한약재품질표준화연구사업단 대계 ( 大薊 ) Cirsii Herba 생약연구과

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1 한약재품질표준화연구사업단 대계 ( 大薊 ) Cirsii Herba 생약연구과

2

3 KHP Cirsii Herba Cirsium japonicum DC. var. ussuriense (regel) Kitamura - CP2015 Cirsii Japonici Herba Cirsium setosum (Willd.) MB. linarin 0.70% JP

4 α α β β - 3 -

5 Sample information - 4 -

6 - 5 -

7 (mg) p-hydroxybenzoic acid (1) 60 - protocatechuic acid (2) 60 - vanillic acid (3) 60 - caffeic acid (4) 60 - chlorogenic acid (5) 60 - apigenin (6) 60, luteolin (7) 1070, luteolin-7--glucopyranoside (8) 130, luteolin-5--glucopyranoside (9) 7700, pectolinarin (10) 60, lupeol (11) 85 - apigenin 7--glucuronide (12) 50 - diosmin (13) diosmetin (14) 70 - hispidulin 7--neohesperidoside (15) 150, apigenin 7--glucoside (16)

8 H H (compound number) H p-hydroxybenzoic acid (1) H protocatechuic acid (2) H H vanillic acid (3) H H H caffeic acid (4) H C 2 H H H H H H chlorogenic acid (5) H apigenin (6) H H H H luteolin (7) H H H H luteolin-7--glucopyranoside (8) H H H H - 7 -

9 H H H luteolin-5--glucopyranoside (9) H H H H H H CH3 H CH 3 H H pectolinarin (10) H H H 3 C CH 2 CH 3 CH 3 H CH 3 lupeol (11) H H H H 3 C CH3 H H H apigenin 7--glucuronide (12) H H H H H H H H H H H H H diosmin (13) H H diosmetin (14) H H H H H H H H hispidulin 7--neohesperidoside (15) H H H H H apigenin 7--glucoside (16) H H H H - 8 -

10 - 9 -

11 μ μ μ μ μ

12 Table6. TLC condition Compounds Mobile phase Detection TLC plate luteolin 5--glucoside, luteolin7--glucoside, hispidulin 7--neohesperidoside, luteolin, CHCl 3 : MeH 10% Normal (5 : 1) (Silica) pectolinarin, apigenin Table7. The optimal condition of sample preparation Extracting method Solvent Time reflux MeH 60 min μ μ μ μ μ 0.1 g pulverized sample added 1 ml MeH 60 min reflux membrane filter (0.2 μm) Aliquot 25 μl HPLC analysis (10 μl) Fig4. verall analytical procedures of extracts

13 Table8. HPLC analysis condition 대계기존 HPLC 분석조건 Time(min) A (0.1 % trifluoro acetic acid) % B (ACN) % Mobile phase Detector UV (254 nm) Column Agilent Edipse XD8 C18 (5 μm, mm) Flow rate 1 ml/min Column temp. 30 Injection volume 10 μ Device Gilson UV/VIS-151, Gilson 321 Pump, Gilson 231 XL Autosampler Fig. 5. HPLC chromatogram of MeH extract (A) and standard mixture (B). (1. luteolin 5--glucoside, 2. luteolin 7--glucoside,3. hispidulin 7--neohesperidoside, 4. luteolin, 5. pectolinarin, 6. apigenin)

14 Table9. HPLC analysis condition 대계 HPLC 분석조건수정 Time(min) A (0.1 % trifluoro acetic acid) % B (ACN) % Mobile phase Detector UV (270 nm) Column Agilent Edipse XD8 C18 (5 μm, mm) Flow rate 1 ml/min Column temp. 40 Injection volume 10 μ Device Gilson UV/VIS-151, Gilson 321 Pump, Gilson 231 XL Autosampler Fig. 6. HPLC chromatogram of MeH extract (A and B) and standard mixture (C). (1. luteolin 5--glucoside, 2. luteolin 7--glucoside,3. hispidulin 7--neohesperidoside, 4. luteolin, 5. pectolinarin, 6. apigenin, MP methyparaben, PP, propylparaben)

15 Fig7. Content Fig8. Pattern analysis

16 α Fig9. hepatoprotective

17 Fig9. Anticonvulsant effects Fig10. Memory impairment

18 - 17 -

19 μ

20 - 19 -

21 μ μ μ

22 Ÿ Ÿ Ÿ Ÿ Ÿ Ÿ

23 Ÿ Ÿ Ÿ Ÿ Ÿ Ÿ α

24 - 23 -

25 - 24 -

26 ( ) ( ug / g) MTT assay, N assay, luteolin 5--glucoside RS assay, ELISA assay - luteolin 7--glucoside - - hispidulin 7--neohesperidoside luteolin, -. pectolinarin,, - MTT assay, N assay, RS assay, ELISA assay. apigenin MTT assay, N assay, RS assay, ELISA assay - MTT assay, N assay, RS assay, ELISA assay

