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Starting Up the System 1. 컴퓨터를켠다. 2. 장비의 main power 스위치를켠다. 3. Flow cell access door 를열고, 사용할 laser 를켠다. - Warming up 시간이 30 분정도소요됨 - Stream 이켜지지않은상태에서는반드시 Flow cell access door 를열어 laser가지나가지못하도록한다. 4. FACSDiva software 를실행한다 5. CST Mismatch 가발생할경우, laser delay, area scaling 을포함한가장최근의최적화된 setting 으로 update 하기위하여 Use CST Settings 를 click 한다. 6. Cytometer window 에서 fluidics level 을확인한다. - 빈 fluids 는채우고 waste 가가득차있으면비워준다. < Refilling sheath containers > (1) Stream 이켜있으면 steam 을끈다. (2) Air line 을분리한다. (3) Pressure relief valve 를당겨 tank 내압력을뺀다. (4) Sheath tank cover 를연다. (5) Buffer 를 tank 내눈금까지넣는다. (6) Cover 를닫고 knob 를조인후, air line 을다시연결한다. (7) 만일 tank 를 fluidics cart 에서내려놓은상태라면다시원위치에놓는다. (8) Air line 을연결시킨다. FACSAria III handout 1/28

Starting Up the System < Emptying the waste tank > (1) Waste tank 의 sensor 와 fluid line 을분리한다. (2) Waste cap 을열고 tank 를비운다. (3) 1L 의 bleach 를채운다. (4) Cap 을닫고, sensor 와 fluid line 을다시연결한다. Waste filter cap 은한달에한번씩교체해준다. - Reading 중 Fluids 가비면, stream 을끄고 refill 후 Prime 을해준다. Cytometer > Cleaning mode > Prime - Sheath filters 에 bubble 이있으면, 제거한다.. 7. FACSDiva program 의우측하단에서 Fluidics Startup 실행여부를확인한다. 실행된경우 Fluidics Startup done 에녹색불이들어온다. 실행되지않은경우 Fluidics Startup done 이검은색으로남아있다. 8. Fluidics Startup 실행되지않은경우, Cytometer > Fluidics Startup 을선택한다. FACSAria III handout 2/28

Starting Up the System 9. Sheath tank 의 line 이제대로연결되어있는지확인한후 Done 을 click 한다. 10. Closed-loop nozzle 을 flow cell 에장착하고, Done 을 click 한다. Fluidics startup 이진행되며완료되면아래와같이 message 를확인할수있다. 11. Start up 이완료되면, closed-loop nozzle 을 flow cell 에서분리하고 Done 을 click 한다. 12. Flow cell 에 sample 에적당한사이즈의 nozzle 을꽂는다. - 적어도 Sample 보다 3배이상큰사이즈의노즐이장착되어있어야한다. (sorting 시에는 6배가적당하다 ) (1) Nozzle 에 O-ring 을 install 한다. (2) O-ring 이올려져있는부분을위쪽으로하여장비에장착한다. (3) Flow cell 에 nozzle 을장착할때끝까지잘들어가도록밀어준다. (4) Nozzle-locking lever 를시계방향으로돌려 12 시위치에오도록한다. 13. OK 를 click 하여 start up 을종료한다. FACSAria III handout 3/28

Optimizing the Breakoff 1. Sort > Sort Setup 을선택한후 nozzle size 와 setup mode 를 matching 한다. 2. Break-off window 에서 drop 의 break off 가위에서중간정도에올수있도록 amplitude slider 를조절한다. 이때 70 volts 를넘지않도록한다. (1) Flow cell에 air bubble이있는지확인하고있다면 stream을끄고 10초간기다렸다가 stream을다시켠다 (2) Sheath pressure와 drop drive frequency가적절한지확인한다. (3) Amplitude가 <10volts 이하면, Side Stream window에서 Attenuation을켠다. 3. Satellite droplet이 6개이하가될수있도록한다. 4. Drop 1 field 에실제 Drop1 value 를기입한다. 5. Drop 의 pattern 이안정화되면 Sweet Spot 을켠다. FACSAria III handout 4/28

