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2 [UCI]I804: 공학석사학위논문 홍합과한약재혼합추출물의알코올 분해효소활성에대한상승효과 2021 년 2 월 부경대학교 대학원 식품공학과 이윤형

3 공학석사학위논문 홍합과한약재혼합추출물의알코올 분해효소활성에대한상승효과 지도교수 양지영 이논문을공학석사학위논문으로제출함 년 2 월 부경대학교 대학원 식품공학과 이윤형

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5 목 차 Abstract ⅱ Ⅰ. 서론 1 Ⅱ. 실험재료및방법 3 1. 실험재료및시약 3 2. 홍합 한약재복합물의제조 3 3. ABTS radical 소거능측정 4 4. Alcohol dehydrogenase(adh) 활성 4 5. Acetaldehyde dehydrogenase(aldh) 활성 6 6. 구성아미노산분석 6 7. 통계처리 7 Ⅲ. 결과및고찰 8 1. 홍합 한약재복합물의 ABTS radical 소거능 8 2. 홍합 한약재복합물의 ADH 활성 홍합 한약재복합물의 ALDH 활성 홍합 한약재복합물의구성아미노산 14 Ⅳ. 요약 21 Ⅴ. 참고문헌 24 - i -

6 Synergic Effect of Enzymatic Activities for Alcohol Degradation of Extracts from Mixtures of Blue Mussel and Medicianl Herbs Yoon hyeung Lee Department of Food Science and Technology, The Graduate School Pukyong National University Abstract Hangover refers to an unpleasant headache, nausea, and dizziness that people feel after drinking. This is caused by acetaldehyde decomposed from alcohol. Alcohol dehydrogenase (ADH), acetaldehyde dehydrogenase (ALDH) act to decompose acetaldehyde. This study was aimed to evaluate the effect of mixing mussels and herbal medicines on alcohol metabolizing enzymatic and the synergic effect. And blue mussel or herbal medicines had functional ingredient respectively. Samples were extracted with hot water, and the activity of ADH and ALDH were measured and compared. Samples were A (blue mussel), B (arrowroot), C (dried orange peel), D (magnolia), E (quince), F (lonicer aflower), G (blue mussel + arrowroot), H (blue mussel + dried orange peel), I (blue mussel + magnolia), J (blue mussel + quince) and K (blue mussel + lonicer aflower). Extract B showed the highest effect for the activities of ADH (710±4.6%) and ALDH (1716.6±7.5%). And the addition of blue mussel and extract G did provide a synergy effect. And extract C had lower ADH and ALDH activities than other extracts, but exhibited a synergistic effect. Although extract D showed high ADH and ALDH activity, it did not show synergistic effect. As a result, extract B had high value and synergy effect. Arrowroot with blue mussel is expected to help reliving hangover. - ii -

7 Ⅰ. 서론. 일반적인경우, 알코올은위장에서소량분해되고, 위장을통과하여소장에서흡수가된알코올은혈관을통해서간으로이동을하게된다. 간은알코올분해에가장핵심이되는장기이며, 섭취를한알코올의 90% 가넘게간에서분해되며, 섭취를한알코올의 2-5% 는분해가되지않고호흡, 소변, 땀을통해배설이된다. 흡수된알코올은간에서대사되는데이는보통알코올탈수소효소 (Alcohol dehydrogenase, ADH) 가작용하여아세트알데히드로분해가된다. 알코올대사과정에서필수적으로생기는 1차대사산물인아세트알데히드는아세트알데히드탈수소효소 (Acetaldehyde dehydrogenase, ALDH) 가작용하여아세트산으로분해되며, 아세트산은또다른분해과정을거쳐아세틸-CoA로전환이되며신체에너지합성에이용된다. 아세트알데히드가체내에서느리게분해되면, 체내에머무른시간과농도가높아져젖산등의피로물질축적을유도하고, 소변, 땀등으로수분과전해질을체외로방출하여두통, 갈증등의숙취를유발한다. 한국의음주문화특성은보통빈도수가높고, 한번섭취시과음을하는경우가많다. 따라서그로인한숙취로다음날정상적인생활을하는데영향을많이받는사람들이많으며, 이는업무능률저하로인한사회경제적손해를초래하기에, 국내외숙취해소제시장은꾸준히매출이증가되고있다. 시장조사기관인닐슨코리아에따르면국내숙취해소시장매출규모는지난 2005년 600억원에불과했으나 2008년 1,140억원, 2011년 2,058억원, 2014년 1,966억원, 2015년 1,353억원을기록했다. 2016년에는 2,000억원대에육박했다는관측이나온다. 전세계숙취해소제시장규모는 2018년에 11억달러로평가되었으며, 미국, 중국, 인도, 스페인, 이탈리아, 남아프리카및캐나다를포함한다양한국가에 - 1 -

