살충제규격등안전관리연구 - 2 -
편집순서 보고서요약문
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D μ - 10 -
μ μ - 11 -
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2500 2000 a 1500 re a k a e1000 P 500 y = 1.53761 x + 37.95123 R² = 0.99995 0 0.000 500.000 1000.000 1500.000 2000.000 Conc. (ug/ml) 2500 2000 a1500 re a k a e1000 P 500 y = 1.54481 x + 34.61424 R² = 0.99995 0 0.000 500.000 1000.000 1500.000 2000.000 Conc. (ug/ml) 2500 2000 a1500 re a k a e1000 P 500 y = 1.53765 x + 34.32060 R² = 0.99995 0 0.000 500.000 1000.000 1500.000 2000.000 Conc. (ug/ml) - 15 -
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σ σ - 17 -
μ - 18 -
α - 19 -
μ μ - 20 -
μ μ - 21 -
μ - 22 -
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1.40 1.40 1.40 1.20 1.00 a re 0.80 a k a 0.60 e P 0.40 y = 0.00111 x - 0.06413 R² = 0.99940 1.20 1.00 a re 0.80 a k a0.60 e P 0.40 y = 0.00108 x - 0.04687 R² = 0.99996 1.20 1.00 a re 0.80 a k a 0.60 e P 0.40 y = 0.00108 x - 0.04485 R² = 0.99993 0.20 0.20 0.20 0.00 0 200 400 600 800 1,000 1,200 Conc. (ug/ml) 0.00 0 200 400 600 800 1,000 1,200 Conc. (ug/ml) 0.00 0 200 400 600 800 1,000 1,200 Conc. (ug/ml) - 27 -
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σ σ - 29 -
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1.20 1.20 1.20 1.00 1.00 1.00 0.80 a re a k 0.60 a e P 0.40 0.20 y = 0.00048 x - 0.00774 R² = 0.99977 0.80 a re a0.60 k a e P0.40 0.20 y = 0.00047 x - 0.00728 R² = 0.99972 0.80 a re a0.60 k a e P0.40 0.20 y = 0.00047 x - 0.00618 R² = 0.99954 0.00 0 500 1,000 1,500 2,000 2,500 Conc. (ug/ml) 0.00 0 500 1,000 1,500 2,000 2,500 Conc. (ug/ml) 0.00 0 500 1,000 1,500 2,000 2,500 Conc. (ug/ml) - 37 -
1.20 1.20 1.20 1.00 1.00 1.00 0.80 a re a k 0.60 a e P 0.40 0.20 y = 0.00087 x + 0.00400 R² = 0.99981 0.80 a re a0.60 k a e P0.40 0.20 y = 0.00087 x + 0.00584 R² = 0.99989 0.80 a re a0.60 k a e P0.40 0.20 y = 0.00087 x + 0.00198 R² = 0.99973 0.00 0 500 1,000 1,500 Conc. (ug/ml) 0.00 0 500 1,000 1,500 Conc. (ug/ml) 0.00 0 500 1,000 1,500 Conc. (ug/ml) - 38 -
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σ σ σ - 42 -
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α - 44 -
μ μ - 45 -
μ μ - 46 -
μ - 47 -
μ μ μ - 48 -
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0.80 0.80 0.80 0.70 0.70 0.70 0.60 0.60 0.60 a 0.50 re a k 0.40 a e 0.30 P 0.20 0.10 y = 0.00062 x + 0.00068 R² = 0.99990 a 0.50 re a 0.40 k a e 0.30 P 0.20 0.10 y = 0.00061 x + 0.00751 R² = 0.99994 a 0.50 re a 0.40 k a e 0.30 P 0.20 0.10 y = 0.00061 x + 0.00301 R² = 0.99990 0.00 0 200 400 600 800 1,000 1,200 1,400 Conc. (ug/ml) 0.00 0 200 400 600 800 1,000 1,200 1,400 Conc. (ug/ml) 0.00 0 200 400 600 800 1,000 1,200 1,400 Conc. (ug/ml) - 54 -
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σ σ - 57 -
μ μ μ μ - 58 -
μ μ - 59 -
μ μ - 60 -
μ μ - 61 -
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μ - 63 -
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0.35 0.35 0.35 0.30 0.30 0.30 0.25 a re 0.20 a k a 0.15 e P 0.10 0.05 y = 0.00006 x + 0.00156 R² = 0.99982 0.25 a re 0.20 a k a0.15 e P 0.10 0.05 y = 0.00005 x + 0.00527 R² = 0.99958 0.25 a re 0.20 a k a0.15 e P 0.10 0.05 y = 0.00006 x + 0.00131 R² = 0.99991 0.00 0 2,000 4,000 6,000 8,000 Conc. (ug/ml) 0.00 0 2,000 4,000 6,000 8,000 Conc. (ug/ml) 0.00 0 2,000 4,000 6,000 8,000 Conc. (ug/ml) - 69 -
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σ σ - 71 -
μ - 72 -
α α - 73 -
αα αα α α - 74 -
α α - 75 -
분 분 분 - 76 -
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검량선 1 차검량선 2 차검량선 3 차 - 81 -
3.00 3.00 3.00 2.50 2.50 2.50 2.00 a re a k1.50 a e P1.00 0.50 y = 0.00216 x - 0.01087 R² = 0.99987 2.00 a re a k1.50 a e P1.00 0.50 y = 0.00215 x - 0.00313 R² = 0.99990 2.00 a re a k1.50 a e P1.00 0.50 y = 0.00215 x - 0.00252 R² = 0.99991 0.00 0 500 1,000 1,500 Conc. (ug/ml) 0.00 0 500 1,000 1,500 Conc. (ug/ml) 0.00 0 500 1,000 1,500 Conc. (ug/ml) - 82 -
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σ σ - 85 -
μ - 86 -
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μ μ - 88 -
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0.80 0.70 0.60 a 0.50 re a k 0.40 a e 0.30 P 0.20 y = 0.00060 x - 0.00665 R² = 0.99986 0.70 0.60 0.50 a re 0.40 a k a 0.30 e P 0.20 y = 0.00058 x - 0.00260 R² = 0.99979 0.70 0.60 0.50 a re 0.40 a k a 0.30 e P 0.20 y = 0.00058 x - 0.00119 R² = 0.99984 0.10 0.10 0.10 0.00 0 200 400 600 800 1,000 1,200 Conc. (ug/ml) 0.00 0 200 400 600 800 1,000 1,200 Conc. (ug/ml) 0.00 0 200 400 600 800 1,000 1,200 Conc. (ug/ml) - 94 -
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σ σ - 96 -
현행 개선안 = 델타메트린표준품의양 μ - 97 -
현행 개선안 = d- 페노트린표준품의양 - 98 -
현행 개선안 - 99 -
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현행 개선안 μ μ - 101 -
μ μ 현행 개선안 - 102 -
μ μ μ - 103 -
현행 개선안 - 104 -
μ μ 현행 개선안 - 105 -
μ μ - 106 -
현행 개선안 μ μ - 107 -
현행 개선안 - 108 -
μ 현행 개선안 - 109 -
μ - 110 -
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고상제제액상제제기타제제 제형분제 (DP) 입제 (GR) 수화제 (WP) 오일제 ( 油劑, 유제 ) (OL) 유제 ( 乳劑 ) (EC) 미탁제 (ME) 독먹이제 (Bait) 훈연제 (FU) 모기향 (MC) 전자모기향 (MV, LV) 증산제 효력시험방법잔사접촉시험법, 배지혼입시험법, 살분강하시험법약액침지시험법잔사접촉시험법, 배지혼입시험법, 약액침지시험법, 약액계속접촉시험법잔사접촉시험법, 분무시험법, 배지혼입시험법잔사접촉시험법, 분무시험법, 배지혼입시험법, 약액침지시험법, 약액계속접촉시험법잔사접촉시험법, 분무시험법, 약액침지시험법식독시험법, 경구투여시험법훈연시험법분무시험법, 훈연시험법분무시험법, 훈연시험법훈연시험법 기피제 기피시험법 에어로졸제 잔사접촉시험법, 분무시험법 - 112 -
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α - 117 -
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μ μ - 121 -
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보정살충율 실험군의치사율 대조군의치사율 대조군의치사율 - 124 -
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χ χ - 126 -
