(52) CPC 특허분류 A61Q 19/007 ( ) A61Q 19/08 ( ) C12N 15/746 ( ) - 2 -

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1 (19) 대한민국특허청 (KR) (12) 공개특허공보 (A) (51) 국제특허분류 (Int. Cl.) A61K 35/744 ( ) A61K 8/99 ( ) A61Q 19/00 ( ) A61Q 19/08 ( ) C12N 15/74 ( ) (52) CPC 특허분류 A61K 35/744 ( ) A61K 8/99 ( ) (21) 출원번호 (22) 출원일자 ( 국제 ) 2013 년 08 월 07 일 심사청구일자 없음 (85) 번역문제출일자 2015 년 03 월 09 일 (86) 국제출원번호 PCT/US2013/ (87) 국제공개번호 WO 2014/ 국제공개일자 (30) 우선권주장 2014 년 02 월 13 일 61/680, 년 08 월 07 일미국 (US) 61/836, 년 06 월 18 일미국 (US) (11) 공개번호 (43) 공개일자 2015년06월12일 (71) 출원인 탑제닉스, 인크. 미국, 캘리포니아 94025, 멘로파크, 유니트에이, 2 콜맨피엘 (72) 발명자 큐빗 - 라츠노가 미국 캘리포니아주먼로파크콜만플레이스 2 유닛에이 알트만타헬 미국 캘리포니아주먼로파크콜만애비뉴 862 아파트먼트제이 (74) 대리인 김진회, 김태홍 전체청구항수 : 총 37 항 (54) 발명의명칭관심있는화합물을발현하는형질전환된박테리아를포함하는국소조성물 (57) 요약 국소적용용으로조제된형질전환박테리아의집단을포함하는조성물을기술한다. 형질전환박테리아의집단은비병원성박테리아로부터생성하였고치료또는미용목적을위해관심있는화합물을발현하도록형질전환되었다. 일실시양태에서, 이러한조성물은자외선으로부터피부를보호하기위한것이다. 대표도 - 1 -

2 (52) CPC 특허분류 A61Q 19/007 ( ) A61Q 19/08 ( ) C12N 15/746 ( ) - 2 -

3 명세서청구범위청구항 1 관심있는화합물을발현하도록형질전환된비병원성박테리아의집단 (population) 을포함하고, 피험체에국소적용을위해제제화된조성물. 청구항 2 제1항에있어서, 비병원성박테리아의집단은관심있는화합물을발현하는생 (live) 박테리아의집단인조성물. 청구항 3 제2항에있어서, 비병원성박테리아의집단은약독화전또는후또는사멸전에관심있는화합물을발현하는약독화박테리아또는사멸박테리아인조성물. 청구항 4 제3항에있어서, 비병원성박테리아의집단은형질전환된, 비병원성박테리아의단편을포함하는것인조성물. 청구항 5 제 1 항에있어서, 형질전환된박테리아는cm2당약 10 2 조성물. 이상의박테리아를제공하도록조성물로제제화되는것인 청구항 6 제1항에있어서, 화합물은자외선광을흡수또는반사할수있는것인조성물. 청구항 7 제6항에있어서, 화합물은자외선 A( nm), 자외선 B( nm), 또는둘모두를흡수또는반사할수있는것인조성물. 청구항 8 제6항에있어서, 형질전환된박테리아에의해발현되는관심있는화합물은마이코스포린아미노산유사분자 (MAA; 글리코실화되거나또는올리고당에공유결합됨, 올리고당연결된 MAA, 세포내또는세포외 ), 가두솔 (gadusol), 데옥시가두솔, 4-데옥시가두솔 (S2), 시노린 (shinorine), 포피라 (porphyra)-334, 팔리틴 (palythine), 팔리텐 (palythene), 아스테리나 (asterina)-330, 팔리티놀 (palythinol), 마이코스포린-글리신, 마이코스포린세리놀, 마이코스포린-타우린, 마이코스포린-글리신-발린, 마이코스포린-2-글리신, 마이코스포린-글리신-글루탐산, 마이코스포린-글루탐산- 글리신, 마이코스포린-메틸아민- 세린, 마이코스포린-메틸아민- 트레오닌, 우수지렌 (usujirene), 데히드록실우수지렌, 플레이텐산 (playthenic acid)-337, 플레이텐산-335, 팔리틴-세린, 팔리틴-트레오닌, 팔리틴-트레오닌-설페이트, 플레이틴 (playthine)-세린-설페이트, 유할로테스 (euhalothece), 마이코스포린-알라닌 (2-(e)-2,3-디히드록시프로-1-에닐리미노 -마이코스포린-알라닌), 및스시토네민 (scytonemin) 으로이루어진군에서선택되는것인조성물. 청구항 9 제1항에있어서, 관심있는화합물은건선을치료하기위한것인조성물. 청구항 10 제9항에있어서, 화합물은레티노이드, 비타민 A, 비타민 A의유도체, 베타-카로텐, 비타민 D, 비타민 D의유도체, 항염증성사이토킨으로이루어진군에서선택되는것인조성물

4 청구항 11 제1항에있어서, 관심있는화합물은항산화제인조성물. 청구항 12 제11항에있어서, 화합물은레스베라트롤, 비타민 E, 비타민 C, -에피갈로카테킨-3-갈레이트, 및레티닐팔미테이트 ( 레티노이드 ), 루테인, 타마린드, 플라보노이드, 피크노제놀, 리코펜으로이루어진군에서선택되는것인조성물. 청구항 13 제1항에있어서, 관심있는화합물은미용 (cosmetic) 효과를제공하는것인조성물. 청구항 14 제13항에있어서, 화합물은코엔자임 Q10, 티로시나아제, 콜라겐, 라미닌, 세라미드, 리놀레산, 트레티노인, 타자로텐및콜라겐으로이루어진군에서선택되는것인조성물. 청구항 15 제13항또는제14항에있어서, 미용효과는항노화인조성물. 청구항 16 제13항에있어서, 미용효과는보습인조성물. 청구항 17 제1항에있어서, 관심있는화합물은습진을치료하는것인조성물. 청구항 18 제17항에있어서, 화합물은코르티손, 타크롤리무스및시클로스포린으로이루어진군에서선택되는것인조성물. 청구항 19 제1항에있어서, 관심있는화합물은체취 (body odor) 를예방하거나또는억제하는것인조성물. 청구항 20 제1항내지제19항중어느한항에있어서, 형질전환된박테리아의집단은얼굴에국소적용을위해제제화되는것인조성물. 청구항 21 제1항내지제20항중어느한항에있어서, 형질전환된박테리아의집단은인간피부상에거주하는비병원성박테리아의집단으로부터생성되는것인조성물. 청구항 22 제1항내지제21항중어느한항에있어서, 형질전환된박테리아의집단은아시네토박터 (Acinetobacter), 악티노마이세탈레스 (Actinomycetales), 언에어로코커스 (Anaerococcus), 바실라레스 (Bacillales), 비피도박테리움 (Bifidobacterium), 엔히드로박터 (Enhydrobacter), 엔테로코커스 (Enterococcus), 피네골디아 (Finegoldia), 카르노박테리움 (Carnobacterium), 코리네박테리움 (Coryneobacterium), 락토바실러스 (Lactobacillus), 락토코커스 (Lactococcus), 류코노스톡 (Leunconostoc), 마크로코커스 (Macrooccus), 마이크로코시네애 (Micrococcineae), 오에노코커스 (Oenococcus), 페디오코커스 (Pediococcus), 펩토니필루스 (Peptoniphilus), 프로피오니박테리움 (Propionibacterium), 살리니코커스 (Salinicoccus), 스핑고모나스 (Sphingomonas), 스트렙토코커스 (Strepococcus), 테트라게노커스 (Tetragenoccus), 및웨이셀라 (Weissella) 로이루어진군내의박테리아로부터 - 4 -

5 선택되는비병원성박테리아구성원 (member) 으로부터생성되는것인조성물. 청구항 23 제22항에있어서, 형질전환된박테리아는프로피오니박테리움액크네스 (Propionibacterium acnes), 코리네박테리움의병원성균주, 에스. 아우레우스 (S. aureus), 또는에스. 에피데르미디스 (S. epidermidis) 가아닌것인조성물. 청구항 24 제1항내지제23항중어느한항에있어서, 형질전환된박테리아의집단은락토바실러스카세이 (Lactobacillus casei), 락토바실러스레우테리 (Lactobacillus reuteri), 락토바실러스액시도필루스 (Lactobacillus acidophilus), 락토바실러스젠세니이 (Lactobacillus jensenii), 비피도박테리움롱굼 (Bifidobacterium lognum), 비피도박테리움레우테리 (Bifidobacterium reuteri), 비피도박테리움락티스 (Bifidobacterium lactis), 비피도박테리움브레베 (Bifidobacterium breve), 비피도박테리움애니말리스 (Bifidobacterium animalis), 프로피오니박테리움액시디프로피오니시 (Propionibacterium acidipropionici), 프로피오니박테리움프레우덴레이키이 (Propionibacterium freudenreichii), 프로피오니박테리움토에니이 (Propionibacterium thoenii), 및프로피오니박테리움젠세니이 (Propionibacterium jensenii) 로이루어진군내의박테리아로부터선택되는박테리아로부터생성되는것인조성물. 청구항 25 제1항내지제24항중어느한항에있어서, 형질전환된비병원성박테리아구성원의집단은감마-프로테오박테리아 (proteobacteria), 알파-프로테오박테리아, 및박테리오데테스 (bacteriodetes) 로이루어진군에서선택되는문 (phylum) 내의박테리아로부터생성되는것인조성물. 청구항 26 제22항내지제24항중어느한항에있어서, 형질전환된박테리아의집단은비병원성피부박테리아의집단으로부터생성되는것인조성물. 청구항 27 제1항내지제26항중어느한항에있어서, 형질전환된박테리아의집단은크림, 로션, 에멀젼, 연고, 또는액체로서국소적용을위한조성물로제제화되는것인조성물. 청구항 28 제 27 항에있어서, 형질전환된박테리아의집단은cm2당약 10 2 는것인조성물. 이상의박테리아를제공하도록조성물로제제화되 청구항 29 제1항내지제28항중어느한항에따른조성물을국소투여하는단계를포함하는치료방법. 청구항 30 치료또는미용목적을위해피부에화합물을전달하는방법으로서, 관심있는화합물을발현하도록형질전환된비병원성박테리아의집단을포함하는조성물을피부에적용하는단계를포함하고, 박테리아의집단은피부미생물체 (skin microbiome) 의박테리아균주를포함하는것인전달방법. 청구항 31 제30항에있어서, 비병원성박테리아의집단은관심있는화합물을발현하는생박테리아인전달방법. 청구항 32 제30항에있어서, 비병원성박테리아의집단은약독화전또는후또는사멸전에관심있는화합물을발현하는 - 5 -

6 약독화박테리아또는사멸박테리아인전달방법. 청구항 33 제32항에있어서, 비병원성박테리아의집단은형질전환된, 비병원성박테리아의단편을포함하는것인전달방법. 청구항 34 피부미생물체유래의비병원성박테리아의집단을포함하는조성물로서, 박테리아의집단의적어도일부가관심있는화합물을발현하도록형질전환되고, 조성물은피험체에국소적용을위해제제화된것인조성물. 청구항 35 제34항에있어서, 비병원성박테리아의집단은관심있는화합물을발현하는생박테리아의집단인조성물. 청구항 36 제34항에있어서, 비병원성박테리아의집단은약독화전또는후또는사멸전에관심있는화합물을발현하는약독화박테리아또는사멸박테리아인조성물. 청구항 37 제36항에있어서, 비병원성박테리아의집단은형질전환된, 비병원성박테리아의단편을포함하는것인조성물. 발명의설명 [0001] [0002] [0003] [0004] 기술분야관련출원의교차참조본원은 2012년 8월 7일자로출원된미국가출원제61/680,620호및 2013년 6월 18일자로출원된미국가출원제 61/836,594호 ( 이들각각은온전히그대로본원에참고로도입됨 ) 의이익을주장한다. 기술분야본원에기재된보호대상은피부과분야, 보다구체적으로국소치료, 미용또는피부과목적을위한분자또는화합물을발현하는형질전환된박테리아 ( 세균 ) 를포함하는치료조성물및방법에관한것이다. [0005] [0006] [0007] 배경기술통상적으로국소적용된약제로치료되는광범위한피부과장애및질병이존재한다. 일부치료에서, 상기약제는치료목적, 예를들면, 건선, 습진또는피부염을치료하거나호전시키기위해제공된다. 다른치료에서, 상기약제는미용또는보호효과, 예컨대, 피부미백제또는탈색제, 또는자외선차단제효과를제공한다. 미용및의학목적을위한약제의국소적용은일부한계를갖는다. 예를들면, 적용된약제는피부로부터용이하게떨어져나갈수있고약제가적용되는제제가천연피부미생물총 (microbiota) 의균형을방해할수있는화학물질을포함할수있다. 크림및연고는지저분하고, 미끄럽고번거로울수있고, 환자는한정된영역및단지특정해부학적부위상에서한정된수의병변만을치료할수있다. 그결과, 국소제제에대한거의 35% 처방전이약국카운터뒤에남아있고, 환자는국소처방전을가져가지않기로선택한다. 대조적으로, 전신약제용처방전은훨씬더잘지불되고, 이때 14% 만이상환되지않았다고보고된다 (Storm, A. et al., J. Am. Acad. Dermatol., 59:27-33 (2008)). 얼마나자주얼마나많이적용하는지에대한환자의이해의관점에서국소치료의단점도존재한다. 단지한예로서자외선차단제의경우, 사람들은전형적으로권장된것보다절반미만의두께로보다덜빈번하게자외선차단제를적용하므로, 그들의보호를실질적으로손상시킨다 (Stern, R.S., N Engl J. Med, 350: (2004)). 의학, 미용및예방목적을위한보다효과적인국소치료조성물에대한필요성이남아있다. 예를들면, UV가피부암또는광노화의증가하는발생에대한주요원인이기때문에보다효과적인 UV 보호에대한필요성은전세계적으로인식되어있다. 또다른예로서, 효과적인장기간치료법을이용한건선및습진, 및다른피부장 - 6 -

7 애의국소치료가필요하다. [0008] 건강한인간표피는모든사람들에서총피부미생물체 (microbiome) 의약 60% 를보유하는주요 5 개목 (order) 으 로부터의박테리아구성원들을포함하는수천개의박테리아종들에의해콜로니화된다. 건강한인간표피는입 방센티미터당평균대략 10 8 개의박테리아를생성하는수조개의박테리아세포들에의해콜로니화된다. 피부미생물총은피부의독특한속성을활용하고피부생태계를건강한균형으로유지하기때문에숙주와공생관계로진화되었다 (Grice A. E., Science, 324: (2009). 상이한피부과필요성을위해피부박테리아를사용하는치료법은피부의천연생태계를유지할수있을것이고특정피부과필요성을해결하기위해천연피부박테리아를증강시킬것이다. [0009] [0010] [0011] 면역억제를유발하는스트레스조건하에서피부의면역기능을개선하기위한, 구체적으로피부의면역활성을정상화하고이러한조건하에서과다반응을발생시킬경향을감소시키기위한프로바이오틱 (probiotic) 미생물의사용은당분야, 예를들면, 유럽특허제 호에기재되어있다. 피부안색의광채손상을치료하고 / 하거나예방하는데에유용한활성제로서프로바이오틱미생물의미용용도도기재되어있다 ( 미국특허공보제 2012/ 호 ). 프로바이오틱만의사용은국소피부치료를위한한방법이지만, 보다긴기간및 / 또는보다강력한방법에대한필요성이남아있다. 형질전환된박테리아는식품, 약학및생체촉매적용을위한재조합단백질및다양한분자의생성을위해현대생명공학에서집중적으로사용되고있다. 이종유전자에의해코딩된단백질을생성하고분비할수있는박테리아는약학단백질, 예컨대, 인간및동물성장호르몬, 인슐린, 인터페론, 사이토킨등의산업적제조를위해광범위하게사용된다. 따라서, 산업적제조를위해지금까지사용되거나제안된이. 콜라이이외의유기체는배양된포유동물및곤충세포, 효모및진균, 및다수의바실러스 (Bacillus) 종을비롯한다양한박테리아종을포함한다. 산업적목적을위해이미널리사용되는박테리아들중에는발효된식품을위한출발배양물, 향증강제및보존제로서사용되는젖산박테리아가있다. 이들성질은특정효소, 젖산및무해한항미생물폴리펩티드, 예컨대, 니신을생성하는이들유기체들의능력에의존한다 ( 예를들면, 미국특허제6,221,648호참조 ). 관련된분야및이와관련된한계의상기예는설명하기위한것이고배제하기위한것이아니다. 관련된분야의다른한계는본명세서를읽고도면을연구할때당업자에게명확해질것이다. [0012] [0013] [0014] [0015] [0016] 발명의내용이하에기재되고설명되는하기양태들및이들의실시양태는예시하고설명하기위한것이고범위를한정하기위한것이아니다. 한양태에서, 대상체에게국소적용되도록제제화된형질전환된박테리아집단을포함하는조성물을제공하고, 이때형질전환된박테리아집단은관심있는화합물을발현하도록형질전환된비병원성박테리아로부터생성된다. 한실시양태에서, 비병원성박테리아집단은인간피부상에서천연적으로발생하는박테리아를포함한다. 즉, 상기집단내의박테리아는인간피부미생물체로부터유래된다. 또다른실시양태에서, 비병원성박테리아집단은관심있는화합물을발현하는, 한실시양태에서관심있는화합물을만성적으로발현하는생 ( 살아있는 ) 박테리아집단이다. 또다른실시양태에서, 비병원성박테리아집단은온전한약독화된박테리아또는사멸된 ( 죽은 ) 박테리아또는이의단편의집단이고, 이때약독화또는사멸전의박테리아는관심있는화합물을발현하였다. 한실시양태에서, 관심있는화합물은자외선을흡수할수있거나반사할수있는화합물이다. 또다른실시양태에서, 상기화합물은자외선 A(320 내지 400 nm), 자외선 B(315 내지 280 nm) 또는이들둘다를흡수할수있거나반사할수있다. 또다른실시양태에서, 형질전환된박테리아에의해발현된관심있는화합물은하기화합물들로구성된군으로부터선택된다 : 마이코스포린 (mycosporine), 가두솔 (gadusols), 옥소-마이코스포린 (oxo-mycosporines), 이미노 -마이코스포린및마이코스포린유사아미노산 (MAA), 스시토네민 (scytonemin), 멜라닌 (melanines), UV-스크리닝 / 관찰아미노산유사분자, 플라보노이드 (flavonoids), 베탈라닌 (betalanines), UV-스크리닝 / 관찰색소 ( 예를들면, 카로테노이드 (carotenoids)/ 카르테노단백질, 잔토필 (xanthopylls) 및포피린 (porphyrin)-기제/ 헴 (heme)-포피린-기제 ), UV-스크리닝 / 관찰보조인자 ( 예를들면, 테트라하이드로바이오프테린 (tetrahydrobiopterin)), 페닐프로파노이드 (phenylpropanoids), 폴리페놀 (polyphenol)( 예를들면, 탄닌 (tannins)), 피크노제놀 (pycnogenol), 티로시나제 (tyrosinases)( 및이의기질및생성물 ), 알파하이드록시산 (AHA), 다당류 ( 예를들면, 글리코스아미 - 7 -

8 노글리칸 (GAG) 또는점막다당류 ), 피부관련보조인자, 비타민 E, 중합체및추가피부관련천연화합물, 예컨대, 콜라겐, 케라틴, 엘라스틴, 리놀레산, 라미닌 (laminin), 트레티노인 (tretinoin), 타자로텐 (tazarotene), 사르가퀴노산 (sargaquinoic acid), 사르가크로메놀 (sargachromenol), 푸코잔틴 (fucoxanthin), 레티노이드, 소염사이토킨 ( 예컨대, IL-2), 코르티손 (cortisone), 타크롤리무스 (tacrolimus), 시클로스포린 (ciclosporin), 레스베라트롤 (resveratrol), 갈로카테콜 (gallocatechol), 갈로카테킨 (gallocatechin), 에피갈로카테킨갈레이트 (epigallocatechin gallate), 레티노이드, 비타민 A, 비타민 A 유도체, 베타-카로텐, 비타민 D, 비타민 A 유도체, 보습화합물 ; 코르티손, 타크롤리무스및시클로스포린, DNA 복구효소 ; 포토리아제 (photolyase), 엔도뉴클레아제 (endonuclease) 및글리코실라제 (glycosylase). [0017] 또다른실시양태에서, 형질전환된박테리아집단은조성물로 cm 2 당적어도약 10 2 개의박테리아, 또는 cm 2 당 적어도약 10 3 개, 10 4 개, 10 5 개또는 10 6 개의박테리아를제공하도록제제화된다. [0018] [0019] [0020] [0021] [0022] [0023] [0024] [0025] [0026] [0027] 또다른실시양태에서, 조성물은대상체에게국소적용되도록제제화된제2 형질전환된박테리아집단을포함하고, 이때상기제2 형질전환된박테리아집단은 (i) 조성물중의제1 형질전환된박테리아집단과상이한비병원성박테리아로부터생성되거나, (ii) 조성물중의제1 형질전환된박테리아집단에의해발현된관심있는제1 화합물과상이한관심있는화합물을발현하도록형질전환된다. 다른실시양태에서, 조성물은적어도 1개의형질전환된박테리아집단, 적어도 2개의형질전환된박테리아집단, 또는 2개이상의형질전환된박테리아집단을포함한다. 한실시양태에서, 제2 비병원성박테리아집단은인간피부미생물체로부터유래된다. 또다른실시양태에서, 제2 비병원성박테리아집단은관심있는화합물을발현하는, 한실시양태에서관심있는화합을만성적으로발현하는살아있는박테리아집단이다. 또다른실시양태에서, 제2 비병원성박테리아집단은온전한약독화된박테리아또는사멸된 ( 죽은 ) 박테리아또는이의단편의집단이고, 이때약독화또는사멸전의박테리아는관심있는화합물을발현하였다. 또다른실시양태에서, 관심있는화합물은건선을치료하기위한화합물이다. 예시적인화합물은레티노이드, 비타민 A, 베타-카로텐, 비타민 D 및소염사이토킨으로구성된군으로부터선택된화합물을포함하나이것으로한정되지않는다. 한실시양태에서, 관심있는화합물은항산화제이다. 또다른실시양태에서, 화합물은레스베라트롤, 비타민 E, 비타민 C, 에피갈로카테킨-3-갈레이트및레티닐팔미테이트 ( 레티노이드 ), 루테인 (lutein), 타마린드 (tamarind), 플라보노이드, 피크노제놀및리코펜 (lycopene) 으로구성된군으로부터선택된다. 또다른실시양태에서, 관심있는화합물은미용효과를제공한다. 예를들면, 상기화합물은코엔자임 Q10, 티로시나제, 콜라겐, 라미닌, 세라마이드, 리놀레산, 트레티노인, 타자로텐및콜라겐으로구성된군으로부터선택될수있다. 또다른실시양태에서, 미용효과는노화방지이다. 또다른실시양태에서, 관심있는화합물은습진을치료하는화합물이다. 예시적인관심있는화합물은코르티손, 타크롤리무스및시클로스포린으로구성된군으로부터선택된화합물을포함한다. 또다른실시양태에서, 형질전환된박테리아집단을포함하는조성물은안면에의국소적용을위해제제화된다. 또다른실시양태에서, 상기조성물은인간신체의점막표면을제외한피부에의국소적용을위한제제이다. 또다른실시양태에서, 형질전환된박테리아집단은인간에서피부상에존재하는비병원성박테리아집단으로부터생성된다. 즉, 비병원성박테리아집단은질환을갖지않은건강한인간에서피부상에전형적으로존재하는박테리아를포함한다. 일부실시양태에서, 형질전환된박테리아집단은악티노마이세탈레스 (Actinomycetales), 언에어로코커스 (Anaerococcus), 바실라레스 (Bacillales), 비피도박테리움 (Bifidobacterium), 엔히드로박터 (Enhydrobacter), 피네골디아 (Finegoldia), 카르노박테리움 (Carnobacterium), 코리네오박테리움 (Coryneobacterium), 락토바실러스 (Lactobacillus), 락토코커스 (Lactococcus), 레운코노스톡 (Leunconostoc), 마크로오커스 (Macrooccus), 마이크로코시네애 (Micrococcineae), 오에노코커스 (Oenococcus), 페디오코커스 (Pediococcus), 펩토니필루스 (Peptoniphilus), 프로피오니박테리움 (Propionibacterium), 살리니코커스 (Salinicoccus), 스핑고모나스 (Sphingomonas), 스트레포코커스 (Strepococcus), 테트라게노커스 (Tetragenoccus) 및웨이셀라 (Weissella) 로구 - 8 -

9 성된군내의박테리아들로부터선택된비병원성박테리아구성원으로부터생성된다. [0028] [0029] [0030] [0031] [0032] [0033] [0034] 다른실시양태에서, 형질전환된박테리아집단내의형질전환된박테리아는프로피오니박테리움액크네스 (Propionibacterium acnes), 코리네박테리움의병원성균주, 스타필로코커스아우레우스 (S. aureus) 또는스타필로코커스에피데르미디스 (S. epidermidis) 가아니다. 또다른실시양태에서, 형질전환된박테리아집단은락토바실러스카세이 (Lactobacillus casei), 락토바실러스레우테리 (Lactobacillus reuteri), 락토바실러스액시도필루스 (Lactobacillus acidophilus), 락토바실러스젠세니이 (Lactobacillus jensenii), 비피도박테리움로그눔 (Bifidobacterium lognum), 피피도박테리움레우테리 (Bifidobacterium reuteri), 비피도박테리움락티스 (Bifidobacterium lactis), 비피도박테리움브레베 (Bifidobacterium breve), 비피도박테리움애니말리스 (Bifidobacterium animalis), 프로피오니박테리움액시디프로피오니시 (Propionibacterium acidipropionici), 프로피오니박테리움프레우덴레이키이 (Propionibacterium freudenreichii), 프로피오니박테리움토에니이 (Propionibacterium thoenii) 및프로피오니박테리움젠세니이 (Propionibacterium jensenii) 로구성된군내의박테리아들로부터선택된박테리아로부터생성된다. 또다른실시양태에서, 형질전환된박테리아집단은감마-프로테오박테리아 (proteobacteria), 알파-프로테오박테리아및박테리오데테스 (bacteriodetes) 로구성된군으로부터선택된문 (phylum) 내의박테리아들로부터선택된박테리아로부터생성된다. 다양한실시양태에서, 형질전환된박테리아집단을포함하는국소조성물은크림, 로션, 에멀젼, 겔, 연고, 액체또는스프레이일수있다. 한실시양태에서, 국소조성물은 cm 2 당적어도약 10 2 개의박테리아를제공하도록제제화된다. 또다른양태에서, 치료방법이제공되고, 이때본원에기재된조성물은질환예방을위해, 또는치료또는미용목적을위해대상체, 바람직하게는인간대상체의피부에국소적용된다. 한실시양태에서, 국소적용은인간신체의점막표면 ( 코, 질, 직장, 구강표면 ) 에의국소적용을제외한다. 전술된예시적인양태및실시양태이외에, 추가양태및실시양태가도면을참고하고하기설명을연구함으로써명확해질것이다. 본방법및조성물의추가실시양태등은하기설명, 도면, 실시예및특허청구범위로부터명확해질것이다. 상기및하기설명으로부터인식될수있는바와같이, 본원에기재된각각의모든특징들, 및이러한특징들중둘이상의각각의모든조합이본개시내용의범위내에포함되되, 이러한조합내에포함되는특징은상호불일치하지않는다. 또한, 임의의특징또는특징들의조합은본발명의임의의실시양태로부터구체적으로제외될수있다. 본발명의추가양태및장점은특히, 수반되는실시예및도면과함께고려될때하기설명및특허청구범위에기재되어있다. [0035] 도면의간단한설명 도 1a 내지 1c 는관심있는화합물의발현을위해박테리아를형질전환시키기위한예시적인플라스미드또는벡 터의맵이다. [0036] [0037] [0038] [0039] 발명을실시하기위한구체적인내용 1. 정의다양한양태들이이하에더전체적으로기재되어있을것이다. 그러나, 이러한양태들은많은상이한형태들로구현될수있고본원에기재된실시양태로한정되는것으로서해석되어서는안되고 ; 오히려, 이들실시양태들은본개시내용이철저하고완전하며당업자에게그의범위를전체적으로전달하도록제공된다. 값의범위가제공되는경우, 그범위의상한과하한사이의각각의개재값, 및그언급된범위내의임의의다른언급된또는개재값을본개시내용내에포함시키기위한것이다. 예를들면, 1 μm내지 8 μm의범위가언급되는경우, 2 μm, 3 μm, 4 μm, 5 μm, 6 μm및 7 μm뿐만아니라, 1 μm이상의값의범위및 8 μm이하의값의범위도명시적으로개시하기위한것이다. 본명세서에서사용된바와같이, 문맥이달리명시하지않은한, 단수형용어는복수지시대상을포함한다. 따라서, 예를들면, " 부형제 " 의언급은단일부형제뿐만아니라동일한또는상이한부형제들중 2개이상의부형제도포함한다

10 [0040] [0041] [0042] [0043] [0044] [0045] [0046] [0047] [0048] [0049] [0050] [0051] [0052] [0053] [0054] [0055] " 양친매성 " 은친수성성질및친지성 ( 소수성 ) 성질을겸비한분자를지칭한다. " 희석제 " 는제제중의또다른성분을용해시키거나, 분산시키거나다른방식으로혼입시키기위해제제내에포함될수있다. 희석제의예로는물, 완충수용액, 유기친수성희석제, 예컨대, 1가알코올, 및저분자량글리콜및폴리올 ( 예를들면, 프로필렌글리콜, 폴리프로필렌글리콜, 글리세롤, 부틸렌글리콜 ) 이있으나이들로한정되지않는다. " 겔 " 은분산된상이연속상과조합되어반고체물질, 예컨대, 젤리를생성하고있는콜로이드이다. 본원에서사용된바와같이, " 친수성 " 은물과용이하게상호작용하는강한극성기를갖는물질을지칭한다. 본원에서사용된바와같이, " 소수성 " 은물에대한친화성을결여하여물을밀어내고흡수하지않을뿐만아니라물에용해되거나물과혼합되지않는경향을갖는물질을지칭한다. 본원에서사용된바와같이, " 지용성 " 은소수성액체, 예컨대, 피마자유에서 5 g/100 ml이상의가용성을갖는물질을지칭한다. " 친지성 " 은지질에대한친화성을갖는화합물을지칭한다. 친지성물질의예로는천연발생오일, 합성오일, 지방, 지방산, 레시틴, 트리글리세라이드및이들의조합물이있으나이들로한정되지않는다. " 오일 " 은적어도 95 중량 % 의친지성물질을함유하는조성물이다. " 피부 " 는개체, 특히인간의표피전부를표시하기위한것이고, 일부실시양태에서특정된경우피부의특정영역, 예컨대, 안면, 목, 팔, 다리, 복부, 손, 등, 둔부또는발을표시하기위한것이다. 본원에서사용된바와같이, " 수용성 " 은물에서 5 g/100 ml이상의가용성을갖는물질을지칭한다. II. 국소조성물본원에기재된조성물은대상체에게의국소적용을위해제제화된형질전환된박테리아집단으로구성된다. 형질전환된박테리아집단을생성하는데에적합한예시적인비병원성박테리아가하기단락 A에기재되어있다. 형질전환된박테리아집단에의해발현될관심있는화합물이단락 B에기재되어있고, 형질전환된박테리아집단을생성하는기법이단락 C에기재되어있다. 형질전환된박테리아집단을포함하는국소조성물이단락 D에개시되어있다. A. 예시적인박테리아본원에기재된조성물및기재된방법에서사용될박테리아집단은관심있는화합물을발현하고 / 하거나, 생성하고 / 생성하거나분비하도록유전적으로변경되어있는비병원성박테리아로부터생성된다. 예시적인비병원성박테리아가이단락에기재되어있다. 한실시양태에서, 상기집단내의박테리아는비병원성및비침습성미생물이고, 특정실시양태에서그람양성식품등급박테리아균주일수있다. 또다른실시양태에서, 형질전환된박테리아집단은피부미생물체에서천연적으로발생하는박테리아로부터제조된다. 인간피부는피부미생물체로서지칭되는, 피부상에존재하는미생물집단을갖는다. ( 건강한 ( 질환을갖지않는 ) 인간에서 ) 피부상에존재하는박테리아미생물은통상적으로비병원성및공생성 ( 숙주에게유해하지않음 ) 및 / 또는상리공생성 ( 이익을제공함 ) 을나타낸다. 인간피부상에통상적으로존재하는박테리아는후술되어있고, 속 (genus) 수준까지그들의계통발생적계통으로기재된계통발생적수준에의해표시되어있다 (Grice, E. A, et al., Science, 324(5931): (2009); Costello, E.K., et al., Science, 326(5960): (2009), Grice E. A. and J. A. Segre, Nature Reviews Microbiology, 9: (2011)). 조성물중의박테리아집단을형성하고관심있는하나이상의화합물을발현하도록형질전환된박테리아는동일한박테리아들의집합체또는상이한계통발생적수준에서상이한박테리아들의혼합물일수있다. 한실시양태에서, 형질전환을위한박테리아집단은드문이동사건과는별개로다른박테리아군으로부터분리되어있는영역에서한박테리아종의개체들의군이다. 사실상, 상기영역의크기및성질 ( 예를들면, 피부상의영역, 예컨대, 턱또는이마의크기및위치 ) 은원하는목적을위해종종임의로정의된다. 또다른실시양태에서, 조성물을제조하기위해형질전환될박테리아는공간및시간면에서함께존재하는상이한박테리아종들로구성된집단의집합체를의미하는박테리아공통체이다. 한실시양태에서, 박테리아공동체는모든종 ( 즉, 모든영양수준및 / 또는계통발생적수준에걸쳐모든종 ) 을포함하거나, 대안적으로모든영양적으로유사한종들 ( 예를들면, 열대우림의모든식물들 ) 을포함한다. 또다른실시양태에서, 조성물을제조하기위해형질전환될박

