(72) 발명자조주현전남여수시여서로 동 207호김은희전남고흥군도양읍하화도길 21-1 주우형전남여수시문수북5길 동 401호 이정호전남고흥군도양읍용정등넘길 류근영광주광역시북구향토문화로 2번길 33-3 이진희전남여수시장군산길 동

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하늘 최
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1 (19) 대한민국특허청 (KR) (12) 등록특허공보 (B1) (51) 국제특허분류 (Int. Cl.) A61K 8/97 ( ) A61Q 19/02 ( ) A61Q 19/00 ( ) (21) 출원번호 (22) 출원일자 2013 년 07 월 10 일 심사청구일자 (56) 선행기술조사문헌 KR A* KR A* JP A 2013 년 07 월 10 일 네이버뉴스, 버려지던미역귀로천연화장품개발 ( )* * 는심사관에의하여인용된문헌 (45) 공고일자 2014년01월14일 (11) 등록번호 (24) 등록일자 2014년01월07일 (73) 특허권자 전라남도 전라남도무안군삼향읍오룡길 1 (72) 발명자 권승배 전남고흥군금산면평산 1 길 6-10 박순호 전남여수시신월로 동 1703 호 ( 뒷면에계속 ) (74) 대리인 최석진 전체청구항수 : 총 1 항심사관 : 박정민 (54) 발명의명칭미역귀를이용한항산화기능성화장품원료추출방법및이를이용한항산화기능성화장품 (57) 요약 미역귀 ( 포자엽 ) 에는칼슘, 마그네슘, 철분, 칼륨과같은미네랄이풍부하며, 티아민, 리보플라민, 니아신또는아스코르브산등의비타민도풍부해몸의밸런스유지에효과적인것으로알려져있다. 최근에미역귀의효능이알려지면서많은연구가진행되어지고있으며, 본발명에서는바다에버려지는미역귀의유효성분을추출하여항산화, 미백및보습에효과가있는화장품을제공하고자한다. 상기의목적을달성하기위하여, 본발명은미역귀내성분의최적추출조건을확립하기위해수분함량측정후시료분쇄과정, 용출조건별추출, 여과, 건조후수율측정과정과항산화의생리활성측정과정및기타최종미역귀추출후부산물에대한안전성검사로써중금속분석을수행하여미역귀를이용한항산화기능성화장품원료추출방법을제공한다. 대표도 - 도 2-1 -

2 (72) 발명자조주현전남여수시여서로 동 207호김은희전남고흥군도양읍하화도길 21-1 주우형전남여수시문수북5길 동 401호 이정호전남고흥군도양읍용정등넘길 류근영광주광역시북구향토문화로 2번길 33-3 이진희전남여수시장군산길 동 201호 이발명을지원한국가연구개발사업 과제고유번호 부처명 전라남도 연구사업명 미역귀를이용한기능성화장품원료추출방법개발 연구과제명 미역귀를이용한기능성화장품원료추출방법개발 기여율 1/1 주관기관 전라남도천연자원연구원 연구기간 ~

3 특허청구의범위청구항 1 미역귀수분함량측정하여선정된시료를분쇄하고, 분쇄된미역귀에추출용매로서 20부피 %-에탄올또는 30부피 %-에탄올을첨가하여, 60 내지 100 의온도에서 6 내지 12시간가열하여가용한추출물을여과, 건조하는단계로이루어지는항산화기능성화장품원료추출방법으로추출되는, 미역귀추출물이 300 내지 500 μg/ml로포함되는것을특징으로하는미역귀추출물을이용한항산화기능성화장품청구항 2 삭제청구항 3 삭제청구항 4 삭제청구항 5 삭제 명세서 [0001] 기술분야본발명은미역귀를이용한항산화기능성화장품원료추출방법에관한것으로서, 보다상세하게는바다에버려지는미역귀의유효성분을이용하여화장품의원료로사용함으로써, 항산화효과가있는화장품을제조하여고품질, 고부가가치소재로사용될수있는미역귀를이용한기능성화장품원료추출방법에관한것이다. [0002] [0003] [0004] 배경기술미역은갈조류로다시마목미역과에속하고, 한류와난류가직접만나는지역을제외하고는전국의연안에자생하고있다. 