(72) 발명자반승언전라남도장흥군안양면우드랜드길 288 진성우전라남도장흥군안양면우드랜드길 288 최봉석전라남도장흥군안양면우드랜드길 288 김유선전라남도장흥군대덕읍신리 601 박태영 전라남도장흥군대덕읍산정구평길 박종국 전라남도장흥군장동면북교반산로 137 김기

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경철 원
5 years ago
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1 (19) 대한민국특허청 (KR) (12) 등록특허공보 (B1) (51) 국제특허분류 (Int. Cl.) A23L 2/38 ( ) A23L 1/29 ( ) A61K 36/72 ( ) A61P 1/16 ( ) (21) 출원번호 (22) 출원일자 2012 년 11 월 23 일 심사청구일자 2012 년 11 월 23 일 (65) 공개번호 (43) 공개일자 2014 년 06 월 03 일 (56) 선행기술조사문헌 KR A* KR A KR A KR A * 는심사관에의하여인용된문헌 (45) 공고일자 2014년07월16일 (11) 등록번호 (24) 등록일자 2014년07월07일 (73) 특허권자 주식회사새롬 전라남도장흥군장동면북교반산로 137 재단법인장흥군버섯산업연구원 전라남도장흥군안양면우드랜드길 288 (72) 발명자 김경제 전라남도장흥군안양면우드랜드길 288 서경순 전라남도광양시진월면이정 1 길 72 ( 뒷면에계속 ) (74) 대리인 최규환 전체청구항수 : 총 4 항심사관 : 이윤아 (54) 발명의명칭헛개나무를첨가한표고버섯균사체배양액을유효성분으로함유하는간기능개선용식품 (57) 요약 본발명은헛개나무에표고버섯균사체를접종하여배양한배양액을유효성분으로함유하는간기능개선용식품및약학조성물에관한것으로, 본발명의배양액은간세포보호및간기능개선효과가증진되어간기능개선을위한식품및약학조성물등에유용하게사용할수있다. 대표도 - 도 2-1 -

2 (72) 발명자반승언전라남도장흥군안양면우드랜드길 288 진성우전라남도장흥군안양면우드랜드길 288 최봉석전라남도장흥군안양면우드랜드길 288 김유선전라남도장흥군대덕읍신리 601 박태영 전라남도장흥군대덕읍산정구평길 박종국 전라남도장흥군장동면북교반산로 137 김기만 광주광역시남구제중로 11 휴먼시아 1 차아파트 10 3 동 406 호 유태경 광주광역시동구남문로 693 번길 11 ( 학동, 학 2 마을아파트 ) 206 동 501 호 이발명을지원한국가연구개발사업 과제고유번호 부처명 지식경제부 연구사업명 지역산업기술개발사업 연구과제명 헛개와버섯균사체를이용한간기능개선건강기능식품소재개발및사업화 기여율 1/1 주관기관 ( 주 ) 피엔케이 /( 재 ) 장흥군버섯산업연구원 연구기간 ~

3 특허청구의범위청구항 1 헛개나무가지를분쇄한분쇄물에정제수를첨가하여수분함량이 60~70%(v/w) 가되도록조절한후, 표고버섯균사체를접종하고 23~27 에서배양한배양액을유효성분으로함유하는간기능개선용식품. 청구항 2 삭제청구항 3 삭제청구항 4 제1항에있어서, 상기식품은육류, 곡류, 음료, 초콜릿, 빵류, 스넥류, 과자류, 피자, 젤리, 면류, 껌류, 아이스크림류, 알코올성음료, 술, 비타민복합제또는건강보조식품류인것을특징으로하는간기능개선용식품. 청구항 5 헛개나무가지를분쇄한분쇄물에정제수를첨가하여수분함량이 60~70%(v/w) 가되도록조절한후, 표고버섯균사체를접종하고 23~27 에서배양한배양액을유효성분으로함유하는간기능개선용약학조성물. 청구항 6 헛개나무가지를분쇄한분쇄물에정제수를첨가하여수분함량이 60~70%(v/w) 가되도록조절한후, 표고버섯균사체를접종하고 23~27 에서배양하여제조하는것을특징으로하는간기능개선효과와아미노산함량이증진된배양액의제조방법. 명세서 [0001] 기술분야 본발명은헛개나무에표고버섯균사체를접종하여배양한배양액을유효성분으로함유하는간기능개선용식품 및약학조성물에관한것이다. [0002] [0003] [0004] [0005] [0006] 배경기술간은인체에서혈액저장및순환, 혈액량조절과방어해독작용을하며정신적활동과밀접하게관련되어있다고알려져있다. 