11 테리아는집단들사이의이동에의해연관되어있는일련의국소집단들로서존재하는것으로인지되는집단군을의미하는메타집단이다. 또다른실시양태에서, 조성물을제조하기위해형질전환될박테리아는잠재적으로상호작용하는종들의분산에의해연관되어있는일련의국소공동체들로서존재하는것으로인지되는영양적으로유사한개체및종의집합체를의미하는메타공동체이다 (Green, J.L et al., Science, 320(5879): (2008)). [0056] [0057] [0058] [0059] [0060] 건강한인간의피부상에존재하는박테리아는인간의안면상에전형적으로존재하는박테리아종, 예컨대, 코리네박테리움 (corynebacterium) 속및프로피오니박테리움 (propionibacterium) 속내의박테리아들을포함하는악티노박테리아를포함한다. 다른실시양태에서, 건강한인간대상체의피부상에존재하는박테리아는예를들면, 박테로이데테스및프로테오박테리아속내의박테리아를포함하는, 안면이외의피부상에전형적으로존재하는박테리아종을포함한다. 피부미생물체내의다른박테리아는본원에서이하에나열된박테리아들을포함한다. 한실시양태에서, 박테리아는하기박테리아들을포함하나이들로한정되지않는프로피오니박테리움속으로부터유래된다 : 프로피오니박테리움액시디파시엔스 (Propionibacterium acidifaciens), 프로피오니박테리움액시디프로피오니시 (Propionibacterium acidipropionici), 프로피오니박테리움액시디프로피오니시균주 4900, 프로피오니박테리움액크네스 (Propionibacterium acnes), 프로피오니박테리움아우스트랄리엔스 (Propionibacterium australiense), 프로피오니박테리움아비둠 (Propionibacterium avidum), 프로피오니박테리움사이클로헥사니쿰 (Propionibacterium cyclohexanicum), 프로피오니박테리움프레우덴레이키이 (Propionibacterium freudenreichii) 하위종프레우덴레이키이, 프로피오니박테리움프레우덴레이키이하위종프레우덴레이키이균주 20271, 프로피오니박테리움프레우덴레이키이하위종셔마니이 (Shermanii), 프로피오니박테리움프레우덴레이키이하위종셔마니이균주 4902, 프로피오니박테리움프레우덴레이키이하위종셔마니이균주 4902, 프로피오니박테리움그라눌로숨 (Propionibacterium granulosum), 프로피오니박테리움이노쿠움 (Propionibacterium innocuum), 프로피오니박테리움젠세니이 (Propionibacterium jensenii), 프로피오니박테리움젠세니이균주 20278, 프로피오니박테리움림포필룸 (Propionibacterium lymphophilum), 프로피오니박테리움마이크로애로필룸 (Propionibacterium microaerophilum), 프로피오니박테리움프로피오니쿰 (Propionibacterium propionicum), 프로피오니박테리움토에니이 (Propionibacterium thoenii), 및프로피오니박테리움토에니이균주 또다른실시양태에서, 박테리아는프로피오니박테리움액시디프로피오니시, 프로피오니박테리움프레우덴레이키이하위종프레우덴레이키이, 프로피오니박테리움프레우덴레이키이하위종셔마니이, 프로피오니박테리움젠세니이및프로피오니박테리움토에니이를포함하나이들로한정되지않는, 프로피오니박테리움속에서 " 일반적으로안전한박테리아로서간주된 "(GRAS) 박테리아들로서분류된박테리아의집단이다. 한실시양태에서, 박테리아는프로피오니박테리움액크네스가아니다. 한실시양태에서, 박테리아는하기박테리아들을포함하나이들로한정되지않는코리네박테리움속으로부터유래된다 : 코리네박테리움액콜렌스 (C. accolens), 코리네박테리움아페르멘탄 (C. afermentan), 코리네박테리움아미콜라툼 (C. amycolatum), 코리네박테리움아르젠토라텐스 (C. argentoratense), 코리네박테리움아쿠아티쿰 (C. aquaticum), 코리네박테리움아우리스 (C. auris), 코리네박테리움보비스 (C. bovis), 코리네박테리움디프테리아 (C. diphtheria), 코리네박테리움에퀴 (C. equi)( 현재로도코커스에퀴 (Rhodococcus equi)), 코리네박테리움플라베센스 (C. flavescens), 코리네박테리움글루쿠로놀라이티쿰 (C. glucuronolyticum), 코리네박테리움글루타미쿰 (C. glutamicum), 코리네박테리움그라눌로숨 (C. granulosum), 코리네박테리움해몰라이티쿰 (C. haemolyticum), 코리네박테리움할로파이티카 (C. halofytica), 코리네박테리움제이케이움 (C. jeikeium)( 군 JK), 코리네박테리움맥긴레이이 (C. macginleyi), 코리네박테리움마트루초티이 (C. matruchotii), 코리네박테리움미누티시뭄 (C. minutissimum), 코리네박테리움파르붐 (C. parvum)( 프로피오니박테리움액크네스 ), 코리네박테리움프로핀쿠움 (C. propinquum), 코리네박테리움슈도디프테리티쿰 (C. pseudodiphtheriticum)( 코리네박테리움호프만니이 (C. hofmannii)), 코리네박테리움슈도튜버큘로시스 (C. pseudotuberculosis)( 코리네박테리움오비스 (C. ovis)), 코리네박테리움피오게네스 (C. pyogenes), 코리네박테리움우레아라이티쿰 (C. urealyticum)( 군 D2), 코리네박테리움레날레 (C. renale), 코리네박테리움스펙 (C. spec), 코리네박테리움스트리아툼 (C. striatum), 코리네박테리움테누이스 (C. tenuis), 코리네박테리움울세란스 (C. ulcerans), 코리네박테리움우레아라이티쿰 (C. urealyticum) 및코리네박테리움제로시스 (C. xerosis). 친지성기및비친지성기를갖는박테리아가고려되고, 비친지성박테리아는발효코리네박테리아및비발효코리네박테리아를포함할수있다. 또다른실시양태에서, 박테리아는코리네박테리움암모니아게네스 (Corynebacterium ammoniagenes), 코리네박테

12 리움카세이 (Corynebacterium casei), 코리네박테리움플라베센스 (Corynebacterium flavescens) 및코리네박테 리움배리아바일 (Corynebacterium variabile) 을포함하나이들로한정되지않는, 코리네박테리움속에서 " 일반 적으로안전한박테리아로서간주된 "(GRAS) 박테리아들로서분류된박테리아들의집단이다. [0061] [0062] [0063] [0064] [0065] 한실시양태에서, 박테리아는코리네박테리움디프테리아, 코리네박테리움아미콜라툼, 코리네박테리움스트리아툼, 코리네박테리움제이케이움, 코리네박테리움우레아라이티쿰, 코리네박테리움제로시스, 슈도튜버큘로시스, 코리네박테리움테누이스, 코리네박테리움스트리아툼또는코리네박테리움미누티시뭄이아니다 ( 이는이들이병원성을나타낼수있기때문이다 ). 한실시양태에서, 박테리아는하기 GRAS 박테리아종들을포함하나이들로한정되지않는마이크로코시네애 (Micrococcineae) 하위목으로부터유래된다 : 아쓰로박터아릴라이텐시스 (Arthrobacter arilaitensis), 아쓰로박터베르게레이 (Arthrobacter bergerei), 아쓰로박터글로비포르미스 (Arthrobacter globiformis), 아쓰로박터니코티아내 (Arthrobacter nicotianae), 코쿠리아리조필라 (Kocuria rhizophila), 코쿠리아바리안스 (Kocuria varians), 마이크로코커스루테우스 (Micrococcus luteus), 마이크로코커스라일래 (Micrococcus lylae), 마이크로박테리움구베에넨스 (Microbacterium gubbeenense), 브레비박테리움아우란티아쿰 (Brevibacterium aurantiacum), 브레비박테리움카세이 (Brevibacterium casei), 브레비박테리움리넨스 (Brevibacterium linens), 브라키박테리움알리멘타리움 (Brachybacterium alimentarium) 및브라키박테리움티로페르멘탄스 (Brachybacterium tyrofermentans). 한실시양태에서, 박테리아는 GRAS 박테리아종인스트렙토마이세스그리세우스 (Streptomyces griseus) 하위종그리세우스 (Griseus) 를포함하나이것으로한정되지않는악티노마이세탈레스 (Actinomycetales) 목으로부터유래된다. 한실시양태에서, 박테리아스트렙토마이세스그리세우스는티로시나제를발현하지않을것이다. 또다른실시양태에서, 박테리아는하기박테리아들을포함하나이들로한정되지않는스타필로코커스속으로부터유래된다 : 스타필로코커스아그네티스 (Staphylococcus agnetis), 스타필로코커스아를레태 (S. arlettae), 스타필로코커스아우리쿨라리스 (S. auricularis), 스타필로코커스카피티스 (S. capitis), 스타필로코커스카프래 (S. caprae), 스타필로코커스카르노서스 (S. carnosus), 스타필로코커스카세올라이티커스 (Staphylococcus caseolyticus), 스타필로코커스크로모게네스 (S. chromogenes), 스타필로코커스코니이 (S. cohnii), 스타필로코커스콘디멘트 (S. condiment), 스타필로코커스델피니 (S. delphini), 스타필로코커스데브리에세이 (S. devriesei), 스타필로코커스에쿠오룸 (S. equorum), 스타필로코커스펠리스 (S. felis), 스타필로코커스플레우레티이 (S. fleurettii), 스타필로코커스갈리나룸 (S. gallinarum), 스타필로코커스해몰라이티커스 (S. haemolyticus), 스타필로코커스호미니스 (S. hominis), 스타필로코커스하이커스 (S. hyicus), 스타필로코커스인터메디우스 (S. intermedius), 스타필로코커스클로오시이 (S. kloosii), 스타필로코커스레에이 (S. leei), 스타필로코커스렌투스 (S. lentus), 스타필로코커스루그두넨시스 (S. lugdunensis), 스타필로코커스루트래 (S. lutrae), 스타필로코커스마실리엔시스 (S. massiliensis), 스타필로코커스마이크로티 (S. microti), 스타필로코커스무스캐 (S. muscae), 스타필로코커스네팔렌시스 (S. nepalensis), 스타필로코커스파스테우리 (S. pasteuri), 스타필로코커스페텐코페리 (S. pettenkoferi), 스타필로코커스피스시페르멘탄스 (S. piscifermentans), 스타필로코커스슈딘테르메디우스 (S. pseudintermedius), 스타필로코커스슈도루그두넨시스 (S. pseudolugdunensis), 스타필로코커스풀베레리 (S. pulvereri), 스타필로코커스로스트라 (S. rostra), 스타필로코커스사카로라이티커스 (S. saccharolyticus), 스타필로코커스사프로파이티커스 (S. saprophyticus), 스타필로코커스슐레이페리 (S. schleiferi), 스타필로코커스스시우리 (S. sciuri), 스타필로코커스시미애 (S. simiae), 스타필로코커스시물란스 (S. simulans), 스타필로코커스스테파노비시이 (S. stepanovicii), 스타필로코커스석시누스 (S. succinus), 스타필로코커스비툴리누스 (S. vitulinus), 스타필로코커스와르네리 (S. warneri) 및스타필로코커스자일로서스 (S. xylosus). 또다른실시양태에서, 박테리아는하기박테리아들을포함하나이들로한정되지않는, 스타필로코커스목에서 " 일반적으로안전한박테리아로서간주된 "(GRAS) 박테리아로서분류된박테리아들의집단이다 : 스타필로코커스카모서스 (Staphylococcus camosus) 하위종카모서스 (Camosus), 스타필로코커스카모서스하위종우틸리스 (Utilis), 스타필로코커스코니이 (Staphylococcus cohnii), 스타필로코커스콘디멘티 (Staphylococcus condimenti), 스타필로코커스에쿠오룸 (Staphylococcus equorum) 하위종에쿠오룸 (Equorum), 스타필로코커스에쿠오룸하위종리넨스 (Linens), 스타필로코커스플레우레티이 (Staphylococcus fleurettii), 스타필로코커스피스시페르멘탄스 (Staphylococcus piscifermentans), 스타필로코커스사프로파이티커스 (Staphylococcus saprophyticus), 스타필로코커스스두리 (Staphylococcus sduri) 하위종스두리 (Sduri), 스타필로코커스석시누스 (Staphylococcus succinus) 하위종석시누스 (succinus), 스타필로코커스석시누스하위종카세이 (Casei), 스

13 타필로코커스비툴리누스 (Staphylococcus vitulinus), 스타필로코커스와메리 (Staphylococcus wameri) 및스타 필로코커스자일로서스 (Staphylococcus xylosus). [0066] [0067] 한실시양태에서, 박테리아는스타필로코커스아우레우스또는스타필로코커스에피데르미디스가아니다. 또다른실시양태에서, 박테리아는하기박테리아들을포함하나이들로한정되지않는스트렙토코커스속으로부터유래된다 : 스트렙토코커스액시도미니무스 (Streptococcus acidominimus), 스트렙토코커스아드자센스 (Streptococcus adjacens), 스트렙토코커스아갈락티애 (Streptococcus agalactiae), 스트렙토코커스알락토라이티커스 (Streptococcus alactolyticus), 스트렙토코커스안기노서스 (Streptococcus anginosus), 스트렙토코커스아우스트랄리스 (Streptococcus australis), 스트렙토코커스보비스 (Streptococcus bovis), 스트렙토코커스카발리 (Streptococcus caballi), 스트렙토코커스캐니스 (Streptococcus canis), 스트렙토코커스카프리누스 (Streptococcus caprinus), 스트렙토코커스카스토레우스 (Streptococcus castoreus), 스트렙토코커스세코룸 (Streptococcus cecorum), 스트렙토코커스콘스텔라투스 (Streptococcus constellatus), 스트렙토코커스콘스텔라투스하위종콘스텔라투스 (Constellatus), 스트렙토코커스콘스텔라투스하위종파린기스 (Pharyngis), 스트렙토코커스크레모리스 (Streptococcus cremoris), 스트렙토코커스크리세티 (Streptococcus criceti), 스트렙토코커스크리스타투스 (Streptococcus cristatus), 스트렙토코커스다니엘리애 (Streptococcus danieliae), 스트렙토코커스데펙티베스 (Streptococcus defectives), 스트렙토코커스덴타프리 (Streptococcus dentapri), 스트렙토코커스덴티로우세티 (Streptococcus dentirousetti), 스트렙토코커스디델피스 (Streptococcus didelphis), 스트렙토코커스디피실리스 (Streptococcus difficilis), 스트렙토코커스두란스 (Streptococcus durans), 스트렙토코커스다이스갈락티애 (Streptococcus dysgalactiae), 스트렙토코커스다이스갈락티애하위종다이스갈락티애 (Dysgalactiae), 스트렙토코커스다이스갈락티애하위종에퀴시밀리스 (Equisimilis), 스트렙토코커스엔테리커스 (Streptococcus entericus), 스트렙토코커스에퀴 (Streptococcus equi), 스트렙토코커스에퀴하위종에퀴 (Equi), 스트렙토코커스에퀴하위종루미나토룸 (Ruminatorum), 스트렙토코커스에퀴하위종주에피데미커스 (Zooepidemicus), 스트렙토코커스에퀴네스 (Streptococcus equines), 스트렙토코커스패칼리스 (Streptococcus faecalis), 스트렙토코커스패시움 (Streptococcus faecium), 스트렙토코커스페루스 (Streptococcus ferus), 스트렙토코커스갈리나세우스 (Streptococcus gallinaceus), 스트렙토코커스갈로라이티커스 (Streptococcus gallolyticus), 스트렙토코커스갈로라이티커스하위종갈로라이티커스 (Gallolyticus), 스트렙토코커스갈로라이티커스하위종마세도니커스 (Macedonicus), 스트렙토코커스갈로라이티커스하위종파스테우리아누스 (Pasteurianus), 스트렙토코커스가르비에애 (Streptococcus garvieae), 스트렙토코커스고르도니이 (Streptococcus gordonii), 스트렙토코커스할리코에리 (Streptococcus halichoeri), 스트렙토코커스한세니이 (Streptococcus hansenii), 스트렙토코커스헨라이 (Streptococcus henryi), 스트렙토코커스히요인테스티날리스 (Streptococcus hyointestinalis), 스트렙토코커스히요바기날리스 (Streptococcus hyovaginalis), 스트렙토코커스익탈루리 (Streptococcus ictaluri), 스트렙토코커스인판타리우스 (Streptococcus infantarius), 스트렙토코커스인판타리우스하위종콜라이 (Coli), 스트렙토코커스인판타리우스하위종인판타리우스 (Infantarius), 스트렙토코커스인판티스 (Streptococcus infantis), 스트렙토코커스이니애 (Streptococcus iniae), 스트렙토코커스인터메디우스 (Streptococcus intermedius), 스트렙토코커스인테스티날리스 (Streptococcus intestinalis), 스트렙토코커스락타리우스 (Streptococcus lactarius), 스트렙토코커스락티스 (Streptococcus lactis), 스트렙토코커스락티스하위종크레모리스 (Cremoris), 스트렙토코커스락티스하위종디아세틸락티스 (Diacetilactis), 스트렙토코커스락티스하위종락티스 (Lactis), 스트렙토코커스루테티엔시스 (Streptococcus lutetiensis), 스트렙토코커스마카캐 (Streptococcus macacae), 스트렙토코커스마세도니커스 (Streptococcus macedonicus), 스트렙토코커스마리맘말리움 (Streptococcus marimammalium), 스트렙토코커스마실리엔시스 (Streptococcus massiliensis), 스트렙토코커스메리오니스 (Streptococcus merionis), 스트렙토코커스마이너 (Streptococcus minor), 스트렙토코커스미티스 (Streptococcus mitis), 스트렙토코커스모르빌로룸 (Streptococcus morbillorum), 스트렙토코커스뮤탄스 (Streptococcus mutans), 스트렙토코커스올리고페르멘탄스 (Streptococcus oligofermentans), 스트렙토코커스오랄리스 (Streptococcus oralis), 스트렙토코커스오리스라티 (Streptococcus orisratti), 스트렙토코커스오비스 (Streptococcus ovis), 스트렙토코커스파라산귀니스 (Streptococcus parasanguinis), 스트렙토코커스파라우베리스 (Streptococcus parauberis), 스트렙토코커스파르불루스 (Streptococcus parvulus), 스트렙토코커스파스테우리아누스 (Streptococcus pasteurianus), 스트렙토코커스페로리스 (Streptococcus peroris), 스트렙토코커스포캐 (Streptococcus phocae), 스트렙토코커스플란타룸 (Streptococcus plantarum), 스트렙토코커스플레오모르푸스 (Streptococcus pleomorphus), 스트렙토코커스플루라니말리움 (Streptococcus pluranimalium), 스트렙토코커스플루렉스토룸 (Streptococcus plurextorum), 스트렙토코커스뉴모니아 (Streptococcus pneumonia), 스트렙토코커스포르시 (Streptococcus porci), 스트렙토코

14 커스포르시누스 (Streptococcus porcinus), 스트렙토코커스포르코룸 (Streptococcus porcorum), 스트렙토코커스슈도뉴모니애 (Streptococcus pseudopneumoniae), 스트렙토코커스슈도포르시누스 (Streptococcus pseudoporcinus), 스트렙토코커스피오게네스 (Streptococcus pyogenes), 스트렙토코커스라피놀락티스 (Streptococcus raffinolactis), 스트렙토코커스라티 (Streptococcus ratti), 스트렙토코커스루피카프래 (Streptococcus rupicaprae), 스트렙토코커스사카로라이티커스 (Streptococcus saccharolyticus), 스트렙토코커스살리바리우스 (Streptococcus salivarius), 스트렙토코커스살리바리우스하위종살리바리우스 (Salivarius), 스트렙토코커스살리바리우스하위종써모필루스 (Thermophilus), 스트렙토코커스산귀니스 (Streptococcus sanguinis), 스트렙토코커스실로이 (Streptococcus shiloi), 스트렙토코커스시넨시스 (Streptococcus sinensis), 스트렙토코커스소브리누스 (Streptococcus sobrinus), 스트렙토코커스수이스 (Streptococcus suis), 스트렙토코커스써모필루스 (Streptococcus thermophilus), 스트렙토코커스토랄텐시스 (Streptococcus thoraltensis), 스트렙토코커스티구리누스 (Streptococcus tigurinus), 스트렙토코커스트로글로다이태 (Streptococcus troglodytae), 스트렙토코커스트로글로다이티디스 (Streptococcus troglodytidis), 스트렙토코커스우베리스 (Streptococcus uberis), 스트렙토코커스우리날리스 (Streptococcus urinalis), 스트렙토코커스베스티불라리스 (Streptococcus vestibularis) 및스트렙토코커스와이우스 (Streptococcus waius). [0068] [0069] 또다른실시양태에서, 박테리아는스트렙토코커스써모필루스균주 Th4, 스트렙토코커스갈로라이티커스하위종마세도니커스, 스트렙토코커스살리바리우스하위종살리바리우스및스트렙토코커스살리바리우스하위종써모필루스를포함하나이들로한정되지않는, 스트렙토코커스속에서 " 일반적으로안전한박테리아로서간주된 "(GRAS) 박테리아로서분류된박테리아들의집단이다. 또다른실시양태에서, 박테리아는하기박테리아들을포함하나이들로한정되지않는락토바실러스 (Lactobacillus) 속으로부터유래된다 : 락토코커스가르비에애 (Lactococcus garvieae), 락토코커스락티스 (Lactococcus lactis), 락토코커스락티스하위종크레모리스 (cremoris), 락토코커스락티스하위종호르드니애 (hordniae), 락토코커스락티스, 락토코커스락티스하위종락티스 (Lactis), 락토코커스피스시움 (Lactococcus piscium), 락토코커스플란타룸 (Lactococcus plantarum), 락토코커스라피놀락티스 (Lactococcus raffinolactis), 락토바실러스아세토톨레란스 (Lactobacillus acetotolerans), 락토바실러스액시도필루스 (Lactobacillus acidophilus), 락토바실러스아길리스 (Lactobacillus agilis), 락토바실러스알기두스 (Lactobacillus algidus), 락토바실러스알리멘타리우스 (Lactobacillus alimentarius), 락토바실러스아밀로라이티커스 (Lactobacillus amylolyticus), 락토바실러스아밀로필루스 (Lactobacillus amylophilus), 락토바실러스아밀로보루스 (Lactobacillus amylovorus), 락토바실러스애니말리스 (Lactobacillus animalis), 락토바실러스아비아리우스 (Lactobacillus aviarius), 락토바실러스아비아리우스하위종아라피노서스 (araffinosus), 락토바실러스아비아리우스하위종아비아리우스 (aviarius), 락토바실러스바바리커스 (Lactobacillus bavaricus), 락토바실러스비페르멘탄스 (Lactobacillus bifermentans), 락토바실러스브레비스 (Lactobacillus brevis), 락토바실러스부크네리 (Lactobacillus buchneri), 락토바실러스불가리커스 (Lactobacillus bulgaricus), 락토바실러스카르니스 (Lactobacillus carnis), 락토바실러스카세이 (Lactobacillus casei), 락토바실러스카세이하위종알락토서스 (alactosus), 락토바실러스카세이하위종카세이 (casei), 락토바실러스카세이하위종슈도플란타룸 (pseudoplantarum), 락토바실러스카세이하위종람노서스 (rhamnosus), 락토바실러스카세이하위종톨레란스 (tolerans), 락토바실러스카테나포르미스 (Lactobacillus catenaformis), 락토바실러스셀로바이오서스 (Lactobacillus cellobiosus), 락토바실러스콜리노이데스 (Lactobacillus collinoides), 락토바실러스콘푸서스 (Lactobacillus confusus), 락토바실러스코리니포르미스 (Lactobacillus coryniformis), 락토바실러스코리니포르미스하위종코르니포르미스 (coryniformis), 락토바실러스코리니포르미스하위종토르쿠엔스 (torquens), 락토바실러스크리스파투스 (Lactobacillus crispatus), 락토바실러스쿠르바투스 (Lactobacillus curvatus), 락토바실러스쿠르바투스하위종쿠르바투스 (curvatus), 락토바실러스쿠르바투스하위종멜리바이오서스 (melibiosus), 락토바실러스델브루엑키이 (Lactobacillus delbrueckii), 락토바실러스델브루엑키이하위종불가리커스 (bulgaricus), 락토바실러스델브루엑키이하위종델브루엑키이 (delbrueckii), 락토바실러스델브루엑키이하위종락티스 (lactis), 락토바실러스디베르겐스 (Lactobacillus divergens), 락토바실러스파르시미니스 (Lactobacillus farciminis), 락토바실러스페르멘툼 (Lactobacillus fermentum), 락토바실러스포르미칼리스 (Lactobacillus formicalis), 락토바실러스프럭티보란스 (Lactobacillus fructivorans), 락토바실러스프럭토서스 (Lactobacillus fructosus), 락토바실러스갈리나룸 (Lactobacillus gallinarum), 락토바실러스가세리 (Lactobacillus gasseri), 락토바실러스그라미니스 (Lactobacillus graminis), 락토바실러스할로톨레란스 (Lactobacillus halotolerans), 락토바실러스햄스테리 (Lactobacillus hamsteri), 락토바실러스헬베티커스 (Lactobacillus helveticus), 락토바실러스헤테로히오키이 (Lactobacillus heterohiochii), 락토바실러스힐가

15 르디이 (Lactobacillus hilgardii), 락토바실러스호모히오키이 (Lactobacillus homohiochii), 락토바실러스이네르스 (Lactobacillus iners), 락토바실러스인테스티날리스 (Lactobacillus intestinalis), 락토바실러스젠세니이 (Lactobacillus jensenii), 락토바실러스존소니이 (Lactobacillus johnsonii), 락토바실러스칸들레리 (Lactobacillus kandleri), 락토바실러스케피리 (Lactobacillus kefiri), 락토바실러스케푸라노파시엔스 (Lactobacillus kefuranofaciens), 락토바실러스케피르그라눔 (Lactobacillus kefirgranum), 락토바실러스쿤케에이 (Lactobacillus kunkeei), 락토바실러스락티스 (Lactobacillus lactis), 락토바실러스레이크만니이 (Lactobacillus leichmannii), 락토바실러스린드네리 (Lactobacillus lindneri), 락토바실러스말레페르멘탄스 (Lactobacillus malefermentans), 락토바실러스말리 (Lactobacillus mali), 락토바실러스말타로미커스 (Lactobacillus maltaromicus), 락토바실러스만니호티보란스 (Lactobacillus manihotivorans), 락토바실러스마이너 (Lactobacillus minor), 락토바실러스미누투스 (Lactobacillus minutus), 락토바실러스무코새 (Lactobacillus mucosae), 락토바실러스무리누스 (Lactobacillus murinus), 락토바실러스나겔리이 (Lactobacillus nagelii), 락토바실러스오리스 (Lactobacillus oris), 락토바실러스파니스 (Lactobacillus panis), 락토바실러스파라부크네리 (Lactobacillus parabuchneri), 락토바실러스파라카세이 (Lactobacillus paracasei), 락토바실러스파라카세이하위종파라카세이 (paracasei), 락토바실러스파라카세이하위종톨레란스 (tolerans), 락토바실러스파라케피리 (Lactobacillus parakefiri), 락토바실러스파라리멘타리우스 (Lactobacillus paralimentarius), 락토바실러스파라플란타룸 (Lactobacillus paraplantarum), 락토바실러스펜토서스 (Lactobacillus pentosus), 락토바실러스페롤렌스 (Lactobacillus perolens), 락토바실러스피스시콜라 (Lactobacillus piscicola), 락토바실러스플란타룸 (Lactobacillus plantarum), 락토바실러스폰티스 (Lactobacillus pontis), 락토바실러스레우테리 (Lactobacillus reuteri), 락토바실러스람노서스 (Lactobacillus rhamnosus), 락토바실러스람노서스균주 5/E5a, 락토바실러스리매 (Lactobacillus rimae), 락토바실러스로고새 (Lactobacillus rogosae), 락토바실러스루미니스 (Lactobacillus ruminis), 락토바실러스사케이 (Lactobacillus sakei), 락토바실러스사케이하위종카모서스 (camosus), 락토바실러스사케이하위종사케이 (sakei), 락토바실러스살리바리우스 (Lactobacillus salivarius), 락토바실러스살리바리우스하위종살리시니우스 (salicinius), 락토바실러스살리바리우스하위종살리바리우스 (salivarius), 락토바실러스산프란시스센시스 (Lactobacillus sanfranciscensis), 락토바실러스샤르페애 (Lactobacillus sharpeae), 락토바실러스수에비커스 (Lactobacillus suebicus), 락토바실러스트리코데스 (Lactobacillus trichodes), 락토바실러스울리 (Lactobacillus uli), 락토바실러스백시노스테르커스 (Lactobacillus vaccinostercus), 락토바실러스바기날리스 (Lactobacillus vaginalis), 락토바실러스비리데센스 (Lactobacillus viridescens), 락토바실러스비툴리누스 (Lactobacillus vitulinus), 락토바실러스자일로서스 (Lactobacillus xylosus), 락토바실러스야마나쉬엔시스 (Lactobacillus yamanashiensis), 락토바실러스야마나쉬엔시스하위종말리 (mali), 락토바실러스야마나쉬엔시스하위종야마나쉬엔시스 (Yamanashiensis) 및락토바실러스제애 (Lactobacillus zeae). [0070] 또다른실시양태에서, 박테리아는하기박테리아들을포함하나이들로한정되지않는, 락토바실러스속에서 " 일반적으로안전한박테리아로서간주된 "(GRAS) 박테리아로서분류된박테리아들의집단이다 : 락토바실러스액시도필루스 (Lactobacillus acidophilus) 균주 NP 28, 락토바실러스액시도필루스균주 NP51, 락토바실러스하위종락티스 (lactis) 균주 NP7, 락토바실러스레우테리 (Lactobacillus reuteri) 균주 NCIMB 30242, 락토바실러스카세이 (Lactobacillus casei) 균주쉬로타 (Shirota), 락토바실러스레우테리균주 DSM 17938, 락토바실러스레우테리균주 NCIMB 30242, 락토바실러스액시도필루스 NCFM, 락토바실러스람노서스 (Lactobacillus rhamnosus) 균주 HN001, 우유-기제배지에서생성된락토바실러스람노서스균주 HN001, 락토바실러스레우테리균주 DSM 17938, 락토바실러스카세이하위종람노서스균주 GG, 락토바실러스액시도필루스, 락토바실러스락티스, 락토바실러스아세톨레란스 (Lactobacillus acetotolerans), 락토바실러스액시디파리내 (Lactobacillus acidifarinae), 락토바실러스액시디피스즈 (Lactobacillus acidipisds), 락토바실러스액시도필루스, 락토바실러스알리멘리우스 (Lactobacillus alimenmrius), 락토바실러스아밀로라이티커스 (Lactobacillus amylolyticus), 락토바실러스아밀로보루스 (Lactobacillus amylovorus), 락토바실러스브레비스 (Lactobacillus brevis), 락토바실러스부크네리 (Lactobacillus buchneri), 락토바실러스카카오눔 (Lactobacillus cacaonum), 락토바실러스카세이하위종카세이 (Casei), 락토바실러스콜리노이데스 (Lactobacillus collinoides), 락토바실러스콤포스티 (Lactobacillus composti), 락토바실러스코리니포르미스 (Lactobacillus co-ryniformis) 하위종코리니포르미스 (Coryniformis), 락토바실러스크리스파투스 (Lactobacillus crispatus), 락토바실러스크루스토룸 (Lactobacillus crustorum), 락토바실러스쿠르바투스 (Lactobacillus curvatus) 하위종쿠르바투스 (Curvatus), 락토바실러스델브루엑키이 (Lactobacillus delbrueckii) 하위종불가리커스 (Bulgaricus), 락토바실러스델브루엑키이하위종델브루엑키이 (Delbrueckii), 락토바실러스델브루엑키이하위종락티스 (Lactis),

