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1 J Korean Surg Soc 2010;79: DOI: /jkss 원 저 무모쥐의피부화상에대한실크피브로인필름피복제의치유효능 한림대학교의과대학병리학교실, 1 생화학교실, 2 외과학교실, 3 영상의학교실, 4 삼육대학교자연과학연구소, 5 화인코주식회사 최영희ㆍ김민규ㆍ안동현ㆍ홍수희 1 ㆍ이재용 1 ㆍ김해성 2 ㆍ김흥철 3 ㆍ남상용 4 ㆍ임건빈 5 The Wound Healing Effect of a Silk Fibroin Film on Cutaneous urn of Hairless Mice Young Hee Choi, M.D., Ph.D., Min Gyu Kim, M.D., Dong Hyun Ahn, M.D., Soo Hee Hong, M.D. 1, Jae-Yong Lee, Ph.D. 1, Hae Sung Kim, M.D. 2, Heung Cheol Kim, M.D. 3, Sang Yong Nam, Ph.D. 4, Garbeen Yim, Ph.D. 5 Departments of Pathology, 1 iochemistry, 2 Surgery and 3 Radiology, College of Medicine, Hallym University, Chuncheon, 4 Division of Natural Science, SahmYook University, Seoul, 5 FineCo Ltd., Chuncheon, Korea Purpose: The aim of this study was to examine the effects of silk fibroin film on wound healing of cutaneous burn in hairless mice by using microscopic findings and stem cell markers (nestin, cytokeratin 15) and ki-67 proliferation marker. Methods: Each mouse received two burns at the dorsal area by applying a metal rod heated with boiling water. urn wound sites were dressed with Silk Fibroin Film and duoderm (SF group), Aquacel hydrofiber and duoderm (AC group) and duoderm only (Control group). All groups were covered externally with duodermas adhesive bands. Those mice were sacrificed at zero, two, seven, fourteen and twenty one days after burn. Histological findings and immunohistochemical staining for stem cell markers were observed. Results: In SF group, inflammatory cell infiltration, formation of granulation tissue and inflammatory foci are greater than in AC and control group. Those factors appear to enhance mesenchymal stem cell markers such as nestin. Finally mesenchymal tissue regeneration was enhanced. In addition, the length of ki-67 expressed re-generating epithelium, which appeared to be associated with epithelial regeneration, was the longest in SF group. Conclusion: The results show that the wound healing effect of SF is the best among other treatment materials including AC in the experimental group and duoderm in the control group through mesenchymal regeneration and epithelial regeneration which are essential factors for wound healing. (J Korean Surg Soc 2010;79: ) Key Words: Hairless mice, Silk fibroin film, urn, Wound healing, Stem cell 중심단어 : 무모쥐, 실크피브로인, 화상, 창상치유, 줄기세포 서 드레싱이란상처면을보호하기위해무엇인가로상처를덮어주는것으로이때사용하는소재를드레싱제 ( 재 ) 라고 책임저자 : 김해성, 강원도춘천시교동 153 번지 , 한림대학교춘천성심병원외과 Tel: , Fax: biogra@hallym.or.kr 접수일 :2010 년 5 월 25 일, 게재승인일 :2010 년 10 월 8 일 론 한다. 