산업화에따른공해물질, 유독물질에우리의몸은항상노출되어있어우리의간은끊임없이해독작용에시달리고있다. 간은완충능력이큰기관으로질환의초기단계에서는잘나타나지않고상당히악화되어서야발견된다. 간경화, 간암등은각종간질환이만성적으로진행될경우공통적으로이르는마지막단계이다. 그원인으로는알코올, 약물, 화학약품, 바이러스성간염, 담도질환, 혈색소증 (hematochromatosis) 과같은대사성질환, 자가면역성질환등이있으나원인을알수없는경우도많아간은초기의건강관리가매우중요한기관이다. 최근한국인의건강수준에서간암에의한사망률은 10만명당 23.4명으로세계 1위이고만성간질환의경우도 28.8명으로 3번째로조사되었다. 또한최근통계청에서우리나라 40대의경우인구 10만명당 56.1명이간질환으로가장높은사망원인으로발표하였다. 더욱심각한것은정신적인스트레스로인한간손상이다. 정신적휴식을가질경우손상된간세포는복구되지만급박한현대사회에서정신적휴식의여유를찾을수없어정신적스트레스, 과음, 흡연으로간손상을가중시켜인체가방어해독작용을하지못해면역체계에이상을가져와다른질병의원인이되기도한다. 헛개나무는우리나라특산수종으로주독해소, 이뇨갈증해소등각종해독작용을하는것으로본초학이나식물 - 3 -

4 도설등에기록되어있다. 헛개나무열매자루 ( 果柄 ) 가간경화방지와알코올성간손상에보호효능이뛰어나다 는연구결과에따라간기능개선관련상품으로많은주목을받고있다. [0007] [0008] [0009] [0010] 버섯은식물성단백질과아미노산, 효소, 지방, 철분, 섬유소, 비타민, 미네랄등과같이인체에중요한각종영양성분을함유하고있으며특유의향과맛때문에예로부터사람들이즐겨먹었고, 지방질이적고식이섬유와단백질이풍부한저칼로리식품으로알려져있다. 또한, 여러가지건강기능성물질이많이함유되어있는식재료로써노화예방을위한항산화활성, 항암, 항당뇨, 체중감량, 면역력증강, 고혈압예방등의성인병예방에관한생리활성효과를가지고있어건강기능식품및의약품원료로많이이용되고있으며자실체뿐만아니라균사체를이용한면역력개선제품이시판되고있다. 표고균사체는식물성단백질과아미노산, 효소, 지방, 철분, 섬유소, 비타민, 미네랄등과같이인체에중요한각종영양성분을함유하고있으며특유의향과맛때문에예로부터사람들이즐겨먹었고, 지방질이적고식이섬유와단백질이풍부한저칼로리식품으로알려져있다. 헛개를이용한건강기능식품인정내용은간기능개선에주기능으로되어있으나식품학적가치에서볼때영양성분공급에대한부분은취약하므로, 헛개를주원료로표고버섯균사체를배양한배양액을활용한다면기능적측면뿐만아니라영양학적측면에서도우수한제품을기대할수있을것으로생각되어, 헛개와버섯균사체에대한간기능개선에관한연구를실시하고이에대한과학적근거를확보하고이를건강식품소재로개발하여산업화함으로써국민의건강증진을도모하여삶의질을높이는연구가필요하다. 한국등록특허제 호에는에나활성미네랄 A 활성수를유효성분으로함유하는간손상방지또는간기능개선용약학조성물이개시되어있고, 한국공개특허제 호에는간기능개선용오가피발효물과이의추출물을유효성분으로하는간기능개선용제제가개시되어있으나, 본발명의헛개나무를첨가한표고버섯균사체배양액을유효성분으로함유하는간기능개선용식품과는상이하다. 발명의내용 [0011] 해결하려는과제본발명은상기와같은요구에의해도출된것으로서, 본발명의목적은헛개나무어린가지, 잎, 과병등부위별성분분석및효능평가를통한이용성확대및버섯균사체를이용하여간기능개선에대한효능연구를실시하여과학적근거를제시하고간기능개선기능성을가지는건강식품소재의생산기술확립과안정적인생산체계를마련하기위해, 헛개나무에표고버섯균사체를접종한후최적의배양조건을확립하여배양한배양액을유효성분으로함유함으로써, 간세포및간기능개선효과를증진시킬수있는조성물을제공하는데있다. [0012] [0013] [0014] 과제의해결수단상기과제를해결하기위해, 본발명은헛개나무에표고버섯균사체를접종하여배양한배양액을유효성분으로함유하는간기능개선용식품을제공한다. 또한, 본발명은헛개나무에표고버섯균사체를접종하여배양한배양액을유효성분으로함유하는간기능개선용약학조성물을제공한다. 