KOD FX Blend Taq -Plus- Crude Sample 또는 GC-rich Target과 같이 PCR이 어려운 샘플에 최적 높은 PCR 성공율 GC-rich 또는 crude sample(blood, bacteria, fungi, yeast 등)에서 높은 증폭

Size: px

Start display at page:

Download "KOD FX Blend Taq -Plus- Crude Sample 또는 GC-rich Target과 같이 PCR이 어려운 샘플에 최적 높은 PCR 성공율 GC-rich 또는 crude sample(blood, bacteria, fungi, yeast 등)에서 높은 증폭"

서용 탁
7 years ago
Views:

1 KOD -Plus- 높은 정확성과 증폭율로 Cloning에 적합한 PCR enzyme TOYOBO 겨울 할인 행사 Conventional PCR enzyme TOYOBO 대표 제품, KOD Polymerase란? PCR 관련 제품 20%할인 일본 코타카라섬(화산)에서 고온 미생물인 Thermococcus kodakaraensis로부터 추출한 고온 증폭 효소로 PCR 반응의 반복적인 100 조건에서 가장 안정적이라고 알려져 있음 Cloning 실험에 필수인 높은 정확성 Taq 의 약 80배의 PCR fidelity Hot-start PCR로 PCR specificity 향상 PCR 반응 buffer의 적정화로 증폭길이, 증폭효율 향상 우수한 내열성으로 GC-rich 샘플에 유리 KOD -Plus-로 PCR을 하면 Mutation 걱정이 없습니다! Colony number Mutation frequency (%) Total Mutant KOD -Plus- 10, A 社 High fidelity PCR enzyme 10, Pfu based 6, Taq 10, Obligatory anaerobic Heterotrophic nutrition 높은 Long Target PCR 성공률 GC-rich 샘플에서의 높은 증폭 효율 Evolutional family tree Kodakara island (Japan) KOD -Plus- High fidelity enzyme (Company B) M Intermittent spring [Yellowstone national park (USA)] 5 3 exonuclease activity에 강력한 5 exonuclease activity (proof reading)가 있어 잘못 가져온 염기를 제거하면서 합성 Taq 에 비해 약 80배 높은 정확성을 가지고 있어 정확한 DNA합성을 요구하는 실험에 적합 DNA 복제 속도는 약 130 base/sec로 Taq DNA pol.의 약 2 배 고효율 고속 PCR에 적합 KOD pol.의 Thumb 영역이 다른 효소에 비해 이완된 상태로 존재, 이러한 구조적인 특징으로 높은 증폭속도와 정확한 복제가 가능 일반 Taq 보다 80배 높은 정확성과 고효율 KOD -Plus- Neo KOD -Plus- KOD FX Pfu DNA Polymerase Long PCR enzyme (A company) Taq DNA Polymerase Mutation frequency (Number of misincorporated bases/100,000 bases) Thermococcus kodakaraensis KOD1 Growth temperature : 60~100 Optimum : 85 KOD 의 특징에 따른 두 가지 라인업 3.6 kb 2.8 kb 1.3 kb 0.6 kb Target : Human β-globin gene Reaction condition : see typical reaction setup Sample : Plasmid clone 50 ng / 50 μl reaction Cycling condition : 94 : 2 min 98 : 10 sec Tm-5 : 30 sec 30 cycles 68 : 1 min. kb 1 : human β-globin 0.6 kb 2 : human β-globin 1.3 kb 3 : human β-globin 2.8 kb 4 : human β-globin 3.6 kb 2 kb Target : Lipase gene (Pseudomonas sp.) [GC=70%] Reaction condition : see typical reaction setup Sample : Plasmid clone 10 ng / 50 μl reaction Cycling condition : 94 : 2 min 98 : 10 sec 60 : 30 sec 30 cycles 68 : 2 min 1 : KOD -Plus- 2 : Taq 3 : Taq + 5% DMSO 4 : Taq + PCR enhancer (company A) 5 : High efficient Taq (company B) M : 200 bp Ladder Markers 높은 효율의 신장력 40 sec 60 sec KOD Pfu Taq 90 sec 120 sec 60 sec 90 sec 120 sec 150 sec 60 sec 90 sec 120 sec 150 sec

KOD FX Blend Taq -Plus- Crude Sample 또는 GC-rich Target과 같이 PCR이 어려운 샘플에 최적 높은 PCR 성공율 GC-rich 또는 crude sample(blood, bacteria, fungi, yeast 등)에서 높은 증폭율 보임 High specificity anti-kod antibody를 포함하여

