Polymer(Korea), Vol. 29, No. 1, pp 54-58, 2005 단결정과단분자막을모델시스템으로한 Poly[(R )-3-hydroxybutyrate] 의분해거동 김성수ᆞ이원기, ᆞ안용식 부산카톨릭대교환경과학부, 부경대학교응용화학공학부, 부경대학교신소재공학부 (2004년 9월 16일접수, 2005년 1월 17일채택 ) Degradation Behavior of Poly[(R)-3-hydroxybutyrate] by Using Single Crystals and Monolayers as Model Systems Seong-Soo Kim, Won-Ki Lee*,, and Yong-Sik Ahn** School of Environmental System Engineering, Catholic University at Busan, Busan 609-757, Korea *Division of Chemical Engineering, Pukyong National University, Busan 608-739, Korea **Division of Materials Science & Engineering, Pukyong National University, Busan 608-739, Korea (Received September 16, 2004;accepted January 17, 2005) 초록 : 미생물합성 poly[(r)-3-hydroxybutyrate]](p(3hb)) 의알칼리및효소분해거동을단결정과 Langmuir 단분자막을모델시스템으로하여연구하였다. 단결정의초기효소및알칼리분해거동은단결정의장축에대해수직방향 (b 축 ) 으로분해가일어났고용융점이하의온도에서열처리또한단결정의 b축을따라봉우리형태의형태학적변화를관찰하였다. 이러한결과는라멜라단결정은 b축을따라불규칙한영역을가지고있음을의미하고효소분해가불규칙한영역에서선호적으로일어난다고설명할수있다. 한편, P(3HB) 단분자막의효소및알칼리분해경향은분해매체와표면압력에크게의존하였다. 알칼리분해의경우낮은표면압력에서도분해를나타내는반면효소분해는높은표면압력하에서분해거동을나타내었다. 이러한현상은분자수준의크기인알칼리분해매체는 P(3HB) 단분자막과좁은접촉면적 ( 낮은표면압력 ) 에서도활성을보이는반면크기가큰분해효소는보다큰활성접촉면적 ( 높은표면압력 ) 을필요로하는것으로판단된다. Abstract: The hydrolytic behavior of microbial poly[(r)-3-hydroxybutyrate]](p(3hb)) has been studied by using two model systems, Langmuir monolayer and solution-grown single crystals (SCs), for elucidating the mechanism for both alkaline and enzymatic degradations. An initial degradation of SCs of P(3HB) leads to breakup lamellae parallel to their short axis (b-axis). Similarly, ridge formation on the lamellar surface appears along the b-axis at lower quenching temperature than melting temperature. Both results support that the lamellar crystals contain less-ordered and more thermally sensitive regions along the b-axis. Although the enzymatic hydrolysis of P(3HB) monolayers was similar to its alkaline one, the enzymatic degradation of P(3HB) monolayers occurred at higher constant surface pressure than the alkaline degradation. This behavior might be attributed to the size of enzymes which is much larger than that of alkaline ions; that is, the enzymes need larger contact area with monolayers to be activated. Keywords: poly[(r)-3-hydroxybutyrate], Langmuir monolayer, solution-grown crystals, enzymatic degradation. 