대한한의학회지제 33 권제 3 호 (2012 년 9 월 ) J Korean Oriental Med 2012;33(3): Original Article 산수유산약지각상엽으로구성된복합처방투여가고지방, 고탄수화물식이로유발된비만형당뇨병동물모델의대사인자및지방세포염증

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1 대한한의학회지제 33 권제 3 호 (2012 년 9 월 ) J Korean Oriental Med 2012;33(3): Original Article 산수유산약지각상엽으로구성된복합처방투여가고지방, 고탄수화물식이로유발된비만형당뇨병동물모델의대사인자및지방세포염증반응조절에미치는영향 한수련, 백선호, 권오준, 안영민, 이병철, 안세영 경희대학교한의과대학신계내과학교실 Effects in Metabolism and Adipocyte Inflammation Induced by the Complex Herbal Medicine composed of Cornus officinalis, Dioscorea rhizoma, Aurantii fructus, Mori folium in Obese Type 2 Diabetes Mouse Model Su-Ryun Han, Sun-Ho Paik, Oh-Jun Kwon, Young-Min Ahn, Byung-Cheol Lee, Se-Young Ahn Dept. of Internal medicine, College of Oriental Medicine, Kyung Hee University Objectives: There is a steady increase in the prevalence of obesity worldwide and obesity is often accompanied by inflammation. Although much emphasis has been placed on the adipose tissue inflammation in obesity, a study with herbal medicine is few. This study aimed to investigate the antidiabetic and anti-inflammatory effect of a complex herbal medicine (CHM) composed of Cornus officinalis, Dioscorea rhizoma, Aurantii fructus, and Mori Foliumon on obese type 2 diabetes mice. Methods: Type 2 diabetes mellitus and obesity were induced by Surwit's high fat, high sucrose diet for 8 weeks. Mice were divided into ND (normal diet, n=10), HFD (high fat and high sucrose diet, n=10), CHM (high fat and high sucrose diet with complex herbal medicine, n=10) and Met (high fat and high sucrose diet with metformin, n=10) groups. The body weight, fructosamine and OGTT (oral glucose tolerance test) were measured. After 8 weeks the blood samples of all mice were taken from the heart, and lipid profiles were measured. Epididymal fat pad, histological size of the adipocyte tissue and liver weights were measured. Inflammatory markers such as leptin and adipocyte tissue macrophage were measured to evaluate the effect of CHM on adipocyte tissue inflammation. Results: Compared with the HFD group, there was an improvement in OGTT and epididymal fat decreased in the CHM group. White adipocyte size and adipocyte tissue macrophage decreased in CHM group. Conclusions: These results suggest that CHM has antidiabetic and anti-inflammatory effects in high fat, high sucrose diet induced obese mice. Key Words : Cornus officinalis, Dioscorea rhizoma, Aurantii fructus, Mori Folium, Adipocyte tissue macrophage, Obesity Received:27 July 2012 Revised:6 September 2012 Accepted:11 September 2012 Correspondence to: 안세영 (Se-Young Ahn) 서울특별시동대문구회기동 1 경희의료원부속한방병원한방 6 내과 Tel : , Fax : , 184

2 한수련외 5 명 : 산수유산약지각상엽으로구성된복합처방투여가고지방, 고탄수화물식이로유발된비만형당뇨병동물모델의대사인자및지방세포염증반응조절에미치는영향 (439) 서론전세계적으로과잉에너지섭취와활동량의감소로인해비만한인구는꾸준히증가하고있다. 비만은결국인슐린저항성, 고혈당, 고혈압, 이상지질혈증과함께발생하여이를대사증후군이라고칭하는데이러한대사증후군이심혈관계질환의위험도를증가시키게되므로비만은임상적으로매우중요하다. 비만중에서도특히중심성비만이인슐린저항성을유발하는가장큰요인이며인슐린저항성과더불어인슐린을분비하는췌장의베타세포의파괴까지일어나게되면제2형당뇨병이발병하게된다 1). 최근의연구들을통하여비만이인슐린저항성과만성염증상태와밀접한관련이있으며지방세포를내분비기관으로인식하게되면서지방세포에서분비하는 cytokine 들이그신호전달에중요한역할을한다는사실이밝혀지고있다. 비만이만성염증상태라는사실은비만한상태에서 pro-inflammatory cytokine중의하나인 TNF-α 의지방세포에서의분비가증가하며이상태가인슐린저항성을증가시킨다는것이밝혀지면서부터연구가활발히이루어져왔다 2). 그후에지방세포에서분비되는 leptin이라는 cytokine 이음식섭취와에너지균형에관여한다는것등이밝혀지면서지방세포에서분비되는 cytokine 이라는의미의 adipokine 이라는개념이정립되었다. 비만한상태에서는지방조직에서 TNF-α 나 IL-6와같은 inflammatory adipokine의생성이증가하는데이는지방조직의 macrophage 의증가와동반되어나타난다 3). 지방세포에서분비되는 adipokine 들이 macrophage 를지방조직으로침윤하게만들고이러한 macrophage 가염증을매개하게되어결국은 macrophage 가염증상태와인슐린저항성의주된원인이된다고보아최근의연구들은 macrophage 에초점을맞추고있다 4). 현재까지당뇨병을치료하기위한여러가지약물이개발되었지만만성염증상태의개선을목적으로개발된약제는없었다. 따라서현재시점에서비만과이로인하여발생하는염증상태를개선함으로써인슐린저항성을개선시킬수있는치료제연구가필요하다고생각되며본연구에서는한의학에서그해결의실마리를찾아보고자한다. 본연구에서는산수유산약지각상엽으로한약 복합처방을구성하여실험을시행하였는데이중산수유 (Cornus officinalis) 산약 (Dioscorea rhizoma) 과지각 (Aurantii fructus) 은수풍순기환의분할처방으로이미다수의연구에서혈당강하의효과가입증된바있고 5),6),7), 상엽 (Mori Folium) 또한인슐린저항성개선의효과가있다고알려진약물이다 8)9),10),11). 하지만이전의연구들은한약물의투여가혈당강하와지질개선에미치는효과에초점을맞추고있으며지방조직의염증에관한연구는거의이루어지지않았다. 따라서이번연구에서는위네가지약제로복합처방을구성하여이들을고지방고탄수화물식이로유발된비만한쥐에게투여하였을때쥐들의체중, 혈당지표, 지질대사이상, 지방의무게, 지방의크기, adipokine 중의하나인 leptin의농도뿐만아니라지방조직의 macrophage 의변화를모두살펴보고자하였다. 연구방법 1. 검체제조총량 1,000g 씩의산수유 (Cornus officinalis), 산약 (Dioscorea rhizoma), 지각 (Aurantii fructus), 상엽 (Mori Folium) 을각각 1,500 의 80% 에탄올에넣고 heating mantle 을이용하여 2시간동안가열추출하고여과한여액을 500 플라스크에 applicator 를이용하여넣은후 filter로걸러냈다. 걸러진여과액을 Rotary evaporator(model NE-1,, Japan) 로감압농축한후동결건조기 (Model FD-1,, Japan) 로건조시켰다. 동결건조된산수유, 산약, 지각, 상엽 1차추출물을 1:1:1:1 의비율로혼합하여실온에서보관하였다. 최종수거율은산수유 18.9%, 산약 3.4%, 지각 16%, 상엽 18.7% 였다. 2. 고지방고탄수화물식이유발비만형제2형당뇨병동물모델의제작체중 23-25g의 male ICR mice ( 중앙실험동물, Korea) 를구매하여 12시간씩낮과밤이교대되며 40-70% 의습도를유지하고 stainless-steel cage에서 1 주일간사육하며적응기를거쳤다. 먹이와물은자유롭게먹도록하였다. 그후정상군을제외한모든실험군에인슐린저항성을일으킨다고알려진 Surwit's 185