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살충제제형별시험방법해설서개정 ( 안 ) Ⅰ. 일반사항 < 제형에따른효력시험방법분류 > 고상제제액상제제기타제제 제형분제 (DP) 입제 (GR) 수화제 (WP) 오일제 ( 油劑, 유제 ) (OL) 유제 ( 乳劑 ) (EC) 미탁제 (ME) 독먹이제 (Bait) 훈연제 (FU) 모기향 (MC) 전자모기향 (MV, LV) 증산제 효력시험법잔사접촉시험법, 배지혼입시험법, 살분강하시험법약액침지시험법잔사접촉시험법, 배지혼입시험법, 약액침지시험법, 약액계속접촉시험법잔사접촉시험법, 분무시험법, 배지혼입시험법잔사접촉시험법, 분무시험법, 배지혼입시험법, 약액침지시험법, 약액계속접촉시험법잔사접촉시험법, 분무시험법, 약액침지시험법식독시험법, 경구투여시험법훈연시험법분무시험법, 훈연시험법분무시험법, 훈연시험법훈연시험법 기피제 기피시험법 에어로졸제 잔사접촉시험법, 분무시험법 - 144 -
Ⅱ. 제형의종류및특징 고상제제액상제제기타제제 제형분제 (DP) 입제 (GR) 수화제 (WP) 입상수용제 (SG) 유제 ( 乳劑 ) (EC) 오일제 ( 油劑 ) (OL) 액제 (SL) 액상수화제 (SC) 유탁제 (EW) 미탁제 ( 현탁제 ) (ME) 캡슐현탁제 (CS) 훈연제 (FU) 모기향 (MC) 전자모기향 (MV, LV) < 사용유형별제형분류 > 형태 주성분을제외한주요성분 사용법 미세한분말광물성담체 (45 μm이하가 85% 이상 ) (+ 결합제 ) 그대로분산기로살포 세립 광물성담체 그대로손또는산포 (300 ~ 1,700 μm 90% 이상 ) (+ 결합제 ) 기로살포 미세한분말 광물성담체 + 물로희석하여분무기 (75 μm이하가 98% 이상 ) 분산제 로살포 과립 수용성담체 물로희석하여분무기로살포 투명한액체 유기용매 + 유화제 그대로또는물로희석하여분무기로살포 그대로또는유기용매 투명한액체 유기용매 + 유화제 로희석하여분무기로 살포 투명한액체 물 그대로또는물로희석하여분무기로살포 백색또는유백색의액체 물 + 분산제 + 증점제 그대로또는물로희석하여분무기로살포 백색또는유백색의액체 물 + 분산제 (+ 증점제 ) 물로희석하여분무기로살포 백색또는유백색의투명한물로희석하여분무기물 + 유화제액체로살포 백색또는유백색의액체 물 + 고분자막물질 물로희석하여분무기로살포 과립, 봉 광물성담체 + 발열제 연무 코일형 점결제 연소 매트형 기제 ( 펄프판 ), 용제 기화 투명한액체 용제 기화 독먹이제 (Bait) 세립 ~ 정형 베이트기제 (+ 결합제 ) 오식방지용용기에 설치 - 145 -
Ⅲ. 효력시험법 < 제형별효력시험법 > 1. 분제 (DP : Dustable Powders) - 잔사접촉시험법, 배지혼입시험법, 살분강하시험법 2. 입제 (GR : Granules) - 약액침지시험법 3. 수화제 (WP : Wettable Powders) - 잔사접촉시험법, 배지혼입시험법, 약액침지시험법, 약액계속접촉시험법 4. 오일제 ( 油劑, 유제, OL : Oil Miscible Liquid) - 잔사접촉시험법, 분무시험법, 배지혼입시험법 5. 유제 ( 乳劑, EC : Emulsifiable Concentrates) - 잔사접촉시험법, 분무시험법, 배지혼입시험법, 약액침지시험법, 약액계속접촉시험법 6. 미탁제 (ME : Micro-Emulsions) - 잔사접촉시험법, 분무시험법, 약액침지시험법 7. 기타제제 1) 독먹이제 (Bait) - 식독시험법, 경구투여시험법 2) 훈연제 (FU : Smoke Generator) - 훈연시험법 3) 모기향 (MC : Mosquito Coil), 전자모기향 [ 매트형 (MV : Vaporizer Mats), 액체형 (LV : Liquid Vaporizers) - 분무시험법, 훈연시험법 4) 증산제 l 정의및특징 : 증기압이높은유효성분을수지등에합침시켜장기간에걸친유효성분의자연증산에의한효과를목적으로한제제로주로매다는타입과살충기사용타입이있다. 2 적용가능한효력시험법 : 훈연시험법 5) 기피제 l 정의및특징 : 목적물에처리하여해충으로부터보호하기위해이용하는약제이다. 모기성 충의흡혈피해를방지하기위해사용되는것이많다. - 146 -
2 적용가능한효력시험법 : 기피시험법 6) 에어로졸제 l 정의및특징 : 액제와동일한방법으로시험할수있지만분사제에의해약제를방출하는제제이므로작은해충에게는분사압에의한영향에주의한다. 잔사접촉시험에서는에어로졸로부터원액을꺼내어그것을유제 ( 油劑 ) 와동일한형태로잔류처리하여시험하는경우도있다. 2 적용가능한효력시험법 : 잔사접촉시험법, 분무시험법 7) 정제 l 정의및특징 : 유효성분을정제상으로성형한제제이다. 시험은약제를그대로물안에처리하여원액또는희석액에해충을침지하는방법으로실시한다. 약제의방출을조절하고있는제제에서는시간의경과에따라순차적으로유효성분이물안에방출되므로이점을고려하여시험을설계한다. 8. 살충제성분 ( 원료 ) - 미량적하시험법, 잔사접촉시험법, 분무시험법, 배지혼입시험법, 약액침지시험법, 약액계속접촉시험법, 경구투여시험법, 기피시험법 - 147 -
< 효력시험법순서 > 1) 미량적하시험법 2) 잔사접촉시험법 (1) 한정시간접촉시험법 ( 단시간접촉시험법 ) (2) 계속접촉시험법 (3) 잔효성시험법 (4) 드라이필름시험법 (5) 클립시험법 3) 분무시험법 (1) 분무강하시험법 (2) 직경분무시험법 (3) 상형시험법 (4) 피트 그래디시험법 4) 훈연시험법 (1) 통기원통시험법 (2) 정량훈연시험법 5) 배지혼입시험법 (I) 6) 배지혼입시험법 (II) 7) 약액침지시험법 8) 약액계속접촉시험법 9) 살분강하시험법 10) 식독시험법 (1) 바퀴벌레에대한시험 (2) 집파리에대한시험 11) 경구투여시험법 12) 기피시험법 (1) 흡혈해충에대한시험법 (2) 바퀴벌레에대한시험법 - 148 -
< 효력시헙법해설 > 1. 기초시험법 1) 미량적하시험법 l 특징해충의가슴에아세톤에녹인살충성분 ( 원료 ) 등을일정량적하하여부착시켜일정시간후의용량 ( 농도 ) 과치사율의관계로보통 LD 50 값을구하여효력을판정하며살충성분 ( 원료 ) 에서는가장기초적인시험법으로널리실시된다. 살충성분간의상대평가를하기에는적합하지만, 일반적으로제제시험에는적용하기어렵다. 이시험법에서는살충제를직접해충의가슴 ( 전흉배판 ) 에적용시키므로, 효과에영향을주는요인의개입이적으며또한, 해충한마리당처리용량 ( 농도 ) 을정확히알수있어비교적안정된결과를얻을수있는이점이있다. 2 대상약제 ( 원료및제제 ) 살충성분 ( 원료 ) 3 시험대상파리성충, 모기성충, 바퀴벌레등 4 장치검액의적하처리에이용하는미량적하장치 ( 그림1) 는선단에붙은주사침과일정규격의마이크로시린지및그집어넣는부분을움직이는마이크로미터로구성되어있다. 마이크로시린지끝에붙은침은보통약 45도로기울여사용하면다루기쉽다. 마이크로미터대신에디스펜서 ( 미국해밀턴사등 ) 와마이크로시린지의세트 ( 그림2) 도이용가능하다. 그림 1. 미량적하장치 - 149 -
그림 2. 해밀턴사디스펜서 5 순서 a. 살충성분 ( 원료 ) 을아세톤이나살충력이약한그외의용매에녹여, 보통 1.4 ~ 3 배정도의비율을가진 4 ~ 8단계의검액을조제한다. b. 에테르, 이산화탄소또는저온으로마취한해충을두꺼운종이위에등에살충성분을처리하는부위를위로하여나열한다. c. a. 에서제작한검액을장치를이용하여해충에정확히적하한다. d. 용매만을같은양을떨어트려대조군으로한다. 아무것도처리하지않은것도대조군으로하여설정한다. e. 처리후의해충은청결한용기로이동하여먹이를주며사육하며보통파리, 모기는 24 및 48 시간후, 바퀴벌레는 48 및 72시간후의치사율을구한다. f. 용량 ( 농도 ) 치사율로부터프로빗 (probit) 통계처리하여 LD 50 값과 LD 90 값을구한다. 6 비고 a. 해충은원칙적으로암컷성충을사용한다. b. 에테르로는깊이마취되면살아나지않는경우가있다. 또한이산화탄소에서는빨리살아나므로검액을주입해가면서적하하면좋다. c. 두꺼운종이위에나열하는수는 10 ~ 15 마리정도가좋다. d. 표준적하량은모기의경우 0.2 ~ 0.5 µl, 바퀴벌레는 1 ~ 3 µl 로하며, 바퀴벌레에서는가슴앞쪽양다리사이에, 다른해충에서는가슴뒤쪽에처리한다. 희석액의적하량은표준을나타낸것으로시험에사용하는벌레의종류에따라증감하여도좋으나정확한양을부착하여야한다. e. 필요하다면각농도단계별치사율로얻은한마리당 LD 50 값을해충의단위체중당환산한다. 이경우해충의평균체중을구하여한마리에대한 LD 50 값을평균체중으로나누어체중 1g에대한용량 ( 농도 ) 을 µg 등으로나타낸다. - 150 -
f. 치사율판정은해충이나약제의작용성에따라다르다. 기절한해충이살거나사망한것을파악할수있을때까지관찰을계속하며평가가안정된시점에서치사효과를판정하는것이바람직하다. g. WHO 가정용살충제효력시험법가이드라인 (guidelines for efficacy testing of house insecticide products, 2009) 에따라수행해도좋다. 2) 잔사접촉시험법 l 개요종이나판등의표면에약제를처리하고, 여기에해충을접촉시켜효과를조사하는시험법으로약제의잔류효과를보기위해서빠질수없는시험법이다. 또한이시험법에서는약제를처리하는처리면의종류나성상, 처리용량 ( 농도 ), 약제를처리한후해충을접촉시키기까지의시간등효력에직접영향을미치는다양한요인이있으므로시험조건을일정하게설정하여시험할필요가있다. 약제의처리면으로는여과지, 블록보드, 합판이널리이용되고있지만비흡수성스테인리스판이나유리판등도이용된다. 집먼지진드기류에서는관찰의용이함등에서여과지대신흑색라사지 ( 나사부스러기와털실부스러기를섞고접착제를가한다음종이로뜬것 ) 도이용된다. 처리면의종류에따라약제의흡수성이다르며, 대상해충에직접작용하는표면의약제잔류량이달라효력에영향을미친다. 살충제의주성분이나보조제의물리화학적성질과습도와처리면의수분함량등도관여하기때문에이용하는처리면의종류나환경조건은일정하게하는것이바람직하다. 잔사접촉시험법에서는한정시간접촉시험법과계속접촉시험법의 2가지접촉방법이있지만, 어떠한접촉방법이라도잔효성시험이실시된다. 시험목적에따라적절한접촉방법을선택한다. (1) 한정시간접촉시험법 ( 단시간접촉시험법 ) l 개요약제를잔류처리한실제장소에서는바퀴벌레등의시험대상은장시간연속적으로처리면에머무르는것보다, 통과하며단시간접촉하는경우가많다는견해에서이끌어낸시험법이다. 이시험에서는일정기준량의약제를처리한처리면에 2, 10, 20 분등의한정된시간만해충을접촉시키고그후는청결한장소 ( 용기 ) 로이동하여일정시간후에치사율을구한다. 접촉시간을사용목적등에따라, 1, 2, 4 시간등비교적장시간접촉시킨것도있다. 2 대상약제 - 151 -
살충성분 ( 원료 ), 유제 ( 油劑 ), 유제 ( 乳劑 ), 분제, 미탁제, 에어로졸제 3 시험대상파리성충, 모기성충, 바퀴벌레, 사람이, 벼룩성충, 빈대등 4 순서 a. 사용하는약제살충성분 ( 원료 ) : 아세톤이나케로신등의유기용매에녹여사용한다. 유제 ( 油劑 ) : 그대로사용한다. 유제 ( 乳劑 ) 수화제등 : 물로희석하여사용한다. 분제 : 그대로또는기제로희석하여사용한다. 에어로졸제 : 원액을그대로사용한다. b. 처리량액제 : 처리하는면이흡수성재질인경우 1 m 2 당처리량은 50 ml 을표준으로한다. 이양은원형여과지를사용하는경우, 직경 9 cm의여과지라면 0.32 ml, 직경 11 cm 라면 0.48 ml 에상당한다. 판등네모난처리면의경우는 10 cm 각이라면 0.5 ml 가된다. 처리면이비흡수성재질인경우, 표준처리량은 25 ml /1m 2 로한다. 분제 : 페트리디쉬등을이용하여, 1 m 2 당 1.5 ~ 15 g 처리하는것을표준으로한다. 이것은직경 9cm의페트리디쉬를사용할경우 10 ~ 100 mg에상당한다. 희석하지않은경우는이범위의처리량을상한으로하고, 예를들어 1/3 식용량 ( 농도 ) 을줄인군을 3단계이상설정한다. 처리량이현저히적어진경우에는동일분제의기제를이용하여미리희석한것의처리량을변경하지않고이용한다. c. 처리법살충성분 ( 원료 ) 액제 : 살충성분 ( 원료 ) 은유기용매로희석한액, 제제는그대로또는물로희석한것을유리판등의위에둔여과지등에일정량을피펫으로균일하게적하처리한다. 분제 : 페트리디쉬바닥에여과지를깔고그위에분제를가능한균일하게살포한다. d. 액제에서는약제처리후 1시간이상경과하여용매가충분히휘발한뒤해충을접촉시킨다. - 152 -
