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미선 채
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1 대한치주과학회지 : Vol. 36, No. 2, 2006 사람태아골모세포에대한근골격이식재의골형성유도에관한효과 박재영, 피성희, 신형식 * 1) 원광대학교치과대학치주과학교실 I. 서론 치주질환은치주병원박테리아와숙주간의염증반응으로인해일어나며치아의지지조직인치조골, 치주인대, 치은, 백악질소실을초래하여, 치아는기능을상실하게된다. 치주질환치료의목적은소실된치아지지조직을치아가기능하고, 더이상치주질환에이환되지않도록치유시켜주는것이다. 치주치료후의치유의과정은재생, 재부착, 신부착의세가지로구분할수있다. 1) 재생은신체의일부가손괴되었을때잃었던조직과기관은생리적인과정을통해원래의상태로복구시키는과정으로이상적인치주치료의결과이다. 그러나, 치주조직의재생은치주인대세포와치조골세포가치주결손부로분화, 증식되어결체조직을형성하여야하며, 증식과이주속도가상대적으로빠른상피세포의치주결손부로의침입을막아야하므로일반적인치주치료인치근면활택술과치주판막술후치유에는회복과재부착, 신부착등이일어나게된다. 2,3) 이상적인치주질환의치료결과인재생을위해서차폐막의사용, 이식재의사용, 재생유도인자등이임상에서시도되고있다. 상피의하방증식을차단하기위한차페막의사용은선택적인세포증식을유도할수있으므로신생조직의재생을용이하게하지만, 차페막은노출되지않아야하며, 감염이일어나서는안된다. 4) 또한, 비흡수성차페막의경우제거를위한 2차수술로인해신생조직의손상과환자와술자의부담이발생한다. 이로인한조직학적, 임상적결과들이보고되고있다. 또한임플란트를위한수평적골소실은사용이제한되고있다. 5) 치주질환으로파괴된골결손부를위해광범위하게사용되는것이이식재를사용한치조골이식술이다. 이식재은원료에따라자가골, 동종골, 이종골, 합성골이식등으로구별할수있다. 자가골은골형성, 골유도, 골전도들의기전으로신생골을유도하지만, 수술부위이외의채취부위가부가적으로필요하며, 골유착과치근흡수의부작용등이보고되고있다. 6) * 연구비 : 본연구는 2006 년도원광대학교의교비지원으로이루어졌음 * 교신저자 : 신형식, 전북익산시신용동 원광대학교치과대학치주과학교실, 우편번호 , periohs@wonkwang.ac.kr 449

2 동종골과합성골은일반적으로자가골에비해골형성능력이부족하지만 7,8), 부가적인채취술식이불필요하고, 충분한양을사용할수있어널리사용되고있다. 동종골이식에대한연구는 Senn 9) 이탈회한골의사용을소개한이후, 미해군조직은행에서 Hyatt 와 Butler 10) 가저장골을임상에적용하였고 Urist11) 는골을탈회시키면내제되었던골유도단백질 (BMP) 이노출되어조직내에이식되었을때숙주의간엽세포를조골세포로분화시켜골형성을유도할수있다고보고하였다. 이후여러연구자들은동종골이자가골의대체물로이용가능하고자가골보다느리게흡수되어골형성의틀로작용한다고하였다. 그러나동종골은질환을전염시킬가능성이있고골은행이필요하며신선동종골이식후에면역학적거부반응을야기할가능성이있다. 12) 이러한질환전염의가능성및면역학적거부현상을감소하기위해 r-ray 에노출시키거나냉동혹은화학처리를하는데이러한과정은골형성능력을감소시킬수있다. 이를방지하기위해 Schallhom 과 Hyatt 는조직적합성검사 (HL-A 항원검사 ) 를실시하였고동결건조하므로이식항원을제거하는방법도개발되어현재가장널리사용되고있다. 13) 동종골이식은 Mellonig 14) 에의해처음치주치료에사용되었으며 Nade 등 15) 은여러다양한동물에이식재를이용한실험에서탈회동결건조골이식이냉동건조골이식보다더많은신생골유도능력이있다는것을보고하였다. 탈회동결건조동종골 (decalcified freeze-dried bone allograft) 은지난 40년이상치과와의과분야에서골이식재로써사용되어왔으며여러실험들을통하여골내낭결손부, 치조능결손부, 임플란트주위의골결손부를포함하는다양한골결손부에서골생성의우수한결과를보고하였다. 그러나 Becker 등 16,17) 은 DFDBA 의신생골형성의생물학적활성도는입증될수없으며따라서임상적효과역시의심스럽다고보고하였다. DFDBA 의효과에대해이러한상반된결과가나오는이유로상품화된 DFDBA 가제조방법, 공여자의나이등여러조건에 따라다양한생물학적활성도를가지기때문이라는연구결과가있다. 18,19,20) 치유과정에서이런활성도의차이는이식재에따라골유도단백질의양이충분하기않거나, 골유도단백질이불활성화되었기때문에치료결과를예측하는것이곤란하다. 