질병관리본부학술연구용역사업최종결과보고서 과제명 수행기관 / 연구책임자 인증표준물질 (CRM) 생산을위한프로토콜개발및품질확보방안연구신진메딕스 ( 주 ) 이용래 발주부서 생물안전평가과 1

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1 질병관리본부학술연구용역사업최종결과보고서 과제명 수행기관 / 연구책임자 인증표준물질 (CRM) 생산을위한프로토콜개발및품질확보방안연구신진메딕스 ( 주 ) 이용래 발주부서 생물안전평가과 1

2 목 차 Ⅰ. 연구개발결과요약문 최종결과보고서요약문 Summary Ⅱ. 학술연구용역사업연구결과 제1장. 최종연구개발목표 제 1 절. 목 표 제 2 절. 목표달성도및관련분야에대한기여도 제 3 절. 국내 외기술개발현황 제2장. 최종연구개발내용및방법제 1 절. 적용된규정및규격 제 2 절. 연구개발내용 제 3 절. 연구개발방법 제3장최종연구개발결과 제 1 절. 인증표준물질생산계획의검토 제 2 절. 인증표표준물질제조를위한절차서작성 제 3 절. 인증표준물질개발결과 제4장연구결과고찰및결론제 1 절. 연구결과고찰및결론 제5장연구성과및활용계획 제 1 절. 연구성과 제 2 절. 활용계획 제6장기타중요변경사항 제7장연구비사용내역 제8장참고문헌

3 과제명 중심단어 인증표준물질 (CPM) 생산을위한프로토콜개발및품질확보방안연구 인증표준물질 (CPM), 균질성, 안정성 주관연구기관신진메딕스 ( 주 ) 주관연구책임자이용래 연구기간 본연구는우리나라대부분의검사실정도관리또는진단제의성능평가를위하여사용되는표준물질은 WHO 표준물질을사용하고있다. 그러나이러한표준품들은구입에많은비용이소요되고특히각기관별로 2vial이상을구매할수없는단점이있어일반적인실험실이나검사실의정도관리또는진단제의질평가등에사용하기에는무리가있었다. 이에우리나라실정에적합한표준물질을개발하고생산에필요한절차및지시서작성하여그절차에따라표준물질생산하고자하였으며, 그결과를토대로인증표준물질생산기관인증을위한기초자료로활용코자하였다. HIV항원 항체인증표준물질의제조는울산대학교병원진단검사의학과에서입수한감염자 4명으로부터채혈한혈액과대한산업보건협회한마음혈액원으로부터입수한음성 25명의혈액을이용하여제조하였다. 표준품은음성, 저농도 (S/C 2~3), 중농도 (S/C 5~7), 고농도 (S/C 15~16), 양성각각 1개씩 5개를 1set를구성하여총 300set를제조하였다. 또한제조에필요한절차서 6종의개발을완료하였다. DNA 인증표준물질제조에필요한주요원료인 K562 세포주 (ATCC CCL 243) 는 American Type Culture Collection (ATCC) 에서구입하여확보하였으며, Pseudomonas aeruginosa (ATCC : ) 는 KCCM에서구입하여제조하였다. Human RM DNA 50 ng/μl 300vial과 Human-Bacteria RM DNA(1:5) 50 ng/μl 1,000vial, Human-Bacteria RM DNA(1:0.5) 50 ng/μl 1,000vial을제조하였으며, 제조에필요한절차서 6종의개발을완료하였다. 3