1. 서론고분자는가볍고물성이우수하며특히가공성이뛰어나지난 4 반세기동안석유화학공업의발달과더불어저렴한플라스틱의생산과일회용품및포장재로서의소비가급격히증가하고있다. 그러나근래들어이러한대량의고분자폐기물의매립지부족과장기간미분해로야기되는지구환경오염문제가심각하게대두되면서분해성고분자에대한관심이고조되고있다. 한편, 생분해 To whom correspondence should be addressed. E-mail: wonki@pknu.ac.kr 성고분자의의료분야에서응용은여러면에서그활용도가높아지고있는데, 수술용봉합사, 방출조절용의약, 인공피부이식등의생체적합성재료의상업화와더불어다양한응용연구가활발히진행되고있다. 1-7 생분해성고분자의분해는주로물 ( 인체 ) 이나토양속의미생물에의해가수분해될수있는주사슬결합에서일어나며분해가진행됨에따라분자량을감소시키고최종적으로단량체로재생되거나물과이산화탄소로분해된다. 분해과정에서생성되는부산물은독성을가지고있지않으며환경친화적재활용이가능하여야한다. 지난 30여년동안발견된대부분의생분해성고분자는고분자주사슬에아민, 에스테르, 우레아, 우레탄 54
단결정과단분자막을모델시스템으로한 Poly[(R)-3-hydroxybutyrate] 의분해거동 55 등과같은가수분해성결합을가지고있음이잘알려져있다. 1,2,4,5 생분해성고분자란사용중에일반적인고분자와유사한물리적, 화학적물성을가지면서사용후자연계에존재하는미생물등에분해성을보이며고분자들로서미생물혹은화학적합성으로부터얻어지는지방족폴리에스테르에관심이집중되고있다. 지방족폴리에스테르들은일반적으로두가지그룹으로분류되는데산과알코올의축합중합이나환형모노머의개환중합과같은화학적합성으로얻어지는 poly(lactide) (PLA), poly(glycolide)(pga), poly(εcaprolactone)(pcl) 등과미생물로부터합성되는 poly((r)-3-hydroxybutyrate)(p(3hb)) 와 poly(hydroxybutyrate-co-hydroxyvalerate)(p(hb-co- HV)) 등으로분류된다. PLA, PGA, PCL 및이들의공중합체들은의료용재료로서주목을받고있으며현재다양한제품, Dexon, Vicryl, Biofix, Monocryl, Decapeptyl 등이생산되고있다. 미생물의에너지저장물질로서체내에합성되는 PHB계고분자들은탄소원이풍부한환경하에서생합성하여체내에축척하였다가대사에이용할탄소원이부족하면체내의고분자를분해하여에너지원으로이용한다. 현재발효장치를이용하여대량의 PHB계고분자들을생산하고있으며범용고분자의 3-4배의생산원가로생산이가능한수준이며포장재료나일회용재료의대체물질로서주목을받고있다. 이러한생분해성고분자의상업적응용은요구하는시간내에서충분한물성과분해성을가지도록설계하는측면으로부터출발한다. 생분해성폴리에스테르의분해거동은여러가지요인들, 즉, 분자량, 모폴로지, 입체구조, 분해매체등에의해영향을받는다. 5,8,9 대부분의분해성폴리에스테르는결정성을가지고있으며모폴로지 ( 결정성과사슬배향 ) 는분해거동의아주중요한역할을한다고알려져있다. 5 일반적으로반결정성고분자의분해는무정영역에서먼저진행되고조밀하게채워진결정영역으로이동한다고알려져있다. 고분자내의결정들은무정의사슬로연결되어있어효소분해가시작함에따라무정의연결고리가빠르게분해되어기계적물성은현격히감소한다고알려져있다. 10 결정영역의분해거동은모델시스템으로단결정을이용하여연구되고있는데라멜라단결정의분해는단결정내의불규칙한사슬에서선호적으로일어난다고알려져있다. 7,10-12 일반적으로생분해성고분자의분해거동은분해매체내에서의단위시간당모폴로지변화및중량감소해석이주된관점이되어왔다. 한편, 폴리에스테르계분해성고분자는친수 / 소수특성을가지고있으므로 Langmuir 단분자막을형성할수있다. 따라서, Langmuir 단분자막은분자크기에서폴리에스테르의가수분해거동을측정하는데아주유용하게응용할수있다. 13-15 즉, 가수분해에의해생성되는저분자올리고머나단량체는물속에용해되기때문에시간에따른단분자막의점령면적변화는분해속도와직접적으로관련된다. 최근에 Lee 등은 14,15 알칼리수용액에서다양한폴리에스테르단분자막의가수분해속도를측정하였다. 본연구에서는분해매체에따른생분해성고분자인 P(3HB) 의분해메카니즘및분해거동을모델시스템으로단결정과단분자막을이용하여연구하였다. 2. 실험 2.1 재료미생물합성 P(3HB) 는 ICI사로부터구입하여클로로포름에용 해한후노르말핵산에침전하여정제하였으며낮은분자량의 P(3HB)(Mw=47000, Mw/Mn=1.6) 를얻기위하여시료를클로로포름용매에 1 N의 KOH와 18-crown-6 ether 첨가하여염기성가수분해를통하여얻어졌다. 