18) 본실험에사용된 MTF(Musculoskeletal Transplant Foundation) 는상품화된 DFDBA 로골유도및골전도능력이예상되어진다. 하지만신생골형성의생물학적활성도에대한논란이아직까지계속되고있고제조방법이나공여자의상태에따라활성도가달라지므로이에 MTF 의골생성효과를실험실상에서검증하고자실시하였다. II. 연구재료및방법 1. 연구재료 (1) 세포배양골기질단백을만들고광화시킬수있는태아골모세포주 (hfob ; American Type Culture Collection, Manassas, VA) 를 10% fetal bovine serum (FBS, Gibco BRL, GibcoBRL, Grand island, NY, USA) 과 0.03mg / ml의 G-418 (Duchefa, Netherlands) 이첨가된 Dulbecuo's Modified Eagle's Medium Nutrient Mixture F-12 HAM (DMEM/F-12 1:1 Mixture, Sigma, St.Louis, MO, USA) 8ml이담긴 100mm 배양접시에적정세포 5 105cell/well 를분주하였다. 이를 34 의온도및 100% 습도조건에서 95% 의공기와 5% CO2 를계속공급하면서배양하였다. 배양액은세포가충분한증식이일어날때까지 2일간격으로교환하였으며계대배양은 1:3 의비율로시행하였다. 본실험에서는 4 6 계대배양된세포를사용하였다. (2) MTF 의준비 MTF(Musculoskeletal Transplant Foundation) 를 0.5g 을공급받아 LN2 gas 를이용하여분말로분쇄한후 1mg / ml, 100 μg / ml, 10μg / ml, 1μg / ml, 100ng/ 450

3 ml, 10ng/ ml, 1ng/ ml로만들어사용하였다. 2. 연구방법 (1) 세포증식측정배양접시에서밀생에도달한단층의세포들을 0.25% trypsin/edta 로분리해내었다. 이세포들을배양액으로현탁시키고 6-well plate 에 개의세포수가되도록분주하였다. 24 시간후에배양액을제거하고실험군에는 1mg / ml, 100 μg / ml, 10 μg / ml, 1μg / ml, 100ng/ ml, 10ng/ ml, 1ng/ ml의 MTF 를첨가하고, 양성대조군에는 10-7M 의 dexamethasone 을넣었다. 각각 3, 5일동안 34 에서배양한후, 혈구계수기를이용하여세포의수를계산하였다. 시일별로각그룹에서 3번배양을시행했다. (2) 염기성인산분해효소활성측정 hfob1.19을 6-well plate 에 1 105cell/well이되도록분주한후, 10% FBS 가첨가된 DMEM/F-12 1:1 Mixture 에서단일밀생층 (mono layer) 이형성될때까지 34, 100% 습도, 5% CO2 공기혼합배양기에서배양하였다. 단일밀생층이형성된후배지를제거하고 DMEM/F-12 1:1 Mixture 으로 2회세척후, 10% FBS, G-418 항생제, 50 μg / ml ascorbic acid, 10mM sodium β -glycerophosphate 가첨가된 DMEM/F-12 1:1 Mixture 에음성대조군에는다른처리없이분주하였으며, 양성대조군에는 10-7 M의 dexamethasone 을첨가하였고, 실험군은 1mg / ml, 100 μg / ml, 10 μg / ml, 1μg / ml, 100ng/ ml, 10ng/ ml, 1ng/ ml농도의 MTF 를첨가하여분주한후추가로 5일간더배양하였다. 일정배양시간이지난후배지를제거하고, trypsin-edta 로세포를분리시키고, 1,500rpm 에서 6 분간원심분리하였다. 상층액을제거하고 0.2 ml의멸균된증류수를첨가하여초음파분쇄기로현탁하였다. 각세포현탁액 0.1ml에 0.1 M glycine NaOH buffer (ph 10.4) 0.2 ml, 15 mm 의 p-nitrophenyl phosphate (рnpp ; Sigma, USA) 0.1 ml, 0.1% triton X-100/saline 0.1 ml와멸균된증류수 0.1 ml를잘혼합하여, 이반응물을 37 에서 30 분간배양하였다. 0.1 N NaOH 를 0.6 ml첨가함으로써이들반응을중지시켰다. р-npp 의가수분해는 410 nm파장의 ELISA reader 에서흡광도의차이로나타나며, p-nitrophenol (p-np ; Sigma, USA) 을기준값으로이용했다. 