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1 대한안과학회지 2009 년제 50 권제 6 호 J Korean Ophthalmol Soc 2009;50(6): DOI : /jkos = 증례보고 = 접수번호 : 토끼눈에서플라스민과히알루론산분해효소의약리적유리체융해능력비교 김무상 1 문상웅 2 김응석 3 유승영 1 곽형우 1 경희대학교의과대학안과학교실 1, 인제대학교의과대학서울백병원안과학교실 2, 중앙대학교의과대학안과학교실 3 목적 : 플라스민, 히알루론산분해효소, 이들의혼합물이유리체를융해시키는능력을알아보고자한다. 대상과방법 : 36 마리의토끼를 12 마리씩 3 군으로나누고, 우안에각각플라스민, 히알루론산분해효소, 이들의혼합물을유리체강내주사하고좌안에인산염완충생리식염수를주사하여대조안으로삼았다. 전체유리체중액화되지않은부피를측정하여대조안및각군의결과를비교하였다. 결과 : 대조군 36 안에서 24 시간지난후겔상태인유리체부피는전체의 74.7±2.4% 였다. 플라스민을주사한군에서 56.7±2.4%, 히알루론산분해효소를주사한군에서 56.1±2.0%, 이들의혼합액을주사한경우 44.6±2.1% 의겔상태유리체가남았다. 각군모두대조안에비해유의하게우수한유리체융해능력이관찰되었다 (p<0.05). 플라스민과히알루론산분해효소각군간비교에서유리체융해능력은유의한차이를보이지않았으나이들의혼합물을주입한군에서효소를단독으로주입한군보다유의하게더큰유리체융해가관찰되었다 (p<0.05). 결론 : 토끼눈에서플라스민과히알루론산분해효소는유리체를액화시키는능력이있을것으로생각된다. < 대한안과학회지 2009:50(6): > 약리적유리체융해 (pharmacologic vitreolysis) 는유리체망막질환에서유리체역할을약물로제거함으로써질병의경과를호전시키는새로운치료의개념이다. 1 유리체망막질환에서유리체는질병의진행과밀접한연관이있는데, 당뇨망막병증등에서발생하는신생혈관은망막에서시작하여유리체후면을따라증식하게되고이러한경우유리체제거는치료에도움을줄것으로생각된다. 2 또한황반원공이나유리체황반견인증후군 (vitreomacular tractional disease) 에서유리체의견인력을제거하는것역시치료의중요한과정이며, 당뇨황반부종이나낭포황반부종에있어서도유리체의제거는치료에긍정적인영향을미칠것으로예상된다. 3-5 한편, 약리적유리체융해는유리체절제술의보조수단으로도사용이가능하다. 특히, 젊은환자의유리체절제술시후유리체박리의어려움이예상되는경우후유리체박리를유발할수있는약물을수술과동시에사용한다면많은도움을받을수있을것이다. 6,7 따라서약리적유리체융해는보다덜침습적이고값싸며안전한치료의 접수일 : 2008 년 8 월 25 일 심사통과일 : 2009 년 3 월 2 일 통신저자 : 곽형우서울시동대문구회기동경희대학교병원안과 Tel: Fax: * 본논문의요지는 2006 년대한안과학회제 95 회춘계학술대회에서구연으로발표되었음. 대안으로서임상적발전가능성이클것으로생각된다. 약물을이용하여후유리체박리를유발하기위해서는두가지의과정을구분하여고려하여야한다. 첫번째과정은겔상태의유리체가융해되어일부는액화되고일부만이겔상태의유리체로남겨지는과정, 즉겔상태의유리체부피가감소되는과정이다. 두번째는유리체가망막으로부터완전히분리되는과정이다 약물을이용한유리체분리에서이두가지의과정은반드시동시에일어나야한다. 만약유리체가융해되어서부피가감소하였으나유리체와망막이완전히분리가일어나지않는다면, 망막에가해지는견인이오히려증가하여망막열공등의심각한합병증을유발할수있을것이다. 1,2,10 따라서약물을임상적으로사용하기이전에이들약물의유리체융해능력과유리체를망막으로부터분리시키는능력의정도를농도와시간에따라서면밀히검사함이필요하게된다. 유리체를액화시키는효소로가장많이알려진것은히알루론산분해효소 (hyaluronidase) 이며, 이들은유리체의중요한구조물인히알루론산 (hyaluronic acid) 을분해한다. 10,11 유리체를망막으로부터분리시킬수있을것으로생각되는효소로서가장많이연구된것은플라스민 (plasmin) 으로, 이들은유리체- 망막의접착력에중요한라미닌 (laminin) 과파이브로넥틴 (fibronectin) 을쉽게분해할수있다 최근이상의두가지효소를단독으로혹은함께사용하여유리체망막질환의치료에이용하고자하는 911

2 - 대한안과학회지 2009 년제 50 권제 6 호 - 많은연구가시도되었다. 15 그러나, 각각의효소를단독으로혹은혼합해서안구에주입하였을경우시간에따라유리체액화가얼마만큼진행되는가에대한정량적연구는시행된바가없었다. 이에저자들은유리체를융해시킬것으로생각되는히알루론산분해효소와유리체와망막을분리시킬것으로생각되는플라스민을대상으로이들이실제로유리체를융해시킬수있는지에대한검증이필요하다고생각했다. 또한이들효소를각각혹은혼합하여주입후시간에따른유리체융해의차이가있는지를검사해보기로하였다. 이를위해토끼눈을이용하여유리체액화정도를비교할수있는방법을알아보고, 각각의약물을유리체강에주입하였을경우시간에따라유리체가얼마나액화되는지를검사해보았다. 대상과방법 유색토끼 36마리 (1.5 kg~2.0 kg) 를임의로 3군 (A군 12마리, B군 12마리, C군 12마리 ) 으로나누고 1% cyclopentolate hydrochloride (Cyclogyl, Alcon) 와 2.5% phenylephrine hydrochloride (BAUSCH & LOMB) 를사용하여양안을산동시켰다. 