8 서알코올소비가꾸준히증가함이숙취해소제수요를증가시키는주요원인으로판단된다 (Hang JH 등, 2020). 최근숙취의경감을위한다양한연구로부작용이없는천연물을이용한숙취해소효능에대한연구가활발히진행되고있다. 숙취개선에도움이되는소재로는홍합, 칡, 진피, 신이화, 모과, 금은화등이보고되어있다 (Lee SC 등, 2014). 이들중특히홍합의생리적기능성의경우에는불포화지방산을중심으로염증 (Treschow AP 등, 2007) 과관절염 (McPhee S 등, 2007) 에효과가있다고알려져있다. 또한, 간보호효과및알코올대사에관련이있다고보고된아미노산류중 asparagine, glycine 및 glutamic acid(oh KS 등, 2013) 등이다량함유되어있다고알려져있다. 그리고홍합열수추출물의항산화능이알코올분해효소인 ADH와 ALDH에미치는영향이보고되었다 (Kim SK 등, 2014). 본연구에서는홍합추출물을기본으로하여숙취및간보호, 항염증효과가알려져있는소재들의개별항산화및알코올분해효과를평가하고, 알코올로부터발생되는라디칼을소거하는항산화도및알코올분해가높은소재를복합하여적합한소재를찾고자하였다. 그리고홍합추출물을기본으로하여일반적으로숙취해소효과가있다고알려진칡, 진피, 신이화, 모과, 금은화를각각첨가한추출물을제조하였다. 그런다음알콜분해효소에미치는영향과항산화능, 그리고아미노산을분석하여홍합과한약재간의상승효과를통하여숙취해소와관련한음료및식품개발의근거를마련하고자하였다

9 Ⅱ. 실험재료및방법 1. 실험재료및시약 홍합은부산자갈치어시장에서구입하였고, 칡, 진피, 신이화, 모과, 금은화의한약재들은 헬씨코에서제공받아실험에사용하였다. 모든시료들은실험에사용하기전냉장보관하였다. 알코올분해효소생리활성측정을위해 1.0 M Tris-HCl buffer (ph 8.8), acetaldehyde, 2-mercaptoethanol, alcohol dehydrogenase from saccharomyces (ADH), aldehyde dehydrogenase from yeast (ALDH), ß-Nicotinamide adenine dinucleotide hydrate (NAD+), potassium persulfate (Sigma-Aldrich, Saint Louis, MO, USA) 를사용하였다. 구성아미노산분석을위하여유리아미노산표준품은 Amino Acid Mixture Standard Solution, Type B (Wako, Osaka, Japan) 와 Amino Acid Mixtrue Standard Solution, Type H (Wako) 을사용하였다. 2. 홍합 한약재복합물의제조 껍질홍합에이물질을물로제거하고, 껍질홍합 150 g에증류수 300 ml 를가열하였다. 그리고칡, 진피, 신이화, 모과, 금은화 15 g에증류수 300 ml를가열하여열수추출물을제조하였다. 홍합과 5가지햔약재를각각혼합하여열수추출물을제조한경우는껍질홍합 150 g과각각의한약재 15 g에증류수 300 ml으로설정하여가열시켰다. 가열조건은항온수조에서 - 3 -

10 100 에서 120 rpm으로교반하여 2시간동안열수추출하였다. 이후 No. 3 여과지 (Advantec, Tokyo, Japan) 로추출물을통과시켰다. 추출물들의명칭을간략화하여 A, B, C, D, E, F, G, H, I, J, K로명명하고, Table 1에나타내었다. 3. ABTS_radical 소거능측정 ABTS_radical 소거능측정은 (Roberta Re 등, 1999) 의방법을이용하여 7.4 mm의 ABTS과 2.6 mm potassium persulfate를실온의암소에서 24시간보관하였다. ABTS radical 소거능측정은 96 well plate에시료 50 ul와 ABTS 용액 950 ul를가한후, 실온의암소에서 10분간보관한후, microplate reader를이용하여 732 nm의흡광도에서그값을측정하였다. 음성대조구로는 1.5 mm trolox working solution을 assay buffer와혼합하여 mm의농도로조제하여작성하였다. 4. Alcohol dehydrogenase (ADH) 활성 각열수추출물의 ADH 활성에미치는영향은 (Bergmeyer HU 등, 1974) 의방법을참조하고변형시켜측정하였다. 증류수 700 μl, 1.0 M Tris-HCl buffer (ph 8.8) 380 μl, 20 mm NAD+ 150 μl, 시료 50 ul를혼합하여 2 5 항온수조에서 10분간반응시키고난뒤, ADH (5 unit/ml) 27.5 ul를가하여 25 에서 10분간반응시킨후생성된 NADH를 Microplate reader (EPOCH2; BioTek Instruments, Inc., Winooski, VT, USA) 를이용하여 340 nm에서흡광도를측정하고난뒤, 음성및양성대조군에대한상대적활성을비교하였다. 음성대조구는시료대신증류수를이용하였고, 양성대조구 - 4 -