16 저분자량의 P(3HB) 의단결정은희박옥탄올용액 (0.5 wt%) 에서성장된단결정을원심분리기로분리한후메탄올에분산하였다. dl-pla(mn=11000, Mw/Mn=1.4) 는 dl-la (Aldrich, Milwakee, WI, U.S.A.) 를무수에틸아세테이트로재결정한후진공반응기에서 stannous octoate(sigma, St. Luis, MO, U.S.A.) 를촉매로하여중합하였다. 2.2 단결정의분해거동메탄올에분산된단결정분산용액을마이카위에떨어뜨린후용매를증발시켜단결정시편을제조하였다. 단결정의열처리는단결정이분산된마이카를질소분위기의 DSC(Perkin-Elmer Pyris 1, MA, U.S.A.) 내에서 20 /min의승온속도로일정온도까지승온한후 200 /min로급랭하였다. 알칼리분해실험을위한 subphase의 ph는 1 N NaOH로조절하였고효소분해는 37 의 25 mm Tris- HCl 완충용액 (ph 7.5) 에 Alcaligeneous faecalis T1으로부터정제된약 0.2 µg/ml의 PHB depolymerase를첨가하여측정하였다. 분해전후의표면모폴로지변화를관찰하기위하여원자간력현미경 (atomic force microscopy, AFM) 측정을행하였다. AFM측정은 SPI 3700 분석모드로서 SPA 300(Seiko Industry Co. Ltd., Japan) 을이용하여대기중에서 22, 척력영역에서스프링정수가 0.022 nn인 Si 3 N 4 제침계 (Olympus Co., Japan) 를사용하여측정하였다. Topographic과 deflection 이미지는동시에측정하였다. Deflection 이미지는높이에대한정보를제공하지는못하지만시료의거친표면의미세한높이변화를관찰하는데유용하다. 2.3 Langmuir 단분자막을이용한분해거동단분자막의특성은 20 에서 KSV 2200 film balance (KSV Instruments Ltd., Helsink, Finland, 면적 :15 45 cm 2 ) 를이용하여측정하였다. 단분자막압축속도는 30 cm 2 /min였고 subphase는 1600 ml의 2 차증류된초순수 (Millipore Mega-Pure system MP-6A, Prairie, WI, U.S.A) 를사용하였다. 분산용매로는클로로포름 (Fisher, Hampton, NH, U.S.A, 99%+) 을사용하였으며고분자용액의농도는 2 µmol /ml 였다. 용액분산후용매의증발을위해 1분간방치한후측정을하였고용매의증발시간은초순수의 subphase에서시간에따른재현성실험으로확인하였다. 알칼리와효소분해실험은 subphase에각각 NaOH와 0.001 µg의 PHB depolymerase를첨가하여관찰하였다. 3. 결과및토론 3.1 단결정을이용한분해거동다양한미생물로부터탄소와에너지의저장원으로서생산되는 P(3HB) 와공중합체의효소분해에대하여광범위한연구가이루어지고있으며, PHB의효소분해는무정형부분에서우선적으로일어난다고보고되어있다. Figure 1은클로로포름용액으로부터캐스팅된 P(3HB) 필름의효소분해전ㆍ후의 AFM에의해측정된표면형상을나타낸다. 높은결정성을보이는 P(3HB) 의표면은구정으로형성되어있음을보여주고 Alcaligeneous faecalis T1으로부터정제된 PHB depolymerases에서 2시간분해후의표면형상은구정사이에존재하는무정형사슬들이선택적으로분해되어명확 Polymer(Korea), Vol. 29, No. 1, 2005
56 김성수ㆍ이원기ㆍ안용식 한구정의조직을보여준다. 이러한결과는 P(3HB) 의초기효소분해는무정형영역에서진행됨을의미하며다른결과들과도잘일치한다. 5,17 3.2 단결정을이용한분해메카니즘단결정모델은반결정성고분자재료에대한결정영역에서의다양한정보를얻기위한모델시스템으로널리이용되고있다. 본연구에서도반결정성고분자인 P(3HB) 의효소및알칼리분해에대한결정영역의분해거동을고찰하기위하여단결정을제조하여관찰하였다. Figure 2는옥탄올희박용액에서성장된저분자량의 P(3HB) 라멜라단결정의 AFM에의한모폴로지와 TEM에의한회절패턴 (A), 그리고 wide angle X-ray diffraction pattern(b) 를나타내었다. 모폴로지로부터모노단결정의두께는약 7 nm, 폭은 0.3 5 µm, 그리고길이는 1 10 µm였다. 고차까지나타난명확한회절패턴 ( 장축이 a축 ) 으로부터양호한단결정이생성되었음을확인하였다. 한편, Vonk's 방법에 18 따라 X-ray diffraction pattern의회절강도로부터얻어진단결정의결정화도를계산한결과, 76% 의결정화도를보였 다. 