LC MS Agilent 6100 series Quick Access Manual Chulbom Lee Group By. 이동길, 안은혜

Size: px

Start display at page:

Download "LC MS Agilent 6100 series Quick Access Manual Chulbom Lee Group By. 이동길, 안은혜"

미지 우
5 years ago
Views:

1 LC MS Agilent 6100 series Quick Access Manual By. 이동길, 안은혜

2 사용전주의사항 - 처음에혼자사용하지말고함께사용하면서익숙해질것. - 회사에서제공한전체매뉴얼도함께참고할것. 사용시주의사항 1. LC Flow rate : 0.5 ml/min 이하로사용 ( 사이가적당함 ) 2. Drying gas flow : 10L/min 으로사용 (12L/min 이상인경우 shut down 됨 ) 3. 샘플농도를진하게하지말것. 꼭샘플뚜껑을막고사용하고사용한샘플은즉시회수. 4. 분석후에반드시 column 세척할것 5. 분석완료후 LC off, MS off click 해서 off된상태를확인하고, 기기전원은 LC 만끈다. 6. 로그북을반드시기재한다. ( 문의 : 내선 6663 조교구은회 )

3 사용순서 ( 사용전준비 ) 1. 시료준비 - GC vial에측정할시료를넣어서준비한다. - 농도 10 ppm 수준적당, 용매는 ACN 이나 MeOH, H2O 을사용한다 ppm 이상이면 ESI 분석효율이떨어지고오염이우려됨, 1-10 ppb면검출가능. - Wash vial 준비 : ACN이나 MeOH을 vial에가득채워준비한다. Sample 및 wash vial을 autosampler에넣고각각의위치번호를기억한다. 2. 액체질소상태체크 1) 액체질소의 regulator gauge중왼쪽 gauge 압력이 80 psi인지체크 - 압력이적을경우기계작동중 mass가 shutdown됨 - 압력낮거나에러있으면꼭담당조교에게문의할것 ( 조교퇴근시급하게쓸경우압력이낮으면액체질소통의 pressure build up 로표시된 valve를살짝열어주어압력이적정수준에도달할때까지둔후꼭닫아주어야함. 닫는것잊지말것. 가급적건드리지않는게좋다.)

4 3. 용매양이충분한지체크 4. 기계전원 on 및컴퓨터프로그램가동 1) 우측기계 4개전원을전부켠다. 2) 컴퓨터로그온한다. log on : 초기사용시배운 ID/PW 프로그램사용및 set up 과정 1. 바탕화면의 Instrument Online 프로그램을켠다. (trouble : 만일시간이오래지나도프로그램이켜지지않으면컴퓨터를다시시작한다. 간혹기계현재상태와프로그램현재상태가다르다는창이나오면 아니요 누른다.) 2. 가운데창의기계 ON 및 Mass ON 버튼을누른다.- 1

체크 : Mass 현재상태창이녹색으로변하는지확인할것 Gas flow가 3L에서 10L에도달했는지확인한다.

진공압력이 1차진공 (Rough vac) <3%, 2차진공 (high vac pump) <10 이어야한다. -2 3.

Method 선택 - 3 - 예전에저장했던 Method가있을경우불러온다 - 좌측창에 method tab을눌자신의

5 체크 : Mass 현재상태창이녹색으로변하는지확인할것 Gas flow가 3L에서 10L에도달했는지확인한다. ( 도달이안되면설정상 shutdown됨. 질소압력문제일경우가대부분임. 진공압력이 1차진공 (Rough vac) <3%, 2차진공 (high vac pump) <10 이어야한다 현재 sequence 모드일경우 single 모드로변환한다 Method 선택 예전에저장했던 Method가있을경우불러온다 - 좌측창에 method tab을눌자신의 method가있을경우더블클릭 - 좌측에보이지않을경우맨위메뉴바 >method 폴더버튼을눌러직접불러온다. - 불러왔더라도자신이원하는값인지일일이체크할것. 5. Method 새로만들경우 ( 원하는설정으로변경후저장과정거침 ) 1) Sampler - Sampler 창에마우스를놓고 > 우클릭 > method 클릭

- injection volume : 10ppm 농도수준인경우 ~ 10 μl 지정 - 1 보통잘모르겠으면 0.1 μl 정도부터올려서 test. 보통 1 μl면적당. 너무진하면안좋음. - standard injection vs needle wash : wash vial을준비했을경우 needle wash를선택한후아래창에그 vial을둔곳의번호를적는다.