e. 처리면은파리, 모기에서는평형페트리디쉬에서바퀴벌레에서는내부벽면에버터나바셀린을얇게바른페트리디쉬로덮는다.( 그림3) 단, 증기압이높은약제로실시하는경우는밀폐된페트리디쉬에서는흡입효과가가미되어효과가높게나타나므로, 상면이폐쇄된유리링등을이용하며, 상면을철망으로덮는다. 또속효성을평가하는경우, 접촉시간중경과시간 ( 분 ) 마다기절된충수를관찰하고, KT 50 및 KT 90 값을구한다. 그림 3. 잔사접촉시험 f. 일정시간의접촉이종료된후해충은청결한용기로이동하고설탕물에적신탈지면등을먹이로넣으며일반적으로파리, 모기에서는 24 및 48 시간후, 바퀴벌레에서는 48 시간및 72 시간후에치사율을구한다. 1) 미량적하시험법 6비고 f. 에기술한것처럼필요에따라 7 일후에도실시하는등관찰을계속하는것이바람직하다. 이경우물과사육용사료조각을준다. g. 모기성충의시험에서는 WHO 테스트키트 ( 그림 4) 를이용한방법을준용해도좋다. WHO의테스트키트시험에서는약제를처리한장방형의여과지를원통의내측에돌려붙이고, 이것에모기를접촉시킨다.( 처리군 ) 이방법을이용하여단시간접촉하는경우, 무처리한원통을준비하여내벽에무처리종이를돌려붙이고 ( 무처리군 ), 접촉완료후에는원통을연결시켜처리군의모기를무처리군으로들어오게하여이동한다. 원통위는망, 아래는플라스틱제의슬라이드판으로막고있다. 그림 4. 테스트키트 1. 한쪽통내부에는, 약제를 처리한여과지를돌려붙인다. 2. 또다른통에해충을넣는다. 3. 중앙의슬라이드칸막이를당겨, 해충을약제지가붙은통안으 로도입하고, 칸막이를다시제 - 153 -
자리로한다. h. 벼룩성충을이용하는시험의경우 i) 10 x 10 cm로자른카펫이나블록보드등에살충성분 ( 원료 ) 에서는유기용매희석액, 제제에서는물희석액을 1 m 2 당 10 ~ 50 ml 의비율이되도록균일하게처리한다. ii) 해충을여과지위에둔직경 9 cm, 높이 6 cm의유리링내에놓고, 도망방지를위해상단을파라필름등으로덮는다. iii) 약제를처리한처리면에해충을넣은링을여과지마다두고뛰어오르는벼룩의몸통을상하지않도록여과지를뽑아내어처리면에벼룩을접촉시킨다. iv) 접촉시간은 10, 30 및 90 분을표준으로하며, 일정시간접촉종료후에는즉시해충을회수하여플라스틱캡에넣고수분이함유된여과지조각을주어보존하고 24 시간및 48 시간후의치사율을구한다. v) 이를이용하는시험의경우방법은파리 모기의시험에준한다. 해충을여과지위에두고페트리디쉬로뚜껑을하여 6 시간째일정의시간경과후및 12 시간, 24 시간후의기절한해충을관찰한다. 접촉시험중에는페트리디쉬내의건조를막기위해방울져떨어지지않을정도로물을머금은탈지면작은조각을페트리디쉬상부가장자리와뚜껑사이에끼워둔다. 5 비고 a. 1 군의해충수는보통바퀴벌레에서 5 ~ 10 마리정도, 그이외에서는 10 ~ 20 마리정도를이용한다. b. 예를들어, 조명등의시험환경조건또는해충의습성등이처리면의벌레의균일한접촉에영향을주는경우가있다. 특히모기의경우는용기의측벽에정지하는습성이있어수평면의잔사에대해서는접촉을기대하기어려운경향이있으므로 WHO형링을이용하는경우는키트를수직으로세워실시한다. c. 기절효과가빠른약제에서는치사량을섭취하기전에기절하여그후의약제수확이이루어지지않고치사하지않는경우가있으므로시간을두고관찰하는편이낫다. d. 약제에따라서는해충이기절하지않고그대로움직이지않게되는경우가있으므로주의해서관찰해야하지만이것도기절로간주한다. 또한기절해도그후사망하지않는경우가있다. e. 치사의판정 : 1) 미량적하시험법 6비고 f. 를참조. - 154 -
(2) 계속접촉시험법 l 개요접촉에서사망까지의해충약제에대한반응을경시적으로관찰할수있으며, 또한동시에속효성을평가할수있는시험법중하나이다. 일정기준농도의약제처리면에해충을계속적으로접촉시켜, 시간의경과에따른해충의기절한해충수로 KT값을구하는방법이다. 기본적인순서는단시간접촉법과동일한형태의시험법이다. 2 대상약제살충성분 ( 원료 ), 유제 ( 油劑 ), 유제 ( 乳劑 ), 분제, 미탁제, 에어로졸제 3 시험대상파리 모기성충, 바퀴벌레, 이, 벼룩성충, 빈대등 4 시험법해충을처리면에접촉시킨채, 2, 5, 10, 20 분시간경과별로기절한해충수를세어경과시간에따른기절한비율로 KT 50 값과 KT 90 값을구한다. 그이외는한정시간접촉시험법을준용한다. (3) 잔효성시험법 l 개요잔효성시험에서는약제를처리한여과지나판등을시험목적에따른환경조건으로보존하고, 일정기간별로위의 (1), (2) 와같은형태의시험을실시하여약제의잔류효과를조사한다. 이경우, 예를들어 1시간의접촉으로 90 % 이상의효과를얻을수있는일수 (LT 90 ) 등의기간을구하여평가한다. 2 비고 a. 처리면의보존은일반적으로실내의산광 ( 散光 ) 하의실온 (25 전후 ) 에서실시된다. b. 시험은약제처리후, 1, 2, 4 주후를기준으로실시한다. 목적에따라관찰횟수를늘리거나줄이는경우가있다. c. 처리면은이미접촉시험에사용되는것을반복하여사용하는경우와, 접촉시험에사용되지않고보존해둔것을사용하는경우가있다. d. 치사의판정 : 1) 미량적하시험법 6비고 f. 를참조. - 155 -
(4) 드라이필름시험법 l 개요시험관등의내벽에약제를부착시켜해충을투입하여처리면에접촉시켜효과를조사하는시험법이다. 집먼지진드기류와같이시험기구의틈으로도망하거나벽면을돌아다녀처리면으로의접촉이이루어지기힘든해충시험에이용된다. 미량저가시험을실시하기곤란한작은시험대상에대한살충성분 ( 원료 ) 등의기초효력을평가하는수단으로도이용되고있다. 2 대상약제살충성분 ( 원료 ), 유제 ( 油劑 ), 유제 ( 乳劑 ), 미탁제 3 시험대상주로집먼지진드기류나집쥐진드기를대상으로하지만다른해충으로도준용할수있다. [ 순서 ] ( 집먼지진드기류에대한시험 ) a. 유리제의작고긴병에살충성분 ( 원료 ) 인아세톤일정희석액을일정량적하하여, 그적하액으로긴병의내벽을균일하게코팅하도록병을돌리며처리한다. b. 부착시킨검액아세톤이충분히휘산할때까지실내에방치한다. c. 휘산후일정수의진드기를떼어투입하고, 뚜껑을덮어일정시간후에치사율을관찰한다. 4 비고 a. 직경 2.0 cm, 높이 4.5 cm, 용량 10 ml 정도크기의유리제긴병이다루기쉽다. 이사이즈의긴병이라면처리량은 0.1 ml 이적당하다. b. 약제에대해수단계의농도로시험을실시한다. c. 생존, 기절, 빈사의판별이어려우므로, 관찰은실체현미경하에서실시하며, 침끝으로자극을주어도미동조차하지않는개체나전혀움직이지않는개체만치사로간주한다. 접촉은 24 시간 ( 필요에따라 48 시간 ) 까지로한다. d. 액체의제제에대해서도이방법으로실시할수있으나, 아세톤과같이휘발성이강한용매가아니라, 접착성이있는용매등을사용하면, 집먼지진드기류가처리면에부착하는등효과에영향을미치므로, 용매만을이용한대조군의설정이불가피하다. - 156 -
e. 치사의판정 : 1) 미량적하시험법 6비고 f. 를참조 (5) 클립시험법 1 개요본시험법은해충이도망가는것을방지하고집먼지진드기류가처리면에확실하게접촉하도록개발된잔사접촉시험법이다. 2 대상약제살충성분 ( 원료 ), 제제 3 시험대상집쥐진드기, 집먼지진드기류등 ( 비상성곤충류이외에다른해충에서도응용이가능하다 ) 4 순서 a. 길이 10 cm x 폭 5 cm의크기로자른여과지또는라사지를준비한다. b. 살충성분 ( 원료 ) 은아세톤으로희석한수단계의검액, 제제로는일정농도에물등으로희석한검액을각각 0.25 ml (50 ml / m 2 ), 균일하게적하처리하고, 실내에보존하여용매등을휘산시킨다. 방충지는그대로이사이즈로절단하여이용한다. c. 종이를반으로접어두방향을클립으로막고개방된한쪽입구로부터작은붓등을이용하여살아있는진드기만 20 ~ 30 마리넣고이곳도클립으로막아밀봉한다.( 그림5) 분제의경우는동일한순서로작성한반으로접은종이가운데일정량의약제를넣고, 또진드기를넣어봉한다. d. 일정시간경과후에치사율을구한다. e. 잔효성조사는약제를처리한잔사를시험목적에따라일정기간실내등에보존하고동일한순서로실시한다. 5 비고 a. 약제처리는 10 cm x 10 cm 크기의종이로하며, 처리후반으로절단해도좋으나, 절단시처리면을문지르지않도록주의한다. b. 해충을넣어처리가종료된것은건조를피하기위해물을채운밀폐용기등고습도로보존한다. - 157 -
그림 5. 클립법 상부에서진드기를투입한후, 클립으로막는다. c. 별도로약제를처리하지않은대조군을설정한다. d. 보통, 일단사용한처리종이는관찰종료후파기하므로접촉시간마다동일한농도의것을몇장이나준비해둘필요가있다. e. 치사의관찰은실체현미경하에서실시하며침끝으로자극해도미동하지않는개체나전혀움직이지않는개체를치사로간주한다. f. 치사의판정 : 1) 미량적하시험법 6비고 f. 를참조 g. 제제가운데입제는그입도에따라본시험법에적합하지않은경우가있다. 3) 분무시험법 (1) 분무강하시험법 l 개요유리원통가운데검액을분무하여일정시간후거친입자가낙하한후에아래포트에준비한해충을세무 ( 細霧 ) 에노출시켜효과를조사하는시험법이다. 2 대상약제살충성분 ( 원료 ), 유제 ( 油劑 ), 미탁제, 에어로졸제등 3 시험대상파리, 모기, 바퀴벌레, 집먼지진드기류등 4 사용장치 a. 분무강하장치 ( 그림6) 내경 20 cm, 높이 43 cm의유리원통을높이 30 cm 정도의목제가대위에두고, 유리여닫이판을칸막이로하고원통바로아래에해충을넣는유리포트 ( 내경 15 cm, 깊이 18 cm 정도 ) 를설치한것이다. 원통위에덮은유리판 ( 직경 27 cm 정 - 158 -
도의원판이좋다 ) 에는중앙에검액을분무하기위한직경 2 ~ 5 cm의동그란구멍이뚫려있다. 분무시이외에는마개를해둔다. 유리원통, 유리포트, 여닫이판의접합부에는잔물방울 ( 霧滴 ) 이흐르는것을방지하기위해고무패킹을장착한다. 유리포트의상면에는 12 ~ 24 호체의철망을덮는다. 원통, 판, 포트는유리대신투명수지제라도괜찮으나, 씻어도약제가남을우려가있는소재는사용하지않는다. b. 에어컴프레서 ( 공기압축기 ) 검액분사에는 1.5 ~2.0 kg/cm의압력조절장치에장착된에어컴프레서를이용한다. c. 분사장치일반적으로자주이용되는도장용 R2분무기 ( 그림7) 를예로제시한다. 분무기는기초부 (D) 를고무관으로컴프레서와접속하여분사구근처에있는나사 (C의뒤쪽 ) 에검액용기 (E) 의나사 (C) 를고정한다. 피펫으로정확한양의검액을용기안에주입한다. 레버 (A) 를자기앞으로당기고용기안의검액을전량분무강하장치안으로분사한다. 5 순서 a. 살충성분 ( 원료 ) 은케로신등의용매에용해시키고제제는물등으로희석한다. 유 제 ( 油劑 ), 에어로졸제는그대로이용한다. 그림 7. R2 분무기 C 의뒤쪽좌상 ( 左上 ) 에소 용기를끼워넣는다. b. 유리포트의바닥면에는여과지를깔고해충을넣는다. 파리, 모기에서는 24 호체등으로뚜껑을덮는다. 바퀴벌레는포트내면상벽에얇게버터나바셀린을발라위쪽으로의도망을방지한다. 집먼지진드기류의경우에는직경 9 cm 정도의유리용기에넣고, 이것을유리포트중앙에둔다. c. 분사장치 ( 애터마이저그림8) 를이용하여최종제품을상부원판중앙의작은구멍에서 1.5 ~2.0 kg/cm 2 의압력으로분무한다. 분무량은파리 모기 진드기의경우 - 159 -