27 (Cirsii Herba) - - Detector ( ) Column ( ) Shimadzuu UV/VIS SPD-20A, UV (270 nm) Agilent Eclipse XD8- C18 (5 μm, mm) Folw rate ( ) 1.0 ml/min Column temperature ( ) 40 Injection volume ( ) 1.0 μl Mobile phase ( ) ACN 10 % Gradient (, B%) ACN 10 % ~ 40 %, 대계의지표성분함량은각시료들간에일련의관련 성을보이지않아패턴분석을시행할수없다. - KHP CP JP KP - linarin 0.70% - 각시료들간에일련의관련성을보이지않아패턴분석을시행할수없다

28 - 27 -

29 H H H H H H H

30 HPLC conditions for the analysis of Cirsii Herba. Time(min) A (ACN) % B (0.1% H 3 P 4 in H 2 ) % Mobile phase Detector UV (254 nm) Column RP C18 ( mm 5 μm) Flow rate 1 ml/min Column temp. 30 Injection volume 10 μ

31 δ δ

32 Parameters LC/MS/MS System: API 2000 coupled with Shimadzu 10Avp Column: gemini C mm, 3 micron Solvent system: ACN : 0.5 % Formic acid = 70 : 30 Running time: 5 min Volume injection : 20 μl Flow rate: 0.25 ml/min Ion mode: ESI positive MRM

33 No. Compound MRM transition Q1 DP FP EP CE CXP Source Tem. 1 luteolin 5--glucoside

34 2-33 -

35 H H H H H H H

36 HPLC conditions for the analysis of Cirsii Herba. Time(min) A (ACN) % B (0.1% H 3 P 4 in H 2 ) % Mobile phase Detector UV (254 nm) Column RP C18 ( mm 5 μm) Flow rate 1 ml/min Column temp. 30 Injection volume 10 μ

37 δ δ

38 Parameters LC/MS/MS System: API 2000 coupled with Shimadzu 10Avp Column: gemini C mm, 3 micron Solvent system: ACN : 0.5 % Formic acid = 70 : 30 Running time: 5 min Volume injection : 20 μl Flow rate: 0.25 ml/min Ion mode: ESI positive MRM

39 No. Compound MRM transition Q1 DP FP EP CE CXP Source Tem. 2 luteolin 7--glucoside

40 3 hispidulin 7--neohesperidose hispidulin 7--neohesperidose

41 α β H H H H H H H H H H

42 HPLC conditions for the analysis of Cirsii Herba. Time(min) A (ACN) % B (0.1% H 3 P 4 in H 2 ) % Mobile phase Detector UV (254 nm) Column RP C18 ( mm 5 μm) Flow rate 1 ml/min Column temp. 30 Injection volume 10 μ

43 - 42 -

44 Parameters LC/MS/MS System: API 2000 coupled with Shimadzu 10Avp Column: gemini C mm, 3 micron Solvent system: ACN : 0.5 % Formic acid = 70 : 30 Running time: 5 min Volume injection : 20 μl Flow rate: 0.25 ml/min Ion mode: ESI positive MRM

45 4 luteolin luteolin

46 H H H H

47 HPLC conditions for the analysis of Cirsii Herba. Time(min) A (ACN) % B (0.1% H 3 P 4 in H 2 ) % Mobile phase Detector UV (254 nm) Column RP C18 ( mm 5 μm) Flow rate 1 ml/min Column temp. 30 Injection volume 10 μ

48 δ δ

49 Parameters LC/MS/MS System: API 2000 coupled with Shimadzu 10Avp Column: gemini C mm, 3 micron Solvent system: ACN : 0.5 % Formic acid = 70 : 30 Running time: 5 min Volume injection : 20 μl Flow rate: 0.25 ml/min Ion mode: ESI positive MRM

50 No. Compound MRM transition Q1 DP FP EP CE CXP Source Tem. 4 luteolin

51 5 pectolinarin pectolinarin

52 H H CH3 H CH 3 H H H H

53 HPLC conditions for the analysis of Cirsii Herba. Time(min) A (ACN) % B (0.1% H 3 P 4 in H 2 ) % Mobile phase Detector UV (254 nm) Column RP C18 ( mm 5 μm) Flow rate 1 ml/min Column temp. 30 Injection volume 10 μ

54 δ δ

55 Parameters LC/MS/MS System: API 2000 coupled with Shimadzu 10Avp Column: gemini C mm, 3 micron Solvent system: ACN : 0.5 % Formic acid = 70 : 30 Running time: 5 min Volume injection : 20 μl Flow rate: 0.25 ml/min Ion mode: ESI positive MRM

56 No. Compound MRM transition Q1 DP FP EP CE CXP Source Tem. 5 pectolinarin

57 6 apigenin apigenin

58 H H H

59 HPLC conditions for the analysis of Cirsii Herba. Time(min) A (ACN) % B (0.1% H 3 P 4 in H 2 ) % Mobile phase Detector UV (254 nm) Column RP C18 ( mm 5 μm) Flow rate 1 ml/min Column temp. 30 Injection volume 10 μ

60 δ δ

61 Parameters LC/MS/MS System: API 2000 coupled with Shimadzu 10Avp Column: gemini C mm, 3 micron Solvent system: ACN : 0.5 % Formic acid = 70 : 30 Running time: 5 min Volume injection : 20 μl Flow rate: 0.25 ml/min Ion mode: ESI positive MRM

62 No. Compound MRM transition Q1 DP FP EP CE CXP Source Tem. 6 apigenin

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