4 Title of Project Key Words Protocol development for production of certified reference material and study on quality assurance CRM, Homogeneity, Stability, Reliability Institute SHINJIN MEDICS INC. Project Leader Lee yongrae Project Period In this study, the reference materials used for the performance evaluation of the quality assurance or diagnosis in korea's many laboratories make use of WHO standard substance. However These standards are so expensive that each organization can not purchase more than two vials. On this account, those for evaluation of the quality assurance or diagnosis in the general laboratory is not reasonable to use. Therefore, we are trying to make or develop the production of reference materials depending on Procedures and instructions suitable for this situation in Korea. On the basis of these results, we are trying to utilize a basic information for the certified reference material Production agencies. The blood needed for HIV antigen antibody certification reference material obtained from infected foul peoples in the Department of Laboratory Medicine, Ulsan University Hospital and twenty five peoples in the Hanmaum blood center, Korean Industrial Health Association. Negative reference materials are made of low concentration(s/c 2~3), mid concentration(s/c 5~7) and high concentration(s/c 15~16). Positive reference materials are manufactured total 300set consisted of one set per five. Also the six types of procedures required for the manufacturing were completed. The host(atcc CCL 243) and Pseudomonas aeruginosa(atcc:29336) as the main raw material of DNA certified reference materials needed for the manufacturing was purchased from American Type Culture Collection(ATCC) and KCMM respectively. Human RM DNA 50ng/ μl 300 vials, Human-Bacteria RM DNA(1:5) 50ng/ μl 1000 vials and Human-Bacteria RM DNA(1:0.5) 50ng/ μl are made and the six types of procedures required for the manufacturing were completed. 4

5 5

6 1. 인증표준물질 (CRM) 생산계획수립 연구목표대비목표달성도 : 100% 2. 인증표준물질생산 연구목표대비목표달성도 : 100% 3. 인증표준물질제조지시서작성 연구목표대비목표달성도 : 100% 6

7 1. 국외연구동향 7

8 8

9 . 2. 국내연구동향 9

10 10

11 KS A ISO Guide 34 : 2005; General requirements for the competence of reference material producers KS A ISO Guide 35 : 2005; Certification of reference materials-general and statical principles. KS A ISO Guide 30 : 2005; Terms and definition used in connection with reference materials KS A ISO Guide 31 : 2005; Reference material-contents of certificates and labels KS A ISO Guide 32 : 2005; Calibration in analytical chemistry and use of certified reference materials KS A ISO Guide 33 : 2005; Uses of certified materials ISO : 2003; Medical device-quality management System-Requirements for regulatory Purposes EN ISO : 2003; Invitro diagnostic medical device-measurements of quantities in biological sample-meterological traceability of values assigned to calibrators and control materials WHO 2004 ; Recommendations for the preparation, Characterization and establishment of international and other biological reference standards CLSI ISSN X : Method comparison and Bias Estimation Using Patient Sample; Approved Guideline-Second Edition Certified Reference Material IRMM-449 Certified Reference Material IRMM/IFCC-491 Certified Reference Material IRMM

12 1. 인증표준물질 (CRM) 생산계획수립 가. 정도관리물질을인증물질로인증받기위한연차별생산계획수립 특성 No 성상 ELISA(S/C) CLIA(S/C) PA(+/-) Western blot KCDC CRM B001 음성 1이하 1이하 - no band 비고 KCDC CRM B002 저농도 2~3 1~1.5 ± gp120/160(+) KCDC CRM B003 중농도 5~7 5이상 + p24, gp120/160(+) KCDC CRM B004 고농도 15~16 50이상 ++ p24, gp41, gp120/160(++) KCDC CRM B005 양성 16이상 50이상 +++ all band 12

13 No 특성비고 NBK-RM-H00001 NBK-RM-HB NBK-RM-HB Human DNA quantitation standard(5μg (50ng/ul) Bacteria DNA spiked(1 : 0.5) quantitation standard(5μg (50ng/ul) Bacteria DNA spiked(1 : 5) quantitation standard(5μg (50ng/ul) 나. 생산계획에따른시험항목및시험방법제시 13

14 다. 수립된생산계획의검증 14

15 2. HIV 항원 항체인증표준물질 (CRM) 개발 가. 원료물질의개발 나. 표준물질의특성 다. 표준물질의구성 HIV 항원 항체인증표준물질은원재료로사람의혈장을비동화시킨혈청으로만든표준물질을 각 1 ml /vial/5ea/set 로구성한다. 라. 표준물질제조용원료물질 마. 표준물질보관용기 15

16 3. DNA 인증표준물질개발 가. 원료물질의개발 Human DNA quantitative standard 를제조하기위한원료물질을개발한다. Bacteria DNA quantitative standard 를제조하기위한원료물질을개발한다. 나. 표준품물질의특성 다. 표준품물질의구성 라. 표준물질보관용기 16