16 락토바실러스덱스트리니커스 (Lactobacillus dextrinicus), 락토바실러스디올리보란스 (Lactobacillus diolivorans), 락토바실러스파비페르멘탄스 (Lactobacillus fabifermentans), 락토바실러스파르시미니스 (Lactobacillus farciminis), 락토바실러스페르멘툼 (Lactobacillus fermentum), 락토바실러스프럭티보란스 (Lactobacillus fructivorans), 락토바실러스프루멘티 (Lactobacillus frumenti), 락토바실러스가세리 (Lactobacillus gasseri), 락토바실러스가넨시스 (Lactobacillus ghanensis), 락토바실러스햄메시이 (Lactobacillus hammesii), 락토바실러스하르비넨시스 (Lactobacillus harbinensis), 락토바실러스헬베티커스 (Lactobacillus helveticus), 락토바실러스힐가르디이 (Lactobacillus hilgardii), 락토바실러스호모히오키이 (Lactobacillus homohiochii), 락토바실러스호르데이 (Lactobacillus hordei), 락토바실러스젠세니이 (Lactobacillus jensenii), 락토바실러스존소니이 (Lactobacillus johnsonii), 락토바실러스케피리 (Lactobacillus kefiri), 락토바실러스케피라노파덴스 (Lactobacillus kefiranofadens) 하위종케피라노파시엔스 (Kefiranofaciens), 락토바실러스케피라노파덴스하위종케피르그라눔 (Kefirgranum), 락토바실러스킴키이 (Lactobacillus kimchii), 락토바실러스키소넨시스 (Lactobacillus kisonensis), 락토바실러스말리 (Lactobacillus mali), 락토바실러스마니호티보란스 (Lactobacillus manihotivorans), 락토바실러스민덴시스 (Lactobacillus mindensis), 락토바실러스무코새 (Lactobacillus mucosae), 락토바실러스나겔리이 (Lactobacillus nagelii), 락토바실러스나무렌시스 (Lactobacillus namurensis), 락토바실러스난텐시스 (Lactobacillus nantensis), 락토바실러스노덴시스 (Lactobacillus nodensis), 락토바실러스오에니 (Lactobacillus oeni), 락토바실러스오타키엔시스 (Lactobacillus otakiensis), 락토바실러스파니스 (Lactobacillus panis), 락토바실러스파라브레비스 (Lactobacillus parabrevis), 락토바실러스파라부크네리 (Lactobacillus parabuchneri), 락토바실러스파라카세이 (Lactobacillus paracasei) 하위종파라카세이 (Paracasei), 락토바실러스파라케피리 (Lactobacillus parakefiri), 락토바실러스파라리멘타리우스 (Lactobacillus paralimentarius), 락토바실러스파라플란타룸 (Lactobacillus paraplantarum), 락토바실러스펜토서스 (Lactobacillus pentosus), 락토바실러스페롤렌스 (Lactobacillus perolens), 락토바실러스플란타룸 (Lactobacillus plantarum) 하위종플란타룸 (Plantarum), 락토바실러스포부지히이 (Lactobacillus pobuzihii), 락토바실러스폰즈 (Lactobacillus ponds), 락토바실러스라피 (Lactobacillus rapi), 락토바실러스레우테리 (Lactobacillus reuteri), 락토바실러스람노서스 (Lactobacillus rhamnosus), 락토바실러스로시애 (Lactobacillus rossiae), 락토바실러스사케이 (Lactobacillus sakei) 하위종카르노서스 (carnosus), 락토바실러스사케이하위종사케이 (Sakei), 락토바실러스살리바리우스 (Lactobacillus salivarius) 하위종살리바리우스 (Salivarius), 락토바실러스산프란시스센시스 (Lactobacillus sanfranciscensis), 락토바실러스사트수멘시스 (Lactobacillus satsumensis), 락토바실러스세칼리필루스 (Lactobacillus secaliphilus), 락토바실러스센마이주케이 (Lactobacillus senmaizukei), 락토바실러스실리기니스 (Lactobacillus siliginis), 락토바실러스스피케리 (Lactobacillus spicheri), 락토바실러스수에비커스 (Lactobacillus suebicus), 락토바실러스선키이 (Lactobacillus sunkii), 락토바실러스툭세티 (Lactobacillus tucceti), 락토바실러스백드노스테루스 (Lactobacillus vacdnosterrus), 락토바실러스베르스몰덴시스 (Lactobacillus versmoldensis) 및락토바실러스야마나쉬엔시스 (Lactobacillus yamanashiensis). [0071] [0072] [0073] [0074] 또다른실시양태에서, 박테리아는락토코커스슐레이페르 (Lactococcus Schleifer), 락토코커스춘강겐시스 (Lactococcus chungangensis), 락토코커스푸지엔시스 (Lactococcus fujiensis), 락토코커스가르비에애 (Lactococcus garvieae), 락토코커스락티스 (Lactococcus lactis), 락토코커스락티스하위종크레모리스 (Cremoris), 락토코커스락티스하위종호르드니애 (Hordniae), 락토코커스락티스하위종락티스 (Lactis), 락토코커스락티스하위종트룩태 (Tructae), 락토코커스피스시움 (Lactococcus piscium), 락토코커스플란타룸 (Lactococcus plantarum) 및락토코커스라피놀락티 (Lactococcus raffinolacti) 를포함하나이들로한정되지않는락토코커스속으로부터유래된다. 또다른실시양태에서, 박테리아는락토코커스락티스하위종크레모리스, 락토코커스락티스하위종락티스및락토코커스락티스하위종라피놀락티스를포함하나이들로한정되지않는, 락토코커스속에서 " 일반적으로안전한박테리아로서간주된 "(GRAS) 박테리아로서분류된박테리아들의집단이다. 또다른실시양태에서, 박테리아는 GRAS 박테리아종엔테로코커스두란스 (Enterococcus durans), 엔테로코커스패칼리스 (Enterococcus faecalis) 및엔테로코커스패시움 (Enterococcus faecium) 을포함하나이들로한정되지않는엔테로코커스속으로부터유래된다. 또다른실시양태에서, 박테리아는테트라게노코커스할로필루스 (Tetragenococcus halophilus) 및테트라게노코커스코레엔시스 (Tetragenococcus koreensis) 를포함하나이들로한정되지않는테트라게노코커스속으로부터

17 유래된다. [0075] [0076] [0077] [0078] [0079] [0080] [0081] [0082] [0083] [0084] [0085] 또다른실시양태에서, 박테리아는 GRAS 박테리아종웨이셀라코레엔시스 (Weissella koreensis), 웨이셀라파라메센테로이데스 (Weissella paramesenteroides), 웨이셀라타일란덴시스 (Weissella thailandensis), 웨이셀라콘푸사 (Weissella confusa), 웨이셀라베니넨시스 (Weissella beninensis), 웨이셀라시바리아 (Weissella cibaria), 웨이셀라파바리아 (Weissella fabaria), 웨이셀라가넨시스 (Weissella ghanensis) 및웨이셀라헬레니카 (Weissella hellenica) 를포함하나이들로한정되지않는웨이셀라속으로부터유래된다. 또다른실시양태에서, 박테리아는 GRAS 박테리아종류코노스톡카르노숨 (Leuconostoc carnosum), 류코노스톡시트레움 (Leuconostoc citreum), 류코노스톡팔락스 (Leuconostoc fallax), 류코노스톡홀잡펠리이 (Leuconostoc holzapfelii), 류코노스톡인해 (Leuconostoc inhae), 류코노스톡킴키이 (Leuconostoc kimchii), 류코노스톡락티스 (Leuconostoc lactis), 류코노스톡메센테로이데스 (Leuconostoc mesenteroides) 하위종크레모리스 (Cremoris), 류코노스톡메센테로이데스하위종덱스트라니쿰 (Dextranicum), 류코노스톡메센테로이데스하위종메센테로이데스 (Mesenteroides), 류코노스톡팔매 (Leuconostoc palmae) 및류코노스톡슈도메센테로이데스 (Leuconostoc pseudomesenteroides) 를포함하나이들로한정되지않는류코노스톡속으로부터유래된다. 또다른실시양태에서, 박테리아는오에노코커스오에니 (Oenococcus oeni) 를포함하나이것으로한정되지않는오에노코커스속으로부터유래된다. 또다른실시양태에서, 박테리아는살리니코커스벤토사 (Salinicoccus Ventosa), 살리니코커스알부스 (Salinicoccus albus), 살리니코커스알칼리필루스 (Salinicoccus alkaliphilus), 살리니코커스카르니칸크리 (Salinicoccus carnicancri), 살리니코커스할로두란스 (Salinicoccus halodurans), 살리니코커스히스파니커스 (Salinicoccus hispanicus), 살리니코커스이라넨시스 (Salinicoccus iranensis), 살리니코커스제오트갈리 (Salinicoccus jeotgali), 살리니코커스쿤밍겐시스 (Salinicoccus kunmingensis), 살리니코커스루테우스 (Salinicoccus luteus), 살리니코커스큉다오넨시스 (Salinicoccus qingdaonensis), 살리니코커스로세우스 (Salinicoccus roseus), 살리니코커스살시라이애 (Salinicoccus salsiraiae), 살리니코커스세수비이 (Salinicoccus sesuvii) 및살리니코커스시아멘시스 (Salinicoccus siamensis) 를포함하나이들로한정되지않는살리니코커스속으로부터유래된다. 또다른실시양태에서, 박테리아는마크로코커스카세올라이티커스 (Macrococcus caseolyticus) 를포함하나이것으로한정되지않는마크로코커스속으로부터유래된다. 또다른실시양태에서, 박테리아는 GRAS 박테리아종바실러스아밀로리쿠에파시엔스 (Bacillus amyloliquefaciens), 바실러스코아굴란스 (Bacillus coagulans) 및바실러스서브틸리스 (Bacillus subbtilis) 를포함하나이들로한정되지않는바실랄레스 (Bacillales) 목으로부터유래된다.. 또다른실시양태에서, 집단내의박테리아는피네골디아마그나 (Finegoldia magna) 가아니다. 또다른실시양태에서, 박테리아는언에어로코커스하이드로게날리스 (Anaerococcus hydrogenalis), 언에어로코커스락토라이티커스 (Anaerococcus lactolyticus), 언에어로코커스무르도키이 (Anaerococcus murdochii), 언에어로코커스옥타비우스 (Anaerococcus octavius), 언에어로코커스프레보티이 (Anaerococcus prevotii), 언에어로코커스테트라디우스 (Anaerococcus tetradius) 및언에어로코커스바기날리스 (Anaerococcus vaginalis) 종을포함하나이들로한정되지않는언에어로코커스속으로부터유래된다. 또다른실시양태에서, 박테리아는펩토니필루스아사카로라이티커스 (Peptoniphilus asaccharolyticus), 펩토니필루스콕시이 (Peptoniphilus coxii), 펩토니필루스두에르데니이 (Peptoniphilus duerdenii), 펩토니필루스고르바키이 (Peptoniphilus gorbachii), 펩토니필루스하레이 (Peptoniphilus harei), 펩토니필루스인돌리커스 (Peptoniphilus indolicus), 펩토니필루스이보리이 (Peptoniphilus ivorii), 펩토니필루스코에노에네니애 (Peptoniphilus koenoeneniae), 펩토니필루스라크리말리스 (Peptoniphilus lacrimalis), 펩토니필루스메티오닌니보락스 (Peptoniphilus methioninivorax), 펩토니필루스올세니이 (Peptoniphilus olsenii) 및펩토니필루스타이렐리애 (Peptoniphilus tyrrelliae) 종을포함하나이들로한정되지않는펩토니필루스속으로부터유래된다. 또다른실시양태에서, 박테리아는엔히드로박터애로사커스 (Enhydrobacter aerosaccus) 종을포함하나이것으로한정되지않는엔히드로박터속으로부터유래된다. 또다른실시양태에서, 박테리아는하기종들을포함하나이들로한정되지않는스핑고모나스 (Sphingomonas) 속

18 으로부터유래된다 : 스핑고모나스아바시 (Sphingomonas abaci), 스핑고모나스애드해시바 (Sphingomonas adhaesiva), 스핑고모나스애롤라타 (Sphingomonas aerolata), 스핑고모나스애스투아리이 (Sphingomonas aestuarii), 스핑고모나스알라스켄시스 (Sphingomonas alaskensis), 스핑고모나스알파인 (Sphingomonas alpine), 스핑고모나스아쿠아틸리스 (Sphingomonas aquatilis), 스핑고모나스아로마티시보란스 (Sphingomonas aromaticivorans), 스핑고모나스아사카로라이티카 (Sphingomonas asaccharolytica), 스핑고모나스아스탁산티니파시엔스 (Sphingomonas astaxanthinifaciens), 스핑고모나스아우란티아카 (Sphingomonas aurantiaca), 스핑고모나스아조티피겐스 (Sphingomonas azotifigens), 스핑고모나스캡슐레이트 (Sphingomonas capsulate), 스핑고모나스창바이엔시스 (Sphingomonas changbaiensis), 스핑고모나스클로로페놀리카 (Sphingomonas chlorophenolica), 스핑고모나스충부켄시스 (Sphingomonas chungbukensis), 스핑고모나스클로아캐 (Sphingomonas cloacae), 스핑고모나스사이나래 (Sphingomonas cynarae), 스핑고모나스데시카빌리스 (Sphingomonas desiccabilis), 스핑고모나스독도넨시스 (Sphingomonas dokdonensis), 스핑고모나스에키노이데스 (Sphingomonas echinoides), 스핑고모나스엔도파이티카 (Sphingomonas endophytica), 스핑고모나스패니 (Sphingomonas faeni), 스핑고모나스페니카 (Sphingomonas fennica), 스핑고모나스포르모센시스 (Sphingomonas formosensis), 스핑고모나스긴센기솔리 (Sphingomonas ginsengisoli), 스핑고모나스긴세노시디무탄스 (Sphingomonas ginsenosidimutans), 스핑고모나스글라시알리스 (Sphingomonas glacialis), 스핑고모나스할로아로마티카만스 (Sphingomonas haloaromaticamans), 스핑고모나스한쿠켄시스 (Sphingomonas hankookensis), 스핑고모나스헤르비시도보란스 (Sphingomonas herbicidovorans), 스핑고모나스히스티디닐라이티카 (Sphingomonas histidinilytica), 스핑고모나스인디카 (Sphingomonas indica), 스핑고모나스인슐래 (Sphingomonas insulae), 스핑고모나스자포니카 (Sphingomonas japonica), 스핑고모나스자스프시 (Sphingomonas jaspsi), 스핑고모나스제주엔시스 (Sphingomonas jejuensis), 스핑고모나스진주엔시스 (Sphingomonas jinjuensis), 스핑고모나스카이스텐시스 (Sphingomonas kaistensis), 스핑고모나스코레엔시스 (Sphingomonas koreensis), 스핑고모나스라테라리애 (Sphingomonas laterariae), 스핑고모나스레이다이 (Sphingomonas leidyi), 스핑고모나스마크로골리타비다 (Sphingomonas macrogolitabida), 스핑고모나스마크로골타비두스 (Sphingomonas macrogoltabidus), 스핑고모나스말리 (Sphingomonas mali), 스핑고모나스멜로니스 (Sphingomonas melonis), 스핑고모나스몰루스코룸 (Sphingomonas molluscorum), 스핑고모나스무코시스시마 (Sphingomonas mucosissima), 스핑고모나스나타토리아 (Sphingomonas natatoria), 스핑고모나스올리고페놀리카 (Sphingomonas oligophenolica), 스핑고모나스오리지테래 (Sphingomonas oryziterrae), 스핑고모나스판니 (Sphingomonas panni), 스핑고모나스파라파우시모빌리스 (Sphingomonas parapaucimobilis), 스핑고모나스파우시모빌리스 (Sphingomonas paucimobilis), 스핑고모나스파일로스패래 (Sphingomonas phyllosphaerae), 스핑고모나스피투이토사 (Sphingomonas pituitosa), 스핑고모나스폴리아로마티시보란스 (Sphingomonas polyaromaticivorans), 스핑고모나스프루니 (Sphingomonas pruni), 스핑고모나스슈도산귀니스 (Sphingomonas pseudosanguinis), 스핑고모나스로사 (Sphingomonas rosa), 스핑고모나스로세이플라바 (Sphingomonas roseiflava), 스핑고모나스루브라 (Sphingomonas rubra), 스핑고모나스산귀니스 (Sphingomonas sanguinis), 스핑고모나스산자니게넨스 (Sphingomonas sanxanigenens), 스핑고모나스세디미니콜라 (Sphingomonas sediminicola), 스핑고모나스솔리 (Sphingomonas soli), 스핑고모나스스타른베르겐시스 (Sphingomonas starnbergensis), 스핑고모나스스타이기아 (Sphingomonas stygia), 스핑고모나스수바르크티카 (Sphingomonas subarctica), 스핑고모나스수베리파시엔스 (Sphingomonas suberifaciens), 스핑고모나스수브테라네안 (Sphingomonas subterranean), 스핑고모나스태조넨시스 (Sphingomonas taejonensis), 스핑고모나스테래 (Sphingomonas terrae), 스핑고모나스트루에페리 (Sphingomonas trueperi), 스핑고모나스우르신콜라 (Sphingomonas ursincola), 스핑고모나스위티키이 (Sphingomonas wittichii), 스핑고모나스제노파가 (Sphingomonas xenophaga), 스핑고모나스진지앙겐시스 (Sphingomonas xinjiangensis), 스핑고모나스야부우키애 (Sphingomonas yabuuchiae), 스핑고모나스야노이쿠이애 (Sphingomonas yanoikuyae) 및스핑고모나스유나넨시스 (Sphingomonas yunnanensis) 종. [0086] [0087] 또다른실시양태에서, 박테리아는하프니아알베이 (Hafnia alvei) 를제외한, 감마-프로테오박테리아문내의 GRAS 종, 예컨대, 할로모나스엘롱가타 (Halomonas elongata) 이다. 또다른실시양태에서, 박테리아는 GRAS 종아세토박터아세티 (Acetobacter aceti) 하위종아세티 (Aceti), 아세토박터파바룸 (Acetobacter fabarum), 아세토박터로바니엔시스 (Acetobacter lovaniensis), 아세토박터말로룸 (Acetobacter malorum), 아세토박터오리엔탈리스 (Acetobacter orientalis), 아세토박터파스테우리아누스 (Acetobacter pasteurianus) 하위종파스테우리아누스 (Pasteurianus), 아세토박터포모룸 (Acetobacter pomorum), 아세토박터시지기이 (Acetobacter syzygii), 아세토박터트로피칼리스 (Acetobacter tropicalis), 글루콘아세토박터아조토캡탄스 (Gluconacetobacter azotocaptans), 글루콘아세토박터디아조트로피커스

19 (Gluconacetobacter diazotrophicus), 글루콘아세토박터엔타니이 (Gluconacetobacter entanii), 글루콘아세토박터유로패우스 (Gluconacetobacter europaeus), 글루콘아세토박터한세니이 (Gluconacetobacter hansenii), 글루콘아세토박터조한내 (Gluconacetobacter johannae), 글루콘아세토박터오보에디엔스 (Gluconacetobacter oboediens), 글루콘아세토박터옥시단스 (Gluconobacter oxydans) 및글루콘아세토박터자일리누스 (Gluconacetobacter xylinus) 를포함하나이들로한정되지않는알파-프로테오박테리아문의속으로부터유래된다. [0088] [0089] [0090] 또다른실시양태에서, 박테리아는자이모모나스모빌리스 (Zymomonas mobilis) 하위종모빌리스 (Mobilis) 이다. 또다른실시양태에서, 박테리아는박테리오데스자일라니솔벤스 (Bacteriodes xylanisolvens) 균주 DSM 23964를포함하나이것으로한정되지않는박테리오데테스문으로부터유래된다. 또다른실시양태에서, 박테리아는하기박테리아들을포함하나이들로한정되지않는비피도박테리움 (Bifidobacterium) 속으로부터유래된다 : 비피도박테리움아돌레센티스 (Bifidobacterium adolescentis), 비피도박테리움아돌레센티스 ATCC 15703, 비피도박테리움아돌레센티스 L2-32, 비피도박테리움안굴라툼 (Bifidobacterium angulatum), 비피도박테리움안굴라툼 DSM = JCM 7096, 비피도박테리움애니말리스 (Bifidobacterium animalis), 비피도박테리움애니말리스하위종애니말리스 (Animalis), 비피도박테리움애니말리스하위종애니말리스 ATCC 25527, 비피도박테리움애니말리스하위종락티스 (Lactis), 비피도박테리움애니말리스하위종락티스 AD011, 비피도박테리움애니말리스하위종락티스 ATCC 27673, 비피도박테리움애니말리스하위종락티스 B420, 비피도박테리움애니말리스하위종락티스 BB-12, 비피도박테리움애니말리스하위종락티스 Bi-07, 비피도박테리움애니말리스하위종락티스 BI-04, 비피도박테리움애니말리스하위종락티스 BLC1, 비피도박테리움애니말리스하위종락티스 BS 01, 비피도박테리움애니말리스하위종락티스 CNCM I- 2494, 비피도박테리움애니말리스하위종락티스 DSM 10140, 비피도박테리움애니말리스하위종락티스 HN019, 비피도박테리움애니말리스하위종락티스 V9, 비피도박테리움아스테로이데스 (Bifidobacterium asteroides), 비피도박테리움아스테로이데스 PRL2011, 비피도박테리움비아바티이 (Bifidobacterium biavatii), 비피도박테리움비피둠 (Bifidobacterium bifidum), 비피도박테리움비피둠 ATCC = JCM 1255, 비피도박테리움비피둠 BGN4, 비피도박테리움비피둠 CECT 7366, 비피도박테리움비피둠 DSM 20215, 비피도박테리움비피둠 IPLA 20015, 비피도박테리움비피둠 JCM 1254, 비피도박테리움비피둠 LMG 13195, 비피도박테리움비피둠 NCIMB 41171, 비피도박테리움비피둠 PRL2010, 비피도박테리움비피둠 S17, 비피도박테리움봄비 (Bifidobacterium bombi), 비피도박테리움보움 (Bifidobacterium boum), 비피도박테리움브레베 (Bifidobacterium breve), 비피도박테리움브레베 ACS-071-V-Sch8b, 비피도박테리움브레베 CECT 7263, 비피도박테리움브레베 DPC 6330, 비피도박테리움브레베 DSM = JCM 1192, 비피도박테리움브레베 EX336960VC18, 비피도박테리움브레베 EX336960VC19, 비피도박테리움브레베 EX336960VC21, 비피도박테리움브레베 EX533959VC21, 비피도박테리움브레베 HPH0326, 비피도박테리움브레베 JCP7499, 비피도박테리움브레베 S27, 비피도박테리움브레베 UCC2003, 비피도박테리움칼리트리코스 (Bifidobacterium callitrichos), 비피도박테리움카테눌라툼 (Bifidobacterium catenulatum), 비피도박테리움카테눌라툼 DSM = JCM 1194, 비피도박테리움코에리눔 (Bifidobacterium choerinum), 비피도박테리움코에리눔 DSM 20434, 비피도박테리움코아굴란스 (Bifidobacterium coagulans), 비피도박테리움인디쿰 (Bifidobacterium indicum), 비피도박테리움카쉬와노헨스 (Bifidobacterium kashiwanohense), 비피도박테리움카쉬와노헨스 JCM 15439, 비피도박테리움롱굼 (Bifidobacterium longum), 비피도박테리움롱굼 3_1_37DFAAB, 비피도박테리움롱굼 AGR2137, 비피도박테리움롱굼 BORI, 비피도박테리움롱굼 D2957, 비피도박테리움롱굼 DJO10A, 비피도박테리움롱굼 NCC2705, 비피도박테리움롱굼하위종인판티스 (Infantis), 비피도박테리움롱굼하위종인판티스 157F, 비피도박테리움롱굼하위종인판티스 ATCC = JCM 1222, 비피도박테리움롱굼하위종인판티스 CCUG 52486, 비피도박테리움롱굼하위종롱굼 (Longum), 비피도박테리움롱굼하위종롱굼 1-6B, 비피도박테리움롱굼하위종롱굼 2-2B, 비피도박테리움롱굼하위종롱굼 35B, 비피도박테리움롱굼하위종롱굼 44B, 비피도박테리움롱굼하위종롱굼 ATCC 55813, 비피도박테리움롱굼하위종롱굼 BBMN68, 비피도박테리움롱굼하위종롱굼 CECT 7347, 비피도박테리움롱굼하위종롱굼 CMCC P0001, 비피도박테리움롱굼하위종롱굼 F8, 비피도박테리움롱굼하위종롱굼 JCM 1217, 비피도박테리움롱굼하위종롱굼 JDM301, 비피도박테리움롱굼하위종롱굼 KACC 91563, 비피도박테리움롱굼하위종수이스 (Suis), 비피도박테리움마그눔 (Bifidobacterium magnum), 비피도박테리움마그눔 DSM 20222, 비피도박테리움코리네포르메 (Bifidobacterium coryneforme), 비피도박테리움크루딜락티스 (Bifidobacterium crudilactis), 비피도박테리움쿠니쿨리 (Bifidobacterium cuniculi), 비피도박테리움덴티움 (Bifidobacterium dentium), 비피도박테리움덴티움 ATCC 27678, 비피도박테리움덴티움 ATCC 27679, 비피도박테리움덴티움 Bd1, 비피도박테리움덴티움 JCM 1195, 비피도박테리움덴티움 JCVIHMP022, 비피도박테리움갈리쿰 (Bifidobacterium gallicum), 비피도박테

20 리움갈리쿰 DSM 20093, 비피도박테리움갈리나룸 (Bifidobacterium gallinarum), 비피도박테리움시미애 (Bifidobacterium simiae), 비피도박테리움스텔렌보쉔스 (Bifidobacterium stellenboschense), 비피도박테리움스테르코리스 (Bifidobacterium stercoris), 비피도박테리움서브타일 (Bifidobacterium subtile), 비피도박테리움서브타일 DSM 20096, 비피도박테리움메리시쿰 (Bifidobacterium merycicum), 비피도박테리움미니뭄 (Bifidobacterium minimum), 비피도박테리움미니뭄 DSM 20102, 비피도박테리움몬골리엔스 (Bifidobacterium mongoliense), 비피도박테리움슈도카테눌라툼 (Bifidobacterium pseudocatenulatum), 비피도박테리움슈도카테눌라툼 D2CA, 비피도박테리움슈도카테눌라툼 DSM = JCM 1200, 비피도박테리움슈도롱굼 (Bifidobacterium pseudolongum), 비피도박테리움슈도롱굼 AGR2145, 비피도박테리움슈도롱굼하위종글로보숨 (Globosum), 비피도박테리움슈도롱굼하위종슈도롱굼 (Pseudolongum), 비피도박테리움사이크래로필룸 (Bifidobacterium psychraerophilum), 비피도박테리움풀로룸 (Bifidobacterium pullorum), 비피도박테리움풀로룸 ATCC 49618, 비피도박테리움레우테리 (Bifidobacterium reuteri), 비피도박테리움루미난티움 (Bifidobacterium ruminantium), 비피도박테리움새쿨라레 (Bifidobacterium saeculare), 비피도박테리움사귀니 (Bifidobacterium saguini), 비피도박테리움스카르도비이 (Bifidobacterium scardovii), 비피도박테리움스카르도비이 JCM 12489, 비피도박테리움써마시도필룸 (Bifidobacterium thermacidophilum), 비피도박테리움써마시도필룸하위종포르시눔 (Porcinum), 비피도박테리움써마시도필룸하위종써마시도필룸 (Thermacidophilum), 비피도박테리움써모필룸 (Bifidobacterium thermophilum), 비피도박테리움써모필룸 RBL67, 비피도박테리움츠루미엔스 (Bifidobacterium tsurumiense), 비피도박테리움츠루미엔스 DSM 17777, 비피도박테리움종비피도박테리움브레베 (Bifidobacterium breve) M-16V, 비피도박테리움애니말리스 (Bifidobacterium animalis) 하위종락티스균주 HN019, Bi-07, BI-04 및 B420, 비피도박테리움애니말리스하위종락티스균주 Bf-6, 비피도박테리움롱굼 (Bifidobacterium longum) 균주 BB536, 및비피도박테리움락티스 (Bifidobacterium lactis) 균주 Bb12. [0091] 또다른실시양태에서, 박테리아는하기박테리아들을포함하나이들로한정되지않는카르노박테리움 (Carnobacterium) 속으로부터유래된다 : 카르노박테리움알테르펀디툼 (Carnobacterium alterfunditum), 카르노박테리움디베르겐스 (Carnobacterium divergens), 카르노박테리움펀디툼 (Carnobacterium funditum), 카르노박테리움갈리나룸 (Carnobacterium gallinarum), 카르노박테리움인히벤스 (Carnobacterium inhibens), 카르노박테리움제오트갈리 (Carnobacterium jeotgali), 카르노박테리움말타로마티쿰 (Carnobacterium maltaromaticum), 카르노박테리움말타로마티쿰 38b, 카르노박테리움말타로마티쿰 ATCC 35586, 카르노박테리움말타로마티쿰 LMA28, 카르노박테리움모바일 (Carnobacterium mobile), 카르노박테리움플레이스토세니움 (Carnobacterium pleistocenium), 카르노박테리움비리디안스 (Carnobacterium viridians), 카르노박테리움종 ' 에일라티쿰 (eilaticum) ', 카르노박테리움종 11-1, 카르노박테리움종 12266/2009, 카르노박테리움종 13-3, 카르노박테리움종 17-4, 카르노박테리움종 22-6, 카르노박테리움종 2673, 카르노박테리움종 27L, 카르노박테리움종 35L, 카르노박테리움종 , 카르노박테리움종 38ANAV, 카르노박테리움종 40L, 카르노박테리움종 7196, 카르노박테리움종 A, 카르노박테리움종 A2S10L14, 카르노박테리움종 A4, 카르노박테리움종 A726, 카르노박테리움종 ag53, 카르노박테리움종 ARCTIC-P2, 카르노박테리움종 ARCTIC-P26, 카르노박테리움종 ARCTIC-P35, 카르노박테리움종 AT12, 카르노박테리움종 AT7, 카르노박테리움종 B, 카르노박테리움종 B5, 카르노박테리움종 BA-8I, 카르노박테리움종 BBDP54, 카르노박테리움종 BBDP71, 카르노박테리움종 BM-8, 카르노박테리움종 BM-8I, 카르노박테리움종 C-13, 카르노박테리움종 c58, 카르노박테리움종 cg53, 카르노박테리움종 CM1, 카르노박테리움종 D35, 카르노박테리움종 D4, 카르노박테리움종 D5, 카르노박테리움종 EK-I53, 카르노박테리움종 ES-11, 카르노박테리움종 FBT1-19, 카르노박테리움종 FBT1-22, 카르노박테리움종 FBT3-14, 카르노박테리움종 FBT3-9, 카르노박테리움종 FBT4-1, 카르노박테리움종 FBT4-18, 카르노박테리움종 G1516J1L, 카르노박테리움종 G4a-1, 카르노박테리움종 G5a-1, 카르노박테리움종 GCM1, 카르노박테리움종 H126a, 카르노박테리움종 Hg4-03, 카르노박테리움종 I-Bh20-14, 카르노박테리움종 I-Bh4-26, 카르노박테리움종 KA-2, 카르노박테리움종 KA-8, 카르노박테리움종 KH1, 카르노박테리움종 KOPRI80142, 카르노박테리움종 KOPRI80153, 카르노박테리움종 KOPRI80155, 카르노박테리움종 L , 카르노박테리움종 LIV10, 카르노박테리움종 LMG 26642, 카르노박테리움종 LV62:W1, 카르노박테리움종 LV66, 카르노박테리움종 M7-C10, 카르노박테리움종 MARL15, 카르노박테리움종 MKJ37, 카르노박테리움종 NFU35-25, 카르노박테리움종 NJ-46, 카르노박테리움종 R-36982, 카르노박테리움종 RI234, 카르노박테리움종 S171, 카르노박테리움종 S181, 카르노박테리움종 Sd5t18, 카르노박테리움종 Sd5t5, 카르노박테리움종 Sd6t1, 카르노박테리움종 Sd6t15, 카르노박테리움종 Sd6t17, 카르노박테리움종 Sd6t18, 카르노박테리움종 SR2-31-I, 카르노박테리움종 St2, 카르노박테리움종 T301, 카르노박테리움종 UI49, 카르노박테리움종 UPAA77, 카르노박테리움종 UST , 카르노박테리움종 WFPIS001, 카르노박테리움종 WN1359, 카르노박테리움종 WN1370, 카르노박테리움종 WN1371, 카르노