0.5 ml, 바퀴벌레는 1 ml 를표준으로한다. 에어로졸제에서는 1 초간분무를표 준으로하지만제제에따라서적당히조정한다. 그림 8. 애터마이저 A : 분사관 B : 소시험관 C : 모세관 D : 고무로컴프레서에접속 E : 미소공 ( 微少孔 ) F : 고무마개 G : 개구부 d. 위쪽의작은구멍을마개로닫고, 분무종료로부터 10 초후에아래방향의여닫이판을열어원통내에남은미세한분무입자를해충위로강하시킨다. e. 여닫이뚜껑을연후부터시간경과에따른기절한해충수를관찰한다. 집먼지진드기류에서는이와같은속효성평가를위한관찰은곤란하므로노출만실시한다. f. 그후, 10 ~ 20 분후에해충을별도의청결한용기에이동하여먹이와물을준다. 25 전후의실온하에서보존한다. g. 관찰은파리 모기에서는 24 시간 ( 또는 48 시간 ) 후, 집먼지진드기류에서는 24 시간 ( 필요에따라 48 ~ 72 시간 ) 후, 바퀴벌레에서는 48 시간내지 72 시간후에실시하며, 정상충, 기절한해충 ( 고심충 ), 치사충 ( 빈사충을포함 ) 수를기록한다. h. 3회이상반복한다. 6 비고 a. 피레스로이드와같은속효성약제를이용하여속효성을평가하는경우에는관찰을용이하게하기위해 1포트내의해충수를 10 ~ 20 마리정도로하며 3 ~ 5회반복하여실험을한다. b. 분무후여닫이판을당길때까지의시간에따라효력에격차가발생하기때문에그시간을명기한다. 보통 10초정도를기준으로한다. - 160 -
c. 집먼지진드기의경우도망방지가어렵기때문에시험에사용되는진드기를넣은후약제처리까지가능한신속히행한다. d. 장치가운데원판이나둥근구멍의크기는필요에따라변해도괜찮다. e. 집먼지진드기류에서는요기표면에얇은비닐이나식품용랩등으로뚜껑을덮고내부에물에적신여과지를넣어고습으로유지한다. f. 집먼지진드기류는실체현미경하에서신속히치사를관찰한다. 시험에사용되는진드기가들어간용기의내벽을세제물로씻고, 이것을여과지위에전개하여현미경아래에관찰해도좋다. g. 반복은보통 3 회실시한다. h. 치사의판정 : 1) 미량적하시험법 6비고 f. 를참조 (2) 직경분무시험법 l 개요원통위쪽부터내부로분무한약제에해충을직접노출시켜효과를조사하는시험법이다. 2 대상약제살충성분 ( 원료 ), 유제 ( 油劑 ), 유제 ( 乳劑 ), 미탁제, 에어로졸제 3 시험대상파리, 모기, 바퀴벌레, 집먼지진드기류등 4 장치분무강하시험법과동일한장치 ( 그림6) 을사용하지만여닫이판은사용하지않는다. 5 순서 a. 유리포트에해충을넣고철망을한다. 바퀴벌레의경우내면상벽에얇게버터나바셀린을발라위쪽으로의도망을방지한다. 바닥면에는여과지를깐다. 진드기의경우에는직경 9 cm정도의유리용기에넣어이것을유리포트중앙에둔다. - 161 -
그림 6. 분무강하장치 A : 유리원통 B : 유리여닫이판 C : 유리포트 D : 목제가대 E : 유리원판 F : 마개 G : 고무패킹 H : 놋쇠성철망 I : 받침 b. 용매로희석한살충성분 ( 원료 ), 유제 ( 油劑 ) 나물로희석한유제 ( 乳劑 ) 는분사장치 ( 애터마이저 : 그림8) 을이용하여 0.5 ml 를에어로졸제는일정의초 ( 秒 ) 수또는분사량을상부원판중앙의작은구멍에서 1.5 kg/cm 2 의압력으로분무한다. c. 위쪽의작은구멍을마개로닫고분무종료로부터 10 ~ 20 분간시간의경과에따른해충의기절한해충수를관찰한다. d. 노출종료후바로해충을청결한용기로이동하고먹이와물을주어 25 전후의실온하에보존한다. e. 24 시간후 ( 필요에따라 48 시간또는 72 시간후 ) 에사충수를관찰하여치사율을구한다. f. 보통 3 회반복한다. 6 비고 a. 피레스로이드와같은속효성약제를이용하여속효성을평가하는경우에는, 관찰을용이하게하기위해 1포트내의해충수를 10 ~ 20 마리정도로하며 3 ~ 5회반복하여실험을한다. b. 집먼지진드기는도망을방지하기어렵기때문에, 시험에사용되는진드기를넣은후약제처리까지가능한신속히행한다. c. 장치가운데원판이나둥근구멍의크기는필요에따라바꾸어도괜찮다. - 162 -
d. 진드기류는용기표면에얇은비닐이나식품용랩등으로뚜껑을덮고, 내부에물에적신여과지를넣어고습으로유지한다. e. 집먼지진드기류는실체현미경하에서신속히관찰한다. 시험에사용되는진드기가들어간용기의내벽을세제물로씻고, 이것을여과지위에전개하여현미경아래에관찰해도좋다. f. 반복은보통 3 회실시한다. g. 치사의판정 : 1) 미량적하시험법 6비고 f. 를참조 (3) 상형시험법 1 개요소형상자안에서약제를분사한후부터일정시간후에해충을풀어놓고약제의공간처리효과를보는방법또는해충을상자내에풀어놓은후약제를분무하는방법이다. 전자는해충을상자내로유입한후후자는약제의분무후에시간의경과에따른기절한비율을파악함으로서속효성을조사하는시험방법이다. 노출시간종료후해충을회수하여 24 ~ 72시간후의치사효과도관찰한다. 때로는한정시간노출시험법으로서, 일정시간만노출시킨후에치사효과를조사하는경우도있다. 2 대상약제살충성분 ( 원료 ), 액상제제, 모기향, 전자모기향등 3 시험대상파리, 모기, 바퀴벌레, 집먼지진드기류등 4 장치내용적 0.5 m 3 (63 cm x 63 cm x 125 cm높이 ) 정도의씻기편한유리또는투명한수지제의상자 ( 그림9) 를이용한다. 그림각변의길이는표준을나타낸것으로특별히규격화된것은아니다. 상자에는검액의분사구멍과해충이출입하는작은창이있다. 그림 9. 상형장치 ( 수지제 ) A : 내부작업을위해슬라이드한다. - 163 -
B : 약제의분사구멍 C : 벌레투입구 5 순서 a. 바닥에비광택성의종이를깐다. b. 분사장치를이용하여장치내에검액을 2 초간분사하고, 일정시간 (30 초정도 ) 경과후에하부의작은창으로부터내부로해충을풀어넣거나용기에넣은해충을넣는다. 또는장치내에해충을풀거나용기에넣은해충을도입하여, 위와동일한형태로분무장치를이용하여약제처리를한다. 제제에따라서는분사시간을적당하게조정한다. c. 검액에노출후 10 ~ 20 분등일정시간경과후에전해충을회수하여먹이와물을주고, 일정의시간후치사율을구한다. d. 한정시간노출시험법의경우는 10 ~ 60분간노출한후에회수하고, 일정의시간후치사수를관찰한다. 6 비고 a. 바닥에깐종이는한실험마다새로운것으로교환한다. b. 여기에기재한이외에한변이 60 cm ~ 1 m의입방체 ( 예 : 60 cm x 60 cm x 60 cm = 0.216 m 3 ) 의상형장치를사용하는것도가능하다. c. 대단히속효성이높은에어로졸제의경우는전자식미량분사장치를이용하여 0.3 초, 0.5 초또는 1 초간등의분사를적용한다. 이경우분사량을기록한다. d. 처리후결과시간마다기절한해충의비율을구하고프로빗법에의해 KT 50 값및 KT 90 값을산출한다. e. 진드기에서는기절개체를판별하기곤란하므로드라이필름시험법과동일한형태의관찰로, 일반적으로 24 및 72 시간후에치사수만을세어, 치사율을구한다.+ f. 모기향, 전자모기향은 WHO 가정용살충제효력시험법가이드라인 (guidelines for efficacy testing of house insecticide products, 2009) 에따라수행해도좋다. - 164 -
g. 치사의판정 : 1) 미량적하시험법 6 비고 f. 를참조 (4) 피트 그래디시험법 l 개요피트 그래디장치내에일정수의해충을풀어, 약제를분사후관찰창에서기절한해충수를조사함으로서효과를파악하는시험이다. 미국에서가정용살충제의효력시험법으로개발된것으로, 주로파리시험에이용되고있으나모기에도준용가능하다. 2 대상약제유제 ( 油劑 ), 에어로졸제 3 시험대상파리성충, 모기성충 4 장치피트 그래디장치는약180 cm 정육면체의사람출입이가능한금속제의상자로, 약제의분사구멍, 환기장치, 조명, 관찰창이설치되어있다 ( 그림10). 그림 10. 피트 그래디장치 A : 환기장치 B : 조명 C : 분사구멍 D : 출입구 E : 관찰창문 F : 환기창 5 순서 a. 바닥에비광택성종이를깐다. b. 장치내에파리의경우, 암수비를 1로하여시험에사용한다. 모기는암컷만사용한다. - 165 -
c. 약 10분경과후에시험에사용할에어로졸제 0.65 g ± 0.1 g 을분사창에서분사한다. 유제 ( 油劑 ) 의경우는애터마이저 (DeVilbiss Special Atomiser 등 ) 으로 12 ml 를분사한다. d. 분사후 5 분, 10 분, 15 분또는 KT 50 값을얻을수있는시간을 3점정도설정하여, 관찰창에서기절한해충수를조사한다. e. 관찰종료후바로환기를개시하는동시에기절한해충도포함하여모든해충을청결한용기로회수하여물과먹이를주어사육하고, 24 및 72 시간후의치사수를센다. 6 비고 a. 바닥에깐종이는한실험마다새로운것으로교환하고환기를충분히한다. b. 1회의해충수는파리의경우암수약 100 마리, 모기에서는암컷 50 마리를원칙으로하며, 3 회이상반복하는것이바람직하다. c. 에어로졸제를일정량분사하기위해, 미리최종제품에대해분무시간과분사량의관계를측정해두고, 일정량에상당하는시간만분사한다. 분사후의감량으로실분사량을구하여기록한다. d. 관찰시간내에해충전체가기절하지않은경우가있으므로, 해충을회수할때도망가지않도록주의한다. 20 분이내에해충의회수를종료하도록한다. e. 속효성은경과시간에따른기절한비율로부터, 또는치사효과는 24 시간및 48 시간후의치사율로평가한다. f. 모기향, 전자모기향, 에어로졸제는 WHO 가정용살충제효력시험법가이드라인 (guidelines for efficacy testing of house insecticide products, 2009) 에따라수행해도좋다. g. 치사의판정 : 1) 미량적하시험법 6비고 f. 를참조 4) 훈연시험법 (1) 통기원통시험법 1 개요상부가망뚜껑을통해통기되는원통내에서, 모기약으로점화또는전원을켜유효성분을함유한연기내지기류를만들어해충을노출시켜속효성을조사하는시험법이다. 2 대상약제 - 166 -
모기향, 모기매트, 액체모기약 3 시험대상모기성충 4 장치통기식원통장치 ( 그림11) 나무틀위에직경 5 cm의동그란구멍이뚫린유리판을올리고, 그위에내경 20 cm, 높이 43 cm의유리원통 2 개와짧은유리원통 2 개를차례로올린다. 각원통은고무패킹을두고사란망으로뚜껑을한다. 그리고그위에내경 20 cm, 높이 20 cm 의유리원통을모두고무패킹을두고 2 개올린다. 위에서 2 개째짧은유리원통은해충용으로한다. 해충을넣을때는하부의뚜껑은사란망으로괜찮지만, 윗뚜껑은규정된눈 (48 ~ 65 호체 ) 의합섬포를이용한다. 원통, 판, 포트는유리대신에투명수지제로도좋으나씻은후약제가남을우려가있는소재는사용하지않는다. 그림 11. 통기원통장치 A1 : 유리원통 A2 : 유리원통 B1 : 소원통 B2 : 소원통 C : 합섬포 D1 : 방충망 D2 : 방충망 E : 유리원통 H1 : 고무패킹 H2 : 고무패킹 H3 : 고무패킹 5 순서 G : 가대 - 167 -
a. 하부의유리원통내바닥부중앙 (E 유리중앙의동그란구멍하부 ) 에준비한최종제품을설치하고점화또는전원을켠다. b. 그후, 0.5 분, 1.0 분, 1.5 분, 2.0 분 3.0 분과같이 20 분간시간의경과에따른기절한해충수를관찰한다. c. 노출종료후, 즉시전해충을청결한종이컵등의용기로이동하고설탕물을머금은탈지면을주어 25 전후로보존한다. d. 24 시간및 48 시간후에기절한해충수, 사충수를관찰한다. 6 비고 a. 해충수는 10 ~ 20 마리로하며보통 3회반복한다. b. 경과시간에따른기절률로 KT 50 값과 KT 90 값을구한다. c. WHO 가정용살충제효력시험법가이드라인 (guidelines for efficacy testing of house insecticide products, 2009) 에따라수행해도좋다. d. 치사의판정 : 1) 미량적하시험법 6비고 f. 를참조 (2) 정량훈연시험법 1 개요밀폐장치내에해충을풀고그가운에점화한모기약제를넣어일정시간훈연한후빼내는해충을노출시켜속효성을조사하는시험방법이다. 2 대상약제모기향, 모기매트, 액체모기약 3 시험대상모기성충 4 장치통기식원통장치와, 분무강하장치를이용한다. 후자의경우는고무패킹을사이에두고, 상하에유리판이있는내경 20 cm, 높이 40 cm의유리원통을높이 30 cm 정도의가대위에둔다. 아래쪽유리판은중앙에경 5 cm의원구멍이있는것을준비한다. 5 순서 - 168 -