드레싱은내부의상처분비물을흡수, 제거하고외부로부터의이물침입을방지하며물리적충격혹은자극으로부터보호하기위한목적에서시작되었다. 그러나최근에는종래의단순보호개념에서능동적인보호개념으로바뀌어습윤환경을유지시켜주거나보온하여주어서상처가보다효율적으로치유될수있는환경을제공하는개념으로새롭게변화되고있다.(1) 이에저자들은무모쥐에심층 2도화상을유발한후 Duoderm만을이용한드레싱을대조군으로하여, Aquacel hydrofiber 및 duoderm을이용한 421

2 422 J Korean Surg Soc. Vol. 79, No. 6 드레싱과 Silk fibroin film 및 duoderm을이용한드레싱을비교하는방법으로 Silk fibroin film이화상치유에미치는효과를알아보고자하였다. 방법 1) 동물 동물윤리위원회규정과동물실험관련법규 (Hallym ) 에따라동물을보호하고실험하였다 g 무게의수컷무모쥐를군별로 5마리를사용하였고, 실험기간중사육실환경은 23±2 o C, 상대습도 55±10% 를유지하였다. 12 시간인공조명하에서마우스용케이지에 4마리씩넣어사육하였으며, 실험동물용사료및식수는자유로이공급하였다. 2) 심부 2도화상유도및드레싱 70% 아산화질소와 30% 산소가섞여있는기체에 2% 이소플루란 (isoflurane) 을무모쥐에흡입시켜마취를유도한후 1% 이소플루란농도로마취를유지시키면서화상을유도하였다. 지름 1 cm의둥글납작한쇠막대기를끓는물에넣어서가열한후무모쥐의등양쪽에 10초간두어서화상을입혔다. 조직학적으로심부 2도화상을확인하였다.(2,3) Silk fibroin film (SF, Fine Co., Seoul, Korea) 과 aquacel hydrofiber (AC, ConvaTec Co., Seoul, Korea) 드레싱제재를화상부위보다약간크게잘라서무모쥐등에부착하고듀오덤 (Duoderm) 을사용하여고정시켰다. 실험군은크게, SF와 duoderm (SF군), AC와 duoderm (AC군) 및듀오덤부착한대조군 (control) 으로분류하였으며, 각군마다 5마리씩사용하였다. 화상을입힌 2시간후, 2일, 7일, 14일, 21일후에각각 5 마리씩희생하였다. 동물들은모두경추탈골한후화상부위의피부조직을채취하여가운데를잘라서헤마톡실린에오진 (Hematoxin & Eosin, H&E) 염색과면역조직화학염색을위하여 10% 중성포르말린용액에 10시간고정하였다. 3) 조직학적검사파라핀블록을 5μm두께로연속절편을제작하여일부는통상적인헤마톡실린에오신염색을한후광학현미경으로관찰하였다. 그리고일부는면역조직화학염색을하였다 (Fig. 1 3). 광학현미경으로는아래의목록들을관찰하였다.(4) (1) 염증세포침윤도 (Cellularity): 화상부위에침윤한염증세 포는주로상피와나란히침윤하였다. 화상부위의전체면적중에염증세포가침윤한면적이차지하는비율 (%) 로관찰하였다. (2) 근육층의위치 : 화상부위의근육층이주위정상부위의근육층보다위에있으면 2, 그대로이면 0, 내려가있으면 2로하였다. (3) 육아조직의양 (Amount of Granulation tissue): 100배로관찰하여육아조직의양은화상부위의전체면적중에육아조직이차지하는면적의비율 (%) 로관찰하였다. (4) 재생상피의길이측정 (Length of regenerated epithelium): 재생상피는정상상피보다 4층이상으로두꺼워진상피로정의하였다. 재생상피의길이는독일 Zeiss 현미경으로관찰하였고, AxioCamera로촬영하여, Axio Vision Soft Ware 를사용하여길이 를측정하였다. 4) 면역조직화학염색 (Immunohistochemical stain) 파라핀블록절편으로면역조직화학염색을실시하였다. 