17 4. 인증표준물질 (CRM) 제조를위한절차서개발 원료물질 (RM: Resference Material) 채 혈및확보지시서 원료 물질분석지시서 표준물질제조지시서 표준물질제조시설환경지시서 표준물질제조안전관리지시서 표준물질포장, 보관및배포지시서 17

18 질병본부 생물안전평가과 연구계획의수립 사업의관리감독 관계법 제도협의 질병관리본부 에이즈 종양바이러스과 신진메딕스 ( 주 ) 진단시약연구소 질병관리본부 생물자원은행과 국가차원의 HIV감염진단표준화확립 검사능력향상관리 표준물질개발 표준물질의안정적공급 HIV Ag/Ab 표준물질개발 다량의원료물질확보 DNA외부정도평가물질제작 균질성및안정성평가 CRM 제작절차서작성 인체자원표준물질제작 숙련도시험을통한인체자원관리표준화 CRM 인증자료확보 인증표준물질 (CRM) 생산프로토콜개발 품질확보방안연구 18

19 1. 정도관리물질을인증물질로인증받기위한연차별생산계획수립 가. 1 차검토회의 19

20 20

21 다. 3 차검토회의 21

22 라. 4 차검토회의 22

23 23

24 마. 5 차검토회의 24

25 25

26 바. 6 차검토회의 26

27 27

28 28

29 29

30 사. 7 차검토회의 일자 ~ 과정 구성 사용시약 구성 특성 수량 ( 개 ) ELISA 수동 CLIA 확인 음성 음성 500 AVIDIA 저농도 S/C 2~3 500 Centaur Genedia R Western 중농도 S/C 5~7 500 PA (Bayer사) vironostica R blot 고농도 S/C 15~ Architect 양성 양성 500 (Abbott사) ~9 Pilot study( 울산대 / 녹십자 / 질병관리본부 ) 제조균질성검사 제조완료및보관 30

31 과정 일자 DNA 제작 예비실험 Spiking test, PCR 예비실험 K562 cell DNA 예비배양 1주 본배양 4주 DNA제작 1주 ~ Bacteria cell DNA 본배양 4주 DNA제작 1주 ~7 DNA정량및 PCR, 균질성평가, 전기영동 ~14 배포용패널제조, 균질성및단기안정성평가 ~20 숙련도평가시행 이후 결과취합및분석 비고단기안정성평가지속단기안정성평가지속 아. 8 차검토회의 31

32 자. 9 차검토회의 32

33 온도 시간 0 주 1 주 2 주 4 주 6 주 8 주 3 월 6 월 9 월 1 년 1 년 6 월 2 년 3 년 -75 2vial vial 냉장 (4~6 ) 2vial 실온 (18~25 ) 2vial 고온 (30 ) 2vial

34 2. 생산계획에따른시험항목및시험방법 가. HIV 항원 항체인증표준물질 병간균질성 병내균질성 검체수 실험수 검체수 실험수 음성 3 vial 18회 20 vial 60회 저농도 3 vial 18회 20 vial 60회 중농도 3 vial 18회 20 vial 60회 고농도 3 vial 18회 20 vial 60회 양성 3 vial 18회 20 vial 60회 합계 15 vial 90회 100 vial 300회 온도 시간 0 주 1 주 2 주 4 주 6 주 8 주 3 월 6 월 9 월 1 년 1 년 6 월 2 년 3 년 -75 2vial vial 냉장 (4~6 ) 2vial 실온 (18~25 ) 2vial 고온 (30 ) 2vial

35 나. DNA 인증표준물질 병간균질성 병내균질성 검체수 실험수 검체수 실험수 Human DNA 3 vial 18회 20 vial 60회 Bacteria DNA 0.5ug(5ng/ul) 3 vial 18회 20 vial 60회 Bacteria DNA 5ug(50ng/ul) 3 vial 18회 20 vial 60회 합계 9 vial 54회 60 vial 180회 Table.9 인증표준물질의안정성시험및평가방법 온도 시간 0 주 1 주 2 주 4 주 6 주 8 주 3 월 6 월 9 월 1 년 1 년 6 월 2 년 3 년 냉장 (4~6 ) 실온 (18~25 ) 고온 (30 ) 소계 합계 120 vial 35