플라스민 (Lyophilized human plasmin, Calbiochem, La Jolla, CA) 과히알루론산분해효소 (Lyophilized ovine testicular hyaluronidase, Calbiochem, La Jolla, CA) 를 -20 에서보관하다가평형염기용액 (balanced salt solution (BSS)) 에용해시켜원하는농도를얻어사용하였다. 모든토끼의오른눈에는플라스민또는히알루론산분해효소를주사하여실험안으로사용하였고, 왼눈에는인산염완충식염수 (phosphate buffered saline, PBS) 를주사하여대조안으로삼았다. B군에는플라스민 1U를평형염기용액 0.1 ml에용해하여단독으로주사하였고 C군은히알루론산분해효소 (10 U/0.1 ml) 를단독주사하였다. A군은향후이두효소의혼합사용가능성을평가해보기위하여, 플라스민 1 U와히알루론산분해효소 10 U를인산염완충식염수 0.1 ml 에용해하여주사하였다. 왼눈에는대조안으로서인산염완충식염수 0.1 ml를유리체강내주사하였다. 유리체강내주사전모든토끼는케타민 (ketamine) 150 mg을근주하여완전히마취시킨후, 개검기를이용하여눈을벌리고 30게이지바늘로앞방천자를시행하였다. 그후, 각막윤부 2 mm 뒤쪽에플라스민및히알루론산분해효소를 30게이지바늘을이용하여유리체강내주사하였다. 주사후항생제안약 (Cravit ) 을점안하였다. 효소의시간에따른유리체융해능력의차이를보기위하여, 각군의 12마리가운데 6마리는주사 1시간후에안구를적출하였고나머지 6마리는 24 시간후에안구적출을시행하였다. 안구내에서유리체만 을분리하기위하여액화질소를이용하였다. 16 즉, 적출한안구는즉시 -196 액체질소 (liquid nitrogen) 에약 30초간넣어서급속냉동시킨후, 얼린조직이녹기전에지체없이각막, 공막, 홍채, 수정체, 맥락막을벗겨내어순수한유리체만을분리할수있었다. 액화질소용기에서안구를꺼낸뒤약 1분후에결빙되었던조직들이녹기시작하므로그전에유리체를분리하여야하였다. 결빙되어분리된유리체는상온에서결빙이풀리면서겔상태와액화된상태의유리체로분리되었다. 이때즉시액화된유리체와겔상태의유리체를따로분리할수있었고, 각각의부피를마이크로피펫을이용하여측정하였다 (Fig. 1). 겔상태의유리체는수술현미경의강한조명아래에서 10분뒤에완전한액체로액화되며이를마이크로피펫을이용하여측정할수있었다. 이를이용하여전체유리체의부피에대해겔상태로남은유리체의백분율 (remained volume of gel type vitreous) 를구할수가있었고이를통계의지표로사용하였다. 통계분석은 SPSS 11.0 for Windows를이용하였고, 비교분석은개체의수가작은점을고려하여비모수적방법인 Wilcoxon signed rank test 및 Kruskal-Wallis test를이용하였으며유의수준 0.05 미만을유의한의미가있다고보았다. 결과 우선, 액화질소를이용한유리체분리와여기에서겔상태의유리체와액화된상태의유리체를분리하는방법의유용성을판단하기위하여아무런처치도하지않은 4안의유색가토의안구를적출하여겔상의유리체와액화된상태의유리체의부피를측정하여보았다. 결과평균 80.7% 의겔상태의유리체를분리할수있었으며, 나머지 19.3% 는이미액화된상태로분리되었다. 플라스민을단독으로주사한 B군에서 1시간후안구적출을한 6안에서는평균 60.3±2.1%, 24시간후적출한 6안에서는평균 56.7±2.4% 의겔상태의유리체가측정되었다. 히알루론산분해효소를단독으로주사한 C군에서는 1시간후적출한눈에서평균 59.2±3.6%, 24시간후적출한눈에서평균 56.1±2.0% 의남은겔상태의유리체부피가측정되었다. 플라스민과히알루론산분해효소의혼합액을주사한 A군에서 1시간후적출한눈에서평균 52.5±2.3%, 24 시간후적출한눈에서평균 44.6±2.1% 의겔상태의유리체가측정되었다. 한편대조군으로주사한인산염완충식염수의경우주사후 1시간에적출한 18안에서는평균 76.5± 2.5%, 24시간후에적출한 18안에서는평균 74.7±2.4% 정도의겔상태의유리체부피가측정되었다 (Table 1, 2). 912

3 - 김무상외 : 약리적유리체융해 - Figure 1. Photographs of the experimental process. (A, B and C) Peeling the sclera, choroid, retina tissue of frozen rabbit eyeball. (D, E) Removal of the cornea, aqueous humor, iris and lens of frozen eyeball. (F) Separated frozen vitreous, lens and iris respectively (Blue asterisk: vitreous green asterisk: lens white asterisk: iris). (G, H and I) Melting the vitreous at room temperature (red arrow: gel type vitreous yellow arrow: fluid type vitreous). 