1. 실험에적절한최상의피펫을선택하는법 1.1 시료의물리적성질을고려 4 수용액시료 (Aqueous samples) 점성이강한시료 (Viscous samples) 방사능이나부식성이강한시료 (Radioactive or corrosive samples) DNA, RNA, 생물학적시료 1.2 공기치환 (Air-displacement) 방식과직접치환 (Positive-displacement) 방식을이용한피펫의작동원리 5 심화학습... 공기치환방식피펫이라고모두같지는않습니다. 심화학습... Mistake-free" 피펫팅 1.3 옮기려고하는액체시료의부피를고려 7 Pipetman 의부피범위 Microman 의부피범위 Distriman 의부피범위심화학습... 부피를어떻게조절하여읽을수있을까요? 2. 피펫에맞는적당한팁을선택하는법 2.1 팁의품질평가 10 심화학습... 눈으로보이는것이상으로... 2.2 실험에적절한최상의팁선택 11 랙타입팁 (Racked tips) 멸균팁 (Sterilized tips) 필터팁 (Filter tip) 심화학습... 에어로졸에의한오염을방지하는법 - 1 -
3. 올바른피펫사용법 3.1 실험테이블의배열 12 3.2 일회용피펫팁끼우기 13 심화학습... Multi-channel 피펫에팁을끼우는방법 3.3 부피를설정하는방법 14 3.4 전진 (Forward) 또는후진 (Reverse) 모드피펫팅교육 15 심화학습... Pre-rinsing 3.5 사용한팁의제거와피펫을수직으로세워서보관 18 심화학습... 피펫스탠트의필요성 4. 오염방지 4.1 오염의종류와예방 19 개인에의한오염노출 피펫 - 시료 시료 - 피펫 시료 - 시료 4,2 피펫의오염제거방법 20 5. 피펫점검및관리 5.1 신속한진단 Pipetman 2분점검 21 심화학습... 피펫의나이는? 심화학습... 피스톤의부식을방지할수있는방법심화학습... 피펫에팁이잘맞지않을때... 어떻게해야하나요? 심화학습... 누수의주요원인은무엇일까요? 심화학습... 어떻게유기용매가누수의원인이되는지... 5.2 스스로해결해야할지, 서비스를의뢰해야할지 24-2 -
6. 피펫의조절과보정 6.1 Specification 이란무엇인가? 25 심화학습... 정확성 (Accuracy), 정밀성 (Precision) 의정의 6.2 부피의정확성과정밀성을계산하는방법 26 6.3 무게법사용 27 6.4 성능정검과정 28 6.5 테스트실행시기 28-3 -
1. 실험에적절한최상의피펫을선택하는법 요즈음에는여러용도의피펫이출시되고있습니다. 수용액, 밀도나점성이큰용액, 방사능화합물, DNA 시퀀싱, 일정량을분배, 마이크로플레이트에시료채우기등등... 여러분께서실행하고자하는분석의종류와사용할액체의물리적성질, 그리고피펫의사용부피범위는여러분이사용해야할피펫과팁의종류를결정해줄것입니다. 1.1 시료의물리적성질을고려 수용액시료 올바르게작동되고유지보수된 PipetmanR 피펫은실험실에있는대부분의용매에대하여정밀한결과를보장해드릴것입니다. 만약분배할분획이많다면반복주입을전용으로출시된 DistrimanR 을이용하십시오. 점성시료 점성시료를피펫팅할때 Gilson MicromanR 피펫을사용하면훨씬더편하다는것을여러분께서는알수있을것입니다. Microman은글리세롤이나세제, 그리고꿀과같이점성이강한시료도재현성있게피펫팅해주며, 클로로포름처럼휘발성이강한시료나수은과같은밀도가큰액체처럼흡입하기어려운시료에도 Microman을추천해드립니다. 방사능시료나부식성이강한시료 Microman은위험한시료까지도안전하게피펫팅하고피펫을손상시키지않도록특별히디자인된피펫입니다. DNA, RNA, 생물학시료 선택은여러분에게달려있습니다. Pipetman에 DiamondR autoclavable filter tip (0.1 μl ~ 1 ml) 을끼워사용하거나오토클레이브가가능한 Microman (Model M10, M100, 또는 M1000) 에멸균된캐필러리와피스톤을끼워서사용하실수있습니다. 올바르게사용한다면두종류의피펫모두가정밀하고오염되지않은결과를보장해드릴것입니다. 같은양을여러곳에분배하기원하신다면 Distriman 반복주입피펫에감마선멸균된마이크로시린지, DistriTip TM 을끼워사용하십시오. - 4 -
1.2 공기치환 (Air-displacement) 방식과직접치환 (Positive-displacement) 방식을이용한피펫의작동원리 Pipetman, Microman, 그리고 Distriman의가장큰차이점은그들의작동원리가서로다르다는것입니다. Pipetman(single과 multi channel 모두 ) 은공기치환 (air-displacement) 방식피펫입니다. Microman과 Distriman은직접치환 (positive-displacement) 방식피펫입니다. important 완벽한피스톤 공기치환방식피펫으로부피를설정할때, 피스톤은공기쿠션을조절하여흡입할시료의부피를결정하게됩니다. 시료를설정한부피만큼정확하게흡입하려면피스톤이완벽해야합니다. 