a. 장치내에해충을푼다. b. 모기향은세워수평으로설치하고, 일단또는양단에점화한다. 정상의훈연상태가되기까지사전에 3 분가량경과시킨검체를아래쪽원구멍으로장치안에넣는다. 액체모기약이나모기매트에서는전원을켠후로부터 30 분정도경과한검체를동일한형태로원구멍으로장치내에도입한다. c. 검체를장치내에서밀봉한채일정시간훈연한후재빨리검체를빼낸다. d. 바로해충을도입하고, 그후의시간경과에따른기절한비율을구한다. f. 일정시간후에전해충을청결한용기로이동하고물 먹이를주어 24 시간후또는 48 시간후에치사수를관찰한다. 6 비고 a. 1회시험해충수는 10 ~ 20 마리로하며, 이것을 3 회이상반복한다. b. 선향에서는단위시간당연소량을조사하여명기한다. c. 훈연시간 : 선향의경우는 0.2 g 또는 0.5 g 등일정량의검체를채취하여그것을장치내에서모두연소할때까지밀폐해두는방법도있다. 모기매트나액체모기약의경우는전원을켜는시간을 1 분, 2 분간등을표준으로하지만이시간은목적에따라적당변경가능하다. d. 모기매트나액체모기약은통전의경과시간에따른휘산량이다르므로, 통전개시후유효사용기간의초기, 중기, 후기등수회의시간대에대한시험을실시한다. e. 노출시간을 20 분간정도로하여경과시간에따른기절률로 KT 50 값과 KT 90 값을구한다. f. 노출종료후즉시해충을모두회수하고, 24 ~ 72 시간후에치사율을구한다. g. 상형장치를이용하여동일한형태의시험을실시할수있다. h. WHO 가정용살충제효력시험법가이드라인 (guidelines for efficacy testing of house insecticide products, 2009) 에따라수행해도좋다. i. 치사의판정 : 1) 미량적하시험법 6비고 f. 를참조 5) 배지혼입시험법 (I) 1 개요 - 169 -
파리에대해실시한다. 유충의사육배지중에일정량의살충제를처리하고그중에 2 ~ 4일령의유충을풀어그대로사육해우화율을조사하여효과를판정하는시험법이다. 이방법은식독이외에접촉독의효과가더해져종합적인평가가된다. 2 대상약제살충성분 ( 원료 ), 분제, 수화제, 유제 ( 油劑 ), 유제 ( 乳劑 ) 등 3 시험대상집파리유충등 4 순서 a. 시판되는분말사료, 밀기울, 물을 1:1:2 ~ 2.5 의비율로혼합한배지 50 g을페트리디쉬등에넣는다. b. 살충성분 ( 원료 ) 은아세톤과에탄올로희석하여, 수단계농도의검액을준비한다. 유제 ( 乳劑 ) 나수화제등은물, 유제 ( 油劑 ) 등은케로신등, 분제등은탤크등의담체로희석한다. c. 검액 1 ml 또는 1 g을앞서기술한배지에첨가하여잘혼합한다. d. 해충 1 군 50 마리를이페트리디쉬에풀어목면포로덮고고무밴드로막는다. e. 보통 1 주간후에번데기 ( 용화 ( 蛹化 )) 개체를꺼내고, 이것을별도의청결한용기로이동하고, 그 1주후에우화수를관찰하여치사율을구한다. 5 비고 a. 무처리대조군을설정하고, 그우화율로최종제품의우화율을보정한다. 유충에서우화까지의과정을관찰하기때문에무처리대조군에서도사충이나타나기쉽다. 그와같은경우는 Abott의보정식으로처리군의죽은해충의비율을보정한다. b. 곤충생장조절제 (Insect Grow Regulator, IGR) 의시험에서는사용하는유충의일령은최종제품의작용성과목적에따라선택한다. 해충의전체가우화또는치사하는시점까지사육하고우화저해율 ( 다음식 ) 을구한다. 우화저해율 (%) = ( 처리군의우화저해율 - 대조군의 우화저해율 ) (100% 대조군의우화저해율 ) X 100 c. 쉬파리유충등대상에따라서는배지의조성을바꾼다. - 170 -
d. 배지량에대해유충수가적으면곰팡이에의한영향을받는경우가있으므로주의한다. e. 번데기화되는 ( 용화 ) 상황은관찰하기어렵지만, 필요한경우에는용화수, 용화이상, 유충사망에대해서도관찰한다. f. 최종제품을배지에혼입하지않고, 표면에처리하는방법도있다. g. 얻은결과는 LC 50 값과 IC 50 값 (50% 우화억제값 ) 으로나타낸다. 6) 배지혼입시험법 (II) 1 개요주로집먼지진드기류에대해실시한다. 살충제를일정의농도로혼합한배지에서진드기를사육하여일정기간후의번식상황을무처리배지에서사육한경우와비교검토하는시험법이다. 따라서, 단기적인약제의치사효과라기보다는장기간에걸친개체군의증식에주는영향을보는시험이다. 관찰에시간이걸리는결점이있지만, 비교적안정된결과를얻을수있다. 진드기는미소하여다른곤충류와같은미량적하시험을하기어려워본법은집먼지진드기류에대한약제의기초적인평가를시행하는과정에서중요한방법의하나로생각해도좋다. 2 대상약제살충성분 ( 원료 ), 제제 3 시험대상표피진드기, 긴털가루진드기등집먼지진드기류 4 순서 a. 시판되는곤충사육용분말사료를건열건조한후, 물을더하여긴털가루진드기용에는 15 %, 표피진드기용에는 12 % 로함수량 ( 수분함유량 ) 을조정하여사육배지를준비한다. b. 아세톤으로용해시킨살충성분 ( 원료 ) 나물등으로희석한제제를, 배지중량에대해일정농도가되도록넣어잘혼합하고, 이를페트리디쉬나샘플병에취한다. c. 진드기가잘번식한배지에서, 진드기를배지별소량으로취하여약제를처리한배지에넣고, 가볍게혼합한다. - 171 -
d. 이것들이들어있는페트리디쉬나병은폴리에틸렌랩등으로뚜껑을하여, 침끝으로진드기가도망나가지않을정도의작은공기구멍을뚫고, 표피진드기는상대습도 60 ~ 80 %, 긴털가루진드기는 75 ~ 90 % 의환경하에보존한다. e. 일정기간후, 처리한배지의일부또는전부를취하여, 샘플링법, 시야법, 포화식염수부유법등으로살아있는진드기수를관찰한다 ( 아래 6 참조 ). f. 별도로약제를처리하지않은무처리대조군을설정하여양측의살아있는진드기수의차로, 증식억제율을산출한다. 5 비고 a. 배지에사용하는사료는진드기가생식하고있는경우, 함수량이일정하지않은경우등의이유로, 시험에사용되기전에건열건조한후에함수량을조정하여시험에사용한다. b. 배지량은 5 g ~ 50 g을표준으로한다. c. 투입진드기수의기준은배지 1 g 중, 긴털가루진드기는 100 ~ 200 마리, 표피진드기는 200 ~ 500마리로한다. d. 혼합한검액량은배지중량의 1 % 정도를표준으로한다. e. 관찰은긴털가루진드기의경우 4주까지, 표피진드기는 6 ~ 8주까지수회한다. 이사이, 표피진드기에서는배지를 1회섞어주는것이좋다. 진드기수가적으면곰팡이가생기거나배지가고화될영향이있으므로주의한다. f. 방충지의효력효과를본법으로시행할경우종이를 1 cm 정사각형크기로자르고, 이것을배지 50 g 당 50장, 100장, 200장과같이넣어혼화하고, 시험을실시한다. g. 진드기의투입은배지에혼입한용매가충분히휘산된후실시한다. 6 진드기의수관찰 a. 샘플링법배지를잘교반하여 100 mg정도를정확하게칭량하여취하고, 이를실체현미경하에서관찰하여, 유병침 ( 有柄針 ) 등으로살아있는진드기를 1 마리씩제거하면서전체수를센다. 단, 진드기수가현저하게많은경우에는보다이것을동일의배지에서일정비율로희석한후에동일한형태의방법으로관찰하여도좋다. 이경우, 관찰로얻은수로희석배율을곱하여본래값으로한다. b. 시야법 - 172 -
분말배지를잘교각하여페트리디쉬등의용기바닥에깔고, 직접실체현미경하 (x20) 에서한시야내에볼수있는살아있는진드기수를센다. 시야를바꿀때마다배지를교각하여한번의관찰당 6시야를본다. c. 포화식염수부유법적량의배지 ( 보통 0.05 ~ 0.5 g 정도 ) 를취하여와이드맨플라스크안에넣고, 포화식염수를이용하여진드기를부유시켜, 진드기가부유하고있는상층의물을흡입장치를장착한여과지위에이동하여여과한다. 관찰이쉽도록여과지를 0.1 % 메틸렌블루수용액으로염색한후, 실체현미경 (x20) 을이용하여살아있는진드기를센다. 부유시간은원칙적으로 10 분으로한다. 계수는 1 시야당 3 회반복하여실시한다. 7) 약액침지시험법 1 개요간단히침지시험법이라불리는것이다. 최종제품의희석액중에모기의유충을풀어, 24 시간후의치사수를관찰한다. 보통, 유제 ( 乳劑 ) 및수화제의시험에적용하지만, 이방법은살충성분 ( 원료 ) 의효력시험에도이용할수있다. 이경우는살충성분 ( 원료 ) 을용매에용해시킨것을물안에분산시켜적용한다. 2 대상약제살충성분 ( 원료 ), 유제 ( 乳劑 ), 수화제등 3 시험대상모기유충 4 순서 a. 살충성분 ( 원료 ) 은에탄올로용해 ( 용해하기어려운경우는아세톤에현탁 ), 제제는물로일정농도로희석하여 5 ~ 6 단계의약액을만든다. 희석을필요로하지않는분제나입제의경우, 그대로사용하기때문에양을바꾸어단계를설정한다. b. 살충성분 ( 원료 ) 에서는에탄올의최종농도가 0.5 %(v/v) 가되도록, 우선해충 20 ~ 50 마리를 199 ml 물을넣은용기에풀고, 다음으로살충성분 ( 원료 ) 의에탄올희석액 1 ml를첨가하여교반한다. c. 24 시간후 ( 필요에따라 48 시간후 ) 의치사수를관찰하고, 치사율을구한다. 곤충생장조절제 (Insect Grow Regulator, IGR) 의경우는 1 ~ 2 주후의우화저해율을구한다. - 173 -
5 비고 a. 희석에사용하는물은증류수, 순도가높은물, 하루이상받아놓은수도물등을이용하며, 염소가포함된받은수도물은사용하지않는다. b. 분제나입제에서는 250 ~ 500 ml 용량의비커등깊은용기를사용하는편이낫다. c. 유충은미리물에담궈둔차 ( 茶 ) 망가운데스포이드로이동한다. 일정수를차망안에넣으면, 재빨리물을제거하고시험에사용하는용기에신속하게이동한다. d. 생사의관찰시용기바닥에가라앉고, 부상하지못한것은사충에포함한다. e. 곤충생장조절제 (Insect Grow Regulator, IGR) 을이용하는시험에서는해충의발육단계를정확히갖춘다. 예를들어키친합성저해제의경우는 2령, 유약호르몬같은약제는번데기가되기직전의개체를사용하는것이좋다. f. 곤충생장조절제 (Insect Grow Regulator, IGR) 이외의경우 24시간후에용화된것은해충수에서제외하여죽은해충의비율을산출한다. 곤충생장조절제 (Insect Grow Regulator, IGR) 제는전해충이사망하는지우화까지사육하여우화저해율을구한다. g. 잔효성시험에서는일정의시험조제액을실온또는항온실에보존하여일정기간마다위의방식에준하여잔류효과를조사한다. 이경우, 예를들어 24시간침지로 90 % 이상의효과를얻을수있는지속기간, 일수등을구하여평가한다. 이경우에오수를이용하여조제액을만들어시험하면실용효과의추정에도움이된다. 8) 약액계속접촉시험법 1 개요유충이물이약간고여있는곳에생식하는파리종에대해적용할수있는시험법이다. 일정농도의약제를이용하여침지시간을바꾸어 3단계이상으로조제한약액시리즈에서단시간침지를시행한경우 ( 약액단시간접촉법 ) 과침지시간을일정하게하여수단계의약액을적용하는경우 ( 약액계속접촉법 ) 가있다. 단시간침지를실시하는경우침지를마친해충은물로씻은후그대로사육하고일정시간후치사율을조사한다. 전자의경우는시험에사용되는용량 ( 농도 ) 에서 50 % 치사침지시간, 후자에서는 50 % 치사농도를구할수있다. 여기에서는약액계속접촉법에대해서술한다. 2 대상약제살충성분 ( 원료 ), 유제 ( 乳劑 ), 수화제등 - 174 -
3 시험대상집파리, 쉬파리유충등 4 순서 a. 살충성분 ( 원료 ) 은 10 % 에탄올용액에용해하거나시험유제 ( 乳劑 ) 를조제하여이를바탕으로약액을만든다. b. 각희석액 3 ~ 5 ml 를직경 9 cm의페트리디쉬에취한다. c. 종령후기의해충 20 ~ 30마리를그안에넣고페트리디쉬를철망등으로덮어고무줄로막는다. d. 그페트리디쉬를잠시물을가득채운용기등에넣고, 습도환경을 90 % 이상으로유지하여그대로보존한다. e. 24 시간및 48 시간후의치사수를관찰한다. 48 시간후를표준판정시간으로하고, 그후보통습도환경으로이동하여보존하며우화까지관찰한다. f. 곤충생장조절제 (Insect Grow Regulator, IGR) 을검체로한경우, 도중치사는관찰하지않고, 전 ( 全 ) 해충이사망하거나, 우화하기까지보존 관찰하여우화저해율을구한다. 5 비고 a. 해충을약액에비교적장시간계속적으로접촉시키기때문에약액층의깊이가문제가되어용기와시험에사용되는액량을표준화시킬필요가있다. 해충은기어오르는성질이있으므로적은액량으로실시하는관계상페트리디쉬의상부를흡수성이높은천으로덮으면해충에부착하여운반된약액이그천에흡착되며, 극단적인경우에는페트리디쉬안의약액이거의보이지않게되는경우큰영향을미치므로뚜껑은흡수성이없는재질을선택하여사용하고, 약액의증산을막기위해시험과정동안용기안을고습도로유지할필요가있다. b. 얻은결과로부터 LC 50 값과 LC 90 값 ( 곤충생장조절제 (Insect Grow Regulator, IGR) 에서는 IC 50 값과 IC 90 값 ) 을계산하면, 다른약제와비교가쉽다. c. 치사의판정 : 1) 미량적하시험법 6비고 f. 를참조 9) 살분강하시험법 1 개요 - 175 -