6 - injection volume : 10ppm 농도수준인경우 ~ 10 μl 지정 - 1 보통잘모르겠으면 0.1 μl 정도부터올려서 test. 보통 1 μl면적당. 너무진하면안좋음. - standard injection vs needle wash : wash vial을준비했을경우 needle wash를선택한후아래창에그 vial을둔곳의번호를적는다. - Stop time : 샘플찍힌후자동으로 기록 이멈추는시간지정또는 as Pump No Limit은실험자가직접 Stop 버튼누를때까지기록이계속된다. ( 측정할물질의 retention time 및 eluent 조건에따라 sample 등이충분히나올시간을정해야함.) - 모두정했으면 > OK 2) Quant. Pump > 우클릭 > Method - Flow : 일단 0으로둔다. - 1 ( 기기가켜져있는상태이므로설정해놓은대로 Solvent 를흘려보내주기때문이다. 지금은 method 를짜주고있는상태이므로 0 으로설정해놓는다.) - Stop time : sampler에서지정했던 Stop time과같다. (5min으로지정하면 5min) - Solvent ( 현재 ) : A (ACN), B (water-acid additive), C (water), D (MeOH) 중사용할용매선택 ( 여기서는 B 선택 ) - timetable : 원하는 시간 대- B 의 % 값입력하기위해 add 눌러추가 - 2 표시된곳을클릭하여원하는값을넣음 - 3 remove 버튼이용해서제거할수도있음. - 모두정했으면 > OK

7 3) Column Comp. Port 확인 인경우 : column 을통과하지않는것 인경우 : column 을통과하는 - 우클릭 > switch valve 누르면쉽게두모드를쉽게 변환할수잇음. (1 2 : 순물질일경우측정시간을 5 분이내로도찍을수있다. 1 6 : mixture 일경우나 retention time 을보고자할경우에쓰며, 측정시간도더 걸리게된다.) 4) MS (1) MS 창의빨간박스의 FIA> 우클릭 > (FIA실험선택되어있는지확인하고 uncheck-선택안함 ) (2) MS 창의파란박스의 quadrupole> 우클릭 >Setup MSD signals

±100이적당 ) - 파란박스 : Scan mode나 Sim mode 선택가능 ( Sim mode는원하는 mass의 peak을입력하면그 peak이나오는것만 detection한다.

8 - 좌측하단의 Active Signals에 1,2 둘다체크되어있는지확인 - 우측상단의 signal 1번 Mass 는 Positive / Scan mode 확인 mass area/ fragmentation 입력 ( 예 : 100/300/150) - 우측하단의 signal 2번 Mass 는 Negative / Scan mode 확인 mass area / fragmentation 입력 - mass area는예상되는 sample의값에서 (sample ±100이적당 ) - 파란박스 : Scan mode나 Sim mode 선택가능 ( Sim mode는원하는 mass의 peak을입력하면그 peak이나오는것만 detection한다.) - 아래의 insert append등으로시간대별특정값을따로측정하도록지정가능하나 pass - 모두정했으면 > OK OK 5) Method 저장 - 메뉴바 > Method > Save Method As.. 로다른이름으로저장을한다. - 저장위치는다른그룹들의 method 저장위치를참고한다.

6. purge 및안정화 - purge valve 를반시방향으로돌려서열어놓는다. - Quat. Pump.

- Quat. Pump 우클릭에서 flow 0.0ml/min 설정 > OK - 다시다른용매로 (Quat.

Flow 0상태에서다른용매로바꾸는등의조작을한다.) - 이과정이끝나면 valve를시계방향으로돌려잠궈준다. - 컬럼 wash : 앞에컬럼을사용한사람이있을경우아까와같은방법으로 Quant.