3 (440) 대한한의학회지제 33 권제 3 호 (2012 년 9 월 ) high fat, high sucrose diet (HFD, Research Diets #D , 45 kcal% Fat and 32 kcal% Sucrose) 를 8 주간섭취시켜비만형제 2 형당뇨병을유발했다 (Table 1). 모든동물실험과정은경희의료원동물실험윤리 위원회의승인 (KHMC-IACUC:11-032) 을받았다. 3. 실험군배정및연구계획 실험군은 ICR mouse 10 마리씩정상군 (ND), 대조군 (HFD), 복합처방투여군 (Complex Herbal Medicine, CHM), Metformin 투여군 (Met) 으로나누어진행하였 다. 정상군을제외한나머지 2 개군들은 Surwit's high fat, high sucrose diet 를 8 주간섭취시켜비만형제 2 형당뇨병을유발했다. Metformin 투여군은 Surwit's high fat, high sucrose diet 에복합처방을 0.5% 의비 율로, 복합처방투여군은 Surwit's high fat, high sucrose diet 에복합처방을 5% 의비율로섞어 8 주간섭 취하도록하였다. 4. 체중측정 체중은실험개시일에최초측정한후매주 1 회 씩측정하였고, 실험종료일에마지막 sampling 하기 전에측정하였다. 체중측정은아침사료공급전에 일괄적으로전자저울 (CAS 2.5D, Korea) 을사용하여 측정하였으며, 측정시 mouse 의움직임에따른체중 오차를최소화하기위해플라스틱 bowl 에 mouse 을 올려놓고, mouse 가안정상태에이르러나타나는체 중을기록하였다. 5. Fasting Blood Suger(FBS) 및 Oral Glucose Tolerance Test(OGTT) 측정 FBS 및경구 OGTT 검사는실험 7 주째 8 시간이 상 mouse 를금식시킨후공복시혈당을측정한뒤, glucose(1g/kg body weight) 를 D.W. 에녹여경구투 여한다음 30 분후, 60 분후, 90 분후 mouse 의 tail vein 에서혈액을채취하여혈당을측정하였다. 혈당 은 strip-operated blood glucose sensor(onetouch Ultra Inverness Medical Ltd. Stockport. UK) 기기를 이용하여측정하였다. 6. 지질및당대사분석실험시작 8주째식이제한없이실험동물을희생시키기전 mouse의심장에서채혈을시행하여 3,000rpm 에서 20분간원심분리한다음, 을얻어 -40 에보관한후 total cholesterol(tc), high density lipoprotein(hdl) cholesterol, low density lipoprotein(ldl) cholesterol, triglyceride(tg) 등의생화학적분석을시행하였으며, 동시에 fructosamine(glycoprotein) 검사를시행하였다. 7. 혈청랩틴 (Leptin) 측정실험시작 8주째 mouse의심장에서채혈을시행하여 3,000rpm 에서 20분간원심분리한다음 을얻어 -40 에보관한후삼광재단에의뢰하여 leptin 을분석하였다. leptin은검체에 125I가부착된인간 leptin과 leptin 항혈청을결합시키고, 이결합체에 PEG 침전액을넣어, 결합된 form에서 leptin의양을측정하는이중항체법원리를이용하였다. 방사면역측정법으로 Human Leptin 125 Tubes RIA kit(usa, Linco Research, Inc) 를이용하여측정하였다. 8. 지방및간무게측정실험시작 8주째 mouse를희생시킨후개복하여부고환지방조직 (epididymal fat pad) 및간의무게를측정하였다. 9. 지방세포크기측정지방조직세포의형태학적관찰을위해부고환조직의일부를적출하여 10% formaldehyde 용액에고정및탈수후, paraffin 투과과정을거쳐포매하였다. 박절편기로약 2 두께로박절하여 Hematoxylin and Eosin(H&E) 염색하였다. 염색된지방조직을카메라가부착된광학현미경 (BX61, Olympus, Japan) 으로찍어서 100배의대물렌즈를사용하여개체당 5장의사진을얻은후, 컴퓨터영상분석프로그램 (ImageJ or Image analysis program, Metamorph, Japan) 과크기분석프로그램 (Float morphology, USA) 으로분석하였다. 186

4 한수련외 5 명 : 산수유산약지각상엽으로구성된복합처방투여가고지방, 고탄수화물식이로유발된비만형당뇨병동물모델의대사인자및지방세포염증반응조절에미치는영향 (441) ND(g) HFD(g) Complex Herbal Medicine(g) Casein L-Cysteine Cornstarch Maltodextrin Soybean oil Mineral mixture S Sodium bicarbonate Potassium Citmousee Vitamin mixture V Cholin bitartmousee Sucrose Coconut Oil Herbal Medicine 5.00 Group abbreviation :ND; normal diet, HFD; high fat, high sucrose diet. Weight(g) ND(n=10) HFD(n=10) CHM(n=10) Met(n=10) Initial 23.2± ± ± ±1.03 Final 35.6± ±4.64*** 41.7± ±3.31 FBS(mg/dL) 97.1± ±30.78*** 127.8± ±23.65 OGTT 30ml(mg/dL) 232.5± ±37.34*** 334.4± ±18.08 OGTT 60ml(mg/dL) 203.6± ±61.18*** 268± ±37.57 OGTT 90ml(mg/dL) 141.9± ±45.94*** 218.6± ±33.15 Fructosamine( μm ol/l) 222.4± ±21.53*** 220.8± ±21.05 Group abbreviation : ND; normal diet, HFD; high fat, high sucrose diet, CHM; high fat, high sucrose diet with Complex herbal medicine, Met; high fat, high sucrose diet with metformin, FBS; Fasting Blood Suger, OGTT; Oral Glucose Tolerance Test. Significantly different between the ND and the HFD by ANOVA (*** p<0.001). Significantly different between the HFD and the CHM by ANOVA( p<0.05). Significantly different between the HFD and the Met by ANOVA( p<0.05), p<0.01). 10. Stromal Vascular Cell의분리지방조직은 male ICR mice로부터실험시작 8주째 mouse를희생시킨후개복하여부고환지방조직 (epididymal fat pad) 을채취하였다. Mouse으로부터채취한지방조직은 phosphate buffered saline(pbs, Gibco, USA) 에 2% bovine serum albumin(bsa, Gibco, USA) 를넣은용액에넣은다음작은조각으로분쇄하였다. 여기에 collagenase(sigma, USA) 와 DNase I(Roche, USA) 를넣어 37 에서 30분간 shake하여조직이분쇄되도록하였다. 2% BSA/PBS 에 5mM EDTA를넣은용액에넣고섞은다음 1000rpm 으로 3분간원심분리하였다. 상청액을분리한다음하층의 pellet을제외한나머지용액을제거하고 PBS에 2% Fetal Bovine Serum(FBS, Sigma, USA) 를넣은용액에넣은다음 100 μm cell strainer(bd bioscience, USA) 를이용하여불필요한조직을제거하고 200 g에서 10분동안원심분리하여하부의모아진세포를 RBC lysis buffer(ebioscience, San. Diego, CA, USA) 에 10분간처리, 원심분리하여 SVC를모았다. 187