21 박테리움종 WN1372, 카르노박테리움종 WN1373, 카르노박테리움종 WN1374, 카르노박테리움종 Y6, 카르노박테리움디베르겐스 (Carnobacterium divergens), 카르노박테리움말타로마티쿰 (Carnobacterium maltaromaticum), 카르노박테리움피스시콜라 (Carnobacterium piscicola), 카르노박테리움말타로마티쿰균주 CB1( 살아있고열-처리됨 ) 및카르노박테리움말타로마티쿰균주 CB1. [0092] [0093] [0094] 또다른실시양태에서, 박테리아는하기박테리아들을포함하나이들로한정되지않는페디오코커스 (Pediococcus) 속으로부터유래된다 : 페디오코커스액시딜락티시 (Pediococcus acidilactici), 페디오코커스액시딜락티시 7_4, 페디오코커스액시딜락티시 D3, 페디오코커스액시딜락티시 DSM 20284, 페디오코커스액시딜락티시 MA18/5M, 페디오코커스아르겐티니커스 (Pediococcus argentinicus), 페디오코커스셀리콜라 (Pediococcus cellicola), 페디오코커스클라우세니이 (Pediococcus claussenii), 페디오코커스클라우세니이 ATCC BAA-344, 페디오코커스담노서스 (Pediococcus damnosus), 페디오코커스담노서스 9-6b, 페디오코커스에탄올리두란스 (Pediococcus ethanolidurans), 페디오코커스이노피나투스 (Pediococcus inopinatus), 페디오코커스롤리이 (Pediococcus lolii), 페디오코커스롤리이 NGRI 0510Q, 페디오코커스파르불루스 (Pediococcus parvulus), 페디오코커스파르불루스 CIRM 750, 페디오코커스펜토사세우스 (Pediococcus pentosaceus), 페디오코커스펜토사세우스 ATCC 25745, 페디오코커스펜토사세우스 IE-3, 페디오코커스시아멘시스 (Pediococcus siamensis), 페디오코커스스틸레시이 (Pediococcus stilesii), 페디오코커스종 , 페디오코커스종 BGM59, 페디오코커스종 BZ-2005, 페디오코커스종 CAT-100BC, 페디오코커스종 CR-6S, 페디오코커스종 CRA51, 페디오코커스종 EDB-LI4, 페디오코커스종 epsi2-mse-e3-2, 페디오코커스종 epsi31-mse-e3-2, 페디오코커스종 FUA 3137, 페디오코커스종 FUA 3140, 페디오코커스종 FUA 3226, 페디오코커스종 GS4, 페디오코커스종 IBUN 186, 페디오코커스종 IE3, 페디오코커스종 IJ-K1, 페디오코커스종 J-11, 페디오코커스종 KDLLL3-1, 페디오코커스종 L04, 페디오코커스종 LAB4012, 페디오코커스종 Lact10, 페디오코커스종 LQC 1953, 페디오코커스종 LQC 1957, 페디오코커스종 LQC 1963, 페디오코커스종 LQC 1966, 페디오코커스종 LQC 1972, 페디오코커스종 MB2C, 페디오코커스종 MB2D, 페디오코커스종 MFC1, 페디오코커스종 MMZ60A, 페디오코커스종 MUU10, 페디오코커스종 MUU13, 페디오코커스종 MUU2, 페디오코커스종 MUU3, 페디오코커스종 MUU4, 페디오코커스종 NBRC , 페디오코커스종 NBRC , 페디오코커스종 NBRC , 페디오코커스종 NBRC , 페디오코커스종 NBRC , 페디오코커스종 NBRC , 페디오코커스종 NBRC , 페디오코커스종 NBRC , 페디오코커스종 NBRC , 페디오코커스종 NBRC , 페디오코커스종 NBRC , 페디오코커스종 NBRC , 페디오코커스종 NBRC , 페디오코커스종 NBRC , 페디오코커스종 NBRC , 페디오코커스종 NBRC , 페디오코커스종 NBRC , 페디오코커스종 NBRC , 페디오코커스종 NBRC , 페디오코커스종 NBRC , 페디오코커스종 NBRC , 페디오코커스종 NBRC , 페디오코커스종 NBRC , 페디오코커스종 NBRC , 페디오코커스종 NBRC , 페디오코커스종 NIR1, 페디오코커스종 NIR3, 페디오코커스종오메가41-FH-E3-2, 페디오코커스종 P14, 페디오코커스종 Pom3, 페디오코커스종 Pom4, 페디오코커스종 Pom7, 페디오코커스종 Pov5, 페디오코커스종 Pov7, 페디오코커스종 Pov8, 페디오코커스종 QCH-42, 페디오코커스종 QCH-66, 페디오코커스종 QCH-67, 페디오코커스종 QMA-03G, 페디오코커스종 QMA-06CH, 페디오코커스종 QMA-07G, 페디오코커스종 QMA-11, 페디오코커스종 QMA-21BC, 페디오코커스종 QMA-23BC, 페디오코커스종 QMA-24BC, 페디오코커스종 QMA-27BC, 페디오코커스종 Rrt8, 페디오코커스종 Rrt9, 페디오코커스종 Rrv1, 페디오코커스종 Rrv3, 페디오코커스종 S17, 페디오코커스종 S18, 페디오코커스종 SD2, 페디오코커스종샤사바르 (Shahsavar), 페디오코커스종 siga1, 페디오코커스종 T1R1C23, 페디오코커스종 T1R4C24, 페디오코커스종 Te6, 페디오코커스종 YCO-02, 페디오코커스종 YCO- 04, 페디오코커스종 YCO-09, 페디오코커스종 YCO-10, 페디오코커스종 YCO-11, 페디오코커스종 YCO-12, 페디오코커스종 YCO-13, 페디오코커스종 YCO-16, 페디오코커스종 YCO-17, 페디오코커스종 YCO-18, 페디오코커스종 YCO-23, 페디오코커스종 YCO-25, 페디오코커스종 YCO-26, 페디오코커스종 YCO-28, 페디오코커스종 YXC- 17, 페디오코커스종 Z-17, 페디오코커스액시딜락티시 (Pediococcus acidilactici) 균주 NP3, 페디오코커스액시딜락티시, 페디오코커스파르불루스 (Pediococcus parvulus) 및페디오코커스펜토사세우스 (Pediococcus pentosaceus). 한실시양태에서, 병원성을나타내고 / 내거나기회감염성병원성종인것으로서본원에나열되어있거나다른방식으로공지되어있는임의의박테리아는제외된다. 또다른실시양태에서, 형질전환을위해선택되고조성물에포함될박테리아는본원에나열되어있는박테리아속의어느한박테리아, 본원에나열되어있는특정박테리아종의어느한박테리아, 또는본원에나열되어있는제1 박테리아및제2 박테리아의임의의집합체이다. 한실시양태에서, 조성물에서사용될박테리아는피부, 특히인간피부상에존재할수있는임의의박테리아, 보다구체적으로인간피부상에존재하고병원성및 / 또는기회감염성박테리아를제외한 GRAS 박테리아인박테

22 리아이다. [0095] [0096] [0097] [0098] [0099] [0100] 한실시양태에서, 조성물은형질전환된박테리아의집단, 및관심있는화합물을발현하도록형질전환되지않은박테리아의집단을포함한다 ( 예를들면, 조성물은형질전환된박테리아집단및천연발생또는프로바이오틱박테리아로구성된다 ). 1개초과의박테리아집단을포함하는조성물도고려되고, 이때각각의집단은각각의개별세포가 1개초과의관심있는화합물을발현할수있거나각각의개별세포가 1개의화합물을발현하기때문에상이한관심있는화합물들의발현을위한개별형질전환된박테리아들의집합체이고상이한관심있는분자를발현하는상이한개체들의집합체는상이한관심있는화합물을발현하거나, 한집단은형질전환되고한집단은형질전환되지않는다. 한실시양태에서, 조성물은대상체에게의국소적용을위해제제화된제1 형질전환된박테리아집단및제2 형질전환된박테리아집단을포함한다. 한실시양태에서, 제2 형질전환된박테리아집단은 (i) 조성물중의제1 형질전환된박테리아집단과상이한비병원성박테리아로부터생성되거나, (ii) 조성물중의제1 형질전환된박테리아집단에의해발현된관심있는제1 화합물과상이한관심있는화합물을발현하도록형질전환된다. 박테리아는살아있는형태, 약독화된형태, 반활성형태, 불활성화된형태또는사멸된형태로조성물내에포함될수있다. 한특정실시양태에따라, 이들박테리아들은살아있는형태로사용되고이들이제제화되어있는조성물의국소적용시관심있는화합물을만성적으로발현할수있다. 이들은세포성분분획의형태또는대사물질의형태로도포함될수있다. 박테리아종 ( 들 ), 관심있는분자 ( 들 ) 또는분획 ( 들 ) 은동결건조된분말의형태, 배양상청액의형태, 회수된화합물의형태및 / 또는적절한경우농축된형태로도입될수도있다. 한변경에따라, 조성물은 2가무기양이온을함유할수도있다. 조성물은선택된투여방법을위해통상적으로이용될수있는임의의생약형태로존재할수있다. 박테리아 ( 한실시양태에서피부박테리아 ) 에의해합성된활성분자는박테리아내에머무를수있거나피부외부로분비될수있다. 한정인자는박테리아생장을조절할수있다. 이러한한정인자는천연적으로피부상에존재할수있고한실시양태에서치료될대상체에게국소적용될조성물내에포함될수있다. 하나이상의한정인자가제제내에포함될수있다. 또다른실시양태에서, 한정인자는보완제품, 예컨대, 비누, 신체세척제, 샴푸또는로션에첨가되어조성물의질을높이거나조성물에영양분을공급하고조성물을활성또는살아있는상태로유지한다. 한정인자의예로는아미노산, 바이오틴, 니코틴아미드및티아민, 판토테네이트, 리보플라빈, 엽산, 케라틴, 지질, 락테이트및멜라닌이있다. 바람직한한정인자는아미노산 L-알라닌일수있다. 박테리아생장은박테리아주기를한정하기위해복제기점의기작에의해조절될수있다. 박테리아주기는 50 주기로한정될수있거나, 박테리아주기는 2 내지 40 주기로한정될수있다. 박테리아생장의한정은물리적환경인자, 예컨대, ph 및온도에의해달성될수도있다. B. 예시적인관심있는화합물전술된바와같이, 조성물을위해선택된박테리아종을공지된재조합기법을이용하여형질전환시켜관심있는화합물을발현한다. 예시적인관심있는화합물은이화합물이사용되는피부장애또는질병, 또는목적의표시와함께하기표에나열되어있다

23 [0101]

24 [0102] [0103] [0104] [0105] [0106] [0107] [0108] [0109] [0110] [0111] [0112] [0113] [0114] [0115] 한실시양태에서, 자외선으로부터피부를보호하는데에사용될조성물이고려된다. 즉, 상기조성물은전형적으로 320 내지 400 nm의파장에서자외선 A 방사선을흡수하거나반사하거나, 전형적으로 315 내지 280 nm의파장에서자외선 B 방사선을흡수하거나반사하거나, 또는 UVA 및 UVB 둘다를흡수하고 / 하거나반사하기위한자외선차단제로서사용되기위한것이다. 조성물중의형질전환된박테리아는하기 1 군, 2 군, 3 군, 4 군, 5 군, 6 군, 7 군, 8 군, 9 군, 10 군, 11 군및 12 군내의예시적인관심있는화합물들중하나이상을발현한다 : 1 군 - 마이코스포린, 가두솔, 옥소-마이코스포린, 이미노-마이코스포린및마이코스포린유사아미노산 (MAA; 글리코실화되어있거나올리고당류에공유결합되어있음, 올리고당류-연결된 MAA); 및 / 또는세포내또는세포외가두솔, 데옥시가두 ), 4-데옥시가두솔 (S2), 시노린, 포피라-334, 팔리틴, 팔리텐, 아스테리나-330, 팔리티놀, 마이코스포린-글리신, 마이코스포린-세리놀, 마이코스포린-타우린, 마이코스포린-글리신- 발린, 마이코스포린-2- 글리신, 마이코스포린-글리신- 글루탐산, 마이코스포린-글루탐산- 글리신, 마이코스포린-메틸아민- 세린, 마이코스포린-메틸아민-트레오닌 ( 쓰레오닌 ), 우수지렌, 데하이드록실우수지렌, 플레이텐산-337, 플레이텐산-335, 팔리틴 -세린, 팔리틴-트레오닌, 팔리틴-트레오닌-설페이트, 플레이틴-세린-설페이트, 유할로테세, 마이코스포린-알라닌 (2-(e)-2,3-디하이드록시프로-1-에닐이미노 -마이코스포린-알라닌); 2 군 - 스시토네민 ; 3 군 - 멜라닌 : 유멜라닌 ( 또는디하이드록시페닐알라닌 (DOPA) 멜라닌 ), 페오멜라닌, 알로멜라닌, 피오멜라닌, 도파멜라닌, 뉴로멜라닌 ; 4 군 - UV-스크리닝 / 관찰아미노산유사분자 : 유로칸산 ; 5 군 - 플라보노이드 : 안토시아닌및안토잔틴및안토시아니딘 ; 6 군 - 베탈라닌 : 베타시아닌및베타잔틴 ; 7 군 - MAA에대한서열유사성을갖는분자 : 데하이드로퀴네이트합성효소상동체 (DHQS 상동체 ) 및 ATP-그래스프 ; 8 군 - UV-스크리닝 / 관찰색소 : 카로테노이드 / 카르테노단백질, 카로텐, 리코펜, 잔토필, 루틴, 제아잔틴및포피린-기제 / 헴-포피린-기제의클로로필-II; 9 군 - UV-스크리닝 / 관찰보조인자, 예컨대, 테트라하이드로바이오프테린및바이오프테린 ; 10 군 - 페닐프로파노이드 ; 11 군 - 탄닌 : 플로로탄닌, 디엑콜및엑콜 ; 군 12 - 사르가퀴노산, 사르가크로메놀, 스패로포린 ( 뎁사이드 (depside)), 판나린 ( 뎁시돈 ); 및

25 [0116] [0117] [0118] [0119] [0120] [0121] [0122] [0123] [0124] [0125] [0126] [0127] [0128] [0129] [0130] [0131] 13 군 - UV에의노출에의해야기된손상을복구하는 DNA 복구효소, 예컨대, 포토리아제, 엔도뉴클레아제및 DNA 글리코실라제. 한실시양태에서, 관심있는화합물은 1 내지 13 군중어느한군에나열된화합물들중어느한화합물이다. 또다른실시양태에서, 산화스트레스의감소를제공하는데에사용될, 예컨대, 미용또는노화방지조성물로서사용될조성물이고려된다. 상기조성물은항산화제조성물로서 UV 노출로부터의감소를제공할수있다. 조성물중의형질전환된박테리아는하기 1 군, 2 군, 3 군, 4 군, 5 군, 6 군및 7 군내의예시적인관심있는화합물들중하나이상의화합물을발현한다 : 1 군 - 티로시나제 ( 및이의기질및생성물 ); 2 군 - 알파하이드록시산 (AHA): 글리콜산, 젖산및시트르산 ; 3 군 - 다당류 : 글리코스아미노글리칸 (GAG), 점막다당류및히알루로난 ( 히알루론산, 히알루로네이트또는 HA로서도지칭됨 ); 4 군 - 피부관련보조인자 : 비타민 C 또는 L-아스코르브산, 또는단순히아스코르베이트, 비타민 A, 바이오프테린, 보조효소 A(CoA, CoASH, 또는 HSCoA), 보조효소 Q10( 유비퀴논, 유비데카레논, 보조효소 Q, CoQ10) 및몰리브도프테린 ; 5 군 - 비타민 E: 알파-토코페롤, 베타-토코페롤, 감마-토코페롤, 델타-토코페롤, 알파-토코트리에놀, 베타-토코트리에놀, 감마-토코트리에놀및델타-토코트리에놀 ; 6 군 - 중합체 : 폴리올및글리세롤 ; 7 군 - 추가피부관련천연화합물, 예컨대, 콜라겐, 케라틴, 엘라스틴, 리놀레산, 라미닌, 트레티노인, 타자로텐, 사르가퀴노산, 사르가크로메놀, 푸코잔틴, 레티노이드, 소염사이토킨 ( 예컨대, IL-2), 코르티손, 타크롤리무스, 시클로스포린, 레스베라트롤, 갈로카테콜, 갈로카테킨및에피갈로카테킨갈레이트. 다른실시양태에서, 활성피부염, 여드름, 화상, 곤충자상, 두드러기, 비듬및신체악취를치료하는데에사용될조성물이고려된다. 당업자는이들질병들의치료를위해형질전환된박테리아에서발현될관심있는화합물을확인할수있다. 상기표에나열된화합물들의서열에대한서열유사성을갖는화합물들도고려되고동일한화합물로서간주될수있다. 2개의서열들은후술된바와같이최대상응성에대해정렬될때 2개의서열들에서뉴클레오티드또는아미노산잔기의서열이적어도 40% 의유사성을갖는경우 " 실질적으로동일하거나동일하다 " 고주장된다. 대안적으로, % 동일성은 20% 내지 100% 일수있다. 보다바람직한실시양태는후술된바와같이본원에기재된프로그램, 예컨대, 표준파라미터를사용한 BLAST를사용할때기준서열 ( 예를들면, 서열번호 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 또는 18) 에비해 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 를포함한다. 이정의는시험서열이기준서열에대한실질적인동일성을가질때시험서열의상보체도지칭한다. 상기표에나열된화합물의단백질의도메인의서열에대한서열유사성을갖는보존된단백질도메인을갖는화합물도고려되고동일한화합물로서간주될수있다. 서열비교를위해, 전형적으로한서열은시험서열과비교되는기준서열로서작용한다. 서열비교알고리즘을사용할때, 시험서열및기준서열은컴퓨터내로도입되고, 필요하다면하위서열좌표가지정되고, 서열알고리즘프로그램파라미터가지정된다. 디폴트프로그램파라미터가사용될수있거나, 대안적파라미터가지정될수있다. 그다음, 서열비교알고리즘이프로그램파라미터를기초로기준서열에비해상대적으로시험서열에대한 % 서열동일성을계산한다. 비교를위한서열정렬방법은당분야에서잘공지되어있다. ( 국립생명공학정보센터에의해제공된 ) 하기프로그램이상동성 / 동일성을측정하기위해사용될수있다 : 디폴트파라미터와함께사용될수있는 BLAST, 갭 (gapped) BLAST, BLASTN 및 PSI-BLAST. 비교를위한최적서열정렬은당분야에서공지되어있는상이한방법들, 예컨대, 워터만 (Waterman), 니들만 (Needleman) 또는피어슨 (Pearson)( 그러나, 이들로한정되지않음 ) 에의해, 또는수동정렬및시각적조사에의해수행될수있다. 유전코드의축퇴성때문에, 다수의기능적으로동일한핵산이임의의주어진단백질을코딩한다. 당업자는관

26 심있는화합물의코딩을가능하게하기위해코딩된서열에서단일아미노산또는작은백분율의아미노산을변 경시키거나, 추가하거나결실시키는, 핵산, 펩티드, 폴리펩티드또는단백질서열에대한개별코돈용법을인 식할것이다. [0132] 조성물은동일한또는또다른장애또는질병의치료를위해의도된기존국소조성물과함께사용될수있다 는것이인식될것이다. 예를들면, 자외선차단제로서사용될본원에기재된조성물은하기물질들을포함하는 공지된자외선차단제품과함께사용될수있다 : 이산화티탄 (Ti0 2 ), 산화아연 (ZnO), 파라 - 아미노벤조산, 아보벤 존 (avobenzone), 부틸메톡시디벤조일메탄, 엔술리졸 (ensulizole), 2-페닐벤즈이미다졸-5-설폰산, 호모살레이트 (homosalate), 호모멘틸살리실레이트 (homomenthylsalicylate), 메라디메이트 (meradimate), 멘틸 (menthyl) 2-미노벤조에이트, 멘틸안쓰라닐레이트 (menthylanthranilate), 옥티녹세이트 (octinoxate), 멘틸 2-미노벤조에이트멘틸안쓰라닐레이트, 옥티살레이트 (octisalate), 2-에틸헥실살리실레이트, 옥틸살리실레이트, 옥토크릴렌 (octocrylene), 2-에틸헥실-2-시아노-3,3 디페닐아크릴레이트, 옥시벤존 (oxybenzone), 벤조페논-3,2-하이드록시-4-메톡시벤조페논, 술리소벤존 (sulisobenzone), 벤조페논-4, 드로메트리졸트리실록산 (drometrizoletrisiloxane), 멕소릴 (mexoryl) XL, 엔자카멘 (enzacamene), 4-메틸벤질리덴캄포르, 파디메이트 (padimate)-o, 옥틸디메틸 PABA, σ-paba, 테레프탈릴리덴디캄포르설폰산, 멕소릴 SX, 3,3'-(1,4-페닐렌디메틸리덴 ) 비스 [7,7-디메틸-2-옥소비사이클로[2.2.1] 헵트-1-일메탄설폰산 ), 시녹세이트 (cinoxate), 2-에톡시에틸 3-(4-메톡시페닐 ) 프로페노에이트, 디에탄올아민-메톡시신나메이트, 디옥시벤존, 벤조페논-8, (2-하이드록시 -4-메톡시페닐)-(2-하이드록시페닐 ) 메탄온, 트리에탄올아민살리실레이트및트롤아민살리실레이트. [0133] [0134] [0135] [0136] [0137] [0138] [0139] [0140] [0141] [0142] [0143] [0144] [0145] [0146] [0147] [0148] [0149] [0150] [0151] [0152] 관심있는화합물을코딩하는핵산서열은당업자에의해확인될수있고, 여러예가다음과같이본원에기재되어있다 : 서열번호 1: 시노린 (shinorine) 오페론에대한 DNA 서열 ; 서열번호 2: 시노린노스톡 (shinorine nostoc) 에대한 DNA 서열 ; 서열번호 3: 아미노산아데닐화 _Ava_3855에대한아미노산서열 ; 서열번호 4: ATP-그래스프효소유사단백질 _Ava_3856에대한아미노산서열 ; 서열번호 5: O-메틸트랜스퍼라제패밀리 3_Ava_3857에대한아미노산서열 ; 서열번호 6: 3-데하이드로퀴네이트합성효소 _Ava_3858에대한아미노산서열 ; 서열번호 7: DNA Ava_3858_3_ 데하이드로퀴네이트합성효소 ; 서열번호 8: DNA 스페이서1_ _ ; 서열번호 9: DNA Ava_3857_O-메틸트랜스퍼라제 ; 서열번호 10: DNA 스페이서2_ _ ; 서열번호 11: DNA Ava_3856_ATP-그래스프효소유사단백질 ; 서열번호 12: DNA 스페이서3_ _ ; 서열번호 13: DNA Ava_3855_ 아미노산아데닐화 ; 서열번호 16: 시노린오페론에대한 DNA 정방향프라이머 ; 서열번호 17: 시노린오페론에대한 DNA 역방향프라이머 ; 및서열번호 18: 티로시나제에대한 DNA 서열. C. 재조합분자기술본원에열거하거나또는아니면당분야에공지된임의의박테리아종의형질전환을위한기술은당분야의숙련가가이해하고있다. 몇몇기술이간략하게본원에기술되어있으며, 1. 모듈구성 ; 2 벡터유형 ; 3. 발현및개선된발현기술 ; 4. 삽입물의발현및검증 ; 및 5. 형질전환을포함하여, 이러한기술들에서고려되는인자들을이하에기술한다. 1. 모듈구성

27 [0153] [0154] [0155] [0156] 형질전환된박테리아종은당분야에공지된임의의방법 ( 본원에참조하여편입되는미국특허제4,259,444호 ) 에의해서재조합단백질을생산하는세포공장, 또는비히클로간주될수있고, 전형적으로적합한벡터에목적화합물을코딩하는단리된핵산분자의클로닝을포함한다. 발현벡터는개별조건에서각성분의독립적인디자인및모든필수성분의용이한교환을허락하는, 모듈구성으로구축된다. 이러한모듈벡터에서, 필수성분은전형적으로 MICE 시스템 (Mierau I and Kleerebezem M., AppI Microbiol Biotechnol. 68:705-17(2005)) 과같거나, 또는잠재플라스미드 (Shareck J. et al., Crit Rev Biotechnol. 24: (2004)) 를기반으로하는, 몇몇시스템에서볼수있는바와같이, 레플리콘, 프로모터 ( 조절시스템을구비한유도성또는항상성 ), 목적유전자, 마커또는리포터, 내성또는제한인자, 복수클로닝부위 (MCS), 샤인-달가르노 ( 리보솜결합부위 ), 및종결인자를포함한다. 프로모터서열, 종결인자단편, 폴리아데닐화서열, 인핸서서열, 및다른적합한서열을포함하는, 적절한조절서열을함유하는, 적합한벡터를선택하거나, 또는제작할수있다. 서열이리보솜결합부위및번역출발코돈을포함하는추가적인서열을상기기술된바대로부가할수있다. 적절한박테리아발현벡터는문헌 [Molecular Cloning: a Laboratory Manual: 2nd edition, Sambrook et al., 1989, Cold Spring Harbor Laboratory Press] 에기술된대로당분야의숙련가들에게공지되어있으며, [Wang T. T. and Lee B. H., Plasmids in Lactobacillus. Crit Rev Biotechnol. 17: (1997)] 에기술된대로 LAB 균주용발현벡터를열거한몇몇연구가있고,, 특히 [Nguyen T. T. et al., J Agric Food Chem. 59: (2011)] 에의한식품산업에서의발현벡터들에대한연구들도존재한다. 목적분자의적합한발현을위한, 상이한조합의, 골격플라스미드의모듈조직을가능하게하는, 예시적인벡터의필수빌딩블록을이하표에열거하였다

28 [0157]

29 [0158] [0159] [0160] [0161] [0162] [0163] [0164] [0165] 모듈구성은박테리아숙주세포에의해코딩서열을발현할수있는구성체이다. 구체적으로, 이러한벡터는예를들면, [Steidler L. et al., Nature Biotechnology, 21_(7): (2003)], 또는 [Perez-Arellano I. et al., Plasmid 46: (2001)] 에기술된바와같이, 발현벡터이거나또는염색체통합벡터이다. 박테리아의형질전환용벡터는당분야의숙련가가디자인할수있다. 예로는도 1에기재되어있고, 서열번호 15의서열과같을수있으며, 서열번호 14와같은제한효소를가질수있다. 일실시양태에서, 벡터는사용되는박테리아균주에대해상용성인골격복제기원, 목적분자의발현을위한상용성프로모터, 및상용성내성유전자를함유한다. 플라스미드는제한효소의서열을함유할수있다. 2. 벡터유형 4가지주요벡터유형은플라스미드, 바이러스벡터, 코스미드, 및인공염색체이다. 모든조작벡터에서공통점은복제기원, 복수클로닝부위, 및선별마커이다. 임의의이들은본원에서사용하기적합하다. 목적분자를코딩하는서열은클론, 벡터, 셔틀, 플라스미드, BAC에삽입될수있거나, 또는박테리아게놈에통합될수도있다. 플라스미드의복제수는세포당 5 내지 500 복제수일수있다. 예시적인플라스미드및발현벡터는제한없이, p252, p256, p353-2(leer et al. 1992), p8014-2, pa1, pacyc, paj01, pai-유래 (Vujcic & Topisirovic 1993), pall, pam-beta1,2,3,5,8(simon and chopin 1988), par1411, pbg10, pbk, pbm02, pbr322, pbr328, pbs-slpgfp, pc194(mckenzie et al. 1986, 1987; Horinouchi & Weisblum 1982b), PC194/PUB110, pc30i1, pc30il(skaugen 1989), pcd034-1, pcd034-2, pcd256, pcl2000, pcl305, pcl528, pcls3, pcl2.1, pct1138, pd125, pe194, pe194/pls1, pegfp-c1, peh, pf8801, pfg2, pfk-시리즈, pgk-시리즈, pgk12, pgk13, pla, plav1,5,6,7,9, pil.catt, pll252/3, pil253, pil7, pisa( 이. 콜라이에대해서는낮음 ), pjw563, pkrv3, plab1000(josson et al. 1990), plb4(bates & Gilbert 1989, plbs, ple16, pleb124, pleb590, pleb591, pleb600, pleb604, plep24mcop, plj1(takiguchi et al. 1989), plks, pltk2, pwcfs101 및 pmd5057(bates & Gilbert, 1989; Skaugen, 1989; Leer et al., 1992; Vujcic & Topisirovic, 1993; Eguchi et al., 2000; Kaneko et al., 2000; Danielsen, 2002; Darning et al., 2003; de las Rivas et al., 2004; van Kranenburg et al., 2005), plp1/18/30, plp18, plp317, plp317cop, plp3537, plp3537xyl, plp402, plp825, plp825 및 plpe323, plp82h, plpc37, plpe23m, plpe323, plpe350, plpi (Bouia et al. 1989), pls1, pls1 및 pe194(lacks et al. 1986; Horinouchi & Weisblum 1982a), plul631, 에리쓰로마이신- 내성유전자를보유한엘. 레우테리 (L. reuteri) 유래 plul631, pm3, pm4, pmd5057, pmg36e, pnd324, pnz-시리즈, ppsc 시리즈, psh71(de vos, 1987), psip-시리즈, psk11l, psl2, PSN2, psn2(khan & Novick 1982), pt181(koepsel et al. 1987), (Khan & Novick 1983), pt181, pc194 및 pe194( 비. 서브틸리스에서는무기능 )(Gruss et al. 1987), pt181, pe194/pls1, pc194/pub110 및 psn2(khan, 2005), ptl, ptrk 패밀리, ptrt 패

30 밀리, ptuat35, pubiio 및 pc194(mckenzie et al. 1986, 1987; Horinouchi & Weisblum 1982b), pucl22, pulp8/9, pvs40, pwc1, pwcfs101, pwv02, pwv04, pwv05, RepA, 시스템 BetL 을포함한다. [0166] [0167] [0168] [0169] [0170] [0171] [0172] 일실시양태에서, 락토스포스포트랜스퍼라아제시스템은이. 콜라이박테리오파지 T7 프로모터 ; 엘. 락티스 (L. lactis) nisa 프로모터시스템 ; 환경조건에의해조절되는프로모토를포함하는벡터, 예컨대저 ph에서만활성인 P170 프로모터에작동적으로연결된다. 다른예시적인벡터는람다파지 cos 서열을함유하는하이브리드플라스미드 ( 흔히클로닝벡터라고사용됨 ) 인코스미드 (cos 부위 + 플라스미드 = 코스미드 ) 이다. DNA 서열은원래람파파지로부터유래하였고, 코스미드는게놈라이브러리를구축하는데사용될수있다. 다른예로는박테리아인공염색체 (BAC) 가있으며, 이는박테리아, 일반적으로이. 콜라이에서의형질전환및클로닝을위해사용되는, 기능적번식플라스미드 ( 또는 F-플라스미드 ) 를기반으로하는 DNA 구성체이다. 프로모터서열, 종결인자단편, 폴리아데닐화서열, 인핸서서열, 마커유전자및다른적절한서열을포함하는, 적절한조절서열을함유하는적합한벡터를선택하거나또는제작할수있다. 적절한박테리아발현벡터는 [Nouaille S. et al., Genetics and Molecular Research, 2: (2003)], 및 [Maniatis, Sambrook and Fritscb. 1982, Molecular Cloning: A Laboratory Manual] 에기술된바와같이당분야의숙련가에게공지이다. 3. 발현및개선된발현기술용어이종성발현은단백질, 또는목적유전자가예를들면, 세포에그러한단백질, 또는핵산, 단백질, 또는벡터를정상적으로는제조 ( 즉, 발현 ) 하지않는세포에실험적으로넣는것을의미하며, 그러한세포, 핵산, 단백질또는벡터가이종성핵산또는단백질의도입에의해개질되거나또는천연핵산또는단백질의변경을의미하거나, 또는세포가그렇게개질된세포로부터유래된것을의미한다. 따라서, 예를들면, 재조합세포는그렇지않으면비정상적으로발현되거나발현저하되거나또는전혀발현되지않는천연유전자를발현하거나또는천연 ( 비재조합 ) 세포형태에서발견되지않는유전자를발현한다. 또한, 핵산은전형적으로재조합적으로생산되고, 새로운기능적핵산, 예를들면하나의공급원유래의프로모터및다른공급원유래의, 목적분자에대한코딩영역을만들도록배열된비관련유전자유래의 2 이상의서열을가질수있다. 숙주세포에서특정핵산의전사를허용하는일련의특정핵산성분들을갖는, 재조합적으로또는합성적으로생성된핵산을 " 발현카세트 " 라고한다. 발현카세트는플라스미드, 바이러스, 또는핵산단편의일부일수있다. 전형적으로, 발현벡터는프로모터에작동적으로연결되어전사되는핵산을포함한다. 또한, 발현카세트는본발명의목적화합물의발현및국재화를조절하는다양한성분들을포함할수있다. 예를들면, 발현카세트는프로모터성분, 신호서열코딩서열, 목적화합물에대한코딩서열, 종결인자및앵커서열을포함한다. 프로모터 - 이종성목적화합물의발현은항상성이거나또는유도성일수있다. 사용되는프로모터는예를들면, 유도성락토바실러스 lac 프로모터, LdhL, Slp, ernb, orfx이거나, 또는인공적으로항상성일수있다 (Rud I. et al., Microbiology, 152: (2006). 프로모터의예는모듈구성표에열거되어있고, 예를들면, 제한없이, P 59 (van der Vossen et al., Appl. Environ. Microbiol. 58: (1992)), P 23 (Elliot et al., Cell 36: (1984)) 프로모터들 ), 락토바실러스카제이 (Lactobacillus casei)l(+)-락테이트디히드로게나아제프로모터 (Pouwels et al., 1993, Genetics of lactobacilli: plasmids and gene expression, Antonie van Leeuwenhoek 64:85-107), 바실러스아밀라아제의프로모터 (Weickert et al., J. Bacteriol. 171 : (1989)) 또는자일로스 (Kim et al. Gene 181 :71-76 (1996)) 프로모터를비롯하여락토코커스니신 (Lactococcus nisin) 프로모터 (Eichenbaum et al., Appl. Environ. Microbiol. 64: (1998)) 가유도성발현을유도하는데사용될수있다. 추가적인프로모터는락토코커스락티스플룩토스-1,6-디포스포알돌라아제의발현을제어하는 p32 프로모터 (Van de Guchte et al., 1990, Appl. Environ. Microbiol. 56: ), T7 유전자 10 프로모터 (Wells et al, 1993, Mol. Microbiol. 8: ), 락토바실러스아밀로바이러스 (Lactobacillus amylovirus) 의알파아밀라아제프로모터서열 (Pouwels et al., 1993, Genetics of lactobacilli; plasmids and gene expression, Antonie van Leeuwenhoek 64:85-107), 및 [Kim JH, and Mills DA. Plasmid. 58: (2007)] 에기재된바와같이, LdhL, Slp, ermb, orfx, p6(pla6), plt71, T7, p11, lactp, dltp, ccpap, pip, 및 lac 프로모터로서유도성락토바실러스 LdhL, Slp, ernb, orfx의발현을제어하는프로모터들일수있다. [0173] 발현, 또는클로닝및성분의발현을개선시키기위한몇몇재조합기술들이공지되어있는데, 분자생물학적 방법, 핵산및클론제작, 돌연변이유발법, 서열분석법, 세포로 DNA 도입, 및단백질분석법이포함되며, 구체