일차항체로 rabbit Nestin (1:4,000, ab 5968, abcam, Cambridge, UK), rabbit keratin 15 (1:200, N , Novus iologicals, USA), rabbit Ki-67 (1:200, RM-9106-S0, Labvision, California, USA) 을사용하였고, 면역조직화학염색은 Polink-2 plus Rabbit DA kit (D41-125, GI, WA, USA) 를사용하였다. Nestin은세포질, keratin 15는세포질, Ki-67은핵에서발현한것을양성으로하였고, 화상부위와주위정상부위의진피낭에서의발현을관찰하였다. Ki-67과 keratin 15는재생상피에서발현하는양상이정상상피에서와다르고, 부위마다발현하는양상이달라서화상으로손상을입은진피위로자라는재생상피 ( 원위부 ), 원위부재생상피와정상부위중간에존재하면서아래진피층과붙어있는재생상피 ( 근위부 ) 로나누어관찰하였다. 원위부에서는 Ki-67과 keratin 15이발현하지않았으며, 근위부는 Ki-67의발현이기저세포층뿐만아니라그위층에도발현하여중층을형성하였다. Keratin 15는기저세포층과위의몇층에서도발현하지않아서그부위의길이를각각측정하였다. 독일 Zeiss 현미경으로관찰하였고, AxioCamera 로촬영하여, Axio Vision Soft Ware를사용하여길이 를측정하였다. 5) 통계분석모든자료의분석은 SAS (version No. 9.1) 통계프로그램

3 Young Hee Choi, et al:wound Healing in Hairless Mice 423 을이용하였고, 지표간의상관관계는 Pearson χ 2 test, Duncan's multiple range test로검정하였으며, 유의수준은 0.05 이하로하였다. 결과 1) 염증세포침윤도 (Cellularity) 염증세포들은주로화상부위에두꺼운띠모양으로상피와평행하게침윤하였다. 대조군에서는화상후 2일, AC군에서는화상후 7일, SF군에서는화상후 14일에가장많았다. 대조군에서는 2일이후에침윤이감소하였고, AC군은 7일이후에감소하였으며 SF군은 7일이후에도침윤은그대로있었다. 대조군에비하여 SF군에서염증세포침윤도가 7일, 14일에유의하게높았다 (P<0.05)(Table 1). AC군은대조군에비하여 2일, 7일, 14일에증가하였고 (P< 0.05)(Table 1), AC군과 SF군의비교에서는전반적으로 SF군에서염증세포침윤도가높았으며 14일 (72.50%±8.21) 에는유의하게높았다 (P<0.05)(Table 1). 2) 근육층의위치대조군은화상후 7일부터화상부위근육층이주위의정상근육층보다올라갔으며, AC군도 7일부터올라갔으나, 대조군에비하면높지않았다 (P<0.05)(Table 1). SF군은화상후 7일에도화상부위근육층이주위정상부위근육과동일한위치에있었고, 14일째올라갔다. 그러나, 대조군보다는적게올라갔다 (P<0.05)(Table 1). 3) 육아조직의양화상후 7일에모든군에서육아조직을관찰할수있었다. 육아조직은 14일에 SF군에서가장많이생성되었으며 (74.66%±9.85), SF군에서대조군및 AC군양군과비교해서의미있게증가하였다 (P<0.05)(Table 1). 4) 재생상피의길이측정재생상피는화상후 2일부터관찰되었고, 14일에는가장길었다. SF군에서재생상피의길이가가장길었다 (2, μm±113.69)(p<0.05)(table 1). 그러나, 21일에는화상부위가완전히봉합되어서재생상피의길이를측정할수없었다. Table 1. Histologic changes in dressed wounds at 2, 7, 14 and 21 days after burn Dressing/ days Cellularity (%) * Location of muscle layer * Amount of Granulation tissue (%) * Length of regenerated epithelium 0 day 0 0 C 0 0 Control ±17.38, C 0 C 0 C 42.61±54.46 D ±20.78 C, D 2 A 22.77±4.38 1,021.32± ±9.81 D 2 A 23.00± ,421.32± A,, C ±2.46 C - AC ±9.34 D 0 C 0 C 41.65±86.28 D ± ± ± ± C, D ± A 27.12±4.38 1,794.99±3, A, ±10.42 C - SF ±5.85 C, D 0 C 0 C ± D ± C 6.44±4.03 C 1,128.48±343.14, C ±8.21 A 1.00± ±9.85 A 2,004.24± A ± Control represents the animals with burn wound dressed with duoderm only. AC group represents the animals with burn wound dressed with aqua cell and duoderm. SF group represent the animals with burn