5 (442) 대한한의학회지제 33 권제 3 호 (2012 년 9 월 ) 11. Adipose tissue macrophage(atm) 에대한 Fluorescence Activated Cell Sorting(FACS) 분석 지방조직에서분리한 SVC 를얼음에넣고세포수 를측정한다음각샘플당 106 cell 농도로조정하였 다. FcBlock (20μg/ml) (BD Pharmingen, USA) 를넣 고 20 분간반응시킨다음 fluorophore-conjugated 된 1 차 antibodies 인 CD45-FITC(BD Pharmingen, USA), F4/80-APC(eBioscience, USA), CD11b-phycoerythrin(CD11b-PE, BD Pharmingen, USA) 혹은 isotype control antibodies 인 Rat IgG2B FITC(BD, USA), Rat IgG2B PE(BD, USA), Rat IgG2a,k APC isotype(ebioscience, USA) 를넣고차광상태에서 20 분간 반응시킨다. 2% FBS/PBS 용액로세척한다음 FACSCalibur(BD bioscience, USA) 를이용하여분석 한다. 이후 FlowJo 프로그램 (Tree star, inc, USA) 을 이용하여 CD45(+), CD11b(+), F4/80(+) 인 macrophage 의퍼센트를분석하였다. 12. 통계분석 통계학적비교분석은 GraphPad PRISM statistical package(ver 2.00, Graphpad software inc., San Diego, USA) 를이용하였고, 각군간의비교는 one-way analysis of variance(anova) 에이어 Tuckey's post-hoc test 로사후검증하였다. 표 (Table) 와그림 (Figure) 에서 각각의수치는평균 ± 표준편차 (mean ± S.D.) 로표시 했으며, 양방검정유의도 (two-tailed p value) 는 p 값이 <0.05 수준일때를기준으로하였다. 결과 1. 한약복합처방투여가체중에미치는영향 체중은 8 주간모든실험군에서지속적으로증가하 는양상을보였는데대조군은 91.8%(23.30±0.82g 에 서 44.70±4.64g 으로증가함 ) 의체중이증가하여정상 군이 53.4%(23.2±0.79g 에서 35.60±3.06g 으로증가 함 ) 의체중증가를보인것에비하여유의한비만이 유도되었다 (p<0.001). 한약복합처방투여군은 8 주간 의고지방고탄수화물식이로 75.9%(23.70±0.67g 에 서 41.7±3.53g 으로증가함 ) 의체중증가율을보여대 조군보다 12.7% 체중증가가억제되었으나유의하지는않았다 (Table 2). 2. 한약복합처방투여가당대사에미치는영향 OGTT에서 FBS를비롯한모든 30분, 60분, 90분후의혈당에서대조군이정상군보다유의성있게높았고 (p<0.001), 한약복합처방군은 60분과 90분후에서대조군보다유의하게낮았다 (p<0.05). 메트포르민군은대조군에비하여 FBS와 30분 (p<0.05), 60분과 90분후 (p<0.01) 의 OGTT 결과에서대조군보다혈당이유의하게낮았다. 즉한약복합처방군이 60분과 (268±31.03mg/dL) 과 90분에서 (218.6±49.04mg/dL) 대조군과비교하여유의하게고혈당을억제하는작용이있는것으로나타났으며 (p<0.05) FBS(127.8± 24.73mg/dL) 와 30분후혈당 (334.4±29.48mg/dL) 과는유의한차이가없었다 (Table 2 & Fig. 1). Fructosamine 농도는정상군 (222.4±10.11 ol/l) 보다대조군 (265.90±21.53 ol/l) 에서유의하게증가하였고 (p<0.001), 한약복합처방투여군 (220.8±53.92 ol/l) 은대조군보다유의하게낮았다 (p<0.05)(table 2 & Fig. 2). 3. 한약복합처방투여가혈장지질농도및 Leptin 농도에미치는영향 LDL Cholesterol 의수치는대조군 (18.5±7.74mg/dL) 이정상군 (6.7±2.50mg/dL) 과비교하였을때유의하게높았으며 (p<0.001) 한약복합처방군 (11.6±2.63mg/dL) 은대조군과비교하였을때유의하게낮았다 (p<0.05). Total cholesterol 의수치는대조군 (239.3±29.03mg/ dl) 이정상군 (161.0±25.06mg/dL) 과비교하였을때매우유의하게증가하였으며 (p<0.001) 한약복합처방군 (260.6±34.08mg/dL) 과대조군과는유의한차이가없었다. Triglyceride 의수치는대조군 (267.6±74.51mg/dL) 이정상군 (134.3±51.19mg/dL) 과비교하였을때유의하게증가하였고 (p<0.01) 한약복합처방군 (193.6± 80.24mg/dL) 은대조군과비교하였을때유의하게감소하였다 (p<0.05). 188

6 한수련외 5 명 : 산수유산약지각상엽으로구성된복합처방투여가고지방, 고탄수화물식이로유발된비만형당뇨병동물모델의대사인자및지방세포염증반응조절에미치는영향 (443) 350 Blo od g lucose level (m g /d L ) N D H F D C H M M e t M in u te s Group abbreviation : ND; normal diet, HFD; high fat, high sucrose diet, CHM; high fat, high sucrose diet with Complex herbal medicine, Met; high fat, high sucrose diet with metformin, FBS; Fasting Blood Suger, OGTT; Oral Glucose Tolerance Test. (*** p<0.001). Significantly different between the HFD and the CHM by ANOVA( p<0.05). Significantly different between the HFD and the Met by ANOVA( p<0.05), p<0.01) F ru c to sa m in e (u m o l/l) N D H F D C H M M e t Group abbreviation : ND; normal diet, HFD; high fat, high sucrose diet, CHM; high fat, high sucrose diet with Complex herbal medicine, Met; high fat, high sucrose diet with metformin. Significantly different between the ND and the HFD by ANOVA(*** p<0.001). Significantly different between the HFD and the CHM by ANOVA( p<0.05). Significantly different between the HFD and the Met by ANOVA( p<0.01). HDL cholesterol 의수치는대조군 (134.1±37.45mg/ dl) 을정상군 (126.5±10.02mg/dL) 과비교하였을때증가하였으나유의한차이는없었으며대조군과한약복합처방군 (151.68±18.75mg/dL) 사이에도유의한차이는없었다. Leptin 의농도는대조군 (1.13±0.37ng/mL) 이정상군 (0.48±0.20ng/mL) 과비교하였을때유의하게높았다 (p<0.001). 대조군과한약복합처방군 (1.11±0.71ng/mL) 을비교하였을때는유의한차이가없었다 (Table 3). 189