플라스민과히알루론산분해효소의혼합액을주사한 A군 (Fig. 2) 의평균남은겔상태의유리체부피는대조군에비해통계적으로유의하게작았으며 (1시간 p=0.000, 24시간 p=0.000), 플라스민단독으로주사한 B군 (Fig. 3) 의평균남은겔상태의유리체부피역시대조군에비하여통계적으로유의하게부피가작게측정되었다 (1시간 p=0.000, 24시간 p=0.000). 히알루론산분해효소단독으로주사한 C군 (Fig. 4) 도대조군에비해유의하게부피가작게측정되었다 (1시간 p=0.000, 24시간 p=0.000). A군에서는 24시간후 적출한눈에서 1시간후적출한눈보다통계적으로유의하게남은겔상태의유리체부피가작게측정되었고 (p=0.018), B군역시 24시간후적출한눈에서통계적으로유의하게부피가작았다 (p=0.000). 그러나히알루론산분해효소단독으로주사한 C군에서는 1시간과 24시간후에남은겔상태의유리체부피가통계적으로유의한차이를보이지않았다 (p=0.179)(table 1). 남은겔상태의유리체부피는플라스민과히알루론산분해효소의혼합액을주사한 A군이플라스민을단독으로주사한 B군이나히알루론산분해효소 Table 1. The mean volume of remained gel type vitreous Mean volume of gel type vitreous I hour after enucleation 24 hours after enucleation p-value П Group A * 52.5±2.3% 44.6±2.1% p=0.018 Group B 60.3±2.1% 56.7±2.4% p=0.000 Group C 59.2±3.6% 56.1±2.0% p=0.179 Control 76.5±2.5% 74.7±2.4% * Group A=plasmin 1 U+hyaluronidase 10 U; Group B=plasmin 1 U; Group C=hyaluronidase 10 U; Control=phosphate buffered saline (PBS) 0.1 ml; П Comparison between 1 hour after injection and 24 hours after injection. 913

4 - 대한안과학회지 2009 년제 50 권제 6 호 - Figure 2. Comparison of the plasmin and hyaluronidase injection group with the control group. At 1 hour after enucleation, volume of gel type vitreous per whole vitreous was 52.5% and 76.5% in group A and the control group, respectively. At 24 hours after enucleation, volume of gel type vitreous per whole vitreous was 44.6% and 74.7%, respectively. Volume of gel type vitreous per whole vitreous showed statistically significant difference between group A and the control group (1 hour: p=0.000; 24 hours: p=0.000). Figure 4. Comparison of the hyaluronidase injection group with the control group. At 1 hour after enucleation, volume of gel type vitreous per whole vitreous was 69.2% and 76.5% in group C and the control group, respectively. At 24 hours after enucleation, volume of gel type vitreous per whole vitreous was 56.1% and 74.7%, respectively. volume of gel type vitreous per whole vitreous showed statistically significant difference between group A and the control group (1 hour: p=0.000; 24 hours: p=0.000). 보였으며이는주사후 1시간에적출한경우 (p=0.000) 와 24시간후에적출한경우 (p=0.000) 에서모두해당하였다. 플라스민을단독으로주사한 B군과히알루론산분해효소를단독으로주사한 C군을비교한결과유의한차이를보이지않았다 (1 hour: p=0.490; 24 hours: 0.647). 이러한결과를바탕으로각물질들의유리융해능력은플라스민과히알루론산분해효소의혼합액이가장큰유리체용해능력을가진것으로나타났으며, 플라스민과히알루론산분해효소는유의한차이가없었고, 대조군으로사용한인산염완충식염수가가장작은것으로나타났다 (Table 2). 