또한, 본발명은헛개나무가지를분쇄한분쇄물에정제수를첨가하여수분함량이 60~70%(v/w) 가되도록조절한후, 표고버섯균사체를접종하고 23~27 에서배양하여제조하는것을특징으로하는간기능개선효과와아미노산함량이증진된배양액의제조방법을제공한다. [0015] [0016] 발명의효과기존헛개추출물만을사용한건강기능식품의경우헛개나무의소비가증가함에따라국산헛개나무수급에어려움이따르고있다. 헛개과병의경우식재후 7~8년의긴기간이소요되고이에따른중국산수입이불가피하므로이러한문제점을해결하고자헛개나무어린가지를원료로하여단위시설에서일정한생산량과추출이가능한표고균사체를배양한표고균사체배양헛개나무어린가지배양액을활용하여건강기능식품소재로활용할수있다. 또한, 본발명의배양액은간기능개선뿐만아니라, 구성아미노산함량이증진되어건강기능적측면에서시너지효과를기대할수있어, 상기배양액을이용하여제조된약학또는식품조성물은간기능개선및인체의유 - 4 -

5 용성분인아미노산섭취를위해효과적으로이용할수있다. [0017] 도면의간단한설명 도 1 은헛개가지추출물 (A) 과본발명의배양액추출물 (B) 의다양한농도 (0, 10, 50, 100, 500 μg /ml) 별로간세 포생존율을비교한그래프이다. 도 2는 100 μg /ml의헛개가지추출물과본발명의배양액추출물 ( 헛개가지에배양한표고버섯균사체 ) 을아세트아미노펜 (acetaminophen) 처리하여간독성을일으킨간세포에처리하여간세포보호활성을비교한그래프이다. 도 3은 100 μg /ml의헛개가지추출물과본발명의배양액추출물 ( 헛개가지에배양한표고버섯균사체 ) 을아세트아미노펜 (acetaminophen) 처리하여간독성을일으킨간세포에처리하여간기능보호활성을비교한그래프이다. [0018] [0019] [0020] [0021] [0022] [0023] [0024] [0025] [0026] 발명을실시하기위한구체적인내용본발명의목적을달성하기위하여, 본발명은헛개나무에표고버섯균사체를접종하여배양한배양액을유효성분으로함유하는간기능개선용식품을제공한다. 본발명의간기능개선용식품에서, 상기헛개나무의부위는어린가지, 뿌리, 줄기, 열매또는잎일수있으며, 바람직하게는어린가지일수있는데, 상기어린가지는 12개월미만된가지일수있으나, 이에제한되지않는다. 또한, 본발명의간기능개선용식품에서, 상기배양액은헛개나무가지를분쇄한분쇄물에정제수를첨가하여수분함량이 60~70%(v/w) 가되도록조절한후, 표고버섯균사체를접종하고 23~27 에서배양하여제조될수있으며, 더욱바람직하게는헛개나무가지를분쇄한분쇄물에정제수를첨가하여수분함량이 60%(v/w) 가되도록조절한후, 표고버섯균사체를접종하고 25 에서배양하여제조될수있다. 상기방법으로배양액을제조하는것이헛개나무추출물에비해간세포및간기능보호활성이증진될뿐만아니라인체의유용성분인아미노산함량을최대로증진시킬수있었다. 상기식품은간기능을개선시키기위해섭취할수있는것이면특별히제한되지않는다. 본발명의배양액을식품첨가물로사용하는경우, 상기배양액을그대로첨가하거나다른식품또는식품성분과함께사용될수있고, 통상적인방법에따라적절하게사용될수있다. 유효성분의혼합양은그의사용목적 ( 예방, 건강또는치료적처치 ) 에따라적합하게결정될수있다. 일반적으로, 식품또는음료의제조시에본발명의배양액은원료에대하여 15 중량부이하, 바람직하게는 10 중량부이하의양으로첨가된다. 그러나, 건강및위생을목적으로하거나또는건강조절을목적으로하는장기간의섭취의경우에는상기양은상기범위이하일수있으며, 안전성면에서아무런문제가없기때문에유효성분은상기범위이상의양으로도사용될수있다. 상기식품의종류에는특별한제한은없다. 상기배양액을첨가할수있는식품의예로는육류, 소세지, 빵, 쵸코렛, 캔디류, 스낵류, 과자류, 피자, 라면, 기타면류, 껌류, 아이스크림류를포함한낙농제품, 각종스프, 음료수, 차, 드링크제, 알콜음료및비타민복합제등이있으며, 통상적인의미에서의건강식품을모두포함한다. 본발명의건강음료조성물은통상의음료와같이여러가지향미제또는천연탄수화물등을추가성분으로서함유할수있다. 