이러한이유로 Pipetman의피스톤에결함이있는지확인하기위하여스스로가항상잘관찰해야하고심지어는미세한먼지입자들이있는지를확인하여잘닦아주어야합니다. 피스톤은 Pipetman 피펫에서반영구적인부분이므로, 피스톤이완벽하다는것은언제나완벽하게측정을 할수있다는것을의미합니다. 공기치환 (Air-displacement) 방식피펫이란? 직접치환 (Positive-displacement) 방식피펫이란? 기억해야할 3가지 기억해야할 3가지 1. 수용액이나일반적인실험을할때추천 1. 특별한시료 ( 점성, 밀도, 휘발성, 방사능, 부식성 ) 에추천 2. 피펫의피스톤과액체시료사이에항상공기쿠션 2. 공기쿠션없이피스톤과시료가직접접촉 (dead volume) 이있음 3. 피스톤은피펫에서반영구적인부분 3. 일회용피스톤 ( 영구적인부품이아님 ) - 5 -
공기치환 (Air-displacement) 방식피펫의작동순서 공기치환 (Air-displacement) 방식피펫의푸쉬버튼을누르면피펫내부의피스톤은내려가고대신공기가밖으로배출 됩니다. 피스톤에의하여공기가치환된것입니다. 피펫에남아있는공기의부피는시료의부피와반비례합니다. 공기쿠 션이적을수록시료의부피는많아집니다. 1 부피설정 2 흡입을위한준비 3 시료의흡입 4 시료의분배 필요한부피가설정되면피스톤이적당한위치로이동하게된다. 시료의흡입에앞서서푸쉬버튼을눌러야한다. 피스톤이내려가면서설정한액체의부피만큼공기를배출한다. 푸쉬버튼을놓으면팁의내부에부분적으로진공이형성된다. 대기압력은팁안의구멍을통하여원하는부피가흡입되도록해준다. 푸쉬버튼을다시누른다. 피펫 shaft와팁의압력은증가하게되고압축된공기는액체를팁밖으로밀어내게된다. 직접치환 (Positive-displacement) 방식피펫의작동순서직접치환 (Positive-displacement) 방식피펫은주사기처럼작동합니다. 일회용피스톤과시료간에전혀공기쿠션이없습니다. 팽창하거나수축하기쉬운탄성력있는공기가전혀없기때문에흡입력은일정하게유지되고시료의물리적성질에의하여전혀영향을받지않습니다. 이러한이유로 Microman은수은이나치약처럼밀도가크거나점성이큰시료도피펫팅할수있습니다. 1 부피설정 2 흡입을위한준비 3 시료의흡입 4 시료의분배캐필러리의끝부분이액체표면아래로잠기게되면시료의흡입에앞서서푸쉬푸쉬버튼을다시누른다. 피필요한부피가설정되면푸쉬버튼을천천히놓는다. 버튼을누르면피스톤은캐스톤이아래로내려가면서피스톤이적당한위치로피스톤이위로올라오면서필러리의끝부분까지내려액체를캐필러리밖으로이동하게된다. 대기압은캐필러리의구멍간다. 밀어내게된다. 을통하여원하는만큼의액체를끌어올린다. - 6 -
심화학습... 공기치환방식피펫이라고모두같지는않습니다. DNA 시퀀싱이나미세하고귀중한생화학시료를다루기위하여뛰어난정확성과정밀성을가진모델 P2(0.1~2 μl) 와 P10(0.5~10μL) 이공급됩니다. 피스톤과시료간의공기영역이최소한으로되어있기때문에증기압이나밀도와같은액체의성질과온도의변화에덜민감하게반응하도록 Microman은설계되었습니다. 피스톤이보호된피셋을선택하십시오. 그러면시료의접촉이나교차오염의우려없이실험하실수있습니다. 그리스를바르지않은 Pipetman은그만큼유지보수회수가줄어들게되므로누수나오염문제또한감소하게됩니다. Important 그리스를발라야하나요, 바르지말야야하나요? Pipetman처럼 dry seal" 기술을사용하는피펫과는달리몇몇피펫은피스톤에그리스를바르도록되어있습니다. 그리스를바른피스톤은규칙적으로, 또샐때마다계속그리스를발라주어야합니다. 그리스는피펫내부로입자들을흡착시켜서오염의원인을제공할수도있습니다. Gilson Pipetman에는절대로그리스를바르지마세요! 심화학습... Mistake-free" 피펫팅 Microman 피펫은피스톤이직접시료와접촉하는직접치환방식을사용하고있습니다. 따라서시료의밀도나온도에의하여수축하거나팽창하는공기쿠션이전혀없습니다. 원하는부피가완벽하게흡입됩니다. 피스톤실 (piston seal) 은위험하거나방사능, 또는부식성이있는에어로졸이피펫내부로들어오는것을막아줍니다. 분배를하는과정에서피스톤이캐필러리벽면을쓸어내리기때문에글리세롤에서접착제에이르는모든점성시료까지정확하고정밀하게분배됩니다. 오염을방지하기위하여캐필러리와피스톤은한종류시료의피펫팅이끝나면교환해주어야하며이때는손을접촉하지말고자동적으로캐필러리와피스톤을제거하도록...! 1.3 옮기려고하는액체시료의부피를고려 Gilson Pipetman 은 Classic, Ultra 각각 8 종류의모델로 0.1 μl 에서 10 ml 에이르는부피를정확하게옮길수있도록 - 7 -
