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1 사상체질의학회지 010;(3):13140 J of Sasang Constitutional Medicine Vol., No. 3, 010: 少陰人藿香正氣散의위해물질에대한안전성연구 서창섭 김정훈 황대선 신현규 Abstract 한국한의학연구원한약 EBM 연구센터 Safety on Hazardous Substances of Soeumin Kwakhyangjeonggisan ChangSeob Seo, JungHoon Kim, DaeSun Huang, HyeunKyoo Shin Herbal Medicine EBM Research Center, Korea Institute of Oriental Medicine, Daejeon, , Korea 1. Objective To compare the contents and transfer rate of hazardous substances in crude, washing solution, crude after washing, decoction and remnant after boiling.. Methods The heavy metal contents of each step were measured by inductively coupled plasma mass spectrometer (ICPMS) and mercury analyzer (MA). In order to analyze pesticides in each sample we used simultaneous multiresidue analysis of pesticides by GC/ECD, which was followed by GC/MSD analysis to confirm the identity of the detected pesticide in each sample. In addition, the contents of sulfur dioxide (SO) were performed by MonierWilliams distillation method. 3. Results 1) Contents (mg/kg) of heavy metals in decoction of all herbal medicine prescriptions were not detected. ) Transfer rates (%) of heavy metals from crude to remnant were As (83.3%), Cd (10%), Pb (18.6%) and Hg (10%). 3) Contents (mg/kg) of residual pesticides were not detected. 4) Transfer rate (%) of sulfur dioxide (SO) from crude to remnant was 44.%. 4. Conclusion Our results showed that boiled herbal medicine prescriptions which we take is safe from the hazardous substances. Key Words : Herbal medicine, Heavy metal, Pesticide, Sulfur dioxide, Soeumin, Kwakhyangjeonggisan (Huo Xiang Zheng Qi San) 1) Ⅰ. 緖論少陰人藿香正氣散은李濟馬의 東醫壽世 접수일 010 년 04 월 30 일 ; 심사일 010 년 05 월 07 일 ; 승인일 010 년 05 월 7 일 교신저자 : 신현규대전시유성구엑스포로 483 한국한의학연구원한약 EBM 연구센터 Tel : Fax : hkshin@kiom.re.kr * 본연구는한국한의학연구원에서지원하는 표준한방처방 EBM 구축사업 에의해수행되었다. 保元新定少陰人病應用要藥二十四方에수록되어있으며, 龔信의 古今醫鑑 에기재된藿香正氣散에서桔梗, 白芷, 白茯笭을빼고桂皮, 乾薑및益智仁을추가하여少陰人胃受熱裏熱證의太陽病大腸怕寒, 鬱狂初證, 少陰人胃受寒裏寒病의太陰病下利淸穀등의증상에응용되는처방이다. 1, 또한고등 3 은藿香正氣散의적응증으로少陰人이表病으로裏寒證이있는자가表熱證이倂發한경우 ( 大腸怕寒, 蓄血證, 心下痞證 )