이러한결과는단결정이라고하더라도부분적으로불규칙한영역을포함하고있음을의미하며 Figure 2(A) 우측에나타낸라멜라단결정의사슬접힘구조를모식도로나타내었다. P(3HB) 단결정에불규칙적인영역 ( 불완전한결정을형성 ) 이존재한다면온도변화에따라상이한열적거동을나타낼것이다. Figure 3(A) 는라멜라내의불규칙영역을연구하기위해단결정을용융점 (148 ) 이하의온도 (112 ) 에서열처리한후의형태를나타낸다. 열처리후, 라멜라결정의단축방향 (b) 으로부피가팽창하여솟아오른부분 (ridge) 을부분적으로관찰하였다. 이러한거동은라멜라결정내에서불규칙성을가진부분이용융점이하의온도에서도충분한분자운동성으로보다무질서하게진행되어부피가팽창되었음을의미한다. 이러한모폴로지의변화는앞서설명한단결정의결정화도가 100% 가아닌결과와잘일치한다. P(3HB) 의결정영역에대한효소분해거동을설명하기위하여여러연구자들이라멜라단결정을모델로하여 PHB deploymerases (Alcaligenes facalis T1 및 Comamonas acidovorans YM 1609) 에의한효소분해거동을연구하였다. 7,10-12 Iwata 등은 7,11 라멜라결정안에상대적으로비배향된지역에서 exo-와 endo-의복합형태로효소분해가진행된다고보고하였으며, 분해에따른톱니모양의모폴로지는분해효소에의한가장자리공격모델로서설명하였다. 그러나대부분의 PHB 라멜라단결정의효소분해는분해효소액에단결정을분산하여분해를진행하고잔존결정을원심분리한후측정하였다. 이러한방법은원심분리에의해단결정의파괴를수반할수있기 Figure 1. AFM topographic images of solution-cast P(3HB) films before (A) and after (B) enzymatic degradation. 400 lntensity (cps) 300 200 100 0 5 15 25 35 2 θ (degree) Figure 2. Deflection image (A) and x-ray diffraction pattern (B) of solution-grown crystals. Inset in Figure 2(A): typical electron diffraction pattern. Figure 3. Deflection images of solution-grown P(3HB) crystals. (A) after thermal treatment at 112, (B) after emzymatic degradation, and (C) after alkaline degradation. The right parts correspond to schematic representations of P(3HB) lamellar crystals after treatments. The arrows indicate initially morphological changes along the b-axis. 폴리머, 제 29 권제 1 호, 2005 년
단결정과단분자막을모델시스템으로한 Poly[(R)-3-hydroxybutyrate] 의분해거동 57 때문에초기분해거동을정확히측정하기어렵다. 본연구에서는마이카상에단결정을부착한후효소분해거동을측정하였다. Figure 3(B) 에서는 Alcaligenes facalis T1으로부터정제된 PHB depolymerase에서 1시간분해후의모폴로지를나타내었다. 분해는단결정의장축방향 (a) 에대하여수직방향인단축방향으로분해가일어나며분해시간이증가함으로초기분해에의해절단된면에서장축방향으로진행하여톱니모양의모폴로지를형성하는것으로판단할수있다. 이러한경향은단결정의단축방향으로사슬접힘의불규칙한영역 ( 무정영역과유사한 ) 이존재함을의미하며단결정의열처리에의해나타난모폴로지의변화결과와도부합된다. 유사한거동이단결정의알칼리분해실험에서도관찰되었다 (Figure 3(c)). P(3HB) 단결정의효소분해와알칼리분해에따른분자량의변화결과에따르면효소분해의경우, 측면분해모델로서분해에따른분자량변화를거의수반하지않는반면, 알칼리분해는라멜라의표면및측면분해에의해분자량의감소를나타낸다고알려져있다. 11,12 이러한현상은크기가약 18 25 nm인 PHB depolymerase는 19 규칙적인사슬접힘표면에서분해효소가활성을보일만큼의충분한접촉면적을가지지못하므로측면공격 (edge attack) 메카니즘에의해분해가진행되고아주작은 Na + OH - 이온들은단결정의비규칙적인영역뿐만아니라규칙적인라멜라단결정의표면에동시에분해가진행되어측면및표면공격메카니즘으로설명할수있다. 이러한결과와해석을토대로라멜라단결정의효소분해, 알칼리분해및열처리에의한변화를 Figure 3의우측에모식도로나타내었다. 3.3 단분자막을이용한분해속도 Langmuir 단분자막기법은공기 / 물계면에서분자수준의배향및분자간의작용력을측정할수있는아주유용한수단이다. 안정한단분자막을형성하기위해서는일반적으로물에대한불용성 ( 소수성 ) 과분산안정성을위한친수성기를포함하여야한다. 