디자인되어있습니다. 또한 Pipetman 에는 2 μl 에서 1 ml 까지해당되는고정형피펫도있습니다. 모델 부피범위 P2 U2 0.2-2 μl P10 U10 0.5-10μL P20 U20 2-20 μl P100 U100 20-100 μl P200 U200 20-200 μl P1000 U1000 200-1000 μl P5000 U5000 1-5 ml P10ml U10mL 1-10 ml Important Pipetman과 Microman의최대부피는푸쉬버튼의윗면에표기되어있습니다. 독특한 Gilson microman에는 1 μl에서 1000 μl에해당하는부피를이무런문제없이정밀하게피펫팅할수있는 6종류의모델이있습니다. 모델 M10 M25 M50 M100 M250 M1000 부피범위 1-10 μl 3-25 μl 20-50 μl 10-100 μl 50-250 μl 200-1000 μl 반복주입을위한 Distriman에는 3종류의서로다른시린지 (micro, mini, maxi) 를이용할수있으므로 1 μl에서 1.25 ml 사이에서는어떤부피라도분획을나눌수있습니다. 시린지 ( 전체시린지부피 ) 분획의부피범위 Important 흡입할수있는전체부피는 Distriman syringe의옆면에표기되어있습니다. Micro (125 μl) 1-12.5 μl Mini (1250 μl) 10-125 μl Maxi (12.5mL) 100 μl - 1.25 ml - 8 -
심화학습... 부피를어떻게조절하여읽을수있을까요? 부피는디지털방식의용량계에나타나있습니다. Pipetman 으로부피를설정하는예 : 부피는 3개의숫자로표시되고위에서아래로읽습니다. 왼쪽에나와있는숫자는설정한부피의최소 (MIN.) 와최대 (MAX.), 또는중간값을보여주고있습니다. 붉은색숫자는 P20 에서는 1/10 마이크로리터 (μl) 를, P1000에서는 1/10 밀리리터 (ml) 를나타냅니다. 다른모델의경우는매뉴얼을참고하시기를바랍니다. 2. 피펫에맞는적당한팁을선택하는법 Pipetman과 Microman과같은미량피펫은항상제조업체가권하는적당한팁을사용해야합니다. Microman을위한팁으로는잘알려져있듯이 capillariers" 를사용해야하고 Distriman에는 Syringe" 를사용해야합니다. 피펫을바르게사용하기위한방법으로서 Gilson Tip을사용하시면모든 Gilson 피펫은정확성과정밀성을엄격하게보장해드립니다. 안전이첫째! Microman에사용하는캐필러리와피스톤은부러지지않습니다. 유리캐필러리를사용할때발생하는모든위험성이완전히배제되었습니다. 팁의품질보장 모든 DiamondR 팁에는 Gilson 로고와 I.D. 가각각명시되어있습니다. 이숫자를참고하면생산된팁의 mold를확인하고정확한 cavity 의위치를알아낼수있습니다. - 9 -
제품추적을보장 모든팁박스와비닐백위에있는 batch number 로포장에서각실험실로운반될때까지과정을추적할수있습니다. 2.1 팁의품질평가 팁은겉으로보기에모두같은것처럼보일지도모르지만사실은그렇지않습니다. 질이좋지않은팁을선택했을경우당신의실험결과에치명적인오류를일으킬수도있습니다. 피펫제조업자가추천하는팁을사용하고아래의과정을틈틈히체크해보는것이바람직합니다. 팁의품질평가물리적인면 Yes No 깨끗하고먼지가없나요? 팁의칼라 ( 윗 ) 부분이완벽하게이루어져있나요? ( 팁을밀폐되게끼우기위함 ) 표면이부드럽고균일한가요? ( 액체의머무름시간을최소화 ) 팁의끝포인트부분이미세한가요? ( 공기방울형성을방지 ) 투명한가요? ( 첨가제나염료에의한오염 ) 화학적인저항능력은? 팁제조업자의보증서 Yes No 팁에상표가있나요? Identification number가있나요? 박스에배치넘버가있나요? Important Gilson Diamond 팁은미량금속의방출에대하여테스트값을제공해드립니다. 이농도는진한산에 5-10 회담가둔후에측정한 analytical noise level 보다낮습니다.. 심화학습... 눈으로보이는것이상으로... 현미경으로찍은이사진은양질의팁과그렇지않은제품의차이를보여줍니다. - 10 -
2.2 실험에적절한최상의팁선택 Gilson 팁은여러종류의포맷으로출시됩니다. 벌크타입일상적으로사용하기위한경제적제품입니다. 편리하게사용하고싶거나실험실에서오토클레이브를하기원하시는분은비어있는팁랙에팁을꽂아서사용하시면됩니다. 손의접촉없이쉽게팁을끼울수있는랙타입먼지에오염되는것을방지하기위하여뚜껑이있습니다. Multichannel Pipetman으로 microtiter plate를채우기위하여 96-well 포맷을따르고있기때문에편리하게사용하실수있습니다. 또한구별이쉽도록용량에따라랙의색이다르고실험실에서오토클레이브할수있습니다. 랙은재활용할수있습니다. 멸균조건에서의실험을위한 ( 랙+멸균 ) 타입출시되기전에감마선으로멸균되어랙에담겨서밀봉된상태로제공됩니다. 팁에오토클레이브가가능한필터가끼워져있는랙타입팁에끼워져있는필터는피펫으로액체시료를흡입할때생기는에어로졸에의한오염을예방합니다. Gilson Diamond 필터팁은성공적으로오토클레이브를할수있습니다. 멸균된필터팁이담겨진랙타입필터팁이출시되기전에감마선으로멸균되여랙에담겨서밀봉된상태로제공됩니다. ( 멸균+낱개포장 ) 타입멸균된상태가사용하기전마지막순간까지보장됩니다. 소량의팁을사용할때추천됩니다. 심화학습... 에어로졸에의한오염을방지하는법 PCR이나그밖에다른증폭실험을할때, 또는 DNA/RNA, 전염성물질, 방사능시료등을피펫팅할때에어로졸에의한오염을방지해야하는것은필수불가결한일입니다. - 11 -