36 3. 수립된생산계획의검증 가. 적절한물질선정여부검증 나. 생산측면의적절한환경유지검증 다. 물질제조과정의적합성검증 라. 측정과시험에관련된장비의보유여부확인검증 마. 교정 / 장비의유효성확인과측정방법의적합성검증 바. 균질성및안정성평가및분석방법의적합성검증 사. 협력기관들과시험소간공동작업조직의적합성검증 아. 측정결과에기초한특성값부여여부검증 자. 적합한보관시설및조건보장여부검증 차. 적합한포장시설및운반여부검증 36

37 카. 적절한운송조치보장검증 파. 적합한유동서비스보장검증 37

38 제 2 절. 인증표준물질 (CRM) 제조를위한절차서작성 원료물질 (RM: Reference Material) 채혈및확보지시서 원료물질분석지시서, 표준물질제조지시서 표준물질제조시설환경지시서 표준물질제조안전관리지시서, 표준물질포장, 보관및배포지시서 KS A ISO Guide 34 : 2005; General requirements for the competence of reference material producers KS A ISO Guide 35 : 2005; Certification of reference materials-general and statical principles. KS A ISO Guide 30 : 2005; Terms and definition used in connection with reference materials KS A ISO Guide 31 : 2005; Reference material-contents of certificates and labels KS A ISO Guide 32 : 2005; Calibration in analytical chemistry and use of certified reference materials KS A ISO Guide 33 : 2005; Uses of certified materials ISO : 2003; Medical device-quality management System-Requirements for regulatory Purposes EN ISO : 2003; Invitro diagnostic medical device-measurements of quantities in biological sample-meterological traceability of values assigned to calibrators and control materials WHO 2004 ; Recommendations for the preparation, Characterization and establishment of international and other biological reference standards 38

39 CLSI ISSN X : Method comparison and Bias Estimation Using Patient Sample; Approved Guideline-Second Edition Certified Reference Material IRMM-449 Certified Reference Material IRMM/IFCC-491 Certified Reference Material IRMM

40 1. 원료물질채혈및확보지시서 40

41 2. 원료물질분석지시서 41

42 42

43 3. 표준물질제조지시서. 43

44 4. 표준물질제조실환경지시서 44

45 5. 표준물질제조시설안전관리지시서 45

46 6. 표준물질포장 보관및배포지시서 46

47 1. HIV 항원 항체인증표준물질 가. 원료물질의개발 47

48 48

49 사진 2. 혈액운송형태 나. 혈액의검사 49

50 검사명 검사방법 양성 음성 합계 비고 간기능검사 (ALT) * clorimetry Advia 1650(Gimens, USA) HIV Ag/Ab CLIA Architect (Abbott, USA) Anti-HCV CLIA Architect (Abbott, USA) HBsAg CLIA Architect (Abbott, USA) 다. 인증표준물질의특성 특성 No 성상 ELISA(S/C) CLIA(S/C) PA(+/-) Western blot KCDC CRM B001 음성 1이하 1이하 - no band 비고 KCDC CRM B002 저농도 2~3 1~1.5 ± gp120/160(+) KCDC CRM B003 중농도 5~7 5이상 + p24, gp120/160(+) KCDC CRM B004 고농도 15~16 50이상 ++ p24, gp41, gp120/160(++) KCDC CRM B005 양성 16이상 50이상 +++ all band 50