미역은저조선아래의바위위에군락을이루는 1년생해조로서, 주로겨울에서봄에걸쳐많이자라는데, 이것이무성세대인복상 (2n) 의포자체이며, 늦은봄에미역귀에형성된포자낭으로부터유주자가방출된다. 미역양식은인공채묘관리후 10월중순즈음에씨줄을가이식하고, 11월중순즈음어미줄에부착시켜본양식하여 4~5개월후에수확한다. 미역은 1년생해조로, 부착기는나뭇가지모양으로분기하고, 끝이빨판처럼되어있어다른물체에단단히붙을수있다. 줄기는원기둥이납작하게눌러진모양이며, 위쪽의엽상부의중륵과이어진다. 성숙하면줄기의가장자리가크게주름잡혀서미역귀 ( 포자엽 ) 으로변한다. 잎 ( 엽상부 ) 는좌우에서깊이갈라져띠모양의열편이많이생긴다. 생장함에따라줄기와엽상부의접촉부분에있는생장대에서좌우에열편을가진새엽상부가생긴다. 성분은건조중량 100g 당단백질함량이약 20% 로많고, 지방약 2%, 당질이약 40% 함유되어있으며, 특히칼슘, 칼륨, 마그네슘의함량이풍부하며, 또한요오드를다량함유한다. 미역은예로부터산모나환자의건강을회복하는영양식으로이용될뿐만아니라조미료의역할로도중요한식품으로오랫동안섭취해온해조류이다. 하지만엽체나줄기는건조또는염장의단순한가공처리를거쳐이용되고있으며, 미역분말주스, 미역줄기잼, 미역양갱등이연구된바있으나, 미역귀를이용한상품화실적은미미한실정이다. 미역귀 ( 포자엽 ) 에는칼슘, 마그네슘, 철분, 칼륨과같은미네랄이풍부하며, 티아민, 리보플라민, 니아신또는아스코르브산등의비타민과식이섬유도풍부해몸의밸런스유지에효과적인것으로알려져있다

4 [0005] [0006] [0007] [0008] 또한미역귀에함유된생리활성성분인후코이단의기능성이알려지면서미역귀를활용한건강식품, 화장품등의제품개발이이루어지고있다. 후코이단은갈조류인다시마, 미역, 감태등에함유되어있는산성점질다당류로, 혈액응고저지작용이강한산성다당류인헤파린과그구조와작용이유사하여항혈액응고및혈액정화작용을하는것으로보고되어있다. 또한후코이단은콜레스테롤의배설을도와혈중콜레스테롤수치를낮추며, 혈관질환을예방할수있고, 비만이성인병으로연결되는것을예방한다고알려져있다. 국내외에서도후코이단의혈액응고방지작용, 항종양작용, 위궤양치료촉진작용, 항균작용, 혈압상승억제작용, 간세포증식인자 (HGF) 생산유도, 혈당상승억제작용, 항알레르기작용, 항바이러스작용에대한연구가보고된바있으며, 특히소화기계통암종류치유에 70-80% 효과와대부분의암치유에도탁월한효과가있는것으로보고된바있다. 후코이단의성상은점성이낮고, 용해성이우수하여수용성식이섬유소재의이용뿐만아니라의약품, 기능성식품, 화장품의기초원료및첨가제를비롯하여어류및동물의바이러스성질병예방을위한사료의첨가제로서도이용가치가매우높은물질이다. 현재국내대부분의미역양식장에서는엽체만을채취하고미역귀, 줄기를바다에버리고있어해양환경오염및어선어업등 2차피해유발에따른민원이제기되고있다. 미역귀일부는전복먹이용또는식용으로단순하게이용되나, 그이용실적이미미하며, 가공기술개발및제품화산업화실적이저조한것을감안할때이에대한보다현실적인산업화방향이필요하다. 이와같은문제를해결하기위해서본발명은미역귀유효성분을화장품의원료로사용하여천연추출물을통한항산화효과에의해탄력있고건강한피부를유지시켜줄수있는미역귀를이용한항산화활성을갖는기능성화장품의원료추출방법을제공한다. 