1. 다음사항중동시에두개이상의문제에직면해있다면 Pipetman에 Diamond 멸균필터팁을끼워서사용해야합니다. 멸균조건에서실험 수용액시료의피펫팅 교차오염제거 2. 다음사항중동시에두개이상의문제에직면해있다면 Microman에멸균된캐필러리와피스톤을끼워서사용해야합니다. 멸균조건에서실험 점성이있는시료의피펫팅 교차오염제거 더자세한정보를원하신다면 4.1 절을보세요! 3. 올바른피펫사용법 당신의실험결과를최적화시키기위해서는피펫제품자체도중요하지만그것을올바르게사용하는것이더중요합니다. 1. 먼저효율을최대로높이고, 피로를최소로줄일수있도록실험대를정리하세요. 2. 반드시부피를설정하기전에팁을끼우고팁이잘끼워졌는지확인합니다. 3. 부피를설정합니다. 4. 시료에적합한피펫팅모드 ( 전진또는후진모드 ) 를선택합니다. 5. 사용한팁을제거하고교차오염이나피펫손상을방지하기위하여반드시세워서보관합니다. 3.1 실험테이블의배열실험대정리를위하여잠시만투자하세요! 실험공간은똑바로앉았을때오른쪽이되도록의자를조정하십히오. 가능하다면어깨높이아래에서손이동작할수있도록합니다. Gel loading처럼실험의높이를감소시킬수있는지의여부를판단하십시오. 테이블이나작업대를조절하는것이좋은방법입니다. 휴식시간을가지세요 가능하다면몇가지일들을주기적으로변화시켜가면서실험하세요. 서두르지말고적당한속도로실험하세요. 때때로피펫을놓고손을좀쉬게해주세요. 자주단시간휴식을취하는것이바람직합니다. 당신의앉은자리를변화시켜보세요. 등을뒤로젖힌후어깨와팔을풀어주세요. - 12 -
무난하게피펫팅을하기위하여특별히주의해야할사항몇가지 시간이나움직임을효율적으로사용하기위하여모든필요한물건들을손닿는곳에가져다놓는다. 가장자주사용하는물건들을앞에다놓고빈도수가적어질수록먼곳에위치하도록한다. 사용한팁을버리는용기뚜껑의높이는피펫의끝과동일해야한다. 3.2 일회용팁끼우기 Pipetman에일회용팁을끼우는방법은한손으로마이크로피펫을들고다른한손으로팁을피펫의 shaft에약간씩돌려가면서고정시키는것입니다. 약간씩돌려가면서팁을끼우는이유는팁을 shaft에단단하게고정시켜서밀폐가되도록해주기위함입니다. Pipetman을위한 Diamond 팁의경우손의접촉없이쉽게팁을끼우기위해서는 TIPACK 랙을이용할수있습니다. Distriman에 DistriTip을끼우는방법은사용매뉴얼을참고하시길바랍니다. Microman에캐필러리와팁을끼우기위해서는먼저푸쉬버튼을두번재멈추는부분까지누릅니다. 그러면피펫에서집게같은부분이나오게되는데그곳에피스톤과캐필러리를잘맞추어서끼우면됩니다. 오염을최대한으로막기위하여 Microman의캐필러리와피스톤은미리조립되어랙에담겨진후멸균된상태의제품으로이용하실수있습니다. Pipetman 8 200 Multichannel 피펫에팁을끼울때일반적인평평한랙을사용하면 8개가모두끼워지지않는경우가대부분일것입니다. 심지어는심하게두들겨서세게밀어야하는경우도생기게되는데이런방법은좋지않고, 특허받은둥근모양의 Rocky 랙을사용해보십시오. 아마도훨씬빠른속도로 8개의팁을모두끼울수있을것입니다. Important 팁은항상피펫제조업체가추천하는제품을사용하십시오. Important 팁을끼우지않은상태에서피펫을사용하지마십시오. - 13 -
심화학습... 3.3 부피를설정하는방법 부피를조정하는방법 한손으로피펫을잡고다른한손으로는 thumbwheel이나푸쉬버튼을돌린다. 푸쉬버튼을이용할경우한손으로편리하게부피를조정할수있습니다. 푸쉬버튼으로부피를조정할수있는것은 Microman과 1995년 4월이후에출시된 Pipetman입니다. 재현성을증가시킬수있는유용한힌트 부피설정은항상시계방향으로, 즉숫자가적어지는방향으로마무리를져야합니다. 이런방법을이용하면설사부품간에헐거워짐으로인하여기계적으로역행이생긴다고할지라도항상같은위치에머무르도록할수있습니다. 시계방향으로부피를설정하는방법은 : - 14 -
설정할부피가원래의부피보다줄어드는경우에는원하는숫자가나올때까지천천히 thumbwheel을천천히돌려줍니다. 필요한위치를넘어가지는마세요. 설정할부피가원래의부피보다큰경우에는원하는부피보다약 1/3쯤 thumbwheel을더돌린후에설정할부피로다시천천히돌려줍니다. 정확성을증가시킬수있는유용한힌트 시차에의한에러를피하기위하여부피눈금과설정선을눈과일직선이되게해주어야합니다. 그리고이때, 한쪽눈을감는것이훨씬더좋은방법이라는것을느끼실수있을것입니다. Important 피펫자체를손상시키지않기위하여해당하는부피범위를초과하지않는범위내에서부피를설정해주어야합니다. 3.4 전진 (Forward) 또는후진 (Reverse) 모드피펫팅교육 작동모드의선택은분석결과에상당히영향을줄수있습니다. Gilson 피펫은전진모드로보정이되어있습니다. 제조업체에서는작동과관련된모든모드에대한목록을작성하고기기를보정한모드를구체적으로명시해야합니다. 전진모드는 Pipetman 처럼일반적인공기치환방식피펫팅에서보편적으로사용되고있습니다. Microman 과같은직접치환방식피펫을전진모드로피펫팅할때에는 purge stroke 과정이없어집니다. 후진모드는단지공기치환방식피펫에만적용됩니다. 유기용매나약간점성이있는액체를피펫팅할때사용하면좋습니다. 닦아내기 크림과같이점성이있는시료의경우필요하다면깨끗한의료용 wipe를사용하여팁이나캐필러리의바깥쪽을닦아줍니다. 이때구멍에 wipe가접촉하면안됩니다. 저항력이있고보풀이없고산이나유기용매에안전한천을사용하십시오. 안전과위생을위하여사용한천은폐기처분합니다. Important 위험한실험을하는경우일회용부품을닦지마십시오. 또한침수깊이도 3 mm가넘지않도록주의해야하고용기의벽면에대고시료를분배하도록합니다. - 15 -
