(72) 발명자 토키, 브라이언, 이. 미국 워싱턴주쇼어라인 27 번애비뉴엔이 에번스, 알렌, 제이. 미국 캘리포니아주샌카를로스어로이요애비뉴 1932 클라인, 토니, 베스 미국 워싱턴주시애틀 6 번애비뉴웨스트 3629 폴라키스

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1 (19) 대한민국특허청 (KR) (12) 등록특허공보 (B1) (45) 공고일자 2012년10월18일 (11) 등록번호 (24) 등록일자 2012년10월11일 (51) 국제특허분류 (Int. Cl.) C07D 207/08 ( ) A61K 38/00 ( ) A61P 35/00 ( ) A61P 37/00 ( ) (21) 출원번호 (22) 출원일자 ( 국제 ) 2004 년 11 월 05 일 심사청구일자 2009 년 11 월 05 일 (85) 번역문제출일자 2006 년 05 월 01 일 (65) 공개번호 (43) 공개일자 2006 년 10 월 27 일 (86) 국제출원번호 PCT/US2004/ (87) 국제공개번호 WO 2005/ 국제공개일자 (30) 우선권주장 2005 년 09 월 09 일 60/518, 년 11 월 06 일미국 (US) ( 뒷면에계속 ) (56) 선행기술조사문헌 WO A1 WO A1 (73) 특허권자 시애틀지네틱스, 인크. 미국 워싱턴주보델 30 번드라이브에스. 이 (72) 발명자 도로니나, 스베틀라나, 오. 미국 워싱턴주스노호미시 198 번플레이스에스. 이 센터, 피터, 디. 미국 워싱턴주시애틀 40 번애비뉴엔. 이 ( 뒷면에계속 ) (74) 대리인 김영, 장수길 US A 전체청구항수 : 총 82 항 심사관 : 성선영 (54) 발명의명칭리간드에접합될수있는모노메틸발린화합물 (57) 요약 MeVal-Val-Dil-Dap- 노레페드린 (MMAE) 및 MeVal-Val-Dil-Dap-Phe (MMAF) 을비롯한아우리스타틴펩티드는제조되어서말레이미도카프로일 -Val-cit-PAB 를비롯한각종링커를통해리간드에부착된다. 생성된리간드약물접합체는시험관내및생체내에서활성이다. 대표도 - 도 1-1 -

2 (72) 발명자 토키, 브라이언, 이. 미국 워싱턴주쇼어라인 27 번애비뉴엔이 에번스, 알렌, 제이. 미국 캘리포니아주샌카를로스어로이요애비뉴 1932 클라인, 토니, 베스 미국 워싱턴주시애틀 6 번애비뉴웨스트 3629 폴라키스, 폴 미국 캘리포니아주벌린게임코르테즈애비뉴 1449 슬리우코우스키, 마르크, 엑스. 미국 캘리포니아주샌카를로스오크크리크레인 42 스펜서, 수잔, 디. 미국 캘리포니아주티뷰론파라다이스드라이브 2395 (30) 우선권주장 60/557, 년03월26일미국 (US) 60/598, 년08월04일미국 (US) 60/622, 년10월27일미국 (US) - 2 -

3 특허청구의범위청구항 1 삭제청구항 2 삭제청구항 3 삭제청구항 4 삭제청구항 5 하기화학식 Ia' 을갖는항체-약물접합체, 또는그의제약상허용되는염또는용매화물. < 화학식 Ia'> 상기식에서, Ab는항체이고, -A a -W w -Y y -는링커 (Linker) 단위이고, A는스트레처 (Stretcher) 단위이고, a는 0 또는 1이고, W는각각독립적으로아미노산단위이고, w는 0 내지 12 범위의정수이고, Y는스페이서 (Spacer) 단위이고, y는 0, 1 또는 2이고, p는 1 내지 20의범위이며, D F 는하기화학식 D F 를갖는다. < 화학식 D F > [ 상기식에서, D F 의파형선은 A, W 또는 Y 에의공유부착부위를나타내고, 각각의위치에서독립적으로, R 2 는 H 및 C 1 -C 8 알킬로이루어진군으로부터선택되고 ; - 3 -

4 R 3 은 H 및 C 1 -C 8 알킬로이루어진군으로부터선택되고 ; R 4 는 H 및 C 1 -C 8 알킬로이루어진군으로부터선택되고 ; R 5 는 H 또는메틸이고 ; R 6 은 H 및 C 1 -C 8 알킬로이루어진군으로부터선택되고 ; R 7 은 H 및 C 1 -C 8 알킬로이루어진군으로부터선택되고 ; R 8 은각각 O-(C 1 -C 8 알킬 ) 이고 ; R 9 는 H 또는 C 1 -C 8 알킬이고 ; R 10 은아릴이고 ; Z 는 O 또는 NH 이고 ; R 11 은 H, C 1 -C 20 알킬또는 -(R 13 O) m -R 14 이고 ; m 은 1 내지 1000 범위의정수이고 ; R 13 은 C 2 -C 8 알킬이고 ; R 14 는 H 또는 C 1 -C 8 알킬이다.] 청구항 6 삭제청구항 7 제5항에있어서, 항체가그의시스테인잔기를통해링커단위또는약물에부착되는것인항체-약물접합체, 또는그의제약상허용되는염또는용매화물. 청구항 8 제5항에있어서, p가 2 내지 4인항체-약물접합체, 또는그의제약상허용되는염또는용매화물. 청구항 9 제5항에있어서, 하기화학식을갖는항체-약물접합체, 또는그의제약상허용되는염또는용매화물. 상기식에서, R 17 은 C 1 -C 10 알킬렌-, -C 3 -C 8 카르보시클로-, -O-(C 1 -C 8 알킬 )-, -아릴렌-, -C 1 -C 10 알킬렌-아릴렌-, -아릴렌-C 1 - C 10 알킬렌-, -C 1 -C 10 알킬렌-(C 3 -C 8 카르보시클로 )-, -(C 3 -C 8 카르보시클로 )-C 1 -C 10 알킬렌-, -C 3 -C 8 헤테로시클로-, -C 1 -C 10 알킬렌-(C 3 -C 8 헤테로시클로 )-, -(C 3 -C 8 헤테로시클로 )-C 1 -C 10 알킬렌-, -(CH 2 CH 2 O) r - 또는 -(CH 2 CH 2 O) r - CH 2 -이고; - 4 -

5 r 은 1 내지 10 범위의정수이다. 청구항 10 제 9 항에있어서, 하기화학식을갖는항체 - 약물접합체, 또는그의제약상허용되는염또는용매화물. 청구항 11 제 9 항에있어서, 하기화학식을갖는항체 - 약물접합체, 또는그의제약상허용되는염또는용매화물. 상기식에서, w 및 y는각각 0이다. 청구항 12 제5항에있어서, w가 2 내지 12 범위의정수인항체-약물접합체, 또는그의제약상허용되는염또는용매화물. 청구항 13 제12항에있어서, w가 2인항체-약물접합체, 또는그의제약상허용되는염또는용매화물. 청구항 14 제13항에있어서, W w 가 -발린-시트룰린- 또는 -페닐알라닌-리신-인항체-약물접합체, 또는그의제약상허용되는염또는용매화물. 청구항 15 삭제청구항 16 제14항에있어서, 하기화학식을갖는항체-약물접합체, 또는그의제약상허용되는염또는용매화물

6 청구항 17 제 14 항에있어서, 하기화학식을갖는항체 - 약물접합체, 또는그의제약상허용되는염또는용매화물. 청구항 18 제 14 항에있어서, 하기화학식을갖는항체 - 약물접합체, 또는그의제약상허용되는염또는용매화물.. 청구항 19 삭제청구항 20 제5항에있어서, D F 가 - 6 -

7 로이루어진군으로부터선택된화학식을갖는것인항체-약물접합체, 또는그의제약상허용되는염또는용매화물. 청구항 21 제20항에있어서, D F 가하기화학식을갖는것인항체-약물접합체, 또는그의제약상허용되는염또는용매화물. 청구항 22 제5항에있어서, Z가 O이고, R 11 이 H인항체-약물접합체, 또는그의제약상허용되는염또는용매화물. 청구항 23 제5항에있어서, 항체가모노클로날항체, 이중특이성항체, 키메라항체, 인간화항체, 디아바디 (diabody) 및항체단편으로부터선택된것인항체-약물접합체, 또는그의제약상허용되는염또는용매화물. 청구항 24 제5항에있어서, 하기화학식을갖는항체-약물접합체, 또는그의제약상허용되는염또는용매화물. 상기식에서, Val 은발린이고, Cit 는시트룰린이다

8 청구항 25 제 5 항에있어서, 하기화학식을갖는항체 - 약물접합체, 또는그의제약상허용되는염또는용매화물. 청구항 26 제24항에있어서, 항체가 CD30, CD20, CD33, CD40 또는루이스 Y 항원에결합하는것인항체-약물접합체, 또는그의제약상허용되는염또는용매화물. 청구항 27 제25항에있어서, 항체가 CD20, CD30, CD40 또는루이스 Y 항원에결합하는것인항체-약물접합체, 또는그의제약상허용되는염또는용매화물. 청구항 28 제24항에있어서, 항체가모노클로날항체이고 1F6 항체인항체-약물접합체, 또는그의제약상허용되는염또는용매화물. 청구항 29 제25항에있어서, 항체가 CD70 항원에결합하는것인항체-약물접합체, 또는그의제약상허용되는염또는용매화물. 청구항 30 제24항에있어서, 항체가모노클로날항체인항체-약물접합체, 또는그의제약상허용되는염또는용매화물. 청구항 31 제25항에있어서, 항체가모노클로날항체인항체-약물접합체, 또는그의제약상허용되는염또는용매화물. 청구항 32 유효량의제5항, 제7항내지제14항, 제16항내지제18항및제20항내지제31항중어느한항에따른접합체, 또는그의제약상허용되는염또는용매화물, 및제약상허용되는희석제, 담체또는부형제를포함하는, 림프종, 유방암, 비-소세포폐암및신장암으로이루어진군으로부터선택되는암을치료하기위한제약조성물. 청구항 33 제32항에있어서, 항체-약물접합체의항체가암세포에의해발현된 CD70 항원에결합하는것인제약조성물. 청구항 34 하기화학식을갖는접합체, 또는그의제약상허용되는염또는용매화물. A a -W w -Y y -D F 상기식에서, A a -W w -Y y -는존재하는링커단위이고, A는스트레처단위이고, a는 0 또는 1이고, - 8 -

9 -W-는각각독립적으로아미노산단위이고, w는 0 내지 12 범위의정수이고, -Y-는스페이서단위이고, y는 0, 1 또는 2이며, D F 는하기화학식 D F 를갖는다. < 화학식 D F > [ 상기식에서, 파형선은 A, W 또는 Y 에의공유부착부위를나타내고, 각각의위치에서독립적으로, R 2 는 H 및 C 1 -C 8 알킬로이루어진군으로부터선택되고 ; R 3 은 H 및 C 1 -C 8 알킬로이루어진군으로부터선택되고 ; R 4 는 H 및 C 1 -C 8 알킬로이루어진군으로부터선택되고 ; R 5 는 H 또는메틸이고 ; R 6 은 H 및 C 1 -C 8 알킬로이루어진군으로부터선택되고 ; R 7 은 H 및 C 1 -C 8 알킬로이루어진군으로부터선택되고 ; R 8 은각각 O-(C 1 -C 8 알킬 ) 이고 ; R 9 는 H 또는 C 1 -C 8 알킬이고 ; R 10 은아릴이고 ; Z 는 O 또는 NH 이고 ; R 11 은 H, C 1 -C 20 알킬또는 -(R 13 O) m -R 14 이고 ; m 은 1 내지 1000 범위의정수이고 ; R 13 은 C 2 -C 8 알킬이고 ; R 14 는 H 또는 C 1 -C 8 알킬이다.] 청구항 35 하기화학식 D F 를갖는화합물, 또는그의제약상허용되는염또는용매화물

10 < 화학식 D F > 상기식에서, D F 의파형선은 H 를나타내고, 각각의위치에서독립적으로 : R 2 는 H 및 C 1 -C 8 알킬로이루어진군으로부터선택되고 ; R 3 은 H 및 C 1 -C 8 알킬로이루어진군으로부터선택되고 ; R 4 는 H 및 C 1 -C 8 알킬로이루어진군으로부터선택되고 ; R 5 는 H 또는메틸이고 ; R 6 은 H 및 C 1 -C 8 알킬로이루어진군으로부터선택되고 ; R 7 은 H 및 C 1 -C 8 알킬로이루어진군으로부터선택되고 ; R 8 은각각 O-(C 1 -C 8 알킬 ) 이고 ; R 9 는 H 또는 C 1 -C 8 알킬이고 ; R 10 은아릴이고 ; Z는 O이고 ; R 11 은 H이다. 청구항 36 제35항에있어서, 하기화학식 을갖는화합물, 또는그의제약상허용되는염또는용매화물. 청구항 37 삭제청구항 38 삭제청구항 39 삭제청구항

11 삭제청구항 41 삭제청구항 42 제5항, 제7항내지제14항, 제16항내지제18항및제20항내지제31항중어느한항에있어서, 단리되고정제된형태인접합체, 또는그의제약상허용되는염또는용매화물. 청구항 43 하기화학식 Ic를갖고, 하나이상의약물잔기에공유적으로부착된항체를포함하는항체-약물접합체, 또는그의제약상허용되는염또는용매화물. < 화학식 Ic> 상기식에서, Ab는하나이상의하기종양-관련항원 (1) 내지 (35): (1) BMPR1B ( 골형태형성단백질수용체-IB형 ); (2) E16 (LAT1, SLC7A5); (3) STEAP1 ( 전립선의 6개의막횡단상피항원 ); (4) 0772P (CA125, MUC16, 진뱅크 (Genbank) 수탁번호 AF361486); (5) MPF (MPF, MSLN, SMR, 거대핵세포강화인자, 메소텔린 ); (6) Napi3b (NAPI-3B, NPTIIb, SLC34A2, 용질담체 34족 ( 인산나트륨 ), 2 원, 제II형나트륨-의존성포스페이트전달체 3b); (7) Sema 5b (FLJ 10372, KIAA1445, Mm.42015, SEMA5B, SEMAG, 세마포린 5b Hlog, 세마도메인, 7개의트롬보스폰딘반복 ( 제1형및제1형-유사 ), 막횡단도메인 (TM) 및짧은세포질도메인, ( 세마포린 ) 5B, 진뱅크수탁번호 AB040878); (8) PSCA hlg ( C12Rik, C530008O16Rik, RIKEN cdna C12, RIKEN cdna C12 유전자, 진뱅크수탁번호 AY358628); (9) ETBR ( 엔도텔린 B형수용체, 진뱅크수탁번호 AY275463); (10) MSG783 (RNF124, 가상단백질 FLJ20315, 진뱅크수탁번호 NM_017763); (11) STEAP2 (HGNC_8639, IPCA-1, PCANAP1, STAMP1, STEAP2, STMP, 전립선암관련유전자 1, 전립선암관련단백질 1, 전립선의 6개의막횡단상피항원 2, 6개의막횡단전립선단백질 ); (12) TrpM4 (BR22450, FLJ20041, TRPM4, TRPM4B, 일시적수용체잠재적양이온채널, M 아족, 4 원 ); (13) CRIPTO (CR, CR1, CRGF, CRIPTO, TDGF1, 기형암종-유도성장인자 ); (14) CD21 (CR2 ( 보체수용체 2) 또는 C3DR (C3d/ 엡스타인바바이러스수용체 ) 또는 Hs.73792); (15) CD79b (IGb ( 이뮤노글로불린-연관베타 ), B29); (16) FcRH2 (IFGP4, IRTA4, SPAP1A (SH2 도메인함유포스파타제고정단백질 1a), SPAP1B, SPAP1C); (17) HER2; (18) NCA;

12 (19) MDP; (20) IL20Rα; (21) 브레비칸 ; (22) Ephb2R; (23) ASLG659; (24) PSCA; (25) GEDA; (26) BAFF-R; (27) CD22; (28) CD79a (CD79A, CD79α, 이뮤노글로불린-연관알파 ); (29) CXCR5 ( 버킷림프종수용체 1); (30) HLA-DOB ( 펩티드에결합하여이를 CD4+ T 림프구에제시하는 MHC 클래스 II 분자 (Ia 항원 ) 의베타서브유닛 ); (31) P2X5 ( 퓨린성수용체 P2X 리간드-게이트이온채널 5); (32) CD72 (B-세포분화항원 CD72, Lyb-2); (33) LY64 ( 림프구항원 64 (RP105), 류신풍부반복체 (LRR) 족의제I형막단백질 ); (34) FCRH1 (Fc 수용체-유사단백질 1); 및 (35) IRTA2 ( 이뮤노글로불린거대족수용체전위관련 2) 에결합하는항체이고, A는스트레처단위이고, a는 0 또는 1이고, W는각각독립적으로아미노산단위이고, w는 0 내지 12 범위의정수이고, Y는스페이서단위이고, y는 0, 1 또는 2이고, p는 1 내지 20 범위이고, D는하기화학식 D F 인약물잔기이다. < 화학식 D F > [ 상기식들에서, D F 의파형선은 A, W 또는 Y 에의공유부착부위를나타내고, 각각의위치에서독립적으로, R 2 는 H 및 C 1 -C 8 알킬로이루어진군으로부터선택되고 ;

13 R 3 은 H 및 C 1 -C 8 알킬로이루어진군으로부터선택되고 ; R 4 는 H 및 C 1 -C 8 알킬로이루어진군으로부터선택되고 ; R 5 는 H 또는메틸이고 ; R 6 은 H 및 C 1 -C 8 알킬로이루어진군으로부터선택되고 ; R 7 은 H 및 C 1 -C 8 알킬로이루어진군으로부터선택되고 ; R 8 은각각 O-(C 1 -C 8 알킬 ) 이고 ; R 9 는 H 또는 C 1 -C 8 알킬이고 ; R 10 은아릴이고 ; Z 는 O 또는 NH 이고 ; R 11 은 H, C 1 -C 20 알킬또는 -(R 13 O) m -R 14 이고 ; m 은 1 내지 1000 범위의정수이고 ; R 13 은 C 2 -C 8 알킬이고 ; R 14 는 H 또는 C 1 -C 8 알킬이다.] 청구항 44 삭제청구항 45 삭제청구항 46 제43항에있어서, 항체가그의시스테인잔기를통해약물잔기에부착되는것인항체-약물접합체, 또는그의제약상허용되는염또는용매화물. 청구항 47 제46항에있어서, p가 1 내지 4인항체-약물접합체, 또는그의제약상허용되는염또는용매화물. 청구항 48 제43항에있어서, p가 2 내지 8인항체-약물접합체, 또는그의제약상허용되는염또는용매화물. 청구항 49 제43항에있어서, p가 2 내지 5인항체-약물접합체, 또는그의제약상허용되는염또는용매화물

14 청구항 50 제 46 항에있어서, 하기화학식을갖는항체 - 약물접합체, 또는그의제약상허용되는염또는용매화물. 청구항 51 제 50 항에있어서, 하기화학식을갖는항체 - 약물접합체, 또는그의제약상허용되는염또는용매화물. 청구항 52 삭제청구항 53 삭제청구항 54 삭제청구항 55 제51항에있어서, 화학식 D F 가하기화학식을갖는것인항체-약물접합체, 또는그의제약상허용되는염또는용매화물. 청구항 56 제 43 항에있어서, 하기화학식을갖는항체 - 약물접합체, 또는그의제약상허용되는염또는용매화물

15 청구항 57 제 56 항에있어서, 하기화학식을갖는항체 - 약물접합체, 또는그의제약상허용되는염또는용매화물. 청구항 58 제 57 항에있어서, 하기화학식을갖는항체 - 약물접합체, 또는그의제약상허용되는염또는용매화물. 청구항 59 삭제청구항 60 삭제청구항 61 삭제청구항 62 제57항에있어서, 화학식 D F 가하기화학식을갖는것인항체-약물접합체, 또는그의제약상허용되는염또는용매화물. 청구항 63 삭제청구항 64 제43항에있어서, w가 2 내지 12 범위의정수인항체-약물접합체, 또는그의제약상허용되는염또는용매화물. 청구항 65 제43항에있어서, w가 2인항체-약물접합체, 또는그의제약상허용되는염또는용매화물

16 청구항 66 제 43 항에있어서, W w 가 - 발린 - 시트룰린 - 인항체 - 약물접합체, 또는그의제약상허용되는염또는용매화물. 청구항 67 제 43 항에있어서, D 가하기화학식으로이루어진군으로부터선택된것인항체 - 약물접합체, 또는그의제약상 허용되는염또는용매화물.. 청구항 68 제43항에있어서, 항체가 HER2 수용체에특이결합하는것인항체-약물접합체, 또는그의제약상허용되는염또는용매화물. 청구항 69 제68항에있어서, HER2 수용체의세포외도메인에특이결합하여 HER2 수용체를과발현시키는종양세포의성장을억제하는항체-약물접합체, 또는그의제약상허용되는염또는용매화물. 청구항 70 제43항에있어서, 항체가모노클로날항체, 이중특이성항체, 키메라항체, 인간화항체및항체단편으로이루어진군으로부터선택된것인항체-약물접합체, 또는그의제약상허용되는염또는용매화물. 청구항 71 제70항에있어서, 항체단편이 Fab 단편인항체-약물접합체, 또는그의제약상허용되는염또는용매화물

17 청구항 72 제70항에있어서, 인간화항체가 humab4d5-1, humab4d5-2, humab4d5-3, humab4d5-4, humab4d5-5, humab4d5-6, humab4d5-7 및 humab4d5-8 ( 트라츠주마브 (trastuzumab)) 로부터선택된것인항체-약물접합체, 또는그의제약상허용되는염또는용매화물. 청구항 73 제72항에있어서, 항체가 humab4d5-8 ( 트라츠주마브 ) 인항체-약물접합체, 또는그의제약상허용되는염또는용매화물. 청구항 74 제43항에있어서, 하기화학식으로이루어진군으로부터선택된항체-약물접합체, 또는그의제약상허용되는염또는용매화물. 상기식에서, Val은발린이고, Cit는시트룰린이다. 청구항 75 제74항에있어서, 항체가 humab4d5-8 ( 트라츠주마브 ) 인항체-약물접합체, 또는그의제약상허용되는염또는용매화물. 청구항 76 유효량의제43항, 제46항내지제51항, 제55항내지제58항, 제62항및제64항내지제75항중어느한항에따른항체-약물접합체, 또는그의제약상허용되는염또는용매화물, 및제약상허용되는희석제, 담체또는부형제를포함하는, 림프종, 유방암, 비-소세포폐암및신장암으로이루어진군으로부터선택되는암을치료하기위한제약조성물. 청구항 77 제76항에있어서, 치료유효량의튜불린-형성억제제, 토포이소머라제억제제및 DNA 결합제로부터선택된화학치료제를추가로포함하는제약조성물. 청구항 78 삭제청구항 79 삭제

18 청구항 80 삭제청구항 81 제77항에있어서, 유효량의항암제, 면역억제제및항-감염제로이루어진군으로부터선택된추가작용제를추가로포함하는제약조성물. 청구항 82 삭제청구항 83 삭제청구항 84 세포배양배지내의포유동물세포를제43항, 제46항내지제51항, 제55항내지제58항, 제62항및제64항내지제75항중어느한항에따른항체-약물접합체, 또는그의제약상허용되는염또는용매화물에노출시키고, 상기항체-약물접합체, 또는그의제약상허용되는염또는용매화물의세포독성활성을측정함으로써, 상기세포의증식을억제하는것을포함하는, 세포증식의억제방법. 청구항 85 제43항, 제46항내지제51항, 제55항내지제58항, 제62항및제64항내지제75항중어느한항에따른항체- 약물접합체, 또는그의제약상허용되는염또는용매화물, 및제약상허용되는희석제, 담체또는부형제를포함하는, 림프종, 유방암, 비-소세포폐암및신장암으로이루어진군으로부터선택되는암을치료하기위한제제. 청구항 86 제85항에있어서, 항체-약물접합체, 또는그의제약상허용되는염또는용매화물이 ErbB2 유전자에의해코딩되는수용체에특이결합하는것인제제. 청구항 87 제85항에있어서, 항체-약물접합체, 또는그의제약상허용되는염또는용매화물의양이환자의체중 kg 당 0.1 내지 10 mg 범위인제제. 청구항 88 제85항에있어서, 항체-약물접합체, 또는그의제약상허용되는염또는용매화물이 3주간격으로투여되는것인제제. 청구항 89 제85항에있어서, 상기항체-약물접합체, 또는그의제약상허용되는염또는용매화물이제약상허용되는비경구용비히클로제제화되어비경구로투여되는것인제제. 청구항 90 제85항에있어서, 상기항체-약물접합체, 또는그의제약상허용되는염또는용매화물이단위투여량주입형태로제제화된것인제제. 청구항 91 제85항에있어서, 상기항체-약물접합체, 또는그의제약상허용되는염또는용매화물이정맥내로투여되는것인제제

19 청구항 92 제85항에있어서, (1) 내지 (35) 로부터선택된종양-관련항원에결합하는 2차항체를추가로포함하는제제. 청구항 93 제92항에있어서, 상기 2차항체가세포독성제와접합된것인제제. 청구항 94 종양-관련항원에특이결합하는제43항, 제46항내지제51항, 제55항내지제58항, 제62항및제64항내지제 75항중어느한항에따른항체-약물접합체, 또는그의제약상허용되는염또는용매화물, 및화학치료제를각각환자의종양세포성장을억제하는유효량으로포함하는, 림프종세포, 유방암세포, 비-소세포폐암세포및신장암세포로이루어진군으로부터선택되고종양-관련항원을과발현하는종양세포의성장을억제하기위한제약조성물. 청구항 95 제94항에있어서, 상기항체-약물접합체, 또는그의제약상허용되는염또는용매화물이종양세포를상기화학치료제에대해민감하게하는것인제약조성물. 청구항 96 유효량의제43항, 제46항내지제51항, 제55항내지제58항, 제62항및제64항내지제75항중어느한항에따른항체-약물접합체및화학치료제의조합물을포함하는, 림프종, 유방암, 비-소세포폐암및신장암으로이루어진군으로부터선택되고 ErbB2 수용체의과발현을특징으로하는질환에민감하거나상기질환으로진단받은인간환자를치료하기위한제약조성물. 청구항 97 개체로부터분리된암세포를제43항, 제46항내지제51항, 제55항내지제58항, 제62항및제64항내지제75항중어느한항에따른항체-약물접합체, 또는그의제약상허용되는염또는용매화물에노출시키고, 상기항체-약물접합체, 또는그의제약상허용되는염또는용매화물의암세포에대한결합정도를측정하는것을포함하는, 암세포의검출분석법. 청구항 98 제97항에있어서, 세포가유방종양세포인분석법. 청구항 99 제97항에있어서, 형광계내혼성화 (FISH) 에의해종양-관련항원-코딩핵산의수준을측정함으로써결합정도를측정하는분석법. 청구항 100 제97항에있어서, 면역조직화학 (IHC) 에의해결합정도를측정하는분석법. 청구항 101 제43항, 제46항내지제51항, 제55항내지제58항, 제62항및제64항내지제75항중어느한항에따른항체- 약물접합체, 또는그의제약상허용되는염또는용매화물 ; 용기 ; 및상기항체-약물접합체, 또는그의제약상허용되는염또는용매화물이암을치료하는데사용될수있다고나타낸패키지첨부설명서또는표지를포함하는제품. 청구항

20 제101항에있어서, 상기패키지첨부설명서또는표지가, 상기항체-약물접합체, 또는그의제약상허용되는염또는용매화물이 ErbB2 수용체의과발현을특징으로하는암을치료하는데사용될수있다고나타낸것인제품. 청구항 103 제101항에있어서, 암이유방암인제품. 청구항 104 치료유효량의제43항, 제46항내지제51항, 제55항내지제58항, 제62항및제64항내지제75항중어느한항에따른항체-약물접합체, 또는그의제약상허용되는염또는용매화물을포함하는, ErbB2 (HER2) 수용체의과발현을특징으로하고항-ErbB2 항체치료에반응하지않거나빈약하게반응하는포유동물에서의암을치료하기위한제약조성물. 청구항 105 제104항에있어서, 포유동물이인간인제약조성물. 청구항 106 제35항또는제36항에있어서, 단리되고정제된형태인화합물, 또는그의제약상허용되는염또는용매화물. 청구항 107 제5항에있어서, A, W 및 Y가각각존재하는항체-약물접합체, 또는그의제약상허용되는염또는용매화물. 청구항 108 제5항에있어서, a가 1이고, w 및 y가각각 0인항체-약물접합체, 또는그의제약상허용되는염또는용매화물. 청구항 109 삭제청구항 110 삭제청구항 111 삭제청구항 112 삭제청구항 113 삭제청구항 114 삭제청구항 115 삭제청구항 116 삭제

21 청구항 117 삭제청구항 118 삭제청구항 119 삭제청구항 120 삭제청구항 121 삭제청구항 122 삭제청구항 123 삭제청구항 124 삭제청구항 125 삭제청구항 126 삭제청구항 127 삭제청구항 128 삭제청구항 129 삭제청구항 130 삭제청구항 131 삭제청구항 132 삭제

22 청구항 133 삭제청구항 134 삭제청구항 135 삭제청구항 136 삭제청구항 137 삭제청구항 138 삭제청구항 139 삭제청구항 140 삭제청구항 141 삭제청구항 142 삭제청구항 143 삭제청구항 144 삭제청구항 145 삭제청구항 146 삭제청구항 147 삭제청구항 148 삭제

23 청구항 149 삭제청구항 150 삭제청구항 151 삭제청구항 152 삭제청구항 153 삭제청구항 154 삭제청구항 155 삭제청구항 156 삭제청구항 157 삭제청구항 158 삭제청구항 159 삭제청구항 160 삭제청구항 161 삭제청구항 162 삭제청구항 163 삭제청구항 164 삭제

24 청구항 165 삭제청구항 166 삭제청구항 167 삭제청구항 168 삭제청구항 169 삭제청구항 170 삭제청구항 171 삭제청구항 172 삭제청구항 173 삭제청구항 174 삭제청구항 175 삭제청구항 176 삭제청구항 177 삭제청구항 178 삭제청구항 179 삭제청구항 180 삭제

25 청구항 181 삭제청구항 182 삭제청구항 183 삭제청구항 184 삭제청구항 185 삭제청구항 186 삭제청구항 187 삭제청구항 188 삭제청구항 189 삭제청구항 190 삭제청구항 191 삭제청구항 192 삭제청구항 193 삭제청구항 194 삭제청구항 195 삭제청구항 196 삭제

26 청구항 197 삭제청구항 198 삭제청구항 199 삭제청구항 200 삭제청구항 201 삭제청구항 202 삭제청구항 203 삭제청구항 204 삭제청구항 205 삭제청구항 206 삭제청구항 207 삭제청구항 208 삭제청구항 209 삭제청구항 210 삭제청구항 211 삭제청구항 212 삭제

27 청구항 213 삭제청구항 214 삭제청구항 215 삭제청구항 216 삭제청구항 217 삭제청구항 218 삭제청구항 219 삭제청구항 220 삭제청구항 221 삭제 명세서 [0001] 본출원은 2003년 11월 6일에출원된미국가특허출원제60/518,534호 ; 2004년 3월 26일에출원된미국가특허출원제60/557,116호 ; 2004년 8월 4일에출원된미국가특허출원제60/598,899호 ; 및 2004년 10월 27일에출원된미국가특허출원제60/622,455호를우선권으로주장하며, 이들의개시내용은본원에참고문헌으로도입되어있다. [0002] 기술분야본발명은약물화합물, 보다구체적으로는약물-링커-리간드접합체, 약물-링커화합물, 및약물-리간드접합체, 이를포함하는조성물, 암, 자가면역질환또는감염성질환을치료하기위하여이를이용하는방법에관한것이다. 본발명은또한항체-약물접합체, 이를포함하는조성물, 및암, 자가면역질환또는감염성질환을치료하기위하여이를사용하는방법에관한것이다. 본발명은또한시험관내, 계내, 및생체내에서포유동물세포또는관련병리학적상태의진단또는치료를위하여항체-약물접합체화합물을사용하는방법에관한것이다. [0003] 배경기술최대의효능및최소의독성을얻기위하여약물및다른제제의표적세포, 조직및종양으로의전달을개선하는것은관심을받아왔으며, 수년간상당한연구가수행되었다. 생물학적활성분자를세포내로수송하는효과적인방법을개발하기위하여많은시도가이루어졌으나, 생체내및시험관내둘다에서완전히만족스러운것으로증명된것은없었다. 약물과세포내표적과의결합을최적화하면서, 예를들어인접세포로의약물의세포간재분포를최소화하는것은종종어렵고비효율적이다

