fm

pissn 1229-1153 / eissn 2465-9223 J. Fd Hyg. Saf. Vl. 32, N. 2, pp. 129~134 (2017) https://di.rg/10.13103/jfhs.2017.32.2.129 Jurnal f Fd Hygiene and Safety Available nline at http://www.fdhygiene.r.kr 국내유통중인생닭및닭가공품에서병원성대장균의분리및특성 조용선 1 * 이다연 1 김희언 1 이명기 2 이주영 1 1 한국식품연구원식품분석센터, 2 한국식품연구원전통식품연구센터 Prevalence and Characterizatin f Diarrheagenic Escherichia cli Islated frm Raw Chicken and Chilled Chicken in Krea Yng-Sun Ch 1 *, Da-Yen Lee 1, Hee-En Kim 1, Myung-Ki Lee 2, and J-Yung Lee 1 1 Fd Analysis Center, Krea Fd Research Institute, Gyenggi, Krea 2 Traditinal Fd Research Grup, Krea Fd Research Institute, Gyenggi, Krea (Received January 13, 2017/Revised January 28, 2017/Accepted February 15, 2017) ABSTRACT - Diarrheagenic Escherichia cli is nw recgnized as an imprtant cause f diarrhea, hemrrhagic clitis and hemlytic-uremic syndrme (HUS) wrldwide. E. cli were islated frm 80 f 356 (22.5%) chicken and chilled chicken prducts in Krea. Fifteen virulence genes specific fr pathgenic E. cli, including Shiga txin-prducing E. cli (STEC), enterpathgenic E. cli (EPEC), entertxigenic E. cli (ETEC), enterinvasive E. cli (EIEC) and enteraggregative E. cli (EAEC), were examined by multiplex PCR. STEC virulence markers were detected fr eaea (20.0%), escv (21.3%), stx1 (3.8%), ent (2.5%), EHEC-hly (1.3%), stx2 (1.3%), EAEC virulence marker (asta) was detected in 32.5%. ETEC and EIEC were nt detected. STEC sertypes O152, O1, O116, O26, O25, O119 and O153 were fund in chicken samples. This suggests the imprtance f diarrheagenic Escherichia cli cntrl in raw chicken and chilled chicken fd fr fd safety. Key wrds : Diarrheagenic Escherichia cli, Prevalence, Chicken, Multiplex PCR, STEC O-sergrup 병원성대장균 (Pathgenic Escherichia cli) 는전세계적으로식중독을발생시키는중요한병원균으로알려져있다. 인간에게감염되면심한설사증상을일으키며특히개발도상국에서유아사망률이높아공중보건의문제로대두되고있다 1). 병원성대장균은병원성을일으키는독성원인에따라구분이된다 : 시가독소생성대장균 (Shiga txinprducing E. cli: STEC), 장독소형대장균 (Entertxigenic E. cli: ETEC), 장병원성대장균 (Enterpathgenic E. cli: EPEC), 장출혈성대장균 (Enterhemrrhagic E. cli: EHEC), enterinvasive E. cli (EIEC), 장부착성대장균 (enteraggregative E. cli: EAEC) 2,3). STEC는 stx1 또는 stx2 유전자변이에의해 shiga txin 을생성하며, 장부착유전자인 eae를수반하기도한다. 때로는 enterhemlysin (EHEC-hly) 유전자에의해서추가적인독성을지니기도한다 4). STEC는급성대장염이나용 *Crrespndence t: Yng-Sun Ch, Krea Fd Research Institute, 516 Baekhyen-dng Bundang-gu, Sengnam-si Gyenggid 13539, Krea Tel: 82-31-780-9242, Fax: 82-31-780-9280 E-mail: ysch@kfri.re.kr 혈성요독성증후군을일으키며 (HUS) 소아에게급성신부전증을발생시킨다. STEC 중 EHEC는 30개국이상에서사람에게식중독이발병한보고가있으며, 한국에서도 2012년 1,844명에게 31건이발생하였으며 2015년에는 2,138 명에게 38건이발병하여꾸준히증가하고있다 5). ETEC는여행자설사와소아설사로주로개발도상국가의설사질환의원인균으로, 설사의중요한원인은 heat-labile (LT) 과 heat-stable (ST) entertxins으로발병한다 6). EPEC는 HeLa 세포나 HEp-2세포에부착성을나타낸다. 