고 찰 Figure 3. Comparison of the plasmin injection group with the control group. At 1 hour after enucleation, volume of gel type vitreous per whole vitreous was 60.3% and 76.5% in group B and the control group, respectively. At 24 hours after enucleation, volume of gel type vitreous per whole vitreous was 56.7% and 74.7%, respectively. volume of gel type vitreous per hole vitreous showed statistically significant difference between group A and the control group (1 hour: p=0.000; 24 hours: p=0.000). 를단독으로주사한 C 군에비해통계적으로유의한차이를 실제로약물을이용한유리체융해가실용화되기위해서는약물에의한유리체의부피감소를약물의농도와시간에따라서측정하여야할것으로생각된다. 서론에서도언급했듯이망막과유리체의부착이해결되지않은상태에서과도한유리체부피의감소는오히려망막의견인을증가시킬위험이있으며, 약물의작용기전을고찰하지않은상태에서이를사용함은예기치못한위험성을유발할수있기때문이다 플라스민에의한유리체와망막의분리효과는여러연구에서이미증명된바있으므로본실험에서저자들은유리체강내에주입한히알루론산분해효소와플라스민이 914

5 - 김무상외 : 약리적유리체융해 - Table 2. Comparison of the mean volume of remained gel type vitreous between groups (at 24 hours after injection) Mean volume of gel type vitreous (%) p value Group B 56.7± Group A * Group C 44.6± ± Control 74.7± Group C 56.1± Group B 56.7±2.4 Control 74.7± Group C Control 56.1± ± * Group A=plasmin 1 U+hyaluronidase 10 U; Group B= plasmin 1 U; Group C=hyaluronidase 10 U; Control= phosphate buffered saline (PBS) 0.1 ml. 유리체를융해시키는능력이있음을입증하고, 각효소의주입후시간에따른융해정도를측정하고자하였다. 8,9,17 이를위해유리체의액화정도를정량적을측정하는방법을고안하여야하였다. 현재까지유리체의액화정도를측정하는몇가지의연구들이시도된바있다. 우선, Tanaka and Qui 9 는히알루론산분해효소를주입한안구의유리체를적출하여이를매달았을때, 대조군보다길게늘어짐을비교하여유리체액화가진행하였음을추정하였다. 이는액화정도를대조군과비교할수는있지만정량적인측정으로보기어려우며, 유리체액화정도를다른효소의효과와비교할수는없을듯하다. Staubach et al 14 은적출한돼지눈을 대상으로히알루론산분해효소를유리체강내주사하고 1 port 유리체절제술을시행할경우, 일정한시간에대조군보다더많은유리체가제거됨을이용하여유리체액화가진행하였음을추정하였다. 이는간접적인방법으로유리체의액화정도를평가할수있는방법으로생각되나, 전체적인유리체부피의감소를측정할수없다. 이에저자들은토끼의유리체를눈에서분리하여유리체겔의액화정도를부피로비교하는방법을고안하고자하였다. 즉, 액화질소를이용하여안구를급속히얼린후유리체의얼음조직만을분리해낼수있었으며, 이들이녹는순간에다시겔상태의유리체와액화된상태의유리체를분리해낼수있었다. 그러나후유리체박리가일어나지않았던어린토끼의눈에서유리체를분리해본결과전체부피의 80.7% 만을겔형태로얻을수있었고나머지 19.3% 는이미액화된상태였다. 이러한결과의원인으로서다음의두가지를추측해볼수있다. 첫번째원인은급속냉동하여유리체만을분리하였으나유리체얼음조각주변부에섬모체나망막, 맥락막조직들이소량붙어있는경우가있었다. 매우미세한조직들이지만이런조직에서유출된혈청단백질분해효소가실험 조작을하는사이에유리체액화를진행시켰을가능성이있다. 10,14 또한가지의가능성으로는급격한냉동과해동등의온도변화에의해히알루론산등의유리체구성성분에손상이발생하고, 이로인해유리체의액화가진행하였을가능성이있다. 10 이경우는효소에의한약리적유리체융해라기보다는유리체의탈수혹은단순한액화라고말함이옳을것이다. 이처럼유리체의분리시에피할수없는액화가진행함은효소를이용하여유리체융해의정도를정량적으로비교하고자하는본실험의한계점으로인정할수밖에없다. 그러나유리체를분리하는과정에서발생하는유리체의액화는액화의정도가소량이며, 비교적일정한양을보여서위의방법을효소에의한유리체융해의정도를비교하는본실험에서사용하기로하였다. 본실험에서저자들은플라스민과히알루론산분해효소등의약물을유리체강내주사하고 1시간후와 24시간후에안구를적출하였다. 그이유를플라스민으로예를들어설명하면, 플라스민을유리체강내에주입하였을경우최대작용시간은주사후 30분에서 1시간이며, 반감기는주사후 3시간이고, 24시간뒤에는소실된다. 8,25 따라서플라스민등이효소고유의작용으로유리체를액화시킬수있다면, 1시간뒤의적출한눈에서이미대부분의유리체가액화될것이다. 그렇지않고, 플라스민효소의고유작용이외의기전에의해서유리체가액화된다면 24시간뒤에적출한유리체에서대부분의유리체가액화될것으로예상된다. 