wound dressed with Silk fibroin film and duoderm. *Duncan's multiple range test: Means with the same letter are not significantly different. Means with a different letter are significantly different (P <0.05). Example = A, are significantly different (P<0.05). Cellularity and Amount of granulation tissue represent the percentage in total area of wound. *

4 424 J Korean Surg Soc. Vol. 79, No. 6 5) Nestin의발현 (Fig. 1) 화상부위에서 nestin은주로육아조직의내피세포에서발현하였고육아조직의양과비례하였다. 6) Keratin 15의발현 (Table 2, Fig. 2) 정상상피에서는 keratin 15가기저세포에서만발현하지않았고, 상부에서는발현하였다. 재생상피에서는 keratin 15 의발현이정상상피와는달랐다. 원위부재생상피에서는 keratin 15의발현이화상후 14일까지관찰되지않거나소 수에서만관찰되었다. 화상후 2일에는대조군, AC 및 SF 군에서기저부부터표면까지전층에서발현하지않았다. 발현되지않은부위의길이는화상후 14일에 SF에서가장길었으며 (1,258.00μm±599.93), 대조군과비교하여통계학적으로유의한차이를보이지않았다. 근위부재생상피에서는 keratin 15가주로표면층에서발현되었지만, 기저부의 2 3층에서는발현되지않았다. 화상후 2일에는재상피화정도가대조군, AC, SF군에서각각 μm, μm 및 μm 길이로발현하였으며, SF가대조군에비하여유의한차이를보였다 (P<0.05). Fig. 1. Immunohistochemical expression of nestin in granulation tissue 7 days after burn. The long and thin arrow indicates necrotic tissue after burn. Nestin presents in the capillaries and peripheral nerve bundles (short and thick arrow) in the granulation tissue under the necrotic tissue ( 40). Fig. 2. Immunohistochemical expression of keratin 15 in regenerating epithelium 2 days after burn. A shows the distal part of regenerating epithelium without keratin 15 expression. shows the proximal part of regenerating epithelium with keratin 15 expression of superficial layer. C shows the normal epidermis with keratin 15 expression of the full thickness skin except basal layer ( 40, Inset: 100). Table 2. The length of the expression of CK15 in regenerating epithelium Control ± AC ± SF ± Day 2 Day 7 Day 14 A ± A ± A ± ± A ± A 1,135.68± ± ± A 1,125.68± ± A ± A ± A 1,148.59± C 1,235.08± ,654.63± ± ± A 1,258.00± A ± A ± A 1,347.71± ,663.55± ,435.81± A 2,605.71± Control represents the animals with burn wound dressed with duoderm only. AC group represents the animals with burn wound dressed with aqua cell and duoderm. SF group represents the animals with burn wound dressed with Silk fibroin film and duoderm. *Duncan's multiple range test: Means with the same letter are not significantly different. Means with a different letter are significantly different (P<0.05). Example = A, are significantly different (P<0.05). A

