 土 : Trace, - : unidentified, None: unstained cell types of islet 표 3. The result of P AS~ Trichrome staining for pancreatic islet cell syb types according to various fixative solution and time. Fixaton time 6hrs 12hrs 23hrs 48hrs fixative solution aβδ aβδ aβδ aβ8 10 % formalin 土 + 土 + 土 + 土 Bouin Helley + 士 + 土 + 土 None : Moderate, + : Mild, 士 :Trace, - : unidentified, None: unstained cell types of islet 색된다고보고하였으나, 본연구에서는 a 세포는자색, β 세포는보라빛청색으로염색되어 a 와 β 세포의구별 은용이하였으나 6 세포는 β 세포와구별할수없었 다.(table 2, 그림 2). 이것은 Azure II 용액의과염색과 더불어표본자체도다른것에비해두꺼웠던데그원인 이있는것으로생각된다. 한편 Weigert 의 iron hematoxylin 용액을사용하여 핵을염색할때 A 용액 (hematoxylin) 과 B 용액 (iron) 을 사용직전에혼합하지않으면용액의색깔이 암갈색으로변하여사용할 법을이용하여 청색에서 수없엇다. Gomori 염색 염색한 Gomori ( 1939) 와 McManus 등 (196 이및 C k (1 974) 의연구결과를보면 a 세포는 빨강, β 세포는청색, δ 세포는청색으로염색되어 a 와 β 세포의구별은용이하였으나 6 세포는 a 세포와구별 할수없었다. 이것은 95 % alcohol 을사용하여감별하 는과정에서너무빨깡게염색되지않도록주의를필 요로하는기술상의문제점으로생각된다. 한편 Gomori 염색법에서고정액은 Bouin 용액을사 용하였을때가장좋은염색성을관찰할수있었으나 ( 표 2, 그림 3), 염색과정에서조직절편을 Bouin 용액 에 게 -82- 약 24 시간동안 2 차고정을실시한후염색을하 되어시간이오래걸리고 Bouin 용액성분의일종 인 picric acid 를완전히제거시켜야만이원하는염색 성 (Gomori, 1939; McManus 등, 196 이을얻을수있는 것이단점으로지적되었으며, 실제로 80 % alcohol 에 서는약 30 분, 되었다. 흐르는물에서는약 1 시간가량이소요 Maldonado 염색볍에서는 β 와 6 세포를, Gomori 염색법 에서 는 a 와 6 세포를구별할수없어 <<, β, ô 세포의 구별을명확하게할수없었던바 PAS- Trichrome 염 색법을시도하였다. PAS-Trichrome 염색법을이용한 McMnus 동 (1 960) 과 Sheehan 등 (198 이의연구결과를보면 a 세포는짙 은오랜지색, β 세포는밝은녹색, ô 세포는반투명한 독색으로염색된다고보고하였으며, 본연구에서도마찬가지의결과를얻을수있었다 ( 그림 4, 5).

6 Explanation for Figures Fig 1. H&E stain. x 400 (1 0 % formalin sol, 12hrs) Fig 2. A: a1pha cell B: beta cell,' Ma1donado stain. x100이 (Bouin Fig 3. A : a1pha cell B : beta cell, Gomori stain. x 1000 (Bouin so1. 12 hrs) so1. 6hrs) Fig 4. A : a1pha cell B : beta cell D : de1ta cell, P AS- F핑 5. Trichrome stain. x400(bouin so1. 12hrs) -83- A : a1pha æll B: beta cell D : de1ta cell, Pas -Trichrome stain. x 1000(Bouin 떼. 12hrs)

7 JI~<2!j.g- Bouin %<2!J% A}% il}~%u:jl 7}-AJ ~.g- cg ~Ad% :t!-% ~ T ~~_9 ~(1i 3), 10% ~.SW~% ~i!} Belley %<2!JoJ]Afc Bouin %~&q cg~ado] q ~ A~ il}!9 '-l- Maldonado cg ~ 1iJ ~ Gomori ~ ~ 1iJ i!} l:l]ji!.il}a:j &ll'! ~~ ~.g- 'i'j~ad% :t!-% ~ T ~l~tt. rrj-c}a~ PAS-Trichrome'i'!~liJ.g- 'i'!li9-1 tf 0 J~ j ~p~ Ad~(Cook, 1974:McManus %, 1960)_9. ~illa:j 'i'j~7li'-"'j-9-1 ;;r~q~ i!}_~7l- ~H=-~ ~i!l-ojl 1~9-1 OJ"8J% ol:;(.lal ~%~_9 A}Ji.!fltf. ~~ JI~'2!j_9. Belley %<2!J% A}% ill-~% u:j1 _2_ (1977)~ Jo!{(1984).g_ L-ilf- _2_?)!%~ Jl~A]7]ll'! 3:_~ o] - -~c~al7l "fjqji il}-~_9 '-l- ~~]. 24A]{} +ojl c JI~'2!j9-l ~~oj T-%~oJjA~ ~_9 ~il}jl 48A] {} +ojlc ~ ~_9. ~ }ill-ll'!"'~ tif.g- ~~%o] ;,~~ _9_~ 3:_~0] t-ilf- li:!-li:!-5ij~a~ Jo!