효율은 향상 미량의 template (5 ng)도 효율적 증폭 Blend Taq -Plus-는 anti-taq antibody를 포함하여 hot-start PCR에 적합 TA-cloning kit을 이용하여 cloning 가능 복잡한 전처리 과정없이 훌륭한 PCR 결과를 내주는 KOD FX 일반 Taq DNA Polymerase에 비해 3~4배 낮은

2 KOD FX Blend Taq -Plus- Crude Sample 또는 GC-rich Target과 같이 PCR이 어려운 샘플에 최적 높은 PCR 성공율 GC-rich 또는 crude sample(blood, bacteria, fungi, yeast 등)에서 높은 증폭율 보임 High specificity anti-kod antibody를 포함하여 hot-start PCR 가능 긴 target PCR 가능 (~24 Kb) 정확성 : 기존 Taq 보다 낮은 PCR error률 높은 PCR 증폭율로 다양한 목적의 PCR에 범용으로 사용할 수 있음 일반 Taq과 Pfu로 대표되는 proofreading 기능의 효소를 최적의 비율로 blending한 제품 일반 Taq보다 높은 정확성을 가지면서도 증폭 효율은 향상 미량의 template (5 ng)도 효율적 증폭 Blend Taq -Plus-는 anti-taq antibody를 포함하여 hot-start PCR에 적합 TA-cloning kit을 이용하여 cloning 가능 복잡한 전처리 과정없이 훌륭한 PCR 결과를 내주는 KOD FX 일반 Taq DNA Polymerase에 비해 3~4배 낮은 Error-rate Long Target 증폭에 유리한 Blend Taq Series Mouse Sample Processing Mouse tail (ca 3 mm) 50 mm NaOH 180 μl Vortex well 95 for 10 min 1 M Tris-HCl(pH8.0) 20 μl Vortex well 12,000 rpm, 5 min Supernatant 0.5~2 μl PCR Transfer to microtube Crude Mouse Tail Lysate로부터의 증폭 Plant Sample Processing Transfer to microtube Buffer A 100 μl Vortex for 10 min Vortex well Refference:BioTechniques, 19:394 (1995) Leaf (3 x 3 mm) / Rice grain Buffer A : 100 mm Tris-HCl (ph9.5) 1 M KCl 10 mm EDTA Left : Rice leaf Right : Rice grain Supernatant 1 μl PCR Plant Tissue Lysate로부터 rcbl 유전자의 증폭 (lacking proofreading activity) Missincorporation Pausing (lacking proofreading activity) (having proofreading activity) Repairing (lacking proofreading activity) Quick Taq TM HS Dye Mix Quick Taq HS DyeMix* Primers PCR-grade water High efficient Taq Blend Taq Blend Taq -Plus- (Company A) M M M M M M M : 1 kb Ladder Marker 1 : β-globin 1.3 kb 2 : β-globin 2.7 kb 3 : β-globin 3.6 kb 4 : β-globin 17.5 kb 5 : β-globin 23.0 kb Sample : Human genomic DNA, Target : β-globin gene Loading Dye (BPB)를 포함하고 Hot-start PCR 가능한 2X Hot-start Taq Master Mix Cycling comdition : 94, 2 min. 94, 30 sec. 60, 30 sec. 72, 1 min./kb 30 cycles 2x master mixture로, primer와 template만을 넣어 바로 PCR 가능 일반 Taq 보다 높은 PCR효율 Hot-start Taq : anti-taq antibody가 포함되어, 높은 sensitivity와 specificity 보임 30회 이상의 freeze-thaw 및 4 에서 3개월간 안정성 보장 Crude sample (colony)에서 직접 PCR 가능 KOD Neo Series Elongation enhance의 첨가에 의해 Plateau effect 를 억제하여 20 cycles 이후에도 증폭효율 향상 특히 long target의 증폭효율이 큰 폭으로 향상하였고 빠른 증폭속도 (30sec/kb) 실현 Plateau effect 란? 일반적으로 PCR반응에서 20 cycles 이후, 기질이 모두 소모되거나 열에 의한 효소의 activity 감소, 부산물에 의한 효율억제 등 다양한 요인에 의해 증폭 산물이 더 이상 증가하지 않는 현상 Add sample (DNA solution, colony etc.) PCR (Hot-start) Directly Electrophoresis 간편하지만 강력한 증폭 효율 BTQ-101 Blend Taq 250 U (500rxns, 20 μl 기준) 102,480 BTQ-201 Blend Taq -Plus- 250 U (500rxns, 20 μl 기준) 112,560 DTM-101 Quick Taq HS DyeMix 1.25 ml x 2 (250rxns, 20 μl 기준) 88,000 KFX-101 KOD FX 200 U (500rxns, 20 μl 기준) 216,000 KFX-201 KOD FX Neo 200 U (500rxns, 20 μl 기준) 216,000 KOD-201 KOD Plus 200 U (500rxns, 20 μl 기준) 161,920 KOD-401 KOD Plus Neo 200 U (500rxns, 20 μl 기준) 143,680 M Template : Human Genomic DNA (50 ng/50 μl reaction scale) M : 1 kb ladder 94, 2 min. 1 : Quick Taq TM HS DyeMix 2 : rtaq (Hot-start) 94, 30 sec. 2.9 kb 3 : rtaq DNA polymerse 60, 30 sec. 4 : C 社 Taq Master Mix 68, 3 min. Forward Primer : AATGGATGATTTGATGCTGTCCC Reverse Primer : ATAAGAGCTCCCAAGACTTAG Final concetration : 2 µm 40 cycles