51 라. 표준물질분석시험 51

52 Table12. 각시약별반응도 구분 시약명 ELISA-Anti-HCV ELISA-HBsAg ELISA-Antibody ELI DIAKEY R Anti-HCV ELISA 시약명 DIAKEY R HBsAg ELISA 시약명 Vironostika R HIV Uni-Form Plus O 시약명 DIAKEY R Anti-HCV ELISA 신진메딕스 ( 주 ) 신진메딕스 ( 주 ) BIOMURIEUX 신진메딕스 ( 주 ) Lot E Lot E Lot A42LC Lot E Lot Exp Exp Exp Exp June-13 Exp 검체번호 Sample OD/Cut-off Sample OD/Cut-off Sample OD/Cut-off Sample OD/Cut-off Samp p >3.0 >3.0 p >3.0 >3.0 p >3.0 >3.0 p >3.0 >3.0 N N N N N N N N N N N N N N N N N N N N N N N N N 시약명 52

53 PA Rapid SERODIA R HIV 1/2 PA SD R Bio line HIV 1/2 rapid 시약명시약명구분 Flujirebio ( 주 )SD Lot XP10809 Lot A Exp Exp 검체번호 HIV1/HIV2 HIV1/HIV2 p /- ++++/- p /- ++++/- p /- ++++/- p /- ++++/- N1 -/- -/- N2 -/- -/- N3 -/- -/- N4 -/- -/- N5 -/- -/- N6 -/- -/- N7 -/- -/- N8 -/- -/- N9 -/- -/- N10 -/- -/- N11 -/- -/- N12 -/- -/- N13 -/- -/- N14 -/- -/- N15 -/- -/- N16 -/- -/- N17 -/- -/- N18 -/- -/- N19 -/- -/- N20 -/- -/- N21 -/- -/- N22 -/- -/- N23 -/- -/- N24 -/- -/- N25 -/- -/- 53

54 CLIA HIV Ag/Ab Architect ADVIA 시약명시약명 Abbott SIEMENS 구분 Lot 17246LI00 Lot 109 Exp Exp cut-off 1.00 cut-off 1.00 검체번호 Sample OD Sample OD p12-3 양성 : 양성 : >50.00 p12-4 양성 : 양성 : >50.00 p12-5 양성 : 양성 : >50.00 p12-6 양성 : 양성 : >50.00 N1 음성 :0.07 음성 :<0.05 N2 음성 :0.58 음성 :<0.05 N3 음성 :0.11 음성 :<0.05 N4 음성 :0.10 음성 :<0.05 N5 음성 :0.69 음성 :<0.05 N6 음성 :0.07 음성 :<0.05 N7 음성 :0.11 음성 :<0.05 N8 음성 :0.15 음성 :<0.05 N9 음성 :0.19 음성 :<0.05 N10 음성 :0.14 음성 :<0.05 N11 음성 :0.18 음성 :<0.05 N12 음성 :0.52 음성 :<0.05 N13 음성 :0.34 음성 :<0.05 N14 음성 :0.26 음성 :<0.05 N15 음성 :0.11 음성 :<0.05 N16 음성 :0.17 음성 :<0.05 N17 음성 :0.23 음성 :<0.05 N18 음성 :0.39 음성 :<0.05 N19 음성 :0.31 음성 :<0.05 N20 음성 :0.28 음성 :<0.05 N21 음성 :0.31 음성 :<0.05 N22 음성 :0.34 음성 :<0.05 N23 음성 :0.14 음성 :<0.05 N24 음성 :0.16 음성 :<0.05 N25 음성 :0.24 음성 :<

55 55

56 구분 Western blot 반응 gp160 gp120 p66 p55 p51 gp41 p31 p24 p17 판정 p positive p positive p ((+)) positive p positive N negative N negative N negative N negative N negative N negative N negative N negative N negative N negative N negative N negative N negative N negative N negative N negative N negative N negative N negative N negative N negative N negative N negative N negative N negative Standard from Criteria USA ASTPHLD, CDC USA FDA recommend Biotech/Du pont. CO. HIV Diagnosis USA Red Cross REDS(Retrovirus Epidemiology Donor Study) p24, gp41, gp more than 2 band p24, p31, gp41 more than gp at least one band of ech products of gap, pol and envgene, more than 3 band more than 2 band of p24 or p31 and gp41 or gp WHO more than 2 band of env 56