선행기술문헌 [0009] 특허문헌 ( 특허문헌 0001) 국내등록특허번호제 호에는다시마추출물 100 중량부, 미역귀추출물 5 내지 300 중량부및알송이모자반추출물 1 내지 100 중량부를포함하고, 상기다시마추출물, 미역귀추출물또는모자반추출물이각각다시마, 미역귀또는모자반을단독으로또는혼합하여물에침지한후 10 내지 50 의온도에서 5 내지 100시간동안저온추출하여얻어지는것을특징으로하는해조추출물을포함하는화장료조성물에관하여개시되어있다. ( 특허문헌 0002) 국내등록특허번호제 호에는다시마를이용한추출, 농축물을제조하는방법및그잔사에서주정또는에탄올로추출하여엽록소를효과적으로추출, 농축하여농축물에첨가하여엽록소가가지는기능성을보강하는공정으로다시마분말을이용한추출, 농축물제조방법및그잔사에대해서엽록소를추출, 농축하여첨가하여엽록소를함유된다시마농축물의제조및그기능성에관하여개시되어있다. ( 특허문헌 0003) 국내등록특허번호제 호에는동해산의다시마 (Laminaria japoni ca) 또는구멍쇠미역 (Agarum cribrosum) 건조물을세절및분쇄하는제 1단계분쇄물각각에 50 내지 200배 (v/w) 의물을가하여균질화한다음, 상온에서 30분내지 3시간동안추출한후, 원심분리하여얻은상등액을진공동결건조하여상온수추출물 (RWF-1) 을수득하는제 2단계제 2단계의상등액을제거한잔사에증류수를각각가하여 50 내지 150 에서 30분내지 3시간동안추출한후, 원심분리하여얻은상등액을진공동결건조하는단계로수득되는열수추출물 (HWF-1) 이포함되어있는해조류추출물을유효성분으로함유하는고혈압의예방및치료용조성물에관하여개시되어있다. ( 특허문헌 0004) 국내등록특허번호제 호에는미역포자엽을다당분해효소로분해하는단계 ; 상기분해물을가압추출후여과하여저점도효소분해액을제조하는단계 ; 저점도효소분해액에서단백질및알긴산을제거하여다당분해액을제조하는단계 ; 다당분해액중의다당류를산성용액에의해분해하고탈염하여조푸코이단액을제조하는단계 ; 조푸코이단액을이온교환크로마토그래피을통해푸코이단을수집하는단계, 상기수집물을분자량에따라분획하는단계를포함하는미역포자엽으로부터분리한항혈액응고활성을가진황산화푸코스다당및그제조방법에관하여개시되어있다. ( 특허문헌 0005) 그러나이와같은선행기술은본발명에서와같이미역귀의유효성분을화장품원료로사용하 - 4 -

5 여피부의항산화효과를주고, 바다에버려져해양오염및어선어업등의방해가되고있는미역귀를사용할 수있어경제성및안전성에효과가있는미역귀를이용한항산화기능성화장품의원료추출방법과는차이를보 인다. 발명의내용 [0010] 해결하려는과제본발명은상술한문제점을해결하기위한것으로써, 항산화효과가있는미역귀추출물은고부가가치를갖는기능성화장품원료로사용될수있으며, 천연물을추출하여원료로이용함으로써피부트러블및부작용을최소화하고피부의신진대사를촉진시켜건강한피부를유지할수있는미역귀를이용한항산화기능성화장품원료추출방법및이를이용한항산화기능성화장품을제공하고자한다. [0011] [0012] [0013] 과제의해결수단상기과제를해결하기위한수단으로서의본발명은, 미역귀수분함량측정하는단계 ; 상기수분함량측정후시료분쇄하는단계 ; 분쇄된미역귀를용매를첨가하여추출하는단계 ; 추출된용매를여과하는단계 ; 여과된용매를건조하는단계로이루어지는미역귀를이용한항산화기능성화장품원료추출방법을제공한다. 또한상기미역귀추출물은물 (Water), 10부피 %-에탄올, 20부피 %-에탄올또는 30부피 %-에탄올중에서선택되는어느하나를추출용매로사용하는것을특징으로하며, 미역귀추출물은 20 내지 100 중에서선택되는추출온도로사용하는것을특징으로하는미역귀를이용한항산화기능성화장품원료추출방법을제공한다. [0014] 발명의효과본발명은미역귀추출물을항산화화장품원료로사용함으로써, 바다에버려지는미역귀를고품질고부가가치소재로표준화할수있는화장품원료로자원화하여대량생산및어촌의신소득원창출의가능성을열어주고, 이를통한해양환경오염및어선어업등의피해유발을감소시킬수있으며, 건조미역귀및미역귀를열수추출후발생된부산물에서는위해요소가없어이를이용하여식품첨가물등다양한소재로도유용하게사용될수있는효과가있다. [0015] 도면의간단한설명 도 1 은미역귀를나타낸사진이다. 도 2는생리학적활성요소의최적용출조건을나타낸다. 도 3은열수추출물파우더의수분함량을나타낸다. 도 4는추출물파우더의당도 (Brix) 를나타낸다. 도 5는용매별추출물에대한추출수율을나타낸다. 도 6은온도별추출물에대한추출수율을나타낸다. 도 7은시간별추출물에대한추출수율을나타낸다. 도 8은용매별추출물의 DPPH 라디칼소거능을나타낸다. 도 9는온도별추출물의 DPPH 라디칼소거능을나타낸다. 도 10은시간별추출물의 DPPH 라디칼소거능을나타낸다. 도 11은용매별추출물의미백활성을나타낸다