Optimizing the Breakoff < Example of break off patterns at each nozzle size > (a) (b) (c) (d) (a) Nozzle 을다시장착한다. (b) Upper camera window 를닦아준다. (c) Nozzle 을다시장착한다. (d) Partial clog 이발생한것이므로 nozzle 을 sonication 후재장착한다. < Example of troubleshooting for stream > FACSAria III handout 5/28

Daily Shutdown < Fluidic Shutdown > 1. Sample 이 unload 된것을확인후 stream 을끈다. 2. Waste container 를확인하고, 필요하면, waste 를비운다. 3. Ethanol shutdown tank 가차있는지확인한다. 4. Cytometer > Fluidics Shutdown 을선택하면아래와같은창이나타난다. 5. Nozzle 을빼고 Done 을 click 한다. 6. Closed-loop nozzle 을 flow cell 에장착하고 Done 을 click 한다. 7. Sheath tank 의 air line 을떼어 EtOH shutdown tank 의 air port 에연결한다. 8. Sheath filter 의윗부분의 fluid line 을떼어 EtOH shutdown tank 의 fluid port 에연결하고 Done 을 click 한다. 9. Sterile, filtered DI water 3ml 이들어있는 tube 를장착하고 Done 을 click 한다. 10. System 을종료해도된다는메시지가나타나면 OK 를 click 한다. 11. Sort block, deflection plates, nozzle 근처의 saline 을 DI water 나 70% ethanol 로제거한다. 12. Sheath tank 의압력을제거한다. 13. Cytometer main power 를끈다. 14. Diva software 를종료하고, 컴퓨터를끈다. FACSAria III handout 6/28

CS&T Beads with BD FACSDiva < Importing Bead Lot Information > 사용하려고하는 CS&T beads 의 Lot ID 를 Cytometer Setup and Tracking workspace 에서찾을수없을경우 Bead Lot information 을 import 해야한다. 1. Cytometer > CST 선택한다. 2. Cytometer Setup and Tracking workspace 에서 Tools>Bead Lots 를선택한다. 3. Bead Lots dialog 에서 Import 를선택한다. - Bead Lots folder가나타난다. - Bead lot이이미 Setup Control window 에존재하면 warning message 가나타난다. - 선택하고자하는 Bead lot 에대한 file 이없다면, lot-specific file 을 download 받아야한다. 4. Bead lot file (ending in bls) 을선택한후, Open 을 click 하면 software 가자동적으로 bead lot information 을보여준다 FACSAria III handout 7/28

CS&T Beads with BD FACSDiva < Downloading a Lot-Specific File > 사용하고자하는 Bead lot 에대한 file 이없다면, lot-specific file 을 download 받 아야한다. 1. 주소창에 bdbiosciences.com/csandt 를입력한다. 2. 화면의우측에서 CS&T Bead Lot Files 를 click 한다. 3. 필요한 file 을선택한후 download 한다. 4. C:\Program Files\BD FACSDiva Software\CST\Bead Lot 에저장한다. < Entering a Bead Lot ID Manually > Non-standard configuration 을사용하거나 tracking features 를사용하지않을것이라면, Bead Lot ID 를 manual 로입력할수있다. 이때 Lot ID number 는 CS&T beads vial 에표기되어있다. 1. Cytometer > CST 를선택한다. 2. Cytometer Setup and Tracking workspace 에서 Tools>Bead Lots 를선택한다. 3. Bead Lots dialog 에서 New 를 click 한다. Software 가 Lot IDs list 에 00000 을추가시키며, message 를나타낸다. 4. 우측의 Part # 와 Lot ID 를입력하는곳에해당내용을입력한다 5. Expiration Date 의 check box 를선택하여 calendar 상에서유효기간을선택한다. FACSAria III handout 8/28