미리해충을풀어놓은유리원통하부의작은구멍에서, 일정량의분제를일정압력으로불어올려대상해충에부착시켜, 해충의경시적낙하상황을조사하여속효성등을판정하는시험법이다. 2 대상약제분제 3 시험대상집파리성충, 바퀴벌레등 4 장치본체 : 주요부분은분무강하시험장치와동일하다. 그림12의오른쪽에나타낸것처럼상하에직경 27 cm의유리제판 B, C 를가진내경 20 cm, 높이 43 cm의유리원통 A를, 높이 30 cm 정도의목제가대F 위에둔것이다. 위쪽에서부터해충을도입한다. 그후직경 5 cm의원구멍이있는위쪽원반의구멍에마개로뚜껑을해둔다. 아래쪽원판의중앙에뚫려있던직경 5 cm의원구멍은분제를분출하여원통안의해충을처리하기위한것으로살분외는고무마개 D로막아둔다. 살분용깔때기 : 그림왼쪽은, 분제를넣고분출시키기위한깔때기로구경 3.5 cm이다. 또 1 cm씩바깥방향으로벌어져아래판의원구멍 (D) 에 16 호체의철망G를사이에두고밀착하여시험전분제의손실을막도록되어있다. 철망은목제틀 H로깔때기에씌우듯이가장자리가되어있다. 중앙의구슬 I는분제가떨어지지않도록한것이다. 깔때기아래쪽은에어컴프레서에연결한다. 에어컴프레서 : 1.5lg/cm 2 정도의압력조절장치에장착된것 그림 12. 살분장치와 D 에장착하는 깔때기 ( 좌 ) A : 유리원통 B : 유리원통 C : 유리원통 D : 고무마개 E : 코르크마개 - 176 -
F : 목제대 G : 16 호체 H : 목제틀 I : 구슬 5 순서 a. 원통내에해충을도입한다. b. 분제 100 mg 을깔때기로취하여, 아래쪽원판의고무마개를벗기고원구멍으로깔때기를밀착유지한다. c. 에어컴프레서로부터약 3 초간송풍하고, 분제를원통내로분출시킨다. d. 분출종료와동시에고무마개를한다. e. 시간경과에따른기절한해충수를관찰한다. f. 기절한해충의관찰종료후, 해충을청결한용기로이동하고, 집파리는 24 시간및 48 시간후, 바퀴벌레는 48 시간및 72 시간후에치사수를관찰한다. 6 비고 a. 피레스로이드와같은속효성약제의경우해충수는 10 ~ 15 마리가적당하며 3 회이상반복한다. b. 저용량 ( 농도 ) 을처리할때에는살포량을변경하기어려우므로, 효과에영향을주지않을증량제로희석하여 100 mg을살포한다. c. 분출압력은약 1.5 kg/cm 2 로한다. d. KT 50 값은시간의경과에따른기절한비율로, 또는 LD 50 값은치사율로구한다. e. 농업해충용시험에서이용되는살분기 (bell-jar dusting chamber 등 ) 도사용할수있다. f. 치사의판정 : 1) 미량적하시험법 6비고 f. 를참조 10) 식독시험법 1 개요 - 177 -
적당한크기의용기에해충을풀고, 검체를용기안으로배치하여자유롭게섭식시켜, 일정시간후의치사수로효과를판정하는시험법이다. 특히바퀴벌레를대상으로하는독이제의경우, 검체만을준단독군 ( 강제섭식법 ) 외에, 검체와동시에보통의식료를준무처리군과약제처리군비교군을설정하여섭식기호성을비교조사하는시험 ( 임의섭식법 ) 도필요하다. 효과가식독과접촉독의복합작용으로나타나는경향이있기때문에먹이의효과만을평가할수있는방법을설정하여실시한다. 2 대상약제독먹이제 3 시험대상바퀴벌레, 파리성충 (1) 바퀴벌레에대한시험 1 시험용기도망방지용으로내벽에버터등을얇게바른바닥면이 100 cm x 100 cm 정도의넓이인용기를준비한다. 2 순서 a. 용기는작은사이즈라도괜찮으나, 좁아서해충이약제에직접접촉할기회가많아지지않을정도또는검체를분할해야하는상황이발생하지않도록적당한넓이를확보한다. b. 용기내에바퀴벌레가숨어지낼수있는집 ( 블록보드판등의틈을벌려겹친것등 ) 을배치한다. c. 용기내에 10 ~ 50 마리의벌레를놓고먹이와물을주어순화시킨다. d. 독이를급수용물과함께시험용기내에넣고 7 ~ 10일간일정일수마다치사수를관찰한다. 3 비고 a. 용기의크기는해충의종류, 주령등에따라조절한다. 깊이는바퀴벌레가나오지않을정도로, 물교환등다루기쉬운깊이로한다. b. 시험은독이단독으로설치하는경우 ( 강제섭식법 ) 와독이를무독이와무처리군과약제처리군비교하는경우 ( 임의섭식법 ) 양쪽으로시험한다. c. 대조군에는사육용먹이 ( 실험동물용고형사료등 ) 를사용한다. - 178 -
d. 관찰은전 ( 全 ) 해충이사망하기까지실시하는것이좋으나, 일반적으로독이배치후 1주간후또는해충의 90 % 이상이사망할때까지관찰한다. e. 시험은 3 회이상반복실시한다. f. 죽은해충의비율의경일변화를구하여대조약제와비교한다. 평가는 LT 50 값 (50 % 치사일수 ) 으로실시한다. g. 시험에사용될독이의섭취량을시간에따라측정하며, 섭식의정도를고찰하는것이바람직하지만, 측정시, 흡습보정이필요하므로동일한습 온도조건하에보관한독이로보정한다. (2) 집파리에대한시험 1 대상약제독먹이제 2 용기 20 cm 이상의철망이나나일론메시의케이지또는상형쳄버등을이용한다. 3 순서 a. 케이지또는쳄버안에독이, 급수용물을배치한후성충을 20 ~ 30 마리푼다. b. 경시적인기절한해충수및 24 시간후의치사충수를관찰하여치사율을구한다. 4 비고 a. 사용하는용기는용법용량의설정을할목적도가지고있으므로지나치게작지않도록제제에맞는크기를확보한다. b. 강제섭식법과임의섭식법양쪽으로실시한다. c. 대조군에는굵은설탕이나가루우유와설탕을혼합한먹이등을사용한다. d. 집파리를대상으로하는소위유인살충제로칭하는독이제의경우는시간의경과에따른살충수를조사한다. e. 치사율의경시적변화로 LT 50 값을구한다. 11) 경구투여시험법 1 개요 - 179 -
설탕물에용해시킨살충성분 ( 원료 ) 이나제제를한마리씩마이크로실린지를이용하여경구투여에의한살충효과를평가하는시험법이다. 2 대상약제살충성분 ( 원료 ), 독먹이제 3 시험대상파리성충, 바퀴벌레등 4 사용장치미량적하시험에서이용하는것과동일한장치를사용한다. 5 순서 a. 해충은바퀴벌레의경우는투여전반일 ~ 1일간, 집파리의경우는수시간 ~ 반일간물, 먹이모두주지않고둔다. b. 살충성분 ( 원료 ) 은일정농도가되도록초음파파쇄기등으로 5 % 설탕물에용해 ( 또는충분히현탁 ) 시켜투여하는검액을준비한다. c. 작은긴병에해충을 1 마리씩넣어거즈로뚜껑을한다. d. 마이크로실린지끝에장착된주사침을거즈틈으로투입하여검액을해충에게제공하여자발적으로흡식시킨다. e. 경구흡입한개체는투여군별로정리하여청결한용기에넣고, 먹이와물을주며 24 시간후및 48 시간후에치사수를관찰하여치사율을구한다. 6 비고 a. 작고긴병은집파리에서는 3 ml 정도의용량의것이좋으나해충에맞게적당한크기의것을사용해도좋다. b. 검액을주어도자발적으로먹지않는개체가있으므로미리많은해충을준비하여경구흡입한개체만평가한다. c. 흡음시킨검액량은파리는 0.2 ~ 1 µl, 바퀴벌레는 1 ~ 2 µl로한다. d. 검액이경구이외의대상해충의몸에묻지않도록주의한다. 12) 기피시험법 (1) 흡혈해충에대한시험법 - 180 -
l 개요쥐를흡혈원으로하여이용한다. 쥐를넣은철망에검액을처리하여기피효과를보는시험법이다. 2 대상약제살충성분 ( 원료 ), 기피제 3 시험대상빨간집모기, 흰줄숲모기 4 순서 a. 철망제, 합섬제또는한랭사를가득채운게이지를준비한다. b. 2 ~ 5 % 의설탕물을준비하고, 케이지안에해충을푼다. c. 철망으로쥐를고정하고몸통전면에균일하도록약제 0.5 ~ 1.0 ml 를약 10 cm 떨어진곳에서분무처리한다. d. 약제를처리하고바람에쐬어말린후, 케이지안에매달아쥐에앉거나흡혈하는충수를관찰한다. e. 그후 2 시간을두고 3 회이상, 흡혈해충수를관찰한다. f. 위순서를무처리쥐에대해서도실시한다. g. 시험종료후냉동등으로해충을기절시키고여과지위에서으깨어흡혈, 무흡혈의판정하여흡혈저해율을구한다. 5 비고 a. 케이지의크기는 30 x 30 x 30 cm 정도이상이좋다. b. 해충은흡혈력이높아진단계끝의흡혈암컷성충 50 ~ 100 마리를이용한다. c. 시험은쥐를고정한철망에만핀셋등으로약제의 0.3 ~ 1 ml 를적하하여시행하는경우도있으나, 특히흰줄숲모기를이용하는경우는약제를처리한무리가있으면, 그장소에서흡혈하기때문에충분히주의하여겉과안을틈없이균일하게처리한다. d. 1 케이지당 2 마리의쥐를이용하는것이바람직하다. e. 무처리대조군도설정한다. - 181 -
f. 충분히흡혈한개체외에는케이지를이용한관찰로는판별하기어려우므로, 최종 g 의방법으로확인한다. g. 경과시간에따른기피율 ( 다음식 ) 을구한다. 기피율 (%) = ( 무처리군의흡혈해충수 - 처리군의 흡혈해충수 ) X 100 무처리군의흡혈해충수 h. 흰줄숲모기와빨간집모기는흡혈활동시간대가다르므로, 적절한시간대를선택할것 i. 24시간후흡혈충을거의얻을수없을때는, 관찰시간을 48시간후등으로연장하여다시관찰한다. (2) 바퀴벌레에대한시험법 l 개요바퀴벌레가숨는장소에기피제를처리하여그효과를확인하기위한시험법이다. 약제처리군단독으로시험하는방법과무처리군과약제처리군을동일한용기내에서시험하는방법이있다. 단독배치로충분한효과를보지못한경우에는무처리군과약제처리군비교평가하는의미는크지않지만, 단독처리로효과를본경우에는실용성을예측하기위해무처리군과약제처리군의평가가빠질수없다. 2 대상약제살충성분 ( 원료 ), 제제 3 시험대상바퀴벌레 4 용기옷상자등 5 순서 a. 바퀴벌레의도망을막기위해, 용기내부벽면에바셀린이나버터등을얇게도포한다. b. 숨을장소 ( 블록보드판등의틈을벌려겹친것 ) 준비한다. - 182 -
c. 숨은장소에물을적신탈지면과먹이를함께용기안에배치한다. d. 준비해둔숨는장소에, 최종제품의일정량을균등하게처리하고말린다. 무처리군 과약제처리군비교하는경우에는 2 곳은처리군, 나머지 2 곳은무처리군으로한 다. e. 용기내바닥면의 4 방향에숨을장소를배치한다. f. 해충을용기내에푼다. g. 1 일후에각숨은장소안에있는바퀴벌레수를세어기피율을구한다. 6 비고 a. 용기는바닥면적 100 x 100 cm 이상등큰것이라도괜찮다. b. 숨는장소는두꺼운종이로만들어져작은상자양단에출입구를열어둔것, 15 x 3.5 cm 정도의크기로자른블록보드판 3 장으로안이빈 3 각기둥을만든것또는 10 cm x 10 cm 정도의블록보드판 2 장을 1 cm 정도의틈을두고겹친것등을이용한다. c. 숨는장소는약제가처리되어있지않아도배치위치에따라영향이미치기쉬우므 로숨는장소는 1 일마다배치위치를교환하여관찰한다. 또한숨는장소는늘 새로운것을사용한다. d. 해충은 100 마리를이용한다. 암수어느한쪽이나또는양쪽모두이용해도좋으 나암수의수는명확히해둔다. e. 시험은 3 회이상반복하여실시한다. f. 야간또는어두운조건에서는바퀴벌레는잠복장소에서나와활동하기때문에관찰 시간은셸터로의잠복시간대인오전에서한낮이되도록시험설정을한다. g. 기피판정은다음식으로기피율을구하여한다. 기피율 (%) = ( 무처리군의바퀴벌레수 -처리군의바퀴벌레수 ) X 100 무처리군의바퀴벌레수 h. 잔효성을볼경우에는약제처리한숨는장소를실온에보존하면서일정기간경 과마다동일한방법으로시험을반복한다. - 183 -
(* 털진드기에대한시험법은없진않으나, 확립되어있다고할수없으므로, 현시 점에서표준시험법으로제안하기적당하지않다고생각되어기재하지않는것으로 하였다.) - 184 -
- 185 -
- 186 -
μ μ - 187 -
μ - 188 -
μ μ - 189 -