6 도 12는온도별추출물의미백활성을나타낸다. 도 13은시간별추출물의미백활성을나타낸다. 도 14는열수추출물의중금속분석을나타낸다. 도 15는미역귀를이용한항산화효과를갖는기능성화장품원료추출방법을나타낸다. 도 16은본발명에서제조된미역귀를이용한항산화효과를갖는기능성화장품을나타낸다. [0016] [0017] 발명을실시하기위한구체적인내용도 1은미역귀를나타낸사진이다. 미역귀 ( 포자엽 ) 에는칼슘, 마그네슘, 철분, 칼륨과같은미네랄이풍부하며, 티아민, 리보플라민, 니아신또는아스코르브산등의비타민도풍부해몸의밸런스유지에효과적인것으로알려져있다. 본발명의항산화기능성화장품의원료추출방법은 a) 미역귀수분함량측정하여선정된시료를분쇄하는단계 ; b) 분쇄된미역귀에용매를첨가하여 20 내지 100 의온도로 2 내지 24시간가열하여용매추출물을추출하는단계 ; c) 추출된용매를여과하여건조하는단계로이루어지는구성을기본특징으로한다. [0018] 미역귀를이용한항산화기능성화장품원료추출방법으로는 a) 미역귀수분함량측정하여선정된시료를분쇄하는단계 ; b) 분쇄된미역귀에용매로서물또는 20부피 %-에탄올을첨가하여 60 내지 100 의온도로 10 내지 24 시간가열하여용매추출물을추출하는단계 ; c) 추출된용매를여과하여건조하는단계로이루어지며, 미역귀를이용한미백기능성화장품원료추출방법은 a) 미역귀수분함량측정하여선정된시료를분쇄하는단계 ; b) 분쇄된미역귀에용매로서물또는 10부피 %-에탄올을첨가하여 80 내지 100 의온도로 12 내지 24시간가열하여용매추출물을추출하는단계 ; c) 추출된용매를여과하여건조하는단계로이루어진다. [0019] 미백기능을갖는미역귀추출물의화장품함유량은 250 내지 1000 ug/ml 이고, 항산화기능을갖는미역귀추출 물의화장품함유량은 100 내지 500 ug/ml 로이루어질수있다. [0020] 이하첨부된도면을참조하여본발명의실시예를상세히설명한다. 하기에서본발명을설명함에있어서, 공 지기능또는구성에대한구체적인설명이본발명의요지를불필요하게흐릴수있다고판단되는경우에는그 상세한설명을생략하였다. [0021] [0022] 1. 연구방법 미역귀를이용한용매추출및추출된조성물의항산화효과에대한실험은다음과같이실시하였다. 도 2 는미 역귀의생리학적활성요소의용출을위한흐름도를나타낸다. [0023] [0024] [0025] 1.1. 시료확보 어장에서채취하여건조된미역귀를형태와건조상태로부터 A 급과 B 급으로구분하고구분된건조미역귀각 200g 과대량추출용 A 급건조미역귀 10kg 을믹서기분쇄후사용하였다. [0026] [0027] 1.2. 최적용출조건수립 (Determination of optimal extract methods) 미역귀내성분의최적추출조건을확립하기위해수분함량측정후시료분쇄과정, 용출조건별추출, 여과, 건조후수율측정과정과항산화생리활성측정과정및기타최종미역귀추출후부산물에대한안전성검사로써중금속분석을수행하였다 ( 도 2)