상술한천연탄수화물은포도당, 과당과같은모노사카라이드, 말토스, 슈크로스와같은디사카라이드, 및덱스트린, 사이클로덱스트린과같은폴리사카라이드, 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨등의당알콜이다. 감미제로서는타우마틴, 스테비아추출물과같은천연감미제나, 사카린, 아스파르탐과같은합성감미제등을사용할수있다. 상기외에본발명의건강음료조성물은여러가지영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산및그의염, 알긴산및그의염, 유기산, 보호성콜로이드증점제, ph 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산음료에사용되는탄산화제등을함유할수있다. 그밖에본발명의건강음료조성물은천연과일주스, 과일주스음료및야채음료의제조를위한과육을함유할수있다. 이러한성분은독립적으로또는혼합하여사용할수있다. 이러한첨가제의비율은크게중요하진않지만본발명의조성물 100 중량부당 0.01~0.1 중량부의범위에서선택되는것이일반적이다. 본발명은또한, 헛개나무에표고버섯균사체를접종하여배양한배양액을유효성분으로함유하는간기능개선용약학조성물을제공한다

6 [0027] [0028] [0029] [0030] [0031] [0032] [0033] 본발명의배양액은약학적조성물의제조에통상적으로사용하는적절한담체, 부형제및희석제를포함할수있다. 본발명의배양액의약학적투여형태는이들의약학적허용가능한염의형태로도사용될수있고, 또한단독으로또는타약학적활성화합물과결합뿐만아니라적당한집합으로사용될수있다. 본발명에따른배양액은, 각각통상의방법에따라산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸등의경구형제형, 외용제, 좌제및멸균주사용액의형태로제형화하여사용될수있다. 배양액에포함될수있는담체, 부형제및희석제로는락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘포스페이트, 칼슘실리케이트, 셀룰로즈, 메틸셀룰로즈, 미정질셀룰로스, 폴리비닐피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘스테아레이트및광물유등을포함한다양한화합물혹은혼합물을들수있다. 제제화할경우에는보통사용하는충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제등의희석제또는부형제를사용하여조제된다. 경구투여를위한고형제제에는정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제등이포함되며, 이러한고형제제는상기성분에적어도하나이상의부형제예를들면, 전분, 칼슘카보네이트 (calcium carbonate), 수크로스 (sucrose) 또는락토오스 (lactose), 젤라틴등을섞어조제된다. 또한단순한부형제이외에마그네슘스테아레이트, 탈크같은윤활제들도사용된다. 경구를위한액상제제로는현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제등이해당되는데흔히사용되는단순희석제인물, 리퀴드파라핀이외에여러가지부형제, 예를들면습윤제, 감미제, 방향제, 보존제등이포함될수있다. 비경구투여를위한제제에는멸균된수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조제제, 좌제가포함된다. 비수성용제, 현탁제로는프로필렌글리콜 (propylene glycol), 폴리에틸렌글리콜, 올리브오일과같은식물성기름, 에틸올레이트와같은주사가능한에스테르등이사용될수있다. 좌제의기제로는위텝솔 (witepsol), 마크로골, 트윈 (tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴등이사용될수있다. 본발명의배양액의바람직한투여량은환자의상태및체중, 질병의정도, 약물형태, 투여경로및기간에따라다르지만, 당업자에의해적절하게선택될수있다. 그러나, 바람직한효과를위해서, 본발명의배양액은 1일 내지 100 mg/kg으로, 바람직하게는 내지 100 mg/kg으로투여하는것이좋다. 