따라서 1시간뒤에가장많은유리체가액화되었는지, 혹은 24시간뒤에가장많은유리체가액화되었는지를관찰함은각효소의작용기전에대한고찰로서의미가있다. 히알루론산 (hyaluronic acid) 은신체의세포외바탕질 (extracellular matrix) 의구성에중요한역할을하는다당류로서글루쿠론산 (glucuronic acid) 과글루코사민 (glucosamin) 의반복된결합으로구성된다. 히알루론산은세포외바탕질내에서의 space filling network 로서의역할, 세포등의큰조직들을고정시키는역할, 완충제로서의역할등을수행한다. 유리체내에서는수분을함유하는고분자 (macromolecule) 를형성하여 collagen fiber의응집을억제하는역할도수행하며, 결과적으로유리체의겔형태를유지하는가장중요한미세구조로생각되고있다. 10 히알루론산분해효소는이러한역할을수행하는히알루론산을분해혹은변성시켜서유리체의액화를유발할수있을것으로기대된다. 18 그러나동물실험에서유리체강내에주입한소량의히알루론산분해효소의농도와시간에따르는유리체액화정도를측정한실험은아직보고된바없다. 11,18-20 저자들은본실험에서살아있는토끼의유리체에 10 U의히알루론산분해효소를주사한후작용시간 1시간 (p=0.000) 또는 24시간 915

6 - 대한안과학회지 2009 년제 50 권제 6 호 - 후 (p=0.000) 에유리체를분리하여관찰한결과, 대조군의겔부피에비하여유의하게유리체겔부피가감소됨을증명하였다. 그러나시간에따른유리체액화정도는차이가없었으며 (p=0.179), 이는뒤에서술할플라스민과다른결과이다 (Table 1). 플라스민은비특이적인단백질분해효소로서유리체-망막경계면 (vitreoretinal interface) 에서뒤유리체피질과내경계막을결합시키는데중요한역할을하는라미닌과파이브로넥틴을분해하여후유리체박리에도움을주는것으로알려져있다. 21,22 Verstraeten et al 8 은토끼를대상으로한실험에서플라스민 1 U를유리체강내에주입한후 1시간뒤에유리체절제술을실시하였으며, 대부분후유리체박리가일어나있었음을수술도중확인하여보고하였다. 이는플라스민이유리체-망막의접착력을약화시킴으로써얻어진결과라고추론할수있다. Gandorfer et al 23,24 은적출한돼지와사람의눈을이용한실험에서다른물리적인조작없이플라스민 1 U만을유리체강내에주사한후에 1 시간뒤에후유리체박리가발생하였고, 플라스민 2 U를주사한경우에는 30분뒤에후유리체박리가발생하였음을보고하였다. 또한마이크로플라스민 (microplasmin) 을이용한동물실험에서 25 μg의마이크로플라스민을주입한후 1일뒤에는후유리체박리가없었으나 3일이경과한후에후유리체박리가발생하였음을보고하였다. 25 이러한 Gandorfer 의실험들은플라스민의유리체강내주사이외에다른물리적인조작없이도후유리체박리를유발할수있음을주장하고있으며, 유리체강내에주사한플라스민이후유리체박리를일으키는효과가주사한효소의양과주사한후의시간에비례한다는사실을보여준다. 또한이러한결과들은플라스민이유리체-망막결합을약화시킬뿐아니라유리체를액화시키는능력이있을것이라는추론을가능하게한다. 23,24 유리체액화가같이진행하지않는상태에서유리체-망막의접착력약화만으로후유리체박리가일어날것이라고는생각하기어렵기때문이다. 1,2,10 또한, 유리체강내에주입한플라스민이최대로활성화된상태로지속되는시간은 1시간이며 24시간뒤에는효소의활성이소실된다. 그럼에도불구하고플라스민을주입한즉시에는후유리체박리가발생하지않다가시간이지날수록 (3일이지난후에 ) 후유리체박리가발생한다는사실은기존에알려진플라스민의작용기전만으로는설명할수없는결과이다. 25 이러한이유에서유리체강내에주입한플라스민에의해유발될수있는부수적인작용기전이거론되어왔다. 가장가능성있는기전은플라스민의유리체강내주입에의한 matrix metalloproteinase (MMPs) 의활성화이다. 25 최근의연구결과에의하면사람의유리체에서 MMP 1,-2,-3,-9가정상적으로존재함이밝혀졌으며 26, 콜라겐을분해할수있 는 MMP-2 (gelatinase A) 와 MMP-9 (Gelatinase B) 의활성화과정에플라스민이참여한다는사실이보고된바있다. 27,28 유리체강내에주사한플라스민이콜라겐을분해할수있는 MMP를활성화시킬수있다면, 이러한이차적인효소의활성화가유리체의액화에관여할수있을것이다. 따라서플라스민의유리체주입후유리체의액화가진행하고, 시간이지남에따라서후유리체박리가더잘발생하는결과를설명할수있을것이다. 25 본실험에서플라스민을주입한후 1시간뒤에적출한안구보다 24시간후에적출한안구에서의미있게유리체의액화가진행하였다 (p=0.00). 히알루론산분해효소를주입한경우에는 1시간이지난경우와 24시간이지난경우에유리체의부피가차이가없었다 (p=0.179) 는점을고려할때, 플라스민의경우에는시간이지나면서계속하여유리체의액화를진행시키는다른기전이있을수있음을시사한다고생각된다. 한편, 최근에유리체용해물질 (pharmacologic vitreolyticagent) 에대한연구들이진행되면서각약물의장단점을절충하기위해서두가지이상의약물을혼합해서사용할수있을것이라는가능성이 Sebag 1 에의해서제안되었다. 히알루론산분해효소는국소마취시마취약의조직내이동을돕는점에서국소마취제와함께사용되어왔다. 히알루론산분해효소와플라스민의복합주입은각각의약물고유의작용뿐만아니라히알루론산이플라스민의유리체강내의이동을자유롭게해줄수있다는점에서약물의효과를더크게할수있는가능성이있다. 