31 적으로는 [Current Protocols in Molecular Biology, Ausubel et al. eds., John Wiley & Sons, 1992, and in Molecular Cloning: a Laboratory Manual: 2nd edition, Sambrook et al., 1989, Cold Spring Harbor Laboratory Press] 에기술되어있다. 또한, 보다나은발현을위해프로모터수및그들의길이를설정하는것이가능하다 (Yagur-Kroll S. et al., Bioeng Bugs, :151-3 (2010). [0174] [0175] [0176] [0177] [0178] [0179] [0180] [0181] [0182] [0183] 레플리콘의복제기전은쎄타-복제플라스미드에의하거나또는 RCR 기전에의할수있다. 내성유전자는제한없이, 항생제, 박테리아마커, 열쇼크, 또는당활용능, 예컨대타이미딜레이트신타아제 (thya), 락토스포스포트랜스퍼라아제 (lacf), 포스-베타-갈락토시다아제 (lac G), 또는알라닌레세마아제 (air) 를기반으로할수있다. 종결인자는보다효율적인발현을제공하도록상이한위치에부가시킬수있다. 막, 세포외공간또는세포벽에폴리펩티드의발현을지정하도록다양한신호및앵커서열들이공지되어있다 ( 예를들면, 펩티도글리칸에공유부착시킴 ). 목적하는유전자를포함하는것이외에도, 미생물은또한박테리아에의해목적분자의바람직한발현생성을촉진시키는다른서열성분을코딩하도록조작될수있다. 이러한서열성분은제한없이, 단백질의항상성또는유도성발현을촉진하거나또는박테리아에서단백질의과발현을촉진하는프로모터 / 조절서열을포함한다. 추가적인서열성분은또한박테리아로부터단백질의분비, 박테리아내단백질의축적, 및 / 또는박테리아로부터단백질이방출되도록박테리아의프로그램화용균을촉진하는것들을포함한다. 상기언급된많은서열성분은당분야의숙련가에게공지이다 (Maniatis, Sambrook and Fritsch Molecular Cloning: A Laboratory Manual). 4. 삽입물의발현및검증이종성유전자의발현은생명공학, 특히풍미, 식감및보존에기여하는, 산업적식품발효에서광범위하게사용된다. 서열은새로운서열분석에의해서또는 PCR 증폭에의해벡터에삽입될수있다. 새로운합성은모세관전기영동법에의해수행되거나, 또는 DNA 서열이 DNA 주형상의각염기에서, DNA 중합효소가오직그염기에상보적인뉴클레오티드를도입하기때문에높은신뢰성으로복제될경우 Sanger 서열분석법 (Sanger et al. (1974)) 을기반으로수행된다. 티미딘 (T) 은아데닌 (A) 에상보적이고구아닌 (G) 은시토신 (C) 에상보적인데이들이서로수소결합을형성할수있기때문이다. 클로닝된유전자및합성서열의서열은예를들면 [Wallace et al., Gene 16:21-26 (1981)] 의이중가닥주형을서열분석하기위한사슬종결방법을이용해클로닝후검증할수있다. 본발명의목적화합물을코딩하기위한유전자를동정하기위한적절한프라이머및프로브는당분야에기술된서열로부터유도될수있다. PCR의일반적인개요를위해서, 문헌 [Innis et al., PCR Protocols: A Guide to Methods and Applications, Academic Press, San Diego (1990)] 을참조한다. 숙주박테리아에서발현되는목적분자의농도는 0.1 mm 100 mm로다양할수있다. 이러한농도는다양한매개변수, 예컨대박테리아의농도, 플라스미드의복제수, 프로모터의활성, 및목적분자의동역학에의해제어될수있다. 목적화합물의기지서열은본원에서보다상세하게기술하는바와같이, 상업적으로입수가능한데이타베이스에서확인할수있다. 벡터내목적분자의예시적인서열은분자스크리닝 UV를코딩하는유전자를갖는것들이다. 구체적으로, nm 범위인분자스크리닝 UV를코딩하는유전자가고려된다. 벡터내목적분자의서열은산화스트레스를감소시키는분자를코딩하는유전자, 예컨대 UV에의해초래되는산화스트레스를감소시키는분자, 항산화제, 항반응성산소종 ( 항-ROS) 을코딩하는유전자를갖는것이다. 목적유전자를코딩하는서열은시아노박테리아종유래의 scya-f일수있다. 일광차단화합물, 예컨대시노린은산호 ( 스틸로포라피스탈라타 (Stylophora pistallata)), 어류 ( 스카루스슈레겔 (Scarus schlegeli) 리및클로루루스소르디두스 (Chlorurus sordidus)), 조류 ( 포르피라엄빌리칼리스 (Porphyra umbilicalis)), 미세조류, 및시아노박테리움노스톡 (cyanobacterium Nostoc) 종 ( 노스톡플라젤리포름 (Nostoc flagelliforme)) 또는노스톡종 PCC 7524) 린그비아 (Lyngbya) 종, 아나바에나 (Anabaena) 종, 및노둘라리아 (Nodularia) 종노스독펑티포름 (Nostoc punctiforme) PCC 아나바에나 (Anabaena) 종, 아나바에나바리아빌리스 (Anabaena variabilis), 아나바에나실린드리카 (Anabaena cylindrica) PCC 7122, 시아노테스 (Cyanothece) 종 PCC 7424, 시아노테스종 PCC 8802, 리불라리아 (Rivularia) 종 PCC 7116, 크루코시디옵시스써말리스 (Chroococcidiopsis thermalis) PCC 7203, 시린드로스페멈스타그네이

32 트 (Cylindrospermum stagnate) PCC 7417, 스타니에리아시아노스패라 (Stanieria cyanosphaera) PCC 7437, 크리날리움에핍삼멈 (Crinalium epipsammum) PCC 9333, 크리날리움에핍삼멈 PCC 9333, 아나바에나종 90 염색체 chanaoi, 글로에캅사 (Gloeocapsa) 종 PCC 7428, 클로로글로에옵시스프리트쉬 (Chlorogloeopsis fritschii), 트리코데스미움에리트라에움 ( Trichodesmium erythraeum) IMS101, 마이크로시스티스애루지노사 (Microcystis aeruginosa) PCC 7806, 마이크로시스티스애루지노사균주 UV027, 플랑크토트릭스루베센스 (Planktothrix rubescens) NIVA-CYA 98, 마이크로시스티스종 NIVA-CYA 172/5, 노스톡종 GSV224, 또는오실라토리아니그로- 비리디스 (Oscillatoria nigro-viridis) PCC 7112 유래와같은박테리아로부터얻을수있다. [0184] [0185] [0186] [0187] [0188] [0189] [0190] [0191] [0192] 일실시양태에서, 목적화합물의발현을위한서열은박테리아의게놈에도입된다. 플라스미드의복제수는세포당 복제수일수있다. 프로모터는항상성이거나또는유도성일수있다. 일실시양태에서, 목적분자의정제를위해서벡터 DNA 및아미노산성분에예컨대, His-태그를부가하는것이가능하다. 또한막밖으로목적분자를뺄수있는, usp45와같은성분을부가하는것이가능하다. 일실시양태에서, 코돈용법은목적분자의보다나은발현을위해개선시킬수있다. 또한발현벡터의 GC% 를변화시키고 / 시키거나감소시킬수있다. 일실시양태에서, 벡터는제한인자를포함하거나, 또는다른실시양태에서, 제한인자는상동성재조합을통해박테리아게놈에도입된다. 5. 형질전환형질전환기술과관련하여, 적절한박테리아숙주균주는예를들면그들의형질전환능력, 이종성단백질발현능력에대해선택된다. 박테리아숙주는표준기술, 예컨대염화루비듐방법또는전기천공법을이용해형질전환에능숙하게된다 (Maniatis, Sambrook and Fritsch Molecular Cloning: A Laboratory Manual). LAB 균주의형질전환을위한특정방법은이하실험파트에서제공하지만, 당분야의예시적인기술이며, 제한하려는의도는아니다. 전기천공에의한락토코커스락티스의형질전환은예를들면, 문헌 [Luchansky et al. (J. Dairy Sci. 74: (1991) 에기술된바와같은표준방법을변형시켜수행할수있다. 간략하게, 신선하게접종된락토바실러스종을 MRS 액체배지에서배양시킨다 ( 예를들면, 37 및 5% CO 2 에서 OD 600 = 까지 ). 박테리아세 포를회수하고, 세척하며수크로스및 MgCl 2 의냉 ( 예를들면, 4 ) 용액에재현탁시킨다. 이어컴피턴트세포를 DNA와혼합하고차가운갭큐벳에놓고전기천공시킨다. 이후, 세포는사전승온된액체배지에서회복 ( 예를들면, 37 에서약 2시간동안 ) 시킨후, 항생제다른선별제를함유하는선택적한천평판배지상에플레이팅한다. [0193] 락토바실러스에서전기천공의최적화 : 이들질락토바실러스균주에서클로닝및이종성단백질발현을지원하기위해서, 전기천공방법은피부박테리아에대한적용을위해개발되었다. 배양배지, 세포성장기, DNA 농도, 세척또는전기천공완충액조성, 큐뱃뱁크기, 전압을포함한, 다양한매개변수들이우리수집물의 WT 락토바실러스균주에대한형질전환빈도를개선시키는조건을결정하기위해평가되었다. 이. 콜라이-유래플라스미드는변형된 [Luchansky et al. (J. Dairy Sci. 74: (1991))] 에따라전기천공을통해락토바실러스균주를형질전환시켰다. 간략하게, 신선하게접종된락토바실러스균주를 37 및 5% CO 2 에서 OD 600 을 까지 MRS 액체배지에서배양하였다. 박테리아세포를회수하고, 세척하였고, 4 에서 952 mm 수크로스및 3.5 mm MgCl 2 에재현탁시켰다. 사전냉각된 0.2 cm 갭큐벳을이용하여, 컴피턴트세포를 1 2 μg의플라스미드 DNA와부가하고 2.5 kv/cm 및 200 ohms에서즉시전기천공하였다. 이어서, 세포를 37 에서 2시간동안사전승온된 MRS 액체배지에서회복시킨후, 20 μg / ml의에리쓰로마이신항생제를함유하는선택적 MRS 한천평판배지에플레이팅하였다. [0194] [0195] [0196] 6. 수확유전자조작법은상이한세포주에서, 다양한발현된이종성목적단백질의과생산을가능하게한다. 과발현, 피부박테리아로부터생물학적재조합분자의회수, 목적분자의수확은생명공학산업의정수이고당분야의숙련가에게공지이다 (Eugene Russo, Nature, (2003). 박테리아로부터추출된분자는 UV 보호용과같은피부과적혜택을위해사용된다

33 [0197] [0198] [0199] [0200] [0201] [0202] [0203] [0204] [0205] [0206] [0207] 수확과정은박테리아세포를비드-비팅하는기계적방법, 또는라이소자임을이용하여화학적으로파괴하는방법이포함될수있다. 발현된분자의단리는 5%-90% 와같은, 다양한세정도일수있고, 예를들면, HPLC, HIS-태그등과같은분자및화학적기술을통해이용할수있고, 당분야의숙련가에게공지이다. 수확된화합물의농도는추출전의 1-50% 의생물량일수있다. 박테리아세포및 / 또는박테리아세포의입자를포함하는다양한화합물이추출물에용해되거나또는현탁될수있다. 최종추출물은지질단백질, 지질펩티드, 펩티도글리칸, 지질올리고당, 리포테이코산및테이코산을포함할수있다. 용해과정동안, 박테리아세포중분자는화학적으로개질될수있다. ph, 출발부피및온도등과같은다양한매개변수가수확량을증가시키도록포괄될수있다. D. 예시적인국소조성물형질전환된, 비병원성박테리아집단은피험체의피부에국소적용하기위해제제화될수있다. 제한하려는의도는없지만, 예시적인실시양태의목적으로, 이러한제제는겔, 연고, 로션, 에멀젼, 크림, 발포체, 무스, 액체, 스프레이, 현탁물, 분산물또는에어로졸일수있음을고려한다. 제제는피부에효과적인도포, 도포범위, 부착을위해, 바람직한형상및바람직한점도, 유동성또는다른물리또는화학적특징을제공하도록 1 이상의부형제를포함한다. 제제중부형제는목적하는제제유형을기반으로선택된다. 표준부형제는젤라틴, 카세인, 레시틴, 검아카시아, 콜레스테롤, 트라가칸트, 스테아르산, 벤즈알코늄클로라이드, 칼슘스테아레이트, 글리세릴모노스테아레이트, 세토스테아릴알콜, 세토마크로골유화왁스, 솔비탄에스테르, 폴리옥시에틸렌알킬에테르, 폴리옥시에틸렌캐스터유유도체, 폴리옥시에틸렌솔비탄지방산에스테르, 폴리에틸렌글리콜, 폴리옥시에틸렌스테아레이트, 콜로이드성이산화규소, 포스페이트, 나트륨도데실설페이트, 카르복시메틸셀룰로스칼슘, 카르복시메틸셀룰로스나트륨, 메틸셀룰로스, 히드록시에틸셀룰로스, 히드록시프로필셀룰로스, 히드록시프로필메틸셀룰로스프탈레이트, 비결정질셀룰로스, 마그네슘알루미늄실리케이트, 트리에탄올아민, 폴리비닐알콜, 폴리비닐피롤리돈, 설탕, 및전분을포함한다. 에멀젼은제2 액체의몸통전체에소구체로분포된액체의조제물이다. 분산된액체는불연속상이고, 분산매질은연속상이다. 기름이분산액체이고수용액이연속상인경우, 수중유에멀젼으로알려져있고, 물또는수용액이분산상이고기름또는기름성물질이연속상인경우, 유중수에멀젼으로알려져있다. 기름상은적어도부분적으로추진제, 예컨대 HFA 추진제로이루어진다. 기름상및수성상중하나또는둘모두는 1 이상의계면활성제, 유화제, 에멀젼안정화제, 완충제, 및다른부형제를함유할수있다. 바람직한부형제는계면활성제, 특히비이온성계면활성제, 유화제, 특히유화왁스 : 및액상비휘발성비수성물질, 특히글리콜예컨대프로필렌글리콜을포함한다. 기름상은다른기름성약학적승인부형제를함유할수있다. 예를들면, 히드록실화캐스터유또는깨유와같은물질을계면활성제또는유화제로기름상에서사용할수있다. " 연화제 " 는피부를연화또는진정시키는외부도포제이고일반적으로당분야에알려져있으며, 예컨대 ["Handbook of Pharmaceutical Excipients", 4 th Ed., Pharmaceutical Press, 2003] 와같은개요서에열거되어있다. 이들은제한없이, 알몬드유, 캐스터유, 세라토니아추출물, 세토스테아로일알콜, 세틸알콜, 세틸에스테르왁스, 콜레스테롤, 면실유, 시클로메티콘, 에틸렌글리콜팔미토스테아레이트, 글리세린, 글리세린모노스테아레이트, 글리세릴모노올레에이트, 이소프로필미리스테이트, 이소프로필팔미테이트, 라놀린, 레시틴, 연질미네랄유, 중쇄트리글리세리드, 미네랄유및라놀린알콜, 페트롤라텀, 페트롤라텀및라놀린알콜, 대두유, 전분, 스테아릴알콜, 해바라기유, 자일리톨및이의조합을포함한다. 일실시양태에서, 연화제는에틸헥실스테아레이트및에틸헥실팔미테이트이다. " 계면활성제 " 는표면장력을저하시켜서생성물의유화, 발포, 분산, 퍼짐및습윤특성을증가시키는표면-활성제이다. 적합한비이온성계면활성제는유화왁스, 글리세릴모노올레에이트, 폴리옥시에틸렌알킬에테르, 폴리옥시에틸렌캐스터유유도체, 폴리솔베이트, 솔비탄에스테르, 벤질알콜, 벤질벤조에이트, 시클로덱스트린, 글리세린모노스테아레이트, 폴록사머, 포비돈및이의조합을포함한다. 일실시양태에서, 비이온성계면활성제는스테아릴알콜이다. " 유화제 " 는다른액체중한액체의현탁을촉진하고안정한혼합물, 또는기름과물의에멀젼의형성을촉진하는표면활성물질이다. 일반적인유화제는금속성비누, 일부동물및식물기름, 및다양한극성화합물이다

34 적합한유화제는아카시아, 음이온성유화왁스, 칼슘스테아레이트, 카보머, 세토스테아릴알콜, 세틸알콜, 콜레스테롤, 디에탄올아민, 에틸렌글리콜팔미토스테아레이트, 글리세린모노스테아레이트, 글리세릴모노올레에이트, 히드록시프로필셀룰로스히드로멜로스, 라놀린, 히드러스, 라놀린알콜, 레시틴, 중쇄트리글리세리드, 메틸셀룰로스, 미네랄유및라놀린알콜, 1염기성인산나트륨, 모노에탄올아민, 비이온성유화왁스, 올레산, 폴록사머, 폴록사머들, 폴리옥시에틸렌알킬에테르, 폴리옥시에틸렌캐스터유유도체, 폴리옥시에틸렌솔비탄지방산에스테르, 폴리옥시에틸렌스테아레이트, 프로필렌글리콜알기네이트, 자가유화성글리세릴모노스테아레이트, 나트륨시트레이트디히드레이트, 나트륨라우릴설페이트, 솔비탄에스테르, 스테아르산, 해바라기유, 트라가칸트, 트리에탄올아민, 잔탄검및이의조합을포함한다. 일실시양태에서, 유화제는글리세롤스테아레이트이다. [0208] [0209] [0210] [0211] [0212] [0213] [0214] " 로션 " 은저점도내지중점도액상제제이다. 로션은현탁제및분산제이용을통해분산매질에용해되는미분물질을함유할수있다. 다르게, 로션은비히클과비혼화성이고일반적으로유화제또는다른적합한안정화제를통해분산되는분산상으로서액체물질을가질수있다. 일실시양태에서, 로션은점도가 100 내지 1000 센티스토크인에멀젼형태이다. 로션의유동성은광범위한표면영역상에신속하고균일한도포를가능하게한다. 로션은전형적으로피부표면상의약효성분의얇은코팅을남기고피부상에서건조되는경향이있다. " 크림 " 은 " 수중유 " 또는 " 유중수 " 유형의반고상에멀젼또는점성액체이다. 크림은유화제및 / 또는다른안정화제를함유할수있다. 일실시양태에서, 제제는점도가 1000 센티스토크를넘고, 전형적으로 20,000-50,000 센티스토크범위인크림형태이다. 크림은일반적으로퍼지기더용이하고제거하기더용이하므로연고보다흔히바람직하다. 크림과로션의기본적인차이는점성이며, 이는제제를제조하는데사용된물이비율및다양한기름의사용 / 양에따라좌우된다. 크림은전형적으로로션보다걸쭉하고, 다양한용도를가지며흔히피부에대한바람직한효과에따라서, 보다다양한기름 / 버터를사용한다. 크림제제에서, 물-베이스비율은약 60-75% 이고기름-베이스는전체의약 20-30% 이며, 다른비율은총 100% 에대해유화제, 보존제및부가제이다. " 연고 " 는연고베이스및경우에따라 1 이상의활성제를함유하는반고체조제물이다. 적합한연고베이스의예에는탄화수소베이스 ( 예를들면, 페트로라텀, 백색페트로라텀, 노란색연고, 및미네랄유 ); 흡착베이스 ( 친수성페트로라텀, 무수라놀린, 라놀린, 및콜드크림 ); 수-제거성베이스 ( 예를들면, 친수성연고 ), 및수가용성베이스 ( 예를들면, 폴리에틸렌글리콜연고 ) 가포함된다. 페이스트는전형적으로그들이보다많은비율의고체를함유하는점에서연고와다르다. 페이스트는전형적으로동일성분으로제조된연고보다더욱흡착성이고덜지성이다. " 겔 " 은액체비히클에용해또는현탁된증점제또는중합성물질의작용에의해반고체가되는액체비히클중수형또는대형분자의분산물을함유하는반고체시스템이다. 액체는친지성성분, 수성성분또는둘모두를포함할수있다. 일부에멀젼은겔이거나또는아니면겔성분을포함한다. 그러나, 일부겔은그들이비혼화성성분의균질화블렌드를함유하지않으므로에멀젼이아니다. 적합한겔화제는제한없이, 개질된셀룰로스, 예컨대히드록시프로필셀룰로스및히드록시에틸셀룰로스 ; 카르보폴동종중합체및공중합체 ; 및이의조합을포함한다. 적합한액체비히클중용매는제한없이, 디글리콜모노에틸에테르 ; 알크렌글리콜, 예컨대프로필렌글리콜 ; 디메틸이소솔비드 ; 알콜, 예컨대이소프로필알콜및에탄올을포함한다. 용매는전형적으로약물을용해시키는그들의능력에따라선택된다. 피부촉감및 / 또는제제의연화성을개선시키는다른첨가제가또한도입될수있다. 이러한첨가제의예에는제한없이, 이소프로필미리스테이트, 에틸아세테이트, C12-C15 알킬벤조에이트, 미테랄유, 스쿠알란, 시클로메티콘, 카프르산 / 카프릴산트리글리세리드, 및이의조합이포함된다. 발포체는기체성추진제와조합된에멀젼으로이루어진다. 기체성추진제는우선적으로히드로플루오로알칸 (HFA) 로이루어진다. 적합한추진제는 HFA 예컨대 1,1,1,2-테트라플루오로에탄 (HFA 134a) 및 1,1,1,2,3,3,3-헵타플루오로프로판 (HFA 227) 을포함하지만, 이들의혼합물및혼화물및최근승인되었거나또는의학용으로승인될수있는다른 HFA가적합하다. 추진제는바람직하게는분무동안가연성또는폭발성증기를생산할수있는탄화수소추진제가스가아니다. 또한, 조성물은바람직하게는사용동안가연성또는폭발성증기를생산할수있는휘발성알콜을함유하지않는다. 완충제는조성물의 ph를제어하기위해사용된다. 바람직하게, 완충제는조성물의 ph를약 4 내지약 7.5, 보다바람직하게는약 4 내지약 7의 ph, 가장바람직하게는약 5 내지약 7의 ph로완충시킨다. 바람직한실시양태에서, 완충제는트리에탄올아민이다

35 [0215] [0216] 보존제는진균및미생물의성장을방지하기위해사용될수있다. 적합한항진균및항미생물활성제는제한없이, 벤조산, 부틸파라벤, 에틸파라벤, 메틸파라벤, 프로필파라벤, 나트륨벤조에이트, 나트륨프로피오네이트, 벤즈알코늄클로라이드, 벤제토늄클로라이드, 벤질알콜, 세틸피리디늄클로라이드, 클로로부탄올, 페놀, 페닐에틸알콜, 및티머로살을포함한다. 일실시양태에서, 진균성장을방지하는데효과적인보존제의농도는국소적용시그의도하는목적에대해조성물의효능에영향이없도록선택된다. 흡수촉진제는피부를통한, 특히각질층을통한약물의경피전달을촉진하는데흔히사용된다. 일부흡수촉진제는피부자극, 피부독성및피부알레르기를야기한다. 그러나, 보다통용되는것에는우레아, ( 카르보닐디아미드 ), 이미드우레아, N,N-디에틸포름아미드, N-메틸-2-피롤리딘, 1-도데칼-아자시클로펩탄-2- 온, 칼슘트오글리케이트, 2-피롤리딘, N,N-디에틸-m-톨루아미드, 올레산및이의에스테르유도체, 예컨대메틸, 에틸, 프로필, 이소프로필, 부틸, 비닐및글리세릴모노올레에이트, 솔비탄에스테르, 예컨대솔비탄모노라우레이트및솔비탄모노올레에이트, 다른지방산에스테르예컨대이소프로필라우레이트, 이소프로필미리스테이트, 이소프로필팔미테이트, 디이소프로필아디페이트, 프로필렌글리콜모노라우레이트, 프로필렌글리콜모노올레에이 트및비이온성계면활성제예컨대 BRIJ 76( 스테아릴폴리 (10 옥시에틸렌에테르 ), BRIJ 78( 스테아릴폴리 (20) 옥시에틸렌에테르 ), BRIJ 96( 올레일폴리 (10) 옥시에틸렌에테르 ), 및 BRIJ 721( 스테아릴폴리 (21) 옥시 에틸렌에테르 )(ICI Americas Inc. Corp.) 를포함한다. [0217] [0218] [0219] [0220] 미생물은cm2당적어도 10 2 콜로니형성유닛 (cfu) 내지 cfu, 구체적으로cm2당 10 5 cfu 내지 cfu의단위용량당 ( 또는cm2당 ) 유효량으로전달될수있다. [Balskus, et al.(science 2010)] 에기술된방법에따라서, UV 성분은 10 6 cfu 당적어도 0.5 mm 내지 1 mm로생산된다. 이를기반으로, 당분야의숙련가는임의의다른 cfu 용량에서생성된성분의범위를계산할수있다. 생물학적조성물은제제중에 1 이상의유효한화합물을더포함할수있는데, 예를들면 UV 보호및화학적 ( 또는생물학적생산 ) 으로부가된비타민 A를포함할수있다. 조성물은임의의공지되거나또는아니면선택된생산물형태를제제또는제작하기위해유효한방법으로제조될수있다. 일실시양태에서, 조성물은점성표면, 예컨대비내, 질내, 직장내, 경구표면을배제하려는의도로, 피험체의피부상피표면에도포하기위해제제화된다. 일실시양태에서, 국소적용은구강을비롯하여다른신체점성표면은배제한다. 조성물은목적화합물의바람직한농도를산출하도록특정농도로형질전환된박테리아를포함하게제제화될수 있다. 예를들면, 조성물은미생물이cm2당적어도약 10 2 콜로니형성유닛 (cfu) 내지약 cfu, 구체적으로cm2당약 10 2 cfu 내지약 cfu의단위용량당 ( 또는cm2당 ) 유효량을전달하도록하는양의형질전환된박테리아를포함할수있다. 조성물은형질전환된박테리아가조성물의총중량에대해적어도약 %( 건조중량기준 ) 의비율, 구체적으로약 % 내지약 99% 의비율, 보다구체적으로는약 중량 % 내지약 90 중량 % 의비율, 특히약 0.01 중량 % 내지약 80 중량 %, 특히약 0.1 중량 % 내지약 70 중량 % 의비율이도록제제화될수있다. 대체로, 국소투여하고자하는조성물은생미생물의경우, 약 10 내지약 cfu/g, 구체적으로약 10 5 내지약 cfu/g, 보다구체적으로약 10 7 내지약 cfu/g의캐리어그램당미생물, 또는불활성또는사멸미생물에대해또는박테리아분획또는생산된대사산물에대해계산된등가용량을포함할수있다. 일실양태에서, 국고투여해야하는조성물에서, 각박테리아균주및 / 또는상응하는분획및 / 또는대사산물의농도는약 5 x 10 5 내지약 cfu/d, 구체적으로, 약 10 7 내지약 cfu/d 범위의용량 ( 박테리아등가물로표현 ) 에상응하도록조정될수있다. 국소적용용조성물은대체로박테리아를약 10 2 내지약 cfu/g, 구체적으로약 10 5 내지약 cfu/g, 보다구체적으로약 10 6 내지약 cfu/g으로포함할수있다. 조성물이목적화합물을포함하는경우, 조성물내목적화합물은실질적으로약 10 3 내지약 cfu, 구체적으로약 10 5 내지약 cfu, 보다구체적으로약 10 6 내지약 cfu의캐리어그램당목적화합물에의해생산될수있는함량에상응한다. [0221] 일실시양태에서, UV 보호를위한피부국소도포용조성물을고려한다. 광노화는일광으로부터의자외선방사 에대한장기간또는반복적노출결과로인한피부의구조, 기능및외양변화이다. 이는남성과여성모두에

36 서의나이연관된미용성피부문제의 90% 를차지하고, 중간내지심한광노화징후가 30세이하의남성 72% 및여성의 47% 에서관찰된다. 자외선방사는짧은파장및고에너지의비가시성스페트럼영역의빛이고, 대략 150 nm 내지 400 nm 범위이다. 대부분의최고에너지 UV 방사 (280 nm 미만파장에서의 UVC 방사 ) 는오존및성층권산소에의해흡수된다 nm의파장으로구성된 UVB 방사및 nm 파장으로구성된 UVA 방사는유기체에서손상의주요 2가지원인이다. UVB는 DNA에의한그흡광이체내다른 DNA, 지질및단백질에손상을주는시클로부탄피리미딘이량체를생성하기때문에유기체에특히유해하다. 이는피부암의일반적인원인이다. UVA는피부층깊숙히침투하므로유기체에특히유해하다. 일실시양태로본원에서고려하는조성물은 UVA 및 UVB 중하나또는둘모두로부터보호하기위해 1 이상의목적화합물을발현하도록형질전환된 1 이상의박테리아를포함한다. 조성물은화학적 ( 예를들면, 아미노벤조산 (PABA), 아보벤존, 시녹세이트, 디옥시벤존, 엔술리졸, 호모살레이트, 멘틸안트라닐레이트, 메라디메이트, 옥토크릴렌, 옥틸메톡시신나메이트, 옥티살레이트, 옥틸살리실레이트, 옥토크릴렌, 옥시벤존, 파디메이트-O, 페닐벤즈이미다졸설폰산, 설리소벤존, 및미네랄 : 이산화티타늄, 트롤라민살리실레이트, 산화아연 ) 또는물리적성질의현존자외선차단제와조합하여피부에도포될수있다. [0222] [0223] 형질전환된박테리아의조성물은바람직하게는피부를 UV 흡수로부터보호하고, 시아노박테리아, 진류및조류와같은다양한유기체에의해합성되는, UV 방사를흡수하는천연마이코스포린유사아미노산 (MAA) 소형분자인시노린일수있는화합물을발현한다. 일실시양태에서, 형질전환된박테리아의집단을포함하는조성물은피부에도포되는비누또는바디워시조성물이다. 미생물은cm2당적어도약 10 2 콜로니형성유닛 (cfu) 내지약 cfu, 구체적으로cm2당약 10 2 cfu 내지약 cfu의유닛용량당 ( 또는cm2당 ) 유효량을전달할수있다. 목적화합물이 UV 보호용인실시양태에서, UV 성분은 cfu에대해적어도약 0.1 mm 내지약 100 mm이생성된다. 이를기반으로, 당분야의숙련가는임의의다른 cuf 용량에서생산된성분의범위를계산할수있다. 국소적용되어야하는조성물의특정경우에서, 각박테리아균주및 / 또는상응하는분획및 / 또는대사산물의농도는약 5 x 10 5 내지약 cfu/d, 구체적으로약 10 7 내지약 cfu/d 범위의용량 ( 박테리아등가물로표시 ) 에상응하도록조정될수있다. [0224] 국소적용용조성물은대체로약 10 2 내지약 cfu/g, 구체적으로약 10 5 내지약 cfu/g, 보다구체적으 로약 10 6 내지약 cfu/g 의박테리아를포함한다. [0225] [0226] [0227] [0228] [0229] [0230] [0231] [0232] 일실시양태에서, 형질전환된박테리아는 UV 손상으로부터보호, 냄새개선, 수의학적피부과요구를해결하기위해, 동물의피부, 예컨대개및고양이를포함하는애완동물에도포된다. III. 치료방법다른측면에서, 피부와연관된질병또는병태를치료하거나또는예방하는방법을고려한다. 1 이상의목적화합물을발현하는형질전환된박테리아의 1 이상의집단을포함하는상기기술된조성물은목적화합물 ( 들 ) 의치료유효량을제공하기에효과적인양으로피부에도포된다. 본원에서사용되는, 치료유효량은환자또는피험체에투여시, 국소영역또는국소조성물도포된근처에서피부질병또는병태가완화, 제거및 / 또는억제되는국소조성물의양이다. 일실시양태에서, 일광노출로인한손상으로부터피부를보호하는방법이제공된다. UV에의해야기된산화적스트레스의경감을위한치료방법, 항산화제, 항반응성산소종 ( 항-ROS) 을제공하는방법, 피부보습을제공하는방법, 항노화를촉진하는방법, 및건선, 습진, 활성피부염, 여드름, 상처치유 ( 당뇨병성상처또는궤양포함 ), 간찰진 / 기저귀발진, 화상, 벌레물림, 두드러기, 비듬 ( 딱지 ) 을치료하는방법, 및냄새제어또는제거를제공하는방법을고려한다. IV. 조성물의포장제제화후, 조성물은전달및최종사용자에의한사용에적합한방식으로포장된다. 일실시양태에서, 조성물은적절한분배기에위치되어최종사용자에운송된다. 최종용기의예에는펌프병, 눌러짜는병, 단지, 튜브, 캡슐또는바이알을포함할수있다. 일부실시양태에서, 포장은조성물내형질전환박테리아의성질을고려한다. 예를들면, 호흡을통해성장하는락토코커스는발효세포보다장기간보관후에두드러지게양호하게생존한다 (Gaudu et al., Antonie van