11 Table 1. Name of extract ingredients and mixtures Korean name English name Scientific name A 홍합 Blue mussel Mytilus edulis B 칡 Arrowroot Kudzu vine C 진피 Dried orange peel Citrus unshiu Markovich D 신이화 Magnolia Magnolia kobus E 모과 Quince Chaenomeles sinensis F 금은화 Lonicera aflower Lonicera japonica G 홍합 + 칡 Blue mussel + Arrowroot H 홍합 + 진피 Blue mussel + Dried orange peel I 홍합 + 신이화 Blue mussel + Magnolia J 홍합 + 모과 Blue mussel + Quince K 홍합 + 금은화 Blue mussel + Lonicer aflower - 5 -

12 는 Relif88 ( 숙취해소제 ) 를이용하였다. ADH 활성 (%) = ( 실험구의흡광도 / 대조구의흡광도 ) Acetaldehyde dehydrogenase (ALDH) 활성 각열수추출물의 ALDH 활성에미치는영향은 (Koivula T와 Koivusal M 등, 1975) 의방법을참조하고변형시켜측정하였다. 증류수 1050 μl, 1.0 M Tris-HCl buffer (ph 8.0) 150 μl, 20mM NAD + 50 ul, 0.1 M acetaldehyde 50 ul, 3.0 M KCl 50 ul, 0.33 M 2-mercaptoethanol 50 ul, 시료 50 ul을잘혼합하여 25 에서 10분간반응시키고난뒤, ALDH (1 unit/ml) 50 ul를첨가하여 25 에서 10분간반응시킨후생성된 NADH의를 microplate reader를이용하여 340 nm에서흡광도로측정하고난뒤, 음성및양성대조군에대한상대적활성을비교하였다. 음성대조구와양성대조구는 ADH 활성측정과동일한대조구를사용하였다. ALDH 활성 (%) = ( 실험구의흡광도 / 대조구의흡광도 ) 구성아미노산분석 구성아미노산은식품공전 (MFDS, 2020, 제 8 일반시험법 아미노산 ) 의방법으로실험하였다. 트립토판이외의아미노산정량용시험용액은단백질로서약 10 mg을함유하는검체를가수분해시험관에정밀히달아놓은뒤넣었다. 6 N HCl을단백질양에대하여 10 ml를가한후, 밀봉하여가열로에서 110±1, 22 24시간가수분해하였다. 가수분해종료후, 즉시감압하여 - 6 -

13 40 에서농축건조하여 HCl을제거하였다. HCl을최대한제거하기위하여잔사에물을가해다시농축건조시켰다 N HCl용액으로일정량으로만들어시험용액으로하였다. 침전이있는경우에는 No. 1 여과지 (Advantec, Tokyo, Japan) 를사용하여여과한후, 아미노산자동분석기 (L-8900, HITACHI, Tokyo, Japan) 를사용하여분석하였다. 7. 통계처리 모든분석은 3 회이상수행되었다. 통계처리는 Minitab (M19) 프로그램을 이용하였고, one way ANOVA 분석을통해 95% 신뢰구간에서유의적인차 이를확인하였다

14 Ⅲ. 결과및고찰 1. 홍합 한약재복합물로부터의 ABTS radical 소거능 실험재료및방법의 Table 1에서간략화한명칭에따라서각추출물들을명명하고그에따른각추출물의 ABTS radical 소거능값 Fig. 1에나타내었다. 홍합 (A), 칡 (B), 진피 (C), 신이화 (D), 모과 (E), 그리고금은화 (F) 추출물을단독으로첨가한경우 ABTS radical 소거능은각각 ±0.0124, ±0.0004, ±0.0051, ±0.0013, ±0.0029, ± mm Trolox로나타났다. 그리고홍합과칡 (G), 홍합과진피 (H), 홍합과신이화 (I), 홍합과모과 (J), 그리고홍합과금은화 (K) 복합물에 ABTS radical 소거능은 ±0.0075, ±0.0013, ±0.0003, ±0.0019, ± mm Trolox로나타났다. 이를홍합또는소재단독을첨가했을때의활성과비교해보면홍합과진피 (H) 복합물만이상승효과가있었으며, 다른시료들은유의적으로상승효과를나타내지않았다. 기존문헌에따르면항산화활성이높은것으로알려진물질이알코올섭취시신체에유발되는산화스트레스를감소시킬수있기때문에그러한연관성으로숙취해소에도움이된다고알려져있다 (Kim BY 등, 2009, Lee M 등, 2013). 그러나 Fig. 1, Fig. 2의높은 ADH, ALDH 활성도를가지는시료들인칡 (B), 금은화 (F) 등과 Fig. 3에 ABTS radical 소거능값을비교하였을때는연관성이없음을알수있다. 따라서 ADH, ALDH 활성과항산화에대해서는연관성이없다

