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담 장
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1 한방비만학회지제 18 권제 1 호, 2018 J Korean Med Obes Res 2018;18(1): pissn , eissn JKOMOR Original Article 알코올로유도된흰쥐의간지방형성에황금추출물이미치는효과 김범회 동의대학교한의과대학한의학과, 동의대학교한의학연구소 The Effects of Scutellaria Radix Extract on the Alcohol-Induced Fatty Acid Synthesis of Liver in Rats Bum Hoi Kim Department of Anatomy, College of Korean Medicine and Research Institute of Oriental Medicine, Dong-Eui University Received: April 27, 2018 Revised: May 18, 2018 Accepted: May 23, 2018 Correspondence to: Bum Hoi Kim College of Korean Medicine, Dong-Eui University, Yangjeong-ro, Busanjin-gu, Busan 47227, Korea Tel: Fax: bume@deu.ac.kr Copyright 2018 by The Society of Korean Medicine for Obesity Research Objectives: Alcoholic fatty liver is a potentially pathologic condition which can progress to steatohepatitis, fibrosis, and cirrhosis. The objective of this study is to investigate the effects of Scutellaria Radix (SR) extract on the alcoholic fatty liver induced by long-term EtOH administration. Results: Male Sprague Dawley rats were used in this study. All animals were randomly divided into Normal group, treated with saline (n=10); EtOH group, treated with ethanol (n=10); EtOH+SR group, treated with ethanol+scutellaria Radix extract (n=10). For oral administration of ethanol in EtOH and EtOH+SR group, the ethanol was dissolved in distilled water in concentrations of 25% (v/v). Throughout the experiment of 8 week, the rats were allowed free access to water and standard chow. Sample group were administrated by Scutellaria Radix extract daily for 8 weeks. Results: The levels of hepatic marker such as aspartate aminotransferase and alanine aminotransferase were altered. Histopathological changes such as ballooning, fatty and hydropic degeneration were reduced and the expression of tumor necrosis factor-α (TNF-α) was significantly attenuated by Scutellaria Radix extract. Conclusions: These data suggest that Scutellaria Radix extract attenuated the alcoholic simple fatty liver by improving hepatic lipid metabolism via suppression of TNF-α protein. Scutellaria Radix could be effective in protecting the liver from alcoholic fatty liver. Key Words: Alcoholic fatty liver, Scutellaria Radix, TNF-α, AST, ALT 서론 알코올을섭취하게되면간에서 acetaldehyde로대사되는데, acetaldehyde는 acetaldehyde dehydrogenase 의해 acetate로변환되고 acetyl-coa를거쳐에너지를발생하거나혹은콜레스테롤과지방산을합성하는데사용된다 1). 