37 Leeuwenhoek, 82: (2002)). 이러한장기생존은아마도산화스트레스로부터세포를보호하는사이토크롬의유도에의한것이다. 산화스트레스로부터또한보호하는, 세포내글루타티온의존재는또한보존시락토코커스의생존능을개선시킬수있다 (Li et al., Appl. Environ. Microbiol, 69(10):5739 (2003)). 보존시락토코커스의생존능을개선시키는다른접근법은분무-건조공정의채택, 및공정보조제, 예컨대박테리아입자를코팅하는데사용될수있는, 미정질셀룰로스, 카르복시메틸셀룰로스, 히드록시프로필메틸셀룰로스아세테이트숙시네이트, 또는나트륨알기네이트의사용 (EP A2) 이있다. 락토코커스에대한이러한예들은당분야의숙련가가본원에기술된임의의박테리아를동정할수있는포장접근법의유형을예시하려는것이다. [0233] [0234] [0235] [0236] [0237] [0238] [0239] [0240] [0241] [0242] [0243] 다른실시양태에서, 조성물중박테리아는피부에도포전또는후에재구성하기위해, 동결건조또는냉동건조된다. 일실시양태에서, 동결건조또는냉동건조는형질전환된박테리아의보관수명을개선시키기위해, 1 이상의부형제, 예컨대글리세롤또는다른당알콜을사용해수행된다. 일실시양태에서, 동결건조된조성물은트레할로스 (a-d-글루코피라노실-1,1-a-d-글루코피라노시드 ) 를포함하지않는다. 조성물의포장은 1 이상의용기의키트형태일수있다. 예를들면, 단일병, 튜브, 용기또는캡슐이동일하거나또는동일하지않은 2 부분으로분리될수있으며여기서한부분은그포장형태 ( 냉공건조 / 불활성화등 ) 의박테리아를포함하고, 다른부분은액체또는겔일수있는활성화물질을포함한다. 단일병또는용기는최종사용자가한번에힘을용기에가하여 2개용기부분내내용물의전부또는일부를분배하여서, 형질전환된박테리아및활성화물질을피부또는다른표면상에분배할수있도록디자인될수있다. 키트는또한 2 이상의용기를포함하는형태일수있는데, 한용기에는형질전환된박테리아의집단 ( 들 ) 을가지며다른용기에는형질전환된박테리아의집단과혼합되는제제를갖는다. 다른예에서, 형질전환된박테리아의집단을갖는한용기, 형질전환되지않은천연비병원성피부박테리아를갖는다른용기, 그리고형질전환된박테리아의집단과혼합하기위한제제를갖는제3 용기로 2 이상의용기를포함할수있다. 다른예에서, 단일병을포함하는 2 이상의용기는 2개의개별튜브에연결된하나의펌프를가지며, 각각상이한챔버로부터배수된다. 키트는또한 1 이상의보완적인산물, 예컨대비누, 바디워시또는일정 ph의보습로션, 활성화합물, 박테리아및제한인자등을함유하는로션또는크림을포함할수있다. 다른실시양태에서, 보완적인산물은화합물의지속적이거나또는연속적인발현을제공하도록목적화합물의발현, 활성및 / 또는성장을증가시키는제한인자이다. 보완적인산물은원래산물의활성에이로운임의의화합물을포함할수있고, 지속적인효율로그활성을향상시킨다. 다른고려되는포장은형질전환된박테리아의집단이박테리아의활성화를가능하게하고, 경우에따라서또한재생 / 성장인자를제한할수있는밴드 / 필름의제2 층과배합되어밴드또는필름상에층으로서유지되는것이다. 다른실시양태에서, 최종산물은박테리아가그들의활성상태로존재하도록, 냉장으로보관될수있다. 다른실시양태에서, 박테리아는수용성셀룰로스의소형비드에보관된다. 비드는임의의용액예컨대자외선차단제 / 보습제 / 바디워시또는비누에혼합될수있다. III. 실시예이하실시예는사실상예시적인것이며, 한정하려는의도는없다. 실시예 1 벡터 BTOP1-시노린1을이용해시노린성분을갖는락토코커스락티스 A. 박테리아엘. 락티스균주의박테리아를사용한다. 균주의스톡용액은 -20 에서 0.5% 당이보충된 GM17/M17 액체배지중 50% 글리세롤에보관한다. 박테리아는 0.5% 당이보충된 GM17 배지 //M17 액체배지또는 MRS 배지에서배양시킨 다. 16 시간항온배양후, 박테리아는원심분리를통해회수하고 박테리아 /100 μl로 BM9 배지에 10 배농축 시켰다. 플레이트또는슬랜트상에서, 균주는 2-3 주생존하게된다. [0244] [0245] 박테리아의스톡조제물은슬랜트로부터의세포를갖는 5 ml액체배지를항온배양하여준비한다. 세포를 30 에서밤새성장시켰다. 이어서, 3 ml의완전하게성장한배지를 1 ml의 60% 글리세롤에부가하고 -80 에서보관하였다. B. 벡터로게놈통합

38 [0246] [0247] [0248] [0249] [0250] [0251] [0252] [0253] [0254] pbtop_ 시노린은시노린 DNA 서열에대한완전한오페론 ( 서열번호 1,2,3,4,5,6,7,8,9,10,11,12,13,14) 을함유하고목적화합물의생산에사용된다. 시노린의오페론은 2가지예시적인방법 ; 분자클로닝방법 (Balskus et al., Science, 329: (2010)), 및시노린오페론과함께플라스미드서열의새로운서열분석합성법을이용해벡터에통합된다. B1: 분자클로닝시노린의서열은몇몇공급원, 예컨대게놈아나바에나바리아빌리스 ATCC 29413으로부터증폭, 아나바에나바리아빌리스또는노스톡종의완전게놈에따른신규한서열분석, 또는아나바에나바리아빌리스의성장배양물로부터증폭으로얻을수있다. [Balskus, et al. ( 상동 )] 에기재된방법에따라서, 완전한시노린유전자클러스터는포워드프라이머 ava3858-start1(ndei 제한효소부위가짐-5'-GAGATCCCATATGAGTATCGTCCAAGCAAAG-3'; 서열번호 16) 및리버스프라이머 ava3855-stop1(xhoi 제한효소부위가짐 5'- GTACCTCGAGTCATGAATTATTTTCCAGACAATCTTG-3'; 서열번호 17) 를이용해, 아나바에나바리아빌리스의게놈 DNA로부터 PCR 증폭하였다. 프라이머는미태깅된유전자산물을코딩하도록 pbtop1 벡터에결찰할수있게디자인하였다. PCR 반응물은총부피 50 μl중에 25 μl의마스터믹스, 2 ng의 DNA 주형, 및 17 pmole의각프라이머를함유한다. 열순환은다음의매개변수를이용해 PCR 기계상에서수행하였다 : 95 에서 1분간변성후, 95 에서 30초, 50 에서 1분, 70 에서 6분의 50 주기, 및 70 에서 5분간최종연장. 증폭된단편을 37 에서 2.5시간동안제한효소 NdeI및 XhoI으로분해하였다. 분해물은 2 μl의물, 6 μl의 NEB 완충액 4(10x), 6 μl의 BSA(10x), 40 μl의 PCR 산물, 3 μl의 NdeI(20 U/ μl ), 및 3 μl의 XhoI(20 U/ μl ) 을함유하였다. 제한효소분해물은직접아가로스겔전기영동을이용해정제하였고, 겔단편은 Illustra GFX 키트를이용해추가정제하였다. 분해물은 T4 DNA 리가아제를이용해선형 pbtopi 발현벡터에결찰시켰다. 결찰물은실온에서 2시간동안항온반응시켰고 3 μl의물, 1 μl의 T4 리가아제완충액 (10x), 1 μl의분해된벡터, 3 μl의분해된삽입 DNA, 및 2 μl의 T4 DNA 리가아제 (400 U/ μl ) 를함유한다. 5 μl의각결찰물을이용해선택된박테리아균주의단일튜브를형질전환시켰다. 얻어진 pbtopi 구성체 ( 시노린서열 ) 의확인은정제된플라스미드 DNA의서열분석을통해검증하였다. B2: 서열분석시노린오페론의완전한서열은 NCBI의공지데이타베이스를이용해검색하고확인하였으며, 플라스미드에삽입물로서합성하기위한신규서열분석의주형으로사용할수있거나, 또는플라스미드내에합성할수있는서열번호 1,2,3,4,5,6,7,8,9,10,11,12,13,18로기재하였다. C. 형질전환시노린서열 ( 서열번호 1) 을갖는시노린벡터, 또는인간피부상에도포하기위한 UV 방사선차단목적으로제작된임의의벡터를다음의단계를포함하는, 하기프로토콜에따라엘. 락티스균주를형질전환시켰다 : 박테리아세포의준비, 형질전환, 플라스미드추출, 박테리아의성장, 분광분석측정, 및형질전환된박테리아의보관. 세포의준비 : 간략하게, 24시간동안 30 에서성장시킨 -80 스톡유래 1-10 ml의엘. 락티스를접종하였다. 배양물을 10X로희석하고, 24시간동안 30 에서성장시켰다. 50 ml배양물을 10X로희석하고 OD 600 이 ( 약 3시간 ) 이될때까지성장시키고, 4 에서 6000 x g로 20분간세포를원심분리하였다. 400 μl의 0.5 M 수크로스, 10% 글리세롤 (4 ) 로세포를세척하고원심분리 (6000 x g) 하였으며, 세포를 200 μl의 0.5 M 수크로스, 10% 글리세롤, 50 mm EDTA(4 ) 에재현탁시키고, 현탁액을 15분간얼음상에유지시키고원심분리하였다. 세포를 100 ml의 0.5 M 수크로스, 10% 글리세롤 (4 ) 에현탁시키고원심분리하였다 (6000 x g). 세포를 4 ml의 0.5 M 수크로스, 10% 글리세롤 (4 ) 에재현탁시켰다. 샘플당 40 μl ( 얼음상에존재 ) 를사용하거나, 또는세포를작은부분으로 -80 에유지시켜서사용전에얼음상에서해동시킨다. [0255] 전기천공을통해세포를형질전환시키는프로토콜 : 1 μl DNA(TE 완충액에재구성시킴 ) 를갖는사전냉각시킨전 기천공큐벳에 μl세포를넣고, 큐벳을얼음에유지시킨다. 다음과같이조정된 Biorad Genepulser 를이 용한다 : 2000 V, 25 F, 200 Ω. 펄스 ( 정상판독은 msec) 를가하고, 1 ml의성장배지 + 20 mg MgCl mm CaCl 2 를부가한다. 큐벳을 5 분간얼음에유지시키고 30 에서 시간항온배양시킨다. 글루코스또는락 토스및제한성분 ( 플라스미드에따라좌우됨 ) 을갖는 M17 한천배지상에 10 μl, 100 μl, 900 μl를플레이팅하 고, 30 에서 1-2 일동안항온배양시키고분광분석을위해액체배지에박테리아를성장시키고, 플라스미드를

39 공개특허 추출한다. [0256] 세포는 또한 열충력을 통해 형질전환될 수 있다. [0257] 3가지 샘플(형질전환된 박테리아(벡터(서열번호 15)에 삽입된 목적 분자로 형질전환된 엘. 락티스, 박테리아 세 포 단독(형질전환 안됨); 및 삽입된 시노린 서열 없이 디자인된 벡터를 갖는 박테리아 균주)를 1시간에서 최대 10일 동안 10분 마다 270 nm, 310 nm, 330 nm, 및 360 nm의 UV 파장, 또는 1시간 내지 최대 10일 동안 10분마 다 nm의 UV 파장을 이용해 정기적인 분광분석기에서 검토하였다. [0258] 다수의 예시적인 측면 및 실시양태를 상기에서 기술하였지만, 당분야의 숙련가는 일정한 변형, 치환, 부가 및 이의 하위조합을 인지하게 될 것이다. 따라서, 이하의 첨부된 청구항 및 이하 도입된 청구항은 그들의 범주 및 사조에 속하는 바와 같이 이러한 모든 변형, 치환, 부가 및 하위 조합을 포함시키는 것으로 이해되고자 한다. 도면 도면1a

40 도면 1b

41 도면 1c 서열목록 SEQUENCE LISTING <110> TopGeniX, Inc. Qvit-Raz, Noga Altman, Tahel <120> Topical Composition Comprising Transformed Bacteria Expressing a Compound of Interest <130> <140> Not Yet Assigned <141> Filed Herewith <150> US 61/680,620 <151> <150> US 61/836,

42 <151> <160> 18 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 6459 <212> DNA <213> Anabaena variabilis <400> 1 atgaattatt ttccagacaa tcttgtaaac gctgtgctaa aacctgtaca tggggttcta 60 gaacaaacga ataatggttt ccagggacat caataatctt aatttcttga gccgccatta 120 cagaaaataa ttctacccaa actaaggtcg ggtcaggagc cataatatgt ttttccctgg 180 ctcgaaatac agtgactttt cctggatatg gttgtcttat ataggaataa gttgctttta 240 aagttcccac caaaacatca agaatacggc gattattttg acgttctaca ccaggcggga 300 atattctagc gctccgtgct ttatcaatga tgtaattaat tttttcttct acagttaaat 360 tttctatttc ttcaggtgtg actagattat cttgaccaaa cataccgcca aaaactctgg 420 agagaacacc aactaaataa acgtcatcaa tgggtttttg tttatccagc agaatcggta 480 cgtaagaatc taatattgct agtaaagata cttcttgtcc ttgtctatgt aactgctgtg 540 ctacttcata agctacgact ccaccaaatg accacccccc gacacgataa ggcccttggg 600 gttgaaattc tctaatagtt ttgacgtaga gactagccat atcttcaact cgcgtcaagg 660 gtgcttcatc tccataaaat ccttgagctt gtaagccata aaatggttgg tcagttccta 720 tatattgtgc gagtttaaaa tagcataaaa catgaccacc agcaggatgt atacaaaaga 780 aaggctgctg cttaccttgt ggttgaattg gaactagggg tgaattatgg atttggttgt 840 ttgcttgaat aaccttggct aaatctgcaa ttactggatt tgttaaaagt gttgctaagg 900 atatctcttt agcaaataac tcttcaattt gagaaattaa atgtagagct ttgagggaat 960 taccaccaat agcgaaaaag ttttctgtca cacctacttt aggtaaatgc agaatattcg 1020 accagatttg tactaatttt tcttcaactt cattccgagg cgctacatag gaattatgtt 1080 cactataatt aaataaatca ggcttaggta atgccttacg gtctacttta ccactgggag 1140 ttaaaggaag atgctccagc atcacaaaag cggctggaat cataaaatca ggtagccttg 1200 cttttaggaa atcacgcaga ttatcaagct gaggtttgat ggagttatag gtaatataag 1260 cgatgatttg tttttcttga gcgttatcat cccgcgctat gactacagct tctctgactt 1320 gtgggtgtga agataaaaca ttttcaatct cgccaatttc aattctataa ccccgaattt

43 ttacttgata atctgttcta ccaagatatt caatatttcc atcgggtaaa taacgagcta 1440 aatcacctgt tttataaagt cgcttaaact cagaattggg aaagggatta ataataaatt 1500 tttctttggt caattcttct ttattcaaat aaccacgagc aacccctaca ccaccaatat 1560 aaatttcacc agtgacacca atatttactg gttgtaaatc ggcatcaaga atataaattt 1620 gagtattagc aatgggacga ccaataggta cactctttaa attactatct tttctacatt 1680 gccaaaatgt gacatcaatt gctgcttctg tcgggccata gaggttatgt aattcacatt 1740 gcaaatgctg gaaaaatcta ttttgtaaat ctatagataa agcttcaccg ctacaaataa 1800 ctctttttag agagctgcat ttgcttacat ggcgattttg taaaaacact tgcagcattg 1860 aggggacaaa atgcaacgta gtgatttgtt cttgagtaat taaatcgatg aggtaagcac 1920 tatctttatg tccgcctggt ttggctatta ccaaacgtgc gccagttaat aaagtccaaa 1980 agaactccca aacggaaaca tcaaaactaa agggggtttt ttgtaaaatg ctatctgtgg 2040 aatcgatttg ataagcttcc tgcatccaca ataagcgatt acagatacct ttgtgggtgt 2100 tcattgcacc ttttggttta ccagtggaac cagaggtgta aattacataa gcaagattat 2160 ccgtttttat attacttttg ggattggtat tagcttgtgt ggaaattttc tcccattccc 2220 tatctacaca gatagtttgt gcttgatggt ggggaatttg attgagtaat ttttcttgag 2280 ttagtagtac cttcacctga gaatcttcta gcatataagc tatgcgttct tgaggatatt 2340 cagggtcaat aggaacataa gcacccccag ctttgaggat tcctaaaaga cagataacca 2400 tttctaagga acgttctaaa caaacgccta ccagggtttc tggctggact cctaatgttt 2460 gtaaataatg tcctagctgg tttgctttat gatttagttc ttgataagtt agttgttgct 2520 tgtcaaaggt gacagcgatc gcctcaggtg ttcgttctac ttgagctaca attagttcat 2580 gtaaactctg ggaaagatca taatctctgt gggtcgcgtt ccactctaca agtaacttac 2640 gaatattaaa atctatagtc tgcatatctt ctaactttgc tcaataataa aaaatttctc 2700 acgcagagac gcagagaaaa cacactccgc gtccctctct cttgaaaagt ttcctacgga 2760 gggaaaccct cctccagaac ttttcgctgc gctaacctca gcgtccctct gcgtttaaaa 2820 actaatctcc ccccaattcc accaacttcc caatattgaa atctatccgc gtccaacctt 2880 taagacgacg caaattattc aataacagta ggggaatttg ccaatgatgt accatcaaaa 2940 acggtaaggg gtcatctggc tgataaatcg catcagtccc gcgccaaata ttccccagcc 3000 atctttgcaa ctgggtgaaa gaacggatac cagttaaacg ccaaacttcg tgataagtcc 3060 aataggtagg cttgcttgtc gttagtggtt gtatggtttc agtcgtcggt gcttgactca 3120 agtacgcttc tgctacctgg gggtggtcgt aaaatgtggt aattgctgaa tgtgtgcggg 3180 ggttacactc gatggcgtaa actgttccgt cttcggcttg gataaagtca aaggaaatct

44 gtcctgtcag tttcagttcc ttgacaaaat gctgtaccca ttcggtaatt tgcgggttat 3300 ttacattctc ataattaact tggaaggctg aagattcgca acagcaatgc agtctgagtt 3360 ccccattccg aacggtgcta tgggtgcaga attccttacc ggggataaat tcctgcataa 3420 tccacggttt ttcgggagta attggcaaac ttctgacgaa tgctgctgtt tcctctggag 3480 tagcacaggg gagtttggtt aagtccaacc gccgcactga gtcgtaggga atgcttttga 3540 ggatgtattt acgtgtctct ccagaaaaat cgaagttgat gacttgttct ggtgaggtaa 3600 ttttaaagga tttgggtact gataaaccaa gcgatcgcgc tttttgtgtc aacgcaaatt 3660 tatcatccaa catttgggta atatctgcgt caaagtgaaa cacttcgcaa taatgggata 3720 actctggttt ggctaatgag tcgtagtagc tacccactgg actggtgacg ggaatataaa 3780 catcgatgtt ttcttgtttg acgatatcta ccaaagcctg aatgtaagct tggggattgt 3840 cctggggtgc ggggactgtg taaaacttat ccactgcttg ggaaaaacga tgaccagtca 3900 accagtattt atgggtttcc accaagacaa ctctatgtcc agccgcgtgg aatgaccttg 3960 ctagttgtaa agctttggtc atcttaccgc cactgataag aatggtttgg gggtttgctg 4020 ctttgacctt ttgcggtcgg aagactaaca aggatataaa aacaatggtg gcattaatgg 4080 gcaatgctag taataacaaa gccaaagtgc agatattttg gataattgcg gctattttcg 4140 tctgggaagg aagagacggt gtagcaggtg cggaagaaag gggaagggat tgtgccatag 4200 tcgattggac aattaaggtt gtattctgcg gataattgtt aaaccatctc gcaacggcaa 4260 caaaacctgt tctacacggg ggtctatagc tactgtatga ttaaattgcg cgatcgcttc 4320 accattgacg ctacgttcct ctgctggtag ataaacttcc ccttgtaata aggtgttatc 4380 tacacaaata aagccatctg gtgctaacaa actgctacct agcaacttgt gaaaataggc 4440 tacatactct tttttatctg cgtcgataaa taccaagtca aaagactccc cagcttctgc 4500 taacttatca agagttgcta aggctgcatc caattccaca cgaatctttc caccgtgggg 4560 agattgttga aaggctttct gtccaatttc cgccgcgtaa gggtcaactt cacaagccac 4620 aagcagtcca tcctctggta atgcttccgc catcgccagc gccgaataac cggtaaacat 4680 cccaatttct aagacttttt tagctttggt catgtgaaca aacatcttta aggtttgtcc 4740 ttcgatatga ccagaaagca tctcttgttc tagaggacgg acggttgtac ctccgtggaa 4800 gtgttctccc caggcttcgg tggctgtggt ttttgccaat gcagcgagtt caggagattc 4860 tggagtggtg cattcttcca aataagggtc tatacctgcg gctaaacgcc aagcctgatg 4920 gatgtttgct atcaattccc caggtaaatc tggatgttgc ttaacctctt ggactatggc 4980 ttctaactgc ttggttaaaa ttcccaatgg tgtaacaggt ctagctgttg gttggacaat

45 cacatttgtc aagtcgcttc gctccaattc aaaattcaaa attcaaaatt caaaattaaa 5100 gacaattagt gtccgattat ttgcgtagcc ttctctttcc ctacgggacg ctccgcgaac 5160 agaaatgcta ccgcgctcgc gcagtgtatc cgtggagtat tttgcatttt gaattcaaaa 5220 aagtcattat ttaacactcc cgattaattc tttttgataa acgggataca catccacacc 5280 ttcaccacca cggggataac tggtacaaag ttctttgtgg tcagctaatg cggctgctaa 5340 ttcttctctt gtcaggtcat tgacgaagac acaatcacca atgggttttg gcatagcagc 5400 tcttaacaaa ccatcacgag ttaatgtgat agattcagta ccacgccaca aaatatctat 5460 atccaacatg ggatggtcga gggatagacc aacgcgactc attaatccta aaatacgatc 5520 gcgttctgca attgtaatat atcctctacg ggcggcgatc gttgccgaga aagccatatc 5580 tacattaacg gcgtgtccgt ggaacatggg tagacgaggc gcaagttcca aggtgggact 5640 ccaagtgtga ccgtaagcaa tcaccctatc taggtctaac tcatgcaggt tgggaacttc 5700 caattccaac atcttatgga tagctttgta agtcaaacga tgggctattt ctttaatctc 5760 tggagttgca tctatattgc caaaatgagt acgtagtaat tcttcgccgt acttctccaa 5820 caattcaaaa acttcttgat gcgctactac agcgattttt accaattccg ccatcccgtt 5880 acgtacttgg tctgtaggga gagtacgcaa caaggagaaa tctaaaaata ctttgcgaga 5940 agcatgataa gcacccaaac ggtttttcag tttgcgatga ttaactgcta ccttaattgc 6000 tacactggca tcaattaatc caatcaatgt agtaggaatg cggatgtaat tgctgctgcg 6060 acgatatgta gaacaagcaa agccgacaac atctgtaatt aaaccgccac ccacgactaa 6120 tactggttct ttgcggacta atttgaaatc tgcaaagaca tctataactc tctcgaaagt 6180 ttgaatagtc ttatctggtt cagtaatggt aataggaaat agcctcagtt ctataccata 6240 atactggaaa tatgcctgaa tttgattacc atacaaccga ctgacgttag catctacaat 6300 cgccaagcat cgtccaaaac cttgatatac atctgctagt gcagaattct ggatttcaaa 6360 aataccatct acatacacca aatcatactc aatcttttcg taaccttcta catgaaaaga 6420 tgtttcctta gcttcaaact ttgcttggac gatactcat 6459 <210> 2 <211> 7210 <212> DNA <213> Nostoc sp. <400> 2 cttttaaaca ttctgctaaa acctgtacat gaggttctaa aacaaacgaa taatgatttc 60 ctggcacatc aataatatta atttcctctg ctgccattac agaaaataac tccacccaaa

46 ctaaagtggg atcaggagcc ataatatgtt tctccctagc tctaaaaatt gttacttttc 180 caggatatgg ctgtctttta taggaataag ttgcttttaa agttcccacc aatacatcta 240 aaatgcggcg attattttga cgttccacac caggaggaaa aattttcgct tttctggctt 300 tgtcaatgat ataattaatt ttttcttcta aacttaaatg ctggatttct tctggtgtaa 360 ctaaattatc ttgaccaaac attcccccga agactctaga aagtacaccc acgagataaa 420 catcatcaat ttgtttttgt ttatctaata aaatgggtac gtaagaatca agtatggcta 480 acaaagatac ttcttgtcct tgctttatta gctgctgtgc tacctcataa gcaaccactc 540 ccccaaacga ccaaccccct aattgataag gcccttgggg ttgaaattct ctgatagttt 600 tcacatagag gctggccata tcttcaactt tagttaaagg ttcctctttc ccataaaaac 660 cctgagcttg caaaccataa aacggttgtt cattgcccat gttatgggct aatttgaagt 720 aacataaaac atgaccaccg gcaggatgta tacaaaagaa aggttgcttc ttaccttgtg 780 gctgaatggg aactaaagga gaattctgaa tcagattact ggaatcttga ataactgctg 840 ctaaatctgt aattactggg ttctttaata gtgttgctag agggatttct tttccaaaat 900 cttgttcaat tttagagatt aaatgtagtg ctttaagtga atttccacct aacgcgaaaa 960 agttatcttt tactcctatt tgtggtaaat ttaggatgtc tgaccaaatt tttactaatt 1020 gtgcttctac ttgattacga ggagcgacaa aatcattaat ttcaatgaaa tgagaaatat 1080 caggttgtgg taaagcttta cggtctactt ttccactagg agttaaaggt agtgcttcca 1140 gcatgacaaa agcggctgga atcataaaat caggtagctt tgctttcaaa aaatcacgta 1200 ggctgttaag tgttggtttt tctgaatcgt aggtaatgta agcaacaagt tgtttttcta 1260 aattttgatg attacgcgca ataattacag cttctcgcac ttgcgaatgt aagcagagag 1320 tattttcaat ttcgccaatt tcaatccgat aacctcggat ttttacttga tagtctactc 1380 tgccaatata ttcaagattg ccatctggta aataacgagc taaatcacca gttttgtaga 1440 gacgttccga tactaatttt gattttttaa aaggattggg aataaatttt tcattagtta 1500 attctggacg attccagtaa ccacgtgcta cgccgacacc accaatatac atttcaccga 1560 tgacaccgac atctacaggc tgcaagtgtt cattaaggat gtaaatttgg gtgttagcaa 1620 tgggacgacc aattggtaca gtttttaaat tactgtgctt ttgacactgc caaaaagtga 1680 catcaatagc tgcttctgta gggccgtaca ggttatataa ttcgcagtcc aaacgctcaa 1740 aaaatctatt ttgtaaatct acaggtaaag cttcaccact acaaattact ctttgaagag 1800 aagtacattt ttctatacca cgactagcta aaaacatttg cagcatggag gggacaaaat

47 gcacagtagt gatttgctct tgaataatca gattaattaa ataattacta tctctatgtc 1920 cacccggttg agcaattact aggcgcgcgc ctgttaataa agtccaaaag aattcccaga 1980 cagagacatc aaagctaaaa ggtgtttttt gtaaaatgct atctgtagaa tttatttgat 2040 aagtttcttg catccacagc aagcgattac atataccttt gtgggtgttc attgcaccct 2100 tgggtttacc agtagaacca gaagtgtaga tgacataagc aagattatct gcttttactt 2160 cactttgggg attagtcttt ggttgtgtag aaattttgtt ccattctgta tctacacaaa 2220 tagtatgtgc ttgatggtgg ggaatttgat ttagtaattt ttcttgggtt agtaatacct 2280 gaatttggga atcttctagc atataagcta tgcgttcttg gggatattct gggtcaatgg 2340 gtacataagc accaccagct ttgagaattc ccaataaaca cacaaccatt tctaaggaac 2400 gttctagaca aacaccaact aatgtttctt gttgaactcc tagtgtgtgt aaatgatgtg 2460 ctagttgatt ggctctatta tttaattctt gataggttat ttgttgctgt tcaaacttta 2520 cagctatggc gttgggggtg cgttctactt gcgttgtaaa taactcatgt aaaccttgag 2580 aaaggtcgta atctctgtgt gtagcgtcgg gatttatttg tgtggtttgc atttttaaat 2640 cagggaaaaa tgtcggttaa tggctttgtg gaatgggggt gatttactca cccagagatg 2700 caaagacgca aaaaaaccta atcttttctt ctttgcgcct ttgcgccttt gcgtgagata 2760 aaaaaaatcc ttaatctccc ccgaattcga ctaatttacc gatgttgaaa tctatccgcg 2820 tccagccttt gagttgacgg agattattta acaacaacag aggaatttgc cagtgatgta 2880 ccatcaaaaa tggtagggga tcatgtagct gtaaaattgc atctgttccg cgccaaatgt 2940 ttttcagcca tgtcttcaac tgggtgaagg aacgaatacc agtcaagcgc caaatttcgt 3000 gataagtcca ataggttggt ttgctggttg ctaatggttg taaggtttcc gccattggtt 3060 gtttaccaat gtaagcttct gcaacttggg ggtggttgta gaaggtggta atagctgagt 3120 gtgtgcgggg gttacactcg atcgcgtata cttgtccgtc ttcagtttgg atgaagtcga 3180 aggatatctg tcctgtgagt ttgagttctt tgacaaagtg tctcacccat tccaagattt 3240 gcgggttttc tatgttctca tagttgactt ggaaggctga tgattcgcaa caacagtgta 3300 gtcgaatttc tccgtcccta actgtgctgt gggtgcagaa ttcttttcct gggatgaatt 3360 cttgcataat ccacggtttt tcgggactga tgggtagttt tctgacgaag gctgctgttt 3420 cctctggggt ggcgcagggg agtttggtta agtccaaacg ccgcactgag tcgtaagcaa 3480 tgcttttgag gatgtatttg cgagtctcac gggaaaagtc gaagttgatg acttgttcgc 3540 cagaggtgat tttaaaggat ttgggtactg ataaaccaag cgatcgcgct ttctctgcca