3 Mutagenesis Product Cloning Product KOD -Plus- Mutagenesis Kit Ligation high Ver.2 KOD -Plus- Enzyme을 이용한 Inverse PCR (ipcr) 기법의 간단하며 정확한 Site-directed Mutagenesis Kit 기존 Taq 보다 정확성이 80배 높은 TOYOBO의 KOD -Plus- PCR enzyme을 사용하여 PCR error-rate를 최소화하면서 유전자의 삽입, 삭제를 수행 최대 95%의 mutation 효율 최대 11 kb large-size plasmid의 유전자 변이 가능 3 step으로 transformation까지 완료 간편한 Ready-to-Use 타입의 고효율성 Ligase 신속성 : 5~30분내 ligation 완료 편리성 : 동결되지 않아 바로 사용 가능 A - attachment mix (TOTAK - 301)을 병용하여 사용함으로서 Blunt-End의 PCR 산물도 A-tailing을 통해 TA vector에 넣을 수 있음 Cohesive, blunt 또는 overhang DNA fragments에 효과적 치환 삭제 삽입 Purified PCR Products을 이용한 TA Cloning Unpurified PCR Products을 이용한 TA cloning Template Plasmid Workflow Template (Plasmid) Template A B PCR Primer x Mutation Methylated site Inverse PCR (5~10 cycles ) <0.5~2hr> PCR products Digestion of the template plasmid by Dpn I <37 1hr> TArget Clone -Plus- 간편한 Ready-to-Use 타입의 고효율성 Ligase Purification 하지 않은 PCR산물 바로 사용가능 고효율의 ligase에 의해 5분만에 간편하게 cloning 완료 TArget Clone -Plus-의 경우, A-attachment mix가 포함되어 blunt PCR 산물에도 사용 가능 PCR products are not digested by Dpn I. DpnI digests methylated sites. C Mutant D Transform E.coli Self-ligationof PCR products (Kinase / Ligase) <16 1hr> KOD -Plus-와 Blend Taq을 이용한 500 bp PCR Product의 TA Cloning Cloning efficiency (%) TArget Clone TArget Clone -Plus- SMK-101 KOD-Plus-Mutagenesis kit 20rxns 225,840 LGK-201 Ligation high Ver.2 100rxns 143,680 TAK-201 Target Clone -Plus- 10rxns 96,480