장기간의지속적인알코올섭취는 nicotinamide adenosine/nicotinamide adenine dinucleotide의비율을증가시켜탄수화물, 지방및단백질대사장애를유발하며, 특히간에서지방산의산화가억제되는동시에지방산합성은증가하게되어간조직의지방축적을초래하게된다 2). 알코올성지 방간 (alcoholic fatty liver) 은주로과다한음주로인해간에중성지방이과도하게축적되는간질환을말하며 3), 이후간염, 간경변증, 간암으로발전될수있다 4). 일반적으로알코올섭취는소장내에공생하는박테리아를유지하고질병을일으키는외부의미생물을공격하는장내면역시스템을약화시킬수있다. 만성적인알코올섭취는소장으로부터미생물과그대사산물의유출을유발하게되고이들은문맥을통해간에도달하게된다. 이들은간에서의면역신호체계를혼란시키고 tumor necrosis factor-α (TNF-α), interleukin-8 (IL-8), IL-1β 등의 proinflammatory cytokine들의생성을촉진하게되며결국 19

2 한방비만학회지제 18 권제 1 호, 2018 간세포의손상을일으키게된다 5). TNF-α의경우알코올에의한간의염증변화에대한역할은자세히밝혀진반면, 알코올성지방변증에있어서의역할은아직잘규명되지않았다. 하지만이전의실험적연구를통하여알코올성지방간에있어서 TNF-α의발현이뚜렷이증가하는것이관찰되었고 6), TNF-α receptor의제거는알코올성지방간의유발을억제하는것으로밝혀졌다 7). 또한 TNFα는간에서의콜레스테롤, 지방산및중성지방을합성하는 sterol regulatory element-binding protein (SREBP) 의활성을촉진시키는것으로알려졌다 8). 즉 TNF-α는간에서의지방변증유발에중요한매개체로써의역할을한다. 따라서알코올성지방간을방지하기위해서는 TNF-α의활성을억제하는약물을사용할필요가있다 9). 황금 (Scutellaria Radix, SR) 은꿀풀과 (Labiatae) 에속하는다년생초본식물인속썩은풀 (Scutellariae baicalensis Georgi) 의주피를벗긴뿌리를건조한것으로, 淸熱燥濕, 瀉火解毒, 止血, 安胎의효능이있어서濕溫, 暑溫胸悶, 嘔惡, 濕熱痞滿, 瀉痢, 黃疸, 肺熱咳嗽, 苦熱煩渴, 血熱吐衄, 癰腫瘡毒, 胎動不安, 崩漏, 熱淋등에사용된다 10). 황금에관한이전의실험적연구에따르면항염증, 항산화작용 11,12) 과간의총콜레스테롤 (total cholesterol) 과중성지방 (triglyceride) 의농도는낮추고 13), 총콜레스테롤에대한 high density lipoprotein-콜레스테롤비율을높여동맥경화를예방해주며항고지혈효과가있음이보고된바있다 14). 본연구의목적은황금물추출물이만성적인알코올투여에의해유발된간에서의지질합성에대한보호효과를검증하기위한것이며, 이를위해흰쥐에알코올을장기간투여하여알코올성지방간을유발하고간기능관련인자들과간세포의해부조직학적변화및 TNF-α의발현변화에대한황금의효능을관찰하였다. 대상및방법 1. 실험동물 본연구에서는 ( 주 ) 샘타코 (Osan, Korea) 에서구입한 8 주령, 약 200 g 전후의 Sprague-Dawley계수컷흰쥐 30마리를사용하였다. 흰쥐는온도 23 24, 습도 40 60%, 조명 12시간명 / 암이자동적으로유지되는사육실에서무균음수와사료를자유롭게공급하여사육하고, 실험실환경에 1주이상적응시킨후사용하였다. 본연구의모 든과정은동의대학교동물실험윤리위원회의규정및방침에따라진행되었다 ( 승인번호 : R ). 2. 약물의제조와실험군의분리본연구에사용된황금은 나눔제약 (Yeongcheon, Korea) 에서구입하였으며, 황금 200 g을증류수 2 L와함께 round flask에담고냉각기를부착한전탕기에서 2시간동안전탕한다음여과액을감압농축하여동결건조시켜물추출엑기스 51.4 g을얻었다. 투여량은흰쥐체중 100 g당 85.7 mg을음용수에녹여경구투여하였다. 실험군의분리는흰쥐를무작위로 10마리씩나누어 Normal, EtOH, EtOH+SR 세군으로분리하였으며, 물과사료는모든군에서전체실험기간동안자유롭게섭취할수있도록하였다. 3. 만성알코올성손상의유발과약물투여휜쥐에서의만성알코올성간손상은 25% 의 EtOH (Sigma Aldrich Chem. Co., St. Louis, MO, USA) 용액을 5 ml/kg, bw/day의수준으로 15), 8주간매일오전일정한시간에경구투여함으로써유발시켰다. EtOH군, EtOH+SR 군의모든실험동물에 EtOH을경구투여하였으며, Normal 군에는동일량의생리식염수를투여하였다. EtOH 투여후 30분후에 EtOH+SR군에는황금추출물을, EtOH군에는동일량의생리식염수를경구투여하였다. 4. 혈액생화학적검사실험개시 8주후실험동물을안락사시킨후심장혹은하대정맥에서혈액을채혈하였다. 혈액을냉장고에 2시간정도방치한후원심분리하여혈청을분리하였다. 채취한혈청내 aspartate aminotransferase (AST), alanine aminotransferase (ALT) 등의수치를측정하였다. 5. 체중측정및간의중량측정실험기간동안매일오전정해진시간에실험동물의체중을측정하였으며, 실험마지막날에는부검직전에측정하였다. 부검을통해실험동물의간을분리채취하여중량을측정하였다. 이후간조직은 50 의 dry ice-isophentan 용액으로동결시키고 80 에서보관하였다. 20