9 6. purge 및안정화 - purge valve 를반시방향으로돌려서열어놓는다. - Quat. Pump. 우클릭 >flow 5ml/min 설정 > OK - 빨간박스안의라인내에공기방울이밀려가는것이확인되는데공기방울이사라질때까지해준다. 대략 bubble이완전히제거될때까지 5~10분소요됨. - Quat. Pump 우클릭에서 flow 0.0ml/min 설정 > OK - 다시다른용매로 (Quat. Pump 우클릭에서 solvent B 체크해서 100% 로두고 ) flow 올렸다가내리는위와같은방법을반복 ( 주의 : 절대 purge닫힌상태에서 flow를 0.5 이상으로두지않는다. Flow 0상태에서다른용매로바꾸는등의조작을한다.) - 이과정이끝나면 valve를시계방향으로돌려잠궈준다. - 컬럼 wash : 앞에컬럼을사용한사람이있을경우아까와같은방법으로 Quant. Pump 우클릭하여 flow 0.5ml/min, ACN 100% 로흘려서오염물질을씻어준다. - 안정화 : Quant. Pump 우클릭하여 flow 0.5 ml/min, 용매 B를초기지정비율 % 만큼선택, OK누른다. 압력은 ±1 bar 이내가되게유지되어야한다. degasing 시에압력이 5 bar 이상이면관리자에게반드시연락할것

10 측정방법 1. Sample 선택 메뉴바 > RunControl > Sample Info 1) Operator Name 2) Path : 저장될곳위치 2) Subdirectory : 폴더명지정 -처음인경우새폴더가만들어짐 - Manual or Prefix/Counter : file 이름지정 (Manual은매 sample마다이름지정해주어야함.) 3) Location에 sample을둔 autosampler상의위치를입력 4) Sample Name 5) comment : 참고할사항모두정했으면 > OK 2. 측정시작모든준비가되면 Single Sample 버튼을누른다. - injection시작.

11 - Stop 을누르거나미리지정한 runtime 까지기다려서 acquisition 을완료. - 다른 sample 도위와같은방법으로찍는다. 전원 Off - 다찍은후 Quat. Pump 우클릭하여 ACN 100% 로컬럼을충분히씻어준다. Flow는 0으로한다. - 화면상의 VWD OFF, MS OFF 를 누른다. 프로그램을끌떄 method 저장 창이나오는데다른사람의 method일경우 save하지않는다. - 마지막으로처음눌러주었던우측기계 4개의전원을눌러끈다. 분석방법 1. 바탕화면상의 Instrument Offline 프로그램열기

- ③ Le eg 더블클릭하면 파일리스트가 나온다. 4. Spectrum 메뉴 버튼을 찾아 누르면 명령 버튼들이 나온다. - ④ 5.

12 ro 3. 폴더를 찾아서 single rues를 더블 클릭 - ② up 2. Data Analysis 탭 클릭 - ① - 왼쪽 창에 저장된 폴더가 보이면 들어가서 single run 을 원하는 파일을 더블클릭한다. - ③ Le eg 더블클릭하면 파일리스트가 나온다. 4. Spectrum 메뉴 버튼을 찾아 누르면 명령 버튼들이 나온다. - ④ 5. Peak 버튼⑤을 누른 후 mass peak을 누르면 (아래그림에서의 ①) C hu lb om 그것에 해당하는 mass 창(아래 그림에서의 ②)이 나온다 - 저장하고 싶으면 screen save를 이용하거나 graphic>copy to clipboard를 이용하여 그림판에 옮겨 저장한다. - 그 외 Integral 등의 분석도 이용해본다.-⑥

한약재품질표준화연구사업단 강활 ( 羌活 ) Osterici seu Notopterygii Radix et Rhizoma 생약연구과

한약재품질표준화연구사업단 강활 ( 羌活 ) Osterici seu Notopterygii Radix et Rhizoma 생약연구과 - 2 - - 3 - KP 11 Osterici seu Notopterygii Radix et Rhizoma Ostericum koreanum Maximowicz, Notopterygium incisum Ting, Notopterygium