심화학습 Pre-rinsing ( 전처리세척 ) 분배하는과정에서균일성과정밀성을증가시키기위해서는모든분획에접촉하는표면적이동일해야합니다. 이는분배할시료와동일한액체로전처리세척을해주므로써성취할수있습니다. 전처리세척을할때에는용액을흡입한후원래의용기에분배하거나폐기처분합니다. 언제전처리세척을해야하나요? 전처리세척은아래의경우에시행되어야합니다. 팁을바꿀때마다 설정할부피가증가할때마다 Microman의캐필러리와피스톤, 그리고 Distriman의 DistriTip도전처리세척을거쳐야한다는사실을잊지마십시오. 공기치환방식 / 전진모드 1. 준비과정 (Preparation) 피펫을수직으로잡고첫번째정지지점까지푸쉬버튼을천천히누른다. 2. 흡입 (Aspiration) 피펫팁을액체에담그고원래의위치까지천천히푸쉬버튼을놓아준다. 모든액체가팁으로충분히올라올수있도록 1초정도기다린다. 3. 분배 (Distribution) 피펫팁을분배할용기의안쪽벽면에 10~45 정도기울여서푸쉬버튼을최초정지지점까지눌러서액체를분배한다. 4. 배출 (Purge) 1초정도기다린후에푸쉬버튼을두번째정지지점까지눌러서팁에남아있는용액의한방울까지밀어낸다. 피펫팁은용기벽면을쓸어올리면서벽면에서떼어낸다. - 16 -
공기치환방식 / 후진모드 1. 준비과정피펫을수직으로잡고두번째정지지점까지푸쉬버튼을천천히누른다. 2. 흡입 (Aspiration) 피펫팁을액체에담그고원래의위치까지천천히푸쉬버튼을놓아준다. 모든액체가팁으로충분히올라올수있도록 1초정도기다린다. 3. 분배 (Distribution) 피펫팁을분배할용기의안쪽벽면에 10~45 정도기울여서푸쉬버튼을최초정지지점까지눌러서액체를분배한다. 4. 재흡입 (Re-aspiration) 만약동일한시료이기에팁을그대로다시사용하기원한다면푸쉬버튼을최초정지점에서그대로유지시킨후 2번과정부터다시시작한다. 5. 배출 (Purge) 1초정도기다린후에푸쉬버튼을두번째정지지점까지눌러서팁에남아있는용액의한방울까지밀어낸다. 피펫팁을재사용하지않는다면팁을용기벽면을쓸어올리면서벽면에서떼어낸후제거한다. 직접치환방식 1. 준비과정 (Preparation) 피스톤을첫번째정지지점까지누르면피스톤이적당한위치로이동한다. 2. 흡입 (Aspiration) 캐필러리 / 피스톤을액체에담그고푸쉬버튼을원래의위치까지놓아준다. 피스톤이위로올라가면서대기압이캐필러리내부의구멍을통하여원하는부피만큼의액체를끌어올리게된다. - 17 -
3. 분배 (Distribution) 푸쉬버튼을첫번째정지지점까지누르면피스톤이내려오면서액체를캐필러리밖으로밀어낸다. 4. 팁의제거 (Ejection) 푸쉬버튼을두번째정지지점까지누르면캐필러리와피스톤은손의접촉없이도제거될수있다. Important 캐필러리와피스톤은직접치환방식피펫의부피측정부분입니다. 두파트모두가액체와접하는부분이기때문에그들은교차오염을피하기위하여자주교체해주어야합니다. 3.5 사용한팁의제거와피펫을수직으로세워서보관 오염된팁을만지지않기위해서는피펫의 ejector 부분을누르세요. Important 버려진팁에는액체가남아있게되는데후진모드로피펫팅을했을때에는더욱더심각하게됩니다. 일회용품을버릴때에는적당한조치를취해야합니다. 오토클레이브가가능한주머니는생화학적으로위험한폐기물들을처리하거나모으고오토클레이브하는데이용할수있습니다. 또한특별한주머니나안티-베타컨테이너는액체나고체방사능폐기물을위하여사용될수있습니다. 사용한팁은반드시제거해야합니다. 남아있는액체로인하여당신의피펫이손상될수도있습니다. 팁을바꿀때... 시료의분배를반복동일한액체를반복적으로분배할때에는같은피펫팁을사용하십시오. 이방법이경제적이고더효율이높습니다. 테스트를시작하기전에는전처리세척과정을거치는것이바람직합니다. 다른종류의액체를한번전달각각새로운액체를피펫팅할때에는새로운팁으로바꾸어주어야합니다. 이때에도역시전처리세척과정을거칠것을추천합니다. - 18 -
심화학습... 피펫스탠드의필요성 부식이나오염, 그리고손상을방지하기위해서는피펫스탠드가반드시필요합니다. 실험대위에피펫을눕혀놓을경우화학물질과접촉할수도있고떨어져서손상을입을수도있습니다. 피펫의 shaft 내부로액체가흘러들어가는것을방지하기위하여피펫은항상수직으로세워서보관해야합니다. 4. 오염방지 1. 실험시에피펫의오염을방지하기위해서는엄격한주의가필요합니다. ( 실험자의청결유지, 글로브착용, 적합한팁의사용등 ) 2. 이러한주의는 DNA를다루는 PCR과같이매우정밀하고민감한실험을할때더욱중요합니다. 3. 또한실험자는방사성동위원소의위험이나병원성미생물에의한감염에신경을써야합니다. 4.1 오염의종류와예방 개인적인노출방지 실험복, 글로브, 보호안경등을착용하고실험을하십시오. 실험대를깨끗하게유지합니다. 배기후드아래서실험을하십시오. 방사능보호대뒤에서실험을하십시오. 사용한팁이몸에접촉하지않도록주의해야합니다. 부서지지않은 capillaries와 pistons을사용하십시오. - 19 -