2 서창섭외사상체질의학회지 010;(3): 에사용한다고하였다. 少陰人藿香正氣散은少陰人의表病과裏病에두루사용하며, 처방정신에따라李濟馬이후의四象醫家들에의하여太陰症吐瀉, 外感風寒, 四時不正之邪, 惡寒發熱, 下焦蓄血證, 內傷飮食, 頭痛, 嘔逆, 胸悶, 腹脹, 咳嗽, 嘔吐, 泄瀉, 癨亂, 癮疹, 中風初證등에광범위하게응용되어왔다. 4 이처방의구성은藿香一錢五分, 蘇葉一錢, 蒼朮, 白朮, 半夏, 陣皮, 靑皮, 大腹皮, 桂皮, 乾薑, 益智仁및灸甘草각각五分, 生薑三片, 大棗二枚의내용으로구성되어있다. 3 이러한少陰人藿香正氣散의구성한약재는그특성상토양과같은자연환경을기반으로자라기때문에주변환경오염에많은영향을받을수밖에없으며, 중금속등과같은위해물질에오염될가능성과국민들의섭취가능성이상대적으로높아지고있다 5. 따라서현재까지재배지및채취한약재, 6,7 유통한약재 8, 한방의료기관보관한약재 9,10 등에대한중금속, 잔류농약및잔류이산화황등과같은다양한위해물질모니터링연구가진행되어왔다. 그러나환자들은한약재를그대로복용하는것이아니라전탕이라는방법을통해복용하므로, 雙和湯 11, 감기약처방 1, 消化器系처방 13, 十全大補湯및十全大補湯구성처방 14, 다빈도처방 15, 補陽補陰구성처방 16 및太陰人처방 17 에대하여전탕전의약재와전탕후전탕액의위해물질분석에대한연구가진행되었다. 게다가이전탕과정을더세분하게나누어건조상태의약재와전탕액, 전탕후찌꺼기등 3개로구분하여중금속의변화를분석한연구 18,19 도보고되었다. 본연구자들은앞서발표한연구에서전탕전후에따른보다더정밀한위해물질의변화와분포를알아보기위하여少陰人藿香正氣散을선택하였다. 선택된처방에대하여분석단계를원료한약재, 세척액, 세척후건조된한약재, 전탕액및전탕후찌꺼기등 5개단계로나누어단계별중금속, 잔류농약및이산화황함유량과이행률을조사하였다. 이들연구를토대로전탕과정이위해물질함량에미치는영향뿐만아니라, 잔류분포를파악하여탕제복용방법이원료한약재의위해물질로부터안전하다고밝힐수있는근거를마련하고자연구하였다. Ⅱ. 材料및方法 1. 재료본실험에사용된少陰人藿香正氣散의구성은 東醫壽世保元 1 에준하여다음과같이준비하였다. 藿香 (Agastachis Herba, Yeongcheon, Korea), 蘇葉 (Perillae Herba, Geochang, Korea), 白朮 (Atractylodis Rhizoma alba, China), 陣皮 (Citri Unshius Pericarpium, Jeju, Korea), 靑皮 (Citri Immatri Pericarpium, Jeju, Korea), 乾薑 (Zingiberis Rhizoma Siccus, Yeongcheon, Korea), 生薑 (Zingiberis Rhizoma Crudus, Yeongcheon, Korea) 및大棗 (Zizyphi Fructus, Yeongcheon, Korea) 는 ( 주 ) 옴니허브 (Yeongcheon, Korea) 에서구입하였으며, 蒼朮 (Atractylodis Rhizoma, China), 半夏 (Pinelliae Tuber, China), 大腹皮 (Arecae pericarpilim, China), 桂皮 (Cinnamomi Cortex, Vietnam), 益智仁 (Alpiniae Fructus, China) 및灸甘草 (Glycyrrhizae Radix, China) 는 ( 주 )HMAX (Jecheon, Korea) 에서각각구입하여동국대학교한의과대학본초학교실로부터동정받았다. 이들약재의표본 (009KE30) 은한국한의학연구원한약EBM연구센터에보관하였다.. 시약및기기본실험에사용한시약은중금속분석시유해중금속측정에적합한등급으로불순물로분석대상물질을포함하지않는질산 (HNO3) 을사용하였고, 납, 카드뮴, 비소, 수은분석에사용한표준원액은 National Institute of Standards and Technology (NIST, USA) 의표준용액을사용하였다. 잔류이산화황시험에사용한염산 (HCl) 은 J.T.Baker 사 (USA), 에탄올 (Ethyl alcohol) 과과산화수소 (HO) 는 ( 주 ) 대정화금 (Daejeon, Korea) 에서각각구입하여사용하였다. 그외모든시약은분석용특급시약을사용하였다. 납, 카드뮴, 비소분석은 ICPMS Spectrometer (Thermo elemental, USA) 를사용하였고, 수은분석은 Mercury Analyzer (MA, Nippon Instrument Co, Japan) 를사용하였다. 잔류이산화황시험은 Ion Chromatography (US/690XE, Waters, USA) 를사용하였고, 잔류농약분석은 GC 7890A system (Agilent, USA) 과 MSQP 010