대부분의분해성폴리에스테르는친수 / 소수특성과단분자막의분산용매로널리사용되는용매에대한용해성을가지고있어 Langmuir 단분자막을형성할수있다. Figure 4의모식도와같이 Langmuir 단분자기법은분자크기에서분해성고분자의분해속도를측정하는데아주유용하게응용할수있다. 13-15 즉, 일정한표면압력하에서는가수분해에의해생성되는저분자올리고머나단량체는물속에용해되기때문에시간에따른단분자막의점령면적변화는아래의식과같이분해속도와직접적으로관련되고또한, 표면압력에따라단분자의밀도를조절하여분해거동을측정할수있다. x t =A/A 0 여기서 A 0 와 A는일정표면압력하에서각각시간 0과일정시간후에서의고분자의반복단위당점령면적을나타낸다. x는일정시간후에잔존하는단분자막의분율을의미한다. 즉, x가 1의값을가지면분해가일어나지않고안정한단분자막을유지함을의미한다. 본연구에서는 P(3HB) 의알칼리와분해효소에의한분해속도를측정하기위하여 NaOH 또는 PHB depolymerase를포함하는 subphase상에, P(3HB) 용액을전개시켜일정표면압력하에서시간에따른면적변화를관찰하였다. Figure 5는알칼리 subphase 상에형성된 dl-pla와 P(3HB) 단분자막들이다양한일정표면압 Subphase including degradation medium Hydrolyzed oligomer Compression Hydrolysis Figure 4. Schematic representation of occupied area changes of polyester monolayers. 력하에서시간경과에대한점령면적의변화 (A/A 0 ) 를보여준다. dl-pla의경우, 표면압력이증가할수록분해속도는감소하는데이러한현상은표면압력의증가는단분자막의점령면적의감소로단위면적당 subphase에존재하는알칼리이온의감소로써설명할수있다. 14 즉, 낮은표면압력하에서는분해가일어날수있도록사슬이충분히 subphase에잠겨있음을의미한다. 그러나 dl- PLA에비해상대적으로소수특성이강한 P(3HB) 의알칼리분해속도는표면압력의증가와더불어증가하는데이러한현상은낮은표면압력에서 subphase에전개되어있는 P(3HB) 단분자막들은최적의알칼리분해가일어날만큼잠겨있지않는것으로판단된다. 따라서표면압력의증가와더불어 subphase 속으로사슬의일부가들어감으로써가수분해가보다원활히일어나는것으로해석할수있다. 한편, 효소분해에대한 P(3HB) 단분자막의분해속도를측정하기위하여 25 mm Tris HCl buffer (ph 7.5) 에 PHB depolymerase를첨가한용액을 subphase로사용하여측정하였다. Figure 6은다양한표면압력하에서 PHB depolymerase를포함하는 subphase상에전개된 P(3HB) 단분자막들의시간에따른면적변화를나타내었다. 앞서측정된알칼리분해거동과는달리낮은표면압력 (4, 7 mn/m) 에서는 A/A 0 의값이시간변화에따라 1보다크거나거의 1의값을보인다. 이러한경향은분해가일어나지않고 P(3HB) 단분자막사이에다른물질이존재함을의미한다. 즉, subphase에존재하는 PHB depolymerase가낮은표면압력하 (4 mn/m) 에서는사슬간의낮은압력으로일부가표면에존재하고표면압력이증가하면사슬간의압력으로 subphase 속으로들어가는것으로설명할수있다. 또한알칼리수용액상에서는낮은표면 (Figure 5 참조, 4, 7 mn/m) 압력에서느린가수분해거동을보이는반면효소분해는보이지않는데이러한현상은분해매체의특성, 즉크기와관련된 Polymer(Korea), Vol. 29, No. 1, 2005
58 김성수ㆍ이원기ㆍ안용식 0.6 0.5 0.6 (A) 0 30 60 80 120 (B) a 4 mn/m b 7 mn/m c 10 mn/m 4 mn/m 7 mn/m 10 mn/m 13 mn/m 0 50 100 150 200 Time (min) Figure 5. Area ratio vs time for dl-pla (A) and P(3HB) (B) monolayers on subphase of ph 10.5 at various constant surface pressures. 4. 결론미생물로부터합성되는생분해성고분자인 P(3HB) 의알칼리및효소분해거동을측정하기위하여모델시스템으로단결정과단분자막을이용하여연구하였다. 희박용액에서제조된 P(3HB) 단결정의효소및알칼리분해에따른모폴로지변화로부터단결정의비규칙영역에서선호적으로분해가일어났으며단결정의용융점이하의온도에서열처리한결과분해거동과유사한모폴로지변화를나타내었다. 단분자막장치를이용한실험에서알칼리분해는낮은표면압력에서도일어난반면효소분해는상대적으로높은표면압력에서일어났다. 이러한현상은분해매체의크기에따라활성을나타내는데필요한접촉면적의차이로설명하였다. 