CS&T Beads with BD FACSDiva Define Baseline 1. Sweet Spot 을끈후, Cytometer > CST 선택한다. 아래와같이 CS&T workspace 를확인할수있다. 2. Configuration 이올바로되어있는지확인한다 (BD default 상태 ). 3. 오른쪽 Setup control 에서 Define Baseline 을선택한다. 4. Bead 의 lot ID 를확인한다. 5. CS&T beads 를준비한다. 3 drop CS&T bead/0.5ml sheath buffer 6. CS&T bead tube 를장비에꽂는다. 7. Run 을 click 한다. 6. Tube 가꽂힌것을확인하는메시지가나타나면, OK 를 click 한다. 20분정도소요되며, 끝나면 Cytometer Baseline Report 가생성된다.!! Baseline의유효기간은 6개월이므로 6개월마다시행한다.!! 장비 alignment를시행한경우 Baseline을꼭수행한다.!! Configuration 별로 baseline을수행해야한다. FACSAria III handout 9/28

CS&T Beads with BD FACSDiva Define Baseline < Change Nozzle size and Pressure> 1. Cytometer > View configuration 을선택한다. 2. Configuration tab 에서 Base configuration 을우측 click 하여 new folder 를선택한다. 3. New folder 에 rename 한다. eg) nozzle size 85 um 4. Base configurations 의하단에있는 2-laser, 6-color (4-2) (BD default) 를선택하 여우측 click 하여 Copy 를선택한다. 5. Nozzle size 85um folder 를선택하고우측 click 하여 paste 를선택한다. 6. Copy of 2-laser, 6-color (4-2) 를선택하고우측 click 하여 Edit Configuration 을선택한다. 7. 오른쪽화면에서아래그림과같이 nozzle size 와 sheath pressure 를설정할수있다. 8. 화면하단에있는 OK 를누른다. 9. CST 창의 setup control window 에서 Select configuration 을눌러새로이만든 nozzle size 85 um folder 를선택한다. 10. 화면하단의 set configuration 을누른다. 11. 우측하단에있는 OK 를누른다. FACSAria III handout 10/28

CS&T Beads with BD FACSDiva Check Performance 1. Cytometer > CST 선택한다. Workspace status bar 가아래와같이나타나고, CS&T workspace 가열린다. 2. Configuration 이올바로되어있는지확인한다 (BD default 상태 ). 3. 오른쪽 Setup control 에서 Check Performance 을선택한다. 4. Bead 의 lot ID 를확인한다. 5. CS&T beads 를준비한다. 1 drop CS&T bead/0.35ml sheath buffer 6. CS&T bead tube 를장비에꽂는다. 7. Run 을 click 한다. 8. Tube 가꽂힌것을확인하는메시지가나타나면, OK 를 click 한다. (5 분정도소요된다.) FACSAria III handout 11/28

CS&T Beads with BD FACSDiva Check Performance 9. Tube 를제거하고, dialog 에서 view report 를 click 한다. 10. File > Print 를선택하여 report 를출력하고결과가 pass 인지확인한다. 11. File > Exit 를선택하여 Cytometer Setup and Tracking workspace 를나와 Diva workspace 로돌아간다. CST mismatch dialog 가나타나면, Don t show this message again checkbox 를 check 하고 Use CST setting 을 click 한다. FACSDiva 에서 CS&T setting 이적용된 cytometer setting 은아래와같이구분된다. FACSAria III handout 12/28