15 b c a a a b b a b a d Fig. 2. ABTS_raical scavenging activity of 11 hot water extracts. (A, blue mussel;b, arrowroot; C, dried orange peel; D, magnolia; E, quince; F, lonicer aflower; G, blue mussel + arrowroot; H, blue mussel + dried orange peel; I blue mussel + magnolia;, J, blue mussel + quince; K, blue mussel + lonicer aflower). Values not sharing the same letter are significantly different from one another (p<0.05)

16 2. 홍합 한약재복합물로부터의 ADH 활성 실험재료및방법의 Table 1에서간략화한명칭에따라서각추출물들을명명하고그에따른 ADH 활성도를 Fig. 2으로나타내었다. Fig. 2에의하면 ADH 활성은양성대조구 (RELIEF 88, 숙취해소제 ) 와음성대조구 ( 증류수 ) 에대하여각각 995.1±24.0%, 100% 의활성도를나타내었다. 홍합및한약재의열수추출물을홍합 (A), 칡 (B), 진피 (C), 신이화 (D), 모과 (E), 그리고금은화 (F) 추출물에대하여각각 150.1±0.7%, 710.8±5.7%, 354.7±5.9%, 576.3±16.0%, 410.0±1.5%, 그리고 697.9±15.5% 의활성도를나타내었다. 모든각시료들은 ADH 활성도를나타내었으며, 특히칡 (B) 추출물은다른모든시료들을비교하였을때, 가장높은값을보였다. 칡은숙취해소능력을검증받는데널리이용되어왔으며, 한의학에서만성알코올성간손상치료에사용되기도하였다. 또한알코올사용장애를치료하는데도영향을미친다. 칡의꽃은아세트알데히드제거능력을향상시키는능력으로인해음주로인한문제를치료하는데사용되었다 (McGregor N.R 등, 2007). 임상연구에따르면 Puerana thomsonii ( 칡의한종류 ) 는사람의혈액에아세트알데히드를제거하는데특정자극효과가있어서그독성및두통과같은숙취증상을감소시킬수있다고알려져있다 (Yamazaki T 등, 2002). 홍합을함유한열수복합물의경우홍합과칡 (G), 홍합과진피 (H), 홍합과신이화 (I), 홍합과모과 (J), 그리고홍합과금은화 (K) 복합물에대하여각각 802.5±9.5%, 410.9±7.9%, ±8.3%, 250.6±1.5% 그리고 463.3±1.0% 의활성도를나타내었다. 각시료에대하여홍합과칡 (G), 홍합과진피 (H) 복합물만이각시료들을따로추출했을때의활성도를나타내는홍합 (A), 칡 (B), 진피 (C) 추출물보다높은활성도를나타내었다. 따라서앞서설명한문헌에근거한내용과 ADH 실험결과값을보았을때홍합과칡 (G) 복합물이가장큰시너지

17 a b b c d g f f e b a Fig. 3. Effect of 11 hot water extracts on the activity of alcohol dehydrogenase (ADH). (A, blue mussel;b, arrowroot; C, dried orange peel; D, magnolia; E, quince; F, lonicer aflower; G, blue mussel + arrowroot; H, blue mussel + dried orange peel; I blue mussel + magnolia;, J, blue mussel + quince; K, blue mussel + lonicer aflower). Values not sharing the same letter are significantly different from one another (p<0.05)

18 효과를나타낼것으로기대된다. 3. 홍합 한약재복합물로부터의 ALDH 활성 실험재료및방법의 Table 1에서간략화한명칭에따라서각추출물들을명명하고그에따른각추출물의 ALDH 활성도를 Fig. 3에나타내었다. Fig. 2에의하면 ALDH 활성은양성대조구와음성대조구에대하여각각 ±19.2%, 100% 의활성도를나타내었다. 각각의시료들인홍합 (A), 칡 (B), 진피 (C), 신이화 (D), 모과 (E), 그리고금은화 (F) 추출물에대하여각각 ±6.8%, ±0.4%, ±12.3%, ±6.8%, ±25.6%, 그리고 ±10.7% 의활성도를나타내었다. 모든각시료들은 ALDH 활성도를나타내었으며, 특히칡 (B) 추출물이다른모든시료들을비교하였을때, 가장높은값을보였다. 임상연구에따르면칡에서분리된이소플라본배당 체인텍토리딘, 혈청에서알라닌아미노전달효소 (alanine aminotransferase, ALT), 아스파르테이트아미노전달효소 (aspartate aminotransferase, AST) 및트리글리세리드를감소시켜과산화수소증식인자활성화수용체 α의경로장애를조절하고개선함으로써알코올유발간지방증에대한간보호효과를가진다 (Xiong. Y 등, 2010). 따라서기존의시료들보다칡추출물이높은 ALDH 활성도를나타내는것과연관된다. 홍합을함유한열수복합물의경우홍합과칡 (G), 홍합과진피 (H), 홍합과신이화 (I), 홍합과모과 (J), 그리고홍합과금은화 (K) 복합물에대하여각각 ±14.5%, ±9.8%, ±18.3%, ±29.0% 그리고 ±33.2% 의활성도를나타내었다. 각시료에대하여홍합과칡 (G), 홍합과진피 (H) 복합물만이각시료들을따로추출했을때의활성도를나타내는홍합 (A), 칡 (B), 진피 (C) 추출물보다높은활성도를나타내었다. 따라서임상연구결과와실험결과에의하여