3 김범회 : 알코올로유도된흰쥐의간지방형성에황금추출물이미치는효과 6. 간조직의해부조직학적관찰동결보관된간조직의일정부위를연속적으로 8 µm 두께로냉동절편하여 hematoxylin and eosin (H&E) 염색법과 Oil Red O 염색을시행후, 현미경하에서관찰하고사진촬영후영상분석용 Axiovision LE sofeware (ver. 4.2; Carl Zeiss Vision Inc., San Diego, CA, USA) 를이용하여간조직의변화를관찰하였다. 7. 면역조직화학염색 (Immunohistochemistry) 면역조직화학염색은자유부유법 (free-floating) 을사용하였다. Primary antibody는 anti TNF-α (ab6671, 1:200 dilution, rabbit polyclonal; ABcam) 로 phosphate buffer saline (PBS) 와 Triton X-100을섞은용액으로희석한후 4 에서 12시간반응시켰다. 이후조직을 PBS로씻어내고, abidin-biotin immunoperoxidase의방법 (ABC Vectastain Kit) 에따라각각 1시간씩반응시켰다. 면역반응의결과를정량화하기위해현미경하에서동일한일정면적내핵내에명확하게적갈색으로염색된세포수를세어면역양성반응으로구분하고세포수를측정하여수치화하였다. 8. 통계학적분석측정된모든자료는 Statistical Package for Social Science (SPSS) for Windows (version 10.0; IBM Corp., Armonk, NY, USA) 를이용하여분석하였다. Analysis of variance (ANOVA) 분석을통해유의성여부를확인후, Tukey s honestly significant difference를사용하여 P<0.05 및 P<0.01의유의수준으로검증하였다. 모든값의수치는평균 ± 표준오차 (mean±standard error) 로표시하였다. 결과 1. 사망률, 일반증상및체중변화 8주간의실험기간동안모든실험군에서사망개체수가발생하지않았으며이상증상은관찰되지않았다. 실험마지막날부검후육안으로관찰한결과, 간조직이외의다른조직에서의이상증상도관찰되지않았다. 각실험군에서의체중변화를살펴보면, EtOH군과 EtOH +SR군에서 Normal군에비해전반적으로체중이감소된경향이나타났다 (Fig. 1). 8주간의실험기간이끝난후최종적인체중은 Normal군에서 425.4±8.0 g, EtOH군이 ±8.7 g, EtOH+SR군에서 382.5±7.6 g으로측정되어, EtOH 군과 EtOH+SR군에서모두 Normal군에비해유의성있게감소되었으며 (P<0.01), EtOH군과 EtOH+SR군의비교에서는 EtOH+SR군이 EtOH군에비해평균체중에다소회복이나타났으나통계적으로유의성있는차이를나타내지는않았다. 2. 간의중량변화 8주간의실험마지막날흰쥐의간을적출하여무게를측정한결과 Normal군에서 17.7±0.4 g, EtOH군이 15.3±0.4 g, EtOH+SR군에서 16.2±0.2 g으로측정되어, 알코올의 Fig. 1. The changes of mean body weights of rats during the 8 weeks. Compared with Normal group, mean body weight of both EtOH and EtOH+Scutellaria Radix (SR) groups were decreased during the entire period of 8 weeks. There was no significant difference of the mean body weight between EtOH and EtOH+SR groups. 21