28 [0004] [0005] [0006] [0007] 현재환자에게비경구적으로투여되는대부분의제제는표적화되어있지않아서, 불필요한체내의세포및조직으로제제를전신적으로전달하게되며, 이는종종바람직하지않다. 이는약물의유해한부작용을야기할수있고, 종종투여될수있는약물 ( 예를들어, 화학요법제 ( 항암제 ), 세포독성제, 효소억제제및항바이러스제또는항미생물제 ) 의투여량을제한하게된다. 비교에의하면, 약물의경구투여가투여의편리하고경제적인방식으로고려되지만, 약물이일단전신적순환으로흡수되면영향을받지않은세포로비특이적독성이있을우려가있다. 또한, 합병증은경구생체이용률, 및장 (gut) 이약물에추가로노출되어장독성의위험을야기하는약물의장내체류시간과관련된문제점과연관이있다. 따라서, 주요목적은세포및조직으로제제를특이적으로표적화하기위한방법을개발하는것이다. 그러한치료방법의장점은다른세포및조직 ( 예를들어, 감염되지않은세포 ) 으로이러한제제의부적절한전달에의한일반적인생리학적효과를회피하는것을포함한다. 세포내표적화는생물학적활성제제 ( 즉, 세포내의활성대사물질 ) 의축적및잔류를가능하게하는방법, 화합물및제형에의하여달성할수있다. 모노클로날항체치료법은암, 면역학적장애및혈관형성장애를갖는환자의표적화된치료를위하여확립되었다. 세포독성제또는세포증식억제제, 예를들어, 암의치료에서종양세포를사멸시키거나억제하는약물의국소전달용항체-약물접합체의용도는 (Syrigos and Epenetos (1999) Anticancer Research 19: ; Niculescu-Duvaz and Springer (1997) Adv. Drg.Del. Rev. 26: ; 미국특허제 호 ) 이론적으로종양으로약물잔기의표적화된전달및그안에서의세포내축적을가능하게하고, 이들접합되지않은약물제제의전신적투여는제거되어야할종양세포뿐만아니라정상세포에대해허용될수없는수준의독성을야기할수있다 (Baldwin et al., 1986, Lancet pp. (Mar. 15, 1986): ; Thorpe, 1985, "Antibody Carriers Of Cytotoxic Agents In Cancer Therapy: A Review, "in Monoclonal Antibodies '84: Biological And Clinical Applications, A. Pinchera et al. (ed. s), pp ). 따라서, 최소의독성을갖는최대의효능을찾아야한다. 폴리클로날항체및모노클로날항체둘다는이러한전략에서유용하다고보고되었다 (Rowland et al., 1986, Cancer Immunol. Immunother. 21: ). 이러한방법에서사용된약물은다우노마이신, 독소루비신, 메토트렉세이트및빈데신을포함한다 (Rowland et al., 1986의상기문헌 ). 항체-독소접합체에사용된독소는박테리아독소, 예를들어디프테리아독소, 식물독소, 예를들어리신, 소분자독소, 예를들어, 겔다나마이신 (Kerr et al., 1997, Bioconjugate Chem. 8 (6): ; Mandler et al. (2000) Jour. of the Nat. Cancer Inst. 92 (19): ; Mandler et al. (2000) Bioorganic & Med. Chem. Letters 10: ; Mandler et al. (2002) Bioconjugate Chem. 13: ), 메이탄시노이드 (EP ; Liu et al., (1996) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 93: ), 및칼리체아미신 (Lodeet al. (1998) Cancer Res. 58: 2928; Hinman et al. (1993) Cancer Res. 53: ) 를포함한다. 독소는튜불린결합, DNA 결합, 또는토포이소머라제억제를포함하는메카니즘에의하여그들의세포독성및세포증식억제효과를일으킬수있다 (Meyer, D.L. and Senter, P.D. "Recent Advances in Antibody Drug Conjugates for Cancer Therapy" in Annual Reports in Medicinal Chemistry, Vol 38 (2003) Chapter 23, ). 일부세포독성약물은큰항체또는단백질수용체리간드에접합될때, 비활성이거나덜활성이되는경향이있다. 제발린 (ZEVALIN) ( 등록상표 ) ( 이브리투모마브티욱세탄, Biogen/Idec) 은티오우레아링커 (linker)-킬레이터에 의하여결합되는 111 In 또는 90 Y 방사성동위원소및보통및악성 B 림프구의표면상에서발견되는 CD20 항원에대한뮤린 (murine) IgG1 카파모노클로날항체로이루어진항체-방사성동위원소접합체이다 (Wiseman et al. (2000) Eur. Jour. Nucl. Med. 27 (7):766-77; Wiseman et al. (2002) Blood 99 (12): ; Witzig et al. (2002) J. Clin. Oncol. 20 (10): ; Witzig et al. (2002) J. Clin. Oncol. 20 (15): ). 제발린은 B-세포비-호지킨림프종 (NHL) 에대한활성을가지지만, 투여는대부분의환자에서중증이면서지연된혈구감소증을야기한다. 칼리체아미신에연결된 hu CD33 항체로이루어진항체약물접합체인밀로타르그 (MYLOTARG TM ) ( 겜투주마브오조카미신 (gemtuzumab ozogamicin), 위트파마슈티칼스 (Wyeth Pharmaceuticals)) 은주사에의한급성골수성백혈병의치료용으로 2000년에승인받았다 ( 문헌 [Drugs of the Future (2000) 25 (7): 686]; 미국특허제 ; ; ; ; ; ; ; 호 ). 메이탄시노이드약물잔기 (DM1) 에디술피드링커 SPP를통하여연결된 huc242 항체로구성된항체약물접합체인칸투주마브메르탄신 (Cantuzumab mertansine) ( 이뮤노겐인크 (Immunogen Inc.)) 은결장, 췌장, 위등과같이 CanAg를발현하는암의치료를위한제2상임상시험단계를진행중이다. 메이탄시노이드약물잔기 (DM1) 에연결된항-전립선특이적막항원 (PSMA) 모노클로날항체로이루어진항체약물접합체인 MLN-2704 ( 밀레니엄팜 (Millennium Pharm), BZL 바이올로직스 (BZL Biologics), 이뮤노겐인크 ) 는전립선종양의강력한치료제로

29 개발중에있다. 동일한메이탄시노이드약물잔기 (DM1) 는마우스뮤린과모노클로날항체 (TA.1) 에비-디술피드링커 (SMCC) 를통하여연결되어있다 (Chari et al. (1992) Cancer Research 52: ). 이접합체는상응하는디술피드링커접합체보다 200배덜강력하다고보고되었다. 본원에서 SMCC 링커는 " 비분해성 (noncleavable)" 인것으로고려하였다. [0008] [0009] [0010] [0011] [0012] 몇몇짧은펩티드화합물은해양연체동물돌라벨라아우리쿨라리아 (Dolabella auricularia) 로부터단리되었고, 생물학적활성을가진것으로밝혀졌다 (Pettit et al. (1993) Tetrahedron 49: 9151; Nakamura et al. (1995) Tetrahedron Letters 36: ; Sone et al. (1995) Jour. Org Chem. 60: 4474). 이들화합물들의유사체가제조되었고, 일부는생물학적활성을가진다고밝혀졌다 ( 개관을위하여문헌 [Pettit et al. (1998) Anti-Cancer Drug Design 13: ] 참조 ). 예를들어, 아우리스타틴 E (auristatin E) ( 미국특허번호제 호 ) 는항암제빈크리스틴과같이튜불린상의동일한도메인에결합하여튜불린중합을억제하는제제인해양천연생성물, 돌라스타틴 10 (Dolastatin 10) 의합성유사체이다 (G.R. Pettit, (1997) Prog. Chem. Org. Nat. Prod. 70: 1-79). 돌라스타틴 10, 아우리스타틴 PE 및아우리스타틴 E는 4개의아미노산 ( 이중 3개는화합물의돌라스타틴부류에특이적인것임 ), 및 C-말단아미드를가진선형펩티드이다. 아우리스타틴펩티드, 아우리스타틴 E (AE) 및모노메틸아우리스타틴 (MMAE) ( 돌라스타틴의합성유사체 ) 은하기에접합된다 : (i) 키메라모노클로날항체 cbr96 ( 암종상의루이스 Y (Lewis Y) 에특이적 ); (ii) 혈액암상의 CD30에특이적인 cac10 (Klussman, et al. (2004), Bioconjugate Chemistry 15(4): ; Doronina et al. (2003) Nature Biotechnology 21(7): ; "Monomethylvaline Compounds Capable of Conjugation to Ligands"; Francisco et al. (2003) Blood 102(4): ; 미국공개번호 2004/ ); (iii) CD20-발현암및면역장애의치료를위한리툭산 (RITUXAN) ( 등록상표 ) (WO 04/032828) 과같은항-CD20 항체 ; (iv) 직장결장암의치료를위한항-EphB2 항체 2H9 및항-IL-8 (Mao, et al. (2004) Cancer Research 64(3): ); (v) E-셀렉틴항체 (Bhaskar et al. (2003) Cancer Res. 63: ); 및 (vi) 다른항-CD30 항체 (WO 03/043583). 모노클로날항체에접합되는아루리스타틴 E는문헌 [Senter et al, Proceedings of the American Association for Cancer Research, Volume 45, Abstract Number 623, presented March 28, 2004] 에개시되어있다. 돌라스타틴부류의화합물및그의유사체에대한시험관내데이타에도불구하고, 치료효과를얻는데요구되는투여량에서의현저한일반적인독성은임상연구에서의그의효능을저하시킨다. 따라서, 현저하게낮은독성을가지면서도유용한치료적효율성을갖는돌라스타틴 / 아우리스타틴유도체가당업계에서요구된다. 과거의이들및다른한계점및문제점을본발명에서해결하였다. 수용체타이로신키나아제의 ErbB 족은세포성장, 분화및생존의중요한매개체이다. 수용체족은상피성장 인자수용체 (EGFR, ErbB1, HER1), HER2 (ErbB2 또는 p185 neu ), HER3 (ErbB3) 및 HER4 (ErbB4 또는 tyro2) 를포함하는 4종의상이한구성원을포함한다. 항-ErbB2 항체의패널은인간유방종양세포주 SKBR3을이용하여특징규명하였다 (Hudziak et al., (1989) Mol. Cell. Biol. 9(3): ). 최대억제율은 56% 로세포증식을억제하는, 4D5로지칭되는항체에의해얻었다. 패널의다른항체는이분석법에서적은정도로세포증식을감소시킨다. 항체 4D5는추가로 TNF-α의세포독성효과에 ErbB2-과발현유방종양세포주를민감하게한다고밝혀졌다 ( 미국특허번호제 호 ). 문헌 [Hudziak et al.] 에서논의된항-ErbB2 항체는추가로문헌 [Fendly et al. (1990) Cancer Research 50: ; Kotts et al. (1990) In vitro 26 (3): 59A]; [Sarup et al. (1991) Growth Regulation 1: 72-82]; [Shepard et al. J. (1991) Clin. Immunol. 11 (3): ]; [Kumar et al. (1991) Mol. Cell. Biol. 11 (2): ]; [Lewis et al. (1993) Cancer Immunol. Immunother. 37: ]; [Pietras et al. (1994) Oncogene 9: ]; [Vitetta et al. (1994) Cancer Research 54: ]; [Sliwkowski et al. (1994) J. Biol. Chem. 269 (20): ]; [Scottet al. (1991) J. Biol. Chem. 266: ]; [D'souza et al. Proc. Natl. Acad. Sci. (1994) 91: ]; [Lewis et al. (1996) Cancer Research 56: ]; 및 [Schaefer et al. (1997) Oncogene 15: ] 에특징규명되어있다. [0013] 다양한특성을갖는다른항-ErbB2 항체는문헌 [Tagliabue et al. Int. J. Cancer 47: (1991)]; [McKenzie et al. Oncogene 4: (1989); Maier et al. Cancer Res. 51: (1991)]; [Bacus et al. Molecular Carcinogenesis 3: (1990)]; [Stancovski et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 88: (1991)]; [Bacus et al. Cancer Research 52: (1992)]; [Xu et al. Int. J. Cancer 53: (1993)]; W094/00136; [Kasprzyk et al. Cancer Research 52: (1992)]; [Hancock et al

30 (1991) Cancer Res. 51: ]; [Shawver et al. (1994) Cancer Res. 54: ]; [Arteaga et al. (1994) Cancer Res. 54: ]; [Harwerth et al. (1992) J. Biol. Chem. 267: ]; 미국특허 제 호 ; 및 [Klapper et al (1997) Oncogene 14: ] 에기재되었다. [0014] [0015] [0016] [0017] [0018] [0019] [0020] [0021] 상동성스크리닝으로 2개의다른 ErbB 수용체족구성원인 ErbB3 ( 미국특허제5,183,884호 ; 미국특허제 5,480,968; 문헌 [KraU. S. et al. (1989) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86: ]) 및 ErbB4 (EP ; [Plowman et al. (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: ]; 및 [Plowman et al. (1993) Nature 366: ]) 를확인하였다. 이들수용체둘다는적어도일부유방암세포주상에서발현이증가된것으로나타난다. 헤르셉틴 (HERCEPTIN) ( 등록상표 ) ( 트라츠주마브 ) 는세포-기재분석법에서인간상피성장인자수용체 2 단백질 (HER2 (ErbB2)) 의세포외도메인에높은친화도 (Kd = 5 nm) 로선택적으로결합하는재조합 DNA-유도인간화모노클로날항체이다 ( 미국특허제 호 ; 미국특허제 호 ; 미국특허제 호 ; 미국특허제 호 ; 문헌 [Coussens L, et al. (1985) Science 230: ]; [Slamon DJ, et al. (1989) Science 244: ]). 트라츠주마브는 HER2에결합하는뮤린항체 (4D5) 의상보성-결정영역을갖는인간프레임워크영역을함유하는 IgG1 카파항체이다. 트라츠주마브는 HER2 항원에결합함으로써암세포의성장을억제한다. 트라츠주마브는인간화항체이기때문에, 이는환자의임의의 HAMA 반응을최소화한다. HER2에대한인간화항체는포유동물세포 ( 중국햄스터난소, CHO) 현탁배양에의하여생성된다. HER2 ( 또는 c-erbb2) 원발암유전자는상피성장인자수용체에구조적으로관련되어있는 185 kda의막횡단수용체단백질을코딩한다. HER2 단백질과발현은일차유방암의 25%-30% 에서관찰되고, 고정된종양블록의면역조직화학기초측정법을이용하여결정할수있다 (Press MF, et al. (1993) Cancer Res 53: ). 트라츠주마브는시험관내분석법및동물둘다에서 HER2를과발현하는인간종양세포의증식을억제한다고나타났다 (Hudziak RM, et al. (1989) Mol Cell Biol 9: ; Lewis GD, et al. (1993) Cancer Immunol Immunother; 37: ; Baselga J, et al. (1998) Cancer Res. 58: ). 트라츠주마브는항체-의존성세포독성 (ADCC) 의매개체이다 (Hotaling TE, et al. (1996) [abstract]. Proc. Annual Meeting Am Assoc Cancer Res; 37:471; Pegram MD, et al. (1997) [abstract]. Proc Am Assoc Cancer Res; 38: 602). 시험관내에서, 트라츠주마브매개 ADCC는 HER2를과발현하지않는암세포에비교하여 HER2 과발현암세포상에서우세하게이루어진다고나타났다. 단일제제로서헤르셉틴 ( 등록상표 ) 은종양이 HER2 단백질을과발현하는전이성유방암을가지며, 전이성질환을위한하나이상의화학치료요법을받은환자의치료를위하여처방된다. 파클리탁셀과병용하는헤르셉틴 ( 등록상표 ) 은종양이 HER2 단백질을과발현하는전이성유방암을가지며, 그의전이성질환을위한화학요법을받지않은환자의치료를위하여처방된다. 헤르셉틴 ( 등록상표 ) 는이전에광범위한항암요법을받았던 ErbB2- 과발현전이성유방암환자에게서임상적으로활성이다 (Baselga et al, (1996) J. Clin. Oncol. 14: ). 뮤린모노클로날항-HER2 항체는 2+ 및 3+ ( 세포당 1-2 x 10 6 개의 HER2 수용체 ) 수준으로 HER2를과발현하는유방암세포주의성장을억제하지만, 낮은수준의 HER2을발현하는세포에대해서는활성이없다 (Lewis et al., (1993) Cancer Immunol. Immunother. 37: ). 이관찰에기초하여, 항체 4D5는인간화되어있으며 (humab4d5-8, rhumab HER2, 미국특허제 호 ; 문헌 [Carter et al., (1992) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89: ]), 종양이 HER2를과발현하지만, 통상의화학요법이후에진행된유방암환자에서시험하였다 (Cobleigh et al., (1999) J. Clin. Oncol. 17: ). 헤르셉틴은이전에광범위한항암요법을받은 ErbB2-과발현유방암환자의치료에있어서중요한발견이긴하지만, 이집단중의일부환자는헤르셉틴치료에반응하지않거나, 단지빈약하게반응한다. 그러므로, HER2-과발현종양또는헤르셉틴치료에반응하지않거나빈약하게반응하는 HER2 발현과관련된다른질환을가진환자를위한추가의 HER2-관련암치료법에대해충분히임상적으로요구되고있다. 본출원에서의임의의참조문헌의인용은그문헌을본출원이전의선행기술로승인하는것은아니다. 발명의요약한측면에서, 본발명은하기화학식 Ia를갖는약물-링커-리간드화합물또는그의제약상허용되는염또는용매화물을제공한다

31 화학식 Ia [0022] [0023] [0024] [0025] [0026] [0027] [0028] [0029] [0030] [0031] [0032] [0033] 상기식에서, L-은리간드단위이고 ; -A a -W w -Y y -는링커단위 (LU) 이고, 여기서링커단위중 -A-는스트레처단위 (Stretcher unit) 이고, a는 0 또는 1이고, 각각의 -W-는독립적으로아미노산단위이고, w는 0 내지 12 범위의정수이고, -Y-는스페이서단위 (Spacer unit) 이고, y는 0, 1 또는 2이고 ; p는 1 내지약 20 범위이고 ; -D는하기화학식 D E 및 D F 를갖는약물단위이며 : 화학식 DE [0034] 화학식 DF [0035] [0036] [0037] 여기서, 각각의위치에서독립적으로 : R 2 는 H 및 C 1 -C 8 알킬로부터선택되고 ; [0038] R 3 는 H, C 1 -C 8 알킬, C 3 -C 8 카르보사이클, 아릴, C 1 -C 8 알킬 - 아릴, C 1 -C 8 알킬 -(C 3 -C 8 카르보사이클 ), C 3 -C 8 헤테로 사이클및 C 1 -C 8 알킬 -(C 3 -C 8 헤테로사이클 ) 로부터선택되고 ; [0039] R 4 는 H, C 1 -C 8 알킬, C 3 -C 8 카르보사이클, 아릴, C 1 -C 8 알킬 - 아릴, C 1 -C 8 알킬 -(C 3 -C 8 카르보사이클 ), C 3 -C 8 헤테로 사이클및 C 1 -C 8 알킬 -(C 3 -C 8 헤테로사이클 ) 로부터선택되고 ; [0040] [0041] R 5 는 H 및메틸로부터선택되거나 ; 또는 R 4 및 R 5 는결합하여카르보시클릭고리를형성하고, 화학식 -(CR a R b ) n - ( 여기서, R a 및 R b 는독립적으로 H, C 1 -C

32 알킬및 C 3 -C 8 카르보시클로부터선택되고, n 은 2, 3, 4, 5 및 6 로부터선택됨 ) 을가지며 ; [0042] R 6 은 H 및 C 1 -C 8 알킬로부터선택되고 ; [0043] R 7 은 H, C 1 -C 8 알킬, C 3 -C 8 카르보사이클, 아릴, C 1 -C 8 알킬 - 아릴, C 1 -C 8 알킬 -(C 3 -C 8 카르보사이클 ), C 3 -C 8 헤테로 사이클및 C 1 -C 8 알킬 -(C 3 -C 8 헤테로사이클 ) 로부터선택되고 ; [0044] R 8 은각각독립적으로 H, OH, C 1 -C 8 알킬, C 3 -C 8 카르보사이클및 O-(C 1 -C 8 알킬 ) 로부터선택되고 ; [0045] R 9 는 H 및 C 1 -C 8 알킬로부터선택되고 ; [0046] R 10 는아릴또는 C 3 -C 8 헤테로시클로부터선택되고 ; [0047] Z 는 O, S, NH 또는 NR 12 ( 여기서, R 12 는 C 1 -C 8 알킬임 ) 이고 ; [0048] [0049] [0050] R 11 은 H, C 1 -C 20 알킬, 아릴, C 3 -C 8 헤테로사이클, -(R 13 O) m -R 14, 또는 -(R 13 O) m -CH(R 15 ) 2 로부터선택되고 ; m 은 범위의정수이고 ; R 13 은 C 2 -C 8 알킬이고 ; [0051] R 14 는 H 또는 C 1 -C 8 알킬이고 ; [0052] R 15 는각각독립적으로 H, COOH, -(CH 2 ) n -N(R 16 ) 2, -(CH 2 ) n -SO 3 H, 또는 -(CH 2 ) n -SO 3 -C 1 -C 8 알킬이고 ; [0053] R 16 은각각독립적으로 H, C 1 -C 8 알킬또는 -(CH 2 ) n -COOH 이고 ; 여기서 n 은 0 내지 6 범위의정수이고 ; [0054] R 18 은 -C(R 8 ) 2 -C(R 8 ) 2 - 아릴, -C(R 8 ) 2 -C(R 8 ) 2 -(C 3 -C 8 헤테로사이클 ) 및 -C(R 8 ) 2 -C(R 8 ) 2 -(C 3 -C 8 카르보사이클 ) 로부터선 택된다. [0055] 다른측면에서, 하기화학식 Ib 의약물화합물또는그의제약상허용되는염또는용매화물이제공된다 : 화학식 Ib [0056] [0057] R 2 는수소및 -C 1 -C 8 알킬로부터선택되고 ; [0058] R 3 는수소, -C 1 -C 8 알킬, -C 3 -C 8 카르보사이클, 아릴, -C 1 -C 8 알킬 - 아릴, -C 1 -C 8 알킬 -(C 3 -C 8 카르보사이클 ), -C 3 - C 8 헤테로사이클및 -C 1 -C 8 알킬 -(C 3 -C 8 헤테로사이클 ) 로부터선택되고 ; [0059] R 4 는수소, -C 1 -C 8 알킬, -C 3 -C 8 카르보사이클, - 아릴, -C 1 -C 8 알킬 - 아릴, -C 1 -C 8 알킬 -(C 3 -C 8 카르보사이클 ), -C 3 - C 8 헤테로사이클및 -C 1 -C 8 알킬 -(C 3 -C 8 헤테로사이클 ) 로부터선택되고 ; [0060] R 5 는 H 및메틸로부터선택되거나 ; 또는

33 [0061] R 4 및 R 5 는결합하여카르보시클릭고리를형성하고, 화학식 -(CR a R b ) n - ( 여기서, R a 및 R b 는독립적으로 -H, -C 1 - C 8 알킬및 -C 3 -C 8 카르보시클로부터선택되고, n 은 2, 3, 4, 5 및 6 로부터선택됨 ) 을가지며이들이부착된탄 소원자와함께고리를형성하고 ; [0062] R 6 은 H 및 -C 1 -C 8 알킬로부터선택되고 ; [0063] R 7 은 H, -C 1 -C 8 알킬, -C 3 -C 8 카르보사이클, 아릴, -C 1 -C 8 알킬 - 아릴, -C 1 -C 8 알킬 -(C 3 -C 8 카르보사이클 ), -C 3 -C 8 헤테로사이클및 -C 1 -C 8 알킬 -(C 3 -C 8 헤테로사이클 ) 로부터선택되고 ; [0064] R 8 은각각독립적으로 H, -OH, -C 1 -C 8 알킬, -C 3 -C 8 카르보사이클및 -O-(C 1 -C 8 알킬 ) 로부터선택되고 ; [0065] R 9 는 H 및 -C 1 -C 8 알킬로부터선택되고 ; [0066] R 10 는아릴기또는 -C 3 -C 8 헤테로시클로부터선택되고 ; [0067] Z 는 -O-, -S-, -NH- 또는 -NR 12 - ( 여기서, R 12 는 C 1 -C 8 알킬임 ) 이고 ; [0068] [0069] [0070] R 11 은 H, C 1 -C 20 알킬, 아릴, -C 3 -C 8 헤테로사이클, -(R 13 O) m -R 14, 또는 -(R 13 O) m -CH(R 15 ) 2 로부터선택되고 ; m 은 범위의정수이고 ; R 13 은 -C 2 -C 8 알킬이고 ; [0071] R 14 는 H 또는 -C 1 -C 8 알킬이고 ; [0072] R 15 는각각독립적으로 H, -COOH, -(CH 2 ) n -N(R 16 ) 2, -(CH 2 ) n -SO 3 H, 또는 -(CH 2 ) n -SO 3 -C 1 -C 8 알킬이고 ; [0073] [0074] [0075] [0076] [0077] [0078] [0079] [0080] [0081] [0082] R 16 은각각독립적으로 H, -C 1 -C 8 알킬또는 -(CH 2 ) n -COOH이고; n은 0 내지 6 범위의정수이다. 화학식 Ib의화합물은환자의암, 자가면역질환또는감염성질환을치료하는데유용하거나, 또는분해가능한약물단위를갖는약물-링커, 약물-링커-리간드접합체및약물-리간드접합체의합성을위한중간체로서유용하다. 다른측면에서, 유효량의약물-링커-리간드접합체및제약상허용되는담체또는비히클을포함하는조성물이제공된다. 또다른측면에서, 본발명은유효량의약물-링커화합물및제약상허용되는담체또는비히클을포함하는제약조성물을제공한다. 또다른측면에서, 본발명은약물-리간드접합체로부터분해가능한약물단위를갖는약물-리간드접합체의유효량및제약상허용되는담체또는비히클을포함하는조성물을제공한다. 또다른측면에서, 본발명은유효량의약물-링커화합물을이를필요로하는환자에게투여하는것을포함하는, 종양세포또는암세포를사멸시키거나증식을억제하는방법을제공한다. 또다른측면에서, 본발명은유효량의약물-링커-리간드접합체를이를필요로하는환자에게투여하는것을포함하는, 종양세포또는암세포를사멸시키거나증식을억제하는방법을제공한다. 다른측면에서, 본발명은약물-리간드접합체로부터분해가능한약물단위를갖는약물-리간드접합체유효량을이를필요로하는환자에게투여하는것을포함하는, 종양세포또는암세포를사멸시키거나증식을억제하는방법을제공한다. 또다른측면에서, 본발명은유효량의약물-링커화합물을이를필요로하는환자에게투여하는것을포함하는,

34 암치료방법을제공한다. [0083] [0084] [0085] [0086] [0087] [0088] [0089] [0090] [0091] [0092] [0093] [0094] [0095] [0096] [0097] [0098] [0099] [0100] [0101] [0102] 또다른측면에서, 본발명은유효량의약물-링커리간드접합체를이를필요로하는환자에게투여하는것을포함하는, 암치료방법을제공한다. 또다른측면에서, 본발명은약물-리간드접합체로부터분해가능한약물단위를갖는약물-리간드접합체의유효량을이를필요로하는환자에게투여하는것을포함하는, 암치료방법을제공한다. 또다른측면에서, 본발명은유효량의약물-링커화합물을이를필요로하는환자에게투여하는것을포함하는, 자가면역항체를발현하는세포를사멸시키거나복제를억제하는방법을제공한다. 또다른측면에서, 본발명은유효량의약물-링커-리간드접합체를이를필요로하는환자에게투여하는것을포함하는, 자가면역항체를발현하는세포를사멸시키거나복제를억제하는방법을제공한다. 또다른측면에서, 본발명은약물-리간드접합체로부터분해가능한약물단위를갖는약물-리간드접합체의유효량을이를필요로하는환자에게투여하는것을포함하는, 자가면역항체를발현하는세포를사멸시키거나복제를억제하는방법을제공한다. 또다른측면에서, 본발명은유효량의약물-링커화합물을이를필요로하는환자에게투여하는것을포함하는, 자가면역질환의치료방법을제공한다. 또다른측면에서, 본발명은유효량의약물-링커-리간드접합체를이를필요로하는환자에게투여하는것을포함하는, 자가면역질환의치료방법을제공한다. 또다른측면에서, 본발명은약물-리간드접합체로부터분해가능한약물단위를갖는약물-리간드접합체의유효량을이를필요로하는환자에게투여하는것을포함하는, 자가면역질환의치료방법을제공한다. 또다른측면에서, 본발명은유효량의약물-링커화합물을이를필요로하는환자에게투여하는것을포함하는, 감염성질환의치료방법을제공한다. 또다른측면에서, 본발명은유효량의약물-링커-리간드접합체를이를필요로하는환자에게투여하는것을포함하는, 감염성질환의치료방법을제공한다. 또다른측면에서, 본발명은약물-리간드접합체로부터분해가능한약물단위를갖는약물-리간드접합체의유효량을이를필요로하는환자에게투여하는것을포함하는, 감염성질환의치료방법을제공한다. 또다른측면에서, 본발명은유효량의약물-링커화합물을이를필요로하는환자에게투여하는것을포함하는, 종양세포또는암세포의증식의예방방법을제공한다. 또다른측면에서, 본발명은유효량의약물-링커-리간드접합체를이를필요로하는환자에게투여하는것을포함하는, 종양세포또는암세포의증식의예방방법을제공한다. 또다른측면에서, 본발명은약물-리간드접합체로부터분해가능한약물단위를갖는약물-리간드접합체의유효량을이를필요로하는환자에게투여하는것을포함하는, 종양세포또는암세포의증식의예방방법을제공한다. 또다른측면에서, 본발명은유효량의약물-링커화합물을이를필요로하는환자에게투여하는것을포함하는, 암의예방방법을제공한다. 또다른측면에서, 본발명은유효량의약물-링커-리간드접합체를이를필요로하는환자에게투여하는것을포함하는, 암의예방방법을제공한다. 또다른측면에서, 본발명은약물-리간드접합체로부터분해가능한약물단위를갖는약물-리간드접합체의유효량을이를필요로하는환자에게투여하는것을포함하는, 암의예방방법을제공한다. 또다른측면에서, 본발명은유효량의약물-링커화합물을이를필요로하는환자에게투여하는것을포함하는, 자가면역항체를발현하는세포의증식을예방하는방법을제공한다. 또다른측면에서, 본발명은유효량의약물-링커-리간드접합체를이를필요로하는환자에게투여하는것을포함하는, 자가면역항체를발현하는세포의증식을예방하는방법을제공한다. 또다른측면에서, 본발명은약물-리간드접합체로부터분해가능한약물단위를갖는약물-리간드접합체의유