4 Real-time PCR Real-time PCR Master Mix / SYBR Green Real-time PCR Master Mix & Plus- 2x Master Mix의 Ready-to-Use Solution, Hot-start System Roche Light cycler에 사용 가능 (optimized protocol 제공) Life Technologies ABI PRISM에 사용 가능 (optimized protocol 제공) 용도 : SYBR Green I을 이용한 intercalation assay SYBR Green Realtime PCR Master Mix TaqMan Assays 또는 hybridization probe assay Realtime PCR Master Mix THUNDERBIRD TM SYBR / Probe qpcr Mix 고효율의 2X Master Mix Solution (Rox Dye (50X) 별도 구성) 특허 출원 PCR enhancer로 target의 PCR efficiency 대폭 증가 적은 양의 target도 detection 가능하며 dimer가 증폭되지 않음 대부분의 real-time PCR cycler에 적용 가능 Anti-Taq antibody 포함으로 hot-start PCR 가능 용도 : SYBR Green I을 이용한 intercalation assay THUNDERBIRD SYBR qpcr Master Mix TaqMan assay 또는 hybridization probe assay THUNDERBIRD probe qpcr Master Mix Melting Curve 분석 결과, 높은 Specifity로 실험의 재현성을 높임 SYBR Green I의 Specificity 비교 (기기 : ABI 7900HT) Amplification curve Melting curve SYBR Green Realtime PCR Master Mix (TOYOBO) THUNDERBIRD SYBR qpcr Mix Company A Company A Delaying of the rising point 가능한 PCR 기기 Company B Dispersion of end points Company B Delaying of the rising point 정확한 결과 : Serial Dilution을 통한 테스트 결과 Generation of primer dimers Applied Biosystems Bio-Rad Roche Stratagene TaKaRa ABI PRISM 7000/7700 ABI 7300/7500 ABI 7900HT ABI Step One CFX96 Mini Opticon LightCycler 1.x/2.0 LightCycler 480 Mx3005P Mx4000 Thermal Cycler Dice Amplification curve on TaqMan assay (ABI PRISM 7700) Template : total RNA (5 M dilution : 6.4 ng~100 μl) Target : β-actin mrna Cat. No. 품 명 용 량 행사가(원) QPK-101 Realtime PCR Master Mix 1 ml x 5 (500rxns-20ul기준) 232,000 QPK-201 SYBR Green Realtime PCR Master Mix 1 ml x 5 (500rxns-20ul기준) 232,000 QPS-101 THUNDERBIRD Probe qpcr Mix 1.67 ml x 3 (500rxns-20ul기준) 224,000 QPS-201 THUNDERBIRD SYBR Green qpcr Mix 1.67 mll x 3 (500rxns-20ul기준) 224,000

Protein Research Can Get Signal 기존 Antibody Reaction Buffer(TBS-T 또는 Bloking Reagents) 대신 사용하는 새로운 조성의 Immunoreaction Enhancer Solution Buffer Signal-to-noise가 개선되어, signal 증폭 효과 폭넓은 적용범위 : Western

reaction 향상으로 sensitivity 향상 용도 : immunohistochemistry (IHC), immunocytochemistry, chemogenetic, fluorescent assay 조직 세포에 적용 가능 파라핀 절편 동결 절편에 적용 가능 일반 세포 형광염색에 적용 가능 Signal은 높게, Background는 낮게 도출된 결과

5 Protein Research Can Get Signal 기존 Antibody Reaction Buffer(TBS-T 또는 Bloking Reagents) 대신 사용하는 새로운 조성의 Immunoreaction Enhancer Solution Buffer Signal-to-noise가 개선되어, signal 증폭 효과 폭넓은 적용범위 : Western Blot, Dot Blot, ELISA 등 간편한 사용법 : ready-to-use ECL system과 함께 사용 Can Get Signal Immunostain 기존 Antibody Reaction Buffer 대신 사용하는 새로운 조성의 Immunoreaction Enhancer Solution Buffer Antigen-antibody reaction 향상으로 sensitivity 향상 용도 : immunohistochemistry (IHC), immunocytochemistry, chemogenetic, fluorescent assay 조직 세포에 적용 가능 파라핀 절편 동결 절편에 적용 가능 일반 세포 형광염색에 적용 가능 Signal은 높게, Background는 낮게 도출된 결과 Conventional Conventional Can Get Siganl (TBS-T) Can Get Siganl (TBS-T) p-akt p-erk1 p-erk2 Sample : Cultured bovine adrenal medulla cells 1. Control (H2O) 2. Insulin (1 nm, stimulated for 5 min) 3. Insulin (10 nm, stimulated for 5 min) 4. Insulin (100 nm, stimulated for 5 min) Western Blot, ELISA용 Can Get Signal 결과 HRP tagging Ab 및 Fluorescent tagging Ab에 모두 사용할 수 있음 현재 사용하는 blocking solution 및 detection reagent를 변경할 필요 없음 S2 cell에서의 α-tubulin detection 결과 파라핀조직을 사용한 CD133 detection 결과 Prestained Marker Samples RT-1 h RT-1 h RT-1 h Cat. No. 품 명 용 량 행사가(원) NKB-101 Can Get Signal Immunoreaction Enhancer Solution 250 ml x 2 289,200 NKB-401 Can Get Signal Immunostain Starter Set 5 ml x 2 104,720 SDS-PAGE Transfer Blocking Primary antibody Secondary antibody Detection Solution 1 Solution 2 Can Get Siganl