이러한성상은 fimbria가 HEp-2 세포에달라붙는성질로다른 E. cli와감별되며 adherence (EAF) plasmid에의해생성되고장점막상피세포에달라붙는 Attaching-and-Effacing (AE) 부착인자는염색체유전자 (eaea) 에의해조절된다 7). 주로분변에의해서전이되며개발도상국에서는유아의혈변의주요한원인이며선진국에서도유아의설사를빈번하게일으킨다. EIEC는 Shigella와유사하며심한경우수양성 8) 설사와이질을유발하며전이는오염된식품이나물을통해서유발된다. EAEC는전형적인부착패턴을보이며 9) 장독소형 ETEC의내열성독소 (Heat-stable txin: ST) 와유사한특성을가지는 Enteraggregative Escherichia cli 129

130 Yng-Sun Ch, Da-Yen Lee, Hee-En Kim, Myung-Ki Lee, and J-Yung Lee heat-stable entertxin 1 (EAST1) 을확인보고하였다. 후속연구에서 38개의아미노산으로구성된 EAST1가 EAEC뿐만아니라장독소형 ETEC, EPEC에서도발견됨으로써식중독을일으키는대장균의주요한병원성인자로주목받고있다 10). 대장균의혈청형은 50,000종이상으로많으나, 전세계적으로는 O26, O103, O111, O145, O157: H7의 O 혈청형으로부터유래된 STEC에의한식중독사고는매우빈번하게발생한다고보고되고있으며, 공중보건학적으로중요한병원성균주로고려된다. 국내연구에는식 11) 육에서분리된대장균에대한병원성특성대한연구결과는있으나, 생닭및가공조리된식품에서분리된대장균에대한병원성특성에대한연구는미흡한실정이다. 또한우리나라병원성대장균식중독의경우환자에서의규명비율은높은반면에식품에서원인규명비율은낮은것이문제점으로지적되고있다 12). 따라서본연구는유통중인생닭및가열조리된닭가공품에서병원성대장균의오염도를조사하고병원성유전자및혈청형을분석하여병원성대장균의특성을파악하고자하였다. 이러한결과는병원성대장균에의한식중독발생의원인파악의 기초자료로활용될수있다고생각된다. Cllectin f samples Materials and Methds 생닭 (N = 132) 및가열조리된닭가공품 (N = 224) 를슈퍼마켓이나대형유통매장에유통중인시료를구입하였다. 구입된시료는교차오염을방지하기위해멸균백에담아냉장운반하였으며구입후 4시간이내시험을실시하였다. Strain islatin and identificatin 대장균은 Bacterilgical Analytical Manual 및식품공 13) 전시험방법으로분리하였다. 시료 25 g에 225 ml f 14) mtsb brth (Difc, Detrit, MI., USA) 증균배지를가해서 stmacher (400 Circulatr, Seward, Lndn, UK) 로 260 rpm, 1 min 균질화한후배양하였다. 배양액은 37 C에서 18~24 h 배양한후 end agar (Merck, Darmstadt, Germany) 와 CHROM agar STEC (CHROMagar, Paris, France) 에 37 C에서 18 h 배양하였다. 배양후전형적인집락을선별 Table 1. Olignucletide primers used fr detectin f the virulence genes 1) Pathgen grup Target gene Primer bp eaea eae-f: TCAATGCAGTTCCGTTATCAGTT eae-r: GTAAAGTCCGTTACCCCAACCTG 482 STEC, EPEC escv MP3-escV-F: ATTCTGGCTCTCTTCTTCTTTATGGCTG MP3-escV-R: CGTCCCCTTTTACAAACTTCATCGC 544 ent ent-f: TGGGCTAAAAGAAGACACACTG ent-r: CAAGCATCCTGATTATCTCACC 629 EHEC-hly hlyehec-f: TTCTGGGAAACAGTGACGCACATA hlyehec-r: TCACCGATCTTCTCATCCCAATG 688 EHEC stx1 MP4-stx1A-F: CGATGTTACGGTTTGTTACTGTGACAGC MP4-stx1A-R: AATGCCACGCTTCCCAGAATTG 244 stx2 MP3-stx2A-F:GTTTTGACCATCTTCGTCTGATTATTGAG MP3-stx2A- R: AGCGTAAGGCTTCTGCTGTGAC 324 EIEC ipah inve ipah-f: GAAAACCCTCCTGGTCCATCAGG ipah-r: GCCGGTCAGCCACCCTCTGAGAGTAC MP2-invE-F: CGATAGATGGCGAGAAATTATATCCCG MP2-invE-R: CGATCAAGAATCCCTAACAGAAGAATCAC 437 