4 한방비만학회지 제18권 제1호, 2018 투여한 EtOH군과 EtOH+SR군에서 Normal군에 비해 각 각 P<0.01, P<0.05의 유의성으로 증가된 것으로 관찰되었 다(Table 1). 4. 간의 해부조직학적 변화 간조직의 일정 부위를 8 µm 두께로 냉동절편하여 H&E 염색법을 시행 후 현미경하에서 관찰한 결과, 만성적인 각 실험군에서의 최종적인 체중에 대한 간 중량의 비 알코올 섭취로 인해 간조직의 변화를 확인할 수 있었는데 율로 환산하여 계산한 간-체중 비의 결과에서는 Normal EtOH군에서 Normal군에 비해 지방방울(fat droplet)의 형 군에서 4.03±0.08%, EtOH군이 4.17±0.12%, EtOH+SR군 성을 뚜렷이 관찰할 수 있었다. EtOH+SR군에서도 지방방 에서 4.24±0.12%로 측정되어, EtOH군과 EtOH+SR군에서 울의 형성이 관찰되었으나 EtOH군에 비해 지방방울의 크 모두 Normal군에 비해 증가하였으며, EtOH+SR군이 EtOH 기와 수가 현저히 감소된 것을 확인할 수 있었다(Fig. 2A-C). 군에 비해 증가율이 더 높았으나 세 군 간에 통계적 유의 Oil Red O 염색을 시행한 결과에서도 EtOH군과 EtOH+SR 성은 확인되지 않았다(Table 1). 3. 간손상의 지표 Table 1. Changes in Body Weight and Liver-Body Weight Ratio of Rats in Normal, EtOH and EtOH+SR Groups 간손상에 대한 지표로써 실험 마지막 날 실험동물로부 Group 터 채취한 혈액에서 혈청 ALT, AST의 수치를 비교 분석한 Liver weight (g) 결과, ALT의 경우 Normal군에서 26.5±2.4 IU/L, EtOH군 에서 52.0±2.2 IU/L, 그리고 EtOH+SR군에서 45.2±2.2 IU/L 로 측정되어 EtOH군과 EtOH+SR군에서 모두 Normal군에 비해 유의성 있는 증가를 나타내었으며(Table 2, P<0.01), EtOH군과 EtOH+SR군 간에도 EtOH+SR군이 EtOH군에 비해 유의성 있는 증가가 나타났다(P<0.05). Normal EtOH 17.7± ±0.4 EtOH+SR Liver-body weight ratio (%) 4.03± ±0.12 *, 16.2± ±0.12 Data were expressed as mean±standard error SR: Scutellaria Radix * P 0.05 compared with Control group; P 0.05 compared with Normal group; P 0.01 compared with Normal group. Table 2. Blood Serum Chemistry Values of Rats in Normal, EtOH and EtOH+SR Groups AST의 경우에서도 Normal군에서 110.9±4.7 IU/L, EtOH Normal EtOH ALT (IU/L) 26.5± ±2.2 군에서 193.7±8.0 IU/L, 그리고 EtOH+SR군에서 185.3±9.2 AST (IU/L) 110.9± ±8.0 IU/L로 측정되어 EtOH군과 EtOH+SR군에서 Normal군에 Data were expressed as mean±standard error and analysed by the Student's t-test. SR: Scutellaria Radix, ALT: alanine aminotransferase, AST: aspartate aminotransferase. * P 0.05 compared with Control group; P 0.01 compared with Normal group. 비해 유의성 있는 증가를 나타내었으나(Table 2, P<0.05), EtOH군과 EtOH+SR군 간에는 유의성 있는 변화가 나타 나지 않았다. Group EtOH+SR *, 45.2± ±9.2 Fig 2. From the hematoxylin and eosin (H&E) staining, EtOH group showed significant histopathological alterations such as ballooning, fatty and hydropic degeneration when compared with Normal group. Whereas, EtOH+Scutellaria Radix (SR) group showed mild changes compared with EtOH group. In addition, from the Oil Red O staining, the EtOH group showed significant intrahepatic lipid infiltration, as indicated by an increased number of red hepatocytes when compared with Normal group. Whereas, EtOH+SR group demonstrated significantly decreased lipid infiltration compared with EtOH group. H&E: A, B, C 200, Oil Red O:

김범회: 알코올로 유도된 흰쥐의 간 지방 형성에 황금 추출물이 미치는 효과 5 2 군에서 Normal군에 비해 간조직으로의 지질침윤(lipid in- 로 EtOH+SR군에서는 37.6±4.4개/1.