{~AjoJ] ~~%% 7,4 ~tf. EE~ 'i'j~% ~ ujl ~~o] lf-~c~a]7~'-l- ~~~'-l-7} c ~.g- Jl~A]{}o] t-ilf-~ji o]oj] ~il}a:j T-A1]7} ~ %~ il}~7] ujj~o]c}ji ;,~zt!e!tt. o]c~~ {l% ~~5ij ~qj :}~]AJ-3:_~~ ~ 9-1 a, /3, OA1]~~ ~*il}-7] ~~ ~T'i'J~oJ]A~c ~l:l]i!}~oj ~ _B_ ~ ~_9 A}li!fltf. ~ ~~~ JIAJ~ ~ jl~aj {}9-l ~12!ji!} ci~~ Jl~A]:{l + %~~ T-A1]7} A-T!9 ~ ~ill.if}c}jtl_ ~ ~% o}t- ~7]1(3-4 o}o]_3_~) Jo!{~ il}ojo}: i!}'i'j%,li]il}jl a, /3, oa11~9-1 -T~% % 0]il}7ll W T- ~%~ o]q, "'i ~n ~~ ~ ~~l ~% ~- -'r'-, ~~Pl-, nj-!}-. l-hr- q..g-.:-rj.. ~.::i: "tl% ~711 ol-71!?-l o}o:j zj- N-~% 10% ~.s~h-~l- -~. Bouin %<2!J. Belley - -Q}joJ]A~ 6"']:;r, 12A]:;r, 24"']:-;'l-, 48A] :;'l- %_9. z{z{ Jl~ Aj :{} + A:..Sc %oj] 24Aj :-;'} TAil il} O:j % "'J- ~~ ~.::i: ~ :;(.1 2-j Jit ~% 71 ~ Al ~~l ~ 3:_ ~ ~ ~s=_g~ a, /3, oa1]~q] ~T-~ ~-g.. Maldonado \tl :i!} Gomori th 1 -}J PAS-Trichromel{l _9. ~A] il}a:j zt 'f! ~ tij-lfl Q] ~ JL}{} l:l] _u~ \~ "-~ ol-~ Iii tl} tf%:i!l- 1t.g.. :ct ~{} ~ ~ 1. a, /3, o Ail~ Q] -ll ~.g- PAS-Trichrome'fl "-~ ~ oj] "'i c a, /3, oa1]~q] -T~o] - -ol il}-~_9 '-l-, Gomori '?=1~~-g- a~ /3A11~9-1 -TtM% ~ T- ~~_9 ~ Maldonado 'fl ~ 1iJ.g- /3 ~ o A1l ~ 9-1 -T ~% ~ T ~~tf. 2. ~~l ~.::i:?-~ ~ ~ 9-1 a, o, /3A1]~9-1 {}~% 'i'j ~~ tljt~.g- PAS- Trichrome~~ 1iJ oj]j,i 7}~ ~.g- 7~.. 7}~ ~~Ctj Maldonado'?=!~ttJ.g- 7}AJ Y-~ ~i!} ~ '-l-et~tt. 'i'j~ad% :t!-%~ T ~~_9 ~, 10% ~E.~~ % ~. Belley%<2!J -i!:- o]q, 4. Jl~ Aj {}.g_ 6Aj :j-i!} 12A] :{}oj] Ai 7}AJ ~_g. 'i'j ~ Ad% tl-~ ~ T ~~tf. o]aj-9-1 ~i!}~ -'5-~il}a:j &l?! :}~]AJ-3:_~~ ~ 9-1 a, /3, oa1l~~ &7]Sfl~ ~T-'i'!~oJl"'ic Bouin%~oJl 12 A]{} JIAJA]:{l +PAS-Trichrome 'i'l~lij_9. 'i'!~% ill-~% ujl 7}~ ~.g- ~i!l-~ ~% T- ~~tt. Comparative Study on the Special Staining Methods for Differentiation of Pancreatic Islet cells in Rat. Koo Yeon Hwang Abstract A special staining methods have been developed for the differentiate of pancreatic islet cells, however, there were few references of the difference of staining results according to fixative solution and time. The pancreas obtained from rat wistar strain were divided into three parts as hesad, body, and tail. 3. JI~<2!j.g- Bouin %<2!J% A}% il}~%u:jl 7}-AJ ~.g -84-

8 Each part was fixed in 10% formalin solution, Bouin solution, and Helley solution, respectively for different fixaative time of 6hrs., 12hrs., 24hrs., and 48hrs., and then it was stained by Maldonado method, Gomori method, and PAS-Trichrome method in order to.observe the suitable differentiation of pancreatic islet cells. The results were as follows: 1. In comparison with PAS-Trichrome method, it was difficult to distinguish a cell from o cells with Gomoi's method and f3 cell from o cells with Maldonado's method, respectively. 