투여는하루에한번투여할수도있고, 수회나누어투여할수도있다. 상기투여량은어떠한면으로든본발명의범위를한정하는것은아니다. 본발명의배양액은쥐, 생쥐, 가축, 인간등의포유동물에다양한경로로투여될수있다. 투여의모든방식은예상될수있는데, 예를들면, 경구, 직장또는정맥, 근육, 피하, 자궁내경막또는뇌혈관내 (intracerebroventricular) 주사에의해투여될수있다. 본발명은또한, 헛개나무가지를분쇄한분쇄물에정제수를첨가하여수분함량이 60~70%(v/w) 가되도록조절한후, 표고버섯균사체를접종하고 23~27 에서배양하여제조하는것을특징으로하는간기능개선효과와아미노산함량이증진된배양액의제조방법을제공한다. 본발명의배양액의제조방법은바람직하게는헛개나무가지를분쇄한분쇄물에정제수를첨가하여수분함량이 60%(v/w) 가되도록조절한후, 표고버섯균사체를접종하고 25 에서배양하여제조할수있다. [0034] 이하, 본발명의실시예에의해상세히설명한다. 단, 하기실시예는본발명을예시하는것일뿐, 본발명의 내용이하기실시예에한정되는것은아니다. [0035] [0036] [0037] 재료및방법 1) 원료 헛개나무어린가지는 PNK 에서구입하여사용하였다. [0038] [0039] 2) 표고균주 Lentinus edodes - 6 -

7 [0040] [0041] 3) 배양방법헛개나무어린가지는분쇄기를이용하여톱밥형태로분쇄후사용하였다. 분쇄된헛개나무어린가지톱밥에정제수를첨가하여수분함량이 60%(v/w) 가되도록조절한후, 배양봉지에 500 g씩입봉하여이것을 121 에서 40 분간멸균하여식혀배지를제조하고, 제조된배지중량대비표고버섯균사체를 10% 내외로배지에접종하고배양기로 25 에서 40일간배양하였다. [0042] [0043] 4) 시료제조방법 분쇄한각시료 6 g 에정제수 100 ml 을넣고 60 에서 4 시간동안추출하고, Whatman filter paper No. 2 로여 과한후동결건조하여실험에사용하였다. [0044] [0045] [0046] 실험방법 1) 구성아미노산분석추출후동결건조한각시료를분쇄하여 0.3 g을시험관에넣고 6N-HCl 용액 10 ml를가한후 110 에서 24시간가수분해해서얻은여액을원심분리하고, 상등액을 50 에서농축하여염산과물을완전히증발시킨후, 20 mm HCl(pH 2.2) 을사용하여 5 ml로정용한다음 0.45 막필터 (membrane filter) 로여과하여여액을취하고 AccQ- Tag 시약을사용하여유도체화시킨후 HPLC용분석시료로사용하였다. 분석조건은표 1과같고, 아미노산함량은적분기 (integrator) 에의한외부표준법으로계산하였다. [0047] 표 1 아미노산분석조건 항목 Instrument Detector Column AccQ-Tag 분석조건 Agilent Technologies 1200 Series Agilent Technologies 1200 Series FLD (Waters Co., 150 mm L 3.9 mm ID) Column temp 37 Buffer solution A : AccQ-Tag Eluent A(acetate-phosphate buffer) Flow rate Injection volume B : AccQ-Tag Eluent B(60% acetonitrile) C : DW time A B C ml /min 5 μl [0048] [0049] [0050] 2) 간보호및간기능개선실험가 ) 콜라게나제주입 (Collagenase perfusion) Sprague-Dawley(SD) 랫트의간세포는 Berry와 Friend의방법을수정한 2단계콜라게나제주입 (collagenase perfusion) 방법으로분리하였다. 랫트간세포 (primary rat hepatocyte) 를얻기위해 SD 랫트는에테르로흡입마취시키고 70% 에탄올 (ethanol) 로복부를소독한후, 개복하고우심방을절개하여혈액이제거될수있도록 - 7 -