5 김범회: 알코올로 유도된 흰쥐의 간 지방 형성에 황금 추출물이 미치는 효과 5 2 군에서 Normal군에 비해 간조직으로의 지질침윤(lipid in- 로 EtOH+SR군에서는 37.6±4.4개/ µm 로 관찰되어 filtration)이 관찰되었으나, EtOH+SR군에서 EtOH군에 비 EtOH군과 EtOH+SR군에서 모두 Normal군에 비해 유의성 해 현저히 감소된 것을 확인할 수 있었다(Fig. 2D-F). 있는 증가가 확인되었다(P<0.01). 한편, EtOH군과 EtOH+SR 군의 비교에서는 EtOH+SR군에서 EtOH군에 비해 면역 5. 간조직에서의 TNF-α의 발현 변화 양성반응 세포수가 유의성 있게 감소된 것으로 관찰되었 각 실험군의 간조직에서의 TNF-α 단백질의 변화를 확 다(Fig. 3, P<0.05). 인하기 위하여 면역조직화학 염색법을 시행하여 TNF-α에 대한 면역반응을 관찰한 결과, 알코올을 투여한 EtOH군과 고찰 EtOH+SR군에서 모두 Normal군에 비해 면역반응이 증가 되는 것으로 관찰되었다. 특히 EtOH군에서 현저히 증가되 알코올에 의한 간에서의 지방축적은 알코올의 종류보 었으며, EtOH+SR군에서는 EtOH군에 비해서는 면역반응 다는 총 섭취량과 밀접한 관계가 있다. 즉, 같은 양이라도 이 좀 더 약하게 발현된 것을 확인할 수 있었다(Fig. 3). 매일 지속적으로 마시게 되면 알코올에 대한 대사효율성 현미경을 통해 육안으로 확인한 면역반응을 객관적으 이 저하되고 지방간 발생이 더욱 심화된다16). 실험적으로 로 수치화하기 위하여 일정면적에서 양성반응을 보인 세 간의 알코올성 지방변증을 유발하는 방법은 이전 실험을 포의 개수를 측정하였다. 그 결과, Normal군은 6.1±1.3개/ 통해 다양한 방법이 제시되었는데, 실험동물에 65% vol/vol µm 인 반면, EtOH군에서는 51.3±4.5개/ µm 의 알코올을 4주간 투여17), 25% vol/vol의 알코올을 8주간 Fig. 3. Immunohistochemical staining of TNF-α proteins. The increased level of TNF-α immunoreactivity was observed in the EtOH group. Whereas, the expressions of TNF-α protein in EtOH+Scutellaria Radix (SR) group were decreased to compared with Control group. Magnification : 200. Data were expressed as mean±s.e. TNF-α: tumor necrosis factor alpha, S.E.: standard error, BAX: bcl-2-associated X protein. *P 0.05 compared with Control group; ##P 0.01 compared with Normal group. 23

6 한방비만학회지제 18 권제 1 호, 2018 투여하는방법 15) 이나혹은 Lieber-DeCarli 에탄올액체표준식이를적용하는방법 18-20) 등이제시되었다. 본연구에서는흰쥐에 25% 의 EtOH을 8주동안매일일정한시간에경구투여함으로써간의알코올성지방변증을유도하였다. 그결과, 실험동물에여러가지신체적변화들이발견되었는데, 우선체중변화에있어알코올을투여한 EtOH 군과 EtOH+SR군에서 Normal군에비해전반적으로체중이감소되는경향을나타냈다. 실험마지막날의최종체중의비교에서도유의성있는감소가나타났다 (Fig. 1, P<0.01). 이전의여러실험연구를통하여실험동물에에탄올을장기간투여한경우체중이감소되는것으로알려졌는데 21,22), 본연구에도이와같이알코올섭취로인해평균체중이감소되는것으로확인되었다. 이러한체중감소는만성적인알코올섭취로인한영양불균형에의한것으로사료된다. 한편, 에탄올투여후황금추출물을투여한 EtOH+SR군에서는 EtOH군에비해평균체중이약간회복되었으나, 유의성있는차이는발견되지않았다. 따라서황금의투여는알코올섭취로인한체중감소에유의한영향을미치지는않은것으로확인되었다. 8주간의실험기간이끝난후, 실험동물을희생하고간을적출하여무게를측정한결과에서는알코올을투여한 EtOH군에서 Normal군에비해평균중량이유의성있게감소하였으며 (Table 1, P<0.01), EtOH+SR군의경우에도유의성있는감소를나타내었다 (Table 1, P<0.05). 이는간의지방축적에따른간실질세포의감소로간중량이현저히감소된것으로사료된다. 에탄올투여후황금추출물을투여한 EtOH+SR군에서는 EtOH군에비해간중량의감소량이줄었으며, 통계적으로도 EtOH군과 EtOH+SR 군의비교에서간중량의유의한증가를확인할수있었다 (Table 1, P<0.05). 체중에대한간의무게를환산한간-체중비의비교에서는알코올을투여한 EtOH군과 EtOH+SR 군에서 Normal 군에비해간-체중비가증가되는것을확인할수있었다. EtOH+SR 군과 EtOH 군의비교에서는 EtOH+SR 군이 EtOH군에비해간-체중비가좀더증가된것을확인할수있었으나, 통계적유의성을보이지는않았다. 