1. 빨리 출되는 매에서 검출되는 시를 체. 이 단계에서 칼 없이 직접 검출에 연결하여 시의 검출 체. 2. 메탄올과 이 혼합된 이동상을 이하여 C18에서 시의 출을 체하고 시의 탄소 수 및 와 된 참고 참고. 3. 이동상의 메탄올 양을 변화시키면서 k 값을 2-20

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1 정보 8. C18 칼에서 이동상 조건 개발 법 소개 역상 칼에서 ODS(octadecyl)룹을 실리카에 본딩한 칼(C18, ODS)는 가장 널리 사하는 방법입니다. C18 칼으 가장 적당한 이동상으서는 신의 경험과 조사에서 공하는 나 시험 조건 인쇄을 참조하여 조할 수 있습니다. 이 부문은 전통적인 이동상 조건 개발 법을 보여 줍니다. 다음은 일반적으 사하는 칼의 예입니다. :COSMOSI 5C18-MS-II, COSMOSI 5C18-AR-II 칼 (내경, I.D x 길이): 4.6 x 150mm 이동상 조건 개발 법 등 매 법(Isocratic method)에서 이동상은 석 중에 매구성비가 변하지 않고 일정합니다. 구배 법(Gradient method)은 시간에 따 매 구성비가 변합니다. 이 두 가지 방법은 양호한 시 리를 위해서 칼의 온도 조절 및 엄격한 이동상 준비가 필요합니다. 등 매 법(Isocratic method) 일반적으 이동상 조건 개발을 하 위해서 다음과 같이 행합니다. 먼저 시가 검출에 검출이 되는지 확인하고 강 한 매 조건으 시를 출시킵니다. 래서 이동상 조건을 변화시키면서 시의 리 조건을 조절합니다. 시의 머무름 시간을 짧게 하려면 강한 출 효과를 갖는 매조건의 농도 하고 시의 머무름 시간을 길게 하려면 농도를 감소시킵니다. 만약 시가 산이나 아민 룹같이 이온화하 쉬운 질이면 버퍼와 함께 p조절이 필요합니 다. 이온화 조절방법 또는 이온-페어(ion-pair) 방법은 공통적으 이혼화된 시의 머무름을 증가시키 위하여 사합니다. 이 방법은 이온-페어 시약(예.,염성 화합은 alkyl benzene sulfonate, 산성 화합은 quaternaty ammonium)을 이동상 첨가하여 시가 이온 쌍이 형성이 되도 하 위해서 사합니다. (예.,) 초 조건 셋팅 순서 (1) 검출 신호레벨 체 (2) C 18 칼에서 시 출 체 (3) k 값이 2-20 범위 내에 오도 조절 리 불량 리 양호 (4) 유매 농도 조절 침 리 불량 (5) 이동상 p 조절 침 리 양호 리 불량 리 양호 (6) 칼 교환 침 208

2 1. 빨리 출되는 매에서 검출되는 시를 체. 이 단계에서 칼 없이 직접 검출에 연결하여 시의 검출 체. 2. 메탄올과 이 혼합된 이동상을 이하여 C18에서 시의 출을 체하고 시의 탄소 수 및 와 된 참고 참고. 3. 이동상의 메탄올 양을 변화시키면서 k 값을 2-20 범위 내에 오도 조절. 4. 만약 리가 불량하면 메탄올을 아세나이트릴 바꾸거나 TF을 첨가하여 α값(리계수)을 변화시킵니다. 5. 테일링 가 염성 화합에서 발생하면 버퍼 이동상의 p을 조절합니다. 6. 5단계에서 리가 만족스럽지 않으면 다른 C18 칼으 바꾸거나 고정상 재질이 알킬 베이스(alkyl based), 아틱 베이스(aromatic based) 또는 타 재질의 다른 고정상으 바꾸어서 실행합니다. 구배 법(Gradient Method) 구배 법은 이동상에서 연적으 유매의 농도를 변화시킵니다. 이 방법은 유매의 농도를 약간 변화시키면서 시 의 머무름 시간을 게 변화시킬 수 있는 방법으서 특히 출 시간이 긴 광범위한 소수성(hydrophobicity) 시 의 짧은 리 시간에 유합니다. 또한 이 방법은 펩타이드와 같은 화합의 큰 량 시에 유합니다. 굴절율(RI) 검 출는 구배 법 방법에 의한 이동상 개발에 적당치 않습니다. 209

