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1 대한한방내과학회지 제34권 1호(2013년 3월) Korean J Orient Int Med 2013:34(1) 蘇木이 산화적 손상 및 과 염증 유관 인자에 미치는 영향 Raw 2647 cell 에서의 HUVEC 강성순 김명신 조재준 최성안 양의호 전상윤 최창원 홍 석 동신대학교 한의과대학 내과학교실 The impact of Caesalpinia Sappan L on Oxidative Damage and Inflammatory Relevant Factor in RAW 2647 Cells and HUVEC Seong-sun Kang Myung-sin Kim Jae-jun Jo Seong-an Choi Eui-ho Yang Sang-yun Jeon Chang-won Choi Soek Hong Dept of Internal Medicine College of Oriental Medicine Dong-Shin University ABSTRACT Objectives : Methods : This study investigated the impact of Caesalpinia sappan L on oxidative damage and inflammatory relevant factor in RAW 2647 cells and human umbilical vein endothelial cells (HUVEC) We determined whether fractionated EtOH extracts of Caesalpinia sappan L () inhibit free radical generation such as 22-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH) reactive oxygen species (ROS) and nitric oxide (NO) and pro-inflammatory Result : cytokines in lipopolysaccharide (LPS)-treated RAW 2647 cells and HUVEC 1 DPPH removal capacity was increased by 2 LPS-induced ROS and NO inhibitory capacity were increased by 3 LPS-induced cell death of Raw 2647 cells was decreased by 4 The amount of cytokine generation in Raw 2647 cell was decreased significantly by Conclusions : 5 The amount of cytokine generation in HUVEC was decreased significantly by These results suggest that supplement may attenuate oxidative stress by elevated antioxidative processes and suppress inflammatory mediator activation Key words : Caesalpinia sappan L Raw 2647 cell HUVEC oxidative stress inflammation cytokine Ⅰ 서 론 1 산화적 손상이란 몸의 항상성을 유지하기 위한 산화 촉진물질과 산화 억제물질간의 균형의 문제 교신저자 홍 석 전남 순천시 이수로 동신대학교 순천한방병원 내과 진료실 : TEL: 이 논문은 년도 동신대학 대학원 한의학 석사학위 논문임 DNA 로 산화가 촉진되어 나타나는 세포에 유해한 작용 을 말하며 이는 노화와 관련이 크며 체내 손상 세포막의 손상 단백질과 지질의 산화 등을 초래해 동맥 경화 및 암 등과 같은 만성질환을 유 발시키는 것으로 알려져 있다 염증은 손상에 대한 조직의 반응으로 생체조직 의 기질변화를 초래하는 침습에 대한 방어기전이 다 이는 대식세포 등의 활성으로 여러 염증인자 의 증가로 나타나는데 정상에서는 항원항체 반응

2 강성순 김명신 조재준 최성안 양의호 전상윤 최창원 홍 석 으로 항원을 제거하는 역할이지만 과활성이 되면 병인으로 작용하여 알레르기 아토피 관절염 심장 병 뇌질환 순환기 장애뿐만 아니라 암 등과 같은 다양한 질환의 원인을 제공하게 된다 최근에는 산화적 손상과 염증 반응을 만성 질환 의 중요한 기전으로 인식하고 있으며 이와 관련된 연구들이 피부 노화 동맥 경화 만성 폐질환 염증성 부인과 질환 만성 염증성 장 질환 등 여러 분야에서 이루어지고 있다 蘇木은 蘇方木 소방목 의 材를 건조한 것으로 活 祛 시켜 消腫止痛 의 작용이 있어 外科의 요약이 되고 또한 婦女의 로 인한 병증에 적용되고 있다 蘇木에 관한 연구에 있어서 임 등 권 등 및 이 의 연구는 항산화 효과에 대한 것이며 정 등 의 연구는 을 이용하여 항염증 효 과에 대한 것이었으나 세포를 이용하여 蘇木의 항 산화 효과 및 에서의 염증 유관인자에 미치는 영 향에 관한 연구는 없었다 본 연구에서는 蘇木을 에탄올 추출하고 그 추출 물을 이용하여 및 에서의 와 에 미치는 영향을 통해 항산화 활 성을 측정하였다 또한 蘇木의 항염증 활성을 조사하기 위하여 과 에 를 처리하여 염증 반응을 유도시켜서 얼마 나 효과적으로 저해할 수 있는지 관찰하였는데 그 지표로서 인 β γ α 생성량을 알아 본 바 유의 한 결과를 얻었기에 보고하는 바이다 (Caesalpinia 心 sappan 血 L: ) 瘀 16 血瘀 RAW 2647 cell umbilical vein endothelial cells (HUVEC) 22-diphenyl-1-picrylhydrazyl(DPPH) RAW 2647 cell reactive oxygen species(ros) nitric oxide(no) RAW 2647 cell HUVEC Lipopolysaccharide (LPS) pro-inflammatory cytokines IL-1 IL-6 INF- MCP-1 TNF- Ⅱ 실험 방법 30 g 80% EtOH 500 ml freeze dryer 25 g( : 83%; (-80 ) ) ( 2 시료 High performance liquid chromatography (HPLC) 패턴 분석 을 에탄올 에 녹여 μ 로 여과 후 이 중 μ 를 시료로 사용하였다 는 사 의 3 membrane mg 1 ml 045 filter 20 HPLC l m HPLC Shimadzu(Japan) system controller(cbm-20a) pump(lc-20ad) column oven(cto-20a) UV/VIS detector(spd-20a) 를 사용하였으며 은 μ 을 사용하였다 이동상은 와 로 을 적용시켜 분 분 분 분 분 로 설정하였다 유속은 이었으며 온도는 를 유지하였 다 는 로 설정하여 분석하 였다 column 5 m) (B) B) ACE 5 C18( mm water(a) acetonitrile gradient elution system 5-10%(20 B) B) %(10 ml/min 5%( %(10 B) B) 20-40%(20 column UV wavelength nm 3 항산화 활성 측정 1) DPPH(22-diphenyl-1-picrylhydrazyl) 소거능 측정 자유라디칼 소거 활성 시험은 안정한 자유라디 칼 를 사용하는 방법으로 에탄올에 용해시 킨 의 용액 μ 와 각 μ μ 를 각각 혼합하고 에서 분간 반응 시킨 후 에서 흡광도 를 측정한 후 아래의 식에 따라 계산하였다 소거능 = 대조군의 흡광도 처리군의 흡광도 대조군의 흡광도 DPPH 02 nm DPPH g/ml) l ( l 517 nm 1 재 료 본 실험에 사용된 소목 蘇木 학명 은 동신대부속 순천한방병원에서 구입 sappan 15 human 하여 정선한 후 사용하였다 蘇木 에 을 넣고 환류 추 출한 후 여과하여 증류장치로 농축하였다 농축액 을 를 이용하여 완전 건조한 다음 얻어 진 분말 수율 이하 이라 칭함 을 냉동 보관 하면서 적당한 농도로 희석하여 사용하였다 : Caesalpinia DPPH (%) - ( ) 100 L) 101