2. The pancreatic islet cells were well differentiated by PAS-Trichrome staining and poorly by the Maldonado's staining. 3. Relatively a good stanability was obtained from the Bouin -fixed tissue, while moderate to poor from 10% formalin and Helley solution 4. The duration of fixation from the Bouin-fixed tissue for 6hrs or 12hrs. In conclusion, specil staining applied to differentiate the a, /3, o cells of pancreatic islets, the best result could be obtained by applying PAS-Trichrome method in Bouin soution for 12hrs. 1. 7J-'f- 1(1981): "~2-1~. "'1%:{1~~ :}-l-}, 7HAj :} {)~~(1986): '1JC-1~~~T-~6!l ~. "'1%:t:ll~"'1 i.fl :' Jl~/-}(1985): '1JC-1~~ 0 }~2.}~, "'1%: Jl~l-} pp J]_~J-}!f_}~-'f-(1984): CfjAJ{3l-}~AJ]_B_, J-1%: Jl_~J-} pp ~%~(1971): ~~l5h-'f-~ii. "'1%: T-~;,} pp lit9.1rl1 '1]2-]~JI!.{:l(1986):.]{1'1]2-]~, "'1%: Jl ~"'} pp A~j~ %~(1986): ~~7]~~, J-1%: Jle;:19.]~ pp ~~~(1984) : ~~ ' :3"'}~. "'1%: tll ~"'1 ~ p _ -eoa 0977) : ' ~ ~ {3 "'}1:l7l ~ ~ 6!l ~, "'1 * : {1 ~~~"'} p _-2-0J, ~Ell~. ~.X.~(1981): '112-1~~~~ {)-, "'1% : t:ll ~"'1 ~ p Arimura, A.,Sato,H.,duport,A.,Nisht, N., and Schally, A.V.(1975) : ~omatostatin abundnce of immune in rat stomach and pancreas, Science. 189: Bayley,J.H.(l937) : Stainingg methods for the islets of Langerhans, J.path & Bact. 44 : Bell,E.T.(l946) : The beta granules in the islets of Langerhans in diabetes mellitus,am.j.path. 22 : Cook,H.C.(l974) :Manual of histological demonstration techniques, London, Butterworths Chidds,G.V.(1982) :Use of immunocytochemical techniques in cellular endocrinology. In :Electron microscopy in biology. ].Griff, ed, John wiley & Sons, New York, 2 : DiFiore,N.S.H.(1973) :Atlas of human histology, philadelphia : 3rd.ed Gomori,G.(1939) :A differentiated stain for cell types in the pancreatic islets. Am.J.path. 15 : Grzanma,R.(1982) : Light microscopic immunocytochemistry with fixed, unembedded tissue. In : techniques in immunocytochemistry. G.R.Bullock and P.Pertusz, eds. New york, Academic press, 1 : Hillerstrom, C., and Hillman, B. ( 1960) : Some aspects of Langerhans in rat, Acta Endocrinol. 35 : Lacy, P.E.,Cardeza,A.F.,and Wilsion, W.D.(l959) : Electron microsocopy cell types in the islets of Langerhans of the guinea pig, rat, rabbit, and dog, Anat. Rec. 128 : Lacy,P.E.,Cardeza,A.f., and Wilson,W.D.(1959) : Electron microsocopy of rat pancreas, Diabetes 8 : Lillie, R.,Dougall, H.,and Fullmer,M.(1976) : Histopathologic technic and practical histochemistry, New York, McGraw-Hill Book Company 4th.ed Luna,L.G. ( 1968) : Manual of histologic staining -85-

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