19 b e c de ab a d c c f f Fig. 4. Effect of 11 hot water extracts on the activity of acetaldehyde dehydrogenase (ALDH). (A, blue mussel;b, arrowroot; C, dried orange peel; D, magnolia; E, quince; F, lonicer aflower; G, blue mussel + arrowroot; H, blue mussel + dried orange peel; I blue mussel + magnolia;, J, blue mussel + quince; K, blue mussel + lonicer aflower). Values not sharing the same letter are significantly different from one another (p<0.05)

20 ALDH 활성도홍합과칡 (G) 복합물가장큰시너지효과를나타낼것으로 기대된다. 4. 홍합 한약재복합물로부터의구성아미노산분석 실험재료및방법의 Table 1에서간략화한명칭에따라서각추출물들을명명하였다. 그리고구성아미노산은필수아미노산 9종 (threonine, valine, methionine, isoleucine, leucine, phenylalanine, lysine, histidine, arginine) 과비필수아미노산 8종 (Aspartic acid, serine, glutamic acid, glycine, alanine, cysteine, tyrosine, proline), 총 17성분을분석하여 Table 2에나타내었다. 이들중숙취해소에도움이된다고알려진아미노산인 aspartic acid, glutamic acid, glysine의경우에는간보호효과와알코올대사에관련이있는것으로보고되었고 (Park SC 등, 1993; Hwang JY 등, 2004; Han SM 등, 2019), arginine, aspartic acid 및 glutamic acid는알코올대사관련효소인 ADH와 ALDH 효소활성을촉진시키는작용이있어숙취해소효과와더불어간보호효과도동시에있을것이라고알려져있다 (Lee JH 등, 1999). Methionine 의경우, 일부문헌에서숙취해소에도움이된다고알려진아미노산들과 ADH와 ALDH 활성을비교하는실험에서가장높은활성도를보였다고알려져있다 (Cha JY 등, 2009). 이들중특히, aspartic acid와 alanine은체내에서 asparic acid-malate 순환계에의해 ADH와 ALDH의조효소인 NAD+ 를생성하여효소들의활성을촉진시켜숙취해소에도움을준다고알려져있으며 (Park SC, 1994), aspartic acid와 gulutamic acid는단백질의아연결합부위에활용되며, 아연은 300개이상의효소에활성에필요하기때문에알코올분해효소활성에도관여한다 (McCall 등, 2000). 따라서본연구에서는 17가지의구성아미노산성분중 aspartic acid, arginine, alanine, glutamic acid,

21 glycine, methionine의함량을홍합과 5가지의한약재각각의값과홍합과이를혼합하였을때의값을비교하였다. Aspartic acid, arginine의경우, 신이화 (D), methionine의경우, 모과 (E) 추출물을제외한모든시료에대하여혼합한시료들이증가하는경향을나타내었다. Alanine, glutamic acid, glycine의경우에는모든개별시료들보다혼합한시료가증가하는경향을나타내었다. 특히, 홍합 (A), 칡 (B), 홍합과칡 (G) 복합물과홍합 (A), 진피 (C), 홍합과진피 (H) 복합물에대하여구성아미노산중 aspartic acid, alanine, glutamic acid, glycine, arginine에대하여개별시료들보다혼합한시료들이크게증가하는경향을나타내어 Table 3에표시해놓았다. Table 3을보면 aspartic acid의경우, 홍합 (A), 칡 (B), 진피 (C) 추출물에대하여각각 18.3±0.7, 5.4±0.6, 15.6±0.2 g/100 g의값을나타내었고, 홍합과각시료들을각각혼합한홍합과칡 (G), 홍합과진피 (H) 복합물의경우 40.5±0.7, 41.4±0.6 g/100 g으로유의적으로크게증가했음을알수있었다. Glutamic acid의경우에는홍합 (A), 칡 (B), 진피 (C) 추출물에대하여각각 40.0±1.2, 5.3±0.1, 4.7±0.2 g/100 g의값을나타내었고, 홍합과각시료들을각각혼합한홍합과칡 (G), 홍합과진피 (H) 복합물의경우 90.6±0.6, 100.2±0.6 g/100 g으로유의적으로크게증가했음을알수있었다. Glycine의경우에는홍합 (A), 칡 (B), 진피 (C) 추출물에대하여각각 51.6±2.8, 2.3±0.2, 2.1±0.2 g/100 g의값을나타내었고, 홍합과각시료들을각각혼합한홍합과칡 (G), 홍합과진피 (H) 복합물의경우 112.2±0.9, 80.4±0.5 g/100 g으로증가함을알수있었다. Glutamic acid의경우에는홍합 (A), 칡 (B), 진피 (C) 추출물에대하여각각 40.0±1.2, 5.3±0.1, 4.7±0.2 g/100 g의값을나타내었고, 홍합과각시료들을각각혼합한홍합과칡 (G), 홍합과진피 (H) 복합물의경우 90.6±0.6, 100.2±0.6 g/100 g으로유의적으로크게증가했음을알수있었다. Glycine의경우에는홍합 (A), 칡 (B), 진피 (C) 추출물에대하여각각 51.6±2.8, 2.3±0.2, 2.1±0.2 g/