35 효량을이를필요로하는환자에게투여하는것을포함하는, 자가면역항체를발현하는세포의증식을예방하는 방법을제공한다. [0103] [0104] [0105] [0106] [0107] [0108] [0109] [0110] [0111] 또다른측면에서, 본발명은유효량의약물-링커화합물을이를필요로하는환자에게투여하는것을포함하는, 자가면역질환의예방방법을제공한다. 또다른측면에서, 본발명은유효량의약물-링커-리간드접합체를이를필요로하는환자에게투여하는것을포함하는, 자가면역질환의예방방법을제공한다. 또다른측면에서, 본발명은약물-리간드접합체로부터분해가능한약물단위를갖는약물-리간드접합체의유효량을이를필요로하는환자에게투여하는것을포함하는, 자가면역질환의예방방법을제공한다. 또다른측면에서, 본발명은유효량의약물-링커화합물을이를필요로하는환자에게투여하는것을포함하는, 감염성질환의예방방법을제공한다. 또다른측면에서, 본발명은유효량의약물-링커-리간드접합체를이를필요로하는환자에게투여하는것을포함하는, 감염성질환의예방방법을제공한다. 또다른측면에서, 본발명은약물-리간드접합체로부터분해가능한약물단위를갖는약물-리간드접합체의유효량을이를필요로하는환자에게투여하는것을포함하는, 감염성질환의예방방법을제공한다. 다른측면에서, 약물-리간드접합체로부터분해가능한약물단위를갖는약물-링커화합물의합성을위한중간체로서사용될수있는약물화합물이제공된다. 다른측면에서, 약물-링커-리간드접합체의합성을위한중간체로서사용될수있는약물-링커화합물이제공된다. 다른측면에서, 본발명은하기화학식 Ia' 를갖는화합물또는그의제약상허용되는염, 또는용매화물을제공한다. 화학식 Ia' [0112] [0113] [0114] [0115] [0116] [0117] [0118] [0119] [0120] [0121] [0122] Ab는 CD30, CD40, CD70 및루이스 Y 항원에결합하는것을포함하는항체를포함하며, A는스트레처단위이고, a는 0 또는 1이고, 각각의 W는독립적으로아미노산단위이고, w는 0 내지 12 범위의정수이고, Y는스페이서단위이고, y는 0, 1 또는 2이고, p는 1 내지약 20 범위이고, D는하기화학식 D E 및 D F로부터선택되는약물단위이며, < 화학식 D E > [0123]

36 [0124] < 화학식 D F > [0125] [0126] [0127] 여기서, 각각의위치에서독립적으로 : R 2 는 H 및 C 1 -C 8 알킬로부터선택되고 ; [0128] R 3 는 H, C 1 -C 8 알킬, C 3 -C 8 카르보사이클, 아릴, C 1 -C 8 알킬 - 아릴, C 1 -C 8 알킬 -(C 3 -C 8 카르보사이클 ), C 3 -C 8 헤테로 사이클및 C 1 -C 8 알킬 -(C 3 -C 8 헤테로사이클 ) 로부터선택되고 ; [0129] R 4 는 H, C 1 -C 8 알킬, C 3 -C 8 카르보사이클, 아릴, C 1 -C 8 알킬 - 아릴, C 1 -C 8 알킬 -(C 3 -C 8 카르보사이클 ), C 3 -C 8 헤테로 사이클및 C 1 -C 8 알킬 -(C 3 -C 8 헤테로사이클 ) 로부터선택되고 ; [0130] [0131] R 5 는 H 및메틸로부터선택되거나 ; 또는 R 4 및 R 5 는결합하여카르보시클릭고리를형성하고, 화학식 -(CR a R b ) n - ( 여기서, R a 및 R b 는독립적으로 H, C 1 -C 8 알킬및 C 3 -C 8 카르보시클로부터선택되고, n 은 2, 3, 4, 5 및 6 로부터선택됨 ) 을가지며 ; [0132] R 6 은 H 및 C 1 -C 8 알킬로부터선택되고 ; [0133] R 7 은 H, C 1 -C 8 알킬, C 3 -C 8 카르보사이클, 아릴, C 1 -C 8 알킬 - 아릴, C 1 -C 8 알킬 -(C 3 -C 8 카르보사이클 ), C 3 -C 8 헤테로 사이클및 C 1 -C 8 알킬 -(C 3 -C 8 헤테로사이클 ) 로부터선택되고 ; [0134] 각각의 R 8 은독립적으로 H, OH, C 1 -C 8 알킬, C 3 -C 8 카르보사이클및 O-(C 1 -C 8 알킬 ) 로부터선택되고 ; [0135] R 9 는 H 및 C 1 -C 8 알킬로부터선택되고 ; [0136] R 10 는아릴또는 C 3 -C 8 헤테로시클로부터선택되고 ; [0137] Z 는 O, S, NH 또는 NR 12 ( 여기서, R 12 는 C 1 -C 8 알킬임 ) 이고 ; [0138] [0139] [0140] R 11 은 H, C 1 -C 20 알킬, 아릴, C 3 -C 8 헤테로사이클, -(R 13 O) m -R 14, 또는 -(R 13 O) m -CH(R 15 ) 2 로부터선택되고 ; m 은 범위의정수이고 ; R 13 은 C 2 -C 8 알킬이고 ; [0141] R 14 는 H 또는 C 1 -C 8 알킬이고 ; [0142] R 15 는각각독립적으로 H, COOH, -(CH 2 ) n -N(R 16 ) 2, -(CH 2 ) n -SO 3 H 또는 -(CH 2 ) n -SO 3 -C 1 -C 8 알킬이고 ; [0143] R 16 은각각독립적으로 H, C 1 -C 8 알킬또는 -(CH 2 ) n -COOH 이고 ; [0144] R 18 은 -C(R 8 ) 2 -C(R 8 ) 2 - 아릴, -C(R 8 ) 2 -C(R 8 ) 2 -(C 3 -C 8 헤테로사이클 ) 및 -C(R 8 ) 2 -C(R 8 ) 2 -(C 3 -C 8 카르보사이클 ) 로부터선

37 택되고 ; [0145] [0146] [0147] [0148] [0149] [0150] [0151] [0152] [0153] [0154] [0155] [0156] [0157] [0158] [0159] [0160] [0161] [0162] [0163] [0164] [0165] [0166] [0167] [0168] [0169] [0170] [0171] n은 0 내지 6 범위의정수이다. 한실시양태에서, Ab는 ErbB 수용체에결합하거나, 또는수용체 (1)-(35) 중하나이상에결합하는항체는아니다 : (1) BMPR1B ( 골형태형성단백질수용체-IB형, 진뱅크수탁번호 NM_001203); (2) E16 (LAT1, SLC7A5, 진뱅크수탁번호 NM_003486); (3) STEAP1 ( 전립선의 6개의막횡단상피항원, 진뱅크수탁번호 NM_012449); (4) 0772P (CA125, MUC16, 진뱅크수탁번호 AF361486); (5) MPF (MPF, MSLN, SMR, 거대핵세포강화인자 (megakaryocyte potentiating factor), 메소텔린, 진뱅크수탁번호 NM_005823); (6) Napi3b (NAPI-3B, NPTIIb, SLC34A2, 용질담체족 34 ( 인산나트륨 ), 2 원, 제II형나트륨-의존성포스페이트전달체 3b, 진뱅크수탁번호 NM_006424); (7) Sema 5b (FLJ10372, KIAA1445, Mm , SEMA5B, SEMAG, 세마포린 (Semaphorin) 5b Hlog, 세마도메인, 7개의트롬보스폰딘반복체 ( 제1형및제1형-유사 ), 막횡단도메인 (TM) 및짧은세포질도메인, ( 세마포린 ) 5B, 진뱅크수탁번호 AB040878); (8) PSCA hlg ( C12Rik, C530008O16Rik, RIKEN cdna C12, RIKEN cdna C12 유전자, 진뱅크수탁번호 AY358628); (9) ETBR ( 엔도텔린 B형수용체, 진뱅크수탁번호 AY275463); (10) MSG783 (RNF124, 가상단백질 FLJ20315, 진뱅크수탁번호 NM_017763); (11) STEAP2 (HGNC_8639, IPCA-1, PCANAP1, STAMP1, STEAP2, STMP, 전립선암관련유전자 1, 전립선암관련단백질 1, 전립선의 6개의막횡단상피항원 2, 6개의막횡단전립선단백질, 진뱅크수탁번호 AF455138); (12) TrpM4 (BR22450, FLJ20041, TRPM4, TRPM4B, 일시적수용체잠재적양이온채널, M 아족, 4 원, 진뱅크수탁번호 NM_017636); (13) CRIPTO (CR, CR1, CRGF, CRIPTO, TDGF1, 기형암종-유도성장인자, 진뱅크수탁번호 NP_ 또는 NM_003212); (14) CD21 (CR2 ( 보체수용체 2) 또는 C3DR (C3d/ 엡스테인바르바이러스 (Epstein Barr virus) 수용체 ) 또는 Hs.73792, 진뱅크수탁번호 M26004); (15) CD79b (IGb ( 이뮤노글로불린-연관베타 ), B29, 진뱅크수탁번호 NM_000626); (16) FcRH2 (IFGP4, IRTA4, SPAP1A (SH2 도메인함유포스파타제고정단백질 1a), SPAP1B, SPAP1C, 진뱅크수탁번호 NM_030764); (17) HER2 ( 진뱅크수탁번호 M11730); (18) NCA ( 진뱅크수탁번호 M18728); (19) MDP ( 진뱅크수탁번호 BC017023); (20) IL20Rα ( 진뱅크수탁번호 AF184971); (21) 브레비칸 (Brevican) ( 진뱅크수탁번호 AF229053); (22) Ephb2R ( 진뱅크수탁번호 NM_004442); (23) ASLG659 ( 진뱅크수탁번호 AX092328); (24) PSCA ( 진뱅크수탁번호 AJ297436); (25) GEDA ( 진뱅크수탁번호 AY260763);

38 [0172] [0173] [0174] [0175] [0176] [0177] [0178] [0179] [0180] [0181] [0182] [0183] [0184] [0185] [0186] [0187] [0188] [0189] [0190] [0191] (26) BAFF-R ( 진뱅크수탁번호 NP_ ); (27) CD22 ( 진뱅크수탁번호 NP ); (28) CD79a (CD79A, CD79α, 이뮤노글로불린-연관알파, Ig 베타 (CD79B) 와공유적으로상호작용하고 Ig M 분자와표면상에서복합체를형성하여 B 세포분화에관여하는신호를전달하는 B 세포-특이적단백질, 진뱅크수탁번호 NP_ ); (29) CXCR5 ( 버킷림프종 (Burkitt's lymphoma) 수용체 1, CXCL13 케모카인에의하여활성화되고림프구이동및체액성방어에작용하고, HIV-2 감염및아마도 AIDS, 림프종, 골수종및백혈병의진행에중요한역할을하는 G 단백질-커플링된수용체, 진뱅크수탁번호 NP_ ); (30) HLA-DOB ( 펩티드에결합하여이를 CD4+ T 림프구에제시하는 MHC 클래스 II 분자 (Ia 항원 ) 의베타서브유닛, 진뱅크수탁번호 NP_ ); (31) P2X5 ( 세포외 ATP에의하여개폐되는이온채널인퓨린성수용체 P2X 리간드-게이트이온채널 5는시냅스전달및신경발생에관련될수있고, 결핍은특발성배뇨근불안정의병태생리에기여할수있음, 진뱅크수탁번호 NP_ ); (32) CD72 (B-세포분화항원 CD72, Lyb-2, 진뱅크수탁번호 NP_ ); (33) LY64 ( 림프구항원 64 (RP105), 류신풍부반복체 (LRR) 족의제I형막단백질은 B-세포활성화및아팝토시스를조절하고이기능의손실은전신홍반루푸스환자의질환활성증가와관련됨, 진뱅크수탁번호 NP_ ); (34) FCRH1 (C2 제I형-유사및 ITAM 도메인을함유하는이뮤노글로불린 Fc 도메인을위한추정의수용체인 Fc 수용체-유사단백질 1은 B-림프구분화에있어서역할을할수있음, 진뱅크수탁번호 NP_ ); 또는 (35) IRTA2 (B 세포발달및림프종발생에작용할가능성이있는추정의면역수용체인이뮤노글로불린거대족수용체전위 (translocation) 관련 2; 전위에의한유전자의탈조절은일부 B 세포악성종양에서일어남, 진뱅크수탁번호 NP_ ). 다른측면에서, 본발명은유효량의약물-링커-항체접합체및제약상허용되는담체또는비히클을포함하는제약조성물을제공한다. 또다른측면에서, 본발명은유효량의약물-항체접합체로부터의분해가능한약물단위 ( 잔기 ) 를갖는약물-항체접합체및제약상허용되는담체또는비히클을포함하는조성물을제공한다. 또다른측면에서, 본발명은유효량의약물-링커-항체접합체를이를필요로하는환자에게투여하는것을포함하는, 종양세포또는암세포를사멸시키거나증식을억제하는방법을제공한다. 또다른측면에서, 본발명은유효량의약물-항체접합체로부터분해가능한약물단위를갖는약물-항체접합체를이를필요로하는환자에게투여하는것을포함하는, 종양세포또는암세포를사멸시키거나증식을억제하는방법을제공한다. 또다른측면에서, 본발명은유효량의약물-링커-항체접합체를이를필요로하는환자에게투여하는것을포함하는, 암치료방법을제공한다. 또다른측면에서, 본발명은유효량의약물-항체접합체로부터분해가능한약물단위를갖는약물-항체접합체를이를필요로하는환자에게투여하는것을포함하는, 암치료방법을제공한다. 또다른측면에서, 본발명은유효량의약물-링커-항체접합체를이를필요로하는환자에게투여하는것을포함하는, 자가면역항체를발현하는세포를사멸시키거나복제를억제하는방법을제공한다. 또다른측면에서, 본발명은유효량의약물-항체접합체로부터분해가능한약물단위를갖는약물-항체접합체를이를필요로하는환자에게투여하는것을포함하는, 자가면역항체를발현하는세포를사멸시키거나복제를억제하는방법을제공한다. 또다른측면에서, 본발명은유효량의약물-링커-항체접합체를이를필요로하는환자에게투여하는것을포함하는, 자가면역질환의치료방법을제공한다. 또다른측면에서, 본발명은유효량의약물-항체접합체로부터분해가능한약물단위를갖는약물-항체접합체

39 를이를필요로하는환자에게투여하는것을포함하는, 자가면역질환의치료방법을제공한다. [0192] [0193] [0194] [0195] [0196] [0197] [0198] [0199] [0200] [0201] [0202] [0203] [0204] [0205] [0206] 또다른측면에서, 본발명은유효량의약물-링커-항체접합체를이를필요로하는환자에게투여하는것을포함하는, 감염성질환의치료방법을제공한다. 또다른측면에서, 본발명은유효량의약물-항체접합체로부터분해가능한약물단위를갖는약물-항체접합체를이를필요로하는환자에게투여하는것을포함하는, 감염성질환의치료방법을제공한다. 또다른측면에서, 본발명은유효량의약물-링커-항체접합체를이를필요로하는환자에게투여하는것을포함하는, 종양세포또는암세포의증식을예방하는방법을제공한다. 또다른측면에서, 본발명은유효량의약물-항체접합체로부터분해가능한약물단위를갖는약물-항체접합체를이를필요로하는환자에게투여하는것을포함하는, 종양세포또는암세포의증식을예방하는방법을제공한다. 또다른측면에서, 본발명은유효량의약물-링커-항체접합체를이를필요로하는환자에게투여하는것을포함하는, 암예방방법을제공한다. 또다른측면에서, 본발명은유효량의약물-항체접합체로부터분해가능한약물단위를갖는약물-항체접합체를이를필요로하는환자에게투여하는것을포함하는, 암예방방법을제공한다. 또다른측면에서, 본발명은유효량의약물-링커-항체접합체를이를필요로하는환자에게투여하는것을포함하는, 자가면역항체를발현하는세포의증식을예방하는방법을제공한다. 또다른측면에서, 본발명은유효량의약물-항체접합체로부터분해가능한약물단위를갖는약물-항체접합체를이를필요로하는환자에게투여하는것을포함하는, 자가면역항체를발현하는세포의증식을예방하는방법을제공한다. 또다른측면에서, 본발명은유효량의약물-링커-항체접합체를이를필요로하는환자에게투여하는것을포함하는, 자가면역질환의예방방법을제공한다. 또다른측면에서, 본발명은유효량의약물-항체접합체로부터분해가능한약물단위를갖는약물-항체접합체를이를필요로하는환자에게투여하는것을포함하는, 자가면역질환의예방방법을제공한다. 또다른측면에서, 본발명은유효량의약물-링커-항체접합체를이를필요로하는환자에게투여하는것을포함하는, 감염성질환의예방방법을제공한다. 또다른측면에서, 본발명은유효량의약물-항체접합체로부터분해가능한약물단위를갖는약물-항체접합체를이를필요로하는환자에게투여하는것을포함하는, 감염성질환의예방방법을제공한다. 또다른측면에서, 약물-항체접합체로부터분해가능한약물단위를갖는약물-링커화합물의합성을위한중간체로서사용할수있는약물화합물이제공된다. 또다른측면에서, 약물-링커-항체접합체의합성을위한중간체로서사용할수있는약물-링커화합물이제공된다. 한측면에서, 본발명은하기화학식 Ic를갖는약물-링커-항체접합체 ( 항체-약물접합체로도지칭됨 ) 또는그의제약학상허용되는염또는용매화물을제공한다. 화학식 Ic [0207] [0208] [0209] [0210] [0211] Ab는하나이상의항원 (1)-(35) 에결합하는항체이다 : (1) BMPR1B ( 골형태형성단백질수용체-IB형, 진뱅크수탁번호 NM_001203); (2) E16 (LAT1, SLC7A5, 진뱅크수탁번호 NM_003486); (3) STEAP1 ( 전립선의 6개의막횡단상피항원, 진뱅크수탁번호 NM_012449);

40 [0212] [0213] [0214] [0215] [0216] [0217] [0218] [0219] [0220] [0221] [0222] [0223] [0224] [0225] [0226] [0227] [0228] [0229] [0230] [0231] [0232] [0233] [0234] [0235] [0236] [0237] [0238] (4) 0772P (CA125, MUC16, 진뱅크수탁번호 AF361486); (5) MPF (MPF, MSLN, SMR, 거대핵세포강화인자, 메소텔린, 진뱅크수탁번호 NM_005823); (6) Napi3b (NAPI-3B, NPTIIb, SLC34A2, 용질담체족 34 ( 인산나트륨 ), 2 원, 제II형나트륨-의존성포스페이트전달체 3b, 진뱅크수탁번호 NM_006424); (7) Sema 5b (FLJ10372, KIAA1445, Mm , SEMA5B, SEMAG, 세마포린 5b Hlog, 세마도메인, 7개의트롬보스폰딘반복체 ( 제1형및제1형-유사 ), 막횡단도메인 (TM) 및짧은세포질도메인, ( 세마포린 ) 5B, 진뱅크수탁번호 AB040878); (8) PSCA hlg ( C12Rik, C530008O16Rik, RIKEN cdna C12, RIKEN cdna C12 유전자, 진뱅크수탁번호 AY358628); (9) ETBR ( 엔도텔린 B형수용체, 진뱅크수탁번호 AY275463); (10) MSG783 (RNF124, 가상단백질 FLJ20315, 진뱅크수탁번호 NM_017763); (11) STEAP2 (HGNC_8639, IPCA-1, PCANAP1, STAMP1, STEAP2, STMP, 전립선암관련유전자 1, 전립선암관련단백질 1, 전립선의 6개의막횡단상피항원 2, 6개의막횡단전립선단백질, 진뱅크수탁번호 AF455138); (12) TrpM4 (BR22450, FLJ20041, TRPM4, TRPM4B, 일시적수용체잠재적양이온채널, M 아족, 4 원, 진뱅크수탁번호 NM_017636); (13) CRIPTO (CR, CR1, CRGF, CRIPTO, TDGF1, 기형암종-유도성장인자, 진뱅크수탁번호 NP_ 또는 NM_003212); (14) CD21 (CR2 ( 보체수용체 2) 또는 C3DR (C3d/ 엡스테인바르바이러스수용체 ) 또는 Hs.73792, 진뱅크수탁번호 M26004); (15) CD79b (IGb ( 이뮤노글로불린-연관베타 ), B29, 진뱅크수탁번호 NM_000626); (16) FcRH2 (IFGP4, IRTA4, SPAP1A (SH2 도메인함유포스파타제고정단백질 1a), SPAP1B, SPAP1C, 진뱅크수탁번호 NM_030764); (17) HER2 ( 진뱅크수탁번호 M11730); (18) NCA ( 진뱅크수탁번호 M18728); (19) MDP ( 진뱅크수탁번호 BC017023); (20) IL20Rα ( 진뱅크수탁번호 AF184971); (21) 브레비칸 ( 진뱅크수탁번호 AF229053); (22) Ephb2R ( 진뱅크수탁번호 NM_004442); (23) ASLG659 ( 진뱅크수탁번호 AX092328); (24) PSCA ( 진뱅크수탁번호 AJ297436); (25) GEDA ( 진뱅크수탁번호 AY260763); (26) BAFF-R ( 진뱅크수탁번호 NP_ ); (27) CD22 ( 진뱅크수탁번호 NP ); (28) CD79a (CD79A, CD79α, 이뮤노글로불린-연관알파, Ig 베타 (CD79B) 와공유적으로상호작용하고 Ig M 분자와표면상에서복합체를형성하여 B 세포분화에관여하는신호를전달하는 B 세포-특이적단백질, 진뱅크수탁번호 NP_ ); (29) CXCR5 ( 버킷림프종수용체 1, CXCL13 케모카인에의하여활성화되고림프구이동및체액성방어에작용하고 HIV-2 감염및아마도 AIDS, 림프종, 골수종및백혈병의진행에서중요한역할을하는 G 단백질-커플링된수용체, 진뱅크수탁번호 NP_ ); (30) HLA-DOB ( 펩티드에결합하여이를 CD4+ T 림프구에제시하는 MHC 클래스 II 분자 (Ia 항원 ) 의베타서브유

41 닛, 진뱅크수탁번호 NP_ ); [0239] [0240] [0241] [0242] [0243] [0244] [0245] [0246] [0247] [0248] [0249] [0250] [0251] [0252] (31) P2X5 ( 세포외 ATP에의하여개폐되는이온채널인퓨린성수용체 P2X 리간드-게이트이온채널 5는시냅스전달및신경발생에관련될수있고, 결핍은특발성배뇨근불안정의병태생리에기여할수있음, 진뱅크수탁번호 NP_ ); (32) CD72 (B-세포분화항원 CD72, Lyb-2, 진뱅크수탁번호 NP_ ); (33) LY64 ( 림프구항원 64 (RP105), 류신풍부반복체 (LRR) 족의제I형막단백질은 B-세포활성화및아팝토시스를조절하고, 이기능의손실은전신홍반루푸스환자의질환활성증가와관련됨, 진뱅크수탁번호 NP_ ); (34) FCRH1 (C2 제I형g-형및 ITAM 도메인을함유하는이뮤노글로불린 Fc 도메인을위한추정의수용체인 Fc 수용체-유사단백질 1은 B-림프구분화에있어서역할을할수있음, 진뱅크수탁번호 NP_ ); 또는 (35) IRTA2 (B 세포발달및림프종발생에작용할가능성이있는추정의면역수용체인이뮤노글로불린거대족수용체전위관련 2; 전위에의한유전자의탈조절은일부 B 세포악성종양에서일어남, 진뱅크수탁번호 NP_ ); A는스트레처단위이고, a는 0 또는 1이고, W는각각독립적으로아미노산단위이고, w는 0 내지 12 범위의정수이고, Y는스페이서단위이고, y는 0, 1 또는 2이고 ; p는 1 내지약 20 범위이고 ; D는하기화학식 D E 및 D F 를갖는약물단위이며 : < 화학식 D E > [0253] [0254] < 화학식 D F > [0255] [0256] 여기서, D E 및 D F 중의파형선은 A, W 또는 Y 에대한공유부착부위를나타내고, 각각의위치에서독립적으로 : [0257] R 2 는 H 및 C 1 -C 8 알킬로부터선택되고 ; [0258] R 3 는 H, C 1 -C 8 알킬, C 3 -C 8 카르보사이클, 아릴, C 1 -C 8 알킬 - 아릴, C 1 -C 8 알킬 -(C 3 -C 8 카르보사이클 ), C 3 -C 8 헤테로 사이클및 C 1 -C 8 알킬 -(C 3 -C 8 헤테로사이클 ) 로부터선택되고 ;

42 [0259] R 4 는 H, C 1 -C 8 알킬, C 3 -C 8 카르보사이클, 아릴, C 1 -C 8 알킬 - 아릴, C 1 -C 8 알킬 -(C 3 -C 8 카르보사이클 ), C 3 -C 8 헤테로 사이클및 C 1 -C 8 알킬 -(C 3 -C 8 헤테로사이클 ) 로부터선택되고 ; [0260] [0261] R 5 는 H 및메틸로부터선택되거나 ; 또는 R 4 및 R 5 는결합하여카르보시클릭고리를형성하고, 화학식 -(CR a R b ) n - ( 여기서, R a 및 R b 는독립적으로 H, C 1 -C 8 알킬및 C 3 -C 8 카르보시클로부터선택되고, n 은 2, 3, 4, 5 및 6 로부터선택됨 ) 을가지며 ; [0262] R 6 은 H 및 C 1 -C 8 알킬로부터선택되고 ; [0263] R 7 은 H, C 1 -C 8 알킬, C 3 -C 8 카르보사이클, 아릴, C 1 -C 8 알킬 - 아릴, C 1 -C 8 알킬 -(C 3 -C 8 카르보사이클 ), C 3 -C 8 헤테로 사이클및 C 1 -C 8 알킬 -(C 3 -C 8 헤테로사이클 ) 로부터선택되고 ; [0264] R 8 은각각독립적으로 H, OH, C 1 -C 8 알킬, C 3 -C 8 카르보사이클및 O-(C 1 -C 8 알킬 ) 로부터선택되고 ; [0265] R 9 는 H 및 C 1 -C 8 알킬로부터선택되고 ; [0266] R 10 는아릴또는 C 3 -C 8 헤테로시클로부터선택되고 ; [0267] Z 는 O, S, NH 또는 NR 12 ( 여기서, R 12 는 C 1 -C 8 알킬임 ) 이고 ; [0268] [0269] [0270] R 11 은 H, C 1 -C 20 알킬, 아릴, C 3 -C 8 헤테로사이클, -(R 13 O) m -R 14, 또는 -(R 13 O) m -CH(R 15 ) 2 로부터선택되고 ; m 은 범위의정수이고 ; R 13 은 C 2 -C 8 알킬이고 ; [0271] R 14 는 H 또는 C 1 -C 8 알킬이고 ; [0272] R 15 는각각독립적으로 H, COOH, -(CH 2 ) n -N(R 16 ) 2, -(CH 2 ) n -SO 3 H, 또는 -(CH 2 ) n -SO 3 -C 1 -C 8 알킬이고 ; [0273] R 16 은각각독립적으로 H, C 1 -C 8 알킬또는 -(CH 2 ) n -COOH 이고 ; [0274] R 18 은 -C(R 8 ) 2 -C(R 8 ) 2 - 아릴, -C(R 8 ) 2 -C(R 8 ) 2 -(C 3 -C 8 헤테로사이클 ) 및 -C(R 8 ) 2 -C(R 8 ) 2 -(C 3 -C 8 카르보사이클 ) 로부터선 택되고 ; [0275] [0276] [0277] [0278] [0279] [0280] n은 0 내지 6 범위의정수이다. 다른측면에서, 본발명의항체-약물접합체 (ADC) 의항체는 ErbB2 유전자에의하여코딩하는수용체에특이적으로결합한다. 또다른측면에서, 항체-약물접합체의항체는 humab4d5-1, humab4d5-2, humab4d5-3, humab4d5-4, humab4d5-5, humab4d5-6, humab4d5-7 및 humab4d5-8 ( 트라츠주마브 ) 로부터선택된인간화항체이다. 또다른측면에서, 본발명은본발명의항체-약물접합체화합물 ; 용기 ; 및상기화합물이 ErbB2 수용체의과발현을특징으로하는암을치료하는데사용될수있다고나타낸포장첨부설명서 (package insert) 또는표지 (label) 를포함하는제품을포함한다. 또다른측면에서, 본발명은본발명의항체-약물접합체화합물의치료유효량을포유동물에게투여하는것을포함하는, 포유동물에서 ErbB2 수용체의과발현을특징으로하고, 항-ErbB2 항체로의치료에반응하지않거나빈약하게반응하는암의치료방법을포함한다. 또다른측면에서, 약물잔기의실질량은항체-약물접합체화합물이항체-약물접합체의항체에특이적인세포

43 표면수용체를갖는세포로들어갈때까지항체로부터분해되지않으며, 약물잔기는항체 - 약물접합체가세포 로들어갈때항체로부터분해된다. [0281] [0282] [0283] [0284] [0285] [0286] [0287] [0288] [0289] [0290] [0291] 또다른측면에서, 포유동물에서의항체-약물접합체화합물또는화합물의세포내대사물질의생체이용률은항체-약물접합체화합물의약물잔기를포함하는약물화합물과비교할때, 또는약물잔기를갖지않는화합물의유사체와비교할때개선된다. 다른측면에서, 약물잔기는포유동물에서화합물의항체로부터세포내에서분해되거나, 또는화합물의세포내대사물질이다. 다른측면에서, 본발명은유효량의본발명의항체-약물접합체화합물, 또는그의제약상허용되는염, 및제약상허용되는희석제, 담체또는부형제를포함하는제약조성물을포함한다. 조성물은튜불린-형성억제제, 토포이소머라제억제제및 DNA 결합제와같은화학요법제의치료유효량을추가로포함할수있다. 다른측면에서, 본발명은종양세포또는암세포를사멸시키거나증식을억제하는양의본발명의항체-약물접합체화합물, 또는그의제약상허용되는염또는용매화물로종양세포또는암세포를치료하는것을포함하는, 종양세포또는암세포를사멸시키거나증식을억제하는방법을포함한다. 다른측면에서, 본발명은항체약물접합체화합물이세포로들어가고, 약물이항체약물접합체화합물의잔여부분로부터분해되어, 세포의증식을억제하게되는, 세포배양배지중에서포유동물세포를본발명의항체약물접합체화합물에노출시키는것을포함하는세포증식을억제하는방법을포함한다. 다른측면에서, 본발명은본발명의항체-약물접합체화합물및제약상허용되는희석제, 담체또는부형제의제제를환자에게투여하는것을포함하는, 암치료방법을포함한다. 다른측면에서, 본발명은 (a) 본발명의항체-약물접합체화합물에세포를노출시키는단계 ; 및 (b) 세포에항체-약물접합체화합물이결합하는정도를측정하는단계를포함하는암세포의검출분석법을포함한다. 본발명은첨부도면, 도해및반응식과함께예시실시양태의상세한설명을참고함으로써가장잘이해될수있다. 하기논의는설명적이고, 예시적이고, 대표적인것이며, 첨부하는청구의범위에서한정된범위로제한되는것으로이해되어서는안된다. [0311] [0312] [0313] [0314] [0315] 발명의상세한설명 4.1. 정의및약어달리표시되지않으면, 본원에사용된하기용어와어구는하기의미를갖는것으로의도된다 : 상표명이본원에서사용되는경우, 출원인은독립적으로상표명제품제제, 일반약물, 및상표명제품의활성제약성분 ( 들 ) 을포함하는것으로의도된다. 본원에서용어 " 항체 " 는최대로넓은의미에서, 또한특이적으로 2종이상의무손상 (intact) 항체로부터형성된무손상모노클로날항체, 폴리클로날항체, 다중특이성항체 ( 예를들어, 이중특이성항체 ), 및바람직한생물학적활성을나타내는한항체단편을포함한다. 항체는특이적인항원을인식하고결합할수있는면역계에의하여생성된단백질이다. 그의구조의면에서, 항체는통상적으로 4개의아미노산쇄 (2개의중쇄및 2개의경쇄 ) 로이루어진 Y-형상단백질을가진다. 각각의항체는본래가변영역및불변영역의 2개의영역을가진다. Y의팔의말단부분에위치한가변영역은표적항원에결합하고상호작용한다. 가변영역은특정항원상의특이적결합부위를인식하고결합하는상보성결정영역 (CDR) 을포함한다. Y의꼬리부분에위치한불변영역은면역계에의하여인식되고면역계와상호작용한다 (Janeway, C., Travers, P., Walport, M., Shlomchik (2001) Immuno Biology, 5th Ed., Garland Publishing, NewYork). 표적항원은일반적으로다수의항체상의 CDR에의하여인식되는, 에피토프로도불리는결합부위를가지고있다. 상이한에피토프에특이적으로결합되는각각의항체는상이한구조를가진다. 그러므로, 한항원은하나이상의상응하는항체를가질수있다. 본원에사용된용어 " 항체 " 는전장이뮤노글로불린분자또는전장이뮤노글로불린분자의면역학적으로활성인