57 마. HIV 항원 항체인증표준물질의제조 57

58 58

59 59

60 결과 Genedia R HIV Ag/Ab 1차 2차 3차 cut-off OD S/C cut-off OD S/C cut-off OD S/C

61 61

62 결과 Genedia R HIV Ag/Ab SERODIA R HIV 1/2 PA Vironostika R HIV Uni-Form Plus O S/C2~3 S/C5~7 S/C15~16 S/C2~3 S/C5~7 S/C15~16 S/C2~3 S/C5~7 S/C15~16 1회 ± 회 ± 회 ± 회 ± 회 ± Mean ± SD ± CV ± 결과 Genedia R HIV Ag/Ab 저농도 중농도 고농도 cut-off OD S/C cut-off OD S/C cut-off OD S/C Mean Mean Mean SD SD SD CV CV CV 결과 Architect (Abbott A Promise Lfe Co, USA) ADVIA Centaur(Bayer Co, Germany) 저농도 중농도 고농도 저농도 중농도 고농도 1회 회 회 회 회 Mean SD CV

63 63

64 No 성상 특성 ELISA(S/C) CLIA(S/C) PA(+/-) Western blot 비고 KCDC CRM B001 음성 1 이하 1 이하 - no band KCDC CRM B002 저농도 2~3 1~1.5 ± gp120/160(+) KCDC CRM B003 중농도 5~7 5 이상 + p24, gp120/160(+) KCDC CRM B004 고농도 15~16 50 이상 ++ p24, gp41, gp120/160(++) KCDC CRM B005 양성 16 이상 50 이상 +++ all band 64

65 구분 시약명 신진메딕스 ( 주 ) ( 주 ) 녹십자MS ELISA-Ag/.Ab ELISA-Antibody Rapid PA ELISA-Ag/.Ab SD Genedia R3 Vironostika R Genedia R Bio line HIV 시 HIV 시시 Seordia R HIV 시약 HIV 1/2 Ag/Ab 약 Uni-Form 시약약명 3.0 multi 약 HIV-1/2 Ag/Ab ELISA Plus O 명명명명 ELISA 녹십자 ( 주 ) BIOMURIEUX ( 주 ) SD FUJIREBIO ( 주 ) 녹십자 Lot 149C0011 Lot A42LC Lot A Lot 테 Lot 149C0011 Exp Exp Exp Exp Exp 표준품번호 Sample OD/Cut-off Sample OD/Cut-off +/- HIV/HIV2 Sample OD/Cut-off KCDC CRM B / / / /0.210 KCDC CRM B / / ±/ /0.210 KCDC CRM B / / / /0.210 KCDC CRM B004 >3.0/ / /- >3.0/0.210 KCDC CRM B005 >3.0/0.215 >3.0/ /- >3.0/

66 구분 시약명 시약 명 분주후 신진메딕스 ( 주 ) ( 주 ) 녹십자 MS 울산대학교 ELISA-Ag/.Ab ELISA-Antibody Rapid PA ELISA-Ag/.Ab Architect Centaur Genedia R3 HIV Ag/Ab ELISA 시약 명 Vironostika R HIV Uni-Form Plus O 시약 명 SD Bio line HIV 1/2 3.0 multi 시약 명 Seordia R HIV-1/2 시약 명 Genedia R HIV Ag/Ab ELISA 시약명 Abbott 시약명 SIMEN 녹십자 ( 주 ) BIOMURIEUX ( 주 ) SD FUJIREBIO ( 주 ) 녹십자 Lot 17246LI00 Lot 109 Lot 149C0011 Lot A42LC Lot A Lot XP10809 Lot 149C0011 Exp Exp Exp Exp Exp Exp Exp cut-off 1.00 cut-off 1.0 표준품번호 Sample OD/Cut-off Sample OD/Cut-off +/- HIV/HIV2 Sample OD/Cut-off Sample OD Sample OD KCDC CRM B001 KCDC CRM B002 KCDC CRM B003 KCDC CRM B004 KCDC CRM B / / /- 음성 :0.13 음성 :0.13 음성 :< /0.228 >3.0/ ±/- 양성 : 1.62 양성 : 1.62 양성 : / / /- 양성 : 양성 : 양성 :4.68 >3.0/0.228 >3.0/ /- 양성 : >3.0 양성 : >3.0 양성 :14.30 >3.0/ / /- 양성 : >3.0 양성 : >3.0 양성 :>