보정살충율 실험군의치사율 대조군의치사율 대조군의치사율 - 190 -
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보정살충율 실험군의치사율 대조군의치사율 대조군의치사율 - 192 -
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보정살충율 실험군의치사율 대조군의치사율 대조군의치사율 - 194 -
- 195 -
보정살충율 실험군의치사율 대조군의치사율 대조군의치사율 - 196 -
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보정살충율 실험군의치사율 대조군의치사율 대조군의치사율 - 198 -
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가정용살충제효력평가법 가이드라인 안 - 202 -
목차 서론 실험실내시험 살충제고유의살충작용 훈증활성 에어로졸주성분의살충력 다른살충제주성분에대한교차내성 제제의생물학적효능 현장시험 참고문헌 별 첨
서론위생해충의종류는모기 파리 바퀴 진드기등다양하지만이중특히모기는뇌염 말라리아등치명적인질환을매개할수있어보다효과적인살충제의개발이요구되고있다 감염병의예방을위해국가및지방자치단체는예방및방역대책을수립하고시행하여위생해충관리를하고있으며가정에서는코일형모기향 전자액체모기향 전자매트모기향 에어로졸등다양한제형의살충제를이용하여곤충매개성질병예방을하고있다 가정용살충제는인간과환경에는저독성이면서모기등위생해충으로부터우리를효과적으로보호하는데그목적이있다 그러므로가정용살충제의유효성분은인체에안전하면서모기등에대한충분한살충력과유효한함량을가지고있어야한다 이에동가이드라인에서는과학적인방법으로가정용살충제효력을평가하기위한표준화된절차를제공하고자한다 이가이드라인은살충제유효성분에대한적정농도 내성 제제의생물학적효능등의실험실내시험과가정용살충제효력평가현장시험에대한지침과절차를제공한다 또한동지침은실험실내시험을활용하여위생해충에대한살충제저항성평가에도활용할수있다 가정용살충제의안전성과독성데이터에대한분석은이가이드라인에서는다루지않는다 실험실내시험과현장시험에서가정용살충제사용과연관된부작용이나바람직하지못한특성은모두기록하고보고한다 시험프로토콜은부작용보고와의학적조치에대한사항을반드시포함한다 이가이드라인에서수행되는모든생물학적시험에사용되는실험용곤충은사육환경및사육자에의해특성이바뀔수있다 따라서실험실내시험과사람을대상으로하는현장시험은시험결과의신뢰성확보와피험자의안전확보를위해생물학적시험에익숙한시험자의지도하에수행한다 실험실내시험 본연구의목적은살충제고유의살충작용 살충제스프레이에의한노출또는공기 - 204 -
흐름을통한생물학적효력을결정하기위한것이다 또한특성이잘알려진모기종에 대한제제의생물학적효력을결정하기위한것이다 실험실내시험의구체적인목적은다음과같다 용량반응곡선을결정하고감수성있는모기성충에대한주성분의살충작용을평가하는살충제의 와 치사율에해당하는치사량 주성분량 모기체중 결정 가정용살충제중훈증제에사용되는주성분의훈증작용에대한평가 살충제스프레이접촉에의해결정되는에어로졸주성분의치사량 주성분량 분사량 평가 살충제주성분의교차내성에대한평가 가정용살충제제제에대한생물학적효력평가 양성대조군 시험에기준이될만한제품 특성이잘알려진주성분을함유하고있는제품 과거시험에대한충분한데이터가있는제품등효력시험에흔히사용되는살충제를권장한다 시험모기및사육 시험은최소한흰줄숲모기 종 빨간집모기 종등국내서식종으로실시되어야하며 종이상의모 기를시험에이용하고시험대상모기종에대한자료는반드시기록한다 신뢰성과재현성있는시험결과를얻기위해서는표준화된모기사육과시험조건이필수적이다 모기사육을위해일반적으로가로 세로 높이한면당 크기의사육장을이용하고 온도 상대습도 이상에서 시간광주기낮과밤 조건을유지하며모기종및시험목적에따라사육조건은변경될수있다 모기성충사육을위해탈지면탈지면을 설탕물에적신것을이용하고혈액은공급하지않는다 시험에대한모기의감수성을유지하기위해사육밀도 마리이하사육장 우화일수일 및세대수세대이내 등은일정하게유지한다 시험장및도구 시험장 및모든도구들은각각의시험을완료한후적절히세척을한다 시 험장과그내벽을세제와물로깨끗이세척한다 불용성의잔류물질을제거하기위해 - 205 -
서특수세척이필요할수있다 각각의시험을시작하기전시험장이살충제에오염되었는지확인한다 시험장에시험대상모기를 시간동안유지하고관찰시모기의 이상이녹다운 을보인다면 그시험장은오염되었거나적합하지않은것으로판정한다 살충제고유의살충작용 이시험의목적은시험대상곤충종에대한살충제고유의살충작용을알아보는것 이다 이시험은곤충에대한여러효과로부터독성을분리하기위해살충제주성분 원 제 을국소도포 국소처리법 하는것이다 시험준비 국소도포용액 은살충주성분을아세톤 휘발성이강하여곤충의외피에머무는시간이짧다에녹여준비한다 국소에적용되는용량은살아있는모기체중 당주성분의 으로표현한다 일반적으로살아있는모기의평균체중을측정하기위하여시험대상종의피를빨아먹지않고감수성있는암컷모기 마리의체중을측정한다 손으로사용하기에적합한도구나피펫팅기구별첨그림 및 참고 자동국소처리기등을사용하여 μ 정도일정량을취하여곤충의전흉배판별첨그림 참고에바른다 양이많으면용매용제의독성때문에치사율이높아질수있으니주의한다 시험방법 각시험농도별모기 마리를사용하며 치사율이 범위가되도록최소 농도를설정한다 한번에모기여러마리를 초동안 가스로가볍게마 취시키고 를유지하는플레이트 에놓고마취상태를유지하면서국소용액을처리 한다 준비된농도국소도포용액 μ 를모기전흉배판에처리한다 대조군은한 무리에 마리의암컷모기 무리를순수아세톤 μ 을처리한다 투여후암컷 을깨끗한축양컵 별첨그림 참고 에옮겨담은다음탈지면에 설탕물을적셔공급하고온도 상대습도 이상조건하에 시간 둔다 국소도포 시간후에죽은모기수를기록한다 따로사육된무리에서 회반 1) 살충제에의해곤충이마비되는것으로곤충들이쓰러져원래의움직임이불가능한상태로있는것. 2) 주성분이아세톤에녹지않을경우, 에탄올등적당한용매를선택할수있다. 3) 처리량이소량일경우처리여부를유관으로확인할수없을때는농도는유지하면서총처리량을늘린다. 4) 얼음위에은박지를깔아플레이트대신사용할수있다. 상온에서모기의마취상태가깨지않도록주의한다. 5) 축양 ( 畜養 ) : 어떤기간동안살려두는것을목적으로못이나채롱등에수용하여두는것. 성장의목적이아님. - 206 -
복시험하고 시험결과를합쳐서통계분석을실시한다 이시험을위해서는최소 마리모기가필요하며새로반복시험검증을할때마다새로운용액을준비한다 결과판정 로그용량프로빗회귀분석 을이용하여투여량과치사율사이의관계를분석한다 이분석에서는 사이치사율을보이는용량이사용되며 이하에서 개용량 이상에서 개용량이사용된다 과다른 값 그리고 신뢰구간을계산할수있는상업용소프트웨어를이용할수있다 만약대조군에서치사율이 를넘으면그시험의결과는사용하지않는다 또대조군치사율이 에서 사이라면시험군의결과를애버트보정식 를이용하여교정한다 애버트보정식 치사율 시험군에서의치사율 대조군에서의치사율 시험살충제성분과대조군살충제성분에대해서로그프로빗분석을실시하고카이제곱유사성검정 을이용하여그기울기를비교한다 로그 프로빗선의기울기가같고즉 유사성검정의귀무가설이거부되지않는다 이나 의신뢰구간이겹친다면두가지분석의결과는유의하게다르지않은것으로간주한다 훈증활성 시험준비 살충주성분원제 을취하여아세톤 를가해녹인용액 와트만지 번 또는이와동등한여과지 잔류하는살충성분이없는것이확인된피트그래디챔버 팬 날의지름 풍속 공기흐름이여과지에직접닿는것을막기위해팬레일가드의윗부분에지름 의납작한접시를붙인것 나일론이나폴리에스테르재질의그물망케이지구멍크기 시험방법 살충주성분을녹인용액을 와트만지 번또는이와동등한여과지에피펫을이용하여고르게도포한다 여과지를피트그래디챔버별첨그림 참고의천장 - 207 -
에서 떨어진중앙에매단다 팬은챔버의중앙바닥에눕혀바닥에서위를향하도록하고가동하여챔버안의공기를순환시킨다 그물망케이지 개에 설탕물을먹인 일된암컷모기 마리를각각넣은다음케이지를챔버네모퉁이에매달아놓고천장에서 떨어지고측벽에서 떨어진지점 관찰창으로 분동안관찰한다 녹다운된모기의수는규칙적인시간간격예 매 분마다 분동안을두고센다 분후시험을종료하고챔버를최대한빨리환기시킨다대조군시험은결과판정항참고 결과판정 환기후 개케이지의모기를깨끗한축양컵으로옮겨담고 설탕물을적신탈지면을공급하여온도 상대습도 이상에서 시간광주기조건에서 시간사육한다 살충제노출 시간후에치사율을기록한다 따로사육한모기집단들에서최소 번반복시험하고결과를합산한다 본시험조건중온도가중요하므로시험공간및사육장의온도가일정하게유지되도록한다 따로대조군은시험전 시험용케이지와같은곳에매달고 분동안관찰후모기를축양컵에옮겨 설탕물을적신탈지면을공급하여시험군모기와같이사육하고 시간후에치사율을기록한다 반복시험으로얻은 시간치사율의평균 을기록한다 수집한데이터를프로빗분석을이용하여모기 와 가녹다운된시간 및 과 신뢰한계를구한다 에어로졸주성분의살충력 시험준비 최소 개농도의살충제주성분조제농도당 개씩 혈액을공급하지않은 일된감수성있는암컷모기최소 마리 윈드터널장치및원통그물형케이지지름 그물구멍 와이어지름 별첨그림 참고 윈드터널조건 본시험에사용되는윈드터널장치는원통형관안지름 으로되어있으며 그속으로공기가 로이동한다 윈드터널안지름과같은크기로만들어진원통그물형케이지를윈드터널입구로부터 위치에넣는다 케이지를관찰하기쉽게하기위하여투명하고 탄력성이있는플라스틱재질판을이용하여여닫이가가능하도록설치한다 - 208 -
시험방법 각시험농도별모기 마리를사용하며 치사율이 범위가되도록최소 농도를설정한다 본시험에서는최소한 마리의모기가필요하다 각시험에서한케이지당모기 마리씩두개케이지를준비하고윈드터널에케이지를삽입한다음분무형살충제의시험용액중한농도를터널입구에분사한다 아세톤에녹인살충제주성분총량 을 입자 로분사시키기위해노즐을이용하여약 초동안분사시킨다 케이지안의모기는살충제노출후 초동안더방치한다 각시험을마친후모기를 로 초동안마취시키고즉시깨끗한축양컵에옮겨담고 설탕물을탈지면에적셔공급한다 온도 상대습도 에서 시간후치사율을기록한다 각살충제주성분시험시험시작시희석액인아세톤으로대조군시험을실시한다 시험은낮은농도에서부터높은농도로진행한다 시험농도가바뀔때마다아세톤 을분사하여윈드터널장치를세척한다대조군시험은결과판정항참고 결과판정 별도로사육한모기집단에서 번의반복검증시험한농도당 회반복을하고통계분석에적절하도록결과를합산한다 위에서설명한것처럼로그용량프로빗회귀분석을이용하여농도와사망률사이의관계를분석하고 과 값을기록한다 이분석에서는 에서 사이의치사율을보이는 개농도를사용하는데 이상적으로 이하에서 개 이상에서 농도를사용한다 대조군에서치사율이 를초과하면그시험은적절하지않은시험으로판정한다 만약대조군의치사율이 에서 사이라면 살충제를처리한시험군의결과는애버트공식 항참조을이용하여교정한다 다른살충제주성분에대한교차내성 저항성기전이밝혀진살충제주성분의교차내성 은감수성과저항성에대한정보가충분한모기계통으로시험한다 저항성있는계통은선택한저항성기전에대해되도록호모유전형질로한다 호모유전형질을얻지못하면 감수성에대한대립형질에대한자연선택으로저항성감소가나타나는것을피하기위해보통주기적선택이필요하다 대조또는표준계통은최소한 년에두번생물학적시험 생화학또는분자생물학적시험등으로계통모니터링을하여저항성에대한변화를관찰및평가하고 6) 분무입자의부피가절반이되는지점을의미하는데, 케이지에서부피중간값의직경인 15±2 μm 를위치를말한다. 7) 보통새로운살충제주성분에대해필요하다. - 209 -