766 aggr MP2-aggR-F: ACGCAGAGTTGCCTGATAAAG MP2-aggR-R: AATACAGAATCGTCAGCATCAGC 400 EAEC pic MP2-pic-F: AGCCGTTTCCGCAGAAGCC MP2-pic-R: AAATGTCAGTGAACCGACGATTGG 1111 asta MP2-astA-F: TGCCATCAACACAGTATATCCG MP2-astA-R: ACGGCTTTGTAGTCCTTCCAT 102 ETEC elt estib MP2-LT-F: GAACAGGAGGTTTCTGCGTTAGGTG MP2-LT-R: CTTTCAATGGCTTTTTTTTGGGAGTC MP2-STI-F: TGTCTTTTTCACCTTTCGCTC MP2-STI-R: CGGTACAAGCAGGATTACAACAC 655 171 16s rrna uida MP2-uidA-F: ATGCCAGTCCAGCGTTTTTGC MP2-uidA-R:AAAGTGTGGGTCAATAATCAGGAAGTG 1487

Prevalence and Characterizatin f Diarrheagenic Escherichia cli Islated frm Raw Chicken and Chilled Chicken in Krea 131 하여 Vitek 2 (Bimeriux, Marcy L'Etile, France) 를이용하여생화학시험후동정하였다. PCR assays fr detectin f diarrheagenic E. cli 분리한대장균에대해서독성유전자존재를분석하였다. 독성유전자는 1) uida, inve, escv, aggr, stx1, 2) eaea, elt, ipah, stx2, estib, 3) pic, EHEC-hly, ent, asta 로 tgradient PCR (Bimetra, Gettingen, Germany) multiplex PCR을이용하였다. Primer는 Bineer (Chengwn, Chungbuk, Krea) 에서구입하였고 sequence는 Table 1과같다. 1) PCR은총반응액 20 µl으로 accupwer multiplex PCR pre mix (Bineer, Daejn, Krea) 에 1U의 taq plymerase 250 µm, 각각 dntps, 10 mm Tris-HCl, 1.5 mm MgCl 2, 2-10 pml의 primer로하였으며단일집락을 PCR template로사용하였다. PCR 반응은 98 C에서 30초반응후에 98 C 에서 30초, 63 C에서 60초, 72 C에서 90초, 35 cycle 반응 후 72 C에서 10분연장시켰다. 반응산물은 2% Seakem agarse gel (Takara, Kyt, Japan) 에서 100 V, 25분전기영동후 ethidium brmide (1 µg/ml) 염색후확인하였다. Sertyping f shiga txin-prducing E. cli STEC를분석하기위해 E. cli Antigen grup O sera (Denka Seiken, Tky, Japan) 을사용하였고분석방법은 O antigen의응집반응을 slide에서확인하였다. 기타시험방법은제조사의메뉴얼에따라분석하였다. Shiga txin-prducing E. cli (STEC) 의혈청학적검사를위해 O26, O157, O145, O111, O121, O103, O91의혈청형에대해 rfb (-specific plysaccharide), wzx (-unit flippase), wbsd (amintransferase) 의 -항원유전자에특이 적으로결합하는 primer를사용하였다 (Table 2). PCR 15,16) 반응액은 1 U Taq plymerase, 250 µm 각 dntps, 10 mm Tris-HCl, 30 mm KCl, 1.5 mm MgCl 2 가포함된 reactin buffer (AccuPwer PCR Pre mix, Bineer Daejn, Krea) 에 10 pml의 primer에순수분리된단일 clny를 template 로총반응액을 20 µl로하였다. PCR 반응조건은 predenaturatin 94 C에서 5분후, 35cycles의 94 C에서 30초, 55 C에서 75초, 68 C에서 75초로반응하였고최종 extensin 은 68 C에서 7분반응시켰다. 증폭된 DNA는 2% agarse gel (Takara, Kyt, Japan) 을 100 V로 30분간전기영동후 ethidium brmide (1 µg/ml) 에염색하여 UV transilluminatr 로확인하였다. Results and Discussin Prevalence f E. cli islates 생닭과조리된닭가공품 356시료에서대장균 80균주 (22.5%) 가분리되었다. 생닭에서는 132시료중 79(59.8%) 개의대장균이분리되었으며가열조리된닭가공품에서는 224시료중 1(0.4%) 개에서만대장균이검출되었다. Zha 등에의하면 retail market에서수집한닭에서의대장균 17) 검출은 38.7% 였으며, supermarket에서수집한시료에서는 20.9% 가검출되었으며, Chi 등 10) 에의하면 29.6% 의대장균이검출되었다. 