Setting Up the Experiment 1. 원하는 Sheath Pressure 로바꾼다. (eg. medium pressure 로 6 micron beads 의 four way sort). (1) Sort > Sort Setup > 원하는 mode 선택한다. (2) Breakoff 를 amplitude 를조절하여최적화시킨다. 필요하다면 frequency 를조절한다. (3) Cytometer > CST 를선택한다. (4) Select Configuration 을 click 한다. (5) 사용할 configuration 을선택하고 Set 을 click 한다. (6) Performance check 를 run 한다. (7) Cytometer Setup and Tracking 에서나온후, mismatch dialog 가나타난다면 User CST Settings 를 click 한다. 2. Sweet Spot 을 setting 한다. (1) Breakoff window 에서 Drop 1 value 와 matching 하여기입한다. (2) Sweet Spot 을켠다 3. Workspace 를준비한다. (1) Edit > User preferences 에서필요한사항을선택한다. Gates tab에서 Interval Gate 를위한 Has Color 를, Quadrant Gates 를위한 Different color for each quadrant 를선택한다. (2) Browser 에서필요한 experiment folder 를선택한다. (3) Browser toolbar 에서 New Experiment button 을 click 하여 Blank experiment 를만들고원하는이름으로 experiment 를 rename 한다 (4). Browser 에서 Global Sheet 1 을 right-click 하여 Apply Analysis Template 를선택한다. (5) Doublet Discrimination Gating worksheet 를선택하고 Ok 를 click 한다. FACSAria III handout 13/28

Setting Up the Experiment 4. Cytometer settings 이적절한지확인한다. (1) Browser 에서 Experiment 하단의 Cytometer setting 을선택하여 Cytometer 또는 Inspector frame 에서 parameter 를확인하여불필요한항목을삭제하거나필요한항목을추가한다. (2) Compensation Controls 를생성한다. - Experiment > Compensation Setup > Create Compensation Controls 를선택한다. - Create Compensation Controls dialog 를확인한후 OK 를 click 한다. (3) FSC, SSC setting 을적절히조절한다. - Unstained Control tube를 loading 한다. - FSC, SSC voltage를조절하여원하는 population 을원하는위치에오도록한다. (4) Threshold setting 을적절히조절한다. - Debris를가능한배제할수있도록 FSC threshold 를조절한다. (5) 원하는 population 에 gating 한다. - 원하는 population 에 P1 gate 를가져다놓고 right-click 하여 Apply to all Compensation Tubes 를선택한다. - 각 single color control tubes 를 recording 한다. FACSAria III handout 14/28

Setting Up the Experiment (6) Compensation 을 calculation 한다. - 각 compensation worksheet tab 을선택하여 snap-to interval gate 가 positive population 에되어있는지확인한다. 필요하다면위치를변경한다. - Experiment > Compensation Setup > Calculate Compensation 을선택한다. - Compensation setup dialog가나타나면 name 란에기입하고 Link&Save 를 click 한다. 5. Pre-sort data 를저장한다. (1) Speicmen_001 을 Sort Specimen 으로 rename 한다.. (2) Tube_001 을 click 하고 Pre Sort로 rename 한다. (3) Dashboard 에서 Next Tube 를 4번 click 하여 new tube 를만든다. (4) PreSort_001 tube 를 Post Sort Far Left 로 rename 한다. (5) 나머지 tube 에대한 name 을아래와같이바꾼다 (6) Experiment > Experiment Layout 을선택하고 Acquisition tab 에서 Pre Sort tube 에 10,000events, Post Sort tubes 에 2,500events 를기입한후 OK 를 click 한다.. FACSAria III handout 15/28

Setting Up the Experiment (7) Worksheet view button 을 click 하여 global worksheet 가보이도록하고 DD Gating global worksheet 가 worksheet window 에 display 되는것을확인한다. (8) Dashboard 에서 Flow Rate 를 1.0 으로하고 current tube pointer 가 Pre Sort tube 에오도록한다. (9) Sort sample tube 를 loading 한후 Dashboard 에서 Record Data 를 click 한다. (10) 모든 events 를저장한뒤 Dashoboard 에서 Unload 를 click 한다. 6. Sort gate 를생성, 조정한다. (1) Singlet population 에제대로 Gate 가위치하도록 Scatter Gate, SSC Gate, FSC Gate 의위치를확인하고필요하다면위치를조정한다. (2) FITC vs PE, PerCP-Cy5.5 vs APC dot plot 두개를그린다. (3) 그려진두개의 dot plot 을선택한후 right-click 하여 Show Populations > FSC gate 를선택한다. (4) FITC vs PE plot 에 quadrant gate 를, PerCP-Cy5.5 vs APC plot 에 PerCP- Cy5.5 축을기준으로 interval gate 를, APC 축을기준으로 Rectangle gate 를그린다. (5) Population hierarchy 에서각 defined population 을 rename 을한다. FACSAria III handout 16/28