선택 보정할수있다 감수성있는모기계통에서얻은값과특정한저항성을보이는계통예 에서얻은값을비교하면새로운후보살충제의교차내성유무및수준을평가할수있다 특정저항성기전을가지는계통의 또는 가감수성있는계통의값보다유의하게더크면교차내성을보이는것이다 제제의생물학적효능 모기향 전자매트모기향 전자액체모기향 휴대용발화기 위에서언급한가정용살충제제품의효능평가는아래사항에따라모기가든케이 를가지고피트 그래디챔버에서수행한다 시험준비 설탕물을먹인 일된암컷모기 마리를나일론또는폴리에스테르그물망 구멍크기으로된케이지 개에각각넣고피트그래디챔버천장에서 아래 측벽에서 떨어진지점네모퉁이창앞에관찰이가능하도록매달아놓는다 지름 팬으로챔버안의공기를순환시키고풍속 에서 팬레일가드위에지름 의납작한접시를붙이고시험제제를가운데둔다 이팬은챔버가운데지점바닥에서위로향하게둔다대조군시험은결과판정항참고 결과판정 규칙적인시간간격을두고녹다운된모기의수를센다예 분동안매분 그이후 분간격으로총 분동안 분후에는챔버를최대한빨리환기시키고녹다운된모기의관찰을끝내고시험한케이지를꺼낸다 케이지에있는모기를깨끗한축양컵으로옮겨담고 설탕물을탈지면에적셔공급하고온도 상대습도 이상에서 시간광주기조건에서 시간사육한다 시간후치사율을기록한다 최소 회반복시험하고각시험은다른배치의모기를사용하고이결과들을합하여 제제의효능을평가한다 8) 예 ) 살충제저항성비 = 야외채집콜리니의 LD 50 / 감수성계통의 LD 50-210 -
각제제를시험하기전에대조군케이지를챔버안에두고 분후모기들을축양컵에옮겨담고 설탕물을탈지면에적셔공급하고온도 상대습도 이상 시간광주기조건에서 시간사육후치사율을기록한다 대조군에서사망률이 를초과하면그시험은적절하지않은시험으로판정한다 만약대조군의사망률이 에서 사이라면 살충제를처리한시험결과는애버트공식 항참조 을이용하여교정한다 표준제제나적절한양성대조군과비교는바람직하다 비교를위해서는 의유의성수준에서적절한통계분석예 프로빗분석을이용한다 분석된시험결과로부터 과 로결과를표현해야하고모기향에대해서는 분노출에대한 시간후의치사율을근거로한다 전자모기향매트 전자액체모기향및휴대용발화기에대해서는위에서설명한것처럼시험조작시간의처음 중간그리고마지막구간의반복관찰 한다 제제별시험방법 모기향 금속재질의받침대에한개의코일을잘끼운다 코일에불을붙이고끝부분이타기시작하면불꽃을끈다 분후 챔버안팬위의납작한접시에두고 분동안관찰한다별첨그림 참고 전자매트모기향 제조업체의용법용량에따라훈증기에매트를끼우고시험챔버로부터떨어진곳에서 시간동안가열한다 매트가끼워진훈증기를챔버의팬접시위에놓고 분동안관찰한다 용법용량에기재되어있는효능의지속시간을평가하기위하여 추가적시간간격예 시간마다에서앞과동일한생물학적시험과정을수행할수있다 시험사이마다훈증기는시험챔버밖에서계속작동시킨다별첨그림 참고 휴대용발화기 용법용량에따라발화기를준비하고시험챔버의중앙천장에서 아래매단다 시험사이마다발화기는공기흐름 이있는시험챔버밖에둔다 이제제에표시된일일작동시간에따라몇일동안효과가지속된다는점을감안하여앞의동일한생물학적시험과정에따라추가시험간격예 최초작동 작동및 작동시을두고효능의지속시간을평가할수있다 9) 살충제작동 : 최초작동, 최대가용시간 50%, 최대가용시간 100% 3 곳의시간구간을설정함 - 211 -
전자액체모기향 전자액체모기향을시험챔버의팬접시위에놓고 분동안계속작동시키며관찰한다 시험사이마다훈증기를시험챔버밖에서계속작동시킨다 작동중인훈증기가시험에영향을주는것을피하기위해시험챔버로부터떨어진곳에서가열시킨다별첨그림 참고 전자액체모기향의생물학적효능은일정한간격을두고평가하여야한다즉 표시기재된작동일의최초작동 작동및 작동시 최초시험영점시간은제제의표시기재사항에따라시험챔버밖에서특정한훈증기를이용하여예열시킨후에시작한다 에어로졸 에어로졸제품의효능평가는아래자세한설명에따라자유롭게날아다니는모기를 이용하여피트 그래디챔버안에서수행한다 시험준비 챔버의바닥에흡수력이있는흰색종이를깔고테이프로고정시킨다음녹다운된모기를관찰과기록이쉽도록사분면을나누어그린다 설탕물을먹인 일된암컷모기 마리를피트그래디챔버에넣는다 시험방법 시험직전시험챔버에서멀리떨어져자동분사기에끼워진에어로졸을흔들고흄 후드가있는곳에서 초동안에어로졸을분사한다 그후 자동에어로졸분사 기를이용하여챔버의중앙 챔버의위쪽에설치된문을통해 을향해 회 양을분사한다 별첨그림 참고 녹다운된모기의수는 분동안매분기 록한후 분간격으로총 분동안계수기 를이용하여기록한다 별 첨그림 참고 녹다운된모기의수를정확하게기록할수있도록각각다른관찰자에게각각다른 사분면을할당한다 분간제품에노출시킨후최대한빨리챔버를환기시킨다 녹다 운된모기와남아있는모기를모두흡인기 로조심스럽게모아서서로다른깨끗한 축양컵에옮겨담는다 탈지면에 설탕물을적셔서공급하고온도 상대 습도 이상에서 시간광주기조건에서 시간후사망률을기록한다 10) 분사량은제품에따라다르므로분무시간에따른분사량을미리계산하여 0.65 ± 0.10 g 에해당하는시간을기록한다. 11) 흡인기 (aspirator) 는사람이입으로빨아당기거나흡입력을이용한장치를이용한다. - 212 -
결과판정 최소 반복시험하고각시험은다른사육장의모기를사용하고이결과들을모아제제의효능을평가한다 표준제제나적절한양성대조군제제와비교하는것이바람직하다 비교를위해 의유의성수준에서적절한통계분석예 프로빗분석을이용해야한다 각각의제제를시험하기전에 자유롭게날아다니는암컷모기를 분동안챔버에풀어놓았다가 그후흡인기로모아서축양컵에옮겨담고 설탕물을탈지면에적셔서공급하고온도 상대습도 이상에서 시간광주기조건에서 시간후사망률을기록한다 대조군에서사망률이 를초과하면그시험은적절하지않은시험으로판정한다 만약대조군의사망률이 에서 사이라면 살충제를처리한표본의결과는애버트공식 항참조을이용하여교정한다 반복시험으로부터얻어진결과로각제제의사용량에대한 및 시간사망률을기록한다 현장시험 현장시험의목적은자연상태에서날아다니는실내모기에대한가정용살충제효능을평가하기위함이다 모기향 전자매트모기향 휴대용발화기및전자액체모기향에대한그시험목적은물림방지측면에서제품의사람보호기능을측정하는것이다 에어로졸에대한시험목적은퇴치대상종의녹다운과사망률로측정되는효능을알아보기위한것이다 시험에사용되는살충제에대한시험지역대상모기의민감성은 표준절차 와 기준에따라미리검증한다 현장시험은사람이노출되는시험대상모기종에적합한서로다른실내환경에서 실시한다 표준제제나적절한양성대조군제제와비교하는것이바람직하다 모기향 전자매트모기향 휴대용발화기및전자액체모기향 시험준비 시험에사용되는살충제효능평가는서로다른실내환경에서실험군 살충제가처리 된방 과대조군 살충제가처리되지않은방 간에사람에의해잡힌모기를비교하는 12) Guidelines for efficacy testing of household insecticide products. annex 5, annex 6, WHO, 2009(WHO/HTM/NTD/WHOPES/2009.3.) - 213 -
것이다 시험공간안에모기의적당한밀도측정 종및병원성등을알아보기위해예비평가를수행하고시험을위해훈련된현장시험전문가가필요하다 시험공간은시험전 개월간잔류살충제가없어야하고 시간동안다른가정용살충제가사용되지않은공간이어야한다 과도한공기흐름을예방하기위해창문과문을닫을필요가있지만최소한한개는열어둔다 현장시험을위한가정집을선택할때그공간의크기와환기창의수를고려한다 시험방법 제제효능은인체 방법 을이용하여시험지원자에앉는모기의비율변화를측정하여평가하는것이다 감염성질병매개충에대한위해가있는상황에서는시험지원자에게모기로부터의예방법또는신체적보호장비를제공한다 전신을보호하는의류가급적밟은색상를착용한지원자가모기를모으거나지원자가지고있는모기장으로모기를모으는것을말한다 수집자와시험공간간끌림 의변화를최소화하기위하여아래라틴 정방설계 에따라시험공간들마다수집자와살충제처리를교 대하면서한다 다음은변화에대한라틴정방설계의예이다 세가지지정된처리 시험용살충제 양성대조군및음성대조군 세개시험공간 또는환경그리고세명의수집자 주 (week) 일 (day) 공간 1 공간 2 공간 3 1 1 A T1 C T3 B T2 3 B T2 A T1 C T3 5 C T3 B T2 A T1 7 A T2 C T1 B T3 2 9 B T3 A T2 C T1 11 C T1 B T3 A T2 13 A T3 C T2 B T1 3 15 B T1 A T3 C T2 지정된수집자 17 C T2 B T1 A T3-214 -
지정된처리 시험용제제는용법용량에따라사용한다 지원자에앉은모기잡기는지원자의무릎아래쪽다리를노출하고제품에서 떨어진곳에서실시한다 모기잡기는시험대상모기종의무는시간이최고인 시간동안한다 연속적인모기수집을권장하지만실험계획에지원자의휴식시간이포함되어있다면휴식으로인한시험의방해를최소화한다 다음시험을위한시험공간은한번사용후 시간경과후재사용한다 모기는흡인기또는시험튜브를이용해시간별로모으고미리라벨을붙여놓은축 양컵에담는다 모기가담겨진축양컵은실험실에서모기의종과수를확인할때까지 냉장보관한다 시험하는동안그공간의실내온도와상대습도를기록한다 결과판정 살충제를처리한공간에서지원자다리에앉은모기수집된모기 비율은적절한통계분석방법예 의유의성을이용하여대조군공간의결과와비교한다 에어로졸 시험에사용되는살충제의효능평가는제제의용량용법에따라서로다른실내에적 용하여실시한다 시험준비 시험공간은최소한 크기에벽과천장은모기를찾기쉽고수집하기에적합해야한다 가능하다면 모기수집이용이하도록가구는최소한으로있어야한다 방의크기 가구 벽 천장의특징그리고배치등에적절히기록한다 시험공간은시험전 개월간잔류살충제가없어야하고 시간동안다른가정용살충제를사용하지않은공간이어야한다 적합한통계분석과비교가가능하도록충분한시험공간침실또는거실 수를확인하고시험공간은시험을위해살충제가적용된군과적용되지않은군대조군에무작위로배정한다 만약시험에적합한공간을구하지못하면이런기준을충족하는실험실공간등을사용할수있다 시험을위해살충제를사용하는동안에바닥과모든수평한면은흰천이주름지지 않게주의하여덮는다 문과창문은닫고팬의전원은끈다 실내휴식기에있는모기 들의수가충분하지않은경우충혈하지않은암컷모기 마리를현장에서수 - 215 -
집또는피로사육되지않은 의새끼또는야생지역의모기를시험공간에넣는다 시험방법 살충제를스프레이분무시용법용량을엄격히준수한다 현장시험을하는동안그공간의온도및상대습도를기록한다 분무후즉시 시험자는시험공간을나가고문을닫는다 분후 시험자는시험공간으로돌아와녹다운된모기와남아있는모기를모두축양컵에수집하여기록하고 시간사망률을관찰한다 수집된모기에 설탕물을적신탈지면을공급하고온도 상대습도 이상에서 시간광주기조건에서 시간사육한다 결과판정 서로다른시험공간에서수행된시험결과를바탕으로하여 분후녹다운된암컷모기의평균비율과 시간후평균사망률을기록한다 각각의시험공간에서의비율계산을할때살아있는모기와녹다운된모기의총수를분모로한다 - 216 -
참고문헌 안용준 채성천 가정용살충제효력평가법가이드라인검증연구 식품의약품안전 처 살충제규격등안전관리연구 모기기피제효력평가방법가이드라인 식품의약품안전처 - 217 -
별첨 a. 전흉배반의위치 b. 국소용액의처리 c. 축양컵 d. 영국 Burkard 사수동미량 e. Hamilton 사 PB600-1 디스 국소처리기, 50 μ 펜서, 10 μ 그림 국소용액을이용한살충작용시험 의실험실 - 218 -
피트 그래디챔버사양 곤충에대한가정용살충제의효능시험을위하여피트 그래디챔버를사용한다 시험 을효율적으로수행할수있는충분한공간에챔버를넣어둘수있도록공간을선택한 다 피트 그래디챔버는 의크기로설계한다 챔버는살충제나 유기용매잔류물을쉽게닦아낼수있게스테인레스스틸 알루미늄 유리또는다른 적당한재질의재료를사용하여만든다 챔버의한쪽벽에출입구약 를고정한다 챔버에는천장에는형광등과시험후잔류한살충제증기등을제거하거위한환기팬이있다 시험용케이지를매달수있도록옆벽에서약 간격을두고각네개천장모서리에고리를부착한다 챔버안의공기순환을이해 지름의팬에팬레일가드위에 지름의납작한접시를붙이고바닥에서천장을향하도록놓아둔다 챔버는각측벽에 개의관찰유리창과모기를넣거나다용도로활용되는창 개 위 개 아래 개 달려있어시험이진행되는동안녹다운된모기의수를확인이 가능하다 a. 피트 - 그래디챔버 b. 지름 30 cm 의팬의예 그림 피트 그래디챔버및팬 의실험실 - 219 -
a. 환기팬, b. 형광등, c. 곤충의출입구또는다용도창, d. 관찰용창, e. 출입구, f. 곤충의출입구 g. 곤충의출입구또는다용도창 그림 피트그래디챔버사양사진출처 - 220 -
a. 윈드터널의사양 b. 케이지의사양 그림 윈드터널 사진출처 - 221 -
a. 모기향효능시험 b. 전기매트모기향효능시험 c. 전자액체모기향효능시험 d. 에어로졸효능시험 - 222 -
e. 자동에어로졸분사기 그림 제제별효능시험의예 의실험실 - 223 -