7 [0028] [0029] 수분함량 (Moisture content) 건조미역귀시료약 2~4g 을평량하여식품내에포함된수분함량을자동수분함량측정기 (CEM, SMART system 5) 를이용하여총 5 회반복측정후평균및표준편차를산출하였다. [0030] [0031] 조건별추출 (Extraction conditions) 250ml 둥근바닥플라스크에건조미역귀시료 10g에추출용매 (Water, 10부피 %-에탄올(EtOH), 20부피 %-EtOH, 30 부피 %-EtOH) 를 10배수인 100 ml을넣고각각의추출온도 (20, 40, 60, 80, 100 ) 및추출시간 (2~24시간, 매 2시간단위 ) 에따른속실렛추출을수행하였다. 추출물은여과 (No.7여지) 후, 건조수율을측정하였다. [0032] [0033] 1.3. 항산화효과 (DPPH free radical scavenging activity) DMSO에시료를희석한후용매별, 온도별, 시간별추출물각 50μl에 10mM DPPH(1,1-diphenyl-2- picrylhydrazyl) 용액 150μl를넣고 10초간 vortexing한후, 증류수를 1mL 첨가후 37 20분간방치하고 517nm 에서대조군 (Ascorbic acid) 대비흡광도를측정하였다. [0034] [0035] 1.4. 미백효과 (Tyrosinase inhibition activity) DMSO에시료를희석한후용매별, 온도별, 시간별추출물각 40μl에 0.1M PBS 440μl, 1.5mM tyrosine 80μl, mushroom tyrosinase(2,000unit/ ml ) 용액 40μl을넣고 10초간 vortexing한후, 37 20분간방치하고 490nm에서대조군 (Arbutin) 대비흡광도를측정하였다. [0036] [0037] 1.5. 중금속분석 (Analysis of heavy metals) 건조미역귀와추출후건조부산물각 0.5g 100mL 삼각플라스크에취하고 70%-HClO4 9ml와 H2SO4 1ml를섞은후 200 hot plate에서 2~3시간정도충분히분해후냉각하여 No.7 여과지를이용하여여과한다음분해액을 200배희석한후, 유도결합플라즈마발광광도계 (Perkin Elmer, opima 7000DV) 를이용하여납, 수은, 카드뮴, 비소에대한중금속분석을수행하였다. [0038] [0039] [0040] 2. 연구결과 2.1. 수분함량 (Moisture contents) 도 3은열수추출물파우더의수분함량을나타낸다. 미역귀 A급은평균 8.14±0.59%, B급은평균 8.59±1.11% 의수분함량범위를나타내었으며, 통계적인등급별차이는나타나지않았다. [0041] [0042] 2.2. Brix (%) 도 4 는추출물파우더의당도 (Brix) 를나타낸다. 미역귀 A 급은평균 6.10±0.04%, B 급은평균 5.87±0.1% 의범 위를나타내었으며, 통계적인등급별차이는나타나지않았다. [0043] [0044] [0045] [0046] 2.3. 추출수율식약청원료추출표준화프로세스 ( 제조공정표준화 ) 에제시된방법에준하여추출용매, 추출온도, 추출시간및건조방법에따른최적추출조건을수행하였으며, 최종원재료모니터링을통한반복시험을통해다음과같은수행결과를도출하였다 추출용매별도 5는용매별추출물에대한추출수율을나타낸다. 용매별추출물에대한추출수율은열수추출물 28.23± - 7 -

8 5.62%, 10부피 %-EtOH 추출물 32.03±8.99%, 20부피 %-EtOH 추출물 35.57±1.10% 및 30부피 %-EtOH 추출물 ±0.85% 로각각측정되었다. 30부피 %-EtOH>20부피%-EtOH 10부피%-EtOH 열수추출물 (0%-EtOH) 순으로나타나 30부피 %-EtOH에서추출수율이가장높은것으로나타난반면 20부피 % 이하 EtOH 추출물은통계적으로유의한차이를보이지않았다 ( 도 5). [0047] 식약청인정화장품추출용매로는물과 30 부피 % 미만의에탄올이며, 대량용매추출시경제성을함께종합적으로 검토해볼때대량열수추출이에탄올추출보다안전성과경제성이보장된방법일것으로판단되었다. [0048] [0049] 추출온도별도 6은온도별추출물에대한추출수율을나타낸다. 