피펫에서시료로의오염 오염된피펫이나팁은시료를오염시킵니다. 멸균된팁을사용하십시오. 시료와접촉한부분은멸균또는세척하십시오. 각시료마다다른팁을사용하십시오. 시료에서피펫으로의오염시료나기포가피펫본체에들어가서오염이발생합니다. 실험시에시료가피펫내부로들어가지않도록주의하십시오. 피펫을지나치게기울이지마십시오. 피펫은항상수직으로보관하십시오. push-button은천천히누르면서사용하십시오. 기포에의한오염방지를위하여필터팁을사용하거나 aerosol barrier가부착된 positive displacement pipette을사용하십시오. 시료에서시료로의오염 ( 시료간의교차오염 ) 하나의시료를취하고나서다른시료를취할떄팁에묻어있는시료에의한오염으로인하여잘못된결과를얻을수있습니다. 각시료마다다른팁을사용하십시요. 4.2 Pipette 의오염제거방법 여러분의피펫이오염되었다면, 다음과정중에서적절한방법을선택하여오염을제거하십시오. 1 멸균 (autoclaving) 가장일반적이며, 멸균에의한오염제거방법입니다. Gilson 다이아몬드팁이나피펫의각부분을 121 (1 bar) 에서 20분정도처리합니다. 단, autoclaving으로제거되지않는성분이있습니다. ( 예 ) RNA Pipetman 에서 Autoclave 가능한부분 2 화학적인세척 오염되지않은피펫을제작사또는공급사에서서비스로세척하기위하여사용되는방법입니다. 세척방법 : 실험실기기세척용세제를초음파세척기에넣은후에 Pipetman을분해하여세척할부분을담가두면바이러스나박테리아, 그리고곰팡이에의하여오염된부분이세척됩니다. 이방법을사용할때에는세척후에피펫을물로헹군후에철저히건조를시켜야합니다. 참고 ) 2% 포름알데히드용액이일반적으로사용되고 (Johnson and Johnson 사의 CIDEX R ), 10% Clorox R 가 PCR 실험실에서 DNA template 를제거할때에많이사용됩니다. 그러나한가지용액으로모든오염요인을한번에제 거할수는없습니다. - 20 -
3 자외선멸균 표면을 300 nm에서 15분간자외선에노출시키는방법입니다. 그러나이방법은피펫을멸균할때에는잘사용되지 않습니다. 왜냐하면자외선은액체나증기와는달리피펫내부까지멸균할수없기때문입니다. 4 베타또는감마선멸균 이방법은 sterilized" 라는표시가있는제품에만사용할수있습니다. 투과된빛은피펫용품을제조하는데사용된플라스틱에매우효과가큽니다. 가격이비싸고특별한장치가필요하기때문에양이많을때사용하는것이바람직합니다. 참고 ) 플라스틱재질에따라감마선과베타선중에서선택 5 Ethylene oxide Ethylene oxide와 ehtylene chlorohydrin은매우독성이강하고돌연변이를유발시킬위험이크기때문에빛에 의하여모양이변형되는플라스틱에만사용하는것이바람직합니다. 5. 피펫점검및관리 1. 피펫은최적의성능을유지하면서오랫동안사용하기위하여적어도일년에한번씩완벽한서비스를받아야합니다. 2. 사사로운문제에접했을때에는실험실에서잘못된부분을수리하는것이바람직합니다. * 경고 : Gilson 부품만을사용해야함 3. Pipetman 2분점검포스터는잘못된부분을점검하고실험실에서해결할수있는문제인지서비스를의뢰해야할지를결정하는데도움이됩니다. 1단계 : 제조일확인 2단계 : 기능확인 3단계 : 누수확인 4단계 : 분해 5단계 : 재조립 Important 장갑을끼지않은채임의의피펫을만지지않는다. 왜냐하면내가만진피펫이오염된피펫일수도있기때문이다. 5.1 신속한진단 : Pipetman 2 분점검 1 단계 : 제조일확인 피펫의고유번호와나이를확인하기위하여 serial number를사용합니다. 마지막서비스를받은날짜를확인합니다. - 21 -
심화학습내피펫의나이는? 모든 Gilson 피펫은제조일을확인하기위하여 serial number를가지고있습니다. 예 ) A10369H 최초문자 A : 제조된연도, 숫자 10369 : 제조번호, 마지막문자 H : 제조된월 문자 연도 문자 연도 A 1984 A 1월 B 1985 B 2월 C 1986 C 3월 D 1987 D 4월 E 1988 F 5월 G 1989 G 6월 H 1990 H 7월 J 1991 J 8월 K 1992 K 9월 L 1993 L 10월 M 1994 M 11월 N 1995 N 12월 P 1996 Q 1997 R 1998 S 1999 T 2000 2 단계 : 피펫의기능점검 푸쉬버튼을사용하여전범위를확인합니다. (1995년이전의피펫의경우푸쉬버튼대신에피펫의 thumbwheel을사용 ) - thumb wheel은부드럽게움직여야합니다. - 최대값과최소값은사용설명서에제시된범위와일치해야합니다. - 부피를표시하는디스플레이부분이일자로정렬되어야합니다. 최대값으로부피를설정한후에푸쉬버튼을천천히눌러봅니다. - 움직임이부드러워야합니다. Ejector가제대로작동되는지살펴보기위하여 Gilson 팁을끼운후에팁 ejector를눌러봅니다. 심화학습 피스톤의부식을방지할수있는방법 피스톤이부식성이강한액체에접했다면부드러운티슈에알콜을묻혀닦고떨어지거나긁히지않도록주의해야합니다. ( 자세한내용은 1.2절을참고 ) - 22 -