22 Table 2. Amino acid content of 11 hot water extracts Sample A B C D E F G H I J K Aspartic acid Threonine Serine Glutamic acid Glycine Alanine Cysteine ±0.7 1)f2) ±0.6 h ±0.2 fg ±3.7 a ±0.6 g ±0.3 f ±0.7 c ±0.6 c ±1.3 b ±0.4 d ±0.7 e ±0.5 fg ±0.2 g ±0.2 ef ±0.2 g ±0.1 ef ±1.7 b ±0.2 b ±1.8 a ±0.5 c ±.0.5 ef ±0.3 g ±0 fg ±0.2 de ±0.3 g ±0.2 f ±0.6 b ±0.2 a ±0.6 c ±0.1 c ±1.2 g ±0.1 hi ±0.2 hi ±0.7 f ±1.2 i ±0.2 g ±0.6 b ±0.6 a ±0.6 c ±1.4 d ±2.8 e ±0.2 f ±0.2 g ±0.2 f ±0.4 g ±0.1 f ±0.9 a ±0.5 b ±0.3 c ±0.4 d ±2.1 e ±0.2 fg ±0.3 fg ±0.2 f ±0.5 fg ±0.2 g ±0.8 b ±0.9 a ±1.3 d ±1.5 c ±0.9 a ±0.2 cd ±0.2 f ±0.1 e ±0.2 e ±0 f ±0.2 b ±0.1 bc ±0.1 de ±0.2 e ±2.2 d ±0.9 d ±2.2 a ±3.5 e ±2.0 d ±1.9 c ±0.4 cd Continued

23 Valine Methionine Isoleucine Leucine Tyrosine Phenylalanine Lysine ±0.7 c ±0 f ±0.1 ef ±0.2 d ±0.4 e ±0.1 e ±0.8 a ±0.8 a ±0.1 b ±0.8 b ±0.7 cd ±0.1 e ±0 e ±0 e ±0.2 d ±0.1 d ±0.4 a ±0.2 b ±0.2 b ±0.4 c ±0.6 c ±0.1 c ±0.2 d ±0.1 d ±0.2 d ±0.1 e ±0.2 a ±0.6 a ±0.2 b ±0.2 c ±1.6 c ±0,2 c ±0.1 d ±0.1 d ±0.2 d ±0 d ±0.6 a ±0.6 a ±0.6 b ±0.5 b ±1.2 c ±0.1 d ±0.2 d ±0.1 d ±0.3 e ±0 e ±0.4 a ±0.4 a ±0.7 b ±1.1 b ±0.9 d ±0.2 e ±0.1 e ±0.2 e ±0.5 e ±0.2 e ±0.8 b ±0.4 a ±0.4 b ±0.4 b ±1.1 d ±0.2 ef ±0.1 f ±0.1 e ±0.6 ef ±0 f ±0.6 a ±0.9 a ±0.4 b ±0.8 c ±1.1 b ±0.5 b ±0.5 b ±1.3 b ±1.9 b ±1.6 a ±1.8 bc Continued

24 Histidine Arginine Proline Total ±0.9 c ±0.1 e ±0.1 g ±0.2 d ±0.3 e ±0 g ±0.2 b ±0.7 c ±0.4 a ±0.3 d ±0.6 d ±0.1 e ±0.1 e ±0.2 b ±0.2 e ±0.1 e ±0.3 b ±0.8 a ±0.1 c ±0.2 c ±0.9 g ±0.1 hi ±0.9 d ±0.1 i ±0.6 hi ±0.5 b ±0.8 c ±0.8 a ±0.1 f ±0.9 e ±0.8 f ±3.8 e ±1.4 f ±1.4 f ±3.0 d ±4.1 f ±1.1 f ±6.2 a ±5.5 a ±6.4 b ±2.6 c ±1.0 b ±0.7 c ±20.6 c A, blue mussel; B, arrowroot; C, dried orange peel; D, magnolia; E, quince; F, lonicer aflower; G, blue mussel + arrowroot; H, blue mussel + dried orange peel; I blue mussel + magnolia;, J, blue mussel + quince; K, blue mussel + lonicer aflower 1) 2) Values are mean ± SD. Values are mean of triplicates. Same letter are not significantly different at the 5% level. (p<0.05)