67 * 물질에대한생산기관의코드 음성 KCDC CRM B001 B : Blood products( 혈액제제 ) 저농도 KCDC CRM B002 C : indicator chemicals for clinical 중농도 KCDC CRM B003 diagnosis ( 임상화학지표물질 ) 고농도 KCDC CRM B004 양성 KCDC CRM B005 * 배치번호 (Lot No.) 2012년 11월 5일날생산, 총생산 Vial 500개라면 Lot No (500-1) 표준물질인증제도운영세칙 [ 별표 4] 표준물질의분류중분류 (111. 이상및생화학물질 ) 소분류 (04. 혈액제제 67

68 68

69 표준품 No KCDC CRM B001 KCDC CRM B002 KCDC CRM B003 KCDC CRM B004 KCDC CRM B005 vial 1 vial 2 vial 3 구분 상부 하부 상부 하부 상부 하부 횟수 S/C S/C cut-off OD OD OD Mean SD CV Mean SD CV Mean SD CV Mean SD CV >3.0 >3.0 >3.0 >3.0 >3.0 >3.0 2 >3.0 >3.0 >3.0 >3.0 >3.0 >3.0 3 >3.0 >3.0 >3.0 >3.0 >3.0 >3.0 Mean #DIV/0! #DIV/0! #DIV/0! #DIV/0! #DIV/0! #DIV/0! SD #DIV/0! #DIV/0! #DIV/0! #DIV/0! #DIV/0! #DIV/0! CV #DIV/0! #DIV/0! #DIV/0! #DIV/0! #DIV/0! #DIV/0! 69

70 KCDC CRM B0001 KCDC CRM B0002 KCDC CRM B0003 Source of variation Between group (influence factor) Within groups (other fluctuations) Sum of squares DF Mean square Sum of squares DF Mean square Sum of squares E DF Me squ Total F-ratio Significance level P=0.152 P=0.258 P=0.263 Factor n Mean n Mean n Mean (1) (2) (3)

71 71

72 구분 표준품 KCDC DRM 001 KCDC DRM 002 KCDC DRM 003 KCDC DRM 004 KCDC DRM 005 시험수 S/C S/C S/C S/C S/C >3.0 vial > > >3.0 vial > > >3.0 vial > > >3.0 vial > > >3.0 vial > > >3.0 vial > > >3.0 vial > > >3.0 vial > > >3.0 vial > > >3.0 vial > > >3.0 vial > > >3.0 vial > > >3.0 vial > > >3.0 vial > > >3.0 vial > > >3.0 vial > > >3.0 vial > > >3.0 vial > > >3.0 vial > > >3.0 vial > >3.0 Mean #DIV/0! SD #DIV/0! CV #DIV/0! 72

73 Source of variation Sum of squares DF Mean square Between group (influence factor) Within groups (other fluctuations) Total F-ratio Significance level P=

74 Source of variation Sum of squares DF Mean square Between group (influence factor) Within groups (other fluctuations) Total F-ratio 1.07 Significance level P=

75 Source of variation Sum of squares DF Mean square Between group (influence factor) Within groups (other fluctuations) Total F-ratio Significance level P=

76 Source of variation Sum of squares DF Mean square Between group (influence factor) Within groups (other fluctuations) Total F-ratio Significance level P=

77 77

78 보관조건 ( -75 ) 4 (-25 ) 37 nc nc nc Mean NC Ab-PC Ag-PC cut-off N P N P N P N P S/C S/C S/C S/C S/C S/C S/C S/C S/C S/C S/C S/C S/C S/C S/C S/C S/C S/C S Mean SD CV Mean SD CV

79 보관조건 ( -75 ) 4 (-25 ) 37 nc nc nc Mean NC Ab-PC Ag-PC cut-off N P N P N P N P S/C S/C S/C S/C S/C S/C S/C S/C S/C S/C S/C S/C S/C S/C S/C S/C S/C S/C S Mean SD CV Mean SD CV