한편, 본연구에서는만성적인알코올섭취로인한간손상의지표로써혈액생화학적변화를확인하기위해혈청내 ALT와 AST 효소의농도를측정하였다. 손상된간세포로부터혈액으로유리되어나오는 ALT와 AST는간손상의진단에있어매우민감한지표로활용된다 23,24). 8주 간의알코올을투여한 EtOH군과 EtOH+SR군에서 Normal 군에비해 ALT 와 AST의급격한상승이나타났는데, 이는알코올투여로인한간기능손상이있음을보여주는것이라할수있다. 황금물추출물을경구투여한 EtOH+SR군에서는 EtOH군에비해 ALT와 AST 수치의상승이줄어든것을관찰할수있었으며, 특히 ALT의경우에서는유의성있는감소가나타났다 (Table 2, P<0.05). 이러한결과는황금이만성적인알코올투여로인한 ALT와 AST의증가를억제시키고간기능손상을방어하는효능이있음을보여주는것이라할수있다. 8주간의알코올투여후간에서해부조직학적변화를확인하기위해동결보관된간조직을 8 µm 두께로냉동절편하여 H&E 염색과 Oil Red O 염색을통해관찰하였다. 그결과, H&E 염색에서 EtOH군이 Normal군에비해염증세포침윤과지방변성, 수포변성 (hydropic degeneration) 등에따른지방방울 (fat droplet) 의형성이뚜렷하게관찰되었으며, EtOH+SR군에서도이러한조직학적병변이관찰되었으나 EtOH군에비해현저히감소된것으로관찰되었다 (Fig. 2). Oil Red O 염색에서도 EtOH군과 EtOH+SR군에서 Normal군에비해간조직으로의지질침윤이뚜렷이관찰되었으나, EtOH+SR군에서 EtOH군에비해현저히감소된것을확인할수있었다 (Fig. 2). 이러한결과는황금물추출물투여로인해만성적인알코올섭취에의한간세포의퇴행적변화, 특히지방방울의형성이억제되고간에서의지방변성이감소되었음을보여주는것이라할수있다. 따라서황금은만성적인알코올섭취로인한간조직의지방축적을억제하여간조직을보호하는효과가있음을확인할수있었다. 앞서언급한바와같이 tumor necrosis factor-α (TNF-α) 는여러간질환에서간독성의매개로써의역할을수행하며간손상의경우증가하게되고이후의지방간이나간경화 (liver fibrosis) 등의질환형성에중요한역할을하는것으로알려져있다 3). 만성적인알코올섭취는장투과성 (gut permeability) 을증가시키고장에서유래된지질다당류 (lipopolysaccharide [LPS]) 를통하여내독소혈증 (endotoxemia) 을유발시키게된다. 이는 TNF-α가매개된염증성 cytokine들을생성하는 nuclear factor kappa light chain enhancer of activated B cells (NF-kB) 를활성화시키게된다 25). 이처럼 TNF-α는지방간을비롯한간손상에중요한매개체로서의역할을하며알코올로인한지방간형성에도이러한 24

7 김범회 : 알코올로유도된흰쥐의간지방형성에황금추출물이미치는효과 TNF-α가핵심적인역할을수행하게된다. 알코올성지방간질환에대한역학연구에서도알코올섭취량과혈청 TNF-α 농도간에상관관계가있음이밝혀졌으며 26), 이전연구를통해 TNF-α는간에서의콜레스테롤, 지방산및중성지방을합성하는 SREBP의활성을촉진시킴으로써간의지방변성을유발하는것으로알려졌다. 본연구에서면역조직화학염색법을통해 8주간의알코올섭취에따른간에서의 TNF-α의발현및황금물추추물투여로인한발현변화를관찰하였는데, 그결과알코올을투여한 EtOH군과 EtOH+SR군에서 Normal군에비해 TNF-α에대한면역반응이뚜렷이증가되었다. 특히 EtOH군에서 Normal 군에비해면역반응이뚜렷이증가된반면, EtOH+SR군에서는 EtOH군에비해서발현이감소된것으로관찰되었다 (Fig. 3). 이러한결과는만성적인알코올섭취로인해간조직에서의 TNF-α의발현이증가되었다는이전실험결과와도일치하는것이며, 또한황금물추출물의투여로인해이러한 TNF-α의발현이감소되었음을나타내는것이라할수있다. 면역반응을객관적으로수치화하기위하여현미경하의일정면적에서 TNF-α에대해양성반응을보인세포수를측정한결과에서도, Normal군에비해 EtOH군과 EtOH+SR군에서모두발현이유의성있게증가되는것으로확인되었다 (Fig. 3, P<0.01). 하지만 EtOH+SR군에서 EtOH군에비해면역양성반응세포수가유의성있게감소된것으로관찰되었다 (Fig. 3, P<0.05). 이러한결과는만성적인알코올섭취로인해간조직에서의 TNF-α의발현이유의성있게증가하였으며, 황금의투여는이러한 TNF-α의증가를유의성있게억제시켰음을보여주는것으로, 황금이알코올섭취로인한간손상및지방간생성과정에서유의한보호효과가있는것으로사료된다. 위의결과들을종합하면, 황금은흰쥐에 8주간의만성적인알코올투여로인한체중감소에는유의한영향을미치지않았으나, 알코올투여로인한간의절대중량감소를유의성있게억제하였다. 혈액생화학적검사에서는장기간의알코올섭취로인한 ALT 의상승을유의하게감소시켰으며간세포의해부조직학적변화에있어서도염증성변화, 지방방울의형성, 지방변성과같은병리적변화를감소시켰다. 