단백질농도는 BCA protein assay reagent (Pierce, USA) 를사용하여측정하며, bovine serum albumin 을표준으로하였고, ALP 활성도는 nm/min/ mg of protein 으로나타내었다. 매실험마다 ALP 활성도를음성대조군에대한백분율로산출하였으며, 각각의실험은 3회반복시행하였다. (3) 칼슘축적측정 6-well 배양접시에 개의세포가들어가도록분주한후각각적정농도로 25 일간배양하였다. 세포외기질무기질화를유도하기위해 23 일째되는날, 4mM/L NaHPO4 를첨가해서배양하였으며 Alizarin red-sulfate (AR-S, Sigma) 염색방법을사용하였다. 25 일이된후배지를제거하고, PBS 로세척하였다. Ice-cold 70% ethanol 로한시간동안 4 에서고정하고 ethanol 을제거한후 40mM/L AR-S (ph 4.2) 로실온에서 10 분동안염색하였다. AR-S 용액을제거하고멸균증류수로조심스럽게 3 회에걸쳐세척하였다. 염색된부분을육안으로비교관찰하기위하여 digital color camera (Nikon E995, Nicon Corporation, Japan) 로촬영후, 이를계량적으로비교하기위하여 10mM/L sodium phosphate (ph 7.0) 에 10%(w/v) cetylpyridinium chloride 가녹아있는용액을이용해염색부위를녹여 AR-S 의농도를 562nm 의흡광도에서읽었으며 AR-S standard curve 는같은용액을사용하였다. (4) 통계분석통계학적유의성은 SPSS 10.0 Version 프로그램을사용하여평균과표준오차를구하고, 이들의통 451

4 계학적유의성은일원분산분석법 (ANOVA) 을이용하여사전검정하였으며, 사후검정은 Tukey 법을사용하였다. (p<0.05) III. 연구성적 1. 세포증식측정 hfob1.19에대한 MTF 1mg/ ml, 100μg / ml, 10μg / ml, 1μg / ml, 100ng/ ml, 10ng/ ml, 1ng/ ml을배양액에첨가후 3, 5일간배양하여살아있는세포수를대조 군과비교측정하였다. 3일간배양한경우음성대조군에비해양성대조군에서만유의한차이를나타내는세포수증가가있었으며, 모든실험군에서음성대조군에비해유의한차이를보이지않았다. 5일간배양한경우에는음성대조군에비해양성대조군뿐만아니라모든실험군에서통계학적으로유의한세포수증가를나타냈다. 특히 100ng/ ml와 10ng/ ml에서유의한증가를나타내었다. 그리고, 각실험군간에는농도차이에따른유의한변화가없었다. (Table 1, Figure. 1). Table 1. MTT assay on MTF in hfob (Mean±S.D.) C- C+ 1mg/ ml 100 μg / ml 10μg / ml 1μg / ml 100ng/ ml 10ng/ ml 1ng/ ml 3day 6.27± ±0.21* 6.6± ± ± ± ± ± ±0.31 5day 12.77± ±0.18* 13.73±0.01* 13.8±0.22* 13.93±0.22* 13.98±0.08* 14.03±0.20* 13.98±0.16* 13.9±0.23* *Statistically significant compared to the negative control(p<0.05). C-(negative control): added distilled water C+(positive control): added 10-7 M dexamethasone Figure 1. MTT assay on MTF in hfob MTT assay was performed after 3 and 5 day incubation. Vertical bars represent standard deviation of each independent experiments. C-(negative control): added distilled water C+(positive control): added 10-7 M dexamethasone * : Statistically significant difference compared with the negative control (p<0.05). 452

2. 염기성인산분해효소의활성도측정 MTF 1mg/ ml, 100 μg / ml, 10 μg / ml, 1μg / ml, 100ng/ ml, 10ng/ ml, 1ng/ ml을 hfob1.19 에투여하여, 골재형성과재생이일어나는부위에서국소적인산이온농도를증가시키는 ALP 의합성을측정한결과는 Table 2와같다.