3 134 사상체질의학회지 010;(3):13140 少陰人藿香正氣散의위해물질에대한안전성연구 Table 1. Prescription of Soeumin Kwakhyangjeongisan. 韓藥名生藥名重量 (g) 藿香蘇葉白朮蒼朮半夏陣皮靑皮大腹皮桂皮乾薑益智仁灸甘草生薑大棗 Agastachis Herba Perillae Herba Atractylodis Rhizoma alba Atractylodis Rhizoma Pinelliae Tuber Citri Nobilis Pericarpium Citri Immatri Pericarpium Arecae pericarpilim Cinnamomi Cortex Zingiberis Rhizoma Siccus Alpiniae Fructus Glycyrrhizae Radix Zingiberis Rhizoma Crudus Zizyphi Fructus 合計 Table. Operating Conditions and Data Acquisition Parameters of ICPMS. Parameters Rf power (W) Sample Uptake Rate (rpm) Cooling Gas Flow Rate (L/min) Auxiliary Gas Flow Rate (L/min) Nebulizer Gas Flow Rate (L/min) Sampling Cone Skimmer Cone Nebulizer Spray Chamber Spray Chamber Temperature ( ) Dwell Time Number Of Sweeps Per Reading Sample Delay Time (s) Rinse Time (s) Operation Conditions Ni, 1.0 mm aperture diameter Ni, 0.7 mm aperture diameter Concentric nebulizer Cyclonic chamber (% HNO3) PLUS system (Shimazu, Japan) 을사용하였다. Microwave digestion system은 Q15 (Questron Technologies, Canada) 를사용하였다. 3. 실험방법 1) 분석시료少陰人藿香正氣散을 Table 1과같은분량으로하여단순건조상태의약제, 세척액, 세척후건조된약제, 전탕액및전탕후찌꺼기로구분하였다. 처방의전탕액은 Table 1의분량을약탕기에넣고시료의 10배에해당되는물을첨가하여 100 에서 10분간 전탕한액을시료로사용하였다. ) As, Cd, Pb 및 Hg 검량선작성 As, Pb, Cd의표준용액 (100 ug/l) 을 70% 질산과증류수를이용하여 BL, 1, 5, 10 ppb로조제한후검량선을작성하고공시험액으로보정하여유도결합플라즈마질량분석기 (ICPMS, Table ) 를사용하여분석하였다. Hg의표준용액 (1000 mg/l) 을 0.5 mol/l 질산시액을이용하여희석한후검량선을작성하였으며, 수은분석기 (MA) 를이용하여분석하였다.

4 서창섭외사상체질의학회지 010;(3): ) 중금속측정 (1) As, Cd 및 Pb 측정모든초자기구는 0% HNO3 solution에투척시킨후 3차증류수로세척한다음건조시킨것을사용하였다. 원재료, 세척후원재료및전탕후찌꺼기와같은건조된시료는각 0. g을정밀하게취하고, 세척액과전탕액은각각 g을정밀하게취한후질산 8 ml 을넣고극초단파시료전처리장치로 180 C 로하여 0분간가열하여완전히용해하였다. 용해한액에초순수증류수를가하여정확하게 5 ml로한후검액으로하였다. 질산 8 ml 를검액조제와같은방법으로조작하여공시험액으로하였다. 각각의검액을유도결합플라즈마질량분석기 (ICPMS) 를이용하여 Table 와같은방법으로 As, Cd 및 Pb 등과같은중금속을분석하였다. () Hg 측정 Hg 분석은藿香正氣散의각단계별시료약 100 mg 을정밀하게취한후가열기화금아말감법 (Combustion gold amalgamation method) 인수은분석기 (MA) 를이 용하여분석하였다. 4) 잔류농약측정少陰人藿香正氣散의건조된약재와전탕액시료에대하여각각약 5 g을정확하게달아물 40 ml 를넣고방치한다. 여기에아세톤 90 ml 를넣고균질기 (homogenizer) 로 5분간균질화한후진공펌프와가지달린삼각플라스크및부크너깔때기로감압여과한다. 이여액을 500 ml 분액깔때기에옮기고포화식염수 50 ml 와증류수 100 ml 를가한다. 이에디클로로메탄 70 ml를넣고흔들어섞은다음정치하여층을분리시킨다. 아래층 ( 디클로로메탄층 ) 은다른분액깔때기에모은다. 물층에다시디클로로메탄 70 ml를넣고흔들어섞은후정치하여층을분리시킨다음아래층을모은다. 디클로로메탄층은무수황산나트륨을통과시켜탈수하고감압농축기에넣어농축한다음헥산 4 ml 에녹인다. 