본연구결과생닭에서의대장균검출률은 59.8% 로선행연구보다높게검출되었다. 대장균의경우유통과정중다양한경로의해교차오염이될수있으므로완전포장되어유통되지않고, 구매자의요구에따라포장판매가되거나절단이되는경우는대장균이교차오염에의해검출될수있다. 이러한이유로논 Table 2. Olignucletide primer used varius E. cli sergrups Pathgen Target gene (bp) Primer (5'-3') Reference O26 wzx (152) O157 rfbe (259) O145 wzx (374) O111 rfb (406) O121 wzx (587) O103 wzx (1,117) O91 wbsd (940) GCG CTG CAA TTG CTT ATG TA TTT CCC CGC AAT TTA TTC AG CGG ACA TCC ATG TGA TAT GG TTG CCT ATG TAC AGC TAA TCC TGC TCG ACT TTT ACC ATC AAC AAC CAA CAC CAT ACA CCT TGT CTT TAG AGA AAT TAT CAA GTT AGT TCC ATA GTT ATG AAC ATC TTG TTT AGC TCA TTA GCG GTA GCG AAA GG TTC TGC ATC ACC AGT CCA GA TTC ATC ACA AGT TTC ACA AG CGT AAT CAC CTT GAT TTT CT GAT GAA TCA ACC TTA TCG AG CTG CTT ATG TAT AGG AAT TGG Paddck et al. [16] Paddck et al. [16]

132 Yng-Sun Ch, Da-Yen Lee, Hee-En Kim, Myung-Ki Lee, and J-Yung Lee Table 3. Prevalence f virulence gene factrs amng 80 E. cli islated frm chicken fds Pathgrup Target gene Samples cntaminated N. % STEC, EPEC eaea 16 20.0 escv 17 21.3 ent 2 2.5 Typical EPEC bfpb 0 0.0 EHEC EHEC-hly 1 1.3 stx1 3 3.8 stx2 1 1.3 EIEC ipah 0 0.0 inve 0 0.0 EAEC aggr 0 0.0 pic 0 0.0 asta 26 32.5 ETEC elt 0 2.5 estia 0 0.0 estib 0 0.0 E. cli uida 74 92.5 Table 4. Prevalence f diarrheagenic E. cli in chicken fds Pathgrup Sample cntaminated N. % STEC, EPEC 13 16.3 Typical EPEC 0 0.0 EHEC 4 5.0 EIEC 0 0.0 EAEC 20 25.0 ETEC 0 0.0 EHC+EAEC 1 1.3 STEC+EAEC 7 8.8 Ttal 45 56.3 문에따라대장균검출률의차이가있는것으로생각된다. 그러나대장균은위생지표세균으로생닭의경우는충분히가열조리해야안전하게섭취할수있을것으로생각된다. Virulence genes and sertyping f E. cli islates 시료에서분리한대장균 80균주에대해서병원성유전자를분석한결과 asta 유전자가 26균주 (32.5%) 에서검출되었으며, escv 유전자는 17균주 (21.3%) eaea 유전자는 16 균주 (20.0%) 검출되었다. 특히식품에서문제가되는장출혈성대장균유전자 stx1는 3균주 (3.8%) 와 stx2, EHEChly는각 1균주 (1.3%) 로검출되었다 (Table 3). 병원성유전자를토대로 STEC, EPEC, EHEC, EIEC r EAEC의병원성대장균으로분류한결과대장균 80균주 Table 5. O sertyping f islated EHEC Sample Pathgrup Virulence genes Sertype f PCR Sertype f O antigen chicken EHEC stx1 ND* O152 chicken EHEC stx1 ND* O1 chicken EHEC EHEC-hly ND* O166 chicken STEC/EPEC escv O26 O26 chicken STEC/EPEC eaea ND* O25 chicken STEC/EPEC escv ND* O119 chicken STEC/EAEC eaea, asta ND* O153 ND*: Nt detected 에서병원성대장균45균주 (56.3%) 분리되었다 (Table 4). 이중 nly EAEC는 20균주 (25.0%) 로가장많이분리되었으며, 본연구에서식육에서 asta의유전자가많이분리된시험결과는 Chi 등의결과와유사하였다. 10) 병원성대장균 STEC, EPEC는 11균주 (13.8%) 가검출되었다. 공존하고있는 STEC균주는 atypical EPEC에존재하는모든독성인자를보유하기때문에 STEC와 EPEC 를구분하는것은불가능하다 1). 식품에서위해성이높은 EHEC는 2균주 (2.5%) 가검출되었으며, typical EPEC, EIEC and ETEC의병원성대장균은검출되지않았다. 