80 보관조건 ( -75 ) 4 (-25 ) 37 nc nc nc Mean NC Ab-PC Ag-PC cut-off N P N P N P N P S/C S/C S/C S/C S/C S/C S/C S/C S/C S/C S/C S/C S/C S/C S/C S/C S/C S/C S Mean SD CV Mean SD CV

81 보관조건 ( -75 ) 4 (-25 ) 37 nc nc nc Mean NC Ab-PC Ag-PC cut-off N P N P N P N P 2-3 S/C S/C S/C S/C S/C S/C S/C S/C S/C S/C S/C S/C S/C S/C S/C S/C S/C S/C Mean SD CV Mean SD CV

82 2. DNA 인증표준물질개발결과 가. 물질제조전준비사항 82

83 나. 인증제조의제조 83

84 Human RM DNA Human-Bacteria RM DNA (1:5) Human-Bacteria RM DNA (1:0.5) 농도 50ng/ul 50ng/ul 50ng/ul 1vial당함량 100ul 100ul 100ul human 세포 K562 세포주 K562 세포주 K562 세포주 균주 무포함 P.aeruginosa P.aeruginosa K562 세포수 : 균수혼합비율 1:0 1:5 1:0.5 제조 vial 300 vial

85 Human RM DNA Human-Bacteria RM DNA (1:5) Human-Bacteria RM DNA (1:0.5) 농도 50ng/ul 50ng/ul 50ng/ul 1vial당함량 100ul 100ul 100ul human 세포 K562 세포주 K562 세포주 K562 세포주 균주 무포함 P.aeruginosa P.aeruginosa K562 세포수 : 균수혼합비율 1:0 1:5 1:0.5 제조 vial 300 vial Human RM DNA Human-Bacteria RM DNA (1:5) Human-Bacteria RM DNA (1:0.5) 측정 vial 수 vial 당측정회수 Ct 평균 (20 3=60 회 )/CV % 29.9/1.8 예정예정 85

86 Human RM DNA Bacteria DNA (1:5) Bacteria DNA (1:0.5) 생물자원은행과 원광대학교 생물자원은행과 원광대학교 생물자원은행과 원광대학교 균질화 제외 제외 안정성 제외 제외 숙련도 20 보관 합계 다. 균질화평가 86

87 K562 real time PCR Starting Quantity(SQ) SQ Mean SQ Std. Dev C(t)-Thresh oldcycle C(t) Mean C(t) Std Dev Log Starting Quantity mean(60)ng/ul sd(60) cv(%) mean(20)ng/ul sd(20) cv%(20) NTC N/A N/A N/A NTC N/A N/A N/A 6.25(K562 DNA) 6.25(K562 DNA) 12.5(K562 DNA) 12.5(K562 DNA) (K562 DNA) (K562 DNA) (K562 DNA) (K562 DNA) (K562 DNA) (K562 DNA) (K562 DNA) (K562 DNA) (K562 DNA) (K562 DNA)

88

89 K562 cell DNA양 (ng/ul) / /230 mean(60) sd(60) cv%(60) mean(20) sd(20) cv%(20)

90

91 91

92 92

93 라. 안정성평가 93

94 사진 주차안정성평가결과 (Bacteria DNA) 사진 주차 사진 주차안정성평가결과 (Bacteria DNA) 94

95 사진 주차 사진 주차안정성평가결과 (Bacteria DNA) 95

96 96

97 번호논문제목저자명저널명집 ( 권 ) 페이지 Impact factor 1 2 국내 / 국외 SCI여부 번호발표제목발표형태발표자학회명연월일발표지 1 2 국내 / 국제 번호출원 / 등록 1 2 특허명출원 ( 등록 ) 인출원 ( 등록 ) 국출원 ( 등록 ) 번호 IPC 분류. 언론홍보및대국민교육내용, 일자등을간략히기술함. 임상시험, 관련 DB 구축, 워크샾또는심포지움개최등의경우구체적으로기술함. 97

98 98

99 해당사항없음 99

100 100

101 101

102 102

103 103

104 104

- 1 -

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