5 2. 염기성인산분해효소의활성도측정 MTF 1mg/ ml, 100 μg / ml, 10 μg / ml, 1μg / ml, 100ng/ ml, 10ng/ ml, 1ng/ ml을 hfob1.19 에투여하여, 골재형성과재생이일어나는부위에서국소적인산이온농도를증가시키는 ALP 의합성을측정한결과는 Table 2와같다. 실험결과음성대조군에비하여양성대조군과실험군의 100ng/ ml, 10ng/ ml, 1ng/ ml에서통계학적으로유의한증가를보였으며, 그이외의농도에서는유의한차이를보이지않았다. (Table 2, Figure. 2) 3. 칼슘축적. MTF 1ng/ ml, 10ng/ ml을배양태아골모세포에투여한뒤석회화된결절을관찰한결과음성대조군과비교시양성대조군과모든실험군에유의한증가를보였다. (p<0.05) (Table 3, Figure 3 ) Table 2. ALP activity on MTF in hfob (nmole/30min/mg of protein) (Mean±S.D.) C- C+ 1mg/ ml 100 μg / ml 10 μg / ml 1 μg / ml 100ng/ ml 10ng/ ml 1ng/ ml 0.28± ±0.01* 0.30± ± ± ± ±0.01* 0.34±0.01* 0.34±0.01* *Statistically significant compared to the negative control(p<0.05). C-(negative control): added distilled water C+(positive control): added 10-7 M dexamethasone Figure 2. ALP Activity on MTF in hfob ALP activity was performed at 3 day after confluence. Vertical bars represent standard deviation of each independent experiments. C-(negative control): added distilled water C+(positive control): added 10-7 M dexamethasone * : Statistically significant difference compared with the negative control (p<0.05). 453

Table 3. Calcium accumulation assay of hfob1.19 exposed to MTF (Mean±S.D.) negative control positive control 1 ng/ ml 10 ng/ ml O.D 160.85±24.54 241.91±15.41* 194.84±19.23* 206.58±16.

6 Table 3. Calcium accumulation assay of hfob1.19 exposed to MTF (Mean±S.D.) negative control positive control 1 ng/ ml 10 ng/ ml O.D ± ±15.41* ±19.23* ±16.38* *Statistically significant compared to the negative control(p<0.05). C-(negative control): added distilled water C+(positive control): added 10-7 M dexamethasone O.D : Optical Density Figure 3. Calcium accumulation assay of hfob1 treated with MTF. Vertical bars represent standard deviation of each independent experiments. (C- : negative control, C+ : Positive control, O.D: Optical Density * : p<0.05) Photo 1. AR-S staining of cultured hfob1.19 with MTF. The mineralized matrix was stained with AR-R for calcium accumulation 그리고, AR-S 로염색된석회화결절을육안으로비교하였을때, 음성대조군과비교하여양성대조군 과 1ng/ ml, 10ng/ ml처리군에서증가된결절의수를보인다. (Photo 1) 454

7 IV. 총괄및고찰 본연구는치주질환으로파괴된골조직의회복을위해널리사용되고있는동종골중 MTF (Musculoskeletal Transplant Foundation) 조직은행의탈회동결건조골를사용하여태아골모세포주에대한세포활성도와칼슘의침작을밝혀치주질환치료제로서의효용을확인하고자실험을진행하였다. 이식수술시동종골은수술부위이외의외상을주지않으면서원하는양을획득할수있는장점이있지만, 그대로사용할경우항원성으로인해면역거부반응을초래하거나감염의위험성, 오염등의위험을가지고있다. 그러므로, 항원성을제거하고생체조직적합성을얻기위하여단순, 냉동건조, 탈회, 방사선조사, 열, 멸균등의다양한방법으로처리보관되고있다. 특히탈회는골기질의골생성단백질을제거하지않으며, 골유도능을유지하고있어숙주조직의신생골형성능력을쉽게하는것으로알려져있다. Urist 11) 는동물실험에서피질골을염산으로탈회시키고냉동건조시킨탈회동결건조골을사용한결과골형성이유도된다는것을보고하여동종탈회골이식의임상적이용의근간을마련하였다. 