5 Young Hee Choi, et al:wound Healing in Hairless Mice 425 Table 3. Expression of Ki-67 in regenerating epithelium. Day 2 Day 7 Day 14 Control ± A ± A ± ± ,001.37± A, 1,247.69± A ± A ± ,382.66± AC ± A ± A ± ± A ± ,427.47± A ± A 1,340.26± A, 1,839.31± A SF ± A ± A ± A ± ,195.59± A 1,643.31± A ± 7.63 A 1,415.25± A 1,988.97± Control represent the animals with burn wound dressed with duoderm only. AC group represent the animals with burn wound dressed with aqua cell and duoderm. SF group represent the animals with burn wound dressed with Silk fibroin film and duoderm. *Duncan's multiple range test: Means with the same letter are not significantly different. Means with a different letter are significantly different (P<0.05). Example = A, are significantly different (P<0.05). A 화상후 7일에는대조군, AC군, SF군에서각각 μm, μm 및 μm 이었으며각군간에재상피화에서유의한차이를보였다 (P<0.05). 화상후 14일에는재상피화정도가대조군, AC군, SF군에서 μm, μm 및 1, μm 길이로발현되었으며, SF군와대조군간, SF군와 AC간에는차이가있었다 (P<0.05). 근위부와원위부재생상피의길이를합쳤을때화상후 2일, 7일, 14일에는 SF군에서가장길었으며, 화상후 2일및 14일에는 SF 군에서 1, μm 및 2, μm로대조군에비하여의미있게길었다 (P<0.05). 6) Ki-67의발현 (Table 3, Fig. 3) 정상상피에서는 Ki-67은기저세포층에서만발현하였다. 그러나화상의원위부재생상피에서는 Ki-67의발현이거의없거나간혹관찰되었다. 화상후 2일에는대조군, AC군, SF군에서각각 μm, μm, 및 μm길이로발현하여 SF군에서가대조군과 AC군에비교하여길었고, 7일에는 μm, μm 및 μm였으며, AC군에서길었다 (P<0.05). 14일에는 Ki-67의발현길이는대조군, AC군, SF군에서 μm, μm 및 μm였으나통계학적으로유의하지는않았다. 근위부재생상피에서는정상상피와는다르게 Ki-67의발현이기저세포뿐만아니라상부몇개의층에서도발현하였다. 화상후 2일에는 Ki-67의발현이 μm, μm 및 μm 였으며 SF 군에서길이가가장길었다. 화상후 7일에는대조군, AC군, SF군에서 μm, μm 및 1,195.59μm 으로 SF군이가장길었으며통계학적으로유의하게 AC군 Fig. 3. Immunohistochemical expression of Ki-67 in regenerating epithelium on 2 days after burn. A shows the distal part of regenerating epithelium with sparse Ki-67 expression. shows the proximal part of regenerating epithelium with Ki-67 expression of 2~3 basal layers. C shows the normal epidermis with Ki-67 expression of basal layer ( 40, Inset: 100). 에비하여길었다 (P<0.05). 화상후 14일에는 SF군에서발현길이가 1,415.25μm로가장길었다. 원위부와근위부재생상피의길이를합친길이는화상후 2일및 14일 (P<0.05), 7일에도 SF군에서가장길었다. 고 상처면의피복에대한최초기록은 C2500년경고대 Sumerian 도판에서발견할수있고, 이집트, 메소포타미아, 찰