앞서용매추출에서선정된열수를이용한온도별추출수율은 ±5.62%, ±0.36%, ±0.21%, ±0.64% 및 ±1.72% 로각각측정되었으며, 100 > 순으로나타나 100 에서추출수율이가장높은것으로나타났다 ( 도 6). 결과적으로 100 열수추출에서가장효율적인방법임을확인하였다. [0050] [0051] [0052] 추출시간별도 7은시간별추출물에대한추출수율을나타낸다. 앞서선정된 100 열수추출의시간별추출수율은 2hour 24.53±4.03%, 4hour 30.47±2.24%, 6hour 33.23±8.53%, 8hour 42.66±0.85%, 10hour 43.90±0.85%, 12hour 45.10±2.69% 및 24hour 47.47±2.28% 로각각측정되었으며, 24hour 12hour 10hour 8hour 6hour>4hour>2hour 순으로나타났다. 통계적으로는 8시간이후부터 24시간까지의추출수율이 8시간이전의추출수율보다유의성이인정되는차이를보였다 ( 도 7). 따라서대량추출시경제성을고려해볼때 8시간과통계적으로유의적인큰차이를보이지않는 6시간이상을설정하는것이가장효과적인방법인것으로확인되었다. [0053] [0054] [0055] [0056] 2.4. 항산화효과 (DPPH free radical scavenging activity) 추출용매별도 8은용매별추출물의 DPPH 라디칼소거능을나타낸다. 용매별추출물의 DPPH 라디칼소거능을측정한결과, 100μg / ml에서열수 44.38%, 10부피 %-EtOH 14.50%, 20부피 %-EtOH 52.60% 및 30부피 %-EtOH 52.60% 이었고, 300μg / ml에서열수 53.71%, 10부피 %-EtOH 36.65%, 20부피 %-EtOH 58.77% 및 30부피 %-EtOH 62.03% 으로나타났으며, 500 μg / ml에서열수 56.74%, 10부피 %-EtOH 52.41%, 20부피 %-EtOH 66.42% 및 30부피 %-EtOH 67.11% 로측정되었다. 각농도별평균적으로 30%-EtOH 20%-EtOH 열수 >10%-EtOH 순으로나타나 20%-EtOH이상과열수추출에서항산화효과가높은것이확인되었다 ( 도 8). 앞서언급된추출용매에따른수율결과에서와마찬가지로항산화효과측정결과에서도열수추출물이 20%-EtOH 이상의추출물에서보다경제성과안전성면에서효과적일것으로판단되었다. [0057] [0058] 추출온도별도 9는온도별추출물의 DPPH 라디칼소거능을나타낸다. 온도별열수추출물의 DPPH 라디칼소거능을측정한결과, 100μg / ml에서 %, %, %, % 및 % 이었고, 300μg / ml에서 %, %, %, % 및 % 로나타났으며, 500μg / ml에서 %, %, %, % 및 % 로측정되었다. 각농도별평균적으로 100 > >20 순으로나타나 100 에서항산화효과가가장높은것이확인되었다 ( 도 9). [0059] [0060] 추출시간별 도 10 은시간별추출물의 DPPH 라디칼소거능을나타낸다. 앞서선정된 100 열수추출물의시간별 DPPH 라디칼 소거능을측정한결과, 100 μg / ml에서 2hour 2.45%, 4hour 42.59%, 6hour 57.73%, 8hour 58.20%, 10hour - 8 -