분자크기의알칼리이온들은낮은표면압력하에서도분해가일어난반면큰부피의분해효소는높은표면압력 ( 큰접촉면적 ) 에서활성을나타내었다. 이상의결과로부터결정성영역에서는분해매체의크기가작은알칼리이온에의해표면및측면분해가일어나고부피가큰 PHB 분해효소는비규칙성을가진영역에서선호적분해가일어남을두모델시스템으로부터확인하였다. 감사의글 : 본연구는한국과학재단특정기초연구 (R01-2002- 000-00034-0 (2004) 지원으로수행되었으며연구비지원에감사드립니다. 참고문헌 12.4 mn/m 4 mn/m 7 mn/m 10 mn/m 0 50 100 150 200 Time (min) Figure 6. Area ratio vs time for P(3HB) monolayers on subphases with an extracellular depolymers purified from A. facalis T1 at various constant surface pressures. 다. 앞서언급한바와같이알칼리분해매체의경우크기가분자수준이어서단결정의굽혀진사슬을절단하여분자량을감소시키나효소분해의경우분해효소의크기가 18 25 nm나 12 되어단결정의규칙적인사슬에는효소가활성을나타낼만큼충분히접촉이되지않고밀도가낮은무질서한부분 ( 무정형영역 ) 을선호적으로분해시킨다는결과로설명할수있다. 즉, 낮은표면압력에서는분해효소가활성을보이도록 P(3HB) 단분자사슬이충분히 subphase에잠겨있지않아분해를보이지않는것으로이해할수있다. 따라서, 표면압력이증가함으로써분해속도가증가하는경향을보인다. 이러한결과는 P(3HB) 단결정을이용한알칼리및효소분해실험의결과와도잘일치한다. 1. R. J. Fredericks, A. J. Melveger, and L. J. Dolegiewtz, J. Polym. Sci. Polym. Phys. Ed., 22, 57 (1984). 2. E. Ron, E. Mathiowitz, A. Mathiowitz, A. Domb, and R. Langer, Macromolecules, 24, 2278 (1991). 3. A. J. Nijenhuis, D. W. Grijpma, and A. J. Pennings, Macromolecules, 25, 6419 (1992). 4. T. Hayashi, Prog. Polym. Sci., 19, 663 (1994). 5. G. Scott, Degradable Polymers, Kluwer Acedemic Publ., Dordrecht, 2002. 6. H. Tsuji and Y. Ikada, Polymer, 36, 2709 (1995). 7. T. Iwata and Y. Doi, Macromolecules, 31, 2461 (1998). 8. Y. Doi, Y. Kumagai, N. Tanahashi, and K. Mukui, Biodegradable Polymers and Plastics, Royal Society of Chemistry, London, 1992. 9. H. Abe and Y. Doi, Macromolecules, 29, 8683 (1996). 10. P. J. Hocking, R. H. Marchessault, M. R. Timmins, R. Z. Lenz, and R. C. Fuller, Macromolecules, 29, 2472 (1996). 11. T. Iwata, Y. Doi, K. Kasuya, and Y. Inoue, Macromolecules, 30, 833 (1997). 12. T Iwata, Y. Doi, F. Kokubu, and S. Teramachi, Macromolecules, 32, 8325 (1999). 13. T. Ivanova, I. Panaiotov, F. Boury, J. P. Benoit, and R. Verger, Colloid Surface B, 8, 217 (1997). 14. W. K. Lee and J. A. Gardella, Jr., Langmuir, 16, 3401 (2000). 15. J. K. Lee, J. H. Ryou, W. K. Lee, S. B. Park, C. Y. Park, and S. K. Min, Macromol. Res., 6, 476 (2003). 16. W. K. Lee, T. Iwata, H. Abe, and Y. Doi, Macromolecules, 33, 9535 (2000). 17. N. Koyama and Y. Doi, Macromolecules, 30, 826 (1997). 18. C. G. Vonk, J. Appl. Crystallogr., 6, 148 (1973). 폴리머, 제 29 권제 1 호, 2005 년