3 μ μ μ μ μ μ μ μ μ μ μ μ μ μ μ μ μ μ α μ μ

4 μ μ μ μ β γ α μ μ

5 μ μ μ μ μ μ μ μ α α

6 α α μ μ μ μ μ β β β β μ μ μ γ γ

7 μ μ μ α α α γ γ μ μ μ α μ μ μ

8

9 β α β α α μ α α β γ α β γ α α

10 강성순 김명신 조재준 최성안 양의호 전상윤 최창원 홍 석 에서의 α 생성 억제 효과를 확인하여 이를 통해 은 세포 내에 생성되는 항산화 및 항염증에 효과가 있을 것으로 사료되며 이를 바탕으로 활성 산소 및 염증성 질 환인 류마티스 관절염 암 등에 효과가 있을 것이 다 그리고 은 뿐만 아니라 사 람의 혈관 내피 세포인 에서의 β γ α 생성억제 효과가 있음을 확 인하였으며 이는 혈관 염증성 질환 등에도 적용할 수 있을 것이다 최근 항산화 및 항염증의 연구가 피부과 산부인 과 심혈관계 호흡기계 등 여러 분야에서 연구가 이루어지고 있으니 蘇木 또한 지속적인 후속 연구 를 통해 여러 방면의 응용도 생각해볼 수 있다 RAW 2647 cell 참고문헌 IL-6 MCP-1 TNF 1 INF- IL 이 가진 소거 활성을 측정한 결과 농도 의존적으로 소거 활성을 증가시켰다 이 로 유도된 의 및 생성 억제를 농도 의존적으로 증가시켰 다 이 로 유도된 의 염증 성분의 생성 억제를 농도 의존적으로 증가시켰으며 특히 μ 에서 유의성 있게 증가시켰다 이 로 유도된 의 염증 성분의 생성 억제를 유의성 있게 증가시켰다 DPPH 2647 cell RAW 2647 LPS 40 HUVEC ; ; 1999 p C Points of control in inflammation 이러한 蘇木의 항산화 및 항염증 효능은 蘇木을 활용한 염증성 질환의 예방 및 면역치료 약물의 개발 가능성을 제시한다 2007;45(2s):203-4 Mouse cell 毒飮 2007;20(3): 박민철 홍승욱 에서 仙方活命 의 항산화작용과 항알러지 및 항염증 효과 대한외 관과학회지 이창현 이효승 김재은 허숙경 차창민 원찬욱 등 혈관내피세포에서 土 笭의 항산화 및 항염 증 효과 대한본초학회지 이효승 허숙경 윤현정 김병완 박선동 마우스 대식세포에서 川楝 의 항산화 및 항염증 효과 대한본초학회지 이효승 허숙경 윤현정 최재우 정재하 박선 동 마우스 대식세포에서 竭의 항산화 및 항 염증 효과 대한본초학회지 곡정강 김진주 노영래 이성헌 정승연 정희재 등 의 항염증 항산화 항노화 작용에 대 한 실험적 연구 대한한방내과학회지 Mouse cell 飮 2008;21(2): 茯 g/ml Cytokine 범희주 은종방 최지영 이승철 이지범 창포의 항산화 활성 및 항균 항염증작용이 피부에 미 치는 영향 대한피부과학회지 이상문 홍승욱 에서 托裏消 의 항산화작용과 항염증 효과 대한외관과학회지 2009;24(3):39-50 子 2008;23(4): : 4 and cell Cytokine periodontitis in pathway for anti-inflammatory drug development LPS and 5 Ludwig JW Richard ML Targeting the secretory ROS NO inflammatory Nature 2002;420(6917): Nathan RAW of HUVEC LPS LPS role mediators 6 RAW 2647 cell The Curr Top Med Chem 2006;6(2): 蘇木의 항산화 효과 및 과 에서 로 유도된 항염증 효과에 대한 연구를 수 행한 결과 다음과 같은 결론을 얻었다 2 E 박광균 구강생화학 서울 군자출판사 3 Nardin 6(1): ;6(4) cardiovascular disease Ann P eriodontol TNF- Ⅴ 결 론 immunological De : RAW 2647 cell HUVEC IL-6 정일민 김광호 안종국 한국 약용 및 식용식물 들의 항산화성 한국약용작물학회지 血 ;23(2): 解熱湯 2007;28(4) 109

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12 α β

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