9 61.28%, 12hour 65.12% 및 24hour 68.71% 이었고, 300 μg / ml에서 2hour 47.48%, 4hour 54.30%, 6hour 58.75%, 8hour 59.19%, 10hour 66.56%, 12hour 67.11% 및 24hour 69.47% 로나타났으며, 500 μg / ml에서 2hour 54.95%, 4hour 56.53%, 6hour 59.06%, 8hour 60.01%, 10hour 68.86%, 12hour 71.72% 및 24hour 72.60% 로측정되었다. [0061] 각농도별평균적으로 24hour 12hour 10hour>8hour 6hour>4hour>2hour 순으로나타나 10hour 이후에항산화 효과가가장높은것을확인할수있었다 ( 도 10). 앞서시간에따른추출수율과대량생산시경제성을고려해 볼때 6hour 이후의추출시간을설정하는것이효율적일것으로판단된다. [0062] [0063] [0064] 2.5. 미백효과 (Tyrosinase inhibition activity) 추출용매별도 11은용매별추출물의미백활성을나타낸다. 용매별추출물의미백활성을측정한결과, 250μg / ml에서열수 30.30%, 10부피 %-EtOH 25.62%, 20부피 %-EtOH 20.21% 및 30부피 %-EtOH 19.08% 이었고, 500μg / ml에서열수 33.03%, 10부피 %-EtOH 29.71%, 20부피 %-EtOH 25.87% 및 30부피 %-EtOH 21.58% 로나타났으며, 1000μg / ml에서열수 40.31%, 10부피 %-EtOH 31.80%, 20부피 %-EtOH 29.11% 및 30부피 %-EtOH 24.13% 로측정되었다. 각농도별평균적으로열수 >10부피 %EtOH> 20부피 %EtOH >30부피 %EtOH 순으로나타나열수추출물의미백활성이가장높은것을확인할수있었다 ( 도 11). [0065] [0066] 추출온도별도 12는온도별추출물의미백활성을나타낸다. 온도별열수추출물의미백활성을측정한결과, 250μg / ml에서 %, %, %, % 및 % 이었고, 500μg / ml에서 %, %, %, % 및 % 로나타났으며, 1000μg / ml에서 %, %, %, % 및 % 로측정되었다. 각농도별평균적으로 100 >80 >60 >40 >20 순으로나타나 100 에서미백활성이가장높은것을확인할수있었다 ( 도 12). [0067] [0068] [0069] 추출시간별도 13은시간별추출물의미백활성을나타낸다. 앞서선정된 100 열수추출물의추출시간별미백활성을측정한결과, 250μg / ml에서 2hour 18.43%, 4hour 19.34%, 6hour 19.84%, 8hour 23.33%, 10hour 24.50%, 12hour 27.23% 및 24hour 29.05% 이었고, 500μg / ml에서 2hour 20.26%, 4hour 20.43%, 6hour 20.55%, 8hour 23.66%, 10hour 25.40%, 12hour 28.60% 및 24hour 29.95% 로나타났으며, 1000μg / ml에서 2hour 21.68%, 4hour 21.92%, 6hour 24.50%, 8hour 25.75%, 10hour 26.75%, 12hour 30.87% 및 24hour 35.78% 로측정되었다. 각농도별평균적으로 24hour>12hour>10hour> 8hour> 6hour> 4hour> 2hour 순으로나타나 12hour 이후에서부터미백활성이가장높은것을확인할수있었다 ( 도 13). 통계적으로는 8hour 전후에서 12hour 이후와비교되는유의적인차이를확인할수있었다. 이는대량추출시경제성과연관지어종합적으로고려해볼때앞서언급한 6hour 정도의시간도유의적으로큰차이를보이지않는다는결과를도출할수있었다. [0070] [0071] 2.6. 