그후미리후로리실카트리지 (6 ml, 1 g) 에헥산 6 ml 를넣고 분간멈춘다음유출시켜버리고, 이카트리지에 0% 아세톤함유헥산 Table 3. Operation Condition of GC/ECD Analysis. Instruments GCECD Column Carrier Gas Injector Temp. Detector Temp. Column Temp. Split Ratio Operation Conditions GC 17A system (Shimadzu) DB17 fusedsilica capillary (0.5 mm 30 m) N (4min) 8 /min 60 (5min) 10:1 Table 4. Operation Condition of GC/MSD Analysis. Instrument GCMS Column Carrier Gas Linear Velocity Interface Temp. Injector Temp. Oven Temp. Ionization Mode Scan Range Split Ratio Operation Conditions GCMSQP5050A system (Shimadzu) Rtx5 fusedsilica capillary (0.3 mm 30 m) He 44.4 cm s (min) 10 /min 80 (15min) Electron impact 70 ev m/z :1

5 136 사상체질의학회지 010;(3):13140 少陰人藿香正氣散의위해물질에대한안전성연구 Table 5. Operating Conditions and Data Acquisition Parameters of IC. Parameters Pump Flow Rate Injection Volume Run Time Detector Column Mobile Phase Operation Conditions Waters ml/min 50 ul 0 min Waters 43 conductivity detector Alltech 5107 anion 0.85 mm NaHCO3 / 0.9 mm NaCO3 6 ml 를위와같은방법으로유출하여버린다. 이어서추출액을카트리지상단에넣고 분간컬럼에머무르게한다음서서히유출액을받는다. 카트리지가용매에젖어있는상태에서헥산 디클로로메탄 아세톤 (50:48.5:1.5) 용액 5 ml 로유출하여유출액을모은다. 유출액은수욕상 (40 이하 ) 에서감압농축시켜용매를날려보낸다음 0% 아세톤함유헥산 ml에녹여시험용액으로하였다. 표준용액및검액을 GCECD 에각각주입하고얻어진크로마토그램상의각피크를표준용액의피크와비교하였고, GC/MSD 분석을통해머무름시간및질량스펙트럼으로각농약의성분을확인하였다 (Table 3, 4). 5) 잔류이산화황측정둥근바닥플라스크에少陰人藿香正氣散의각단계별시료 ( 건조시료 5.0 g, 액체시료 5 g) 을넣고초순수수 400 ml, 4N HCl 90 ml, 5% ethanol 100 ml 를함께넣는다. 냉각기에냉수를통과시키고가스주입관으로 N gas 를둥근바닥플라스크로 15분간유입시킨다. 이때수기에는 3% HO 30 ml 를넣고나서 1시간 45분간 100 에서가열한후수기를떼어내고수기안의 3% HO 를취하여검액으로하였다. 각각의검액을 Table 5와같은조건으로 Ion Chromatography 를이용하여잔류이산화황을분석하였다. Ⅲ. 結果 1. 중금속결과 1) 중금속표준액의검량선작성 少陰人藿香正氣散의중금속 (Pb, Cd, As 및 Hg) 의함량을분석하기위하여 Pb, Cd 및 As의표준용액을이용하여검량선을작성하였다. 검량선작성결과검량선작성결과 Pb는 y = x (R = 1.00), Cd는 y = x (R = 1.00), As는 y = x 4.65 (R = 1.00) 및 Hg는 y = 5x (R = 1.00) 과같은양호한직선성을나타내었다. ) 단계별중금속결과少陰人藿香正氣散에대하여원료한약재, 세척액, 세척후건조된약제, 전탕액및전탕후찌꺼기를대상으로중금속 (As, Cd, Pb 및 Hg) 을분석결과는 Table 6과같다. 즉, 원료한약재상태에서 As, Cd, Pb 및 Hg의함량은각각 0.4, 4, 0.3 및 1 mg/kg으로검출되었으나전탕액에서는모두검출되지않았다. 그리고전탕후찌꺼기에서는각각, 4, 0.4 및 1 mg/kg으로검출되어 83.3, 10, 18.6 및 10% 의이행률을보였다.. 단계별잔류농약결과 GC/ECD 와 GC/MSD 를이용하여 BHC (α, β, γ 및 δbhc), DDT (ρ,ρʹddd, ρ,ρʹdde, o,ρʹddt 및 ρ,ρʹ DDT), aldrin, endrin 및 dieldrin 등과같은잔류농약의함량을조사하였다. 이들의잔류농약의허용기준치와머무름시간은 Table 7과같다. 이에국내한의계에서처방빈도가높은少陽人처방인凉膈散火湯에대하여잔류농약함량을조사한결과 Table 8에서와같이모든단계에서잔류농약이검출되지않음을알수있었다.