6 cdna synthesis kit 할인 품목 리스트 ReverTra Ace -α- Kit High Quality cdna 합성을 위한 편리성과 고효율성을 지닌 RT Kit ReverTra Ace(기능이 향상된(M-MLV) RTase) 이용 Reverse transcription에 필요한 모든 components 포함 14 kb 이상 긴 길이의 cdna 합성 가능 생성된 cdna는 purification없이 바로 PCR 가능 용도 : cdna synthesis, RT-PCR용 ReverTra Ace 효소의 구조 및 기능 d 경쟁사 비교 높은 cdna 합성 효율 A B C 온도에 따른 효율 비교 A : ReverTra Ace B : Reverse Transcriptase (Company A) C : Reverse Transcriptase (Company B) 제품군 품 번 품 명 용 량 행사가 (원) 일반 PCR Cloning 관련제품 BTQ-101 Blend Taq 250U 102,480 BTQ-201 Blend Taq -Plus- (500 rxns, 20 μl 기준) 112,560 DTM-101 Quick Taq HS DyeMix 1.25 ml x 2 88,000 KFX-101 KFX-201 KOD FX KOD FX Neo 200U (500 rxns, 20 μl 기준) 216,000 KOD-201 KOD Plus 200U 161,920 KOD-401 KOD Plus Neo (500 rxns, 20 μl 기준) 143,680 LGK-201 Ligation high Ver rxns 143,680 TAK-201 Target Clone -Plus- 10 rxns 96,480 SMK-101 KOD-Plus-Mutagenesis kit 20 rxns 225,840 ReverTra Ace qpcr RT Kit 잘 발현되지 않는 유전자의 확인 Real-time PCR을 위한 cdna 합성용 Kit 최적화된 RT buffer와 primer mix로 고효율의 reverse transcription 가능 RNA를 제거하는 추가 RNase H treatment step이 포함되지 않아 15분 내 모든 실험 완료 희귀 유전자 발현 검출에 적합 합성된 cdna를 PCR reaction volume의 20%까지 넣을 수 있음 정량PCR enzymes cdna 합성 kit Can Get Signal QPK-101 QPK-201 QPS-101 QPS-201 Realtime PCR Master Mix SYBR Green Realtime PCR Master Mix THUNDERBIRD Probe qpcr Mix 1.67ml x 3 THUNDERBIRD SYBR Green qpcr Mix 1 ml x 5 (500 rxns, 20 μl 기준) 232,000 (500 rxns ~ 20 μl 기준) 224,000 FSK-101 ReverTra Ace -a- 200 rxns 320,000 FSQ-101 ReverTra Ace qpcr RT kit 100 rxns 280,000 NKB-101 NKB-401 Can Get Signal Immunoreaction Enhancer Solution Can Get Signal Immunostain Starter Set 250 ml x 2 289, ,720 VAT는 별도 입니다. x : not detected FSK-101 ReverTra Ace -a- 100rxns 320,000 FSQ-101 ReverTra Ace qpcr RT kit 200rxns 280,000 비엠에스 서울 ㅣ 강남구 역삼로 7길 22 BMS 빌딩 Tel l Fax 비엠에스 대전 ㅣ유성구 계룡로 141길 B station Tel l Fax

TOYOBO Reagent 만의독보적인기술 ReverTra Ace M-MLV RTase 의 RNase H domain 에 mutation 시키므로 RNase H activity 를낮추고,mRNA 의 degradation 을막아 cdna 합성효율을높임 KOD Polyme

TOYOBO Reagent 만의독보적인기술 ReverTra Ace M-MLV RTase 의 RNase H domain 에 mutation 시키므로 RNase H activity 를낮추고,mRNA 의 degradation 을막아 cdna 합성효율을높임 KOD Polyme PCR Enzyme 부터 qpcr 까지! PCR 실험은 TOYOBO 로해결하세요! 행사기간 : 7 월 15 일 ~ 9 월 13 일까지 TOYOBO Reagent PCR Enzyme High Quality PCR Enzyme cdna Synthesis Kit qpcr One-step RT Kit Immunoreaction Enhancer Solution 추가