피질골이탈회되면서골기질내의 BMP 를노출시키며, 이로인해골이식편의골형성능력을증가시키게된다. 이 BMP 는혐수성당단백으로혈관주위의간엽조직세포의분화를유도하여골결손부나골격외부에서도골조직을형성하도록하며골아세포계열뿐만아니라골을형성하지않는비조골간엽세포군의조골세포로의분화를유도해서신생골과백악질의형성을촉진하므로써치주조직재생에관여하는것으로알려져있다. 세포배양실험을통해 rhbmp-2 가미분화간엽세포들이조골세포로분화되게하는것이관찰되었고, 개의하악골에형성된골결손부치유과정에서 rhbmp-2 가구강악안면부위의골재생에폭넓은치료효과를가지고있음이보고되었다. 탈회동결건조골의임상적사용은 Libin 등 21) 에의해처음으로사람에게사용되었고, Pearson 등 22), Mellonig 등 23) 이치조골결손부위에탈회동결건조골을사용하여좋은임상결과를나타냈다고보고하였다. Quintero 등 24) 은인간의골내낭에탈회동결건조골을이식한후 6개월에걸쳐골형성능력을평가하였는데골높이 2.4mm 의증가와 65% 의골재생을나타내었다. 한편으로는탈회동결건조골의골형성유도효과에대하여의문을제기하는연구결과들도보고되어논란이되고있다. Becker 등 16,17) 은자가골과탈회동결건조골로골이식을시행한지역의조직학적관찰에서탈회동결건조골은단지골형성의틀로작용하고골유도성에는영향을주지않는다고보고하였으며임플란트주위의골결손부에골유도재생술을시행한연구에서도동종골의사용효과가의심스럽다고보고하였다. Schwartz 등 19,20) 은상업적으로판매되고있는 DFDBA 의 BMP 양이조직은행마다또한같은조직은행이라도제품마다다르기때문에신생골을유도하는능력이차이가있으며, 이는 DFDBA 의질이본래다르다며. 이런차이가연령의차이에의한것이라고보고하였다. 이전 1996 년연구에서는 6개의조직은행의 DFDBA 를사용하여신생골형성을관찰하였는데, 각기신생골이형성되는시기가달랐으며, 한조직은행의 DFDBA 는전혀신생골을형성하지못하였음을보고하였다. 본실험에사용한탈회동결건조골은 MTF 조직은행에서제조되어상업적으로판매되는것으로 MTF 는미국조직은행연합의공인조직은행으로의과대학, 학술단체, 조직이식단체의비영리콘소시엄으로기증자는 PCR 검사 (Polymerase Chain Reaction Test) 를이용하여 HIV 감염여부를판단한후 B형감염, C 형감염, 매독등가능한전염성질환들의감염여부를검사하여감염되지않은기증자를대상으로골을채취하여탈회동결건조골을제조한다. 실험에사용된 MTF 조직은행의탈회동결건조골은 micro 의피질골분말로태아골모주세포에적용하기위해더작은미립의분말로처리하여사용하였다. 세포의증식을관찰한실험에서 5일후음성대조군에비해모든실험군에서통계학적으로유의한세포수증가를나타냈다. 세포증식의증가는세포의증 455

8 식단계에서여러층을형성할수있다는것을나타내므로이는골형성의초기에도움을줄것으로사료되었다. 경조직의형성과정은알카리성인산분해효소 (alkaline phosphatase, ALP) 활성이높은세포가무기질 (mineral) 이침착될, Ⅰ형교원질이주성분인유기기질 (organic matrix) 을혈액공급이풍부한상태에서형성하는것으로요약할수있다. 25) ALP는유기인산에스테르를가수분해하여석회화가이루어지는부위에서국소적으로인산이온의농도를증가시키는효소로써, 세포외기질에 calcium phosphate 를침착시켜석회화를유도하는기능을갖는다고알려져있다. 26) 본실험에서 MFT 100ng/ ml, 10ng/ ml, 1ng/ ml을투여한실험군에서통계학적으로유의한증가를보였으며이렇게증가된 ALP 합성은세포외기질에 calcium phosphate를침착시켜골형성의핵역할을함으로써석회화를유도하여조골세포의분화와성숙에중요한역할을할것으로생각되었다. 본연구에서골광물화과정중칼슘축적정도를알아내기위하여 AR-S 염색법을사용하였는데, MTF 1ng/ ml, 10ng/ ml을투여한군에서석회화결절을계량한결과유의하게증가하였으며육안으로증가된석회화결절을관찰할수있었다. 이염색법은세포의형태학적특성분석즉세포의경계부위를염색하여세포의밀도, 면적, 주변둘레, 한변의길이등을광학현미경으로촬영후분석할수있다. 특히 AR-S 염색법은칼슘염에특이하게반응하여칼슘과칼슘간에 reddish-orange complex 를형성하는견본에서적은양의칼슘을알아내는데유용하다. 27) 본연구를통해 MTF 가골재형성과정중골모세포의광물화과정에긍정적인영향을미치는것으로사료되었다. 골세포분화단계에서교원질과 ALP 가초기단계에서발현되며, 후기분화단계로가면서 bone sialoprotein, osteopontin, osteocalcin 등이발현된다. 28) bone sialoprotein는 mineralization 의기시과정에서역할하는것으로알려져있고 osteocalcin 는 mineralization 초기단계에서 crystal growth 를조절하는기능을담당할것으로여겨지고있다. Osteopontin 는그기능이명확하게밝혀져있진않지만 crystal growth 의조절과, 골생성혹은골흡수부위로의세포이동과부착의촉진인자로여겨지고있다. 이러한단백질의발현은치주조직내에서경조직형성능력을가져골재생의지표물질이될수있을것이다. 29) 본실험을통하여 MTF 가골형성에초기에긍정적이역할을할것으로기대되지만후기분화단계에영향을주는 bone sialoprotein, osteopontin, osteocalcin 과같은인자들에대한부가적인연구가필요할것으로사료된다. V. 