44 부분, 즉목적하는표적의항원또는그의일부에면역특이적으로결합하는항원결합부위를함유하는분자 ( 그러한표적은암세포또는자가면역질환과관련된자가면역항체를생산하는세포를포함하나이에한정되지는않음 ) 를또한지칭한다. 본원에개시된이뮤노글로불린은이뮤노글로불린의임의의유형 ( 예를들어, IgG, IgE, IgM, IgD 및 IgA), 분류 ( 예를들어, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 및 IgA2) 또는하위분류일수있다. 이뮤노글로불린은임의의종으로부터유래될수있다. 그러나, 한측면에서, 이뮤노글로불린은인간, 뮤린또는토끼유래이다. 다른측면에서, 항체들은암세포항원, 바이러스항원또는미생물항원에면역특이적으로결합되는폴리클로날, 모노클로날, 이중특이성, 인간, 인간화또는키메라항체, 단쇄항체, Fv, Fab 단편, F(ab') 단편, F(ab') 2 단편, Fab 발현라이브러리에의하여생산된단편, 항-개체특이형 ( 항-Id) 항체, CDR's, 및에피토프-결합단편이다. [0316] [0317] [0318] [0319] [0320] [0321] [0322] 여기서사용된용어 " 모노클로날항체 " 는실질적으로균일한항체의집단으로부터얻어진항체를의미하는데, 즉, 집단에포함되는개별항체는소량존재할수있는가능한자연-발생돌연변이를제외하고는동일하다. 모노클로날항체는매우특이적이어서, 하나의항원부위에대해지정되어있다. 나아가, 상이한결정자 ( 에피토프 ) 에대해지정된상이한항체를포함하는폴리클로날항체제조와는달리, 각각의모노클로날항체는항원에있어하나의결정자에대해지정된다. 이들의특이성외에, 모노클로날항체는이들이다른항체에의해오염되지않고합성될수있는이점이있다. 수식어 " 모노클로날 " 은실질적으로균일한항체집단으로부터얻어진다는항체의특성을나타내고, 어떤특정방법에의한항체의생산이필요한것으로해석되진않는다. 예를들어, 본발명에의해사용된모노클로날항체는문헌 [Kohler et al. (1975) Nature 256:495] 에처음기재된하이브리도마법에의해만들어질수있거나, 또는재조합 DNA 법에의해만들어질수있다 ( 미국특허번호제 호참조 ). " 모노클로날항체 " 는또한예를들어, 문헌 [Clackson et al.(1991) Nature, 352: ] 및문헌 [Marks et al. (1991) J. Mol. Biol., 222: ] 에기재된기법을사용하여파지항체라이브러리로부터단리될수있다. 여기의모노클로날항체는특히, 중쇄및 ( 또는 ) 경쇄의일부분은특정종으로부터유도되거나또는특정항체부류또는하위부류에속하는항체내대응서열과동일하거나상동이며, 반면, 사슬의나머지는또다른종으로부터유도되거나또는또다른항체부류또는하위부류에속하는항체내대응서열과동일하거나상동인 " 키메라 " 항체뿐아니라이러한항체의단편을, 이들이원하는생물학적활성을보이는경우에포함한다 ( 미국특허번호제mp/ 호및문헌 [Morrison et al. (1984) Proc.Natl. Acad. Sci. USA, 81: ]). 모노클로날항체 (MAb) 를생산하는데에는다양한방법이사용되어왔다. 항체단일형을생산하는클로닝된세포주를의미하는하이브리도마기술은, 마우스 ( 뮤린 ), 햄스터, 래트, 및인간을포함하는다양한종의세포를사용한다. MAb를제조하는또다른방법은재조합 DNA 기법을포함하는유전공학을사용한다. 이들기법으로만들어진모노클로날항체는, 그중에서도, 키메라항체및인간화항체를포함한다. 키메라항체는하나이상의종유형의 DNA 코딩하는영역들을결합시킨다. 예를들어, 키메라항체는가변영역은마우스로부터유래될수있고불변영역은인간으로부터유래될수있다. 인간화항체는비록비인간부분을포함하고있더라도, 주로인간으로부터유래된다. 키메라항체처럼, 인간화항체는완벽하게인간불변영역을포함할수있다. 그러나, 키메라항체와는달리, 가변영역은부분적으로는인간으로부터유래될수있다. 인간화항체의비인간, 합성부분은종종뮤린항체내 CDR에서유래된다. 어떻든지, 이영역은항체가특이적항원을인식하고결합하는것을가능하게하는데결정적이다. 언급한바와같이, 뮤린항체가사용될수있다. 진단및단기간치료에유용하다하더라도, 뮤린항체가사람에게장기간투여시해로운면역반응의위험이증가할수있다. 인간항-마우스항체 (HAMA) 로불리는이반응은인간면역시스템이뮤린항체를외래물질로인식하고공격할때일어난다. HAMA 반응은독소쇼크또는나아가사망까지도야기시킬수있다. 키메라및인간화항체는투여된항체의비인간부분을최소화하여 HAMA 반응의가능성을감소시킨다. 또한, 키메라및인간화항체는세포독성에의존하는항체와같이, 제2의인간면역반응을활성화하는추가적이점을가진다. " 항체단편 " 은무손상항체의일부분을포함하며, 바람직하게는이들의항원-결합또는가변영역을포함한다. 항체단편의예는 Fab, Fab', F(ab')2, 및 Fv 단편 ; 디아바디 (diabodies); 선형항체 ; 단일-사슬항체분자 ; 및항체단편에서형성된다중특이적항체를포함한다. " 무손상 " 항체는항원결합가변영역뿐아니라경쇄불변도메인 (CL) 및중쇄불변도메인, CH1, CH2 및 CH3 를포함하는항체이다. 불변도메인은천연서열불변도메인 ( 예, 인간천연서열불변도메인 ) 또는이들의

45 아미노산서열변이체일수있다. [0323] [0324] [0325] [0326] [0327] [0328] [0329] 무손상항체는항체의 Fc 영역 ( 천연서열 Fc 영역또는아미노산서열변이체 Fc 영역 ) 에기인할수있는이들의생물학적활성을의미하는하나이상의 " 이펙터기능 " 을가질수있다. 항체이펙터기능의예는 C1q 결합 ; 보체의존세포독성 ; Fc 수용체결합 ; 항체-의존세포-매개세포독성 (ADCC); 식작용 ; 세포표면수용체 ( 예, B 세포수용체 ; BCR) 등의하향조절등을포함한다. 이들중쇄의불변도메인의아미노산서열에따라, 무손상항체를상이한 " 부류 " 로지정할수있다. 무손상항체는다섯개의주부류 (IgA, IgD, IgE, IgG, 및 IgM) 가있으며, 이들중몇몇을나아가 " 하위부류 "( 이소형 (isotype)), 예를들어, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA, 및 IgA2로나눌수있다. 항체의여러가지부류에대응하는중쇄불변도메인은각각 α, β, ε, γ, 및 μ라고불린다. 이뮤노글로불린의여러가지부류의서브유닛구조및 3차원배위는잘알려져있다. 표현 "ErbB2" 및 "HER2" 은여기서호환가능하게사용되며예를들어, 문헌 [Semba et al., Proc. Natl Acad. Sci. USA, 82: (1985)] 및문헌 [Yamamoto et al., (1986) Nature, 319: ( 진뱅크수탁번호 X03363)] 에기재된인간 HER2 단백질을의미한다. 용어 "erbb2" 는인간 ErbB2를코딩하는유전자를의미하며 "neu" 는래트 pl85neu를코딩하는유전자를의미한다. 바람직한 ErbB2는천연서열인간 ErbB2이다. ErbB 수용체에대한항체는예를들어, 미국캘리포니아주에위치한산타크루즈바이오테크놀러지사 (Santa Cruz Biotechnology, Inc.) 를포함하여, 많은공급원으로부터입수가능하다. "ErbB 리간드 " 는 ErbB 수용체에결합및 ( 또는 ) 활성화하는폴리펩티드를의미한다. ErbB 리간드는예를들어, 표피성장인자 (EGF)([Savage et al. (1972) J. Biol. Chem., 247: ]); 형질전환성장인자알파 (TGF-α)([Marquardt et al. (1984) Science 223: ]); 신경초종또는각화세포자가성장인자로또한공지된암피레굴린 (amphiregulin)([shoyab et al. (1989) Science 243: ;Kimura et al., Nature, 348: (1990)] 및 [Cook et al., Mol. Cell. Biol., 11: (1991)]); 베타셀룰린 (betacellulin))([shing et al., Science, 259: (1993)] 및 [Sasada et al., Biochem. Biophys. Res. Commun., 190:1173 (1993)]); 헤파린결합표피성장인자 (HB-EGF)([Higashiyama et al., Science, 251: (1991)]); 에피레굴린 (epiregulin)([toyoda et al., J. Biol. Chem., 270: (1995)] 및 [Komurasaki et al., Oncogene, 15: (1997)]); 헤레굴린 (heregulin)( 하기참조 ); 뉴레굴린- 2(neuregulin-2)(NRG-2)([Carraway et al., Nature, 387: (1997)]; 뉴레굴린-3(NRG-3)([Zhang et al., Proc. Natl. Acad. Sci., 94: (1997)]; 뉴레굴린-4(NRG-4)([Harari et al., Oncogene, 18: (1999)]) 또는크립토 (cripto)(cr-1)([kannan et al., J. Biol. Chem., 272(6): (1997)]) 와같은천연서열인간 ErbB 리간드일수있다. EGFR에결합하는 ErbB 리간드는 EGF, TGF-α, 암피레굴린, 베타셀룰린, HB-EGF 및에피레굴린을포함한다. ErbB3에결합하는 ErbB 리간드는헤레굴린을포함한다. ErbB4에결합가능한 ErbB 리간드는베타셀룰린, 에피레굴린, HB-EGF, NRG-2, NRG-3, NRG-4 및헤레굴린을포함한다. ErbB 리간드는또한합성 ErbB 리간드일수있다. 합성리간드는특정 ErbB 수용체에특이적일수있고, 또는특정 ErbB 수용체복합체를인식할수있다. 합성리간드의예로는합성헤레굴린 /EGF 키메라비레굴린이다 ( 예를들어, 여기서참고하는문헌 [Jones et al., (1999) REBS Letters, 447: ] 참조 ). " 헤레굴린 "(HRG) 는미국특허번호제 호또는문헌 [Marchionni et al., Nature, 362: (1993)] 에개시된바와같은헤레굴린유전자제품에의해코딩된폴리펩티드를의미한다. 헤레굴린의예는헤레굴린- α, 헤레굴린-β1, 헤레굴린-β2 및헤레굴린-β3([Holmes et al., Science, 256: (1992)] 및미국특허번호제 호 ); neu 분화인자 (NDF)([Peles et al., Cell 69: (1992)]); 아세틸콜린수용체- 유도활성 (ARIA)([Falls et al. (1993) Cell 72 : )]); 신경교성장인자 (GGF)([Marchionni et al., Nature, 362: (1993)]); 감각및운동뉴런유도인자 (SMDF)([Ho et al., J. Biol. Chem., 270: (1995)]); γ-헤레굴린 ([Schaefer et al., Oncogene, 15: (1997)]) 을포함한다. 용어는생물학적활성단편및 ( 또는 ) 천연서열 HRG 폴리펩티드의아미노산서열변이체, 예를들어, 이들의 EGF-유사도메인단편 ( 예, HRGβ ) 을포함한다. "ErbB 헤테로-올리고머 " 는두개이상의상이한 ErbB 수용체를포함하는비공유적으로합체된올리고머이다. "ErbB 이량체 " 는두개의상이한 ErbB 수용체를포함하는비공유적으로합체된올리고머이다. 이복합체는두개이상의 ErbB 수용체를발현하는세포가 ErbB 리간드에노출될때형성할수있다. ErbB 이량체와같은 ErbB 올리고머는예를들어, 문헌 [Sliwkowski et al., J. Biol.Chem., 269 (20): (1994)] 에개시된바와같이면역침강법으로단리하고 SDS-PAGE로분석할수있다. 이 ErbB 헤테로-올리고머의예는 EGFR

46 ErbB2(HER1/HER2로도불림 ), ErbB2-ErbB3(HER2/HER3) 및 ErbB3-ErbB4(HER3/HER4) 복합체를포함한다. 또한, ErbB 헤테로-올리고머는상이한 ErbB 수용체와결합한두개이상의 ErbB2 수용체, 예를들어, ErbB3, ErbB4 또는 EGFR(ErbB1) 을포함할수있다. 사이토킨수용체서브유닛 ( 예, gp130) 과같은다른단백질은헤테로-올리고머에포함될수있다. [0330] [0331] [0332] [0333] [0334] [0335] [0336] " 천연서열 " 폴리펩티드는천연유래의폴리펩티드 ( 예, 종양-관련항원수용체 ) 와동일한아미노산서열을갖는것이다. 이러한천연서열폴리펩티드는천연에서단리될수있고또는재조합또는합성수단으로생산될수있다. 따라서, 천연서열폴리펩티드는자연-발생인간폴리펩티드, 뮤린폴리펩티드, 또는어떤다른포유동물종의폴리펩티드의아미노산서열을가질수있다. 용어 " 아미노산서열변이체 " 는천연서열폴리펩티드와다소상이한아미노산서열을가지는폴리펩티드를의미한다. 보통, 아미노산서열변이체는천연리간드의하나이상의수용체결합도메인, 또는천연수용체의하나이상의리간드결합도메인, 예를들어종양-관련항원을가지면서약 70% 이상의상동성을지닐것이고, 바람직하게는이들은이러한수용체또는리간드결합도메인을가지면서약 80% 이상, 더욱바람직하게는, 약 90% 이상의상동성이있을것이다. 아미노산서열변이체는천연아미노산서열의아미노산서열내의특정위치에치환, 결실, 및 ( 또는 ) 삽입을지닌다. " 서열동일성 " 은필요하다면, 서열최대동일성퍼센트를달성하기위해서열이정렬된후갭에도입된, 아미노산서열변이체내의동일한잔기백분율로정의된다. 정렬의방법및컴퓨터프로그램은당업계에잘알려져있다. 컴퓨터정렬프로그램중하나는제넨테크사 (Genentech, Inc.,) 에의해만들어진 " 얼라인 (align) 2" 이며, 이것은 1991년 12월 10일에워싱턴디씨 20559에위치한미국저작권청에사용자문서로출원되었다. " 항체-의존세포-매개세포독성 " 및 "ADCC" 는 Fc 수용체 (FcRs)( 예, 자연살해 (NK) 세포, 호중구및대식세포 ) 를발현하는비특이적세포독성세포가표적세포에결합된항체를인식하고이어서표적세포의용균을야기시키는세포-매개반응을의미한다. ADCC, NK 세포를매개하는 1차세포는 FcγRⅢ만을발현하나, 단핵구는 FcγR Ⅰ, FcγRⅡ 및 FcγRⅢ를발현한다. 개괄적인조혈세포에의 FcR 발현은문헌 [Ravetch and Kinet, (1991) Annu. Rev. Immunol, 9: ] 의 464 페이지의표 3에있다. 관심있는분자의 ADCC 활성을평가하기위해, 미국특허번호제 호또는제 호에개시된바와같이, 시험관내 ADCC 분석법을수행할수있다. 이분석법에유용한이펙터세포는말초혈액단핵세포 (PBMC) 및자연살해 (NK) 세포를포함한다. 별법으로, 또는추가적으로, 관심있는분자의 ADCC 활성은생체내, 예를들면문헌 [Clynes et al., Prco. Natl. Acad. Sci. USA, 95: (1998)] 에개시된바와같은동물모델에서평가될수있다. 용어 "Fc 수용체 " 또는 "FcR" 은항체의 Fc 영역에결합하는수용체를기재하는데사용된다. 바람직한 FcR은천연서열인간 FcR이다. 또한, 바람직한 FcR은 IgG 항체에결합한것 ( 감마수용체 ) 이고, 대립유전자변이체및별법으로이들수용체의스플라이싱된형태를포함하는, FcγRⅠ, FcγRⅡ 및 FcγRⅢ 하위부류수용체를포함한다. FcγRⅡ 수용체는주로이들의세포질도메인에서상이한유사아미노산서열을가지는 FcγRⅡA(" 활성화수용체 ") 및 FcγRⅡB(" 억제수용체 ") 를포함한다. 활성화수용체 FcγRⅡA는세포질도메인내에면역수용체티로신-기초활성화모티프 (ITAM) 을포함한다. 억제수용체 FcγRⅡB는세포질도메인내에면역수용체티로신-기초억제모티프 (ITIM) 을포함한다 ( 문헌 [M. in Dacron, Annu. Rev.ImmunoL, 15 : (1997)] 참조 ). FcR은문헌 [Ravetch and Kinet, Annu. Rev. Immunol., 9: (1991)] ; 문헌 [Capel et al, Immunomethods, 4: (1994)] 및문헌 [de Haas et al., J. Lab. Clin.Med., 126: (1995)] 에서조사된다. 미래에확인되어야하는것까지포함하여, 다른 FcR은본원의용어 "FcR" 에포함된다. 용어는또한모계 IgG를태아로전달을유발하는신생아수용체, FcRn을포함한다 ([Guyer et al.,j. Immunol., 117: 587 (1976)] 및문헌 [Kim et al.,j.immunol., 24: 249 (1994)]). " 보체의존세포독성 " 또는 "CDC" 는보체의존재하에표적을용해하는분자의능력을의미한다. 보체활성화경로는보체시스템의제1의성분 (C1q) 과동족항원과복합체를이룬분자 ( 예, 항체 ) 의결합에의해개시된다. 보체활성화를평가하기위해, 예를들어, 문헌 [Gazzano-Santoro et al.,j. Immunol. Methods, 202: 163 (1996)] 에기재된바와같이, CDC 분석법을수행할수있다. 용어 " 가변 " 은가변도메인의특정부분이항체들사이의서열에있어서광범위하게상이하여이것이특정항원에대해각각의특정항체의결합및특이성에사용된다는사실을의미한다. 하지만, 가변성은항체의가변도메인전체에골고루분포되어있지는않다. 이것은경쇄및중쇄가변도메인모두에서초가변영역이라불리는세개의절편내에집중된다. 가변도메인이매우고도로보존되는부분을프레임워크영역 (FR) 이라고부른다. 천연중쇄및경쇄의가변도메인은주로 β-시트배위를채택하며, β-시트구조와루프연결을

47 형성하여, 경우에따라서는부분적으로형성하는, 세개의초가변영역에의해연결되는네개의 FR을각각포함한다. 각각의사슬에서초가변영역은 FR에아주근접하게모여져있으며, 다른사슬의초가변영역과함께, 항체의항원-결합부위의형성에기여한다 ( 문헌 [Kabat et al. (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD] 참조 ). 불변도메인은항체의항원에의결합에직접적으로관여하지않으나, 항체의존세포독성 (ADCC) 에의항체의관여와같은, 다양한이펙터기능을보인다. [0337] [0338] [0339] [0340] 여기서사용된용어 " 초가변영역 " 은항원-결합을유발하는항체의아미노산잔기를의미한다. 초가변영역은일반적으로 " 상보성결정영역 " 또는 "CDR" 로부터의아미노산잔기 ( 예, 경쇄가변도메인의 24-34(L1), 50-56(L2) 및 89-97(L3), 및중쇄가변도메인의 31-35(H1), 50-65(H2) 및 (H3) 잔기 ; 문헌 [Kabat et al. 상기 ]) 및 ( 또는 ) " 초가변루프 " 로부터의이들의잔기 ( 예, 경쇄가변도메인의 26-32(Ll), 50-52(L2) 및 91-96(L3), 및중쇄가변도메인의 26-32(H1), 53-55(H2) 및 (H3) 잔기 ; 문헌 [Chothia and Lesk (1987) J. Mol. Biol.,196 : ]) 를포함한다. " 프레임워크영역 " 또는 "FR" 잔기는여기서정의한바와같이초가변영역잔기이외의이들의가변도메인잔기이다. 항체의파파인 (papain) 소화는각각단일항원-결합부위가있는, "Fab" 단편이라불리는, 두개의동일한항원- 결합단편및이름이이것의손쉬운재결정화능력을반영하는한개잔여 "Fc" 단편을생산한다. 펩신처리는두개의항원-결합부위를갖는 F(ab') 2 단편을수득하고여전히항원을가교시킬수있다. "Fv" 는완벽한항원-인식및항원-결합부위를포함하는최소항체단편이다. 이영역은단단하고비공유적으로결합된, 한개의중쇄및한개의경쇄가변도메인의이량체로구성된다. 이러한구성에서는, 각각가변도메인을갖는세개의초가변영역이 VH-VL 이량체의표면에항원-결합부위를형성하도록상호작용한다. 여섯개의초가변영역이집합적으로항체에항원-결합특이성을부여한다. 하지만, 비록전체결합부위보다는낮은친화성일지라도, 단일가변도메인 ( 또는항원에대해특이적인세개의초가변영역만을포함하는 Fv의절반 ) 조차항원을인식하고결합하는능력을가진다. Fab 단편또한경쇄의불변도메인및중쇄의제1의불변도메인 (CH1) 을포함한다. Fab' 단편은항체힌지영역으로부터의하나이상의시스테인을포함하는중쇄 CH1 도메인의카르복시말단부에몇몇잔기를첨가하여 Fab 단편과상이해진다. Fab'-SH는불변도메인의시스테인잔기 ( 들 ) 이하나이상의자유티올기를포함하는 Fab' 에대한명칭이다. F(ab') 2 항체단편은처음에는이들사이에힌지시스테인을가지는 Fab' 단편의쌍으 로생성되었다. 항체단편의다른화학적커플링또한공지되어있다. [0341] [0342] [0343] [0344] 임의의척추동물종으로부터의항체의 " 경쇄 " 는이들불변도메인의아미노산서열을기준으로, 카파 (κ) 및람다 (λ) 로불리는두개로명백하게구별되는유형중의하나로지정될수있다. " 단일-사슬 Fv" 또는 "scfv" 항체단편은항체의 VH 및 VL 도메인을포함하며, 여기서이러한도메인은단일폴리펩티드사슬로존재한다. 바람직하게는, Fv 폴리펩티드는 scfv가원하는항원결합구조의형성을가능하게하는 VH 및 VL 도메인사이의폴리펩티드링커를추가로포함한다. scfv의조사에대해서는문헌 [Pluckthun in The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, vol. 113, Rosenburg and Mooreeds., Springer-Verlag, New York, pp (1994)] 를참조. 용어 " 디아바디 (diabody)" 는단편이동일한폴리펩티드사슬 (VH-VL) 내에서가변경도메인 (VL) 에연결된가변중도메인 (VH) 를포함하는, 두개의항원-결합부위를갖는작은항체단편을의미한다. 너무짧아서동일한사슬내두개의도메인사이의쌍형성을불가능하게하는링커를사용함으로써, 도메인은또다른사슬의상보적도메인과쌍을형성하여두개의항원-결합부위를생성하도록한다. 디아바디는, 예를들어, EP 404,097; WO 93/11161; 및문헌 [Hollinger et al. (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: ] 에더욱자세히기재되어있다. 비인간 ( 예, 설치류 ) 항체의 " 인간화 " 형태는비인간이뮤노글로불린에서유래된서열을최소한포함하는키메라항체이다. 대부분의부분에서, 인간화항체는수용자의초가변영역의잔기가마우스, 래트, 토끼또는원하는특이성, 친화성, 및투여량을가지는비인간영장류와같은비인간종 ( 공여자항체 ) 의초가변영역의잔기로대체되는인간이뮤노글로불린 ( 수용자항체 ) 이다. 임의의경우에는, 인간이뮤노글로불린의프레임워크영역 (FR) 잔기가대응하는비인간잔기로대체된다. 또한, 인간화항체는수용자항체또는공여자항체에서발견할수없는잔기를포함할수있다. 이들변형은항체수행을좀더정련되게한다. 일반적으로, 인간화항체는한개이상, 및통상적으로두개의가변도메인모두를실질적으로포함할것인데, 초가변루프의모두또는실질

48 적으로모두는비인간이뮤노글로불린의초가변루프에대응하고, FR의모두또는실질적으로모두는인간이뮤노글로불린서열의 FR에대응한다. 인간화항체는또한최소한이뮤노글로불린불변영역 (Fc) 의일부분, 통상적으로인간이뮤노글로불린의것을임의로포함할것이다. 더자세한것은, 문헌 [Joneset al. (1986) Nature, 321: ]; 문헌 [Riechmannet al. (1988) Nature 332: ]; 및 [Presta, (1992) Curr. Op. Struct. Biol., 2: ] 을참조. [0345] [0346] [0347] [0348] [0349] [0350] [0351] [0352] [0353] 인간화항-ErbB2 항체는여기서명백히참고하는미국특허번호제 호의표 3에기재되어있는바와같이, humab4d5-1, humab4d5-2, humab4d5-3, humab4d5-4, humab4d5-5, humab4d5-6, humab4d5-7 및 humab4d5-8( 헤르셉틴 (HERCEPTIN ); 이하에서기재하는바와같이인간화 520C9(WO 93/21319) 및인간화 2C4 항체를포함한다. " 단리된 " 항체는천연환경의성분으로부터확인되고분리하여및 ( 또는 ) 회수된항체이다. 천연환경의오염성분은항체의진단또는치료적사용을방해할수있는물질이고, 효소, 호르몬, 및다른단백질성또는비단백질성용질을포함할수있다. 바람직한실시양태에서, 항체는 (1) 로우리 (Lowry) 법으로측정된 95 중량 % 초과, 및가장바람직하게는 99 중량 % 초과의항체로, (2) 방사컵서열분석기를사용하여 N-말단또는내부아미노산서열의 15개잔기이상을얻기에충분한정도로, 또는 (3) 쿠마시블루 (Coomassie blue) 또는바람직하게는, 은염색을사용하여환원또는비환원상태하에서 SDS-PAGE에의해균질하게정제될것이다. 단리된항체는항체천연환경의하나이상의성분은존재하지않으므로재조합세포내계내항체를포함한다. 하지만, 보통, 단리된항체는하나이상의정제단계에의해제조될것이다. 관심있는항원에 " 결합하는 " 항체는항체가항원을발현하는표적세포에유용하도록충분한친화성으로항원과결합할수있는항체이다. " 아팝토시스 (apoptosis) 를유발하는 " 항체는아넥신 (annexin) V의결합, DNA 단편화, 세포수축, 소포체의확장, 세포단편화, 및 ( 또는 ) 막소포의형성 ( 아팝토체라불림 ) 으로측정된예정된세포사망을유발하는것이다. 세포는종양세포, 예를들어, 유방, 난소, 위, 자궁내막, 타액선, 폐, 신장, 대장, 갑상선, 췌장또는방광세포이다. 아팝토시스와관련된세포성사건을평가하는데다양한방법이이용될수있다. 예를들어, 포스파티딜세린 (PS) 전위는아넥신결합으로측정될수있고, DNA 단편화는 DNA 래더링 (laddering) 을통해평가될수있으며, 핵 / 크로마틴축합과 DNA 단편화는저이배체세포의증가로평가될수있다. " 장애 " 는본발명의치료로인해이롭게될수있는임의의상태이다. 이것은포유동물의문제의장애소인인병적상태를포함하여만성및급성장애또는질환을포함한다. 여기서치료되는비제한장애의예는양성및악성종양 ; 백혈병및림프성악성종양, 특히유방, 난소, 위, 자궁내막, 타액선, 폐, 신장, 대장, 갑상선, 췌장, 전립선또는방광암 ; 신경원성, 신경교, 성상세포, 시상하부및다른선상, 대식세포상, 상피성, 기질성및할강성장애 ; 및염증성, 혈관형성및면역성장애를포함한다. 용어 " 치료유효량 " 은포유동물에서질환또는장애를치료하기위한약물의유효량을의미한다. 암의경우, 약물의치료유효량은암세포의수를감소시킬수있고 ; 종양크기를감소시킬수있으며 ; 말초기관내의암세포침입을억제할수있고 ( 즉, 다소서서히및바람직하게는중지시킴 ); 종양전이를억제할수있고 ( 즉, 다소서서히및바람직하게는중지시킴 ); 종양성장을다소억제할수있고 ; 및 ( 또는 ) 암과관련된하나이상의증상을어느정도완화시킬수있다. 약물이존재하는암세포성장을예방하거나및 ( 또는 ) 암세포를사멸시킬수있는한, 세포증식억제성및 ( 또는 ) 세포독성이있을수있다. 암치료에있어, 예를들어, 효능은질환진행 (TTP) 에대한시간을평가하거나및 ( 또는 ) 반응속도 (RR) 를측정함으로써결정될수있다. 용어 " 실질량 " 은집단, 및집합또는샘플의 50% 초과, 즉과반수를의미한다. 용어 " 세포내대사물질 " 은항체약물접합체 (ADC) 에서의대사과정또는세포내부반응으로생성된화합물을의미한다. 대사과정또는반응은 ADC 펩티드링커의단백질분해적절단과같은효소적과정, 또는하이드라존, 에스테르, 또는아미드와같은작용기의가수분해일수있다. 세포내대사물질은세포내로진입, 확산, 흡수또는수송후세포내분해를거치는항체및유리약물을포함하나, 이들로제한되는것은아니다. 용어 " 세포내에서분해된 " 및 " 세포내분해 " 는약물-리간드접합체, 약물-링커-리간드접합체, 항체약물접합체 (ADC) 등에서약물잔기 (D) 와항체 (Ab) 간의공유적연결, 예를들어링커가끊어져세포내에서항체로부터해리되는유리약물을생성하는, 세포내대사과정또는반응을의미한다. 따라서약물-리간드접합체, 약물- 링커-리간드접합체또는 ADC의분해된잔기는세포내대사물질이다