7 (444) 대한한의학회지제 33 권제 3 호 (2012 년 9 월 ) ND(n=10) HFD(n=10) CHM(n=10) Met(n=10) HDL Cholesterol(mg/dL) 126.5± ± ± ±12.57 LDL Cholesterol(mg/dL) 6.7± ±7.74*** 11.6± ±2.42 Total Cholesterol(mg/dL) 161.0± ±29.03*** 260.6± ±19.63 Triglyceride(mg/dL) 134.3± ±74.51*** 193.6± ±48.47 Leptin(ng/mL) 0.48± ±0.37*** 1.11± ±0.25 Group abbreviation : ND; normal diet, HFD; high fat, high sucrose diet, CHM; high fat, high sucrose diet with Complex herbal medicine, Met; high fat, high sucrose diet with metformin, HDL; high density lipoprotein, LDL; low density lipoprotein. Significantly different between the ND and the HFD by ANOVA(*** p<0.001). Significantly different between the HFD and the CHM by ANOVA( p<0.05), Significantly different between the HFD and the Met by ANOVA( p<0.01, p<0.001). ND(n=10) HFD(n=10) CHM(n=10) Met(n=10) Fat(g) 0.43± ±0.53*** 1.04± ±0.33 Liver(g) 0.99± ± ± ±0.16 White Adipocyte size( μm 2) Adipocyte tissue macrophage(%) ± ± ** ± ± ± ±1.56*** 2.80± ±0.82 Group abbreviation : ND; normal diet, HFD; high fat, high sucrose diet, CHM; high fat, high sucrose diet with Complex herbal medicine, Met; high fat, high sucrose diet with metformin. Significantly different between the ND and the HFD by ANOVA(** p<0.01, *** p<0.001). Significantly different between the HFD and the CHM by ANOVA( p<0.05, p<0.01). Significantly different between the HFD and the Met by ANOVA( p<0.05, p<0.01) N D W e ig h t (g ) H F D C H M M e t 0 F a t Live r Group abbreviation : ND; normal diet, HFD; high fat, high sucrose diet, CHM; high fat, high sucrose diet with Complex herbal medicine, Met; high fat, high sucrose diet with metformin. Significantly different between the ND and the HFD by ANOVA(*** p<0.001). Significantly different between the HFD and the CHM by ANOVA( p<0.05). Significantly different between the HFD and the Met by ANOVA( p<0.05). 190

8 한수련 외 5명 : 산수유 산약 지각 상엽으로 구성된 복합처방투여가 고지방, 고탄수화물 식이로 유발된 비만형 당뇨병 동물모델의 대사인자 및 지방세포 염증반응 조절에 미치는 영향 (445) W h ite A d ip o cyte Size ND Fig. 4. H FD CHM M et White Adipocyte Size of Each Experimental Group. Group abbreviation : ND; normal diet, HFD; high fat, high sucrose diet, CHM; high fat, high sucrose diet with Complex herbal medicine, Met; high fat, high sucrose diet with metformin. Original magnification = 100. Hematoxylin and Eosin (H&E) staining. Significantly different between the ND and the HFD by ANOVA(** p<0.05). Significantly different between the HFD and the CHM by ANOVA( p<0.05). Significantly different between the HFD and the Met by ANOVA( p<0.01). 4. 한약 복합처방 투여가 지방 및 간 무게에 미치는 영향 부고환 지방층의 무게는 정상군(0.43±0.17g)과 비 교하면 대조군(1.49±0.53g)에서 유의성 있는 증가세 를 보였고(p<0.001), 한약 복합처방 투여군 (1.04±0.27g)은 대조군보다 유의하게 낮았다(p<0.05) (Table 4, Fig. 3). 간의 무게는 대조군(1.07±0.27g)과 정상군 (0.99±0.25g) 사이에 유의한 차이가 없었으며 한약 복합처방 투여군(1.12±0.12g)과 대조군(1.07±0.27g) 사이에도 유의한 차이가 없었다(Table 4, Fig. 3). 5. 한약 복합처방 투여가 부고환 지방 세포 크기에 미치는 영향 지방세포의 크기는 대조군( ± ) 에서 정상군( ± )과 비교하여 유의 하게 증가하였으며(p<0.01), 한약 복합처방의 투여군 에서( ± ) 대조군보다 유의하게 지방세포의 크기가 감소하여(p<0.05) 한약 복합처방 이 지방세포의 크기를 유의하게 억제하는 것으로 나 타났다. 대조군의 지방세포 크기가 1.0배 일 때 한약 복합처방 투여군의 지방세포 크기는 대조군의 0.85배 로 감소하였다(Table 4 & Fig. 4). 광학현미경을 통한 지방세포의 관찰에서 각각의 지방세포를 살펴보았을 때 정상군보다 대조군에서 확연하게 지방세포의 크기가 증가되어있으며 대조군 의 지방세포는 각각의 크기가 정상군에 비하여 불균 일한 형태를 띤다. 한약 복합처방 투여군은 대조군과 비교하여 보았을 때 지방세포의 크기가 더 작고 주변 세포와 비교적 균일한 형태를 띠고 있다(Fig. 4). 191

9 (446) 대한한의학회지제 33 권제 3 호 (2012 년 9 월 ) 12 A d ip o se tissu e m a c ro p h a g e (% ) N D H F D M e t C H M Group abbreviation: ND; normal diet group, HFD; high fat, high sucrose diet group, CHM; high fat, high sucrose diet with Complex herbal medicine, Met; high fat, high sucrose diet with metformin. Significantly different between the ND and the HFD by ANOVA(*** p<0.001). Significantly different between the HFD and the CHM by ANOVA( p<0.01). Significantly different between the HFD and the Met by ANOVA( p<0.01). 6. Fluorescence Activated Cell Sorting (FACS) 를통한한약복합처방투여가 Adipose tissue macrophage(atm) 에미치는영향 FACS 를통한 adipose tissue macrophage 의퍼센트 분석에서 CD11b(+), F4/80(+) 인 macrophage 의퍼센 트는대조군이 (7.99%) 가장높았으며그다음이메트 포르민군 (2.99%) 과한약복합처방군 (2.80%) 이었으며 정상군 (2.49%) 이가장낮았다. 대조군 (7.99±1.56%) 은 정상군 (2.49±0.43%) 에비하여유의하게 (p<0.001) adipose tissue macrophage 가증가하여고지방, 고탄수화물식이로유발된비만한쥐의지방세포에서염증수치가상승되어있음을알수있다. 한약복합처방투여군 (2.80±0.54%) 은대조군과비교하였을때유의하게 adipose tissue macrophage 가감소 (p<0.01) 하여한약복합처방군에서대조군과비교하였을때지방세포의염증이억제되었음을알수있다 (Table 4, Fig. 5). Figure 5의 FACS 의 Q2구간의퍼센트는각군의 mouse 중한마리의분석결과를나타낸다 (Fig. 5). 192