심화학습팁이잘맞지않을때에는어떻게해야하나요? Gilson 피펫에는 Gilson 팁을사용합니다. 팁 Ejector를제대로끼우기위하여위로밀어봅니다. 알콜로피펫홀더를닦아줍니다. 만약홀더가낡았거나화학적으로손상되었다면새것으로교체해주십시오. 3 단계 : 누수확인 Pipetman P1000 ~ P10ml의경우 - 부피를최대로설정한후증류수를흡입합니다. - 20초동안기다려봅니다. 만약이때팁끝부분에방울이맺히면누수가있는것입니다. Pipetman P2 ~ P200의경우 - 부피를최대로설정한후증류수를흡입합니다. - 20초동안기다려봅니다. 1 만약이때팁끝부분에방울이맺히면누수가있는것입니다. 2 방울이맺히지않으면테스트한용액에팁을다시담가봅니다. - 담가본후에팁내부의수위가일정하게유지되어야합니다. 이때수위가낮아지면누수가있는것입니다. 심화학습누수의주요원인은무엇일까요? 팁홀더가긁혔거나손상된경우 Gilson 팁을사용하지않았을경우 Gilson Seal을사용하지않았을경우 유기용매의증기압떄문에 심화학습어떻게유기용매가누수의원인이되는지... 공기치환방식피펫으로유기용매를피펫팅할때주로누수가발생하는데, 이현상은피스톤과시료간의공기쿠션압력과 용매의증기압차에서비롯됩니다. 해결책 : 1 공기쿠션이없는직접치환방식의피펫을사용하십시오. 2 공기치환방식피펫을사용할경우피펫내부의공기쿠션을용매의증기 ( 용매를반복해서흡입하고분배할때발생 ) 로포화시킵니다. 압력의평형이이루어지면누수는중단될것입니다. - 23 -
4 단계 : 분해 Important 극미량피펫인 P2와 P10은부품의크기가매우작습니다. 따라서실험실에서분해하지않도록주의를기울여주십시오. 피펫을점검하기위하여피펫의아랫부분을분해합니다. 분해과정 - 팁제거 - 팁이젝터 (1) 를뺌 - 연결고리 (2) 를풀어줌 - 피펫의아랫부분 (3) 에서핸들부분 (4) 을분리 - 팁홀더 (6) 에서피스톤을분리 - 피스톤표면과 seal, O'ring을점검 피펫의윗부분 (4) 을분해하시마십시오. 5 단계 : 재조립 부품의손실과손상을방지하기위하여피펫을분해한후바로다시조립을해야합니다. - 이때부품이순서에맞게조립되었는지확인 : Seal을 O'ring보다먼저피스톤에끼워야함. 5.2 스스로해결해야할지, 서비스를의뢰해야할지 문제점피펫을구입한지 1년이넘었고과거 12개월내에서비스를받지않았다. Push button, connecting nut, piston seal, O'ring, tip holder, 그리고 tip ejector이손상됨 (P2와 P10을제외한나머지모델 ) P2와 P10에문제가생김 해결방안 Gilson 한국분석기기 ( 주 ) 로서비스의뢰부품을주문하여실험실내에서교환 ( 피펫의성능에영향을주면안됨 ) Gilson 한국분석기기 ( 주 ) 로서비스의뢰 - 24 -
6. 피펫의조절과보정 피펫과액체의관계는저울과고체의관계와도같습니다. 저울을비롯한모든정밀기기는정기적으로검사를받고세척해야하며제조시의규격에맞게실행되도록 calibration되어야합니다. 5장에서는피펫의성능검사, 세척, 그리고유지보수하는방법을설명하였습니다. 이장에서는규격 (specification) 에대하여공부하고여러분피펫의보수필요성여부를결정하는방법에대하여알아보겠습니다. 6.1 Specification 이란무엇인가? Specification은제조자에의하여설정됩니다. 이것은임의로설정된부피에서피펫의정확성과정밀성, 그리고성능을보장해줍니다. 아래의표는올바르게관리된 pipetman P1000을동일한환경에서 200, 500, 1000 μl를각각설정한후에얻어진결과를보여주고있습니다. Specification 1 부피 정확성 (Accuracy) 정밀성 (Precision) 평균오차 재현성 μl E (μl) E (%) S.D. (μl) R.S.D. (%) 200 ±3 ±1.5 0.6 0.30 500 ±4 ±0.8 1.0 0.20 1000 ±8 ±0.8 1.5 0.15 위의 Specification은 Foward Mode를사용하여얻어진결과입니다. 무게법 (gravimetric method) 은 21~22 에서안정된조건에서동일한온도의증류수를사용하였습니다. 이값은일반적으로손에의해서발생하는열과팁의교체에의한오차를포함하고있습니다. 심화학습 정확성과정밀성의정의 정확성 (Accuracy) 이란? 정밀성 (Precision) 이란? 정밀성은기기가어떤값에유사하게반복적으로응답정확성은기기가참값에가깝게응답을할수있는능할수있는능력을말합니다. 또한정밀성은 재현성 이력을말합니다. 나 반복성 으로언급되기도합니다. 정확하지만정밀하지않음정밀하지만정확하지않음정확하고정밀함 - 25 -