8 하고좌심실에 21 게이지 (gauge) 주사기로 HBSS 100 ml을주입 (perfusion) 하였다. 혈액을제거한후, 100 U/mL 콜라게나제 (collagenase) 가포함된 HBSS를 100 ml 재순환시켜세포 (hepatocyte) 가유리화되도록하였다. 간조직을떼어내어 100 mm 배양접시 (culture dish) 에서 HBSS 60 ml를첨가하고 No. 11 블레이드 (blade) 로세절 (chopping) 하여단일세포 (single cell) 들을얻을수있었다. 이세포 (hepatocyte) 현탁액에콜라게나제 (collagenase) 를제거하기위해 3회 Waymouth s MB 752/1 medium(5% 소태아혈청, 2.0 mg/ml 소혈청알부민, 10-6 M 덱사메타손, 10 7 M 인슐린, 5.32 x 10-2 M L-세린, 4.09 x 10-2 M L-알라닌, 2.67 x 10-2 M NaHCO 3, 100 IU/mL 페니실린, 100 IU/mL 스트렙토마이신, 50 μg /ml 겐타마이신설페이트 ) 로헹궈주었다. 이랫트간세포 (primary rat hepatocyte) 는 1 x 10 5 cell/ml로희석하여사전에콜라겐 (collagen) 으로코팅되어있는 96-웰플레이트에 4시간동안부착시킨후, 각시료를처리하였다. [0051] [0052] 나 ) 세포독성분석랫트간세포 (rat primary hepatocyte) 는 96-웰플레이트에 1 x 10 5 cell/ml의농도로배양하여시료를처리하였다. 24시간처리후, 0.5 μg/ml tetrazolium-based colorimetric(mtt) 가첨가된 Waymouth s MB 752/1 배지로 4시간동안포르마잔 (formazan) 을형성시켰다. 반응이끝나면배지를제거하고, 150 μl DMSO로포르마잔 (formazan) 을용해시켜 540 nm로 multiplate reader(biotek, USA) 를이용하여측정하였다. 각시료의세포생존율은, 무처리군을 100% 로하여상대적으로계상하였다. [0053] [0054] 다 ) 간기능검사간기능검사를하기위해, 랫트간세포 (Rat primary hepatocyte) 는 96-웰플레이트에 1 x 10 5 cell/ml의농도로배양하여시료를처리하였다. 24시간처리후, 배지 50 μl를이용하여 BlueGene Co.(Shanghai, China) 에서구매한 Rat lactate dehydrogenase(ldh), Rat aspartate transaminase(ast), Rat alanine transaminase(alt) ELISA kit를사용하여효소를정량적으로측정하였다. 흡광도는 450 nm로 multiplate reader(biotek, USA) 를이용하여측정하였다. 각시료의 LDH, AST, ALT의함량은 0, 10, 25, 50, 100, 250 ng/ml의농도로표준곡선을만들이정량하였다. [0055] [0056] 실시예 1: 구성아미노산함량구성아미노산분석결과표고균사체를배양한헛개가지배양액의총구성아미노산함량은 mg% 로헛개가지추출물의총구성아미노산함량보다높게검출되었다. 헛개가지에서는프롤린 (proline), 아르기닌 (arginine), 페닐알라닌 (phenylalanine) 순으로높게검출되었고, 헛개가지에표고균사체배양한배양액에서는프롤린 (proline), 글루탐산 (glutamic acid), 아스파르트산 (aspartic acid) 순으로검출되었으며총아미노산과필수아미노산의비율에있어서는헛개나무가지를표고균사체를접종하여배양한배양액이헛개나무가지에비해더높게나타났다. [0057] 표 2 구성아미노산함량 (mg%) 구분 헛개가지 헛개나무가지를표고균사체를접종하여배양한배양액 Aspartic acid Serine Glutamic acid Glycine Histidine Arginine Threonine Alanine Proline