10,18 이에저자들은이두가지의약물을혼합주입하였을경우유리체의상당부분을융해시킬수있을것이라고기대하였었다. 그러나혼합주입후 24시간이경과하였을때약 44.6% 의유리체겔이남아있음이측정되었다. 저자들의본연구는최근활발히진행되고있는약물을이용한후유리체박리에관한연구들의고찰을통해서, 논란이되고있는작용기전에대한의문점을해결하기위해고안되고실행되었다. 적출한안구를급속냉동시킨후녹는점의차이를이용하여유리체액화정도를측정하는방법을통하여저자들은플라스민과히알루론산분해효소의혼합주입방식이같은시간내에플라스민과히알루론산분해효소의유리체강내단독주사보다더많은양의유리체액화를나타낸것을확인하였다. 향후약물에의한유리체의액화정도를측정하고, 겔상태의유리체부피를비교하는과정에있어서좀더정교한연구가필요하다고생각되며, 이러한결과를바탕으로약리적유리체융해가유리체절제술의보조수단으로서임상적사용에도움을줄것으로기대된다. 916

7 - 김무상외 : 약리적유리체융해 - 참고문헌 1) Sebag J. Pharmacologic vitreolysis. Retina 1998;18:1-3. 2) Sebag J. Pharmacologic vitreolysis brewing? Retina 2002;22:1-3. 3) Hayreh SS, Jonas JB. Posterior Vitreous detachment: Clinical correlations. Ophthalmologica 2004;218: ) Sebag J. Diabetic vitreopathy. Ophthalmology 1996;103: ) Takahashi MK, Hikichi T, Akiba J, et al. Role of the vitreous and macular edema in branch retinal vein occlusion. Ophthalmic Surg Lasers 1997;28: ) Sonoda K, Sakamoto T, Enaida H, et al. Residual vitreous cortex after surgical posterior vitreous separation visualized by intravitreal triamcinolone acetonide. Ophthalmology 2004;111: ) Asami T, Terasaki H, Kachi S, et al. Ultrastructure of internallimiting membrane removed during plasmin assisted vitrectomy from eyes with diabetic macular edema. Ophthalmology 2004; 111: ) Verstraeten TC, Chapman C, Hartzer M, et al. Pharmacologic inductionof posterior vitreous detachment in the rabbit. Arch Ophthalmol 1993;111: ) Tanaka M, Qui H. Pharmacological vitrectomy. Semin Ophthalmol 2000;15: ) Bishop PN. Structural macromolecules and supramolecular organisation of the vitreous gel. Prog-Retin Eye Res 2000;19: ) Kuppermann BD, Thomas EL, de Smet MD, Grillone LR. Safety results of two phaseⅢ trials of an intravitreous injection of highly purified ovine hyaluronidase (Vitrase) for the management of vitreous hemorrhage. Am J Ophthalmol 2005;140: ) Kim NJ, Yu HG, Yu YS, Chung H. Long term effect of plasmin on the vitreolysis in the rabbit eyes. Korean J Ophthalmology 2004;18: ) Wang ZL, Zhang X, Xu X, et al. PVD following plasmin but nothyaluronidase: implication for combination pharmacologic vitreolysis. Retina 2005;25: ) Staubach F, Nober V, Janknecht P. Enzyme-assisted vitrectomy in enucleated pig eyes: a comparison of hyaluronidase, chondroitinase, and plasmin. Curr Eye Res 2004;29: ) Wang ZL, Zhang X, Xu X, et al. Pharmacologic vitreolysis combining the two enzymes plasmin and hyaluronidase. Retina 2005;25: ) Howard M, Sen HA, Capoor S, et al. Measurement of