10 한수련외 5 명 : 산수유산약지각상엽으로구성된복합처방투여가고지방, 고탄수화물식이로유발된비만형당뇨병동물모델의대사인자및지방세포염증반응조절에미치는영향 (447) 고찰 비만은제 2 형당뇨병또는심혈관계질환을초래 하는대표적인위험인자이다. 특히중심성비만은이 상지질혈증과고혈압등과함께인슐린저항성을초 래하여제 2 형당뇨와대사증후군의가장대표적인위 험요소이다 1). 인슐린저항성과함께베타세포가파 괴되어인슐린분비에이상이발생하게되면제 2 형 당뇨가발병하게된다 1). Nurses' Health Study and the Physician's Health Follow-Up Study 에서당뇨병의발병에가장큰영향 을미치는요인이바로 BMI 인것이밝혀졌으며 12), 대규모로진행된 Diabetes Prevention Program(DPP) 의연구결과평균 7% 정도의체중감량이당뇨병발생 을 58% 나줄였다고발표하여체중과당뇨병이직접 적으로관련이있음을증명하였다 13). 비만, 특히중심성비만이인슐린저항성을유발하 는가장큰원인으로주목을받고있으며최근많은 연구들을통하여비만, 인슐린저항성과저강도만성 염증상태는서로깊은관련이있다는것이밝혀졌다 14). 염증상태가어떻게인슐린저항성에영향을미치 는지그기전에관하여분자세포학적인접근이이루 어져왔지만아직까지도그기전은많은부분에서밝 혀지지않은상태이다. 이과정에서지방세포의 macrophage 로인해발생하는지방세포조직의염증이인 슐린저항성에관여한다고알려져있다. 또한지방세 포를단순히에너지저장기관이아닌에너지항상성 에관여하는중요한내분비조직으로인식하게되면서 15) 지방조직에서분비하는다양한 cytokine(adipokine) 에대한연구도활발히이루어졌다. 이러한 adipokine 들은 macrophage 와상호작용을하면서지방조 직에서의염증반응과인슐린저항성에중요한역할을 한다. 따라서최신연구들은비만으로유도된이러한 염증상태를개선시키고염증과 adipokine 과의관계를 규명함으로서인슐린저항상태또는제 2 형당뇨를 치료하는새로운접근법에주목하고있다 28,35). 지방세포에서분비되는 adipokine 은비만한상태에 서대부분증가되고지방세포에 macrophage 를침윤 시켜염증상태를유발시키고인슐린저항성을증가시 키게된다. 그외에 macrophage 가지방조직으로모이 는데관여하는요인은복합적으로, 지방세포에서분비 되는 adipokine 의작용과더불어비대된지방세포가 사멸하여이를처리하기위해 Adipose tissue macrophage(atm) 에의해둘러싸이게된다는이론도같이 제기되고있으나아직확실시되지는않았다 16). 최근 임상연구에서도 BMI 와지방세포의 macrophage 의숫 자사이에관련성이있다고보고된바있다 17). 현재까지지방세포와관련된당뇨치료제는 PPAR agonist 인 Thiazolidinediones(TZD) 계약물로제 2 형당 뇨병환자의인슐린저항성을개선시켜혈당을강하 시키는효과가있다. PPAR 는주로지방세포에서발 현되며 TZD 는 PPAR 를활성화시킴으로써항당뇨효 과를발휘한다. PPARγ 는 macrophage 의염증반응을 저해하고염증반응을억제하는유형으로 macrophage 를분화시키고인슐린감수성을개선시키는 adipokine 의분비를증가시키고 GLUT-4 의작용을활성화시켜 18) 전신적으로인슐린저항성을개선시켜주는효능 때문에각광받았다. 그뿐만아니라 PPARγ 는여러실 험연구들에서심혈관계질환에긍정적인영향을미친 다고보고된바있지만초기에 TZD 계열약물이당뇨 병의가장흔한합병증인심혈관계합병증예방에도 움이될것이라는기대와는달리여러임상연구에서 심혈관계부작용들이보고되어 19) 현재까지도그안전 성과관련하여논란이제기되고있는실정이다 20). 그외에 GLP-1, GIP, PYY, Ghrelin 등과같이위장 관에서분비되는호르몬 (Gut hormone) 들이에너지 균형에관여한다는것들이밝혀져이와관련된치료 제가개발되기도하였다. 그대표적이예가 GLP-1 인 데, GLP-1 은음식섭취에따른인슐린분비를증가시 키고인슐린감수성을개선시킬뿐만아니라중추신 경에도작용하여위장의움직임을지연시켜포만감 을느끼게하여에너지섭취를감소시키는효과가있 다. 이러한작용은결국체중감소로이어져제 2 형당 뇨환자에게투여시혈당강하효과와더불어체중감 소의효과가있다고밝혀져있으며그중에서도체간 의지방량감소가가장뚜렷하였다 21). 비만과제 2 형 당뇨병의밀접한관계를고려하여보았을때 GLP-1 의중추와위장관의개입을통한체중과지방량감소 의효능은당뇨병치료의새로운획을그었다고할 수있다. 다만짧은반감기로인하여현재는 GLP-1 을비활성화시키는 DPP-4 를억제하는 DPP-4 inhibitor 가보다널리사용되고있으나이약의체중감 193