6 서창섭외사상체질의학회지 010;(3): Table 6. Result of Heavy Metal Analysis and SO Residual Contents (mg/g) and Transfer Rate(%). Materials Crude WAshing Solution Crude After Washing Decoction Remnant * : Not Detected Content (mg/g) 0.4 * 0. Heavy metals As Cd Pb Hg Transfer Content Transfer Content Transfer Content rate (%) (mg/g) rate (%) (mg/g) rate (%) (mg/g) Transfer rate (%) SO residual Content (mg/g) Transfer rate (%) Table 7. Retention Time of Standards and Allowable Standard. Pesticide Std. R.T. (min) Allowable Standard (mg/kg) Pesticide Std. R.T. (min) Allowable Standard (mg/kg) αbhc 9.43 ρ,ρʹdde βbhc ρ,ρʹddd γbhc o,ρʹddt δbhc ρ,ρʹddt 1.97 Aldrin Dieldrin Endrin Table 8. Result of Residual Pesticides Analysis in Kwakhyangjeongisan. Materials α BHC β BHC γ BHC δ BHC o,ρʹ DDT Pesticides (mg/kg) ρ,ρʹ DDT ρ,ρʹ DDE ρ,ρʹ DDD Aldrin Dieldrin Endrin Crude Washing solution Crude after washing Decoction Remnant * * : Not Detected 3. 단계별이산화황결과少陰人藿香正氣散을대상으로각단계별이산화황의잔류량을측정한결과 Table 6과같았다. 건조상태의약재에서잔류이산화황의함량은 1.13 mg/kg 으로측정되었으며전탕후찌꺼기에는 0.50 mg/g 이검출되어 44.% 의이행률을나타냈다. Ⅳ. 考察少陰人藿香正氣散은 東醫壽世保元新定少陰人病應用要藥二十四方에수록되어있으며, 龔信의 古今醫鑑 에기재된藿香正氣散에서桔梗, 白芷, 白茯笭을제외하고桂皮, 乾薑및益智仁을추가하여李濟馬가만든처방 1 으로藿香, 蘇葉, 白朮, 蒼朮, 半夏, 陣皮, 靑皮, 大腹皮, 桂皮, 乾薑, 益智仁, 灸甘草, 生薑및大棗로

7 138 사상체질의학회지 010;(3):13140 少陰人藿香正氣散의위해물질에대한안전성연구 구성되어있다. 안 등은少陰人藿香正氣散이 histamine 및 IgE에의해매개되는제 I 형 allergy 및 T 임파구가관여하는제 VI 형 allergy 반응을억제하는항 allergy 작용이있는약물이라고보고하였으며, 조 0 등은은행잎추출약물을복용후발생한흉배부이하의전신丘疹性發疹과심한소양감을동반한藥疹에대하여少陰人藿香正氣散의완치증례보고를보고하였다. 또한서 1 등은알레르기성비염환자로부터분리동정된 Klebsiella pneumoniae 89 에대하여본처방이높은항균활성을보였다고보고하였으며, 윤 등은藿香正氣散과少陰人藿香正氣散의摘出臟器, 消化器系, 胃液分泌, 腸管輸送能, Castor oil 誘發泄瀉및體溫에대한作用등의효능에대한比較硏究를수행하여少陰人藿香正氣散에서正常體溫下降의抑制效果및小腸輸送能促進作用에대한效果가있는것으로보고하였다. 