adenosine concentration in aqueous and vitreous. Invest Ophthalmol Vis Sci 1998;39: ) Kim DS, Moon SW, Yu SY, Kwak HW. The structure of the internal limiting membrane removed by vitrectomy using tissue plasminogen activator. J Korean Ophthalmol Soc 2008;49: ) Gottlieb JL, Antoszyk AN, Hatchell DL, Saloupis P.The safety of intravitreal hyaluronidase. A clinical and histological study. Invest Ophthalmol Vis Sci 1990;31: ) Harooni M, McMillan T, Refojo M. Efficacy and safety of enzymatic posterior vitreous detachment by intravitreal injection of hyaluronidase. Retina 1998;18: ) Kang SW, Hyung S, Choi MY, Lee J. Induction of vitreolysis and vitreous detachment with hyaluronidase and perfluoropropane gas. Korean J Ophthalmol 1995;9: ) Li X, Shi X, Fan J. Posterior vitreous detachment with plasmin in the isolated human eye. Graefes Arch Clin Exp Ophthalmol 2002; 240: ) Wang F, Wang Z, Sun X, et al. Safety and efficacy of dispase and plasmin in pharmacologic vitreolysis. Invest Ophthalmol Vis Sci 2004;45: ) Gandorfer A, Putz E, Welge-Lussen U, et al. Ultrastructure of the vitreoretinal interface following plasmin assisted vitrectomy. Br J Ophthalmol 2001;85: ) Gandorfer A, priglinger S, Schebitz K, et al. Vitreoretinal morphology of plasmin-treated human eyes. Am J Ophthalmol 2001;133: ) Gandorfer A, Rohleder M, Sethi C, et al. Posterior vitreous detachment induced by microplasmin. Invest Ophthalmol Vis Sci 2004;45: ) Plantner JJ, Smine A, Quinn TA. Matrix metalloproteinases and metalloproteinase inhibitors in human interphotoreceptor matrix and vitreous. Curr Eye Res 1998;17: ) Baramova EN, Bajou K, Remacle A, et al. Involvement of PA/plasminsystem in the processing of pro-mmp-9 and in the second step of pro-mmp-2 activation. FEBS Lett 1997;157: ) Ramos-DeSimone N, Hahn-Dantona E, Sipley J, et al. Activation of matrix metalloproteinase-9 (MMP-9) via a converging plasmin/ stromelysin-1 cascade enhances tumor cell invasion. J Biol Chem 1999;274:

8 - 대한안과학회지 2009 년제 50 권제 6 호 - =ABSTRACT= Comparison of Vitreolytic Effect in Rabbit Eyes: Plasmin, Hyaluronidase, and Their Mixtures Moo Sang Kim, MD 1, Sang Woong Moon, MD 2, Eung Suk Kim, MD 3, Seung Young Yu, MD 1, Hyung Woo Kwak, MD 1 Department of Ophthalmology, KyungHee University Hospital 1, Seoul, Korea Department of Ophthalmology, Inje University College of Medicine, Seoul Paik Hospital 2, Seoul, Korea Department of Ophthalmology, Chung-Ang University College of Medicine 3, Seoul, Korea Purpose: The aim of