6균주 (7.5%) 는두개의병원성 grup (STEC and EAEC) 이동시에검출되었다. Badri 등에의하면 EAEC 식품에서병 9) 원성유발에대한연구는미흡하나, EAEC는저분자량의특히 heat-stable plasmid encded entertxin (EAST 1) 을유발한다고알려져있다 10). 본연구에서도생닭에서 EAEC 의검출율이 25.0% 로가장높다. 따라서생닭에서의 EAEC 오염원에대한추가적인연구가필요하여, 닭을조리시에는대장균이완전히사멸할수있도록하여안전하게섭취하여야한다. Virulence genes and sertyping f islated enterhemrrhagic E. cli (EHEC) STEC, EHEC로분리된병원성대장균 25균주를 PCR을이용해서 7종의혈청형에대해서분석한결과 escv 유전자를보유하고있는 1 균주에서 O26 혈청형이확인되었다. PCR을이용해서확인되지않은병원성대장균을 antisera 로분석한결과 stx1 유전자를보유한 EHEC에서는 O152, O1 혈청형이확인되었으며 EHEC-hly 유전자를보유한 EHEC에서는 O116 혈청형이확인되었다 (Table 5). 그밖에 STEC에서는 O26, O25, O119, O153의혈청형이각 1 개씩확인되었으며, O26으로분리된시료는 PCR과동일한결과가나타났다. 그외다른병원성대장균 (O157, O145, O111, O121, O103, O91) 은확인되지않았다. 분석한 25 균주중 7균주만혈청형을알수있었다. 그밖의다른균주는 O sertyping이불가능했으며이는 Kim 등 18)

Prevalence and Characterizatin f Diarrheagenic Escherichia cli Islated frm Raw Chicken and Chilled Chicken in Krea 133 과유사하게 sertyping이불가능한균주들이분리되었다. Patn 등에의하면본결과와유사하게 stx 유전자를가 19) 지고있어도사람에게위해가되는 O26, O103, O111, O145 and O157 혈청형이아닐수도있으며 stx 유전자를가지고있지않는 O26, O103, O111, O145 and O157 의혈청형도존재할수도있다. 또한, 위해도가높은균주는 stx 유전자를가지고있으면서 O26, O103, O111, O145 and O157 혈청형을가져야한다고보고하고있다. 따라서본시험에서생닭의분리한대장균중병원성대장균검출률은 56.3% 로높았으나그중위해성이높은균주는 1균주 (0.7%) 였다. 조리한닭의경우는대장균의검출률이 0.4% 로시중유통중인조리된닭의경우는안전하게조리가열되고있음을알수있었다. 그러나생닭에위해성이높은대장균이존재하므로생닭은가공조리시교차오염이발생하지않도록조리도구, 조리환경에대한철저한관리가필요하다고생각된다. Acknwledgement 이논문은 2016 년도미래창조과학부재원으로한국식품연구원의지원 (E0152202-02) 을받아수행된연구성과입니다. 국문요약 병원성대장균군은전세계적으로식중독을발생하는중요한병원균으로알려져있다. 국내유통중인생닭과조리된닭가공품 356시료에서대장균 80균주 (22.5%) 를분리하여병원성유전자 multiplex PCR를이용하여분석한결과 asta 유전자가 26균주 (32.5%) 에서검출되었으며, escv 유전자는 17균주 (21.3%) eaea 유전자는 16균주 (20.0%) 검출되었다. 특히식품에서문제가되는장출혈성대장균유전자 stx 1는 3균주 (3.8%) 와 stx 2, EHEC-hly는각 1균주 (1.3%) 에서검출되었다. 병원성유전자를토대로 STEC, EPEC, EHEC, EIEC r EAEC의병원성대장균으로분류한결과 45균주 (56.3%) 가검출되었으며 typical EPEC, EIEC and ETEC의병원성대장균은검출되지않았다. STEC 병원성대장균은 O152, O1, O116, O26, O25, O119, O153 혈청형이분리되었다. 특히생닭에서병원성대장균에대한검출률이높으므로생닭을가공조리시교차오염이발생하기않도록조리도구, 조리환경에대한철저한관리가필요하다고생각된다. References 1. Kagambega, A., Martikainen, O., Lienemann, T., Siitnen, A., Trare, A. S., Barr, N. and Haukka, K.: Diarrheagenic Escherichia cli detected by 16-plex PCR in raw meat and beef intestines sld at lcal markets in Ouagadugu, Burkina Fas. Intern. J. Fd Micrbil., 153, 154-158 (2012). 2. López-Sauced, C., Cerna, J. F., Villegas-Sepulveda, N., Thmpsn, R., Velazquez, F. R., Trres, J. and Tarr, P. I.: Single Multiplex Plymerase Chain Reactin T Detect Diverse Lci Assciated with Diarrheagenic Escherichia cli. Emerging Infectius Diseases, 9, 127-131 (2003). 