이러한효과는알코올섭취로인한간세포에서의 TNF-α의증가를억제시키기때문인것으로사료된다. 다만, 본연구에서는알코올섭취에의한간의지방변성, 즉알코올성지방간에서의황금의효과만을확인 하였으나추후후속연구를통해비만, 스트레스등으로인한비알코올성지방간에서의효과도검증할필요가있다사료된다. 이를통해다양한원인에의해발생하는지방간손상의치료에있어서, 황금이실제임상에서도적극활용될수있는근거를마련해야할것이다. 또한본연구에서는알코올성지방간의다양한형성기전중에서 TNF-α의변화만을관찰하였으나, 후속연구를통해지방간형성에관여하는다른다양한인자및기전에대한연구도이어져야할것이다. 결론 만성적인알코올투여로유발된지방간손상에대한황금의영향을검증하기위하여흰쥐에 25% EtOH을 8주간경구투여하여장기적인간손상을통하여지방간형성을유발하고황금물추출물을투여한결과다음과같은결론을얻었다. 황금은만성적인알코올섭취로인한체중감소에는유의한영향을미치지않았고, 알코올투여로인한간의무게감소를유의하게억제하였다. 간-체중비의변화에는유의성있는변화를나타내지않았다. 또한만성적인알코올섭취로인한 ALT의상승을유의하게억제시켰으며, 간세포의해부조직학적변화에있어서도알코올섭취로인한지방방울의형성, 지방변성과같은병리적변화를감소시켰다. 이러한알코올성지방간에대한보호효과는간세포에서의 TNF-α의발현을효과적으로억제시키기때문인것으로사료된다. 이와같은결과로황금은만성적인알코올섭취로인한간에서의지질형성에유의한보호효과가있는것으로사료된다. References 1. Mezey E. Alcoholic liver disease: roles of alcohol and malnutrition. Am J Clin Nutr ; 33(12) : Lieber CS. Alcohol and the liver: metabolism of alcohol and its role in hepatic and extrahepatic diseases. Mt Sinai J Med ; 67(1) : Willner IR, Reuben A. Alcohol and the liver. Curr Opin Gastroenterol ; 21(3) : Nagata K, Suzuki H, Sakaguchi S. Common pathogenic 25

8 한방비만학회지제 18 권제 1 호, 2018 mechanism in development progression of liver injury caused by non-alcoholic or alcoholic steatohepatitis. J Toxicol Sci ; 32(5) : Nagy LE. The role of innate immunity in alcoholic liver disease. Alcohol Res ; 37(2) : Lin HZ, Yang SQ, Zeldin G, Diehl AM. Chronic ethanol consumption induces the production of tumor necrosis factor-alpha and related cytokines in liver and adipose tissue. Alcohol Clin Exp Res ; 22(5 Suppl) : 231S-7S. 7. Ji C, Deng Q, Kaplowitz N. Role of TNF-alpha in ethanol-induced hyperhomocysteinemia and murine alcoholic liver injury. Hepatology ; 40(2) : Purohit V, Gao B, Song BJ. Molecular mechanisms of alcoholic fatty liver. Alcohol Clin Exp Res ; 33(2) : French JB, Bonacini M, Ghabril M, Foureau D, Bonkovsky HL. Hepatotoxicity associated with the use of anti-tnfα agents. Drug Saf ; 39(3) : The textbook compilation committee of Korean herbology. Bonchohak. 2nd ed. Seoul : Younglimsa : Kim KS, Kim LH, Rhee YJ, Lee SH, Choi JH, Ko HN. Analysis on research trend of studies related with Scutellariae Radix in Korea. Korean J Orient Physiol Pathol ; 25(6) : Kim EH, Shim B, Kang S, Jeong G, Lee JS, Yu YB, et al. Anti-inflammatory effects of Scutellaria baicalensis extract via suppression of immune modulators and MAP kinase signaling molecules. J Ethnopharmacol ; 126(2) : Song KH, Lee SH, Kim BY, Park