중금속분석 (Analysis of heavy metals) 도 14는열수추출물의중금속분석을나타낸다. 식약청화장품중금속허용농도범위 (KRDA STD) 는납, 수은, 카드뮴및비소모두 1ppm 미만이며, 이에건조미역귀시료 (Raw materiral) 의중금속농도는납불검출, 수은 0.007ppm, 카드뮴 0.004ppm 및비소 0.038ppm 수준이었다. 또한미역귀추출부산물시료 (By-product) 의중금속농도는납불검출, 수은 0.016ppm, 카드뮴 0.002ppm 및비소 0.071ppm으로나타나건조미역귀및미역귀추출부산물시료모두허용농도범위보다모두낮은극미량수준인것으로확인되어화장품원료로써안전성이입증되었다 ( 도 14). [0072] 3. 최적용출조건 - 9 -

10 [0073] [0074] 미역귀를분쇄하여열수추출, 추출온도 100 o C, 추출시간 6hr, 추출횟수 1회한후동결건조시켜실험한결과수분함량, 항산화효과에뛰어난유효성분을포함하는화장품원료사용될수있다 ( 도 15). 미역귀를이용한항산화기능성화장품원료추출방법으로는 a) 미역귀수분함량측정하여선정된시료를분쇄하는단계 ; b) 분쇄된미역귀에용매로서물또는 20부피 %-에탄올을첨가하여 60 내지 100 의온도로 10 내지 24 시간가열하여용매추출물을추출하는단계 ; c) 추출된용매를여과하여건조하는단계로이루어지는것이적절하다. [0075] [0076] [0077] [0078] [0079] 4. 추출물을이용한항산화효과를갖는기능성화장품제조미역귀추출물에대한추출시간용매의온도및용매종류에따라수분함량, 항산화효과에뛰어난기능성화장품의원료로사용할수있는것이확인됨에따라본발명의미역귀용매추출물을이용하여항산화효과에뛰어난기능성화장품을제조하였다. 미백기능을갖는미역귀추출물의기능성화장품함유량은본발명의미역귀용매추출물을 250 내지 1000 ug/ml 함유하도록하였고항산화기능을갖는미역귀추출물의화장품함유량은 100 내지 500 ug/ml 로함유하도록하였다. 기타포함되는화장품원료로는일반적으로화장품제조에사용되는원료로서유상, 수상성분, 계면활성제, 비타민류등을혼합하여제조한다. 도 16은본발명에서제조된항산화기능성화장품을나타낸다. 본발명에따라제조된항산화기능성화장품은클렌징폼, 스킨로션, 에멀젼, 영양크림, 에센스, 앰플, 아이크림, 클렌징로션, 마사지크림, 필링젤, 남성용스킨로션, 필링젤, 남성용에멀젼, 비비크림, 슬리밍젤, 고주파젤, 고주파크림, 손소독제등으로제조될수있으며, 사용방법은일반적으로환부에도포하는방법이사용될수있고, 제형에따라바람직한투여방법을선택할수있다. 본발명의조성물의일일투여량은투여대상, 투여방법, 증상에따라결정되며, 투여회수는 1일 2회이상이바람직하나정도에따라투여회수또한조절될수있다. [0080] 산업상이용가능성미역귀추출물은항산화효과가뛰어나고품질의화장품을제조할수있으며, 특히건조미역귀및미역귀추출후발생된부산물에서도중금속이식약청허용농도미만임으로이를이용하여식품첨가물등다양한소재로의미역귀추출물을유효성분으로함유하는식품생산이가능하며, 바다에버려지고있는미역귀를대량으로활용할수있음으로연안어장환경보전및어업인소득증대를도모할수있어산업적으로이용가능성이있다. 도면 도면

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Journal of Life Science 2011 Vol. 21. No. 8. 1120~1126 ISSN : 1225-9918 DOI : http://dx.doi.org/10.5352/jls.2011.21.8.1120 μ μ μ α β Journal of Life Science 2011, Vol. 21. No. 8 1121 μ μ 1122 생명과학회지 2011,