3. Natar, J. P. and Kaper, J. B.: Diarrheagenic escherichia cli. Clinical Micrbilgy Reviews, 11, 142-201 (1998). 4. Schmidt, H., Beutin, L. and Karch, H.: Mlecular analysis f the plasmid-encded hemlysin f Escherichia cli O157: H7 strain EDL 933. Infectin and immunity, 63, 1055-1061 (1995). 5. Fd and Drug Statistical Year Bk 2016. Ministry f Fd and Drug Safety. 6. Barrett, T. J., Kaper, J. B., Jerse, A. E. and Wachsmuth, I. K.: Virulence Factrs in Shiga-like Txin-Prducing Escherichia cliislated frm Humans and Cattle. J. Infectius Diseases, 165, 979-980 (1992). 7. Kim, S.H., Sng, H.J., Chung, J.k., Ha, D.R., Ryu, P.Y. and Lee, J.B.: Gentypic and Phentypic Characterizatin f Enterpathgenic Escherichia cli Islated frm Diarrheal Patients in Gwangju. J. Bacterilgy and Virlgy, 36, 167-174 (2006). 8. Bischff, C., Lüthy, J., Altwegg, M. and Baggi, F.: Rapid detectin f diarrheagenic E. cli by real-time PCR. J. Micrbil. Methds, 61, 335-341 (2005). 9. Badri, S., Fillil, I., Carle, I., Hassar, M., Fassuane, A. and Chen, N.: Prevalence f virulence genes in Escherichia cli islated frm fd in Casablanca (Mrcc). Fd Cntrl, 20, 560-564 (2009). 10. Chi, S.K., Lee, M.H., Lee, B.H., Jung, J.Y. and Chi, C.S.: Virulence factr prfiles f Escherichia cli islated frm prk and chicken meats btained frm retail markets. Krean J. Fd Sci. Animal Resur., 30, 148-153 (2010). 11. Perelle, S., Dilasser, F., Grut, J. and Fach, P.: Screening fd raw materials fr the presence f the wrld s mst frequent clinical cases f Shiga txin-encding Escherichia cli O26, O103, O111, O145 and O157. Intern. J. Fd Micrbil., 113, 284-288 (2007). 12. Lee, J.K., Park, I.H., Yn, K., Kim, H. J., Ch, J.I., Lee, S.H. and Hwang, I.G.: An analysis f epidemilgical investigatin reprts regarding t pathgenic E. cli utbreaks in Krea frm 2009 t 2010. J. Fd Hyg. Saf., 27, 366-374 (2012). 13. Fd, U. S. Drug Administratin bacterilgical analytical manual. AOAC Internatinal, Gaithersburg; 1998. 14. Assciatin, K. F. I.: Krean fd standards cdex. Available frm http://fse.fdnara.g.kr/residue/mbile/index.jsp Accessed Jan.13, 2017 (2017). 15. Valadez, A. M., Debry, C., Dudley, E. and Cutter, C. N.: Multiplex PCR detectin f Shiga txin-prducing Escherichia cli strains belnging t sergrups O157, O103, O91, O113, O145, O111, and O26 experimentally inculated in beef carcass swabs, beef trim, and grund beef. J. Fd Prtectin, 74, 228-239 (2011).

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