결론 본연구는사람태아골모세포에서 MTF Musculoskeltal Transplant Foundation) 를첨가하였을경우에골형성능력에미치는영향을평가하기위해세포증식정도, ALP, 칼슘축적을분석하여다음과같은결과를얻었다. 1. 세포의증식정도를평가한결과 3일군에서는유의한차이는없었고 5일군에서는모든실험군에서음성대조군에비해유의한수준의증가를나타내었다 (p<0.05). 2. ALP 의합성을측정한결과 MTF 100ng/ ml, 10ng/ ml, 1ng/ ml를투여한실험군에서음성대조군에비해유의한수준의증가를보였다 (p<0.05). 3. 칼슘측정은음성대조군에비하여 1ng/ ml, 10ng/ ml처리군에서유의하게증가하였다 (p<0.05). 그리고, AR-S 로염색된석회화결절을육안으로비교하였을때, 음성대조군과비교하여 1ng/ ml, 10ng/ ml처리군에서증가된결절수를보였다. 456

9 본연구를통해 MTF 가세포증식률, ALP 의활성도증가를나타내는결과를확인할수있었으며 AR-S 를통한염색법으로칼슘축적의결과를보여주므로써골세포의활성을촉진시키며골형성과정에효과가있을것으로사료된다. VI. 참고문헌 1. Melcher AH. On the repair potential of periodontal tissues. J Periodontol May;47(5): Caton J, Nyman S, Zander H. Histometric evaluation of periodontal surgery. II. Connective tissue attachment levels after four regenerative procedures. J Clin Periodontol Jun;7(3): Nyman S, Karring T, Lindhe J, Planten S. Healing following implantation of periodontitis-affected roots into gingival connective tissue. J Clin Periodontol.1980 Oct;7(5): Gottlow J, Nyman S, Lindhe J, Karring T, Wennstrom J. New attachment formation in the human periodontium by guided tissue regeneration. Case reports. J Clin Periodontol Jul;13(6): Urbani G, Graziani A, Lombardo G, Caton JG. Clinical results with exposed polyglactin 910 resorbable membranes for guided tissue regeneration. Int J Periodontics Restorative Dent Feb;17(1): Moskow BS, Karsh F, Stein SD. Histological assessment of autogenous bone graft. A case report and critical evaluation. J Periodontol Jun;50(6): Becker W, Becker BE, Caffesse R. A comparison of demineralized freeze-dried bone and autologous bone to induce bone formation in human extraction sockets. J Periodontol Dec;65(12): Egelberg J. Regeneration and repair of periodontal tissues. J Periodontal Res May;22(3): Senn, N. On the healing of aseptic bone cavities by implantation of antiseptic decalcified bone. Am. J. Med. Sci. 98:219, Hyatt, G.W. and Butler, M.C. The precurement, storage and clinical use of bone homografts. AAOS Instructional Course Lecture XIV:343, Urist MR. Bone formation by autoinduction. Science 1965;150: Garraway R., Young WG., Daley T., Harbrow D., and Bartold PM. : An assessment of the osteoinductive potential of commercial demineralized freeze-dried bone in the murine thigh muscle implantation model. J Periodontol 69 : , 전국치주과학교수혐의회, 치주과학제4판, 군자출판사, Mellonig J.T., Bowers G.M., Cotton W.R : Comparison of bone graft materials. Part Ⅱ. New bone formation with autografts and allografts: a histological evaluation. J Periodontol 52: , Nade S, Burwell RG. Decalcified bone as a substrate for osteogenesis. An appraisal of the interrelation of bone and marrow in combined grafts. J Bone Joint Surg Br May;59(2): Becker W, Urist M, Becker BE, Jackson W, Parry DA, Bartold M, Vincenzzi G, De Georges D, Niederwanger M. Clinical and histologic observations of sites implanted with intraoral autologous bone grafts or allografts. 