the present study was to quantify and compare the vitreolytic effect of plasmin, hyaluronidase, and a combination of the two. Methods: Thirty-six rabbits were randomized into 3 groups: (A) twelve rabbits had an intravitreal injection of plasmin 1 U with hyaluronidase 10 U/0.1 ml into the right eye, (B) twelve rabbits had an injection of plasmin alone (1 U/0.1 ml), and (C) twelve rabbits had an injection of hyaluronidase alone (10 U/0.1 ml). The left eye of each rabbit was used as control, which was injected with 0.1 ml phosphate buffered saline (PBS). The eyes were enucleated 1 hour and 24 hours after injection. The volume of fluid-type vitreous and gel-type vitreous was measured with a micropipette using the melting point as the difference. Statistical analysis was performed and light microscopy was used to assess potential damage to the retinal tissue. Results: The volume of remaining gel-type vitreous was measured as 52.5%, 60.3%, 59.2%, and 76.5% after 1 hour enucleation and as 44.6%, 56.7%, 56.1%, and 74.7%, after 24 hours enucleation in group A, B, C, and control group, respectively. Group A, B, and C showed statistically significant differences against the control group. Group A (plasmin with hyaluronidase) showed less remaining gel-type vitreous volume than a single injection of plasmin or hyaluronidase alone. Conclusions: Intravitreal injection of plasmin with hyaluronidase showed more vitreolytic effect than a single injection of plasmin or hyaluronidase alone. The enzyme may be useful in liquefying the vitreous, and may be a useful biochemical adjunct to vitrectomy. J Korean Ophthalmol Soc 2009;50(6): Key Words: Hyaluronidase, Intravitreal injection, Pharmacologic vitreolysis, Tissue plasminogen activator Address reprint requests to Hyung Woo Kwak, MD, PhD Department of Ophthalmology, KyungHee University Hospital #1 Hoegi-dong, Dongdaemun-gu, Seoul , Korea Tel: , Fax: , 918

<283732372D3733312920B4D9C3CAC1A120BCD2C7C1C6AEC4DCC5C3C6AEB7BBC1EEC0C720B3EBBEC8C0C720BDC3B7C2BAB8C1A4BFA120B4EBC7D120C0AFBFEBBCBA20C6F2B0A1283035292E687770>

<283732372D3733312920B4D9C3CAC1A120BCD2C7C1C6AEC4DCC5C3C6AEB7BBC1EEC0C720B3EBBEC8C0C720BDC3B7C2BAB8C1A4BFA120B4EBC7D120C0AFBFEBBCBA20C6F2B0A1283035292E687770> 대한안과학회지 제 49 권 제 5 호 2008 J Korean Ophthalmol Soc 49(5):727-731, 2008 DOI : 10.3341/jkos.2008.49.5.727 다초점 소프트콘택트렌즈의 노안의 시력보정에 대한 유용성 평가 김현경 1 김효명 2 정성근 1 가톨릭대학교 의과대학 성모병원 안과학교실 1, 고려대학교 의과대학 안암병원 안과학교실

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