Sorting 1. Side Streams 을최적화시킨다. (1) Four-way 1mL collection device 를장착한다. - Flow cell access door 를연다 - Sort collection chamber door를연다 - Tube holder를장착하기전에, O-ring 이올려져있는지확인한다. - Holder에 1mL tube 4 개를끼운상태로장착한다. - Sort collection chamber door를닫는다. (2) Deflection plates 를켠다. (3) Test Sort 를켠다. (4) Micrometer dial 을조절하여 stream view 가더좋아지도록한다. (5) 필요하다면 2 nd, 3 rd, 4 th Drop setting을조절하여 center stream, side stream 이깨끗하게나올수있도록한다. <Unadjusted side streams> FACSAria III handout 17/28

Sorting (6) Side Stream window 에서네개의 side stream 을확인한다. (7) Waste Drawer button ( ) 를 click 하여 drawer 를연다 (8) Sort block door 를열고 side stream 이각 tube 로들어가는지확인한다. 필요하다면 side stream slider 를이용하여 side stream 이 tube 로들어가도록한다. (9) Sort block door 를닫고 waste drawer button 을 click 하여 drawer 를닫는다. (10) Voltage control 을 click 하여 deflection plate( ) 를끈다. (11) Collection device 를제거하고 wet tube 를제거한다. 2. Accudrop 을이용한 Drop Delay setting 을실시한다. (1) Accudrop Drop Delay experiment 를열고 Sort Layout 을연다. (2) Current tube pointer 를 Tube_001 에둔다 (3) Accudrop beads 2 drops / 0.5mL PBS tube 를준비하여 loading 한다. (4) Cytometer window 의 Laser tab 에서 window extension 을 0 으로한다. (5) Event rate 가 3,000-4,000 events/sec 이되도록 flow rate 를조절한다. (6) Side Stream window 에서 Voltage 를켠다. FACSAria III handout 18/28

Sorting (7) Sort layout 에서 precision mode 이 Initial 으로되어있는지확인한다. (8) Sort Layout view 에서 Sort 를 click 한다. (9) 아래와같은 dialog 가나타나면 Cancel 을 click 한다. (10)Side Stream window 에서 Optical filter button( ) 을 click 한다. (11)Center steam spot 이가장밝게나오도록 micrometer dial 을조절한다. (12)Left side steam 이 100% 가까이되도록 Drop delay 을조절한다. (Ctrl-Click arrow control) Delay를바꾼후에는몇초간기다려야한다 (13)Sort layout view 에서 precision mode 를 fine turn 으로바꾼다. (14)Drop delay 를 0.1 씩조절해 left side steam 이 90% 이상이되도록한다. (Click arrow control) (15)Deflection plate 를끈다. (16)Optical filter 를 click 하고, window extension 을원래값으로바꾼다 (Typically, 2). (17) Accudrop tube 를 unloading 한다. 아래와같은 dialog 가나타나면 Cancel 을 click 한다. FACSAria III handout 19/28