9 Tyrosine Valine Methionine Lysine Isoleucine Leucine Phenylalanine TAA 1) EAA 2) EAA/TAA(%) [0058] 1) TAA: 총아미노산 [0059] 2) EAA: 필수아미노산 [0060] [0061] 실시예 2: 시료에대한간세포독성확인헛개나무어린가지추출물 (A) 과헛개나무어린가지에배양한표고버섯균사체추출물 (B) 을다양한농도 (0, 10, 50, 100, 500 μg/ml) 별로독성을확인한결과, 모든농도에서간세포독성은보이지않았다 ( 도 1). 따라서, 상기추출물들은독성이없어다량섭취해도간에지장을주지않을것으로사료된다. [0062] [0063] 실시예 3: 아세트아미노펜 (acetaminophen) 에대한간세포보호활성고농도의아세트아미노펜 (acetaminophen) 을처리하여간독성을일으키고, 100 μg/ml의시료들로간세포보호효과를확인하였다. 이때, 10 mm 아세트아미노펜 (acetaminophen) 으로간독성을일으킨그룹의세포생존율은 84.2 ±3.2% 이였으나각각의헛개가지추출물및헛개가지에배양한표고버섯균사체배양액추출물이처리된세포생존율은각각 101.8±1.9%, 102.9±3.5% 으로나왔다. 따라서, 상기추출물들은아세트아미노펜 (acetaminophe n) 에의한간독성을보호하는것으로확인되었다 ( 도 2). 또한, 아세트아미노펜 (acetaminophen) 에의한간독성에는헛개나무어린가지추출물보다헛개나무가지에배양한표고버섯균사체배양액추출물이보다높은방어역할을하는것을확인할수있었다 ( 도 2). [0064] [0065] [0066] [0067] 실시예 4: 아세트아미노펜 (acetaminophen) 에대한간기능보호활성고농도의아세트아미노펜 (acetaminophen) 으로간세포에독성을일으켰을때, 배지로분비되는 LDH의함량을측정한결과 ( 도 3의 A), 대조구 ( 무처리구, control) 보다 31.6 ng/ml가증가되었다. 이결과는간세포에염증을유발하여 LDH의함량이증가되는것으로판단된다. 염증을유발하는아세트아미노펜 (acetaminophen) 을처리하고 100 μg/ml 헛개가지추출물과 100 μg/ml 헛개가지에배양한표고버섯균사체배양액추출물을동시에각각처리하였을때, 아세트아미노펜 (acetaminophen) 만을처리한것보다 LDH의함량이줄어드는것으로확인되었다. 이결과는, 상기추출물들이간세포에염증을감소시켜간기능을개선하는것으로판단된다. 또한, 배지내의 AST의경우에는 ( 도 3의 B) 아세트아미노펜 (acetaminophen) 으로간세포에독성을일으켰을때대조구 ( 무처리구, control) 보다 6.9 ng/ml이증가되었으나, 100 μg/ml 헛개가지에배양한표고버섯균사체배양액추출물을처리하였을때는현저하게감소되어간세포의염증반응및간기능을보호하는것을확인할수있었다. ALT의경우는 ( 도 3의 C), 아세트아미노펜 (acetaminophen) 으로간세포에독성을일으킨처리군보다헛개가지추출물처리군에서 6.5 ng/ml을감소시켜아세트아미노펜 (acetaminophen) 을처리하지않은대조군수준까지감소시켰으며, 헛개가지에배양한표고버섯균사체추출물은 7.9 ng/ml을감소시켜헛개가지추출물보다간손상을줄이고간기능을돕는것으로사료된다

10 도면 도면 1 도면

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(52) CPC 특허분류 A23L 1/3002 ( ) A23L 1/337 ( ) A61K 2236/19 ( ) - 2 -

(52) CPC 특허분류 A23L 1/3002 ( ) A23L 1/337 ( ) A61K 2236/19 ( ) - 2 - (19) 대한민국특허청 (KR) (12) 공개특허공보 (A) (51) 국제특허분류 (Int. Cl.) A61K 36/03 (2006.01) A23L 1/30 (2006.01) A23L 17/60 (2016.01) A23L 33/00 (2016.01) (52) CPC 특허분류 A61K 36/03 (2013.01) A23L 1/29 (2013.01) (21) 출원번호