49 [0354] [0355] [0356] [0357] [0358] [0359] [0360] 용어 " 생체이용률 " 은환자에투여된약물일정량에대한전신이용률 ( 즉, 혈액 / 혈장수준 ) 을의미한다. 생체이용률은투여된투여형태로부터일반적순환에도달하는시간 ( 속도 ) 및약물의총량 ( 범위 ) 모두의측정값을나타내는절대적용어이다. 용어 " 세포독성활성 " 은항체약물접합체화합물또는항체약물접합체화합물의세포내대사물질의세포-사멸, 세포증식억제성또는항-증식효과를의미한다. 세포독성활성은세포의반이생존하는단위부피당농도 ( 몰또는질량 ) 인 IC 50 값으로표현될수있다. 용어 " 암 " 및 " 암성 " 은포유동물에서통상적으로비조절된세포성장이라는특성이있는생리학적상태를의미하거나또는설명한다. " 종양 " 은하나이상의암성세포를포함한다. 암의예는암종, 림프종, 모세포종, 육종, 및백혈병또는림프성악성종양을포함하나이들로제한되는것은아니다. 이러한암의보다구체적인예는편평세포암 ( 예, 상피성편평세포암 ), 소세포폐암, 비소세포폐암 ("NSCLC"), 폐의선암및폐의편평암종을포함하는폐암, 복막암, 간세포암, 위장관암을포함하는위암, 췌장암, 교모세포종, 자궁경부암, 난소암, 간암 (liver cancer), 방광암, 간세포암 (hepatoma), 유방암, 대장암, 직장암, 결장암, 자궁내막또는자궁암종, 타액선암종, 신장암, 전립선암, 외음부암, 갑상선암, 간암종, 항문암종, 음경암종뿐아니라두경부암을포함하나, 이들로제한되는것은아니다. "ErbB2-발현암 " 은항-ErbB2 항체가암에결합하여암에대해치료학적효과를가질수있도록, 이들의세포표면에충분한수준의 ErbB2를생산하는것이다. ErbB2 수용체의 " 과도한활성화를특징으로하는 " 암은암세포의 ErbB2 수용체활성화의정도가동일한조직형의비-암성세포의 ErbB2 수용체의활성화수준을상당히초과하는암이다. 이러한과도한활성화는 ErbB2 수용체의과발현및 ( 또는 ) 암세포내 ErbB2 수용체를활성화하는데이용될수있는 ErbB2 리간드의정상수준의초과에의해발생될수있다. 이러한과도한활성화는암세포의악성상태를야기키거나및 ( 또는 ) 악성상태에의해야기될수있다. 특정실시양태에서, 암은진단또는예후분석법을거쳐, ErbB2 수용체의이러한과도한활성화를초래하는 ErbB2 수용체의증폭및 ( 또는 ) 과발현이일어났는지를측정할수있다. 별법으로, 또는추가적으로, 암은진단또는예후분석법을거쳐, 수용체의과도한활성화에기인하는 ErbB2 리간드의증폭및 ( 또는 ) 과발현이일어났는지를측정할수있다. 이러한암의아집단에서, 수용체의과도한활성화는자가분비자극경로로부터발생될수있다. ErbB2 수용체를 " 과발현 " 하는암은동일한조직형의비암성세포와비교하여, 이들의세포표면에상당히더높은수준의 ErbB2 수용체를가지는것이다. 이러한과발현은유전자증폭또는증가된전사또는번역에의해야기될수있다. ErbB2 수용체과발현은진단또는예후분석법으로세포의표면에존재하는 ErbB2 단백질의증가된수준을평가함으로써측정할수있다 ( 예, 면역조직화학분석법 ;IHC에의함 ). 별법으로, 또는추가적으로, 세포내 ErbB2-코딩핵산의수준을, 예를들어, 형광계내혼성화 (FISH; WO 98/45479 참조 ), 써던블롯팅, 또는실시간정량 PCR(RT-PCR) 과같은중합효소연쇄반응 (PCR) 법에의해측정할수있다. ErbB2 수용체과발현은상기기재한 IHC, FISH, 써던블롯팅, PCR 또는생체내분석법과같은다양한진단분석법으로또는예를들어종양생검에서, 환자의리간드 ( 또는리간드를암호화한핵산 ) 의수준을평가함으로써진단적으로측정할수있다. 또한혈청과같은생물학적유체내에서탈피된항원 ( 예, ErbB2 세포외도메인 ) 을측정함으로써 ErbB2 수용체과발현을조사할수있다 ( 예를들어, 미국특허번호제 호 ; WO 91/05264; 미국특허번호제 호 ; 및문헌 [Sias et al.,(1990) J. Immunol. Methods, 132: 73-80] 참조 ). 상기분석법외에, 다양한다른생체내분석법이당업자에게이용될수있다. 예를들어, 검출가능한표지 ( 예, 방사성동위원소 ) 로임의적으로표지된항체를환자의체내세포에노출시킬수있고, 환자세포에대한항체결합은예를들어, 방사능에대한외부주사또는이전에항체에노출된환자로부터얻은생검을분석하여평가될수있다. HER2를과발현한종양은세포당발현된 HER2 분자의카피수에대응하는면역조직화학적스코어에의해평가되며, 생화학적으로측정될수있다 : 0 = 0-10,000 카피 / 세포, 1+ = 200,000 이상카피 / 세포, 2+ = 500,000 이상카피 / 세포, 3+ = 약 1-2x10 6 카피 / 세포. 티로신키나아제의리간드-비의존활성화를유발 ([Hudziak et al., (1987) Proc. Natl. Acad.Sci. USA, 84: ]) 하는 3+ 수준의 HER2 과발현은대략 30 % 의유방암에서일어나고, 이환자에서, 재발없는생존및전체생존을줄인다 ([Slamon et al., (1989) Science,244 : ; Slamonet al., (1987) Science, 235: ]). [0361] 반대로, "ErbB2 수용체과발현을특징으로하지않는 " 암은진단분석법에의할때, 동일한조직형의비암성세 포와비교하여정상수준의 ErbB2 수용체보다높게발현하지않는것이다

50 [0362] 여기서사용된용어 " 세포독성제 " 는세포의기능을억제하거나예방하거나및 ( 또는 ) 세포의파괴를야기시키는 물질을의미한다. 용어는방사성동위원소 ( 예, 211 At, 13l I, 125 I, 90 Y, 186 Re, 188 Re, 153 Sm, 212 Bi, 32 P, 60 C, 및 Lu 의방사성동위원소 ), 화학요법제, 및소분자독소또는박테리아, 진균, 식물또는동물기원의효소적활성독소와같은독소 ( 이들의합성동족체및유도체를포함 ) 를포함하는것으로의도된다. 한측면에서, 용어는방사성동위원소를포함하지않는것으로의도된다. [0363] " 화학요법제 " 는암의치료에유용한화학적화합물이다. 화학요법제의예는티오테파및시톡산 (CYTOXAN ) 시클로포스파미드와같은알킬화제 ; 부술판, 임프로술판및피포술란과같은알킬술포네이트, 벤조도파, 카르보퀀, 메투레도파, 및우레도파와같은아지리딘 ; 알트레타민, 트리에틸렌멜라민, 트리에틸렌포스포르아미드를포함하는에틸렌이민및메틸아멜라민 ; TLK 286( 텔시타 (TELCYTA )); 아세토제닌 ( 특히불라타신및불라타시논 ); 델타-9-테트라히드로카나비놀 ( 드로나비놀, 마리놀 (MARINOL )); 베타-라파콘 ; 라파콜 ; 콜키신 ; 베툴린산 ; 캄프토테신 ( 합성동족체토포테캄 ( 히캄틴 (HYCAMTIN ) 포함 ), CPT-11( 이리노테칸, 캄프토사르 (CAMPTOSAR )), 아세틸캄프토테신, 스코폴렉틴, 및 9-아미노캄프토테신을포함 ); 브리오스타틴 ; 콜리스타틴 ; CC-1065( 이것의아도젤레신, 카르젤레신및비젤레신합성동족체포함 ); 포도필로톡신 ; 포도필린산 ; 테니포시드 ; 크립토피신 ( 특히크립토피신 1 및크립토피신 8); 돌라스타틴 ; 두오카르미신 ( 합성동족체, KW-2189 및 CB1- TM1 포함 ); 엘레우테로빈 ; 판크라티스타틴 ; 사르코딕티인 ; 스폰기스타틴 ; 클로람부실, 클로르나파진, 콜로포스파미드, 에스트라무스틴, 이포스파미드, 메클로레타민, 메클로레타민옥시드히드로클로라이드, 멜팔란, 노벰비킨, 페네스테린, 프레드니무스틴, 트로포스파미드, 우라실무스타드와같은질소무스타드 ; 카르무스틴, 클로로조토신, 포테무스틴, 로무스틴, 니무스틴, 및라님누스틴과같은니트로스우레아 ; 클로드로네이트와같은비스포스포네이트 ; 에네디인항생제 ( 예, 칼리케아미신, 특히칼리케아미신감마 1Ⅰ 및칼리케아미신오메가Ⅰ1( 예, 문헌 [Agnew, Chem Intl. Ed. Engl., 33: (1994)] 참조 )) 및안나미신과같은안트라시클린, AD 32, 알카루비신, 다우노루비신, 덱스라족산, DX-52-1, 에피루비신, GPX-100, 이다루비신, KRN5500, 메노가릴, 디네미신 A를포함하는디네미신, 에스페라미신, 네오카르지노스타틴발색단및관련된색소단백질에네디인항생물질발색단, 아클라시노미신, 악티노미신, 오트라미신, 아자세린, 블레오미신, 칵티노미신, 카라비신, 카르미노미신, 카르지노필린, 프로모미시니스, 닥티노미신, 데토루비신, 6-디아조-5-옥소-L-노르루신, 아드리아미신 (ADRIAMYCIN ) 독소루비신 ( 모르폴리노-독소루비신, 시아노모르폴리노-독소루비신, 2-피롤리노-독소루비신, 리포좀성독소루비신, 및데옥시독소루비신을포함 ), 에소루비신, 마르셀로미신, 미토미신 C와같은미토미신, 미코페놀산, 노갈라미신, 올리보미신, 페플로미신, 포트피로미신, 푸로미신, 퀘라미신, 로도루비신, 스트렙토니그린, 스트렙토조신, 투베르시딘, 유베니멕스, 지노스타틴, 및조루비신과같은항생물질 ; 데놉테린, 프테롭테린, 및트리메트렉세이트와같은엽산동족체 ; 플루다라빈, 6-머르캅토푸린, 티아미프린, 및티오구아닌과같은푸린동족체 ; 안시타빈, 아자시티딘, 6-아자우리딘, 카르모푸르, 시타라빈, 디데옥시유리딘, 독시플루리딘, 에노시타빈, 및플록수리딘과같은피리미딘동족체 ; 칼루스테론, 드로모스타놀론프로피오네이트, 에피티오스타놀, 메피티오스탄, 및테스톨락톤과같은안드로겐 ; 아미노글루테티미드, 미토탄, 및트릴로스탄과같은항-부신성 ; 폴린산 ( 루코보린 ) 과같은엽산보충물 ; 아세글라톤 ; 알림타 (ALIMTA ), LY 페메트렉세드와같은항-엽산염항-신생물제, 메토트렉세이트와같은디히드로폴레이트환원효소억제제, 5-플루오로우라실 (5-FU) 과같은항-대사물질및 UFT, S-1 및카페시타빈과같은이들의전구물질, 및티미딜레이트합성억제제및랄티트렉세드 ( 토무덱스 RM (TOMUDEX RM ), TDX) 와같은리보뉴클레오티드포르밀전이효소억제제 ; 에닐우라실과같은디히드로피리미딘탈수소효소억제제 ; 알도포스파미드글리코시드 ; 아미노레불린산 ; 암사크린 ; 베스트라부실 ; 비산트렌 ; 에다트렉세이트 ; 데포파민드 ; 데메콜신 ; 디아지퀀 ; 엘포르니틴 ; 엘립티늄아세테이트 ; 아네포틸론 ; 에토글루시드 ; 갈륨니트레이트 ; 히드록시우레아 ; 렌티난 ; 로니다이닌 ; 마이탄신및안사미토신과같은마이탄시노이드 ; 미토구아존 ; 미톡산트론 ; 모피단몰 ; 니트래린 ; 펜토스타틴 ; 페나멧 ; 피라루비신 ; 로속산트론 ; 2-에틸히드라지드 ; 프로카르바진 ; PSK 폴리사카라이드복합체 ( 오레곤주유진에위치한, JHS 내추럴프로덕트 (JHS Natural Products) 사의제품 ); 라족산 ; 리족신 ; 시조피란 ; 스피로게르마늄 ; 테누아조닌산 ; 트리아지퀀 ; 2,2',2"-트리클로트리에틸아민 ; 트리코테센 ( 특히 T-2 독소, 베라쿠린 A, 로리딘 A 및안귀딘 ); 우레탄 ; 빈데신 ( 엘디신 (ELDISINE ), 필데신 (FILDESIN )); 다카르바진 ; 만노무스틴 ; 미토브로니톨 ; 미톨락톨 ; 피포브로만 ; 가시토신 ; 아라비노시드 ("Ara-C"); 시클로포스파미드 ; 티오테파 ; 탁소이드및탁산, 예를들어탁솔 (TAXOL ) 파클리탁셀 ( 뉴저지주, 프린세톤에위치한브리스톤-미에르스스큅온콜로지 (Bristol-Myers Squibb

51 Oncology) 사의제품 ), 아브락세인 (ABRAXANE ) 크레모포르-없음, 파클리탁셀의알부민-유전자조작나노입자형성 ( 일리노이주, 스카움베르그에위치한아메리칸파르마수티컬파트너스 (American Pharmaceutical Partners) 사의제품 ), 및탁소테레 (TAXOTERE ) 독세탁셀 ( 프랑스, 안토니에위치한론-포울렌크로러 (Rhone-Poulenc Rorer) 사의제품 ); 클로란부실 ; 젬시타빈 ( 젬자르 (GEMZAR )); 6-티오구아닌 ; 머르캅토푸린 ; 플라티늄 ; 시스플라틴, 옥살리플라틴및카르보플라틴과같은플라티늄동족체또는플라티늄-기초동족체 ; 빈블라스틴 ( 벨반 (VELBAN )); 에토포시드 (VP-16); 이포스파미드 ; 미톡산트론 ; 빈크리스틴 ( 온코빈 (ONCOVIN )); 빈카알칼로이드 ; 비노렐빈 ( 나벨빈 (NAVELBINE )); 노반트론 ; 에다트렉세이트 ; 다우노미신 ; 아미놉테린 ; 크셀로다 ; 이반드로네이트 ; 토포이소머라아제억제제 RFS 2000; 이플루오로메틸오르니틴 (DMFO); 레티노산과같은레티노이드 ; 상기물질의제약상허용되는염, 산또는유도체 ; 또한시클로포스파미드, 독소루비신, 빈크리스틴, 및프레드니솔론의결합치료제의약칭인촙 (CHOP), 및 5-FU과루코보린이결합된옥살리플라틴 ( 엘록사틴 (ELOXATIN )) 의치료요법의약칭인폴폭스 (FOLFOX) 과같은두개이상의상기물질의조합을포함한다. [0364] 또한, 이정의에따라, 항 - 에스트로겐및선택적에스트로겐수용체조절인자 (SERM) 와같이종양의호르몬작용 을조절하거나또는억제하는작용을하는, 예를들어, 타목시펜 ( 놀바덱스 (NOLVADEX ) 타목시펜 ), 랄록시펜, 드롤록시펜, 4-히드록시타목시펜, 트리옥시펜, 케옥시펜, LY117018, 오나프리스톤, 및파레스톤 (FARESTON ) 토레미펜을포함하는항-호르몬제 ; 부신선의에스트로겐생산을조절하는효소아로마테아제를억제하는아로마테아제억제제, 예를들어, 4(5)-이미다졸, 아미노글루테티미드, 메가세 (MEGASE ) 메게스트롤아세테이트, 아로마신 (AROMASIN ) 엑세메스탄, 포르메스타니에, 파드로졸, 리비소르 (RIVISOR ) 보로졸, 페마라 (FEMARA ) 레트로졸, 및아리미덱스 (ARIMIDX ) 안나스트로졸 ; 안나스트로졸 ; 및플루타미드, 닐루타미드, 비칼루타미드, 류프롤라미드, 및고세렐린과같은항-안드로겐 ; 또한트록사시타빈 (1,3-디옥솔란뉴클레오시드시토신동족체 ); 안티센스 (antisense) 올리고뉴클레오티드, 특히, 예를들어, PKC-알파, Raf, H-Ras, 및표피성장인자수용체 (EGF-R) 와같은변종 (abherant) 세포증식에연루된신호경로에있어유전자발현을억제하는것들 ; 유전자치료백신과같은백신, 예를들어알로벡틴 (ALLOVECTIN ) 백신, 루벡틴 (LEUVECTIN ) 백신, 및박시드 (VAXID ) 백신 ; 프로루킨 (PROLEUKIN ) ril-2; 러르토테칸 (LURTOTECAN ) 토포이소머라아제 1 억제제 ; 아바렐릭스 (ABARELIX ) rmrh; 및상기물질의제약상허용되는염, 산또는유도체도포함된다. [0365] [0366] 여기서사용된용어 "EGFR-표적약물 " 은 EGFR에결합하여, 임의적으로, EGFR 활성화를억제하는치료제를의미한다. 이작용제의예는 EGFR에결합하는항체및소분자를포함한다. EGFR에결합하는항체의예는 MAb 579(ATCC CRL HB 8506), MAb 455(ATCC CRL HB8507), MAb 225(ATCC CRL 8508), MAb 528(ATCC CRL 8509)( 미국특허번호제 호참조, 멘델손 (Mendelsohn) 등 ) 및키메라화 225(C225 또는세툭시맙 ; 에그비툭스 (ERBITUX )) 및재조절인간 225(H225)(WO 96/40210 참조, 임클론시스템사 (Imclone Systems Inc.)) 와같은이들의변이체 ; 제II형돌연변이체 EGFR에결합하는항체 ( 미국특허번호제5,212,290호 ); 미국특허번호제 호에기재된바와같이 EGRF에결합하는인간화및키메라항체 ; 및 ABX-EGF (WO 98/50433 참조, 압젠닉스 (Abgenix) 사 ) 와같이 EGFR에결합하는인간항체를포함한다. 항-EGFR 항체는세포독성제와접합될수있고, 따라서면역접합체를생성시킬수있다 ( 예를들어, EP 659,439A2 참조, 머크특허 GmbH(Merck Patent GmbH) 사 ). EGFR에결합하는소분자의예는 ZD1839 또는제피티닙 ( 아스트라제네카 (Astra Zeneca) 사의제품인이레사 (IRESSA )), 얼로티닙 HCl( 제넨테크 /OSI(Genentech/OSI) 사의제품인 CP , 타르세바 (TARCEVA )) 및 AG1478, AG1571 ( 수젠 (Sugen) 사의제품인 SU 5271) 를포함한다. " 티로신키나아제억제제 " 는 ErbB 수용체와같은티로신키나아제의티로신키나아제활성을다소억제하는분자이다. 이억제제의예는상기단락에서언급한 EGFR-표적화약물뿐아니라 PD , 4-(3-클로로아닐리노 ) 퀴나졸린, 피리도피리미딘, 피리미도피리미딘, CGP 59326, CGP 및 CGP 62706와같은피롤로피리미딘, 및피라졸로피리미딘, 4-( 페닐아미노 )7H-피롤로[2,3-d] 피리미딘, 커르쿠민 ( 디페룰로일메탄, 4,5-비스 (4-플루오로아닐리노) 프탈이미드 ), 니트로티오펜잔기를포함하는티르포스틴과같은퀴나졸린류 ; PD ( 와르너-람베르트 (Warner-Lambert) 사의제품 ); 안티센스분자 ( 예를들어, ErbB-코딩핵산과결합하는것들 ); 퀴녹살린 ( 미국특허번호제5,804,396호 ); 트리포스틴 ( 미국특허번호제 호 ); ZD6474( 아스트라제네카사의제품 ); PTK-787( 노바티스 / 쉐링 AG(Novartis/Sche환 AG) 사의제품 ); CI-1033( 화이자 (Pfizer) 사의제품 ) 과같은 pan-erbb 억제제 ; 아피니타크 ( 이시스 / 릴리 (Isis/Lilly) 사의제품인이시스UISIS) 3521); 이마티닙

52 메실레이트 ( 노바티스사의제품인글리벡 (Gleevac)); PKI 166( 노바티스사의제품 ); GW2016( 글락소스미스클라인 (Glaxo SmithKline) 사의제품 ); CI-1033( 화이자사의제품 ); EKB-569( 위에쓰 (Wyeth) 사의제품 ); 세막산닙 ( 수젠사의제품 ); ZD6474( 아스트라제네카사의제품 ); PTK-787 ( 노바티스 / 쉐링 AG 사의제품 ); INC-1C11( 임클론사의제품 ); 또는하기에특허공보에기재된것과같은것 : 미국특허번호제 호 ; WO 99/09016( 아메리칸시아나미드 (American Cyanamid) 사 ); WO 98/43960( 아메리칸시아나미드사 ); WO 97/38983( 와르너-람베르트사 ); WO 99/06378( 와르너-람베르트사 ); WO 99/06396( 와르너-람베르트사 ); WO 96/30347( 화이자사 ); WO 96/33978( 제네카사 ); WO 96/3397( 제네카사 ); 및 WO96/33980( 제네카사 ) 을포함한다. [0367] [0368] [0369] [0370] [0371] [0372] [0373] " 항-혈관형성제 " 는혈관의발달을다소차단하거나또는방해하는화합물을의미한다. 항-혈관형성인자는예를들어, 혈관형성을촉진시키는데관여하는성장인자또는성장인자수용체와결합하는소분자또는항체일수있다. 한실시양태에서, 항-혈관형성인자는혈관내피성장인자 (VEGF) 와결합하는항체이다. 용어 " 사이토킨 " 은세포내매개인자와같이또다른세포에작용하는하나의세포집단에서방출되는단백질의일반적용어이다. 이러한사이토킨의예는림포킨, 모노킨, 및전형적인폴리펩티드호르몬이있다. 사이토킨중에서, 인간성장호르몬, N-메티오닐인간성장호르몬, 및소성장호르몬과같은성장호르몬 ; 부갑상선호르몬 ; 티록신 ; 인슐린 ; 프로인슐린 ; 렐락신 ; 프로렐락신 ; 난포자극호르몬 (FSH), 갑상선자극호르몬 (TSH), 및황체형성호르몬 (LH) 과같은당단백질호르몬 ; 간성장인자 ; 섬유모세포성장인자 ; 프로락틴 ; 태반최유호르몬 ; 종양괴사인자-α 및 β; 뮬러-억제물질 ; 마우스고나도트로핀-관련펩티드 ; 인히빈 ; 엑티빈 ; 혈관내피성장인자 ; 인테그린 ; 트롬보포이에틴 (TPO); NGF-β와같은신경성장인자 ; 혈소판-성장인자 ; TGF-α 및 TGFβ와같은형질전환성장인자 (TGF); 인슐린-유사성장인자-I 및 -II; 에리트로포이에틴 (EPO); 골유도인자 ; 인터페론-α, -β, 및 -γ와같은인터페론 ; 대식세포-CSF(M-CSF) 와같은콜로니자극인자 (CSF); 백혈구-대식세포-CSF(GM-CSF); 및백혈구-CSF(G-CSF); IL-1, IL-lα, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL-10, IL-11, IL-12와같은인터루킨 (IL); TNF-α 또는 TNF-β와같은종양괴사인자 ; 및 LIF 및키트 (kit) 리간드 (KL) 를포함하는다른폴리펩티드인자를포함한다. 여기서사용된용어사이토킨은천연공급원또는재조합세포배양물으로부터의단백질및천연서열사이토킨과생물학적으로활성인등가물을포함한다. 본출원에사용된용어 " 전구약물 " 은모약물에비해종양세포에약한세포독성이있고, 효소적또는가수분해적으로활성화되거나또는더나은활성모형태로전환가능한제약상활성물질의전구체또는유도형태를의미한다. 예를들어, 문헌 [Wilman, "Prodrugs in Cancer Chemotherapy" Biochemical Society Transactions, 14, pp , 615th Meeting Belfast(1986)] 및 [Stella et al., "Prodrugs : A Chemical Approach to targeted drug Delivery, "Directed Drug Delivery, Borchardt et al., (ed.), pp , Humana Press(1985)] 참조. 본발명의전구약물은더좋은활성세포독성유리약물로전환될수있는포스페이트-포함전구약물, 티오포스페이트-포함전구약물, 술페이트-포함전구약물, 펩티드-포함전구약물, D-아미노산-변형전구약물, 글리코실화전구약물, β-락탐-포함전구약물, 임의적으로치환된페녹시아세트아미드- 포함전구약물또는임의적으로치환된페닐아세타미드-포함전구약물, 5-플루오로시토신및다른 5-플루오로우리딘전구약물을포함하나, 이들로제한되는것은아니다. 본발명에사용하기위해전구약물형태로유도될수있는세포독성약물의예는상기에서기재한바와같은화학요법제를포함하나, 이들로제한되는것은아니다. " 리포좀 " 은포유동물에서다양한유형의지질, 인지질및 ( 또는 ) 약물 ( 예를들어, 항-CD30, CD40, CD70 또는루이스 Y 항체및, 임의적으로, 화학요법제포함 ) 의수송에유용한계면활성제로구성되는작은소포이다. 리포좀성분은생물학적막의지질배열과유사하게, 일반적으로이중층형태로배열된다. 사용된용어 " 제품첨부설명서 " 는치료제품의사용에관한증세, 용법, 투여량, 투여, 금기사항및 ( 또는 ) 주의사항의정보를포함하는, 관례적으로치료제품의상업적포장에포함되는지침서를의미한다. " 단리된 " 핵산분자는항체핵산의천연공급원과보통관련되는하나이상의오염핵산분자로부터확인되고분리된핵산분자이다. 단리된핵산분자는천연에서발견된형태또는환경과다르다. 따라서단리된핵산분자는천연세포에존재하는핵산분자와구별된다. 하지만, 단리된핵산분자는예를들어, 핵산분자가천연세포의핵산분자와상이한염색체위치에있는경우에, 보통항체를발현하는세포내에포함되는핵산분자를포함한다. 표현 " 제어서열 " 은특정숙주생물에작동가능하게연결된코딩서열의발현에필요한 DNA 서열을의미한다. 예를들어, 원핵생물에적합한제어서열은촉진제, 임의적으로작동유전자서열, 및리보솜결합부위를포함한다. 진핵세포는촉진제, 폴리아데닐레화신호, 및인핸서를이용하는것으로공지되어있다. 핵산은또다른핵산서열에기능적관계가인정되었을때 " 작동가능하게연결 " 된다. 예를들어, 전서열또는

53 분비리더의 DNA가폴리펩티드분비에관여하는전단백질로발현된다면, 폴리펩티드에대한 DNA에작동가능하게연결되고 ; 프로모터또는인핸서가서열의전사에영향을미친다면, 코딩서열에작동가능하게연결되며 ; 또는리보솜결합부위가번역이용이하기위한위치에있다면, 코딩서열에작동가능하게연결된다. 일반적으로, " 작동가능하게연결된 " 은연결된 DNA 서열이분비리더에인접해있고, 리딩상에인접해있는것을의미한다. 하지만, 인핸서는인접해있지않다. 연결은알맞은제한부위에서라이게이션으로이루어질수있다. 만약이러한부위가존재하지않는다면, 합성올리고뉴클레오티드어댑터또는링커는통상적인실시에따라사용될수있다. [0374] [0375] 여기서사용된표현 " 세포 ", " 세포주 " 및 " 세포배양물 " 은호환가능하게사용되며이명칭모두가자손을포함한다. 따라서, 단어 " 형질전환 " 및 " 형질전환된세포 " 는전사의횟수에관계없이 1차종속세포및이로부터유도된배양물을포함한다. 고의적또는우연한돌연변이에의해, 모든자손이정확하게동일한 DNA 함량을가지고있지않을수도있다는것또한이해할수있다. 처음의형질전환된세포에서스크린된바와같은동일한기능또는생물학적활성을가진돌연변이체자손을포함한다. 별개의명칭으로의도되는곳에서, 이것은문맥상분명할것이다. 여기의 " 자가면역질환 " 은각각자신의조직에직접대항하여나타나는질환또는장애이거나또는상호분리또는이들의징후이거나또는여기서발생하는상태이다. 자가면역질환또는장애의예는관절염 ( 류마티스관절염, 연소성류마티스관절염, 골관절염, 건선성관절염, 및강직성척추염 ), 건선, 아토피피부염을포함한피부염 ; 만성자가면역두드러기를포함한만성특발성두드러기, 다발성근염 / 피부근염, 독성표피성괴사용해, 전신피부경화증및경화증, 염증성장질환 (IBD)( 크론병, 궤양성대장염 ) 과관련된반응, 및괴저성농피증의상호분리를수반한 IBD, 결절홍반, 1차경화성담관염, 및 ( 또는 ) 상공막염, 성인호흡곤란증후군 (ARDS) 을포함한호흡곤란증후군, 수막염, 과민증및알러지성비염과같은 IgE-매개성질환, 라스무센뇌염과같은뇌염, 포도막염, 현미경대장염및콜라겐성대장염과같은대장염, 막성 GN, 특발성막성 GN, 제I형및유형II을포함하는막성증식 GN(MPGN), 및빠르게진행되는 GN과같은사구체신염 (GN), 알러지상태, 습진, 천식, T 세포의침입및만성염증반응과관련되상태, 죽상경화증, 자가면역심근염, 백혈구유착결핍증, 피부성 SLE 와같은전신홍반성루푸스 (SLE), 루푸스 ( 신염, 뇌염, 소아성, 비-신장성, 원판양성, 탈모증 ), 연소성발병당뇨병, 척수-시각 MS와같은다중경화증 (MS), 알러지성뇌척수염, 시토카인및 T-림프구에의해매개된급성및지연된과민증과관련된면역반응, 결핵, 사르코이드증, 베게너육아종증을포함한육아종증, 무과립증, 혈관염 ( 큰혈관혈관염 ( 류마티스성다발성근육통및거대세포성 ( 다카야수 ) 동맥염포함 ), 중간혈관성혈관염 ( 카와사키병및결정성다발성동맥염포함 ), CNS 혈관염, 및처크스트라우스혈관염또는증후군 (CSS) 과같은 ANCA- 관련혈관염, 재생불량성빈혈, 쿰스양성빈혈, 다이아몬드블랙판빈혈, 자가면역성용혈성빈혈 (AIHA) 과같은면역성용혈성빈혈, 악성빈혈, 순수적혈구무형성증 (PRCA), 인자 Ⅶ 결핍증, 혈우병 A, 자가면역호중구감소증, 범혈구감소증, 백혈구감소증, 백혈구유출증과관련된질환, CNS 염증성장애, 다중기관손상증후군, 중증근무력증, 항원-항체복합체매개질환, 항-사구체기저막질환, 항-인지질항체증후군, 알러지성신경염, 베체트병, 캐슬만증후군, 굳패스쳐증후군, 람베르트-이톤근무력증후군, 레이노드증후군, 쇼그렌증후군, 스티븐-존슨증후군, 실질기관이식거부 ( 고패널반응항체역가에의한사전치료, 조직에의 IgA 축척, 및신장이식, 간이식, 장관이식, 심장이식등에의한거부포함 ), 이식편대숙주질환 (GVHD), 수포성유천포창, 천포창 ( 심상, 낙엽상, 및천포성점막유천포창포함 ), 자가면역다발성내분비병증, 라이터질환, 강직- 인간증후군, 면역복합체신염, IgM 다발성신경병증또는 IgM 매개신경병증, 특발성혈소판감소성자반증 (ITP), 혈전성혈소판감소성자반증 (TTP), 자가면역혈소판감소증을포함한혈소판감소증 ( 예를들어, 심근경색환자에서발달되는것과같음 ), 자가면역고환염및난소염을포함한고환및난소의자가면역질환, 1차갑상선기능저하증 ; 자가면역갑상선염, 만성갑상선엽 ( 하시모토갑상선염 ), 아급성갑상선염, 특발성갑상선기능저하증, 에디슨병, 그레이브병, 자가면역다발성선성증후군 ( 또는다발성선성내분비병증증후군 ), 소아성 IDDM 을포함하여, 인슐린의존성당뇨병 (IDDM) 으로불리는제I형당뇨병, 및쉬한증후군을포함한자가면역내분비질환 ; 자가면역간염, 림프성간질성폐렴 (HIV), 폐쇄성세기관지 ( 비이식 ) 와 NSIP, 길랑-바레증후군, 버거병 (IgA 신증 ), 1차담관성간경화증, 비열대스프루 ( 글루텐장병증 ), 상호분리포진상피부염의난치성스프루, 한랭글로불린혈증, 근위축성측삭경화증 (ALS; 루게릭병 ), 심장동맥질환, 자가면역내이질환 (AIED), 자가면역난청, 안간대간대성근경련증후군 (OMS), 난치성다발연골염과같은다발연골염, 폐포단백증, 아밀로이드증, 거대세포간염, 공막염, 불명 / 원인불명유의성의모노클로날감마글로불린병증 (MGUS), 말초신경병증, 부신생물증후군, 간질, 편두통, 부정맥, 근육장애와같은채널질환, 난청, 실명, 주기성마비증, 및 CNS의채널질환 ; 자폐증, 염증성심근병증, 및국성분절성사구체경화 (FSGS) 를포함하나, 이들로제한되는것은아니다