48 ttgcaaattt atcatccaac atttgggtga tctctgcatc aaaatgaaac acttcgcaat 3660 ggtgagataa ctctggtttg gctaaggagt cgtaataact cccgacagga ctggtaacgg 3720 gaatgtatac atcaatgttt tcccgtttga ctatatctac taaagctttg atatagtctt 3780 ctggtttttt ttgcggtgcg ggagttgtgt aaaatttatc gaccgcttgg gaaaatcgat 3840 gtcccgttaa ccaatattta tgtgtttcca gcaataccac ccgatgtcca tctgcgtgga 3900 atgaccttgc tagttgcaaa gctttggtca tttttccgcc actgatcagg atatttttgg 3960 ggttgctggt ttttgtagtt tggggacgga agatagtacc caaaaccaaa gctatgcaaa 4020 caataatggc gttgatgggc aatgctaata gtagcaaagc caaagtcaga atattttgga 4080 taattgcggc tatttttgtc tctaaaccta gagacggtgt agcaggtgag gagtcaaagg 4140 aaatagattg tgccatagtt tacactcggc ggataatcgt caaaccgtcg cgcaggggaa 4200 gtaaaacctg ttctacacgg atatcaaggg ctacggtacg attgaagtca gcgatcgctt 4260 gaccgttagc actgcgtttt tggggaggta aatatacctc tccttgtagg agtgtgttat 4320 caacacaaat aaagccttgc ggtgctaaca aattagtatc tagcagcatt tgcaagtaag 4380 ctgtgtactc ttttttatcg gcatcaataa ataccaagtc aaaagtttct ccagccgttg 4440 ctaatttctc caaagttgct aaagctgcac ccaattccac acgtatcttt ccaccgtggg 4500 gagattggtt aaaagccttc tgtgcaactt ccgccgcata agggtctact tcacaagcca 4560 ccaatacccc atcttctggt aaagcttccg ccatcgctaa ggctgaataa cccgtgaaca 4620 tcccaatttc cagaactctt ttcgctttag tcatgtgaac aaacatcttt aaagtttgtc 4680 cttcgatatg accagaaagc atttcctgtt ctagaggacg cacagttgca ccggctgtaa 4740 aatgctcacc ccaagcctct tttacagtta tcttagcgag tgctgctaaa gcctctgatt 4800 ctggggtagt acattcctct aaataagggt caatacctgc tgctaactcc caagcttggg 4860 taatctcagc taccaaatca gcaggtaaat cttggcgttg tttaacctct cgaacaacag 4920 cttccaactt cttagttaaa attcccaagg gtgtgacagg tctagctgtc ggtatgtcta 4980 tcaaattcgt catgatttaa aggtgtagcc acataaatta gaaaattgct gattgctcaa 5040 agcctgaaag caactgaatt aagactcagc actcatcact ttcctacagc actccctaca 5100 agttccttct gactgctgag aggatacata tctacaccct caccaccacg aggatattga 5160 ctacaaagtt ccttatgttc agctaaagct gcggctgatt cggcttttgt caggtcattg 5220 acgaagaaac attctccaat aggtcttggc atagcagctc tgagtaaacc atctctagtt 5280 agggtgatag actcagtagc acgccataat aactcctcat ccaacagagg atggtcgagg 5340 gctagaccta tacgactcat caatcctaaa atgcgatcgc gctcttgagt agtaatgtag 5400 cctctccgtg ctgcaatagt cgcagacaaa gccatatcaa tattgactgc gtgaccgtgg

49 aacataggta tatgtggcgc aagttccaag gtcggactcc aagtatgacc gtaagcaatt 5520 accctatcta ggtctaattc gtggaggttg ggtacttcca actccaacat ctttttaatc 5580 gctttgtagg tcacttcatg ggctacatct ttaatttctg gcatagcgtc aatattgcca 5640 aaatgcgtat gcagtaagtc ttccccgtac ttctccaaca actcaaatac ttctttgtga 5700 gcaactacgg cgattttgac taattccgcc ataccgttac gtacttggtc agttggtaga 5760 gtccgtaaaa aggagaaatc taagaaaact tgacgagaag catgatatgc acccaaacgg 5820 tttttcagct tcttgtggtt aactgcgacc ttgatggcaa cactagcatc aattaagcca 5880 attaatgtag taggaatacg gatataatta ctgctgcgac ggtatgcaga gcaagcaaaa 5940 ccgacaacat ctgtaatcaa gccaccacca actactaata ctggttcttt gcgaactaat 6000 ttgaaatctg caaagacatc taccactttc tcaaatgttt gaatggtctt gtttggctca 6060 gtaatagtaa tggggaaaag agtcaagtca atgccgtgat actggaaata tttttgaatt 6120 tgtgtactgt agaactgact cacattagca tctacaacag ccaagcaacg tccaaaattt 6180 ttgtagatat ctgctaattg gtgattttta atctcaaaaa ctccatctac ataaactaag 6240 tcgtactcaa ttttttcgta gccttcaatg tgaaaagctg ctgcttgcgc ttcaaacttt 6300 gcttggacga tgctcatatt ctttgacctt tagtgcagta aatgactgta tgtgttgact 6360 ggaatatttg actcaagcca aaattgaata attctagtcc tagaattaaa ccgattgatt 6420 ggcataccaa ataactctaa tttctcatca agaaatagag gtaatcgctg gcagaatttg 6480 aggtaatcaa aacttgattg taaaaagcag aacgttgatt atatataacg tacagctttt 6540 taaatatagt gaatgacttg tgagtcttgg ttgaactgta agactctgca aatacgagca 6600 aactacatta agtttctact gttttgcagt gatggtacta aatgaagtcc atcatgattg 6660 atctgattgt agacagatat agtatgccag aagttagtag aaatttgctc aaaaatctta 6720 agattttctt cacgatttta aagataacat tatttgcgaa atatttgtac ataattatga 6780 gatttttcta agaaatctca taactataag ctgcaactta gtttatataa gcatcataat 6840 ttttgatctg aactgcaaac caaagaaatt agaggagagt ttgatattaa tttttatcat 6900 aagtatcagc actactaaaa accatgaatt ttaatcaaca cacagcaaat gtttccccta 6960 attctgaatc aagaacagga gtatggaagg aaaatttaca gcagattgtt gttaattaga 7020 aatacaaaaa tggagtgcta aagataaagc acatctactt ttatgagcgc agcagaaatg 7080 tcattggcat tggctaaaac ttaaggcttc taccaatact tgtaacaaaa cttaactaat 7140 ttgctctcat ttttaagtta gtgacactaa tgaaagtcct aagcaatagc ggactttttg 7200 cagttgggca 7210 <210>

50 <211> 888 <212> PRT <213> Anabaena variabilis <400> 3 Met Gln Thr Ile Asp Phe Asn Ile Arg Lys Leu Leu Val Glu Trp Asn Ala Thr His Arg Asp Tyr Asp Leu Ser Gln Ser Leu His Glu Leu Ile Val Ala Gln Val Glu Arg Thr Pro Glu Ala Ile Ala Val Thr Phe Asp Lys Gln Gln Leu Thr Tyr Gln Glu Leu Asn His Lys Ala Asn Gln Leu Gly His Tyr Leu Gln Thr Leu Gly Val Gln Pro Glu Thr Leu Val Gly Val Cys Leu Glu Arg Ser Leu Glu Met Val Ile Cys Leu Leu Gly Ile Leu Lys Ala Gly Gly Ala Tyr Val Pro Ile Asp Pro Glu Tyr Pro Gln Glu Arg Ile Ala Tyr Met Leu Glu Asp Ser Gln Val Lys Val Leu Leu Thr Gln Glu Lys Leu Leu Asn Gln Ile Pro His His Gln Ala Gln Thr Ile Cys Val Asp Arg Glu Trp Glu Lys Ile Ser Thr Gln Ala Asn Thr Asn Pro Lys Ser Asn Ile Lys Thr Asp Asn Leu Ala Tyr Val Ile Tyr Thr Ser Gly Ser Thr Gly Lys Pro Lys Gly Ala Met Asn Thr His Lys Gly Ile Cys Asn Arg Leu Leu Trp Met Gln Glu Ala Tyr Gln Ile Asp Ser Thr Asp Ser Ile Leu Gln Lys Thr Pro Phe Ser Phe Asp Val Ser

51 Val Trp Glu Phe Phe Trp Thr Leu Leu Thr Gly Ala Arg Leu Val Ile Ala Lys Pro Gly Gly His Lys Asp Ser Ala Tyr Leu Ile Asp Leu Ile Thr Gln Glu Gln Ile Thr Thr Leu His Phe Val Pro Ser Met Leu Gln Val Phe Leu Gln Asn Arg His Val Ser Lys Cys Ser Ser Leu Lys Arg Val Ile Cys Ser Gly Glu Ala Leu Ser Ile Asp Leu Gln Asn Arg Phe Phe Gln His Leu Gln Cys Glu Leu His Asn Leu Tyr Gly Pro Thr Glu Ala Ala Ile Asp Val Thr Phe Trp Gln Cys Arg Lys Asp Ser Asn Leu Lys Ser Val Pro Ile Gly Arg Pro Ile Ala Asn Thr Gln Ile Tyr Ile Leu Asp Ala Asp Leu Gln Pro Val Asn Ile Gly Val Thr Gly Glu Ile Tyr Ile Gly Gly Val Gly Val Ala Arg Gly Tyr Leu Asn Lys Glu Glu Leu Thr Lys Glu Lys Phe Ile Ile Asn Pro Phe Pro Asn Ser Glu Phe Lys Arg Leu Tyr Lys Thr Gly Asp Leu Ala Arg Tyr Leu Pro Asp Gly Asn Ile Glu Tyr Leu Gly Arg Thr Asp Tyr Gln Val Lys Ile Arg Gly Tyr Arg Ile Glu Ile Gly Glu Ile Glu Asn Val Leu Ser Ser His Pro Gln Val Arg Glu Ala Val Val Ile Ala Arg Asp Asp Asn Ala Gln Glu

52 Lys Gln Ile Ile Ala Tyr Ile Thr Tyr Asn Ser Ile Lys Pro Gln Leu Asp Asn Leu Arg Asp Phe Leu Lys Ala Arg Leu Pro Asp Phe Met Ile Pro Ala Ala Phe Val Met Leu Glu His Leu Pro Leu Thr Pro Ser Gly Lys Val Asp Arg Lys Ala Leu Pro Lys Pro Asp Leu Phe Asn Tyr Ser Glu His Asn Ser Tyr Val Ala Pro Arg Asn Glu Val Glu Glu Lys Leu Val Gln Ile Trp Ser Asn Ile Leu His Leu Pro Lys Val Gly Val Thr Glu Asn Phe Phe Ala Ile Gly Gly Asn Ser Leu Lys Ala Leu His Leu Ile Ser Gln Ile Glu Glu Leu Phe Ala Lys Glu Ile Ser Leu Ala Thr Leu Leu Thr Asn Pro Val Ile Ala Asp Leu Ala Lys Val Ile Gln Ala Asn Asn Gln Ile His Asn Ser Pro Leu Val Pro Ile Gln Pro Gln Gly Lys Gln Gln Pro Phe Phe Cys Ile His Pro Ala Gly Gly His Val Leu Cys Tyr Phe Lys Leu Ala Gln Tyr Ile Gly Thr Asp Gln Pro Phe Tyr Gly Leu Gln Ala Gln Gly Phe Tyr Gly Asp Glu Ala Pro Leu Thr Arg Val Glu Asp Met Ala Ser Leu Tyr Val Lys Thr Ile Arg Glu Phe Gln Pro Gln Gly Pro Tyr Arg Val Gly Gly Trp Ser Phe Gly Gly Val Val Ala Tyr Glu Val Ala Gln Gln Leu His Arg Gln Gly Gln Glu Val Ser

53 Leu Leu Ala Ile Leu Asp Ser Tyr Val Pro Ile Leu Leu Asp Lys Gln Lys Pro Ile Asp Asp Val Tyr Leu Val Gly Val Leu Ser Arg Val Phe Gly Gly Met Phe Gly Gln Asp Asn Leu Val Thr Pro Glu Glu Ile Glu Asn Leu Thr Val Glu Glu Lys Ile Asn Tyr Ile Ile Asp Lys Ala Arg Ser Ala Arg Ile Phe Pro Pro Gly Val Glu Arg Gln Asn Asn Arg Arg Ile Leu Asp Val Leu Val Gly Thr Leu Lys Ala Thr Tyr Ser Tyr Ile Arg Gln Pro Tyr Pro Gly Lys Val Thr Val Phe Arg Ala Arg Glu Lys His Ile Met Ala Pro Asp Pro Thr Leu Val Trp Val Glu Leu Phe Ser Val Met Ala Ala Gln Glu Ile Lys Ile Ile Asp Val Pro Gly Asn His Tyr Ser Phe Val Leu Glu Pro His Val Gln Val Leu Ala Gln Arg Leu Gln Asp Cys Leu Glu Asn Asn Ser 885 <210> 4 <211> 458 <212> PRT <213> Anabaena variabilis <400> 4 Met Ala Gln Ser Leu Pro Leu Ser Ser Ala Pro Ala Thr Pro Ser Leu Pro Ser Gln Thr Lys Ile Ala Ala Ile Ile Gln Asn Ile Cys Thr Leu

54 Ala Leu Leu Leu Leu Ala Leu Pro Ile Asn Ala Thr Ile Val Phe Ile Ser Leu Leu Val Phe Arg Pro Gln Lys Val Lys Ala Ala Asn Pro Gln Thr Ile Leu Ile Ser Gly Gly Lys Met Thr Lys Ala Leu Gln Leu Ala Arg Ser Phe His Ala Ala Gly His Arg Val Val Leu Val Glu Thr His Lys Tyr Trp Leu Thr Gly His Arg Phe Ser Gln Ala Val Asp Lys Phe Tyr Thr Val Pro Ala Pro Gln Asp Asn Pro Gln Ala Tyr Ile Gln Ala Leu Val Asp Ile Val Lys Gln Glu Asn Ile Asp Val Tyr Ile Pro Val Thr Ser Pro Val Gly Ser Tyr Tyr Asp Ser Leu Ala Lys Pro Glu Leu Ser His Tyr Cys Glu Val Phe His Phe Asp Ala Asp Ile Thr Gln Met Leu Asp Asp Lys Phe Ala Leu Thr Gln Lys Ala Arg Ser Leu Gly Leu Ser Val Pro Lys Ser Phe Lys Ile Thr Ser Pro Glu Gln Val Ile Asn Phe Asp Phe Ser Gly Glu Thr Arg Lys Tyr Ile Leu Lys Ser Ile Pro Tyr Asp Ser Val Arg Arg Leu Asp Leu Thr Lys Leu Pro Cys Ala Thr Pro Glu Glu Thr Ala Ala Phe Val Arg Ser Leu Pro Ile Thr Pro Glu Lys Pro Trp Ile Met Gln Glu Phe Ile Pro Gly Lys Glu Phe Cys Thr His Ser Thr Val Arg Asn Gly Glu Leu Arg Leu His Cys Cys Cys Glu

55 Ser Ser Ala Phe Gln Val Asn Tyr Glu Asn Val Asn Asn Pro Gln Ile Thr Glu Trp Val Gln His Phe Val Lys Glu Leu Lys Leu Thr Gly Gln Ile Ser Phe Asp Phe Ile Gln Ala Glu Asp Gly Thr Val Tyr Ala Ile Glu Cys Asn Pro Arg Thr His Ser Ala Ile Thr Thr Phe Tyr Asp His Pro Gln Val Ala Glu Ala Tyr Leu Ser Gln Ala Pro Thr Thr Glu Thr Ile Gln Pro Leu Thr Thr Ser Lys Pro Thr Tyr Trp Thr Tyr His Glu Val Trp Arg Leu Thr Gly Ile Arg Ser Phe Thr Gln Leu Gln Arg Trp Leu Gly Asn Ile Trp Arg Gly Thr Asp Ala Ile Tyr Gln Pro Asp Asp Pro Leu Pro Phe Leu Met Val His His Trp Gln Ile Pro Leu Leu Leu Leu Asn Asn Leu Arg Arg Leu Lys Gly Trp Thr Arg Ile Asp Phe Asn Ile Gly Lys Leu Val Glu Leu Gly Gly Asp <210> 5 <211> 279 <212> PRT <213> Anabaena variabilis <400> 5 Met Thr Asn Val Ile Val Gln Pro Thr Ala Arg Pro Val Thr Pro Leu Gly Ile Leu Thr Lys Gln Leu Glu Ala Ile Val Gln Glu Val Lys Gln

56 His Pro Asp Leu Pro Gly Glu Leu Ile Ala Asn Ile His Gln Ala Trp Arg Leu Ala Ala Gly Ile Asp Pro Tyr Leu Glu Glu Cys Thr Thr Pro Glu Ser Pro Glu Leu Ala Ala Leu Ala Lys Thr Thr Ala Thr Glu Ala Trp Gly Glu His Phe His Gly Gly Thr Thr Val Arg Pro Leu Glu Gln Glu Met Leu Ser Gly His Ile Glu Gly Gln Thr Leu Lys Met Phe Val His Met Thr Lys Ala Lys Lys Val Leu Glu Ile Gly Met Phe Thr Gly Tyr Ser Ala Leu Ala Met Ala Glu Ala Leu Pro Glu Asp Gly Leu Leu Val Ala Cys Glu Val Asp Pro Tyr Ala Ala Glu Ile Gly Gln Lys Ala Phe Gln Gln Ser Pro His Gly Gly Lys Ile Arg Val Glu Leu Asp Ala Ala Leu Ala Thr Leu Asp Lys Leu Ala Glu Ala Gly Glu Ser Phe Asp Leu Val Phe Ile Asp Ala Asp Lys Lys Glu Tyr Val Ala Tyr Phe His Lys Leu Leu Gly Ser Ser Leu Leu Ala Pro Asp Gly Phe Ile Cys Val Asp Asn Thr Leu Leu Gln Gly Glu Val Tyr Leu Pro Ala Glu Glu Arg Ser Val Asn Gly Glu Ala Ile Ala Gln Phe Asn His Thr Val Ala Ile Asp Pro Arg Val Glu Gln Val Leu Leu Pro Leu Arg Asp Gly Leu Thr Ile Ile Arg Arg Ile Gln Pro

57 275 <210> 6 <211> 410 <212> PRT <213> Anabaena variabilis <400> 6 Met Ser Ile Val Gln Ala Lys Phe Glu Ala Lys Glu Thr Ser Phe His Val Glu Gly Tyr Glu Lys Ile Glu Tyr Asp Leu Val Tyr Val Asp Gly Ile Phe Glu Ile Gln Asn Ser Ala Leu Ala Asp Val Tyr Gln Gly Phe Gly Arg Cys Leu Ala Ile Val Asp Ala Asn Val Ser Arg Leu Tyr Gly Asn Gln Ile Gln Ala Tyr Phe Gln Tyr Tyr Gly Ile Glu Leu Arg Leu Phe Pro Ile Thr Ile Thr Glu Pro Asp Lys Thr Ile Gln Thr Phe Glu Arg Val Ile Asp Val Phe Ala Asp Phe Lys Leu Val Arg Lys Glu Pro Val Leu Val Val Gly Gly Gly Leu Ile Thr Asp Val Val Gly Phe Ala Cys Ser Thr Tyr Arg Arg Ser Ser Asn Tyr Ile Arg Ile Pro Thr Thr Leu Ile Gly Leu Ile Asp Ala Ser Val Ala Ile Lys Val Ala Val Asn His Arg Lys Leu Lys Asn Arg Leu Gly Ala Tyr His Ala Ser Arg Lys Val Phe Leu Asp Phe Ser Leu Leu Arg Thr Leu Pro Thr Asp Gln Val Arg Asn Gly Met Ala Glu Leu Val Lys Ile Ala Val Val Ala His Gln

58 Glu Val Phe Glu Leu Leu Glu Lys Tyr Gly Glu Glu Leu Leu Arg Thr His Phe Gly Asn Ile Asp Ala Thr Pro Glu Ile Lys Glu Ile Ala His Arg Leu Thr Tyr Lys Ala Ile His Lys Met Leu Glu Leu Glu Val Pro Asn Leu His Glu Leu Asp Leu Asp Arg Val Ile Ala Tyr Gly His Thr Trp Ser Pro Thr Leu Glu Leu Ala Pro Arg Leu Pro Met Phe His Gly His Ala Val Asn Val Asp Met Ala Phe Ser Ala Thr Ile Ala Ala Arg Arg Gly Tyr Ile Thr Ile Ala Glu Arg Asp Arg Ile Leu Gly Leu Met Ser Arg Val Gly Leu Ser Leu Asp His Pro Met Leu Asp Ile Asp Ile Leu Trp Arg Gly Thr Glu Ser Ile Thr Leu Thr Arg Asp Gly Leu Leu Arg Ala Ala Met Pro Lys Pro Ile Gly Asp Cys Val Phe Val Asn Asp Leu Thr Arg Glu Glu Leu Ala Ala Ala Leu Ala Asp His Lys Glu Leu Cys Thr Ser Tyr Pro Arg Gly Gly Glu Gly Val Asp Val Tyr Pro Val Tyr Gln Lys Glu Leu Ile Gly Ser Val Lys <210> 7 <211> 1233 <212> DNA <213> Anabaena variabilis <400>

59 atgagtatcg tccaagcaaa gtttgaagct aaggaaacat cttttcatgt agaaggttac 60 gaaaagattg agtatgattt ggtgtatgta gatggtattt ttgaaatcca gaattctgca 120 ctagcagatg tatatcaagg ttttggacga tgcttggcga ttgtagatgc taacgtcagt 180 cggttgtatg gtaatcaaat tcaggcatat ttccagtatt atggtataga actgaggcta 240 tttcctatta ccattactga accagataag actattcaaa ctttcgagag agttatagat 300 gtctttgcag atttcaaatt agtccgcaaa gaaccagtat tagtcgtggg tggcggttta 360 attacagatg ttgtcggctt tgcttgttct acatatcgtc gcagcagcaa ttacatccgc 420 attcctacta cattgattgg attaattgat gccagtgtag caattaaggt agcagttaat 480 catcgcaaac tgaaaaaccg tttgggtgct tatcatgctt ctcgcaaagt atttttagat 540 ttctccttgt tgcgtactct ccctacagac caagtacgta acgggatggc ggaattggta 600 aaaatcgctg tagtagcgca tcaagaagtt tttgaattgt tggagaagta cggcgaagaa 660 ttactacgta ctcattttgg caatatagat gcaactccag agattaaaga aatagcccat 720 cgtttgactt acaaagctat ccataagatg ttggaattgg aagttcccaa cctgcatgag 780 ttagacctag atagggtgat tgcttacggt cacacttgga gtcccacctt ggaacttgcg 840 cctcgtctac ccatgttcca cggacacgcc gttaatgtag atatggcttt ctcggcaacg 900 atcgccgccc gtagaggata tattacaatt gcagaacgcg atcgtatttt aggattaatg 960 agtcgcgttg gtctatccct cgaccatccc atgttggata tagatatttt gtggcgtggt 1020 actgaatcta tcacattaac tcgtgatggt ttgttaagag ctgctatgcc aaaacccatt 1080 ggtgattgtg tcttcgtcaa tgacctgaca agagaagaat tagcagccgc attagctgac 1140 cacaaagaac tttgtaccag ttatccccgt ggtggtgaag gtgtggatgt gtatcccgtt 1200 tatcaaaaag aattaatcgg gagtgttaaa taa 1233 <210> 8 <211> 174 <212> DNA <213> Anabaena variabili <400> 8 tgactttttt gaattcaaaa tgcaaaatac tccacggata cactgcgcga gcgcggtagc 60 atttctgttc gcggagcgtc ccgtagggaa agagaaggct acgcaaataa tcggacacta 120 attgtcttta attttgaatt ttgaattttg aattttgaat tggagcgaag cgac 174 <210> 9 <211> 840 <212> DNA

60 <213> Anabaena variabilis <400> 9 ttgacaaatg tgattgtcca accaacagct agacctgtta caccattggg aattttaacc 60 aagcagttag aagccatagt ccaagaggtt aagcaacatc cagatttacc tggggaattg 120 atagcaaaca tccatcaggc ttggcgttta gccgcaggta tagaccctta tttggaagaa 180 tgcaccactc cagaatctcc tgaactcgct gcattggcaa aaaccacagc caccgaagcc 240 tggggagaac acttccacgg aggtacaacc gtccgtcctc tagaacaaga gatgctttct 300 ggtcatatcg aaggacaaac cttaaagatg tttgttcaca tgaccaaagc taaaaaagtc 360 ttagaaattg ggatgtttac cggttattcg gcgctggcga tggcggaagc attaccagag 420 gatggactgc ttgtggcttg tgaagttgac ccttacgcgg cggaaattgg acagaaagcc 480 tttcaacaat ctccccacgg tggaaagatt cgtgtggaat tggatgcagc cttagcaact 540 cttgataagt tagcagaagc tggggagtct tttgacttgg tatttatcga cgcagataaa 600 aaagagtatg tagcctattt tcacaagttg ctaggtagca gtttgttagc accagatggc 660 tttatttgtg tagataacac cttattacaa ggggaagttt atctaccagc agaggaacgt 720 agcgtcaatg gtgaagcgat cgcgcaattt aatcatacag tagctataga cccccgtgta 780 gaacaggttt tgttgccgtt gcgagatggt ttaacaatta tccgcagaat acaaccttaa 840 <210> 10 <211> 14 <212> DNA <213> Anabaena variabili <400> 10 ttgtccaatc gact 14 <210> 11 <211> 1377 <212> DNA <213> Anabaena variabilis <400> 11 atggcacaat cccttcccct ttcttccgca cctgctacac cgtctcttcc ttcccagacg 60 aaaatagccg caattatcca aaatatctgc actttggctt tgttattact agcattgccc 120 attaatgcca ccattgtttt tatatccttg ttagtcttcc gaccgcaaaa ggtcaaagca 180 gcaaaccccc aaaccattct tatcagtggc ggtaagatga ccaaagcttt acaactagca

61 aggtcattcc acgcggctgg acatagagtt gtcttggtgg aaacccataa atactggttg 300 actggtcatc gtttttccca agcagtggat aagttttaca cagtccccgc accccaggac 360 aatccccaag cttacattca ggctttggta gatatcgtca aacaagaaaa catcgatgtt 420 tatattcccg tcaccagtcc agtgggtagc tactacgact cattagccaa accagagtta 480 tcccattatt gcgaagtgtt tcactttgac gcagatatta cccaaatgtt ggatgataaa 540 tttgcgttga cacaaaaagc gcgatcgctt ggtttatcag tacccaaatc ctttaaaatt 600 acctcaccag aacaagtcat caacttcgat ttttctggag agacacgtaa atacatcctc 660 aaaagcattc cctacgactc agtgcggcgg ttggacttaa ccaaactccc ctgtgctact 720 ccagaggaaa cagcagcatt cgtcagaagt ttgccaatta ctcccgaaaa accgtggatt 780 atgcaggaat ttatccccgg taaggaattc tgcacccata gcaccgttcg gaatggggaa 840 ctcagactgc attgctgttg cgaatcttca gccttccaag ttaattatga gaatgtaaat 900 aacccgcaaa ttaccgaatg ggtacagcat tttgtcaagg aactgaaact gacaggacag 960 atttcctttg actttatcca agccgaagac ggaacagttt acgccatcga gtgtaacccc 1020 cgcacacatt cagcaattac cacattttac gaccaccccc aggtagcaga agcgtacttg 1080 agtcaagcac cgacgactga aaccatacaa ccactaacga caagcaagcc tacctattgg 1140 acttatcacg aagtttggcg tttaactggt atccgttctt tcacccagtt gcaaagatgg 1200 ctggggaata tttggcgcgg gactgatgcg atttatcagc cagatgaccc cttaccgttt 1260 ttgatggtac atcattggca aattccccta ctgttattga ataatttgcg tcgtcttaaa 1320 ggttggacgc ggatagattt caatattggg aagttggtgg aattgggggg agattag 1377 <210> 12 <211> 156 <212> DNA <213> Anabaena variabilis <400> 12 tttttaaacg cagagggacg ctgaggttag cgcagcgaaa agttctggag gagggtttcc 60 ctccgtagga aacttttcaa gagagaggga cgcggagtgt gttttctctg cgtctctgcg 120 tgagaaattt tttattattg agcaaagtta gaagat 156 <210> 13 <211> 2667 <212> DNA <213> Anabaena variabilis

62 <400> 13 atgcagacta tagattttaa tattcgtaag ttacttgtag agtggaacgc gacccacaga 60 gattatgatc tttcccagag tttacatgaa ctaattgtag ctcaagtaga acgaacacct 120 gaggcgatcg ctgtcacctt tgacaagcaa caactaactt atcaagaact aaatcataaa 180 gcaaaccagc taggacatta tttacaaaca ttaggagtcc agccagaaac cctggtaggc 240 gtttgtttag aacgttcctt agaaatggtt atctgtcttt taggaatcct caaagctggg 300 ggtgcttatg ttcctattga ccctgaatat cctcaagaac gcatagctta tatgctagaa 360 gattctcagg tgaaggtact actaactcaa gaaaaattac tcaatcaaat tccccaccat 420 caagcacaaa ctatctgtgt agatagggaa tgggagaaaa tttccacaca agctaatacc 480 aatcccaaaa gtaatataaa aacggataat cttgcttatg taatttacac ctctggttcc 540 actggtaaac caaaaggtgc aatgaacacc cacaaaggta tctgtaatcg cttattgtgg 600 atgcaggaag cttatcaaat cgattccaca gatagcattt tacaaaaaac cccctttagt 660 tttgatgttt ccgtttggga gttcttttgg actttattaa ctggcgcacg tttggtaata 720 gccaaaccag gcggacataa agatagtgct tacctcatcg atttaattac tcaagaacaa 780 atcactacgt tgcattttgt cccctcaatg ctgcaagtgt ttttacaaaa tcgccatgta 840 agcaaatgca gctctctaaa aagagttatt tgtagcggtg aagctttatc tatagattta 900 caaaatagat ttttccagca tttgcaatgt gaattacata acctctatgg cccgacagaa 960 gcagcaattg atgtcacatt ttggcaatgt agaaaagata gtaatttaaa gagtgtacct 1020 attggtcgtc ccattgctaa tactcaaatt tatattcttg atgccgattt acaaccagta 1080 aatattggtg tcactggtga aatttatatt ggtggtgtag gggttgctcg tggttatttg 1140 aataaagaag aattgaccaa agaaaaattt attattaatc cctttcccaa ttctgagttt 1200 aagcgacttt ataaaacagg tgatttagct cgttatttac ccgatggaaa tattgaatat 1260 cttggtagaa cagattatca agtaaaaatt cggggttata gaattgaaat tggcgagatt 1320 gaaaatgttt tatcttcaca cccacaagtc agagaagctg tagtcatagc gcgggatgat 1380 aacgctcaag aaaaacaaat catcgcttat attacctata actccatcaa acctcagctt 1440 gataatctgc gtgatttcct aaaagcaagg ctacctgatt ttatgattcc agccgctttt 1500 gtgatgctgg agcatcttcc tttaactccc agtggtaaag tagaccgtaa ggcattacct 1560 aagcctgatt tatttaatta tagtgaacat aattcctatg tagcgcctcg gaatgaagtt 1620 gaagaaaaat tagtacaaat ctggtcgaat attctgcatt tacctaaagt aggtgtgaca 1680 gaaaactttt tcgctattgg tggtaattcc ctcaaagctc tacatttaat ttctcaaatt 1740 gaagagttat ttgctaaaga gatatcctta gcaacacttt taacaaatcc agtaattgca

63 gatttagcca aggttattca agcaaacaac caaatccata attcacccct agttccaatt 1860 caaccacaag gtaagcagca gcctttcttt tgtatacatc ctgctggtgg tcatgtttta 1920 tgctatttta aactcgcaca atatatagga actgaccaac cattttatgg cttacaagct 1980 caaggatttt atggagatga agcacccttg acgcgagttg aagatatggc tagtctctac 2040 gtcaaaacta ttagagaatt tcaaccccaa gggccttatc gtgtcggggg gtggtcattt 2100 ggtggagtcg tagcttatga agtagcacag cagttacata gacaaggaca agaagtatct 2160 ttactagcaa tattagattc ttacgtaccg attctgctgg ataaacaaaa acccattgat 2220 gacgtttatt tagttggtgt tctctccaga gtttttggcg gtatgtttgg tcaagataat 2280 ctagtcacac ctgaagaaat agaaaattta actgtagaag aaaaaattaa ttacatcatt 2340 gataaagcac ggagcgctag aatattcccg cctggtgtag aacgtcaaaa taatcgccgt 2400 attcttgatg ttttggtggg aactttaaaa gcaacttatt cctatataag acaaccatat 2460 ccaggaaaag tcactgtatt tcgagccagg gaaaaacata ttatggctcc tgacccgacc 2520 ttagtttggg tagaattatt ttctgtaatg gcggctcaag aaattaagat tattgatgtc 2580 cctggaaacc attattcgtt tgttctagaa ccccatgtac aggttttagc acagcgttta 2640 caagattgtc tggaaaataa ttcataa 2667 <210> 14 <211> 6469 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220><223> synthetic sequence <400> 14 tcgagatgaa ttattttcca gacaatcttg taaacgctgt gctaaaacct gtacatgggg 60 ttctagaaca aacgaataat ggtttccagg gacatcaata atcttaattt cttgagccgc 120 cattacagaa aataattcta cccaaactaa ggtcgggtca ggagccataa tatgtttttc 180 cctggctcga aatacagtga cttttcctgg atatggttgt cttatatagg aataagttgc 240 ttttaaagtt cccaccaaaa catcaagaat acggcgatta ttttgacgtt ctacaccagg 300 cgggaatatt ctagcgctcc gtgctttatc aatgatgtaa ttaatttttt cttctacagt 360 taaattttct atttcttcag gtgtgactag attatcttga ccaaacatac cgccaaaaac 420 tctggagaga acaccaacta aataaacgtc atcaatgggt ttttgtttat ccagcagaat 480 cggtacgtaa gaatctaata ttgctagtaa agatacttct tgtccttgtc tatgtaactg 540 ctgtgctact tcataagcta cgactccacc aaatgaccac cccccgacac gataaggccc