Sorting <Using Auto Drop Delay> - Manual 과동일하게 drop delay 를위한 experiment 를만든다. - Accudrop bead tube 를 load 한다. - Flow rate 를조절한다. 70 micron : 1,000 ~ 3,000 85 micron : 800 ~ 2,000 100 micron : 600 ~ 1,500 130 micron : 400 ~ 1,200 - Side Stream window 에서 voltage 를켜고, Sort Layout window 에서 Sort 를 click 한다. - Confirm dialog 에서 cancel 을 click 한다. - Center stream 의 bead spot 이밝게나타나게 micrometer dial 을조절한다. - Side Stream window 에서 Auto Delay button 을 click 한다. - Auto Drop Delay dialog 에서 Start Run 을선택한다. - 완료메시지를확인한다. 3. Sort layout 을 setting 한다. (1) 미리준비했던 experiment 를열고 sort layout 을새로만든다. (2) Sort Layout view 에서 Device 로 4-tube 를선택하고, Precision mode 로 4- way Purity, collection tube 에각 sort population 을선택한다. 4. Sort 를시작하고 monitoring 한다. (1) Sort collection chamber door 를열고 4-way 1ml sort collection device 에 collection tube 를꽂은후장착한다. (2) Falcon filter cap tube 를이용하여 sample 을 filtering, mixing 해준다. (3) Current tube pointer 를 P sot-sort Far Left tube 에오도록한다. (4) Mixed sample 을 loading 한다. FACSAria III handout 20/28

Sorting (5) Flow rate 를적절히조절한다. (6) Sort Layout 에서 Sort button 을 click 한후 confirm dialog 에서 OK 를 click 한다.. (7) Sort layout view 에서 sorting progress 를 monitoring 한다. *Sort Rate : Sort criteria에합당하여초당 sorting 되는 event 수 *Conflict count : Sort criteria에합당하나 conflicts 로인해 sorting 되지못하는 event 수 *Conflict Rate : 초당발생되는 conflicts 의수 *Efficiency: FACSAria III handout 21/28

Sorting into a Plate or Slide 1. Aspirator drawer 아래에 splash shield 를장착한다. 2. Access stage button 을 click 하여 ACDU stage 를앞으로빼낸다. 3. Collection device 를장착한다. 4. Deflection plate 를켠다. 5. Test sort 를켜고, side stream (far left) 을맞춘다. Test sort 를끈다. 6. Sort > home device 7. Collection device 를선택하고, Go to home 을 click 한다. FACSAria III handout 22/28

Sorting into a Plate or Slide 8. Test sort 를 double click 하여 drop 이떨어지는위치를확인한다. 9. Home location 을맞춘다. 10. Set home 을 click 하고, 창을닫는다. 11. Voltage control 을 click 하여 deflection plate 를끈다. 12. Drop delay 를맞추고, sorting 한다. Plate에 sorting 진행할경우, A1 A12, B1 B12 의방향으로진행된다. Slide 에 sorting 진행할경우, 아래그림과같이진행된다. < Custom Device > 1. Sort > custom devices 2. Custom device dialog box 에서 Add button 을 click 한다. 3. 이름을입력한다. 4. Row 와 column 수를입력한다. (60 rows, 25 columns 가능 ) FACSAria III handout 23/28

Sorting into a Plate or Slide 5. Arrow 키, test sort button 을이용하여, home location 을찾아 set home 을 click 한다. 6. 같은방법으로 Furthest location 을찾아 set farthest 를 click 한다. 7, Apply 를 click 하고창을닫는다. 8. Voltage control 을 click 하여 deflection plate 를끈다. 9. Drop delay 를맞추고 sorting 을한다. Maintenance Cleaning Modes < Sample line Backflush > Adherent cell 이나 dye 를사용후 sample carryover 가있을시수행한다. 1. Cytometer > Cleaning modes > Sample line backflush 2. Start 를 click 한다. 3. Backflush 를중단하기위해 Stop 을 click 한다. < Clean Flow Cell > Scatter signal 이많이변형된듯이나타나거나 CV 가높게발생할시수행한다. 1. Cytometer > Cleaning modes > Clean flow cell 2. Filtered DI water 가담긴 tube 를 install 하고 OK 를 click 한다. < Prime After Tank Refill > Tank 를 refill 했을때, filter 에서 manual 로 air 를제거할수없을때시행한다. 1. Laser 와 steam 을끄고 Cytometer > Cleaning Modes > Prime After Tank Refill 2. 다시채운 tank 를선택하고, OK 를 click 한다. 4. Cleaning 이끝나면 OK 를 Click 한다. FACSAria III handout 24/28