54 [0376] " 알킬 " 은표준, 2 급, 3 급또는시클릭탄소원소를포함하는 C l -C 18 탄화수소이다. 예로는메틸 (Me,-CH 3 ), 에틸 (Et,-CH 2 CH 3 ), 1-프로필 (n-pr, n-프로필, -CH 2 CH 2 CH 3 ), 2-프로필 (i-pr, i-프로필, -CH(CH 3 ) 2 ), 1-부틸 (n-bu, n- 부틸, -CH 2 CH 2 CH 2 CH 3 ), 2-메틸-1-프로필 (i-bu, i-부틸, -CH 2 CH(CH 3 ) 2 ), 2-부틸 (s-bu, s-부틸, -CH(CH 3 )CH 2 CH 3 ), 2-메틸-2-프로필 (t-bu, t-부틸, -C(CH 3 ) 3 ), 1-펜틸 (n-펜틸, -CH 2 CH 2 CH 2 CH 2 CH 3 ), 2-펜틸 (-CH(CH 3 )CH 2 CH 2 CH 3 ), 3-펜틸 (-CH(CH 2 CH 3 ) 2 ), 2-메틸-2-부틸 (-C(CH 3 ) 2 CH 2 CH 3 ), 3-메틸-2-부틸 (-CH(CH 3 )CH(CH 3 ) 2 ), 3-메틸-1-부틸 (- CH 2 CH 2 CH(CH 3 ) 2 ), 2-메틸-1-부틸 (-CH 2 CH(CH 3 )CH 2 CH 3 ), 1-헥실 (-CH 2 CH 2 CH 2 CH 2 CH 2 CH 3 ), 2-헥실 (-CH(CH 3 )CH 2 CH 2 CH 2 CH 2 ), 3-헥실 (-CH(CH 2 CH 3 )(CH 2 CH 2 CH 3 )), 2-메틸-2-펜틸 (-C(CH 3 ) 2 CH 2 CH 2 CH 3 ), 3-메틸-2-펜틸 (-CH (CH 3 )CH(CH 3 )CH 2 CH 3 ), 4- 메틸-2-펜틸 (-CH(CH 3 )CH 2 CH(CH 3 ) 2 ), 3-메틸-3-펜틸 (-C (CH 3 )(CH 2 CH 3 ) 2 ), 2-메틸-3-펜틸 (-CH(CH 2 CH 3 )CH(CH 3 ) 2 ), 2,3-디메틸-2-부틸 (-C (CH 3 ) 2 CH(CH 3 ) 2 ), 3,3-디메틸-2-부틸 (-CH(CH 3 )C(CH 3 ) 3 ) 이있다. [0377] " 알케닐 " 은하나이상의불포화부위, 즉, 탄소 - 탄소, sp 2 이중결합을갖는, 표준, 2 급, 3 급또는시클릭탄소 원소를함유하는 C 2 -C 18 탄화수소이다. 예로는에틸렌또는비닐 (-CH=CH 2 ), 알릴 (-CH 2 CH=CH 2 ), 시클로펜테닐 (- C 5 H 7 ) 및 5- 헥세닐 (-CH 2 CH 2 CH 2 CH 2 CH=CH 2 ) 이있으나, 이들로제한되는것은아니다. [0378] " 알키닐 " 은하나이상의불포화부위, 즉, 탄소 - 탄소, sp 삼중결합을갖는, 표준, 2 급, 3 급또는시클릭탄소 원소를함유하는 C 2 -C 18 탄화수소이다. 예로는아세틸레닉 (-C CH) 및프로파르길 (-CH 2 C CH) 을포함하나, 이들 로제한되는것은아니다. [0379] " 알킬렌 " 은탄소원자수 1-18 의포화된, 분지또는직쇄또는시클릭탄화수소기를의미하며, 모알칸의동일 한또는두개의상이한탄소원자로부터두개의수소원자의제거로유도된두개의 1 가기중심을가진다. 통 상적인알킬렌기는메틸렌 (-CH 2 -), 1,2- 에틸 (-CH 2 CH 2 -), 1,3- 프로필 (-CH 2 CH 2 CH 2 -), 1,4- 부틸 (-CH 2 CH 2 CH 2 CH 2 -) 등 을포함하나, 이들로제한되는것은아니다. [0380] [0381] " 알케닐렌 " 은탄소원자수 2-18의불포화된, 분지또는직쇄또는시클릭탄화수소기를의미하며, 모알켄의동일한또는두개의상이한탄소원자로부터두개의수소원자의제거로유도된두개의 1가기중심을가진다. 통상적인알케닐렌기는 1,2-에틸렌 (-CH CH-) 을포함하나, 이들로제한되는것은아니다. " 알키닐렌 " 은탄소원자수 2-18의불포화된, 분지또는직쇄또는시클릭탄화수소기를의미하며, 모알킨의동일한또는두개의상이한탄소원자로부터두개의수소원자의제거로유도된두개의 1가기중심을가진다. 통상적인알키닐렌기는아세틸렌 (-C C-), 프로파르길 (-CH 2 C C-), 및 4-펜티닐 (-CH 2 CH 2 CH 2 C CH-) 을포함하나, 이들로제한되는것은아니다. [0382] [0383] [0384] [0385] " 아릴 " 은모방향족고리계의하나의탄소원자로부터한개의수소원자의제거로유도된탄소원자수 6-20의 1가방향족탄화수소기를의미한다. 몇몇아릴기는예시적구조를 "Ar" 로나타낸다. 통상적아릴기는벤젠, 치환된벤젠, 나프탈렌, 안트라센, 비페닐, 등에서유도된기를포함하나, 이들로제한되는것은아니다. " 아릴알킬 " 은탄소원자 ( 통상적으로말단또는 sp 3 탄소원자 ) 에결합한수소원자중의하나가아릴기로대체된아시클릭알킬기를의미한다. 통상적아릴알킬기는벤질, 2-페닐에탄-1-일, 2-페닐에텐-1-일, 나프틸메틸, 2-나프틸에탄-1-일, 2-나프틸에텐-1-일, 나프토벤질, 2-나프토페닐에탄-1-일등을포함하나, 이들로제한되는것은아니다. 아릴알킬기는탄소원자 6 내지 20개를포함하며, 예를들어알카닐, 알케닐또는알키닐을포함하는, 아릴알킬기의알킬잔기는탄소원자 1 내지 6개이고아릴잔기는탄소원자 5 내지 14개이다. " 헤테로아릴알킬 " 탄소원자 ( 통상적으로말단또는 sp 3 탄소원자 ) 에결합한수소원자중의하나가헤테로아릴기로대체된아시클릭알킬기를의미한다. 통상적헤테로아릴알킬기는 2-벤즈이미다졸릴메틸, 2-푸릴에틸, 등을포함하나이들로제한되는것은아니다. 헤테로아릴알킬기는탄소원자 6 내지 20개를포함하며, 예를들어, 알카닐, 알케닐또는알키닐기를포함하는, 헤테로아릴알킬기의알킬잔기는탄소원자 1 내지 6개이고헤테로아릴잔기는탄소원자 5 내지 14개및 N, O, P, 및 S로부터선택된헤테로원자 1 내지 3개이다. 헤테로아릴알킬기의헤테로아릴잔기는 3 내지 7원의모노사이클 ( 탄소원자 2 내지 6개 ) 또는 7 내지 10원의비사이

55 클 ( 탄소원자 4 내지 9 개및 N, O, P, 및 S 로부터선택된헤테로원자 1 내지 3 개 ), 예를들어비시클로 [4,5], [5,5], [5,6], 또는 [6,6] 계일수있다. [0386] " 치환된알킬 ", " 치환된아릴 ", 및 " 치환된아릴알킬 " 은 1 개이상의수소원자가각각독립적으로치환기로대 체된각각의알킬, 아릴, 및아릴알킬을의미한다. 통상적치환기는 -X, -R, -O -, -OR, -SR, -S -, -NR 2, -NR 3, - =NR, -CX 3, -CN, -OCN, -SCN, -N=C=O, -NCS, -NO, -NO 2, =N 2, -N 3, NC(=O)R, -C(=O)R, -C(=O)NR 2, -S0 3, -SO3 H, - -S(=O) 2 R, -OS(=O) 2 OR, -S(=O) 2 NR, -S(=O)R, -OP(=O)(OR) 2, -P(=O)(OR) 2, -PO 3, -P03 H 2, -C(=O)R, -C(=O)X, - -C(=S)R, -CO 2 R, -CO 2, -C(=S)OR, -C(=O)SR, -C(=S)SR, -C(=O)NR2, -C(=S)NR 2, -C(=NR)NR 2 를포함하나, 이들로제한되는것은아니며, 여기서각각의 X는독립적으로할로겐 : F, Cl, Br 또는 I; 및각각의 R은독립적으로 -H, C 2 -C l8 알킬, C 6 -C 20 아릴, C 3 -C 4 헤테로사이클, 보호기또는전구약물잔기이다. 상기언급된바와같은알킬렌, 알케닐렌, 및알키닐렌기는또한유사하게치환될수있다. [0387] [0388] [0389] [0390] [0391] " 헤테로아릴 " 및 " 헤테로사이클 " 은하나이상의환원자가헤테로원자, 예를들어, 질소, 산소, 및황인고리계를의미한다. 헤테로사이클기는탄소원자 1 내지 20개및 N, O, P, 및 S로부터선택된헤테로원자 1 내지 3 개를포함한다. 헤테로사이클은 3 내지 7원의모노사이클 ( 탄소원자 2 내지 6개및 N, O, P, 및 S로부터선택된헤테로원자 1 내지 3개 ) 일수있거나, 또는 7 내지 10원의비사이클 ( 탄소원자 4 내지 9개및 N, O, P, 및 S로부터선택된헤테로원자 1 내지 3개 ), 예를들어 : 비시클로 [4,5], [5,5], [5,6], 또는 [6,6] 계일수있다. 헤테로사이클은문헌 [Paquette, Leo A.;"Principles of Modern Heterocyclic Chemistry" (W. A. Benjamin, New York, 1968)], 특히제1장, 제3장, 제4장, 제6장, 제7장, 및제9장 ; 문헌 ["The Chemistry of Heterocyclic Compounds, A series of monographs" (John Wiley & Sons, New York, 1950 to present)], 특히제13권, 제14권, 제16권, 제19권, 및제28권 ; 및문헌 [J. Am. Chem. Soc. (1960)82 : 5566] 에기재되어있다. 헤테로사이클의예는피리딜, 디히드로피리딜, 테트라히드로피리딜 ( 피페리딜 ), 티아졸릴, 테트라히드로티오페닐, 황산화테트라히드로티오페닐, 피리미디닐, 푸라닐, 티에닐, 피롤릴, 피라졸릴, 이미다졸릴, 테트라졸릴, 벤조푸라닐, 티아나프탈레닐, 인돌릴, 인돌레닐, 퀴놀리닐, 이소퀴놀리닐, 벤즈이미다졸릴, 피페라디닐, 4-피페리도닐, 피롤리디닐, 2-피롤리도닐, 피롤리닐, 테트라히드로푸라닐, 비스-테트라히드로푸라닐, 테트라히드로피라닐, 비스-테트라히드로피라닐, 테트라히드로퀴놀리닐, 테트라히드로이소퀴놀리닐, 데카히드로퀴놀리닐, 옥타히드로이소퀴놀리닐, 아조시닐, 트리아지닐, 6H-1,2,5-티아디아지닐, 2H,6H-1,5,2-디티아지닐릴, 티에닐, 티안트레닐, 피라닐, 이소벤조푸라닐, 크로메닐, 크산테닐, 페녹사티닐, 2H-피롤릴, 이소티아졸릴, 이속사졸릴, 피라지닐, 피리다지닐, 인돌리지닐, 이소인돌릴, 3H-인돌릴, 1H-인다졸릴, 푸리닐, 4H-퀴놀리지닐, 프탈라지닐, 나프티리디닐, 퀴녹살리닐, 퀴나졸리닐, 시놀리닐, 프테리디닐, 4aH-카르바졸릴, 카르바졸릴, β-카르볼리닐, 페난트리디닐, 아크리디닐, 피리미디닐, 페난트롤리닐, 페나지닐, 페노티아지닐, 푸라자닐, 페녹사지닐, 이소크로마닐, 크로마닐, 이미다졸리디닐, 이미다졸리닐, 피라졸리디닐, 피라졸리닐, 피페라지닐, 인돌리닐, 이소인돌리닐, 퀴누클리디닐, 모르폴리닐, 옥사졸리디닐, 벤조트리아졸릴, 벤즈이속사졸릴, 옥신돌릴, 벤족사졸리닐, 및이사티노일을포함하나, 이들로제한되는것은아니다. 헤테로사이클에결합하는탄소는예를들어, 피리딘의 2, 3, 4, 5, 또는 6번위치, 피리다진의 3, 4, 5, 또는 6 번위치, 피리미딘의 2, 4, 5, 또는 6번위치, 피라진의 2, 3, 5, 또는 6번위치, 푸란의 2, 3, 4, 또는 5번위치, 테트라히드로푸란, 티오푸란, 티오펜, 피롤또는테트라히드로피롤, 옥사졸의 2, 4, 또는 5번위치, 이미다졸또는티아졸, 이속사졸의 3, 4, 또는 5번위치, 피라졸, 또는이소티아졸, 아지리딘의 2 또는 3 번위치, 아제티딘의 2, 3, 또는 4번위치, 퀴놀린의 2, 3, 4, 5, 6, 7, 또는 8번위치, 이소퀴놀린의 1, 3, 4, 5, 6, 7, 또는 8번위치에결합하나, 이들로제한되는것은아니다. 더욱통상적으로는, 헤테로사이클에결합하는탄소는 2-피리딜, 3-피리딜, 4-피리딜, 5-피리딜, 6-피리딜, 3-피리다지닐, 4-피리다지닐, 5-피리다지닐, 6-피리다지닐, 2-피리미디닐, 4-피리미디닐, 5-피리미디닐, 6-피리미디닐, 2-피라지닐, 3- 피라지닐, 5-피라지닐, 6- 피라지닐, 2-티아졸릴, 4-티아졸릴, 또는 5-티아졸릴을포함한다. 헤테로사이클에결합하는질소는예를들어, 아지리딘의 1번위치, 아제티딘, 피롤, 피롤리딘, 2-피롤린, 3-피롤린, 이미다졸, 이미다졸리딘, 2-이미다졸린, 3-이미다졸린, 피라졸, 피라졸린, 2-피라졸린, 3-피라졸린, 피페리딘, 피페라진, 인돌, 인돌린, 1H-인다졸, 이소인돌, 또는이소인돌린의 2번위치, 모르폴린의 4번위치, 및

56 카르바졸, β- 카르볼린의 9 번위치에결합하나, 이들로제한되는것은아니다. 더욱통상적으로, 헤테로사이클 에결합하는질소는 1- 아지리딜, 1- 아제테딜, 1- 피롤릴, l- 이미다졸릴, 1- 피라졸릴, 및 1- 피페라디닐을포함한 다. [0392] [0393] " 카르보사이클 " 은모노시클로서탄소원자 3 내지 7개또는비시클로서탄소원자 1 내지 12개를가지는포화또는불포화환을의미한다. 모노시클릭카르보사이클은환원자 3 내지 6개, 더욱통상적으로환원자 5 내지 6 개를가진다. 비시클릭릭카르보사이클은예를들어, [4,5], [5,5], [5,6] 또는 [6,6] 시스템으로배열된환원자 7 내지 12개, 비시클로 [5,6] 또는 [6,6] 시스템으로배열된환원자 9 내지 10개를가진다. 모노시클릭카르보사이클의예는시클로프로필, 시클로부틸, 시클로펜틸, 1-시클로펜트-1-에닐, 1-시클로펜트-2-에닐, 1-시클로펜트-3-에닐, 시클로헥실, 1-시클로헥스-1-에닐, l-시클로헥스-2-에닐, 1-시클로헥스-3-에닐, 시클로펩틸, 및시클로옥틸을포함한다. " 링커 ", " 링커유닛 ", 또는 " 링크 (link)" 는공유결합을포함하는화학적잔기또는항체에약물잔기를공유적으로덧붙이는원자사슬을의미한다. 다양한실시양태에서, 링커는 LU로명기한다. 링커는알킬디일, 아릴디일, 헤테로아릴디일과같은이가기, 알킬옥시유닛이반복되는 -(CR 2 ) n O(CR 2 ) n -( 예를들어, 폴리에틸레녹시, PEG, 폴리메틸레녹시 ), 및알킬아미노 ( 예를들어, 폴리에틸렌아미노, 제프아민 (Jeffamine )) 와같은잔기 ; 및숙시네이트, 숙신아미드, 디글리콜레이트, 말로네이트, 및카프로아미드를포함하는이산에스테르및아미 드를포함한다. [0394] [0395] [0396] [0397] [0398] [0399] [0400] 용어 " 키랄 " 은거울상파트너에겹쳐질수없는성질을가진분자를의미하고, 반면용어 " 아키랄 " 은이들의거울상파트너에겹쳐질수있는분자를의미한다. 용어 " 입체이성질체 " 는동일한화학적구성을가지나, 공간의원자또는기의배열에대해서는상이한화합물을의미한다. " 부분입체이성질체 " 는두개이상의키랄성중심이있고이들분자가서로거울상이아닌입체이성질체를의미한다. 부분입체이성질체는상이한물리적성질, 예를들어, 융점, 비점, 스펙트럼성질, 및반응성을가진다. 부분입체이성질체의혼합물은전기영동및크로마토그래피과같은고분해능분석절차하에분리될수있다. " 거울상이성질체 " 는서로겹쳐질수없는거울상이있는두개의입체이성질체화합물을의미한다. 여기에사용된입체화학정의및규약은문헌 [S. P. Parker, Ed., McGraw-Hill Dictionary of Chemical Terms (1984) McGraw-Hill Book Company, New York]; 및문헌 [Eliel, E. and Wilen, S., Stereochemistry of Organic Compounds (1994) John Wiley & Sons, Inc. New York] 을따른다. 많은유기화합물은광학적활성형태를보이는데, 즉, 이들은평면-평광의평면을회전하는능력을가진다. 광학적활성화합물을기재함에있어서, 접두사 D 및 L, 또는 R 및 S는키랄중심에대해분자의절대적배위를표시하기위해사용된다. 접두사 d 및 l 또는 (+) 및 (-) 은화합물의평면-평광회전표시를나타내기위해사용되는데, (-) 또는 l은화합물이좌선성임을의미한다. 화합물접두사 (+) 또는 d는우선성이다. 주어진화학적구조에서, 이입체이성질체는이들이서로거울상이라는것만제외하고는동일하다. 특정입체이성질체는또한거울상이성질체로불릴수있고, 이러한이성질체의혼합물은종종거울상이성질체혼합물로불린다. 거울상이성질체의 50:50 혼합물은라세미혼합물또는라세미체로불리는데, 이들은화학적반응또는과정에있어, 임의의입체선택성또는입체특이성도없었던경우가있을수있다. 용어 " 라세미혼합물 " 및 " 라세미체 " 는광학활성이없는, 두개의거울상이성질체종의등몰혼합물을의미한다. " 환자 " 의예는인간, 래트, 마우스, 기니아피그, 원숭이, 돼지, 염소, 암소, 말, 개, 고양이, 새및가금류를포함하나, 이들로제한되는것은아니다. 예시적실시양태에서, 환자는인간이다. " 아릴 " 은카르보시클릭방향족기를의미한다. 아릴기의예는페닐, 나프틸, 안트라세닐을포함하나, 이들로제한되는것은아니다. 카르보시클릭방향족기또는헤테로시클릭방향족기는비치환될수있거나또는 -C l - C 8 알킬, -O-(C l -C 8 알킬 ), - 아릴, -C(O)R', -OC(O)R', -C(O)OR', -C(O)NH 2, -C(O)NHR', -C(O)N(R') 2 -NHC(O)R', -S(O) 2 R', -S (O)R', -OH, - 할로겐, -N 3, -NH 2, -NH(R'), -N(R') 2 및 -CN 를포함 ( 각각의 R' 는 H, -C l -C 8 알킬및 아릴로부터독립적으로선택됨 ) 하나, 이들로제한되는것은아닌하나이상기로치환될수있다. [0401] 여기서사용된용어 "C 1 -C 8 알킬 " 은탄소원자 1 내지 8 개를가지는직쇄또는분지된, 포화또는불포화탄화수 소를의미한다. 대표적인 "C 1 -C 8 알킬 " 기는 - 메틸, - 에틸, -n- 프로필, -n- 부틸, -n- 펜틸, -n- 헥실, -n- 펩틸,

57 -n-옥틸, -n-노닐및 -n-데실을포함하나, 이들로제한되는것은아니며, 반면, 분지된 C l -C 8 알킬은 -이소프로필, -이차-부틸, -이소부틸, -삼차-부틸, -이소펜틸, 2-메틸부틸을포함하나, 이들로제한되는것은아니며, 불포화된 C 1 -C 8 알킬은 -비닐, -알릴, -1-부테닐, -2-부테닐, -이소부틸레닐, -1-펜테닐, -2-펜테닐, -3-메틸- 1-부테닐, -2-메틸-2-부테닐, -2,3-디메틸-2-부테닐, I-헥실, 2-헥실, 3-헥실, -아세틸레닐, -프로피닐, -1-부티닐, -2-부티닐, -1-펜티닐, -2-펜티닐, -3-메틸-1-부티닐, 메틸, 에틸, 프로필, 이소프로필, n-부틸, 이소부틸, 이차-부틸, 삼차-부틸, n-펜틸, 이소펜틸, 네오펜틸, n-헥실, 이소헥실, 2-메틸펜틸, 3-메틸펜틸, 2,2-디메틸부틸, 2,3-디메틸부틸, 2,2-디메틸펜틸, 2,3-디메틸펜틸, 3,3-디메틸펜틸, 2,3,4-트리메틸펜틸, 3-메틸헥실, 2,2-디메틸헥실, 2,4-디메틸헥실, 2,5-디메틸헥실, 3,5-디메틸헥실, 2,4-디메틸펜틸, 2-메틸헵틸, 3-메틸헵틸, n-헵틸, 이소헵틸, n-옥틸, 및이소옥틸을포함하나, 이들로제한되는것은아니다. C 1 -C 8 알킬기는비치환되거나, 또는 C l -C 8 알킬, -0-(C1-C 8 알킬 ), -아릴, -C(O)R', -OC(O)R', -C(O)OR', -C(O)NH 2, -C(O)NHR', -C(O)N(R') 2 -NHC(O)R', -SO 3 R', -S(O) 2 R', -S(O)R', -OH, -할로겐, -N 3, -NH 2, -NH(R'), -N(R') 2 및 -CN을포함 ( 여기서각각의 R' 는 H, -C 1 -C 8 알킬및아릴로부터독립적으로선택됨 ) 하나, 이들로제한되는것은아닌하나이상기로치환될수있다. [0402] "C 3 -C 8 카르보사이클 " 은 3-, 4-, 5-, 6-, 7- 또는 8- 원자포화또는불포화비 - 방향족카르보시클릭환이다. 대표적인 C 3 -C 8 카르보사이클은 -시클로프로필, -시클로부틸, -시클로펜틸, -시클로펜타디에닐, -시클로헥실, - 시클로헥세닐, -1,3-시클로헥사디에닐, -1,4-시클로헥사디에닐, -시클로헵틸, -1,3-시클로헵타디에닐, -1,3,5- 시클로헵타트리에닐, -시클로옥틸, 및 -시클로옥타디에닐을포함하나, 이들로제한되는것은아니다. C 3 -C 8 카르보사이클기는비치환될수있고 -C l -C 8 알킬, -O-(C l -C 8 알킬 ), -아릴, -C(O)R', -OC(O)R', -C(O)OR', -C(O)NH 2, -C(O)NHR', -C(O)N(R') 2 -NHC(O)R', -S(0) 2 R', -S(O)R', -OH, -할로겐, -N 3, -NH 2, -NH(R'), -N(R') 2 및 -CN를포함 ( 각각의 R' 는 H, -C l -C 8 알킬및아릴로부터독립적으로선택됨 ) 하나, 이들로제한되는것은아닌하나이상기로치환될수있다. [0403] "C 3 -C 8 카르보시클로 " 는카르보사이클기의수소원자중의하나가결합으로대체된상기정의된 C 3 -C 8 카르보사 이클기를의미한다. [0404] "C l -C 10 알킬렌 " 은화학식 -(CH 2 ) 의직쇄, 포화탄화수소기이다. C l -C 10 알킬렌의예는메틸렌, 에틸렌, 프 로필렌, 부틸렌, 펜틸렌, 헥실렌, 헵틸렌, 옥틸렌, 노닐렌및데칼렌을포함한다. [0405] " 아릴렌 " 은다음의구조로보여지는바와같이두개의공유결합은가지며오르쏘, 메타, 또는파라배위로존 재할수있는아릴기이며, 여기서, 페닐기는비치환되거나, 또는 -C l -C 8 알킬, -0-(C 1 -C 8 알킬 ), - 아릴, -C(O)R', -OC(O)R', -C(O)OR', -C(O)NH 2, -C(O)NHR', -C(O)N(R') 2 -NHC(O)R', -S(O) 2 R', -S(O)R',-OH, - 할로겐, -N 3, -NH 2, -NH(R'), -N(R') 2 및 -CN 을포함 ( 각각의 R' 는 H, -C l -C 8 알킬및아릴로부터독립적으로 선택됨 ) 하나, 이들로제한되는것은아닌 4 개이하의기로치환될수있다. [0406] [0407] "C 3 -C 8 헤테로사이클 " 은고리탄소원자 1 개내지 4 개가 O, S, 및 N 으로이루어지는군의헤테로원자로독립적으 로대체된방향족또는비방향족 C 3 -C 8 카르보사이클을의미한다. C 3 -C 8 헤테로사이클의대표적인예는벤조푸라닐, 벤조티오펜, 인돌릴, 벤조피라졸릴, 쿠마리닐, 이소퀴놀리닐, 피롤릴, 티오페닐, 푸라닐, 티아졸릴, 이미다졸릴, 피라졸릴, 트리아졸릴, 퀴놀리닐, 피리미디닐, 피리디닐, 피리도닐, 피라지닐, 피리다지닐, 이소티아졸릴, 이속사졸릴및테트라졸릴을포함하나, 이들로제한되는것은아니다. C 3 -C 8 헤테로사이클은비치환되거나, 또는 -C l -C 8 알킬, -O-(C 1- C 8 알킬 ),-아릴, -C(O)R', -OC(O)R', -C(O)OR', -C(O)NH 2, -C(O)NHR', -C(O)N(R') 2 -NHC(O)R', -S(0) 2 R', -S(O)R', -OH, -할로겐, -N 3, -NH 2, -NH(R'), -N( R') 2 및 -CN을포함 ( 각각의

58 R' 는 H, -C l -C 8 알킬및아릴로부터독립적으로선택됨 ) 하나, 이들로제한되는것은아닌 7 개이하의기로치환 될수있다. [0408] "C 3 -C 8 헤테로시클로 " 는헤테로사이클기의수소원자중의하나가결합으로대체된상기정의된 C 3 -C 8 헤테로사 이클기를의미한다. C 3 -C 8 헤테로시클로는비치환되거나, 또는 -C l -C 8 알킬, -O-(C-C 8 알킬 ), -아릴, -C(O)R', -OC(O)R', -C(O)OR', -C(O)NH 2, -C(O)NHR', -C(O)N(R') 2 -NHC(O)R', -S(0) 2 R', -S(O)R', -OH, -할로겐, -N 3, -NH 2, -NH(R'), -N(R') 2 및 -CN을포함 ( 각각의 R' 는 H, -C l -C 8 알킬및아릴로부터독립적으로선택됨 ) 하나, 이들로제한되는것은아닌 6개이하의기로치환될수있다. [0409] [0410] [0411] [0412] [0413] [0414] [0415] [0416] " 예시적인화합물 " 은약물화합물또는약물-링커화합물이다. " 예시적인접합체 " 는약물-리간드접합체또는약물-링커-리간드접합체로부터분해가능한약물단위를갖는약물-리간드접합체이다. 특정실시양태에서, 예시적인화합물및예시적인접합체는단리되거나또는정제된형태로존재한다. 여기서사용된 " 단리된 " 은 (a) 식물또는동물세포또는세포물과같은천연공급원, 또는 (b) 합성유기화학반응혼합물의다른성분으로부터분리되는것을의미한다. 여기서사용된 " 정제된 " 은, 단리된경우단리물이단리물 95 중량 % 이상의예시적인화합물또는예시적인접합체, 및또다른측면에서 98 중량 % 이상의예시적인화합물또는예시적인접합체를포함하는것을의미한다. " 히드록실보호기 " 의예는메톡시메틸에테르, 2-메톡시에톡시메틸에테르, 테트라히드로피라닐에테르, 벤질에테르, p-메톡시벤질에테르, 트리메틸실릴에테르, 트리에틸실릴에테르, 트리이소프로필실릴에테르, t-부틸디메틸실릴에테르, 트리페닐메틸실릴에테르, 아세테이트에스테르, 치환된아세테이트에스테르, 피볼레이트, 벤조에이트, 메탄술포네이트및 p-톨루엔술포네이트를포함하나, 이들로제한되는것은아니다. " 이탈기 " 는또다른작용기에의해치환될수있는작용기를의미한다. 이러한이탈기는당업계에잘알려져있으며, 예는할로겐화물 ( 예, 염소, 브롬, 요오드 ), 메탄술포닐 ( 메실 ), p-톨루엔술포닐 ( 토실 ), 트리플루오로메틸술포닐 ( 트리플레이트 ), 및트리플루오로메틸술포네이트를포함하나, 이들로제한되는것은아니다. 여기서사용된문구 " 제약상허용되는염 " 은예시적인화합물또는예시적인접합체의제약상허용되는유기또는무기염을의미한다. 예시적인화합물또는예시적인접합체는하나이상의아미노기를포함하고, 따라서산부가염은상기아미노기와함께형성될수있다. 예시적염은술페이트, 시트레이트, 아세테이트, 옥살레이트, 염소, 브롬, 요오드, 니트레이트, 비술페이트, 포스페이트, 산포스페이트, 이소니코티네이트, 락테이트, 살리실레이트, 산시트레이트, 타르트레이트, 올리에이트, 타네이트, 판토테네이트, 비타르트레이트, 아스코르베이트, 숙시네이트, 말리에이트, 겐티시네이트, 푸마레이트, 글루코네이트, 글루쿠로네이트, 사카레이트, 포르메이트, 벤조에이트, 글루타메이트, 메탄술포네이트, 에탄술포네이트, 벤젠술포네이트, p-톨루엔술포네이트, 및파모에이트 ( 즉, 1,1'-메틸렌-비스-(2-히드로시-3- 나프토에이트 )) 염을포함하나, 이들로제한되는것은아니다. 제약상허용되는염은아세테이트이온, 숙시네이트이온또는다른반대이온과같이또다른분자의함유물에관여할수있다. 반대이온은모화합물의전하를안정화시키는유기또는무기잔기일수있다. 또한, 제약상허용되는염은이것의구조에하나이상의전하를띈원자를가질수있다. 다가전하를띈원자가제약상허용되는염의일부인경우에는다가반대이온을가질수있다. 따라서, 제약상허용되는염은하나이상의전하를띈원자및 ( 또는 ) 하나이상의반대이온을가질수있다. " 제약상허용되는용매화물 " 또는 " 용매화물 " 은하나이상의용매분자와본발명의화합물과의결합, 예를들어, 예시적인화합물또는예시적인접합체를의미한다. 제약상허용되는용매화물을형성하는용매의예는물, 이소프로판올, 에탄올, 메탄올, DMSO, 에틸아세테이트, 아세트산, 및에탄올아민을포함하나, 이들로제한되는것은아니다. 다음의약어는여기서사용되며나타낸의미를가진다 : AE는오리스타틴 E, Boc는 N-(t-부톡시카르보닐 ), cit는시트룰린, dap는돌라프로인, DCC는 1,3-디시클로헥실카르보디이미드, DCM은디클로로메탄, DEA는디에틸아민, DEAD는디에틸아조디카르복실레이트, DEPC는디에틸포스포릴시아니데이트, DIAD는디이소프로필아조디카르복실레이트, DIEA는 N,N-디이소프로필에틸아민, dil는돌라이소루신, DMAP는 4-디메틸아미노피리딘, DME는에틸렌글리콜디메틸에테르 ( 또는 1,2-디메톡시에탄 ), DMF는 N,N-디메틸포름아미드, DMSO는디메틸술폭사이드, doe는돌라페닌, dov는 N,N-디메틸발린, DTNB는 5,5'-디티오비스 (2-니트로벤조산), DTPA는디에틸렌트리아민펜타아세트산, DTT는디티오트레이톨, EDCI는 1-(3-디메틸아미노프로필 )-3-에틸카르보디이미드염화수소, EEDQ는 2-에톡시