6 426 J Korean Surg Soc. Vol. 79, No. 6 인도등의고대문명에도기록이남아있다. 의학의아버지인그리스의 Hippocrates는창상관리의기본개념으로감염이없는창상을피복하지않고건조시켜서가피를형성시켜야한다고주장하였다. 19세기근대세균학의아버지인 Pasteur는 창상에서의화농은세균감염에의한것이고창상치유에좋지않다 고하였고, 창상면을건조시켜서처치하는것이감염을방지하는올바른방법으로생각하였다. 1962년 Winter는폴리에틸렌필름으로창상을밀폐해서습윤상태로유지시켜치유한돼지창상의상피형성속도가건조시켜가피를형성시켜서치유한창상의경우보다 2배빠르게진행된다는것을보고하였다. 또한 1963년 Hinman 과 Maibach는사람의경우도동일한결과를보이고습윤창상환경이창상치유에필요함을밝혔다. 그리고이후다양한연구결과가발표되었고, 창상을습윤환경으로유지시켜주기위한목적의드레싱재가다양하게개발되었다.(1) 본연구에서사용된실크피브로인은섬유의한종류이기도하지만, 겔, 가루, 다공성막으로사용할수있다. 또한외과봉합사, 효소고정기술을이용한바이오센서, 선택적투과막, 투약을조절하는장치, 상처회복, 골접합기능등여러분야에서사용하고있다.(5) 실크피브로인은 fibroin과 sericin으로구성되어있는데전체무게중에 fibroin이 70 80% 를차지하고, sericin이 20 30% 이다. Sericin은 serine을많이함유하고있으며, fibroin을감싸고있다. Sericin은특히지질과산화 (lipid peroxidation) 를억제하고, 티로시나아제 (tyrosinase) 의활동력을방해하므로, 피부를촉촉하게하고, 주름을방지하는작용을한다고한다.(6) Sugihara 등 (7) 의실험에서는피부전층을제거한후에실크피브로인으로드레싱을하였을때듀오액티브 (Duoactive) 드레싱제재보다염증세포침윤이적었다고하였다. 그러나본실험에서는고온으로인하여손상된조직이존재하면서치유되는과정이기때문인지 SF군에서염증세포침윤도가가장높았다. 일반적으로피부창상치유과정에서염증세포들의침윤의의미는손상된조직들을제거하고사이토카인과성장인자를제공하여창상치유에도움을준다고한다.(8-10) 창상치유과정에서실크피브로인은섬유아세포의부착과성장을도우며, 섬유아세포를활성화시켜서콜라겐의합성을자극한다.(10) 세포배양용기에실크피브로인을입혀서섬유아세포를 2차원으로배양하였을때, 세포의부착이 2.2배향상되었고, 섬유아세포의포도당흡수가증가하였으며글루타민의소비가감소하였다고한다. 섬유아세포가 IL-1 beta, TNF-alpha, TGF-beta1과같은염증에영 향을주는사이토카인의분비는보이지않았지만 IL-6의분비는증가하였다고한다.(11) Yeo 등 (12) 은생쥐 (Sprague-Dawley) 의피부에전기화상을입힌후실크피브로인으로드레싱을하였을때콜라겐증식이대조군에서증가하였다고보고하였다. 또한실크피브로인은뼈, 인대, 힘줄, 혈관, 연골의재생을돕는다고하였다.(13) Choi 등 (2) 에따르면, 무모쥐의화상부위에서 nestin의발현이육아조직에서주로발현하였다고하였다. 결국육아조직의양에비례하여 nestin의발현이증가한다고보면, 본실험에서는육아조직의양이가장많은 SF군에서 nestin의발현도가장많았을것이며, 이 nestin의발현이기질의재생을도왔으리라생각된다. Liu 등 (14) 의보고에의하면, 실크피브로인은세포독성도없으며, 세포의부착이나분열주기, 자멸사 (apoptosis) 등에영향을미치지않으며, 섬유아세포의 FGF2 및 PDGF 의분비를유지시켜서신생혈관의생성을촉진시키므로창상의치유과정을돕는다고하였다. 아마도위의기술한여러기전에의해 SF군에서는손상입은부위의기질이빠르게재생이진행되어, 근육층이진피층으로이동하지않고해부학적위치를그대로유지할수있었던것으로생각된다. H&E 염색에서도재생상피를관찰할수있었는데 SF에서재생상피길이가가장길었다. 또한 keratin 15와 Ki-67의면역조직염색을통하여좀더생물학적인면으로재생상피를관찰할수있었다. Ki-67과 keratin 15는재생상피에서발현하는양상이정상상피에서와다르고, 재생상피에서도원위부와근부위에발현하는양상이달라서화상으로손상을입은진피위로자라는재생상피 ( 원위부 ), 원위부재생상피와정상부위중간에존재하면서아래진피층과붙어있는재생상피 ( 근위부 ) 로나누어관찰하였다. Keratin 15는기저세포뿐만아니라상부 2 3층에서도발현하지않았지만, Ki-67은기저세포층뿐만아니라상부 2 3층에서도발현하고있어서근위부의재생상피에서주로활발하게세포분열이일어나상피의재생을돕는것으로생각된다. SF에서원위부및근위부의길이가대체적으로가장긴것으로보아 SF가상피의재생을돕는역할을하는것으로생각된다. Choi 등 (2) 에따르면, keratin 15는재생상피에서는발현하지않고성숙한표피세포에서만발현한다고하였다. 본실험에서도 keratin 15는원위부재생상피에서는발현하지않거나소량발현하였고, 근위부재생상피에서는발현이증가하였으나, 정상상피보다는적었다.