25 g의값을나타내었고, 홍합과각시료들을각각혼합한홍합과칡 (G), 홍합과진피 (H) 복합물의경우 112.2±0.9, 80.4±0.5 g/100 g으로증가함을알수있었다. Glutamic acid의경우에는홍합 (A), 칡 (B), 진피 (C) 추출물에대하여각각 40.0±1.2, 5.3±0.1, 4.7±0.2 g/100 g의값을나타내었고, 홍합과각시료들을각각혼합한홍합과칡 (G), 홍합과진피 (H) 복합물의경우 90.6±0.6, 100.2±0.6 g/100 g으로유의적으로크게증가했음을알수있었다. Glycine의경우에는홍합 (A), 칡 (B), 진피 (C) 추출물에대하여각각 51.6±2.8, 2.3±0.2, 2.1±0.2 g/100 g의값을나타내었고, 홍합과각시료들을각각혼합한홍합과칡 (G), 홍합과진피 (H) 복합물의경우 112.2±0.9, 80.4±0.5 g/100 g으로증가함을알수있었다. Alanine의경우, 홍합 (A), 칡 (B), 진피 (C) 추출물에대하여각각 47.6±2.1, 4.2±0.2, 3.0±0.3 g/100 g의값을나타내었고, 홍합과각시료들을혼합한홍합과칡 (G), 홍합과진피 (H) 복합물의경우, 88.3±0.8, 92.2±0.9 g/100 g으로유의적으로크게증가했음을알수있었다. 마지막으로 arginine의경우홍합 (A), 칡 (B), 진피 (C) 추출물에대하여각각 6.2±0.6, 1.7±0.1, 1.7±0.1 g/100 g의값을나타내었고, 홍합과각시료들을각각혼합한홍합과칡 (G), 홍합과진피 (H) 복합물의경우 14.0±0.3, 21.2±0.8 g/100 g으로유의적으로증가함을알수있었다. 따라서이를종합해보았을때, 홍합과칡 (G), 홍합과진피 (H) 복합물의경우, 숙취해소및간해독작용에도움이되는아미노산들인 aspartic acid, glutamic acid, glycine, alanine, arginine가유의적으로증가하였음을알수있었고, 홍합및 5종의한약재의복합물의아미노산함량의비교하였을경우에는홍합과칡 (G), 홍합과진피 (H) 복합물이유효하게증가하였음을알수있었다

26 Table 3. Amino acid content of 5 hot water extracts Sample A B C G H Aspartic acid Glutamic acid Glycine Alanine Arginine ±0.7 1)e2) ±0.6 f ±0.2 e ±0.7 c ±0.6 c ±1.2 f ±0.1 g ±0.2 g ±0.6 b ±0.6 a ±2.8 d ±0.2 f ±0.2 f ±0.9 a ±0.5 b ±2.1 e ±0.2 fg ±0.3 fg ±0.8 b ±0.9 a ±0.6 d ±0.1 f ±0.1 e ±0.3 b ±0.8 a A, blue mussel; B, arrowroot; C, dried orange peel; G, blue mussel + arrowroot; H, blue mussel + dried orange peel. 1) 2) Values are mean ± SD. Values are mean of triplicates. Same letter are not significantly different at the 5% level. (p<0.05)

27 Ⅳ. 요약 최근숙취의경감을위한다양한연구로부작용이없는천연물을이용한숙취해소효능에대한연구가활발히진행되고있다. 본연구에서는홍합추출물을기본으로하여숙취및간보호, 항염증효과가알려져있는소재들의개별항산화및알코올분해효과를평가하고, 알코올로부터발생되는라디칼을소거하는항산화도및알코올분해가높은소재를복합하여적합한소재를찾고이를토대로한숙취해소음료및식품개발의근거를마련하고자하였다. 시료로는홍합과 5가지의한약재인칡, 진피, 신이화, 모과, 금은화를각각개별적으로열수추출물을제조하였다. 그리고홍합과각한약재들을혼합하여추가적으로열수추출물을제조하였다. 이열수추출물에대하여각시료들의 ADH와 ALDH의활성도를위하여효소분해를통한 NAD+ 의생성을흡광도로측정하여그활성도를비교하였다. 각시료들중특히 B ( 칡 ), H ( 금은화 ) 추출믈은 ADH 활성도가 710.8±5.7%, 697.9±15.5% 의활성도를나타냈고, ALDH 활성도는 ±0.4%, ±10.7% 로써 ADH 활성도는칡 (B), 금은화 (H) 추출물순으로가장높은활성을나타내었고, ALDH 활성도는금은화 (H), 칡 (B) 추출물순으로가장높은활성도를나타내었다. 그러나이최대활성도를보인두시료를홍합과혼합한홍합과칡 (G), 홍합과금은화 (H) 복합물의활성도를비교해보면, 홍합과칡 (G) 복합물의경우에는칡 (B) 추출물과비교하여 ADH, ALDH 활성도가 802.5±9.5%, ±14.5% 로써증가하는것을볼수있지만, 홍합과금은화 (H) 복합물의경우에는금은화 (H) 추출물과비교하여 ADH, ALDH 할성도가 463.3±1.0%, ±33.2% 로감소되었음을볼수있었다. 이밖에도진피 (C) 추출물과홍합과진피 (H) 복합물의경우에는 ADH 값이 354.7±5.9%, 410.9±7.9% 그리고 ALDH 값이