11 (448) 대한한의학회지제 33 권제 3 호 (2012 년 9 월 ) 소의효과는거의없는것으로알려져있다. 이와같이최근의제2형당뇨병치료제는지방세포의 adipokine 과관련되거나위장관호르몬의변화로발생한체중감소에따른지방량의감소와관련이깊다. 현재까지비만치료연구에천문학적인비용이치러졌음에도불구하고현재까지비만을치료하기위한수많은약이시도되었다가다양한부작용으로인해사라졌다. 미국식품의약청 (FDA) 에서승인된 Olistat이유일하게장기사용가능한약으로체내에서지방흡수를억제하여몸밖으로지방을배출하는작용을하지만근본적인치료는되지못하고있으며이전에사용되었던 sibutramine 은심장발작과뇌졸중, 두통, 혈압상승, 우울증, 불면증등의부작용으로 2010년사용이금지되어현재근본적으로비만을치료하는약은거의없는실정이다. 현재까지비만에서나타나는지방세포의 macrophage의침윤, 만성염증상태의개선을통해부작용없이인슐린저항성과제2형당뇨를치료하는약은아직개발된바가없다. 지방세포에서분비되는 adipokine과 macrophage 가유발하는 inflammation 이인슐린저항성을발생시킨다는연구결과는향후 adipose tissue macrophage(atm) 의침윤을저해하는기전을통하여인슐린저항성을개선시키는치료제개발의연구가진행될것임을암시한다. 한의학에서는당뇨병을 의범주로본다. 이를지칭하는용어또한다양한데황제내경에서는많이마시고많이먹고자주소변을보는것을 이라칭하고이는살이찌고귀한사람이달고기름진음식을먹어서생긴병이라고하였다. 기름진것을먹으면주리가촘촘해져양기가밖으로나가지못하고내열이생기게되어진액을고갈시키기때문에갈증이생기고자주배가고프며탁한소변을자주보게된다 31). 따라서그치료는 라고하여고갈된음을보해주면서청열시키는치법을기본으로삼는다 34). 본연구에서사용된산수유산약지각상엽으로이루어진복합처방은기존의많은연구들에서혈당강하의효과가밝혀진바있는한약물이다 5-11). 산수유산약지각은혈당강하의효과가입증된수풍순기환의분할처방이며상엽은단일약물로도다수의연 구에서혈당강하의효과가입증된본초로이들을혼합하여복합처방을구성하였다. (Cornus officinalis) 는층층나무과 (Cornaceae) 에속한낙엽소교목인 나무의 을건조한것으로, 의효능이있어,,,,,,, 등의증상을치료하는효능이있다 22). 산수유에서추출한 polyphenol 을 streptozotocin 유발당뇨병동물모델에투여하여공복혈당과식후혈당의감소및 advanced glycation end products(ages) 의합성을억제하는효능이있다고알려져산수유의유효성분들이혈당강하에기여한다는것이밝혀진바있다 5). (Dioscorea rhizoma) 은마과 (Dioscoreaceae) 에속한덩굴성참마 (Dioscorea japonica) 또는마 (Disocorea batatas) 의 을건조한것으로,,, 의효능이있어,,,,, 등의증상을치료한다 22). 산약추출물을 fructose 식이유발인슐린저항성동물모델에게투여하였을때공복혈당식후혈당의감소및인슐린분비촉진을통한인슐린저항성을개선시키는효능이확인되었다 6). (Aurantii fructus) 은운향과 (Rutaceae) 에속한산등 (Citrus aurantum L) 의미성숙한 을건조한것으로,, 의효능이있어,,,,,,, 등의증상을치료한다 22). 지각의성분인 hesperidin, naringin은부분적으로간내해당작용을증가시키고 glycogen 합성을증가시키며포도당합성과정을저해하는작용을하여혈당강하효과가있으며 7) 또한지각의성분인 hesperidin, naringin은고콜레스테롤증쥐에서총콜레스테롤, LDL-cholesterol, VLDL-cholesterol 양을유의성있게감소시켜지질이상을회복시킨다는보고가있어혈당강하효과뿐만이아니라제2형당뇨병의지질이상을개선하는데도활용될수있다고생각된다 8). 상엽 (Mori Folium) 은뽕나무과 (Moraceae) 에속한뽕나무 (Morus alba L.) 또는기타근연식물의잎으로 하는작용이있어,,, 의증상을치료한다 22). 상엽은에탄올추출물을고지방식이로유발된 194

12 한수련외 5 명 : 산수유산약지각상엽으로구성된복합처방투여가고지방, 고탄수화물식이로유발된비만형당뇨병동물모델의대사인자및지방세포염증반응조절에미치는영향 (449) 비만형당뇨동물모델에투여한결과체중감소및간내지방축적억제등의효과를나타낸다고알려진바있으며 9) 비-비만형당뇨모델인 Goto-Kakizak(GK) rat 에서도공복혈당및당부하검사에서식후혈당감소, 인슐린분비촉진, 인슐린저항성개선, 소장에서의 α-glucosidase 억제효과를나타낸다고알려져비만형과비-비만형당뇨모델모두에서인슐린저항성개선의효과가있었다 10). 또한건강인대상임상연구에서 50g의 sucrose를경구투여하면서상엽추출물을동시에투여한결과식후혈당은감소하고인슐린분비는증가하는효능이있었다 11). 그외에도 oxygen free radical을조절하여 oxidative stress를감소시켜췌장에도영향을미쳐당뇨병의발현을억제시킬수있는가능성도제기되는등 36) 단일약물로다양한연구가이루어져왔다. 이들중산수유산약지각은수풍순기환의분할처방으로수풍순기환은이미박 23) 의연구에서고지방고탄수화물식이로유발한비만형제2형당뇨병모델에서혈당강하와 PPAR-α 유전자발현증가및중성지방감소를보고한바있으며, 이 24) 의연구에서도내당능장애환자의식후혈당강하효과를보고한바있어그효능이입증된바있는처방이다. 이에이번연구에서는수풍순기환의분할처방인산약, 산수유, 지각에상엽을추가하여복합처방을구성하여이처방의투여가비만형제2형당뇨병에미치는영향을알아보기위하여고지방, 고탄수화물식이로유발시킨비만형제2형당뇨병모델 mouse 에대하여 8주간정상군, 한약복합처방투여군, 대조군, 메트포르민투여군으로나누어체중, 당대사, 지질농도, leptin 의농도, 지방과간의무게, 지방세포의크기, 지방조직의 macrophage 등의지표들을측정하였다. 메트포르민은 prediabetes 환자에게당뇨를예방하기위하여처방할수있는약중에서유일하게 FDA의승인을받은처방으로당뇨병초기에가장많이사용되므로이번실험의양성대조군으로사용하였다. 8주간의연구기간동안고지방, 고탄수화물식이로모두유의한비만이유도되었고 (p<0.001) 대조군과비교하여한약복합처방투여군의체중이 7주차에접어들어감소하기시작하는양상을보였지만유의하게낮지는않아한약복합처방이직접적으로체중감소에변화를가져왔다고보기는어렵다. 이러한결 과는이전의박 23) 의수풍순기환의실험에서도동일하게나타났으며박 25) 의연구에서는수풍순기환의분할처방이대조군과비교하였을때체중감소가관찰되지않다가마지막 8주째에만유의하게감소하였다는결과로미루어보았을때체중감소의효과가 7에서 8 주이후부터두드러지게나타나는것일가능성도있다고본다. 당대사의측정은경구내당능검사 (Oral Glucose Tolerance Test, OGTT) 와 Fructosamine 수치의측정으로평가하였는데정상군과비교하였을때대조군이공복혈당을포함한 0, 30, 60, 90분에서모두유의하게혈당이높게측정되어고지방고탄수화물식이로유의하게내당능의이상이발생하였다고볼수있다. 한약복합처방투여군이대조군에비하여경구당부하 60분과 90분에서유의하게혈당강하의효과가나타나 (p<0.05) 대조군보다인슐린저항성이감소하였음을알수있다. Fructosamine(glycoprotein) 측정법은단백질의아미노기가비효소반응으로포도당과결합하는방법을이용한것으로지난 2-3주간의혈당의평균을반영하는수치이다. Fructosamine 의농도는대조군에서정상군과비교하였을때유의하게증가되어최근 2주간의평균혈당이유의하게상승하였음을알수있으며 (p<0.001) 한약복합처방군의 fructosamine 농도가대조군보다유의하게낮아 (p<0.05) 혈당강하의가능성을보여준다고할수있다. 이상지질혈증은인슐린저항성이특징인당뇨병과대사증후군에서가장많이볼수있는지질대사이상으로, 인슐린의지단백생성억제효과에장애가발생하여혈중에지단백농도가높아지고간내중성지방함량이많아지면서죽상동맥경화증의위험이높은 LDL을생성하며 HDL의분해를촉진시켜콜레스테롤역수송작용을저해한다 26). 이상지질혈증이당뇨병환자의심혈관질환합병증발생위험도에기인하는바가크기때문에당뇨병치료에있어서이상지질혈증의교정은매우중요하다. Total cholesterol의농도는정상군에서가장낮았고대조군은유의하게정상군보다높았으나한약복합처방군은대조군과비교하였을때유의한차이가없었다. 이러한결과는본연구와유사한다른박 23) 의연구에서도수풍순기환의투여가 total cholesterol 의 195