7 Young Hee Choi, et al:wound Healing in Hairless Mice 427 Ki-67의발현은윈위부재생상피에서는발현이적었고, 근위부재생상피에서는기저층뿐만아니라여러층에서발현하였고, 정상부위에서는기저층에서만발현하였다. Patel 등 (15) 도창상치유과정에서창상연접부위상피의기저층과기저상부층에서 Ki-67의발현이증가한다고하였다. 근위부재생상피부위가세포분열이활발하게일어나는부위로생각되며, 세포분열에서만들어진상피들이원위부로옮겨가는것으로생각된다. Repesh와 Oberpriller(16) 는이동중인상피세포의앞쪽이다른세포들과만나면, 상처의중앙부위의상피세포들은순간적으로이동을멈추고세포들이차곡차곡쌓이게되고, 이러한세포들의움직임에의해상처중앙부위에서상피조직의두께는하나또는두개의층을형성한다고하였다. 상처봉합에관여하는세포들은주로인접한상피조직에서유래된다고하였으며상처가봉합되는동안포유류상피는롤링 (rolling) 과활주 (sliding and crawling) 의형태로움직인다고알려져있다.(17) 재생상피의길이도 SF 군에서가장길었는데, Roh 등 (18) 에의하면, 실크피브로인이상피세포의세포분열을자극하여재생을촉진시킨다고하였다. 결 실크피브로인드레싱제는상피의 Ki-67의발현을증가시켜상피의재생화를촉진시켰으며, nestin의발현으로육아조직이형성되어간엽조직의재생을촉진시켜서근육층의해부학적위치유지시키면서창상의치유를촉진하는것으로생각된다. 론 REFERENCES 1) Korean Research Group for Wound Care. Advances in Wound Care. 1st ed. Seoul: Korea Medical ook Publisher; p.11-9, ) Choi YH, Kim MG, Ahn DH, Cho SJ, Hong SH, Lee JY, et al. Immunohistochemical expression of stem cell markers during the wound healing process of cutaneous burn. J Korean Surg Soc 2010;79:1-7. 3) Zhu H, Wei X, ian K, Murad F. Effects of nitric oxide on skin burn wound healing. J urn Care Res 2008;29: ) Yoon HJ, Shin JW, Kim YK, Kim JE, Cho KH. The effect of vitamin C and E on the expression of the cutaneous basement membrane components. Korean J Investig Dermatol 2007;14: ) Freddi G, Tsukada M, eretta S. Structure and physical properties of silk fibroin/polyacrylamide blend films. J Appl Polym Sci 1999;71: ) Kato N, Sato S, Yamanaka A, Yamada H, Fuwa N, Nomura M. Silk protein, sericin, inhibits lipid peroxidation and tyrosinase activity. iosci iotechnol iochem 1998;62: ) Sugihara A, Sugiura K, Morita H, Ninagawa T, Tubouchi K, Tobe R, et al. Promotive effects of a silk film on epidermal recovery from full-thickness skin wounds. Proc Soc Exp iol Med 2000;225: ) Yamaguchi Y, Yoshikawa K. Cutaneous wound healing: an update. J Dermatol 2001;28: ) Werner S, Grose R. Regulation of wound healing by growth factors and cytokines. Physiol Rev 2003;83: ) Suh W, Kim KL, Kim JM, Shin IS, Lee YS, Lee JY, et al. Transplantation of endothelial progenitor cells accelerates dermal wound healing with increased recruitment of monocytes/ macrophages and neovascularization. Stem Cells 2005;23: ) Chiarini A, Petrini P, ozzini S, Pra ID, Armato U. Silk fibroin/poly(carbonate)-urethane as a substrate for cell growth: in vitro interactions with human cells. iomaterials 2003; 24: ) Yeo JH, Lee KG, Lee YW. Collagen growth effects in rats using.mori fibroin. Korean J Sericult Sci 2001;43: ) Sobajo C, ehzad F, Yuan XF, ayat A. Silk: a potential medium for tissue engineering. Eplasty 2008;8:e47. 14) Liu TL, Miao JC, Sheng WH, Xie YF, Huang Q, Shan Y, et al. Cytocompatibility of regenerated silk fibroin film: a medical biomaterial applicable to wound healing. J Zhejiang Univ Sci 2010;11: ) Patel GK, Wilson CH, Harding KG, Finlay AY, owden PE. Numerous keratinocyte subtypes involved in wound reepithelialization. J Invest Dermatol 2006;126: ) Repesh LA, Oberpriller JC. Ultrastructural studies on migrating epidermal cells during the wound healing stage of regeneration in the adult newt, Notophthalmus viridescens. Am J Anat 1980;159: ) Jeong MJ. Wound healing and cell migration, trends in medical research cell organization. Korean Soc Med iochem Mol iol News 2000;7: ) Roh DH, Kang SY, Kim JY, Kwon Y, Kweon HY, Lee KG, et al. Wound healing effect of silk fibroin/alginate-blended sponge in full thickness skin defect of rat. J Mater Sci Mater Med 2006;17:

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