Maintenance Cleaning Modes < Prepare for Aseptic Sort > Aseptic sorting 을수행하기전또는장기간장비를사용하지않을경우시행한다. 1. Fluid cart 의모든 fluid level 이적당한지확인한다. 2. Laser 와 stream 이켜져있으면모두끈다. 3. Cytometer > Cleaning Modes > Prepare for Aseptic Sort 를선택한다. Dialog 가발생하면순서대로진행한다. (1) Closed-loop nozzle 을꽂고 Done 을 click 한다. (2) DI water port 의 fluid line 을빼고 bleach fluid line 을 DI water port 에꽂고 Done 을 click 한다. (3) Bleach fluid line 과 DI water fluid line 을원위치하고 Done 을 click 한다. (4) Sheath tank 의 fluid line 을떼어 fluidics cart 옆면의 fluid out port 에 연결하고 Done 을 click 한다. (20 분정도소요된다 ) (5) Sheath fluid line 을다시떼어새 sheath filter 와연결한다. (6) 사용하던 sheath filter 를제거하고 sterilized sheath tank 의 liquid port 에새 filter 를연결한다. (7) 과정을마치면아래의두가지 option 중한가지를선택한다. FACSAria III handout 25/28

Option Aerosol Filter hold-down Tubing ULPA filter (0.01 μm ) Membrane panel Flow gauge 1. Aspiration drawer 밑에사용할 holder 를설치한다. 2. Sort collection chamber door 에 air filter 가꽂혀있는지확인한다. 3. Sort collection chamber door 를닫는다. 4. Aerosol 뒤의 main power switch 를켠다. 5. Membrane panel 에서 POWER button 을누른다.!! New ULPA filter 인경우사용하기전 membrane panel 에서 Life Reset button을 5-10 초간눌러 reset 을해준다. 6. Up/Down arrow button 을이용하여 suction control rate 를 20% 로설정한다. 20% 이상으로설정하면, side stream 의 stability 에영향을줄수있다. 7. Filter flow gauge 가 2.4 이하인지확인한다. Suction control rate 가 20% 이면서 gauge 가 2.4 이상이면 filter 를교체해준다. 8. Sorting 이끝난후 arrow button 을조절하여 suction 을 100% 로올린다. 9. 30 초정도 evacuation 을진행시킨다. 10. Membrane panel 에서 power button 을눌러 standby 상태로한다. 11. Sort collection chamber door 를열어 sorted sample 을확인한다. 12. Main power switch 를끈다. FACSAria III handout 26/28

Data Management < Exporting FCS Files > 1. Export 할 experiment, specimen 또는 tube 를선택한다. 2. File > Export > Export FCS 를선택한다. 3. Gated event 에서옮길 event 를정하고 FCS file 의 version 을선택한다. 4. OK 를 click 한다. 5. 저장할위치를정한다. 6. Save 를 click 한다. 7. 이동된파일의위치를확인한다. < Exporting Experiments > 1. Browser 에서옮길 experiment 를선택한다. 2. File > Export > Experiments Delete experiment 를선택하면, 지정된 experiment 는 browser 에서삭제된다. 3. 저장할위치를정한다. 4. OK 를 click 한다. FACSAria III handout 27/28

Data Management < Importing FCS Files > 1. Browser 에서파일을옮겨놓을 experiment 를열거나새로만든다.. 2. File > Import > FCS file 을선택한다. 3. 옮겨올 file 을찾아 Import 를 click 한다. < Importing Experiment > 1. Browser 에서 folder 를선택한다. 2. File > Import > Experiments 3. 가지고올 experiment 를찾는다. 4. Import 를 click 한다. 5. Browser 에서 experiment 가옮겨져왔는지확인한다. < Using the Data Manager Utility > 1. FACSDiva software 가사용중이라면종료한다. 2. Desktop 의 data Manager 의바로가기 icon 을 double-click 한다. 3. 아래와같은화면이나오면원하는 tab 을선택한다. 4. Directory 를정한다. 5. Backup ( 또는 Restore) click 한다. FACSAria III handout 28/28