13 (450) 대한한의학회지제 33 권제 3 호 (2012 년 9 월 ) 농도에는영향을미치지않았으며그후박 25) 의수풍순기환분할처방투여에서도동일하게관찰된다. 그외 LDL-cholesterol 과중성지방의농도는정상군과비교하였을때대조군이유의하게높았으며대조군과한약복합처방을비교하였을때는한약복합처방군이유의하게낮았으나 (p<0.05) HDL-cholesterol의경우는대조군과정상군, 대조군과한약복합처방들사이에모두유의성이없었다. 이상지질혈증에대한이러한결과는타유사연구결과들과는조금씩차이를보이는데박 23) 의연구에서는수풍순기환처방의투여가중성지방수치만을유의하게낮추었다고보고하였으나수풍순기환분할처방을투여한박 25) 의연구에서는유의성이없었으며송 27) 의연구에서는수풍순기환분할처방이 HDL-cholesterol 의농도만을유의하게높였다고밝혔다. 지방조직 (White adipose tissue) 은 leptin, adiponectin, resistin, TNF-α, IL-6, MCP-1등을비롯한다양한 adipokine 들을분비하면서지방세포에침윤하는 macrophage 와함께만성염증상태를유발하고인슐린저항성과심혈관계합병증발생에중요한역할을하고있다 15 ). 비만한환자들의만성염증상태는혈장의 C-reactive protein과 TNF-α와 IL-6, MCP-1, IL-8 등과다기능단백질인 leptin과 osteopontin 과같은염증성 cytokine 의농도의상승으로확인할수있다 28). 여러 rat과 mice를통한연구에서실험적으로 TNF-α 를감소시켰을때인슐린저항성이감소하였음이밝혀져염증매개물질이인슐린저항성과관련이있다는것이밝혀지기시작하였으며 2) IL-1과 IL-6도인슐린의신호체계에관여하여인슐린저항성을증가시키는방향으로작용한다는것이밝혀졌다. MCP-1과 IL-8등을비롯한여러 cytokine 들은 macrophage 를지방조직으로유인하여침윤한 macrophage 가염증을매개하게되면서인슐린저항성에관여하는데 leptin 도여기서 MCP-1 을비롯한염증매개물질을생성하는역할을한다 28). Leptin은이들중대표적으로 white adipose tissue에서분비되는 adipokine으로체내지방량과비례하여분비되어비만의지표로사용된다 33). Leptin은인간에서포만감을느끼게하는신호를전달하여음식섭취를조절하고중추회로에도영향을주어에너지소비를촉진시키는기능이있어발견초기에비만치료에활용할수있을것이라고여 겨졌으나비만한사람들은오히려 leptin의내성으로인해 leptin의농도는높으나체중감소의효과는기대하기어렵다 32). 비만에서나타나는고leptin 혈증은만성염증상태와같이관찰되는데이는 leptin이 macrophage를활성화시키고 TNF-α를비롯한다른 cytokine의생성에관여하는것과관련이있다 29). 이번연구에서 leptin의농도는정상군과비교하였을때대조군에서유의하게증가하였으나 (p<0.01) 한약복합처방군과대조군사이에유의한차이가없었다. 대조군에서 leptin의농도가증가하였다는결과는대조군이정상군에비하여유의하게 (p<0.001) 체중증가가일어났으며 leptin의농도가체중, 특히지방량과비례한다는연구들과일치한다 33). 한약복합처방군을대조군과비교하였을때 leptin농도의유의한변화가나타나지않았는데한약복합처방군이지방무게는감소시켰으나유의한체중감소의효과는없었기때문이라고생각되며, 박 23) 의연구에서비만한쥐에게수풍순기환을투여하였을때 leptin의농도에는변화를주지못했다는결과와유사하다. Leptin은다른요인들에의해서많은영향을받으며아직까지도생체내작용이정확하게밝혀지지않은바가많아다른연구들에서도다양한결과들이보고되고있다. 지방세포의크기가커져서형태의변화가오게되면지방세포에서 TNF-α 생성이활발해지고 TNF-α가 chemoattractant protein-1(mcp-1) 의생성을자극시켜 macrophage 가지방조직으로모이도록유도한다. 이과정에서 leptin 또한 macrophage 가지방세포에모이는것을돕는다. 이러한 macrophage 를 adipose tissue macrophage(atm) 라고한다. 즉비만한상태에서는지방세포에서분비되는 adipokine 들이지방세포에 macrophage 들이침윤하는것을돕고이로인해만성염증상태가지속이되는데이러한상태가인슐린저항성을증가시키게되므로 4) 결국염증상태의개선이인슐린감수성향상에도움이된다. ATM은세포표면에 F4/80, CD11b등과같은표지자를갖고있어 FACS(Fluorescence Activated Cell Sorting) 를통한분석에서 F4/80, CD11b에서양성으로나타나는비율로지방세포로유입되는 macrophage의증가정도를측정할수있다. 본실험에서정상군과비교하였을때대조군의지방의무게 (p<0.001) 와지방세포의크기 (p<0.01) 가모 196