15 human case reports. J Periodontol Oct;67(10):

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11 Effects of Musculoskeletal Transplant Foundation on Bone Formation in Human Fetal Osteoblasts Jae-young Park, Sung-Hee Pi, Hyung-Shik Shin * 2) Department of Periodontology, School of Dentistry, Wonkwang University DFDBA(Decalcified freeze-dried bone allograft) is one of the allograft materials for periodontal bone regeneration. DFDBA provides an osteoconductive surface and osteoinductive factors. Therefore, DFDBA have been used successfully to regenerate the attachment apparatus during periodontal treatment. But recent studies was reported that wide variations in commercial bone bank preparations of DFDBA do exist, including the ability to induce new bone formation. DFDBA was experimental materials that was recovered, processed, tested, shipped and invoiced through Musculoskeletal Transplant Foundation. MTF(Musculoskeletal Transplant Foundation) is the world largest, non-profit, AATB(American Association of Tissue Banks) accredited tissue bank. The objective of this study was to determine the effects of serial dilutions of a DFDBA on human fetal osteoblastic cell proliferation and their potential to form and mineralize bone nodules. Human fetal osteoblastic cell line(hfob 1.19) was cultured with DMEM and SSE(1 μg / ml, 10μg / ml, 100 μg / ml, 1mg/ ml ) at 34 with 5% CO2 in 100% humidity. Cell proliferation was significantly increased at 1mg/ ml, 100μg / ml, 10μg / ml, 1μg / ml, 100ng/ ml, 10ng/ ml, 1ng/ ml of DFDBA after 5 days incubation (p<0.05). Alkaline Phosphatase(ALP) level was significantly increased in 100ng/ ml, 10ng/ ml, 1ng/ ml of DFDABA(p<0.05). A quantified calcium accumulation was significantly increased at 1ng/ ml, 10ng/ ml of MTF(p<0.05). These results indicated that DFDBA has an inductive effect on bone formation in vitro. key words:osteoblast, allograft, regeneration 459

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12-3전체 The histologic study of the effect of enamel matrix protein and -tricalcium phosphate in gap defect model in dogs : pilot study Lim Hyun-Chang 1, Yang Jin-Hyuk 1, Chae Gyoung-Joon 1, Kim Sung-Tae 1, Jung