이에본연구의선행연구인감기약처방 1, 消化器系처방 13, 十全大補湯및구성처방 14, 다빈도처방 15, 補陽補陰구성처방 16 및太陰人四象處方 17 에이어少陰人藿香正氣散의단계별위해물질의함량을조사하였다. 선행연구에서는전탕전과후에대한위해물질비교를하여전탕후의위해물질함량이검출되지않거나미량검출되는결과를얻었다. 이에비해少陰人藿香正氣散은단계를단순건조상태의약재, 세척액, 세척후건조된약재, 전탕액및전탕후찌꺼기등과같이 5단계로나누어위해물질의검사를실시하였다. 그결과우리가복용하는탕제의중금속과잔류농약은검출되지않았다. 중금속의경우대부분찌꺼기로이행하였으며, 원료한약재에함유되어있는 As, Cd, Pb 및 Hg의전탕후찌꺼기로의이행률은 83.3, 10, 18.6 및 10% 로각각나타났다. 또한잔류이산화황은경우도복용하는전탕액에서는 7 mg/g 으로검출되어 6.% 의이행률을보인반면전탕후찌꺼기로에는 0.50 mg/g이검출되어 44.% 의이행률을나타냈다. 이상의실험결과로우리가복용하는少陰人藿香正氣散에서전탕액이중금속, 잔류농약및잔류이산화황과같은위해물질이전탕과정을거침으로써위해물질대부분이전탕후찌꺼기로이행함을보여주었다. 이는국민이복용하는전탕액이다양한위해물질로부터안전하다는결과를보여준다고 사료된다. Ⅴ. 結論 본연구는한방의료기관에서한약을복용하는환자들에게전탕된한약의안전성을확보하여, 안심하고복용할수있는지를알아보기위해少陰人에게주로처방되는少陰人藿香正氣散을대상으로원재료, 세척액, 세척후원재료, 전탕액및전탕후찌꺼기에대한각단계별중금속, 잔류농약및잔류이산화황함량을조사한결과다음과같은결론을얻었다. 1. 모든처방의세척액과전탕액에서는중금속이검출되지않았다.. 전탕후찌꺼기에서 As, Cd, Pb 및 Hg의함량은, 4, 0.4 및 1 mg/kg으로각각검출되어 83.3, 10, 18.6 및 10% 의이행률을보였다. 3. 잔류농약함량측정결과모든단계에서검출되지않았다. 4. 잔류이산화황은함량측정결과전탕액에서는 7 mg/g 으로검출되어 6.% 의이행률을보인반면전탕후찌꺼기에서는 0.50 mg/g으로검출되어 44.% 의이행률을나타내었다. Ⅵ. 感謝의글 본연구는한국한의학연구원에서지원하는 표준한방처방 EBM 구축사업 에의해수행되었으며, 이에감사드린다. Ⅶ. 參考文獻 1. Lee JM. Dongeuisusebowon. Seoul:Daeseong Munhwasa. 1998:37. (Korean). Ahn BK, Song JM. Antiallergy action of Soeumin Kwakhyangjeonggisan. J Sasang Constitut Med. 001; 13:7588. (Korean) 3. Koh BH, Koo DM, Kim KY, Kim DR, Kim IH, Kim JY, et al. SasangMedicine. Seoul:Jipmoondang. 004: 651, 678. (Korean)

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개최요강 55 2009. 5. ( ) ( ) < > 1. 1 2. 2. 2. 3 1) 3 2) 3 3) GC-MS 4. 5 1) 5 2) 5 3) ICP-OES 6 3. 7. 7 1) 7 2) 10. 13 1) 1g 13 2),,, 14 3), 15 4),, 15 4. 17 19 < > [ 1] 2 [ 2] ICP-OES 6 [ 3] 13 [ 4] 1g 13 [ 5]