28 1338.3±12.3%, ±18.3% 로증가하는경향을보였지만, 개별적인시료인금은화 (F) 추출물등과비교하여도낮은값을보였으므로 ADH, ALDH 활성도에서는홍합과칡 (G) 복합물이가장높은시너지효과가나오는활성도로기대된다. 각시료들의 ABTS radical 소거능값을살펴보면이들중홍합과진피 (H) 복합물 (0.5357± mm Trolox) 만이개별적추출물인진피 (C) 추출물 (0.5848± mm Trolox) 와비교하여증가함을나타내었다. 기존문헌에따르면항산화활성이높은것으로알려진물질이알코올섭취시신체에유발되는산화스트레스를감소시킬수있기때문에그러한연관성으로숙취해소에도움이된다고알려져있었으나위의실험을종합해보았을때이는상관관계가없다고판단되었다. 각시료들의구성아미노산함량은모든시료들에대하여총아미노산함량은홍합과이들을혼합한복합물이더높은아미노산함량을가짐을알수있었다. 그리고이들중기존문헌에숙취해소및간기능개선에도움이된다고알려진구성아미노산들중 aspartic acid, glutamic acid, glycine, methionine, arginine에대하여개별함량과혼합한함량들을비교하였다. 그결과, methionine을제외한 4가지의아미노산에대하여유의적으로크게증가함을알수있었다. 따라서홍합과 5가지의한약재추출물들에대한개별적인아미노산함량과복합물의아미노산함량을비교하였다. 이들중홍합 (A), 칡 (B), 진피 (C) 추출물과홍합과칡 (G), 홍합과진피 (H) 복합물에대하여 aspartic acid는 5.4± ±0.7 g/100 g보다 40.5± ±0.6 g/100 g으로증가하였고, glutamic acid는 4.7± ±1.2 g/100 g에서 90.6± ±0.6 g/100 g으로증가하였으며, glycine은 2.1± ±2.8 g/100 g에서 80.4± ±0.9 g/100 g로 arginine은 1.7± ±0.6 g/100 g에서 14.0± ±0.8 g/100 g로증가하여아미노산함량을비교하였을때

29 에는홍합과칡 (G), 홍합과진피 (H) 복합물이가장높게증가함을알수있었다. 따라서홍합과 5가지한약재복합물에대한알코올분해효소활성, 항산화활성, 구성아미노산함량을모두비교하여종합해보았을때, 홍합과칡 (G), 홍합과진피 (H) 복합물이시너지효과를보였고, 특히홍합과칡 (G) 복합물에대하여다른모든개별적추출물및복합물들의효소활성과아미노산함량을비교하였을때에도가장높은활성도및함량의증가를보여줬으므로홍합과칡을같이혼합하였을때의숙취해소식품및음료로서의가능성을가장높게기대할수있을것으로사료된다

30 Ⅴ. 참고문헌 Bergmeyer HU. In Methods of Enzymatic Analysis. Academic Press, New York, NY, USA. 1974, 1: Cha JY, Jung HJ, Jeong JJ, Yang HJ, Kim YT, Lee YS. Effects of amino acids on the activities of alcohol metabolizing enzyme alcohol dehydrogenase (ADH) and acetaldehyde dehydrogenase (ALDH). Journal of Life Science, 2009, 19(9): Hwang JY, Ham JW, Nam SH. Effect of maesil (Prunus mume) juice on the alcohol metabolizing enzyme activities. Korean Journal of Food Science and Technology, 2004, 36(2): Keith A, McCall, Chih-chin Huang, Carol A, Fierkel. Function and Mechanism of Zinc Metalloenzymes. The Journal of Nutrition, 2000, 130(5): Kim SK, Ok DL, Park E, Lee SC. Effect of hot water extracts of domestic blue mussel and New Zealand green lipped mussel on alcohol metabolizing enzymes activities, and their DPPH radical scavenging activity and angiotensin converting enzyme inhibitory activities. Journal of Korean Society Food Science and Nutrition, 2014, 49(3):

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34 International Journal of Clincal Pharmacology Research, 2002, 22(1):

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Journal of Life Science 2011, Vol. 21. No μ μ

Journal of Life Science 2011, Vol. 21. No μ μ Journal of Life Science 2011 Vol. 21. No. 8. 1120~1126 ISSN : 1225-9918 DOI : http://dx.doi.org/10.5352/jls.2011.21.8.1120 μ μ μ α β Journal of Life Science 2011, Vol. 21. No. 8 1121 μ μ 1122 생명과학회지 2011,

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Precipitation prediction of numerical analysis for Mg-Al alloys

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