6.2 부피의정확성과정밀성을계산하는방법 정확성 과 정밀성 은정성적인용어이다. 이에대응하는정량적인용어는 systematic error( 계통오차 )" 와 "random error( 우연오차 )" 입니다. 정확성평가 정확성은계통오차의극한값으로서실제로측정한평균부피값과기기에설정된부피값의차로나타낼수있습니다. 계통오차 (E) 는다음과같이구할수있습니다. E = V - V 0 E = 계통오차, V 0 = 설정된부피, V = 평균부피 n V = 1 n Σ i =1 Vi Vi= 각각의측정부피, n = 측정한수 피펫의정확성은설정부피의퍼센트값으로표현되고있습니다. E% = - V V 0 V 0 100 Important 평균값과반복수가언급되어야하고사용된실험과정은다른사람이그방법대로시행할수있도록명기되어야합니다. 정밀성평가정밀성은우연오차의극한값으로서평균값주위의측정값분포를의미합니다. 피펫에서정밀성은반복성으로언급될수도있습니다. 우연오차는동일한측정조건에서설정된부피에서시행된측정값의표준편차에의하여나타낼수있다. 표준편차는다 음과같습니다. SD = n ( _ V V i ) 2 Σi =1 n 1 V = 평균부피 n V = 1 n Σ i =1 Vi Vi= 각각의측정부피, n = 측정한수 피펫의정밀성도정확성과같이평균부피의퍼센트값으로표현됩니다. 이는상대표준편차 (RSD) 나 Coefficient of Variation(CV) 로알려져있으며다음과같이구할수있습니다. SD RSD = _ V 100-26 -
6.3 무게법사용 무게법이피펫제조업자와국제표준기관에의하여추천되고있습니다. 이는피펫에의하여운반된물의무게를재는것을기초로하고있습니다. 이방법을실행하기위해서는정해진대로실행환경이엄격하게지켜져야하고장비를질서정연하게사용해야합니다. 일반적인사항 Gilson 피펫은테스트하는동안손에의하여열이발생하는현상을고려하여디자인되었지만평가대상인피펫이손에의하여지나치게열이발생되는일은없어야합니다. 온도 : 21.5±1.5 (70.7±2.7 F, 293-296 K) 압력 : 1013±25hPa(mbar) (14.5±0.36psi) 상대습도 : 45~75% 참고 : 이조건을벗어난상태에서테스트를할경우에는 conversion table(μl/mg) 에의하여보정해주어야합니다. 필요한기구 보정된온도계 : 테스트가시작될때와끝날때의물의온도와실온을측정하기위하여눈금간격이 0.1 인온도계가 필요 습도계 : 테스트하는동안습도가일정하게유지되는지확인하기위하여필요 기압계 : 대기압을측정하기위하여필요 증류수 : 탈기된증류수를사용해야하고하루에두번교환 저울 : 다음표를충족시키거나초과하는저울을사용 부피 (μl) 감도 (mg) 표준편차 (mg) Class IOLM* 0.1~20 0.001 0.002 E 2 21~200 0.01 0.02 E 2 201~10000 0.1 0.2 E 2 * International Organisation of Legal Metrology 용기 : 다음의기준을준수 피펫부피시료보관용기시료무게측정용기저울다른기구 P2~P20 0.1 Ø35mm Ø10.5mm 10-6 g 뚜껑 F2~F25 20μL H50mm H13mm 핀셋 M10 M25 at 3μL M100 at 10μL P100~P200 8 200 20 Ø35mm Ø21mm 10-5 g 뚜껑 F50~F200 200μL H50mm H50mm M25~M50 M100 at 100μL M250 P1000~P5000 200 Ø50mm Ø35mm 10-4 g - F250~F1000 5000μL H70mm H50mm M1000 P10mL >5mL Ø35mm Ø35mm 10-4 g - H50mm H50mm - 27 -
6.4 성능정검과정 1.. 칭량용기에소량의증류수를넣는다. 2.. 팁이나캐필러리 / 피스톤을끼운다. 3.. 가변형피펫의경우테스트할부피를설정한다. 일반적으로최대, 최소부피를설정한다. 4.. 먼저팁을 pre-rinse한다. 5.. 실온과물의온도, 습도, 그리고압력을기록한다. 6.. 저울을 reset 7.. 저울이안정되면전진모드를이용하여시료를흡입한다. 8.. 저울문을열고칭량용기를올려놓은후에시료를넣고저울문을닫는다. 9.. 측정된무게 (Wi) 를기록한다. 10.. 테스트에필요한만큼위의과정을여러번반복 (n) 한다. 11.. 20μL 이하의시료는칭량용기에다른시료를첨가하지않은상태에서 6~8번과정을반복하여증발손실량을측정해야한다. 12.. 온도, 습도, 압력을기록한후값이추천된범위내에있는지확인한다. 13.. 보정 (Z) 여부를결정하기위하여온도와압력의최초값과두번째값을평균해서사용한다. 14.. 정확성과정밀성을계산한후 Specification과비교해본다. 6.5 테스트실행시기 정확성과정밀성은분석결과에직접적으로영향을주기때문에각각의피펫은정기적으로제조당시의 specification와비교하는과정이필요합니다. 무게분석법은피펫의성능을테스트하는방법으로널리알려져있습니다. 피펫성능정검빈도표 빈도 테스트 방법 매일 누수테스트 2분점검 참고 매주 정확성정검 4번측정 6개월마다 정확성과정밀성정검 10번측정 서비스받은후 정확성과정밀성확인 30번측정 Important 중력법을이용하여테스트를실행하기전에반드시피펫의기계적인결함을 2분점검 을참고하여확인해야합니다. - 28 -
Gilson Guide to Pipetting 한국분석기기 ( 주 ) Tel : (02) 515-8525(Rep.) / Fax: (02) 547-1023, 547-1024 Address : 서울시강남구논현동 223-15 ( 길슨센타 ) ( 135-829) http://www.kaisco.co.kr / E-mail : kaisco@kaisco.co.kr - 29 -