59 -1-에톡시카르보닐-1,2-디히드로퀴놀린, ES-MS는전자분사질량분석법, EtOAc는에틸아세테이트, Fmoc는 N- (9-플루오레닐메톡시카르보닐 ), gly는글리신, HATU는 O-(7-아자벤조트리아졸-1-일 )-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄헥사플루오로포스페이트, HOBt는 1-히드록시벤조트리아졸, HPLC는고압액체크로마토그래피, ile는이소루신, lys는리신, MeCN(CH 3 CN) 는아세토니트릴, MeOH는메탄올, Mtr는 4-아니실디페닐메틸 ( 또는 4-메톡시트리틸 ), nor는 (IS,2R)-(+)-노르에페드린, PAB는 p-아미노벤질, PBS는인산염완충염수 (ph 7.4), PEG는폴리에틸렌글리콜, Ph는페닐, Pnp는 p-니트로페닐, MC는 6-말레이미드카프로일, phe는 L-페닐알라닌, PyBrop는브로모트리스-피롤리디노포스포늄헥사플루오로포스페이트, SEC는크기별배제크로마토그래피, Su 는숙신이미드, TBTU는 O-벤조트리아졸-1-일-N,N,N,N-테트라메틸우로늄테트라플루오로보레이트, TFA는트리플루오로아세트산, TLC는얇은막크로마토그래피, UV는자외선, 및 val는발린이다. [0417] 다음의링커약어들이여기서사용되고, 표시된대로정의된다 : Val Cit 는프로테아제분해가능링커내디펩티 드부위인, 발린 - 시트룰린 ; PAB 는 p- 아미노벤질카르바모일 ; (Me)vc 는링커펩티드결합이개질되어카텝신 B 에 의한절단을방지하는 N- 메틸 - 발린시트룰린 ; MC(PEG) 6 -OH 는말레이미도카프로일 - 폴리에틸렌글리콜 ; SPP 는 N- 숙신이미딜 4-(2- 피리딜티오 ) 펜타노에이트이고 ; SMCC 는 N- 숙신이미딜 4-(N- 말레이미도메틸 ) 시클로헥산 -1 카르 복실레이트이다. [0418] [0419] [0420] [0421] [0422] [0423] [0424] [0425] [0426] " 치료하다 " 또는 " 치료 " 라는용어는, 문맥에의해다르게표시되지않는한, 치료적처리및방지적또는예방적수단모두를의미하며, 여기서그목적은암의발생또는전파와같은원치않는생리학적변화또는장애를방지또는감속 ( 감소 ) 시키고자하는것이다. 본발명의목적에있어, 유익하거나바람직한임상결과들은감지가능하든, 감지가능하지않든간에, 증상의경감, 질환정도의감소, 안정화된 ( 즉, 악화되지않는 ) 질환상태, 질환진행의지연또는감속, 질환상태의개선또는완화, 및차도 ( 부분적또는전체적 ) 를포함하지만이들에한정되지는않는다. " 치료 " 는또한, 치료를받지않은경우의, 예상되는생존에비해연장되는생존을의미할수있다. 치료를필요로하는자들은그상태또는장애를이미갖고있는자들뿐아니라그상태또는장애를갖기쉬운자들또는그상태또는장애가예방되어야하는자들을포함한다. 암과관련하여, " 치료하는 " 이라는용어는종양세포, 암세포, 또는종양의성장방지 ; 종양세포또는암세포의복제방지, 전체적인종양적하의완화또는암성세포개수의감소, 및그질환과관련된하나이상의증상들의개선중일부또는전부를포함한다. 자가면역질환과관련하여, " 치료하는 " 이라는용어는자가면역항체를생성하는세포들을포함하지만이들에한정되지는않는자가면역질환상태와관련된세포의복제방지, 자가면역-항체적하의완화및하나이상의자가면역질환증상들의개선중일부또는전부를포함한다. 감염성질환과관련하여, " 치료하는 " 이라는용어는감염성질환을야기하는병원균의성장, 배가또는복제의방지및하나이상의감염성질환증상들의개선중일부또는전부를포함한다. 다음의세포독성약물약어들이여기서사용되고표시된대로정의된다 : MMAE는모노-메틸아우리스타틴 E(MW 718); MMAF는 N-메틸발린-발린-돌라이소류신 -돌라프로인-페닐알라닌(MW 731.5); MMAF-DMAEA는 C-말단페닐알라닌에아미드연결된 DMAEA( 디메틸아미노에틸아민 ) 를갖는 MMAF (MW 801.5); MMAF-TEG는페닐알라닌에에스테르화된테트라에틸렌글리콜을갖는 MMAF; MMAF-NtBu는 MMAF의 C-말단에아미드로서부착된 N-t-부틸 ; AEVB는 AE 의 C-말단을통해연결된산에불안정한링커인아우리스타틴 E 발레릴벤질히드라존 (MW 732) 이고 ; AFP는아우리스타틴 F의 C-말단페닐알라닌을갖는 p-페닐렌디아민의모노아미드 (MW 732) 이다. 본발명의화합물 1 화학식 (Ia) 의화합물한측면에서, 본발명은하기화학식 Ia를갖는약물-링커-리간드접합체또는그의제약상허용되는염또는용매화물을제공한다. < 화학식 Ia> [0427] [0428] 상기화학식중 L- 은리간드단위 ;

60 [0429] [0430] [0431] [0432] [0433] [0434] [0435] [0436] [0437] [0438] -A a -W w -Y y -는링커단위 (LU); -A-는스트레처단위 ; a는 0 또는 1; 각각의 -W-는독립적으로아미노산단위 ; w는 0 내지 12 범위의정수 ; -Y-는스페이서단위 ; y는 0, 1 또는 2; p는 1 내지약 20 범위이고 ; -D는하기화학식 D E 및 D F 를갖는약물단위이며 : < 화학식 D E > [0439] [0440] < 화학식 D F > [0441] [0442] [0443] 상기식중에서, 각각의위치에서독립적으로 : R 2 는 H 및 C 1 -C 8 알킬로부터선택되고 ; [0444] R 3 은 H, C 1 -C 8 알킬, C 3 -C 8 카르보사이클, 아릴, C 1 -C 8 알킬 - 아릴, C 1 -C 8 알킬 -(C 3 -C 8 카르보사이클 ), C 3 -C 8 헤테로 사이클및 C 1 -C 8 알킬 -(C 3 -C 8 헤테로사이클 ) 로부터선택되고 ; [0445] R 4 는 H, C 1 -C 8 알킬, C 3 -C 8 카르보사이클, 아릴, C 1 -C 8 알킬 - 아릴, C 1 -C 8 알킬 -(C 3 -C 8 카르보사이클 ), C 3 -C 8 헤테로 사이클및 C 1 -C 8 알킬 -(C 3 -C 8 헤테로사이클 ) 로부터선택되고 ; [0446] [0447] R 5 는 H 및메틸로부터선택되거나 ; 또는 R 4 및 R 5 가결합하여카르보시클릭고리를형성하고, 화학식 -(CR a R b ) n -( 여기서, R a 및 R b 는독립적으로 H, C 1 -C 8 알킬및 C 3 -C 8 카르보시클로부터선택되고, n 은 2, 3, 4, 5 및 6 으로부터선택됨 ) 을가지며 ; [0448] R 6 은 H 및 C 1 -C 8 알킬로부터선택되고 ; [0449] R 7 은 H, C 1 -C 8 알킬, C 3 -C 8 카르보사이클, 아릴, C 1 -C 8 알킬 - 아릴, C 1 -C 8 알킬 -(C 3 -C 8 카르보사이클 ), C 3 -C 8 헤테로 사이클및 C 1 -C 8 알킬 -(C 3 -C 8 헤테로사이클 ) 로부터선택되고 ; [0450] R 8 은각각독립적으로 H, OH, C 1 -C 8 알킬, C 3 -C 8 카르보사이클및 O-(C 1 -C 8 알킬 ) 로부터선택되고 ;

61 [0451] R 9 는 H 및 C 1 -C 8 알킬로부터선택되고 ; [0452] R 10 은아릴또는 C 3 -C 8 헤테로시클로부터선택되고 ; [0453] Z 는 O, S, NH, 또는 NR 12 ( 여기서, R 12 는 C 1 -C 8 알킬임 ) 이고 ; [0454] [0455] [0456] R 11 은 H, C 1 -C 20 알킬, 아릴, C 3 -C 8 헤테로사이클, -(R 13 O) m -R 14, 또는 -(R 13 O) m -CH(R 15 ) 2 로부터선택되고 ; m 은 범위의정수이고 ; R 13 은 C 2 -C 8 알킬이고 ; [0457] R 14 는 H 또는 C 1 -C 8 알킬이고 ; [0458] R 15 는각각독립적으로 H, COOH, -(CH 2 ) n -N(R 16 ) 2, -(CH 2 ) n -SO 3 H, 또는 -(CH 2 ) n -SO 3 -C 1 -C 8 알킬이고 ; [0459] R 16 은각각독립적으로 H, C 1 -C 8 알킬, 또는 -(CH 2 ) n -COOH 이고 ; [0460] R 18 은 -C(R 8 ) 2 -C(R 8 ) 2 - 아릴, -C(R 8 ) 2 -C(R 8 ) 2 -(C 3 -C 8 헤테로사이클 ), 및 -C(R 8 ) 2 -C(R 8 ) 2 -(C 3 -C 8 카르보사이클 ) 로부터 선택되고 ; 및 [0461] [0462] [0463] n은 0 내지 6 범위의정수이다. 다른실시양태에서, 본발명은하기화학식 Ib를갖는약물화합물또는그의제약상허용되는염또는용매화물을제공한다. < 화학식 Ib> [0464] [0465] [0466] 상기식중에서, R 2 는수소및 -C 1 -C 8 알킬로부터선택되고 ; [0467] R 3 은수소, -C 1 -C 8 알킬, -C 3 -C 8 카르보사이클, 아릴, -C 1 -C 8 알킬 - 아릴, -C 1 -C 8 알킬 -(C 3 -C 8 카르보사이클 ), -C 3 - C 8 헤테로사이클및 -C 1 -C 8 알킬 -(C 3 -C 8 헤테로사이클 ) 로부터선택되고 ; [0468] R 4 는수소, -C 1 -C 8 알킬, -C 3 -C 8 카르보사이클, - 아릴, -C 1 -C 8 알킬 - 아릴, -C 1 -C 8 알킬 -(C 3 -C 8 카르보사이클 ), -C 3 - C 8 헤테로사이클및 -C 1 -C 8 알킬-(C 3 -C 8 헤테로사이클 ) 로부터선택되고 ; R 5 는 -H 및 -메틸로부터선택되거나 ; 또는 R 4 및 R 5 는결합하여화학식 -(CR a R b ) n - ( 여기서, R a 및 R b 는독립적으로 -H, -C 1 -C 8 알킬및 -C 3 -C 8 카르보시클로부터선택되고, n은 2, 3, 4, 5 및 6로부터선택됨 ) 을가지며이들이부착된탄소원자와함께고리를형성하고 ; [0469] R 6 은 H 및 -C 1 -C 8 알킬로부터선택되고 ; [0470] R 7 은 H, -C 1 -C 8 알킬, -C 3 -C 8 카르보사이클, 아릴, -C 1 -C 8 알킬 - 아릴, -C 1 -C 8 알킬 -(C 3 -C 8 카르보사이클 ), -C 3 -C

62 헤테로사이클및 -C 1 -C 8 알킬 -(C 3 -C 8 헤테로사이클 ) 로부터선택되고 ; [0471] R 8 은각각독립적으로 H, -OH, -C 1 -C 8 알킬, -C 3 -C 8 카르보사이클및 -O-(C 1 -C 8 알킬 ) 로부터선택되고 ; [0472] R 9 는 H 및 -C 1 -C 8 알킬로부터선택되고 ; [0473] R 10 은아릴기또는 -C 3 -C 8 헤테로시클로부터선택되고 ; [0474] Z 는 -O-, -S-, -NH-, 또는 -NR 12 ( 여기서, R 12 는 C 1 -C 8 알킬임 ) 이고 ; [0475] [0476] [0477] R 11 은 H, C 1 -C 20 알킬, 아릴, -C 3 -C 8 헤테로사이클, -(R 13 O) m -R 14, 또는 -(R 13 O) m -CH(R 15 ) 2 로부터선택되고 ; m 은 범위의정수이고 ; R 13 은 -C 2 -C 8 알킬이고 ; [0478] R 14 는 H 또는 -C 1 -C 8 알킬이고 ; [0479] R 15 는각각독립적으로 H, -COOH, -(CH 2 ) n -N(R 16 ) 2, -(CH 2 ) n -SO 3 H, 또는 -(CH 2 ) n -SO 3 -C 1 -C 8 알킬이고 ; [0480] [0481] [0482] [0483] R 16 은각각독립적으로 H, -C 1 -C 8 알킬, 또는 -(CH 2 ) n -COOH이고; n은 0 내지 6 범위의정수이다. 또다른실시양태에서, 본발명은하기화학식 Ia' 를갖는약물-링커-리간드접합체또는제약상허용되는염또는용매화물을제공한다. < 화학식 Ia'> [0484] [0485] [0486] [0487] [0488] [0489] [0490] [0491] [0492] [0493] [0494] 상기화학식중 Ab는항체, A는스트레처단위, a는 0 또는 1, 각각의 W는독립적으로아미노산단위, w는 0 내지 12 범위의정수, Y는스페이서단위, y는 0, 1 또는 2, p는 1 내지약 20 범위이고, D는하기화학식 D E 및 D F 로부터선택되는약물잔기이며 : < 화학식 D E > [0495]

63 [0496] < 화학식 D F > [0497] [0498] [0499] 상기식중에서, 각각의위치에서독립적으로 : R 2 는 H 및 C 1 -C 8 알킬로부터선택되고 ; [0500] R 3 은 H, C 1 -C 8 알킬, C 3 -C 8 카르보사이클, 아릴, C 1 -C 8 알킬 - 아릴, C 1 -C 8 알킬 -(C 3 -C 8 카르보사이클 ), C 3 -C 8 헤테로 사이클및 C 1 -C 8 알킬 -(C 3 -C 8 헤테로사이클 ) 로부터선택되고 ; [0501] R 4 는 H, C 1 -C 8 알킬, C 3 -C 8 카르보사이클, 아릴, C 1 -C 8 알킬 - 아릴, C 1 -C 8 알킬 -(C 3 -C 8 카르보사이클 ), C 3 -C 8 헤테로 사이클및 C 1 -C 8 알킬 -(C 3 -C 8 헤테로사이클 ) 로부터선택되고 ; [0502] [0503] R 5 는 H 및메틸로부터선택되거나 ; 또는 R 4 및 R 5 가결합하여카르보시클릭고리를형성하고, 화학식 -(CR a R b ) n - ( 여기서, R a 및 R b 는독립적으로 H, C 1 -C 8 알킬및 C 3 -C 8 카르보시클로부터선택되고, n 은 2, 3, 4, 5 및 6 으로부터선택됨 ) 을가지며 ; [0504] R 6 은 H 및 C 1 -C 8 알킬로부터선택되고 ; [0505] R 7 은 H, C 1 -C 8 알킬, C 3 -C 8 카르보사이클, 아릴, C 1 -C 8 알킬 - 아릴, C 1 -C 8 알킬 -(C 3 -C 8 카르보사이클 ), C 3 -C 8 헤테로 사이클및 C 1 -C 8 알킬 -(C 3 -C 8 헤테로사이클 ) 로부터선택되고 ; [0506] R 8 은각각독립적으로 H, OH, C 1 -C 8 알킬, C 3 -C 8 카르보사이클및 O-(C 1 -C 8 알킬 ) 로부터선택되고 ; [0507] R 9 는 H 및 C 1 -C 8 알킬로부터선택되고 ; [0508] R 10 은아릴또는 C 3 -C 8 헤테로시클로부터선택되고 ; [0509] Z 는 O, S, NH, 또는 NR 12 ( 여기서, R 12 는 C 1 -C 8 알킬임 ) 이고 ; [0510] [0511] [0512] R 11 은 H, C 1 -C 20 알킬, 아릴, C 3 -C 8 헤테로사이클, -(R 13 O) m -R 14, 또는 -(R 13 O) m -CH(R 15 ) 2 로부터선택되고 ; m 은 범위의정수이고 ; R 13 은 C 2 -C 8 알킬이고 ; [0513] R 14 는 H 또는 C 1 -C 8 알킬이고 ; [0514] R 15 는각각독립적으로 H, COOH, -(CH 2 ) n -N(R 16 ) 2, -(CH 2 ) n -SO 3 H, 또는 -(CH 2 ) n -SO 3 -C 1 -C 8 알킬이고 ; [0515] R 16 은각각독립적으로 H, C 1 -C 8 알킬, 또는 -(CH 2 ) n -COOH 이고 ; [0516] R 18 은 -C(R 8 ) 2 -C(R 8 ) 2 - 아릴, -C(R 8 ) 2 -C(R 8 ) 2 -(C 3 -C 8 헤테로사이클 ), 및 -C(R 8 ) 2 -C(R 8 ) 2 -(C 3 -C 8 카르보사이클 ) 로부터 선택되고 ;

64 [0517] [0518] [0519] [0520] [0521] [0522] [0523] [0524] [0525] [0526] [0527] [0528] [0529] [0530] [0531] [0532] [0533] [0534] [0535] [0536] [0537] [0538] [0539] [0540] [0541] [0542] [0543] [0544] n은 0 내지 6 범위의정수이다. Ab는하나이상의약물단위에공유적으로부착되는임의의항체이다. Ab는 CD30, CD40, CD70, 루이스 Y 항원에결합하는항체를포함한다. 다른실시양태에서, Ab는 ErbB 수용체또는하나이상의 (1)-(35) 수용체에결합하지않는항체는포함하지않는다 : (1) BMPR1B ( 골형태형성단백질수용체-IB형, 진뱅크수탁번호 NM_001203); (2) E16 (LAT1, SLC7A5, 진뱅크수탁번호 NM_003486); (3) STEAP1 ( 전립선의 6개의막횡단상피항원, 진뱅크수탁번호 NM_012449); (4) 0772P (CA125, MUC16, 진뱅크수탁번호 AF361486); (5) MPF (MPF, MSLN, SMR, 거대핵세포강화인자, 메소텔린, 진뱅크수탁번호 NM_005823); (6) Napi3b (NAPI-3B, NPTIIb, SLC34A2, 용질담체족 34 ( 인산나트륨 ), 2 원, 제II형나트륨-의존성포스페이트전달체 3b, 진뱅크수탁번호 NM_006424); (7) Sema 5b (FLJ10372, KIAA1445, Mm , SEMA5B, SEMAG, 세마포린 5b Hlog, 세마도메인, 7개의트롬보스폰딘반복체 ( 제1형및제1형-유사 ), 막횡단도메인 (TM) 및짧은세포질도메인, ( 세마포린 ) 5B, 진뱅크수탁번호 AB040878); (8) PSCA hlg ( C12Rik, C530008O16Rik, RIKEN cdna C12, RIKEN cdna C12 유전자, 진뱅크수탁번호 AY358628); (9) ETBR ( 엔도텔린 B형수용체, 진뱅크수탁번호 AY275463); (10) MSG783 (RNF124, 가상단백질 FLJ20315, 진뱅크수탁번호 NM_017763); (11) STEAP2 (HGNC_8639, IPCA-1, PCANAP1, STAMP1, STEAP2, STMP, 전립선암관련유전자 1, 전립선암관련단백질 1, 전립선의 6개의막횡단상피항원 2, 6개의막횡단전립선단백질, 진뱅크수탁번호 AF455138); (12) TrpM4 (BR22450, FLJ20041, TRPM4, TRPM4B, 일시적수용체잠재적양이온채널, M 아족, 4 원, 진뱅크수탁번호 NM_017636); (13) CRIPTO (CR, CR1, CRGF, CRIPTO, TDGF1, 기형암종-유도성장인자, 진뱅크수탁번호 NP_ 또는 NM_003212); (14) CD21 (CR2 ( 보체수용체 2) 또는 C3DR (C3d/ 엡스테인바르바이러스수용체 ) 또는 Hs.73792, 진뱅크수탁번호 M26004); (15) CD79b (IGb ( 이뮤노글로불린-연관베타 ), B29, 진뱅크수탁번호 NM_000626); (16) FcRH2 (IFGP4, IRTA4, SPAP1A (SH2 도메인함유포스파타제고정단백질 1a), SPAP1B, SPAP1C, 진뱅크수탁번호 NM_030764); (17) HER2 ( 진뱅크수탁번호 M11730); (18) NCA ( 진뱅크수탁번호 M18728); (19) MDP ( 진뱅크수탁번호 BC017023); (20) IL20Rα ( 진뱅크수탁번호 AF184971); (21) 브레비칸 ( 진뱅크수탁번호 AF229053); (22) Ephb2R ( 진뱅크수탁번호 NM_004442); (23) ASLG659 ( 진뱅크수탁번호 AX092328); (24) PSCA ( 진뱅크수탁번호 AJ297436); (25) GEDA ( 진뱅크수탁번호 AY260763); (26) BAFF-R ( 진뱅크수탁번호 NP_ );

65 [0545] [0546] [0547] [0548] [0549] [0550] [0551] [0552] [0553] (27) CD22 ( 진뱅크수탁번호 NP ); (28) CD79a (CD79A, CD79α, 이뮤노글로불린-연관알파, Ig 베타 (CD79B) 와공유적으로상호작용하고 Ig M 분자와표면상에서복합체를형성하여 B 세포분화에관여하는신호를전달하는 B 세포-특이적단백질, 진뱅크수탁번호 NP_ ); (29) CXCR5 ( 버킷림프종수용체 1, CXCL13 케모카인에의하여활성화되고림프구이동및체액성방어에작용하고 HIV-2 감염및아마도 AIDS, 림프종, 골수종및백혈병의진행에서중요한역할을하는 G 단백질-커플링된수용체, 진뱅크수탁번호 NP_ ); (30) HLA-DOB ( 펩티드에결합하여이를 CD4+ T 림프구에제시하는 MHC 클래스 II 분자 (Ia 항원 ) 의베타서브유닛, 진뱅크수탁번호 NP_ ); (31) P2X5 ( 세포외 ATP에의하여개폐되는이온채널인퓨린성수용체 P2X 리간드-게이트이온채널 5는시냅스전달및신경발생에관련될수있고, 결핍은특발성배뇨근불안정의병태생리에기여할수있음, 진뱅크수탁번호 NP_ ); (32) CD72 (B-세포분화항원 CD72, Lyb-2, 진뱅크수탁번호 NP_ ); (33) LY64 ( 림프구항원 64 (RP105), 류신풍부반복체 (LRR) 족의제I형막단백질은 B-세포활성화및아팝토시스를조절하고, 이기능의손실은전신홍반루푸스환자의질환활성증가와관련됨, 진뱅크수탁번호 NP_ ); (34) FCRH1 (C2 제I형g-형및 ITAM 도메인을함유하는이뮤노글로불린 Fc 도메인을위한추정의수용체인 Fc 수용체-유사단백질 1은 B-림프구분화에있어서역할을할수있음, 진뱅크수탁번호 NP_ ); 또는 (35) IRTA2 (B 세포발달및림프종발생에작용할가능성이있는추정의면역수용체인이뮤노글로불린거대족수용체전위관련 2; 전위에의한유전자의탈조절은일부 B 세포악성종양에서일어남, 진뱅크수탁번호 NP_ ). 한실시양태에서 -W w -는 -Val-Cit-이다. [0554] 다른실시양태에서, R 3, R 4 및 R 7 은독립적으로이소프로필또는 sec- 부틸이고 R 5 는 -H 이다. 예시적인실시양태 에서, R 3 및 R 4 는각각이소프로필, R 5 는 -H 이고, R 7 은 sec- 부틸이다. 또다른실시양태에서, R 2 및 R 6 은각각 메틸이고, R 9 는 -H 이다. [0555] [0556] 또다른실시양태에서, 각각의 R 8 은 -OCH 3 이다. 예시적인실시양태에서, R 3 및 R 4 는각각이소프로필, R 2 및 R 6 은각각메틸, R 5 는 -H, R 7 은 sec- 부틸, 각각의 R 8 은 -OCH 3 이고, R 9 는 -H 이다. [0557] [0558] [0559] [0560] [0561] 한실시양태에서, Z는 -O- 또는 -NH-이다. 한실시양태에서, R 10 은아릴이다. 예시적인실시양태에서, R 10 은 -페닐이다. Z가 -O-인예시적인실시양태에서, R 11 은 -H, 메틸또는 t-부틸이다. Z가 -NH인한실시양태에서, R 11 은 -CH(R 15 ) 2 이며, 여기서 R 15 는 -(CH 2 ) n -N(R 16 ) 2 이고, R 16 은 -C 1 -C 8 알킬또는 -(CH 2 ) n -COOH 이다. [0562] [0563] Z 가 -NH 인다른실시양태에서, R 11 은 -CH(R 15 ) 2 이며, 여기서 R 15 는 -(CH 2 ) n -SO 3 H 이다. 한측면에서, Ab 는 cac10, cbr96, cs2c6, c1f6, c2f2, hac10, hbr96, hs2c6, h1f6, 및 h2f2 이다

66 [0564] 화학식 Ia 의예시적인실시양태는하기의구조를갖는다. [0565] [0566] [0567] [0568] 또는 [0569] [0570] [0571] [0572] [0573] [0574] ( 여기서, L은항체, Val은발린이고, Cit는시트룰린임 ). 약물부하량은분자 ( 예를들어, 화학식 Ia, Ia' 및 Ic) 내항체당약물분자의평균개수인 p에의해나타낸다. 약물부하량은리간드 ( 예를들어, Ab 또는 mab) 당 1 내지 20 약물 (D) 범위일수있다. 화학식 Ia 및화학식 Ia' 의조성물은 1 내지 20 약물범위로접합된항체들의집합군을포함한다. 접합반응제조에있어서의항체당약물의평균개수는질량분광법, ELISA 분석법, 및 HPLC와같은통상적인방법에의해규명될수있다. p로표현되는리간드-약물-접합체의정량적분포또한결정될수있다. 특정경우에서, P가다른약물부하량을갖는리간드-약물-접합체로부터의특정값인동질의리간드-약물-접합체의분리, 정제, 및특징규명은역상 HPLC 또는전기영동과같은방법에의해서이루어질수있다. 2 화학식 (Ib) 의약물화합물다른측면에서, 본발명은하기화학식 (Ib) 를갖는약물화합물또는그의제약상허용되는염또는용매화물을제공한다 : < 화학식 Ib> [0575] [0576] [0577] 상기화학식중, R 2 는 - 수소및 -C 1 -C 8 알킬로부터선택되고 ; [0578] R 3 은 - 수소, -C 1 -C 8 알킬, -C 3 -C 8 카르보사이클, 아릴, -C 1 -C 8 알킬 - 아릴, -C 1 -C 8 알킬 -(C 3 -C 8 카르보사이클 ), -C

67 C 8 헤테로사이클및 -C 1 -C 8 알킬 -(C 3 -C 8 헤테로사이클 ) 로부터선택되고 ; [0579] R 4 는 - 수소, -C 1 -C 8 알킬, -C 3 -C 8 카르보사이클, - 아릴, -C 1 -C 8 알킬 - 아릴, -C 1 -C 8 알킬 -(C 3 -C 8 카르보사이클 ), -C 3 -C 8 헤테로사이클및 -C 1 -C 8 알킬-(C 3 -C 8 헤테로사이클 ) 로부터선택되고 ; R 5 는 -H 및 -메틸로부터선택되거나 ; 또는 R 4 및 R 5 는결합하여화학식 -(CR a R b ) n - ( 여기서, R a 및 R b 는독립적으로 -H, -C 1 -C 8 알킬및 -C 3 -C 8 카르보시클로부터선택되고, n은 2, 3, 4, 5 및 6로부터선택됨 ) 을가지며이들이부착된탄소원자와함께고리를형성하고 ; [0580] R 6 은 -H 및 -C 1 -C 8 알킬로부터선택되고 ; [0581] R 7 은 -H, -C 1 -C 8 알킬, -C 3 -C 8 카르보사이클, 아릴, -C 1 -C 8 알킬 - 아릴, -C 1 -C 8 알킬 -(C 3 -C 8 카르보사이클 ), -C 3 -C 8 헤테로사이클및 -C 1 -C 8 알킬 -(C 3 -C 8 헤테로사이클 ) 로부터선택되고 ; [0582] R 8 은각각독립적으로 -H, -OH, -C 1 -C 8 알킬, -C 3 -C 8 카르보사이클및 -O-(C 1 -C 8 알킬 ) 로부터선택되고 ; [0583] R 9 는 -H 및 -C 1 -C 8 알킬로부터선택되고 ; [0584] R 10 은아릴기또는 -C 3 -C 8 헤테로시클로부터선택되고 ; [0585] Z 는 -O-, -S-, -NH-, 또는 -NR 12 - ( 여기서, R 12 는 C 1 -C 8 알킬임 ) 이고 ; [0586] [0587] [0588] R 11 은 -H, C 1 -C 20 알킬, 아릴, -C 3 -C 8 헤테로사이클, -(R 13 O) m -R 14, 또는 -(R 13 O) m -CH(R 15 ) 2 로부터선택되고 ; m 은 범위의정수이고 ; R 13 은 -C 2 -C 8 알킬이고 ; [0589] R 14 는 -H 또는 -C 1 -C 8 알킬이고 ; [0590] R 15 는각각독립적으로 -H, -COOH, -(CH 2 ) n -N(R 16 ) 2, -(CH 2 ) n -SO 3 H, 또는 -(CH 2 ) n -SO 3 -C 1 -C 8 알킬이고 ; [0591] [0592] R 16 은각각독립적으로 -H, -C 1 -C 8 알킬, 또는 -(CH 2 ) n -COOH 이고 ; n 은 0 내지 6 범위의정수이다. [0593] 한실시양태에서, R 3, R 4 및 R 7 은독립적으로이소프로필또는 sec- 부틸이고 R 5 는 -H 이다. 예시적인실시양태에 서, R 3 및 R 4 는각각이소프로필, R 5 는 -H 이고, R 7 은 sec- 부틸이다. [0594] [0595] [0596] 다른실시양태에서, R 2 및 R 6 은각각메틸이고, R 9 는 -H 이다. 또다른실시양태에서, 각각의 R 8 은 -OCH 3 이다. 예시적인실시양태에서, R 3 및 R 4 는각각이소프로필, R 2 및 R 6 은각각메틸, R 5 는 -H, R 7 은 sec- 부틸, 각각의 R 8 은 -OCH 3 이고, R 9 는 -H 이다. [0597] [0598] [0599] 한실시양태에서, Z 는 -O- 또는 -NH- 이다. 한실시양태에서, R 10 은아릴이다. 예시적인실시양태에서, R 10 은 - 페닐이다

68 [0600] [0601] Z 가 -O- 인예시적인실시양태에서, R 11 은 -H, 메틸또는 t- 부틸이다. Z 가 -NH 인한실시양태에서, R 11 은 -CH(R 15 ) 2 이며, 여기서 R 15 는 -(CH 2 ) n -N(R 16 ) 2 이고, R 16 은 -C 1 -C 8 알킬또는 -(CH 2 ) n -COOH 이다. [0602] [0603] Z 가 -NH 인다른실시양태에서, R 11 은 -CH(R 15 ) 2 이며, 여기서 R 15 는 -(CH 2 ) n -SO 3 H 이다. ADC 내약물잔기 (D) 로서사용될수있는화학식 Ib 의예시적인화합물은하기구조를갖는화합물및그의제 약상허용되는염또는용매화물을포함한다 : [0604] [0605] [0606] [0607] [0608] [0609]

69 [0610] [0611] [0612] [0613] [0614] [0615] [0616] 화학식 Ic의화합물다른측면에서, 본발명은하나이상의약물단위 ( 잔기 ) 에공유적으로부착된항체를포함하는, 하기화학식 Ic 를갖는항체-약물접합체화합물 (ADC) 를제공한다. < 화학식 Ic> [0617] [0618] [0619] [0620] [0621] [0622] [0623] [0624] [0625] [0626] 항체-약물접합체화합물은그의제약상허용되는염또는용매화물을포함한다. 화학식 (Ic) 화합물은하기와같이정의된다 : Ab는하나이상의종양-관련항원수용체 (1)-(35) 에결합하는항체이다 : (1) BMPR1B ( 골형태형성단백질수용체-IB형, 진뱅크수탁번호 NM_001203); (2) E16 (LAT1, SLC7A5, 진뱅크수탁번호 NM_003486); (3) STEAP1 ( 전립선의 6개의막횡단상피항원, 진뱅크수탁번호 NM_012449); (4) 0772P (CA125, MUC16, 진뱅크수탁번호 AF361486); (5) MPF (MPF, MSLN, SMR, 거대핵세포강화인자, 메소텔린, 진뱅크수탁번호 NM_005823); (6) Napi3b (NAPI-3B, NPTIIb, SLC34A2, 용질담체족 34 ( 인산나트륨 ), 2 원, 제II형나트륨-의존성포스페이트전달체 3b, 진뱅크수탁번호 NM_006424);