14 한수련외 5 명 : 산수유산약지각상엽으로구성된복합처방투여가고지방, 고탄수화물식이로유발된비만형당뇨병동물모델의대사인자및지방세포염증반응조절에미치는영향 (451) 두유의하게증가하여고지방고탄수화물식이가지방세포의비대를유발시켰음을알수있었다. 지방세포의비대와더불어 FACS 분석에서도 ATM의비율이유의하게증가하여 (p<0.001) 체내지방량이증가함에따라 ATM이증가하였음을알수있었다. 식이로유발된비만한쥐의부고환지방조직을 F4/80과 CD11b 항체로염색하였을때모두양성으로나타나는 macrophage 의비율이증가한다는것은이미다른연구에서밝혀진바있다30). 한약복합처방을투여한군과대조군을비교하였을때한약복합처방군의지방의무게 (p<0.05) 와지방세포의크기 (p<0.05) 가유의하게감소하였으며 ATM의비율이유의하게낮았다 (p<0.01). 양성대조군인메트포르민군이한약복합처방군보다지방의무게와지방세포크기의감소폭이컸음에도 (p<0.01) 불구하고 ATM의비율은한약복합처방군에서메트포르민군보다유의하게감소하였는데이는한약복합처방군이지방량의감소와지방세포크기비대를억제하는효능과더불어지방세포의 macrophage 를감소시키는효능이더클수있다는것을시사한다 (Fig. 5). 본연구에서사용한산수유산약지각상엽으로이루어진복합처방은다수의연구결과에서혈당강하의효과가입증된바있으나이전의연구들은비만한쥐에게이러한한약물경구투여시체중, 혈당, 지질대사, 지방세포의크기및 adipokine 의분비변화등을알아보았다면본연구에서는이와더불어비만을만성염증상태로보아그지표인지방세포의 macrophage의비율을알아보았다. 산수유산약지각상엽의한약복합처방을식이로유발된비만한쥐에게투여하였을때체중은감소하였으나유의하지는않았고 OGTT를비롯한 fructosamine 의수치는유의하게낮았다. 한약복합처방은 leptin의농도및간의무게에는유의한변화가없었으나부고환지방층의무게와지방세포의크기는유의하게감소시켰고그중 ATM의비율을크게감소시켰다. 이번연구결과는본연구에사용된한약복합처방이직접적인체중감소나혈당강하의효과이외에지방세포의 macrophage를감소시켜염증을개선시킴으로써인슐린감수성을증가시킬수있다는가능성을보여준다. 그과정을다양한 adipokine 들이매개하게되는데아직한약물들이이러한 adipokine 들에미치는영향에대 한연구는많이부족한실정으로향후 adipokine 들과 macrophage 에초점을둔연구가많이이루어져야할것이다. 결론한약복합처방이 Surwit's high fat, high sucrose 식이로유발한비만형제 2형당뇨병모델 mouse의체중, 공복혈당, 당및지질대사, 부고환지방무게및간무게, leptin, ATM에미치는효과를조사하여다음과같은결론을얻었다. 1. 한약복합처방투여는 Surwit's high fat, high sucrose 식이로인한체중증가억제가능성을보였다. 2. 한약복합처방투여는공복혈당 (FBS) 과경구당부하검사 (OGTT) 에서내당능을회복시켰다. 3. 한약복합처방투여는 Fructasamine 을유의하게감소시켰다. 4. 한약복합처방투여는 LDL-cholesterol, Triglyceride 를유의하게감소시켰다. 5. 한약복합처방투여는부고환지방층 (Epididymal Fat Pad) 의무게를대조군보다유의하게감소시켰다. 6. 한약복합처방투여는 Adipocyte Size, Adipose Tissue Macrophage를유의하게감소시켰다. 본연구결과에따르면한약복합처방은비만형제 2형당뇨병모델 mouse의당및지질대사를개선시키고, 지방의무게및 ATM을감소시키는효과가있었다. 이연구를바탕으로향후추가적인임상연구가필요할것이라생각된다. 감사의글 * 본연구는 2009년도경희대학교연구비지원에의한결과임 ( 과제고유번호 KHU ). 참고문헌 1. Gardner D, Shoback D. Greenspan's basic & clinical endocrinology. McGrawHill. 2007:

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16 한수련외 5 명 : 산수유산약지각상엽으로구성된복합처방투여가고지방, 고탄수화물식이로유발된비만형당뇨병동물모델의대사인자및지방세포염증반응조절에미치는영향 (453) 18. Odegaard JI, Ricardo-Gonzalez RR, Goforth MH, Morel CR, Subramanian V, Mukundan L, et al. Macrophage-specific PPARr controls alternative activation and improves insulin resistance. Nature. 2007;447: Nissen SE, Wolski K. Effect of rosiglitazone on the risk of myocardial infarction and death from cardiovascular causes. N Engl J Med. 2007;356 (24): Dormandy JA, Charbonnel B, Eckland DJ, Erdmann E, MassiBenedetti M, Moules IK, et al. Secondary prevention of macrovasular events in patients with type 2 diabetes in the proactive study: A randomised controlled trial. Lancet. 2005;366(9493): Bunck MC, Diamant M, Eliasson B, Cornér A, Shaginian RM, Heine RJ, et al. Exenatide affects circulating cardiovascular risk biomarkers independently of changes in body composition. Diabetes Care. 2010;33(8): 전국한의과대학본초학교수. 본초학. 서울 : 도서출판영림사. 2000:351-2, 537-8, Park JS, Lee BC, Doo HK, Ahn YM, Ahn SY. The Effects of Supungsunki-hwan on High Fat, High Carbohydrate Diet-Induced Obese Type 2 Diabetic Mouse Model. Korean J. Orient. Int. Med. 2009;30(2): Lee BC, Kwon YG, Choi KL, Lee JS, Ahn YM, Ahn SY, et al. The Hypoglycemic Effect of Supungsunkihwan on Impaired Glucose Tolerance & Mild NIDDM Patients. Korean J. Orient. Int. Med. 2001;22(3): Park EY, Ahn SY, Ahn YM, Um JY, Jang HJ, Lee BC. The effects of Supungsunki-hwan Partitioned Prescriptions on Obese Type 2 Diabetes Mouse Model Induced by High Fat, High Carbohydrate Diet. Korean J. Orient. Int. Med. 2011;32(3): Cho HK. Diabetes Mellitus and Disorder of Lipid Metabolism. Endocrinol Metab. 2006;21(2): Song SY, Ahn SY, Ahn YM, Um JY, Jang HJ, Lee BC. Anti-Glycemic and Anti-Lipid Effect of Ethanol Extract of Supungsunkihwan-gagambang in High Fat Diet-induced Obese Mice. J Korean Oriental Med. 2011;32(5): Zeyda M, Stulnig T. Obesity, inflammation, and insulin resistance-a mini-review. Gerontology. 2009;55(4): Loffreda S, Yang SQ, Lin HZ, Karp CL, Brengman ML, Wang DJ, et al. Leptin regulates proinflammatory immune responses. FASEB J. 1998;12: Pingping Li. Functional Heterogeneity of CD11c-positive Adipose Tissue Macrophages in Diet-induced Obese Mice. Journal of biological chemistry. 2010; 285(20): 허준. 동의보감. 경남하동 : 동의보감출판사. 2005: Heymsfield SB, Greensberg AS, Fujioka K, Dixon RM, Kushner R, Hunt T, et al. Recombinant leptin for weight loss in obese and lean adults: a randomized, controlled, dose-escalation trial. JAMA. 1999;282(16): Considine RV, Sinha MK, Heiman ML, Kriauciunas A, Stephens TW, Nyce MR, et al. Serum immunoreactive-leptin concentrations in normal-weight and obese humans. NEJM. 1996;334(5): 전국한의과대학신계내과학교실. 신계내과학. 서울 : 군자출판사. 2011: Cancello R, Clement K. Is obesity an inflammatory illness? Role of low-grade inflammation and macropohage infiltration in human white adipose tissue. RCOG. 2006;113: Kim OG, Jeong JC. Effects of the Mori folium in Streptozotocin-Induced Diabetic Rats. Korean J. Orient. Int. Med. 2006;27(4):