3 정보 쉬운 이동상 조건 만드는 법 순상 는 박층(Thin layer) 를 이하여 쉽게 매 조건을 찾을 수 있지만 역상 는 이동상 조건을 쉽게 만들가 어렵습니다. 래서 이동상의 혼합비(유매의 농도)는 종종 반복된 실험을 통하 여 결과를 얻습니다. 만약 질(시)의 화학적 구조를 안다면 여에 적당한 이동상 유매 농도를 설명하였습니다. 본 화학적 구조의 적절한 유매 농도 + 치환 (substituents)의 효과 = 가장 좋은 유매농도 조건 셋팅 림 1의 본 화학적 구조의 머무름 시간을 근거 조건을 선택하고 헤테 원(hetero atom)와 치환 의 효과 조절 합니다. Benzene Naphthalene Diphenyl Quinoline Caeine 림 1. 본 화학적 구조 1. 본화학 구조에 따 가장 좋은 유매농도를 선택. *테이블 1을 참조 2. 헤테 원의 효과를 고려하여 유매 농도를 조절. *테이블 2을 참조 3. 치환 에서 효과를 고려하여 유매 농도를 조절. *테이블 3 참조 해리되는 치환 있음 해리되는 치환 없음 4. 해리되는 치환 에서 효과를 고려하여 유매 농도를 조절 완 완 1. 림 1에서 표 시와 유사한 본화학 구조를 선택. 가장 좋은 유매 농도를 선택. 테이블 1. 본화학 구조의 머무름 시간. 본 구조 Benzene Naphthalene Diphenyl Quinoline Caffeine 칼 다른 메탄올 농도에서의 머무름 시간() 80% 70% 60% 50% 40% 30% 20% 5C18-MS-II C18-AR-II C18-MS-II C18-AR-II C18-MS-II C18-AR-II C18-MS-II C18-AR-II C18-MS-II C18-AR-II 칼: COSMOSI 4.6 mm I.D. 150 mm 유: 1.0 ml/min 검출 파장: UV 254 nm 210

4 2. 테이블 2에서 헤테 원에서 효과를 고려하여 유매 농도를 조절. 테이블 2. 헤테 링(hetero rings)또는 폴리싸이클릭 아틱(polycyclic aromatics)을 참조 유매 농도 조절 헤테 링, 폴리싸이클릭 아틱 시 5C18-MS-II 5C18-AR-II 1개의 켤레링 (Conjugate Ring) Benzene +10% +10% 헤테싸이클릭 헤테 원 1 of S Thiophene ±0% ±0% 1 of O Furane -5% -5% 1 of N yridine -20% -10% 1개의 카보닐 룹(carbonyl) Quinone -5% -5% 1개의 이중결합 - -5% -5% 3. 테이블 3에서 치환 에서 효과를 고려하여 유매 농도를 조절. 테이블 3. 치환 에서 유매 농도 조절 치환 메탄올 농도 5C18-MS-II 5C18-AR-II -F 0 0 -CI +10% +10% -Br +10% +10% -I +20% +15% -CON2-40% -40% -COC3-10% -10% -COOC OC CC2O -10% -10% -C2O -30% -30% -O -30% -30% -NO2-10% -5% -CN -20% -15% -N2-40% -30% -SC3 +10% +10% 칼: COSMOSI 4.6 mm I.D. 150 mm 유: 1.0ml / min 검출 파장: UV 254 nm 치환 메탄올 농도 -C2- (알칼-체인) 본구조에서 MeO 농도 % +10% (4 of C2-) 90-80% +10% (3 of C2-) 80-60% +10% (2 of C2-) < 60% +10% (1 of C2-) -henyl 본구조에서 MeO 농도 % +5% (1 of henyl) 90-60% +10% (1 of henyl) < 60% +20% (1 of henyl) * 치환 의 위치에 따 효과는 이동합니다. 4. 해리 치환 화합은 p의 민감한 변화에 지극히 예민합니다. 재현 성 있는 데이터를 얻 위해서 일정한 이동상 p을 유지시켜야 합니다. 테이블 4는 치환 들이 산(p2)이나 중성(p)에 머무름 시간이 영향을 받는 것을 나타납니다. 테이블 4. 해리 치환 화합의 유매의 효과 해리 치환 화합 메탄올농도(p 2)의 조절 메탄올농도(p 7의 조절 -COO -10~-20% -30~-40% -SO3-20~-40% -30~-40% -O42-20% -50% -BO22-20% -20% -N2 (molecular 타입) -60% -10% -N2 (cyclic amine) -50~-60% -10~-20% -N2 (ionic 타입) - -40~-50% 칼 Buffer p2 p7 유 검출 파장 :COSMOSI 5C18-MS-Il, 4.6 mm l.d. x 150 mm :20mmol/l 3O4 :20mmol/l 3O4/Na204=2/3 :1.0 ml/min :UV 254 nm 211

5 정보 조건 셋팅의 예 칼:COSMOSI 5C18-MS-II 4.6 mm I.D. 150 mm (1) 5-Benzyloxyindole <계산> 본 구조 Naphthalene + (hetero ring N) =70%+ (-20%) =50% <결과> 치환 (phenyl) + (-OC2-는 -OC3 와 같음) =(+10%) + (+0%) 본 구조 + 치환 = 50% + (+10%) = 60% 60%메탄올(메탄올:=60:40) 머무름 시간= 13.7 림2. 5-Benzyloxyindole의 석 (2) omovanillic Acid <계산> 본 구조 Benzene=60% 비 해리 치환 (-O) + (-OC3) + (-C2) =(-30%) + (0%) + (+10%) = -20% 비 해리 치환 -COO = -10~-20% (p2) -30~-40% (p7) 본 구조 + 치환 = 메탄올 농도는 산(acid)범위(p2) 30-20% 중성 범위 (p7) 10-0% < 결과> (p2) 30%메탄올 : 머무름 시간 = %메탄올 : 머무름 시간 = 4.0 (p7) 10%메탄올 : 머무름 시간 = 4.0 0%메탄올 :머무름 시간 =12. 림3. 20%메탄올(p 2)의 석 *실 머무름 시간 예측 결과는 유매 농도 계산의 오차에 의하여 결과는 ±10% 범위에 있을 수 있습니다. 212

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