AY, Kim JY. Extracts of Scutellaria baicalensis reduced body weight and blood triglyceride in db/db mice. Phytother Res ; 27(2) : Yoon HJ, Park YS. Effects of Scutellaria baicalensis water extract on lipid metabolism and antioxidant defense system in rats fed high fat diet. J Korean Soc Food Sci Nutr ; 39(2) : Kim JJ, Seo BI, Choi HS, Kim SM, Woo CH, Koo JS, et al. Preventive effects of Daekumeumja on fatty degeneration of liver and immunosuppression induced by alcohol. Korean J Oriental Medicine ; 16(2) : Yoon SK. Diagnosis and treatment of fatty liver. Korean J Med ; 76(6) : S 17. Ma Z, Zhang Y, Li Q, Xu M, Bai J, Wu S. Resveratrol improves alcoholic fatty liver disease by downregulating HIF-1α expression and mitochondrial ROS production. PLoS One ; 12(8) : e Altavilla D, Marini H, Seminara P, Squadrito G, Minutoli L, Passaniti M, et al. Protective effects of antioxidant raxofelast in alcohol-induced liver disease in mice. Pharmacology ; 74(1) : Augustyniak A, Waszkiewicz E, Skrzydlewska E. Preventive action of green tea from changes in the liver antioxidant abilities of different aged rats intoxicated with ethanol. Nutrition ; 21(9) : Bai T, Yang Y, Yao YL, Sun P, Lian LH, Wu YL, et al. Betulin alleviated ethanol-induced alcoholic liver injury via SIRT1/AMPK signaling pathway. Pharmacol Res ; 105 : Macieira MS, Almeida WG, Silva EA, Schenberg LC, Nakamura-Palacios EM. Alcohol dependence induced in rats by semivoluntary intermittent intake. Braz J Med Biol Res ; 30(9) : Larue-Achagiotis C, Poussard AM, Louis-Sylvestre J. Alcohol drinking, food and fluid intakes and body weight gain in rats. Physiol Behav ; 47(3) : Herlong HF. Approach to the patient with abnormal liver enzymes. Hosp Pract (Off Ed) ; 29(11) : McGill MR. The past and present of serum aminotransferases and the future of liver injury biomarkers. EXCLI J ; 15 : Altamirano-Barrera A, Uribe M, Chávez-Tapia NC, Nuño-Lámbarri N. The role of the gut microbiota in the pathology and prevention of liver disease. J Nutr Biochem ; 60 : Lieber CS. Alcoholic fatty liver: its pathogenesis and mechanism of progression to inflammation and fibrosis. Alcohol ; 34(1) :

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α α α α α α α α 太陰調胃湯加減方 dbdb 마우스 肝에 대한 아디포사이토카인 및 발현에 미치는 영향 SREBPs 와 섞어서 하고 마커 또한 하여 전기 영동을 하였다 전기영동을 한 후에 에 를 쪼여서 각 를 확인하였다 이 를 프로그램을 이용해 수치화하 여 분석하였다 肝 조직 동결 절편 분리한 조직은 로 시간 동안 고정 시킨 후 에 세척한 후 물기를