64 ttggggttga aattctctaa tagttttgac gtagagacta gccatatctt caactcgcgt 660 caagggtgct tcatctccat aaaatccttg agcttgtaag ccataaaatg gttggtcagt 720 tcctatatat tgtgcgagtt taaaatagca taaaacatga ccaccagcag gatgtataca 780 aaagaaaggc tgctgcttac cttgtggttg aattggaact aggggtgaat tatggatttg 840 gttgtttgct tgaataacct tggctaaatc tgcaattact ggatttgtta aaagtgttgc 900 taaggatatc tctttagcaa ataactcttc aatttgagaa attaaatgta gagctttgag 960 ggaattacca ccaatagcga aaaagttttc tgtcacacct actttaggta aatgcagaat 1020 attcgaccag atttgtacta atttttcttc aacttcattc cgaggcgcta cataggaatt 1080 atgttcacta taattaaata aatcaggctt aggtaatgcc ttacggtcta ctttaccact 1140 gggagttaaa ggaagatgct ccagcatcac aaaagcggct ggaatcataa aatcaggtag 1200 ccttgctttt aggaaatcac gcagattatc aagctgaggt ttgatggagt tataggtaat 1260 ataagcgatg atttgttttt cttgagcgtt atcatcccgc gctatgacta cagcttctct 1320 gacttgtggg tgtgaagata aaacattttc aatctcgcca atttcaattc tataaccccg 1380 aatttttact tgataatctg ttctaccaag atattcaata tttccatcgg gtaaataacg 1440 agctaaatca cctgttttat aaagtcgctt aaactcagaa ttgggaaagg gattaataat 1500 aaatttttct ttggtcaatt cttctttatt caaataacca cgagcaaccc ctacaccacc 1560 aatataaatt tcaccagtga caccaatatt tactggttgt aaatcggcat caagaatata 1620 aatttgagta ttagcaatgg gacgaccaat aggtacactc tttaaattac tatcttttct 1680 acattgccaa aatgtgacat caattgctgc ttctgtcggg ccatagaggt tatgtaattc 1740 acattgcaaa tgctggaaaa atctattttg taaatctata gataaagctt caccgctaca 1800 aataactctt tttagagagc tgcatttgct tacatggcga ttttgtaaaa acacttgcag 1860 cattgagggg acaaaatgca acgtagtgat ttgttcttga gtaattaaat cgatgaggta 1920 agcactatct ttatgtccgc ctggtttggc tattaccaaa cgtgcgccag ttaataaagt 1980 ccaaaagaac tcccaaacgg aaacatcaaa actaaagggg gttttttgta aaatgctatc 2040 tgtggaatcg atttgataag cttcctgcat ccacaataag cgattacaga tacctttgtg 2100 ggtgttcatt gcaccttttg gtttaccagt ggaaccagag gtgtaaatta cataagcaag 2160 attatccgtt tttatattac ttttgggatt ggtattagct tgtgtggaaa ttttctccca 2220 ttccctatct acacagatag tttgtgcttg atggtgggga atttgattga gtaatttttc 2280 ttgagttagt agtaccttca cctgagaatc ttctagcata taagctatgc gttcttgagg 2340 atattcaggg tcaataggaa cataagcacc cccagctttg aggattccta aaagacagat 2400 aaccatttct aaggaacgtt ctaaacaaac gcctaccagg gtttctggct ggactcctaa

65 tgtttgtaaa taatgtccta gctggtttgc tttatgattt agttcttgat aagttagttg 2520 ttgcttgtca aaggtgacag cgatcgcctc aggtgttcgt tctacttgag ctacaattag 2580 ttcatgtaaa ctctgggaaa gatcataatc tctgtgggtc gcgttccact ctacaagtaa 2640 cttacgaata ttaaaatcta tagtctgcat atcttctaac tttgctcaat aataaaaaat 2700 ttctcacgca gagacgcaga gaaaacacac tccgcgtccc tctctcttga aaagtttcct 2760 acggagggaa accctcctcc agaacttttc gctgcgctaa cctcagcgtc cctctgcgtt 2820 taaaaactaa tctcccccca attccaccaa cttcccaata ttgaaatcta tccgcgtcca 2880 acctttaaga cgacgcaaat tattcaataa cagtagggga atttgccaat gatgtaccat 2940 caaaaacggt aaggggtcat ctggctgata aatcgcatca gtcccgcgcc aaatattccc 3000 cagccatctt tgcaactggg tgaaagaacg gataccagtt aaacgccaaa cttcgtgata 3060 agtccaatag gtaggcttgc ttgtcgttag tggttgtatg gtttcagtcg tcggtgcttg 3120 actcaagtac gcttctgcta cctgggggtg gtcgtaaaat gtggtaattg ctgaatgtgt 3180 gcgggggtta cactcgatgg cgtaaactgt tccgtcttcg gcttggataa agtcaaagga 3240 aatctgtcct gtcagtttca gttccttgac aaaatgctgt acccattcgg taatttgcgg 3300 gttatttaca ttctcataat taacttggaa ggctgaagat tcgcaacagc aatgcagtct 3360 gagttcccca ttccgaacgg tgctatgggt gcagaattcc ttaccgggga taaattcctg 3420 cataatccac ggtttttcgg gagtaattgg caaacttctg acgaatgctg ctgtttcctc 3480 tggagtagca caggggagtt tggttaagtc caaccgccgc actgagtcgt agggaatgct 3540 tttgaggatg tatttacgtg tctctccaga aaaatcgaag ttgatgactt gttctggtga 3600 ggtaatttta aaggatttgg gtactgataa accaagcgat cgcgcttttt gtgtcaacgc 3660 aaatttatca tccaacattt gggtaatatc tgcgtcaaag tgaaacactt cgcaataatg 3720 ggataactct ggtttggcta atgagtcgta gtagctaccc actggactgg tgacgggaat 3780 ataaacatcg atgttttctt gtttgacgat atctaccaaa gcctgaatgt aagcttgggg 3840 attgtcctgg ggtgcgggga ctgtgtaaaa cttatccact gcttgggaaa aacgatgacc 3900 agtcaaccag tatttatggg tttccaccaa gacaactcta tgtccagccg cgtggaatga 3960 ccttgctagt tgtaaagctt tggtcatctt accgccactg ataagaatgg tttgggggtt 4020 tgctgctttg accttttgcg gtcggaagac taacaaggat ataaaaacaa tggtggcatt 4080 aatgggcaat gctagtaata acaaagccaa agtgcagata ttttggataa ttgcggctat 4140 tttcgtctgg gaaggaagag acggtgtagc aggtgcggaa gaaaggggaa gggattgtgc

66 catagtcgat tggacaatta aggttgtatt ctgcggataa ttgttaaacc atctcgcaac 4260 ggcaacaaaa cctgttctac acgggggtct atagctactg tatgattaaa ttgcgcgatc 4320 gcttcaccat tgacgctacg ttcctctgct ggtagataaa cttccccttg taataaggtg 4380 ttatctacac aaataaagcc atctggtgct aacaaactgc tacctagcaa cttgtgaaaa 4440 taggctacat actctttttt atctgcgtcg ataaatacca agtcaaaaga ctccccagct 4500 tctgctaact tatcaagagt tgctaaggct gcatccaatt ccacacgaat ctttccaccg 4560 tggggagatt gttgaaaggc tttctgtcca atttccgccg cgtaagggtc aacttcacaa 4620 gccacaagca gtccatcctc tggtaatgct tccgccatcg ccagcgccga ataaccggta 4680 aacatcccaa tttctaagac ttttttagct ttggtcatgt gaacaaacat ctttaaggtt 4740 tgtccttcga tatgaccaga aagcatctct tgttctagag gacggacggt tgtacctccg 4800 tggaagtgtt ctccccaggc ttcggtggct gtggtttttg ccaatgcagc gagttcagga 4860 gattctggag tggtgcattc ttccaaataa gggtctatac ctgcggctaa acgccaagcc 4920 tgatggatgt ttgctatcaa ttccccaggt aaatctggat gttgcttaac ctcttggact 4980 atggcttcta actgcttggt taaaattccc aatggtgtaa caggtctagc tgttggttgg 5040 acaatcacat ttgtcaagtc gcttcgctcc aattcaaaat tcaaaattca aaattcaaaa 5100 ttaaagacaa ttagtgtccg attatttgcg tagccttctc tttccctacg ggacgctccg 5160 cgaacagaaa tgctaccgcg ctcgcgcagt gtatccgtgg agtattttgc attttgaatt 5220 caaaaaagtc attatttaac actcccgatt aattcttttt gataaacggg atacacatcc 5280 acaccttcac caccacgggg ataactggta caaagttctt tgtggtcagc taatgcggct 5340 gctaattctt ctcttgtcag gtcattgacg aagacacaat caccaatggg ttttggcata 5400 gcagctctta acaaaccatc acgagttaat gtgatagatt cagtaccacg ccacaaaata 5460 tctatatcca acatgggatg gtcgagggat agaccaacgc gactcattaa tcctaaaata 5520 cgatcgcgtt ctgcaattgt aatatatcct ctacgggcgg cgatcgttgc cgagaaagcc 5580 atatctacat taacggcgtg tccgtggaac atgggtagac gaggcgcaag ttccaaggtg 5640 ggactccaag tgtgaccgta agcaatcacc ctatctaggt ctaactcatg caggttggga 5700 acttccaatt ccaacatctt atggatagct ttgtaagtca aacgatgggc tatttcttta 5760 atctctggag ttgcatctat attgccaaaa tgagtacgta gtaattcttc gccgtacttc 5820 tccaacaatt caaaaacttc ttgatgcgct actacagcga tttttaccaa ttccgccatc 5880 ccgttacgta cttggtctgt agggagagta cgcaacaagg agaaatctaa aaatactttg

67 cgagaagcat gataagcacc caaacggttt ttcagtttgc gatgattaac tgctacctta 6000 attgctacac tggcatcaat taatccaatc aatgtagtag gaatgcggat gtaattgctg 6060 ctgcgacgat atgtagaaca agcaaagccg acaacatctg taattaaacc gccacccacg 6120 actaatactg gttctttgcg gactaatttg aaatctgcaa agacatctat aactctctcg 6180 aaagtttgaa tagtcttatc tggttcagta atggtaatag gaaatagcct cagttctata 6240 ccataatact ggaaatatgc ctgaatttga ttaccataca accgactgac gttagcatct 6300 acaatcgcca agcatcgtcc aaaaccttga tatacatctg ctagtgcaga attctggatt 6360 tcaaaaatac catctacata caccaaatca tactcaatct tttcgtaacc ttctacatga 6420 aaagatgttt ccttagcttc aaactttgct tggacgatac tcatagctc 6469 <210> 15 <211> <212> DNA <213> Artificial Sequence <220><223> synthetic vector sequence <220><221> misc_feature <222> (10)..(10) <223> n is a, c, g, or t <220><221> misc_feature <222> (3343)..(3343) <223> n is a, c, g, or t <220><221> misc_feature <222> (3345)..(3345) <223> n is a, c, g, or t <220><221> misc_feature <222> (3347)..(3347) <223> n is a, c, g, or t <220><221> misc_feature <222> (9883)..(9883) <223> n is a, c, g, or t <400> 15 actbactsan tartmasmdm ccgctcattt ttggggtcca gctggttcag ctggtcagta 60 tggctgaaag ccatggtctt aaaaagcagt tcggcgattt ttgctgatct gctttttggg 120 ggttgaaacc gtcgtttttt cgacggtttc ttcttatctt gatactatta gaaacaacgt

68 cattttaaaa aaccgggata aacccttgac acaactgggc ttaggcgtat tatgagttta 240 taaaatgaat aaagaaaaaa cccacgtgag aattcctagt ttggcgaccc ggaacacgtg 300 agttaatctt gaatattcgt atttactaga catagtttaa agcttgagtt agcaagcgtc 360 aagcccttgg ctttagtaaa tacataaaag attagctctt ctcacgtggc tgaatgaggg 420 gagcttttta gtttggctga tagaaaagtt ttagttgatc gatcgcagtc gggcaaagta 480 cgaccatggc gagaacataa gttagaaaat ttacagtatg gtgattattt acaaatgttg 540 cactacaaga aagcccatcg agttaaagag tgtggtgaag tattacgttt tgtggaagat 600 aaaaatggtc acaaaaaact ggctcagact tggttttgcc attcccgttt gtgtccgtta 660 tgtaattggc ggcggtcaat gaaacaatct aaccagttaa ctcaaatttt gacagaagca 720 gttaaacagc gaaaaacggg tcggttcttg tttttaacat tgacggtaga gaatactaca 780 ggggatttgt tgaagagtga attacggcag atgggacgag ccattgcaaa gatctttcag 840 tataaaaaag tggctaaaaa tttgttgggc tatgtacgtt caactgaggt taccattaat 900 cacgaagcgg atcagccgat gtatcaccac catatgcatg ttttgctttt tatgaaatct 960 agttatttta caggaactga taattatatt tcacaaacag aatggactag atattggcaa 1020 cgagcgatga aattagctta tgtgccggtt gtgaatgttg aagcggttaa accgaatgtg 1080 aaacgccaga aaaattcctt actggctagt gcccaagaaa cggctaagta tcaggtgaag 1140 tccaaagata ttttaactaa taatcaagaa caagatttac aagtaattga tgatttggaa 1200 caagctttgg ctggttcccg gcaaattagc tatgggggtt tgttaaaaga aattcgtaag 1260 caattgcaac tagaagatgt tgaaaatggt gatttaatta atacggatag tgatgatcaa 1320 aaagttgacc aagtggtacg cgagattgtt gctaagtggg actatcagcg aaaaaattac 1380 tttatttgaa tgagtgctat attatatata aagacaggaa atcatttgtc tagcgggggg 1440 aactctttta tgatttatgc tactgctgtt aaatttgaag atgaaaattc tgatagaaca 1500 cctaaagcga ttgattctat ttatttagat tctacttcgg atgaaacttg gcattttgga 1560 gagggagaaa acactactcc tattaagggt tggtatgata aacatgatgt ttatcgttgg 1620 ttatttttga attttgataa aggccttgtg atgaaggttg ttactggtga aaaaccggat 1680 ataaagcctg ttggtaaaga taaagatgac ccggatggat atgttagatc tgaaaagaat 1740 ggtattgttg ttgataatct tgaaatgctt ccagattcgc cttctccttt gtgatattaa 1800 agaatggaga acgtttattt tgattttgaa tttgtttttt attaataatc attgggagcg 1860 aaagcgacct ttgattattt ttttgccaac ggcaaaaatc gcctcgcaga gcccaaactt

69 tacaaggtaa agtatattgg gctatacctt gcatggaggt ttgccgaatt ctgtgctatg 1980 ctctaaccaa atttagctgt ttggaaatgg agtggtgaaa tgagttattt agtggctaat 2040 atgcagaaat taaaagctga taatttagtt ggcttgggta atcatgatca acgccgaacg 2100 caacatcaca aaaatactga tattgacgtt gaccgttctg gcttaaatta tgatttagtt 2160 gctggtcgga ctaaccattt caaaacggat attgcggctt atattaacga gcataaaacc 2220 agtcagcgag cggtcagaaa agatgccgtt ttagtcaatg aatggattat ttcgagcgat 2280 agcaatttct ttgctaattt aacggcggct gatacgcgca aatattttga aacagctaaa 2340 gcttactttg ctgaaaaatt tggtgaagaa aatattcgct atgcaattgt tcaccttgat 2400 gagagtacgc cacatatgca tatgggaatt gtgccctttg atgatgaata taagttgtct 2460 gctaaacggg tgtttaatcg tgcggctttg caaaacgttc aagatcaatt gccgacttat 2520 ttgcaacagc atggttttaa tattcaacgt ggggttcaag aatcggaacg caaaagttta 2580 acggtgccag aatataaagc tatgcgggaa gatttgaaaa aggcgacgct tcaaaaacaa 2640 gaaatacaag ctgaacttga agatgccaga aaacgccttg ctgaacttaa acctcgtgat 2700 cagcaggaaa ttgagagcaa acctactttt ttaagcaagg ataaagtggt tgttagaaaa 2760 agtgatcttc atgacttaga atctcgagca gctgtcagtg atatttataa tcaacaacag 2820 aaccgtttaa aacttgataa tcaaagccta aattatcaac tgcttgaagt taaagacaat 2880 aattatgagt taagcaagaa aaatgagaag ctccaaaaat tagtggatac gttacaagga 2940 attgttcgga gcgttgaccg gttcttacag cgcaaattag gtgttggctt accaagtgag 3000 tggctagaac gagctggact aaaagaaccg tctaaaaacg cccctcagag gccgcaggaa 3060 cgttcggagg gacagcatga tgaattagat ggtccaagtc tttgaatttg tcctatggct 3120 ttaaattacc cgctgatgag cattgaagct ggttaatggc cgtcagtcaa cggtaaatcg 3180 aattaaaggg acttactgct ttagcagtta gtcccttttt gaggctttaa ggagttgact 3240 gactcactag accaagacac ttttgcgcat gcaaagaaaa gcacacctgc tttttttgcc 3300 tgcctcacgg cgagtgcggg gtgagtttga gcgggagctc shnrnrnwth rmtragatct 3360 agcgctatag ttgttgacag aatggacata ctatgatata ttttgctata gcgatgaatt 3420 attttccaga caatcttgta aacgctgtgc taaaacctgt acatggggtt ctagaacaaa 3480 cgaataatgg tttccaggga catcaataat cttaatttct tgagccgcca ttacagaaaa 3540 taattctacc caaactaagg tcgggtcagg agccataata tgtttttccc tggctcgaaa 3600 tacagtgact tttcctggat atggttgtct tatataggaa taagttgctt ttaaagttcc

70 caccaaaaca tcaagaatac ggcgattatt ttgacgttct acaccaggcg ggaatattct 3720 agcgctccgt gctttatcaa tgatgtaatt aattttttct tctacagtta aattttctat 3780 ttcttcaggt gtgactagat tatcttgacc aaacataccg ccaaaaactc tggagagaac 3840 accaactaaa taaacgtcat caatgggttt ttgtttatcc agcagaatcg gtacgtaaga 3900 atctaatatt gctagtaaag atacttcttg tccttgtcta tgtaactgct gtgctacttc 3960 ataagctacg actccaccaa atgaccaccc cccgacacga taaggccctt ggggttgaaa 4020 ttctctaata gttttgacgt agagactagc catatcttca actcgcgtca agggtgcttc 4080 atctccataa aatccttgag cttgtaagcc ataaaatggt tggtcagttc ctatatattg 4140 tgcgagttta aaatagcata aaacatgacc accagcagga tgtatacaaa agaaaggctg 4200 ctgcttacct tgtggttgaa ttggaactag gggtgaatta tggatttggt tgtttgcttg 4260 aataaccttg gctaaatctg caattactgg atttgttaaa agtgttgcta aggatatctc 4320 tttagcaaat aactcttcaa tttgagaaat taaatgtaga gctttgaggg aattaccacc 4380 aatagcgaaa aagttttctg tcacacctac tttaggtaaa tgcagaatat tcgaccagat 4440 ttgtactaat ttttcttcaa cttcattccg aggcgctaca taggaattat gttcactata 4500 attaaataaa tcaggcttag gtaatgcctt acggtctact ttaccactgg gagttaaagg 4560 aagatgctcc agcatcacaa aagcggctgg aatcataaaa tcaggtagcc ttgcttttag 4620 gaaatcacgc agattatcaa gctgaggttt gatggagtta taggtaatat aagcgatgat 4680 ttgtttttct tgagcgttat catcccgcgc tatgactaca gcttctctga cttgtgggtg 4740 tgaagataaa acattttcaa tctcgccaat ttcaattcta taaccccgaa tttttacttg 4800 ataatctgtt ctaccaagat attcaatatt tccatcgggt aaataacgag ctaaatcacc 4860 tgttttataa agtcgcttaa actcagaatt gggaaaggga ttaataataa atttttcttt 4920 ggtcaattct tctttattca aataaccacg agcaacccct acaccaccaa tataaatttc 4980 accagtgaca ccaatattta ctggttgtaa atcggcatca agaatataaa tttgagtatt 5040 agcaatggga cgaccaatag gtacactctt taaattacta tcttttctac attgccaaaa 5100 tgtgacatca attgctgctt ctgtcgggcc atagaggtta tgtaattcac attgcaaatg 5160 ctggaaaaat ctattttgta aatctataga taaagcttca ccgctacaaa taactctttt 5220 tagagagctg catttgctta catggcgatt ttgtaaaaac acttgcagca ttgaggggac 5280 aaaatgcaac gtagtgattt gttcttgagt aattaaatcg atgaggtaag cactatcttt 5340 atgtccgcct ggtttggcta ttaccaaacg tgcgccagtt aataaagtcc aaaagaactc 5400 ccaaacggaa acatcaaaac taaagggggt tttttgtaaa atgctatctg tggaatcgat 5460 ttgataagct tcctgcatcc acaataagcg attacagata cctttgtggg tgttcattgc

71 accttttggt ttaccagtgg aaccagaggt gtaaattaca taagcaagat tatccgtttt 5580 tatattactt ttgggattgg tattagcttg tgtggaaatt ttctcccatt ccctatctac 5640 acagatagtt tgtgcttgat ggtggggaat ttgattgagt aatttttctt gagttagtag 5700 taccttcacc tgagaatctt ctagcatata agctatgcgt tcttgaggat attcagggtc 5760 aataggaaca taagcacccc cagctttgag gattcctaaa agacagataa ccatttctaa 5820 ggaacgttct aaacaaacgc ctaccagggt ttctggctgg actcctaatg tttgtaaata 5880 atgtcctagc tggtttgctt tatgatttag ttcttgataa gttagttgtt gcttgtcaaa 5940 ggtgacagcg atcgcctcag gtgttcgttc tacttgagct acaattagtt catgtaaact 6000 ctgggaaaga tcataatctc tgtgggtcgc gttccactct acaagtaact tacgaatatt 6060 aaaatctata gtctgcatat cttctaactt tgctcaataa taaaaaattt ctcacgcaga 6120 gacgcagaga aaacacactc cgcgtccctc tctcttgaaa agtttcctac ggagggaaac 6180 cctcctccag aacttttcgc tgcgctaacc tcagcgtccc tctgcgttta aaaactaatc 6240 tccccccaat tccaccaact tcccaatatt gaaatctatc cgcgtccaac ctttaagacg 6300 acgcaaatta ttcaataaca gtaggggaat ttgccaatga tgtaccatca aaaacggtaa 6360 ggggtcatct ggctgataaa tcgcatcagt cccgcgccaa atattcccca gccatctttg 6420 caactgggtg aaagaacgga taccagttaa acgccaaact tcgtgataag tccaataggt 6480 aggcttgctt gtcgttagtg gttgtatggt ttcagtcgtc ggtgcttgac tcaagtacgc 6540 ttctgctacc tgggggtggt cgtaaaatgt ggtaattgct gaatgtgtgc gggggttaca 6600 ctcgatggcg taaactgttc cgtcttcggc ttggataaag tcaaaggaaa tctgtcctgt 6660 cagtttcagt tccttgacaa aatgctgtac ccattcggta atttgcgggt tatttacatt 6720 ctcataatta acttggaagg ctgaagattc gcaacagcaa tgcagtctga gttccccatt 6780 ccgaacggtg ctatgggtgc agaattcctt accggggata aattcctgca taatccacgg 6840 tttttcggga gtaattggca aacttctgac gaatgctgct gtttcctctg gagtagcaca 6900 ggggagtttg gttaagtcca accgccgcac tgagtcgtag ggaatgcttt tgaggatgta 6960 tttacgtgtc tctccagaaa aatcgaagtt gatgacttgt tctggtgagg taattttaaa 7020 ggatttgggt actgataaac caagcgatcg cgctttttgt gtcaacgcaa atttatcatc 7080 caacatttgg gtaatatctg cgtcaaagtg aaacacttcg caataatggg ataactctgg 7140 tttggctaat gagtcgtagt agctacccac tggactggtg acgggaatat aaacatcgat 7200 gttttcttgt ttgacgatat ctaccaaagc ctgaatgtaa gcttggggat tgtcctgggg 7260 tgcggggact gtgtaaaact tatccactgc ttgggaaaaa cgatgaccag tcaaccagta 7320 tttatgggtt tccaccaaga caactctatg tccagccgcg tggaatgacc ttgctagttg

72 taaagctttg gtcatcttac cgccactgat aagaatggtt tgggggtttg ctgctttgac 7440 cttttgcggt cggaagacta acaaggatat aaaaacaatg gtggcattaa tgggcaatgc 7500 tagtaataac aaagccaaag tgcagatatt ttggataatt gcggctattt tcgtctggga 7560 aggaagagac ggtgtagcag gtgcggaaga aaggggaagg gattgtgcca tagtcgattg 7620 gacaattaag gttgtattct gcggataatt gttaaaccat ctcgcaacgg caacaaaacc 7680 tgttctacac gggggtctat agctactgta tgattaaatt gcgcgatcgc ttcaccattg 7740 acgctacgtt cctctgctgg tagataaact tccccttgta ataaggtgtt atctacacaa 7800 ataaagccat ctggtgctaa caaactgcta cctagcaact tgtgaaaata ggctacatac 7860 tcttttttat ctgcgtcgat aaataccaag tcaaaagact ccccagcttc tgctaactta 7920 tcaagagttg ctaaggctgc atccaattcc acacgaatct ttccaccgtg gggagattgt 7980 tgaaaggctt tctgtccaat ttccgccgcg taagggtcaa cttcacaagc cacaagcagt 8040 ccatcctctg gtaatgcttc cgccatcgcc agcgccgaat aaccggtaaa catcccaatt 8100 tctaagactt ttttagcttt ggtcatgtga acaaacatct ttaaggtttg tccttcgata 8160 tgaccagaaa gcatctcttg ttctagagga cggacggttg tacctccgtg gaagtgttct 8220 ccccaggctt cggtggctgt ggtttttgcc aatgcagcga gttcaggaga ttctggagtg 8280 gtgcattctt ccaaataagg gtctatacct gcggctaaac gccaagcctg atggatgttt 8340 gctatcaatt ccccaggtaa atctggatgt tgcttaacct cttggactat ggcttctaac 8400 tgcttggtta aaattcccaa tggtgtaaca ggtctagctg ttggttggac aatcacattt 8460 gtcaagtcgc ttcgctccaa ttcaaaattc aaaattcaaa attcaaaatt aaagacaatt 8520 agtgtccgat tatttgcgta gccttctctt tccctacggg acgctccgcg aacagaaatg 8580 ctaccgcgct cgcgcagtgt atccgtggag tattttgcat tttgaattca aaaaagtcat 8640 tatttaacac tcccgattaa ttctttttga taaacgggat acacatccac accttcacca 8700 ccacggggat aactggtaca aagttctttg tggtcagcta atgcggctgc taattcttct 8760 cttgtcaggt cattgacgaa gacacaatca ccaatgggtt ttggcatagc agctcttaac 8820 aaaccatcac gagttaatgt gatagattca gtaccacgcc acaaaatatc tatatccaac 8880 atgggatggt cgagggatag accaacgcga ctcattaatc ctaaaatacg atcgcgttct 8940 gcaattgtaa tatatcctct acgggcggcg atcgttgccg agaaagccat atctacatta 9000 acggcgtgtc cgtggaacat gggtagacga ggcgcaagtt ccaaggtggg actccaagtg 9060 tgaccgtaag caatcaccct atctaggtct aactcatgca ggttgggaac ttccaattcc

73 aacatcttat ggatagcttt gtaagtcaaa cgatgggcta tttctttaat ctctggagtt 9180 gcatctatat tgccaaaatg agtacgtagt aattcttcgc cgtacttctc caacaattca 9240 aaaacttctt gatgcgctac tacagcgatt tttaccaatt ccgccatccc gttacgtact 9300 tggtctgtag ggagagtacg caacaaggag aaatctaaaa atactttgcg agaagcatga 9360 taagcaccca aacggttttt cagtttgcga tgattaactg ctaccttaat tgctacactg 9420 gcatcaatta atccaatcaa tgtagtagga atgcggatgt aattgctgct gcgacgatat 9480 gtagaacaag caaagccgac aacatctgta attaaaccgc cacccacgac taatactggt 9540 tctttgcgga ctaatttgaa atctgcaaag acatctataa ctctctcgaa agtttgaata 9600 gtcttatctg gttcagtaat ggtaatagga aatagcctca gttctatacc ataatactgg 9660 aaatatgcct gaatttgatt accatacaac cgactgacgt tagcatctac aatcgccaag 9720 catcgtccaa aaccttgata tacatctgct agtgcagaat tctggatttc aaaaatacca 9780 tctacataca ccaaatcata ctcaatcttt tcgtaacctt ctacatgaaa agatgtttcc 9840 ttagcttcaa actttgcttg gacgatactc atgactbact santartmwc sagatctagc 9900 gctatagttg ttgacagaat ggacatacta tgatatattt tgctatagcg atggttgtaa 9960 ttggggagca ccgccacaca caagtcacag tcgacttgca ggcaattaag acaaatatta gtaatgaaat ggcgcaaaag gatgagttga ccgagttatg ggcagtcgtt aaagcgaatg gttatggaca tggaattatc caagttgctc aggccgccaa agaagccggg gcgaccggct tttgtgttgc aatcctggat gaggccttag cgttgcgggc cgctggcttt gcggaaccca tcctagtact tggaattacg gaaccggaat acgccccact ggtagctgaa aaggatattt cactagctgt tggaacgcaa gattggctga ctacggccgc agcaatttta gcggctaatc aagtgacgac accacttcac gttcatcttg cattagatac gggtatggga cgaatcgggt ttcagacgcc cgaagaattg gcaacggcgg ttacgacttt gcgtcaaccg cagtcaccat ttgactttga agggattttt acgcattttg caacggctga ccaggcagat gatacgtatt ttactcatca attaaataat tggaaacact tgattgcagt ggtggatgag ctaccacgct atgtccacgt gtccaattcg gccaccagtc tctggcatca agcttgcaat ggcaacatgg tgcgctttgg ggttgcactc tatggtctaa atccttctgg tcgcgaactc agcgcaccat accccttgca acccgcgttg tcgctaacgg cacgcttgac gtttgttaaa cgcttggctc ggggcaaatc ggtcagctat ggtgccacgt atacggccgc acaggatgaa tggattggca cggtgccgat tgggtatgcg gacggctatg aacgccgatt acaaggcttc catgtacttg ttgatggtga gttttgcgaa atcgtcggac gggtctgcat ggaccagctg atggttcgtc tgccacatga agtaccggtt ggagctaagg taactttggt tggcacggac ggtgctcgta

74 ccatttcgtt gcaagatatt gctgactatt gtgggacaat tcattatgag attgcttgtg ggttagcacc acgagtgccg agagtttata tagattaa <210> 16 <211> 31 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220><223> synthetic primer <400> 16 gagatcccat atgagtatcg tccaagcaaa g 31 <210> 17 <211> 37 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220><223> synthetic primer <400> 17 gtacctcgag tcatgaatta ttttccagac aatcttg 37 <210> 18 <211> 982 <212> DNA <213> Streptomyces glaucescens <400> 18 ggtccccacc ccgcgggccg ccgcccgggc ggcgtcgacg aactccaggg cgcgcggctg 60 ctgccgttcc ccgccaactg acccgccccg cgctctcttg gagcactcgc acatgaccgt 120 ccggaagaac caggccaccc tgaccgccga cgagaagcgg cgcttcgtcg ccgccgtcct 180 ggaactcaag cgcagcggcc gctacgacga gttcgtcacc acccacaacg ccttcatcat 240 cggcgacacc gacgcgggtg agcgcaccgg ccaccgctcg ccctcgttcc tgccctggca 300 ccgcagatac ctgctggagt tcgagcgggc cctgcagagc gtggacgcct cggtcgccct 360 cccctactgg gactggtccg ccgaccgcac cgcacgggcc tcgctgtggg cgcccgactt 420 cctcggcggc accgggcgca gcctggacgg ccgggtcatg gacggaccgt tcgccgcctc 480 ggccggcaac tggccgatca acgtgcgcgt ggacgggcgc gcgtacctgc ggcggtcgct 540 cggcaccgcg gtgcgggaac tgccgacgcg ggcggaggtg gagtcggtgc tcggcatggc 600 cacgtacgac acggccccct ggaacagcgc ctcggacggc ttccgcaacc acctggaggg

75 ctggcgcggc gtcaacctgc acaaccgcgt ccacgtctgg gtgggcgggc agatggccac 720 cgggatgtcg cccaacgacc cggtgttctg gctgcacaac gcctacgtcg acaagctgtg 780 ggccgagtgg cagcgccgcc acccgggatc cggctacctc cccgccgccg ggacgcccga 840 cgtggtggac ctgaacgaca ggatgaagcc ctggaacgac acctccccgg ccgacctttt 900 ggaccacacc gcccactaca ccttcgacac cgactgaccc ggccggccgt cggcaggcat 960 cctcccgcag gtcaggggta cc