70 [0627] [0628] [0629] [0630] [0631] [0632] [0633] [0634] [0635] [0636] [0637] [0638] [0639] [0640] [0641] [0642] [0643] [0644] [0645] [0646] [0647] [0648] [0649] [0650] [0651] (7) Sema 5b (FLJ10372, KIAA1445, Mm , SEMA5B, SEMAG, 세마포린 5b Hlog, 세마도메인, 7개의트롬보스폰딘반복체 ( 제1형및제1형-유사 ), 막횡단도메인 (TM) 및짧은세포질도메인, ( 세마포린 ) 5B, 진뱅크수탁번호 AB040878); (8) PSCA hlg ( C12Rik, C530008O16Rik, RIKEN cdna C12, RIKEN cdna C12 유전자, 진뱅크수탁번호 AY358628); (9) ETBR ( 엔도텔린 B형수용체, 진뱅크수탁번호 AY275463); (10) MSG783 (RNF124, 가상단백질 FLJ20315, 진뱅크수탁번호 NM_017763); (11) STEAP2 (HGNC_8639, IPCA-1, PCANAP1, STAMP1, STEAP2, STMP, 전립선암관련유전자 1, 전립선암관련단백질 1, 전립선의 6개의막횡단상피항원 2, 6개의막횡단전립선단백질, 진뱅크수탁번호 AF455138); (12) TrpM4 (BR22450, FLJ20041, TRPM4, TRPM4B, 일시적수용체잠재적양이온채널, M 아족, 4 원, 진뱅크수탁번호 NM_017636); (13) CRIPTO (CR, CR1, CRGF, CRIPTO, TDGF1, 기형암종-유도성장인자, 진뱅크수탁번호 NP_ 또는 NM_003212); (14) CD21 (CR2 ( 보체수용체 2) 또는 C3DR (C3d/ 엡스테인바르바이러스수용체 ) 또는 Hs.73792, 진뱅크수탁번호 M26004); (15) CD79b (IGb ( 이뮤노글로불린-연관베타 ), B29, 진뱅크수탁번호 NM_000626); (16) FcRH2 (IFGP4, IRTA4, SPAP1A (SH2 도메인함유포스파타제고정단백질 1a), SPAP1B, SPAP1C, 진뱅크수탁번호 NM_030764); (17) HER2 ( 진뱅크수탁번호 M11730); (18) NCA ( 진뱅크수탁번호 M18728); (19) MDP ( 진뱅크수탁번호 BC017023); (20) IL20Rα ( 진뱅크수탁번호 AF184971); (21) 브레비칸 ( 진뱅크수탁번호 AF229053); (22) Ephb2R ( 진뱅크수탁번호 NM_004442); (23) ASLG659 ( 진뱅크수탁번호 AX092328); (24) PSCA ( 진뱅크수탁번호 AJ297436); (25) GEDA ( 진뱅크수탁번호 AY260763); (26) BAFF-R ( 진뱅크수탁번호 NP_ ); (27) CD22 ( 진뱅크수탁번호 NP ); (28) CD79a (CD79A, CD79α, 이뮤노글로불린-연관알파, Ig 베타 (CD79B) 와공유적으로상호작용하고 Ig M 분자와표면상에서복합체를형성하여 B 세포분화에관여하는신호를전달하는 B 세포-특이적단백질, 진뱅크수탁번호 NP_ ); (29) CXCR5 ( 버킷림프종수용체 1, CXCL13 케모카인에의하여활성화되고림프구이동및체액성방어에작용하고 HIV-2 감염및아마도 AIDS, 림프종, 골수종및백혈병의진행에서중요한역할을하는 G 단백질-커플링된수용체, 진뱅크수탁번호 NP_ ); (30) HLA-DOB ( 펩티드에결합하여이를 CD4+ T 림프구에제시하는 MHC 클래스 II 분자 (Ia 항원 ) 의베타서브유닛, 진뱅크수탁번호 NP_ ); (31) P2X5 ( 세포외 ATP에의하여개폐되는이온채널인퓨린성수용체 P2X 리간드-게이트이온채널 5는시냅스전달및신경발생에관련될수있고, 결핍은특발성배뇨근불안정의병태생리에기여할수있음, 진뱅크수탁번호 NP_ );

71 [0652] [0653] [0654] [0655] [0656] [0657] [0658] [0659] [0660] [0661] [0662] [0663] [0664] (32) CD72 (B-세포분화항원 CD72, Lyb-2, 진뱅크수탁번호 NP_ ); (33) LY64 ( 림프구항원 64 (RP105), 류신풍부반복체 (LRR) 족의제I형막단백질은 B-세포활성화및아팝토시스를조절하고, 이기능의손실은전신홍반루푸스환자의질환활성증가와관련됨, 진뱅크수탁번호 NP_ ); (34) FCRH1 (C2 제I형g-형및 ITAM 도메인을함유하는이뮤노글로불린 Fc 도메인을위한추정의수용체인 Fc 수용체-유사단백질 1은 B-림프구분화에있어서역할을할수있음, 진뱅크수탁번호 NP_ ); 또는 (35) IRTA2 (B 세포발달및림프종발생에작용할가능성이있는추정의면역수용체인이뮤노글로불린거대족수용체전위관련 2; 전위에의한유전자의탈조절은일부 B 세포악성종양에서일어남, 진뱅크수탁번호 NP_ ). A는스트레처단위, a는 0 또는 1, 각각의 W는독립적으로아미노산단위, w는 0 내지 12 범위의정수, Y는스페이서단위, y는 0, 1 또는 2, p는 1 내지약 8 범위이고, D는하기화학식 D E 및 D F 로부터선택되는약물잔기이며 : < 화학식 D E > [0665] [0666] < 화학식 D F > [0667] [0668] 여기서, D E 및 D F 의파형선은 A, W, 또는 Y 에대한공유부착부위를나타내고, 각각의위치에서독립적으로 : [0669] R 2 는 H 및 C 1 -C 8 알킬로부터선택되고 ; [0670] R 3 은 H, C 1 -C 8 알킬, C 3 -C 8 카르보사이클, 아릴, C 1 -C 8 알킬 - 아릴, C 1 -C 8 알킬 -(C 3 -C 8 카르보사이클 ), C 3 -C 8 헤테로 사이클및 C 1 -C 8 알킬 -(C 3 -C 8 헤테로사이클 ) 로부터선택되고 ; [0671] R 4 는 H, C 1 -C 8 알킬, C 3 -C 8 카르보사이클, 아릴, C 1 -C 8 알킬 - 아릴, C 1 -C 8 알킬 -(C 3 -C 8 카르보사이클 ), C 3 -C 8 헤테로 사이클및 C 1 -C 8 알킬 -(C 3 -C 8 헤테로사이클 ) 로부터선택되고 ; [0672] [0673] R 5 는 H 및메틸로부터선택되거나 ; 또는 R 4 및 R 5 는결합하여카르보시클릭고리를형성하고, 화학식 -(CR a R b ) n - ( 여기서, R a 및 R b 는독립적으로 H, C 1 -C 8 알킬및 C 3 -C 8 카르보시클로부터선택되고, n 은 2, 3, 4, 5 및 6 로부터선택됨 ) 을가지며 ;

72 [0674] R 6 은 H 및 C 1 -C 8 알킬로부터선택되고 ; [0675] R 7 은 H, C 1 -C 8 알킬, C 3 -C 8 카르보사이클, 아릴, C 1 -C 8 알킬 - 아릴, C 1 -C 8 알킬 -(C 3 -C 8 카르보사이클 ), C 3 -C 8 헤테로 사이클및 C 1 -C 8 알킬 -(C 3 -C 8 헤테로사이클 ) 로부터선택되고 ; [0676] R 8 은각각독립적으로 H, OH, C 1 -C 8 알킬, C 3 -C 8 카르보사이클및 O-(C 1 -C 8 알킬 ) 로부터선택되고 ; [0677] R 9 는 H 및 C 1 -C 8 알킬로부터선택되고 ; [0678] R 10 은아릴또는 C 3 -C 8 헤테로시클로부터선택되고 ; [0679] Z 는 O, S, NH, 또는 NR 12 ( 여기서, R 12 는 C 1 -C 8 알킬임 ) 이고 ; [0680] [0681] [0682] R 11 은 H, C 1 -C 20 알킬, 아릴, C 3 -C 8 헤테로사이클, -(R 13 O) m -R 14, 또는 -(R 13 O) m -CH(R 15 ) 2 로부터선택되고 ; m 은 범위의정수이고 ; R 13 은 C 2 -C 8 알킬이고 ; [0683] R 14 는 H 또는 C 1 -C 8 알킬이고 ; [0684] R 15 는각각독립적으로 H, COOH, -(CH 2 ) n -N(R 16 ) 2, -(CH 2 ) n -SO 3 H, 또는 -(CH 2 ) n -SO 3 -C 1 -C 8 알킬이고 ; [0685] R 16 은각각독립적으로 H, C 1 -C 8 알킬, 또는 -(CH 2 ) n -COOH 이고 ; [0686] R 18 은 -C(R 8 ) 2 -C(R 8 ) 2 - 아릴, -C(R 8 ) 2 -C(R 8 ) 2 -(C 3 -C 8 헤테로사이클 ), 및 -C(R 8 ) 2 -C(R 8 ) 2 -(C 3 -C 8 헤테로사이클 ) 로부터 선택되고 ; 및 [0687] [0688] n 은 0 내지 6 범위의정수이다. 한실시양태에서, -W w - 는 -Val-Cit- 이다. [0689] 다른실시양태에서, R 3, R 4 및 R 7 은독립적으로이소프로필또는 sec- 부틸이고, R 5 는 -H 이다. 예시적인실시양 태에서, R 3 및 R 4 는각각이소프로필, R 5 는 -H 이고, R 7 은 sec- 부틸이다. [0690] [0691] [0692] 또다른실시양태에서, R 2 및 R 6 은각각메틸이고, R 9 는 -H 이다. 또다른실시양태에서, R 8 은각각 -OCH 3 이다. 예시적인실시양태에서, R 3 및 R 4 는각각이소프로필, R 2 및 R 6 은각각메틸, R 5 는 -H, R 7 은 sec- 부틸, 각각의 R 8 은 -OCH 3 이고, R 9 는 -H 이다. [0693] [0694] [0695] [0696] [0697] 한실시양태에서, Z는 -O- 또는 -NH-이다. 한실시양태에서, R 10 은아릴이다. 예시적인실시양태에서, R 10 은 -페닐이다. Z가 -O-인예시적인실시양태에서, R 11 은 -H, 메틸또는 t-부틸이다. Z가 -NH인한실시양태에서, R 11 은 -CH(R 15 ) 2 이며, 여기서 R 15 는 -(CH 2 ) n -N(R 16 ) 2 이고, R 16 은 -C 1 -C 8 알킬또는

73 -(CH 2 ) n -COOH 이다. [0698] [0699] Z 가 -NH 인다른실시양태에서, R 11 은 -CH(R 15 ) 2 이며, 여기서 R 15 는 -(CH 2 ) n -SO 3 H 이다. 화학식 Ic ADC 의예시적인실시양태는하기구조를갖는다 : [0700] [0701] [0702] [0703] [0704] [0705] [0706] [0707] ( 여기서, Ab는하나이상의종양-관련항원수용체 (1)-(35) 에결합하는항체이고 ; Val은발린이고 ; Cit는시트룰린임 ). 약물부하량은화학식 I의분자내항체당약물분자의평균개수인 p에의해나타낸다. 약물부하량은항체 ( 예를들어, Ab 또는 mab) 당 1 내지 20 약물 (D) 범위일수있다. 화학식 I의 ADC 조성물은 1 내지 20 약물범위로접합된항체들의집합군을포함한다. 접합반응으로부터 ADC를제조하는데있어서항체당약물의평균개수는 UV/ 가시광선분광법, 질량분석법, ELISA 분석법, 및 HPLC와같은통상적인방법에의해규명될수있다. p로표현되는 ADC의정량적분포또한결정될수있다. 특정경우에서, p가다른약물부하량을갖는 ADC로부터의특정값인동질의 ADC의분리, 정제, 및특징규명은역상 HPLC 또는전기영동과같은방법에의해서이루어질수있다. 일부항체약물접합체에있어, p는항체상의부착부위의개수에의해제한될수있다. 예를들어, 부착이상기예시적인실시양태에서와같이시스테인티올에의한경우, 항체는오직하나또는수개의시스테인티올기를갖거나, 링커가부착될수있는오직하나또는수개의충분히반응성인티올기를가질수있다. 전형적으로, 이론상최대치보다적은약물잔기들이접합반응동안항체에접합된다. 항체는, 예를들면약물 -링커중간체또는링커시약과반응하지않는많은리신잔기들을함유할수있다. 가장반응성인리신기만이아민-반응성링커시약과반응할수있다. 일반적으로, 항체는, 존재한다면유리형이고반응성인, 약물잔기에연결될수있는시스테인티올기를많이함유하지않는다. 본발명화합물의항체내대부분의시스테인티올잔기들은디술피드가교로서존재하며, 디티오트레이톨 (DTT) 과같은환원제로환원시켜야한다. 추가적으로, 항체는리신또는시스테인과같은반응성있는친핵성기를노출시키기위해변성조건에적용시켜야한다. ADC의부하량 ( 약물 / 항체비율 ) 은 (i) 항체에비해몰과량인약물-링커중간체또는링커시약의제한, (ⅱ) 접합반응시간또는온도의제한, 및 (ⅲ) 시스테인티올변형을위한부분적또는제한적인환원조건을포함하는몇가지상이한방식들로조절될수있다

74 [0708] [0709] [0710] 하나초과의친핵성기가약물-링커중간체, 또는링커시약에이어서약물잔기시약과반응함으로써생성된생성물은항체에부착된하나이상의약물잔기들의분포를갖는 ADC 화합물의혼합물이라고이해되어야한다. 항체당약물의평균개수는항체에특이적이고약물에특이적인이중 ELISA 항체분석법에의해혼합물로부터계산할수있다. 개별적인 ADC 분자들은질량분광법에의해혼합물내에서확인되고, HPLC, 예를들어소수성상호작용크로마토그래피에의해분리될수있다 ( 문헌 ["Effect of drug loading on the pharmacology, pharmacokinetics, and toxicity of an anti-cd30 antibody-drug conjugate", Hamblett, K.J., et al, Abstract No. 624, American Association for Cancer Research; 2004 Annual Meeting, March 27-31, 2004, Proceedings of the AACR, Volume 45, March 2004]; ["Controlling the Location of Drug Attachment in Antibody-Drug Conjugates", Alley, S.C., et al, Abstract No. 627, American Association for Cancer Research; 2004 Annual Meeting, March 27-31, 2004, Proceedings of the AACR, Volume 45, March 2004] 참조 ). 따라서, 단일의부하량값을갖는동질의 ADC는전기영동또는크로마토그래피에의해접합혼합물로부터단리될수있다. 4.3 링커단위 " 링커단위 "(LU) 는약물단위및리간드단위를연결하여약물-링커-리간드접합체를형성하는데사용될수있거나, 종양관련항원에대한면역접합체의형성에유용한양기능성화합물이다. 그러한면역접합체는독성약물이종양세포에선택적으로전달되게한다. 한실시양태에서, 약물-링커화합물및약물-링커-리간드접합체의링커단위는하기의화학식을갖는다 : [0711] [0712] [0713] [0714] [0715] [0716] [0717] [0718] [0719] [0720] [0721] 상기화학식중 -A-는스트레처단위이고 ; a는 0 또는 1; -W-는각각독립적으로아미노산단위 ; w는독립적으로 0 내지 12 범위의정수 ; -Y-는스페이서단위이고 ; y는 0, 1 또는 2이다. 약물-링커-리간드접합체에서, 링커는약물잔기및리간드단위를연결시킬수있다 스트레처단위스트레처단위 (-A-) 는, 존재하는경우, 리간드단위를아미노산단위 (-W-) 에연결시킬수있다. 이관점에서, 리간드 (L) 은스트레처관능기와결합을형성시킬수있는관능기를갖는다. 천연적으로또는화학적조작을통해리간드상에존재할수있는유용한관능기는술프히드릴 (-SH), 아미노, 히드록실, 카르복시, 탄수화물의아노머성히드록실기, 및카르복실을포함하지만, 이들에한정되지는않는다. 한측면에서, 리간드관능기는술프히드릴및아미노이다. 술프히드릴기는리간드의분자내디술피드결합의환원에의해생성될수있다. 달리, 술프히드릴기는 2-이미노티올란 ( 트라우트시약 (Traut's reagent)) 또는다른술프히드릴생성시약을이용한, 리간드의리신잔기내아미노기의반응에의해생성될수있다. 한실시양태에서, 스트레처단위는리간드단위의황원자와결합을형성한다. 황원자는리간드의술프히드릴기로부터유도될수있다. 이실시양태의대표적인스트레처단위는화학식 Ⅲa 및 Ⅲb의꺾쇠괄호내에도시 하였으며, 여기서 L-, -W-, -Y-, -D, w 및 y는상기에서정의된바와같고, R 17 은 -C 1 -C 10 알킬렌-, -C 3 -C 8 카르보시클로-, -O-(C 1 -C 8 알킬 )-, -아릴렌-, -C 1 -C 10 알킬렌-아릴렌-, -아릴렌-C 1 -C 10 알킬렌-, -C 1 -C 10 알킬렌-(C 3 -C 8 카르보시클로 )-, -(C 3 -C 8 카르보시클로 )-C 1 -C 10 알킬렌-, -C 3 -C 8 헤테로시클로-, -C 1 -C 10 알킬렌-(C 3 -C 8 헤테로시클로 )-, -(C 3 -C 8 헤테로시클로 )-C 1 -C 10 알킬렌-, -(CH 2 CH 2 O) r -, 및 -(CH 2 CH 2 O) r -CH 2 -이고; r은 1-10 범위의정수이다. 화학식 Ⅲ-Ⅵ과같은화학식 Ia의모든예시적인실시양태으로부터, 명확히표시되어있지않더라도, 1 내지 20개의약물잔기들이리간드에연결되어있는것으로이해해야한다 (p=1-20)

75 화학식 Ⅲa [0722] 화학식 Ⅲb [0723] [0724] 예시적인스트레처단위는하기의 R 17 이 -(CH 2 ) 5 - 인화학식 Ⅲa 의스트레처단위이다. [0725] [0726] 또다른예시적인스트레처단위는하기의 R 17 이 -(CH 2 CH 2 O) r -CH 2 - 이고 ; r 이 2 인화학식 Ⅲa 의스트레처단위이다. [0727] [0728] 또다른예시적인스트레처단위는하기의 R 17 이 -(CH 2 ) 5 - 인화학식 Ⅲb 의스트레처단위이다. [0729] [0730] 다른실시양태에서, 스트레처단위는리간드단위의황원자와스트레처단위의황원자사이에디술피드결합 을통해리간드단위에연결된다. 이실시양태의대표적인스트레처단위는화학식 Ⅳ 의꺾쇠괄호내에도시 하였으며, 여기서 R 17, L-, -W-, -Y-, -D, w 및 y 는상기에서정의된바와같다. 화학식 Ⅳ [0731] [0732] 또다른실시양태에서, 스트레처의반응성기는리간드의일차또는이차아미노기와결합을형성할수있는반응성부위를함유한다. 이들반응성부위들의예로는숙신이미드에스테르, 4-니트로페닐에스테르, 펜타플루오로페닐에스테르, 테트라플루오로페닐에스테르, 무수물, 산염화물, 술포닐염화물, 이소시아네이트및이소티오시아네이트와같은활성화된에스테르를포함하지만이들에한정되지는않는다. 이실시양태의대표적인 스트레처단위는화학식 Va 및 Vb 의꺾쇠괄호내에도시하였으며, 여기서 -R 17 -, L-, -W-, -Y-, -D, w 및 y 는 상기에서정의된바와같다

76 화학식 Va [0733] 화학식 Vb [0734] [0735] 또다른측면에서, 스트레처의반응성기는리간드상에존재할수있는개질된탄수화물의 (-CHO) 기에대해반응성인반응성부위를함유한다. 예를들어, 탄수화물은과요오드산나트륨과같은시약을사용하여온화하게산화될수있으며, 산화된탄수화물의생성된 (-CHO) 단위는문헌 [Kaneko, T. et al. (1991) Bioconjugate Chem 2: ] 에기재된것들과같은히드라지드, 옥심, 일급또는이급아민, 히드라진, 티오세미카르바존, 히드라진카르복실레이트, 및아릴히드라지드와같은관능기를함유하는스트레처와축합될수있다. 이실시 양태의대표적인스트레처단위는화학식 Ⅵa, Ⅵb, 및 Ⅵc 의꺾쇠괄호내에도시하였으며, 여기서 -R 17 -, L-, -W-, -Y-, -D, w 및 y 는상기에서정의된바와같다. 화학식 Ⅵa [0736] 화학식 Ⅵb [0737] 화학식 Ⅵc [0738] [0739] [0740] [0741] 아미노산단위아미노산단위 (-W-) 는, 존재하는경우, 스페이서단위가존재한다면스트레처단위를스페이서단위에연결시키고, 스페이서단위가없다면스트레처단위를약물잔기에연결시키고, 스트레처단위및스페이서단위가없다면리간드단위를약물단위에연결시킨다. W w -는디펩티드, 트리펩티드, 테트라펩티드, 펜타펩티드, 헥사펩티드, 헵타펩티드, 옥타펩티드, 노나펩티드, 데 카펩티드, 운데카펩티드또는도데카펩티드단위이다. 각각의 -W- 단위는독립적으로하기꺾쇠괄호내에표 시된화학식을가지고, w 는 0 내지 12 범위의정수이다

77 [0742] [0743] 상기화학식중 R 19 는수소, 메틸, 이소프로필, 이소부틸, sec- 부틸, 벤질, p- 히드록시벤질, -CH 2 OH, -CH(OH)CH 3, -CH 2 CH 2 SCH 3, -CH 2 CONH 2, -CH 2 COOH, -CH 2 CH 2 CONH 2, -CH 2 CH 2 COOH, -(CH 2 ) 3 NHC(=NH)NH 2, -(CH 2 ) 3 NH 2, -(CH 2 ) 3 NHCOCH 3, -(CH 2 ) 3 NHCHO, -(CH 2 ) 4 NHC(=NH)NH 2, -(CH 2 ) 4 NH 2, -(CH 2 ) 4 NHCOCH 3, -(CH 2 ) 4 NHCHO, -(CH 2 ) 3 NHCONH 2, -(CH 2 ) 4 NHCONH 2, -CH 2 CH 2 CH(OH)CH 2 NH 2, 2- 피리딜메틸 -, 3- 피리딜메틸 -, 4- 피리딜메틸 -, 페닐, 시클로헥실, [0744] [0745] 이다. 아미노산단위는종양-관련프로테아제를포함하는하나이상의효소에의해효소적으로분해되어약물단위 (- D) 를유리시킬수있으며, 한실시양태에서, 약물단위가방출되었을때생체내에서양성자화되어약물 (D) 를제공한다. 예시적인 W w 단위는하기화학식 (Ⅶ)-(Ⅸ) 에의해나타낸다 : 화학식 Ⅶ [0746]

78 [0747] 상기화학식중 R 20 및 R 21 은다음과같다 : [0748] [0749] 화학식 Ⅷ [0750] [0751] 상기화학식중 R 20, R 21 및 R 22 는다음과같다 : [0752] 화학식 Ⅸ [0753] [0754] 상기화학식중 R 20, R 21, R 22 및 R 23 은다음과같다 : [0755] [0756] 예시적인아미노산단위는 R 20 이벤질이고 R 21 이 -(CH 2 ) 4 NH 2 ; R 20 이이소프로필이고 R 21 이 -(CH 2 ) 4 NH 2 ; R 20 이이소프 로필이고 R 21 이 -(CH 2 ) 3 NHCONH 2 인화학식 (Ⅶ) 의단위를포함하지만, 이들에한정되지는않는다. 다른예시적인 아미노산단위는 R 20 이벤질이고, R 21 이벤질이고, R 22 가 -(CH 2 ) 4 NH 2 인화학식 (Ⅷ) 단위이다. [0757] 특정효소, 예를들어종양 - 관련프로테아제에의한효소적분해에유용한 -W w - 단위가설계되고그의선택성에 있어최적화될수있다. 한실시양태에서, -W w - 단위는그절단이카텝신 B, C 및 D, 또는플라스민프로테아 제에의해촉매된것이다

79 [0758] 한실시양태에서, -W w - 는디펩티드, 트리펩티드, 테트라펩티드또는펜타펩티드이다. [0759] [0760] [0761] [0762] [0763] [0764] [0765] R 19, R 20, R 21, R 22 또는 R 23 이수소이외의것인경우, R 19, R 20, R 21, R 22 또는 R 23 이부착된탄소원자는키랄성이다. R 19, R 20, R 21, R 22 또는 R 23 이부착된각각의탄소원자는독립적으로 (S) 또는 (R) 배위로존재한다. 아미노산단위의한측면에서, 아미노산단위는발린-시트룰린이다. 다른측면에서, 아미노산단위는페닐알라닌-리신 ( 즉, fk) 이다. 아미노산단위의또다른측면에서, 아미노산단위는 N-메틸발린-시트룰린이다. 또다른측면에서, 아미노산단위는 5-아미노발레르산, 호모페닐알라닌리신, 테트라이소퀴놀린카르복실레이트리신, 시클로헥실알라닌리신, 이소네페코트산리신, 베타-알라닌리신, 글리신세린발린글루타민및이소네페코트산이다. 특정실시양태에서, 아미노산단위는천연아미노산을포함할수있다. 다른실시양태에서, 아미노산단위는비-천연아미노산을포함할수있다 스페이서단위스페이서단위 (-Y-) 는, 존재하는경우, 아미노산단위가존재할때아미노산단위를약물잔기에연결시킨다. 달리, 아미노산단위가없는경우, 스페이서단위는스트레처단위를약물잔기에연결시킨다. 아미노산단위및스트레처단위둘다가없는경우, 스페이서단위는또한약물잔기를리간드단위에연결시킨다. 스페이서단위는자체-희생성및비자체-희생성의두가지일반적인유형이있다. 비자체-희생성스페이서단위는스페이서단위의일부또는전부가약물-링커-리간드접합체또는약물-링커화합물로부터아미노산단위를분해, 특히효소적으로분해된후에약물잔기에결합된채남아있는것이다. 비자체-희생성스페이서단위의예는 ( 글리신-글리신 ) 스페이서단위및글리신스페이서단위 ( 둘다반응식 1에표시됨 )( 하기 ) 를포함하지만, 이들에한정되지는않는다. 글리신-글리신스페이서단위또는글리신스페이서단위를함유하는예시적인화합물이종양-세포연관-프로테아제, 암-세포-연관프로테아제또는림프구-연관프로테아제를통한효소적분해를거치는경우, 글리신-글리신-약물잔기또는글리신-약물잔기는 L-A a -W w -로부터절단된다. 한실시 양태에서, 독립적인가수분해반응이표적세포내에서일어나서, 글리신 - 약물잔기결합을분해하고약물을유 리시킨다. [0766] 다른실시양태에서, -Y y - 는, 페닐렌부분이, Q 가 -C 1 -C 8 알킬, -O-(C 1 -C 8 알킬 ), - 할로겐, - 니트로또는 - 시아노 이고 ; m 이 0-4 범위의정수인 Q m 으로치환된 p- 아미노벤질알코올 (PAB) 단위 ( 반응식 2 및 3 을참조 ) 이다. 반응식 1 [0767] [0768] [0769] [0770] 한실시양태에서, 비자체-희생성스페이서단위 (-Y-) 는 -Gly-Gly-이다. 다른실시양태에서, 비자체-희생성스페이서단위 (-Y-) 는 -Gly-이다. 한실시양태에서, 스페이서단위가없는 (y=0) 약물-링커화합물또는약물-링커리간드접합체또는그의제약상허용되는염또는용매화물이제공된다. 달리, 자체-희생성스페이서단위를함유하는예시적인화합물은별도의가수분해단계를필요로하지않고 -D 를방출시킬수있다. 이실시양태에서, -Y-는 PAB 기의아미노질소원자를통해 -Ww-에연결되고, 카르보네이트, 카르바메이트또는에테르기를통해 -D에직접연결되는 PAB 기이다. 임의의특정이론또는메카니즘에매이지않고, 반응식 2는문헌 [Toki et al. (2002) J Org. Chem. 67: ] 에의해채택된카르바메이트또는카르보네이트기를통해 -D에직접부착된 PAB 기의약물방출의가능한메카니즘을표시한다

80 반응식 2 [0771] [0772] 상기반응식중 Q 는 -C 1 -C 8 알킬, -O-(C 1 -C 8 알킬 ), - 할로겐, - 니트로또는 - 시아노 ; m 은 0-4 범위의정수이고 ; p 는 1 내지약 20 범위이다. [0773] 특정이론또는메카니즘에매이지않고, 반응식 3 은에테르또는아민연결을통해 -D 에직접부착된 PAB 기의 약물방출의가능한메카니즘을표시한다. 반응식 3 [0774] [0775] 상기반응식중 Q 는 -C 1 -C 8 알킬, -O-(C 1 -C 8 알킬 ), - 할로겐, - 니트로또는 - 시아노 ; m 은 0-4 범위의정수이고 ; p 는 1 내지약 20 범위이다. [0776] 자체-희생성스페이서의다른예는 2-아미노이미다졸-5-메탄올유도체 ( 문헌 [Hay et al. (1999) Bioorg. Med. Chem. Lett. 9: 2237]) 및오르쏘또는파라-아미노벤질아세탈과같은 PAB 기와전자적으로유사한방향족화합물들을포함하지만, 이들에한정되지는않는다. 치환된및비치환된 4-아미노부티르산아미드 ( 문헌 [Rodrigues et al., Chemistry Biology, 1995, 2, 223]), 적당히치환된비시클로 [2.2.1] 및비시클로 [2.2.2] 고리계 ( 문헌 [Storm, et al., J. Amer. Chem. Soc., 1972, 94, 5815]) 및 2-아미노페닐프로피온산아미드 ( 문헌 [Amsberry, et al., J. Org. Chem., 1990, 55, 5867]) 과같은아미드결합의가수분해시에고리화반응을거치는스페이

81 서가사용될수있다. 글리신의 a- 위치에서치환된아민 - 함유약물의제거 ( 문헌 [Kingsbury, et al., J. Med. Chem., 1984, 27, 1447]) 또한예시적인화합물에유용한자체 - 희생성스페이서의예이다. [0777] 한실시양태에서, 스페이서단위는다중약물들을도입시키고방출시키는데사용될수있는, 하기반응식 4 에 표시된바와같은분지형비스 ( 히드록시메틸 ) 스티렌 (BHMS) 단위이다. 반응식 4 [0778] [0779] 상기반응식중 Q 는 -C 1 -C 8 알킬, -O-(C 1 -C 8 알킬 ), - 할로겐, - 니트로또는 - 시아노 ; m 은 0-4 범위의정수 ; n 은 0 또는 1 이고 ; p 는 1 내지약 20 범위이다. [0780] [0781] 한실시양태에서, -D 잔기들은서로같다. 또다른실시양태에서, -D 잔기들은서로다르다. 한측면에서, 스페이서단위 (-Y y -) 는하기화학식 (X)-(XⅡ) 으로나타난다 : 화학식 X [0782] [0783] 상기화학식중 Q 는 -C 1 -C 8 알킬, -O-(C 1 -C 8 알킬 ), - 할로겐, - 니트로또는 - 시아노이고 ; m 은 0-4 범위의정수이 다. 화학식 XI [0784] [0785] 및 화학식 XⅡ [0786] [0787] 화학식 Ia' 및 Ic 항체 - 약물접합체화합물의실시양태는하기화학식을포함한다. [0788]

82 [0789] [0790] ( 여기서, w 및 y 는각각 0 임 ), [0791] [0792] [0793] [0794] [0795] [0796] [0797] 4.4 약물단위 ( 잔기 ) 항체약물접합체 (ADC) 의약물잔기 (D) 는미세소관역학, GTP 가수분해, 및핵및세포분열 ( 문헌 [Woyke et al. (2001) Antimicrob. Agents and Chemother. 45(12): ]) 을방해하고항암 ( 미국특허 No ) 및항진균활성 ( 문헌 [Pettit et al. (1998) Antimicrob. Agents Chemother. 42: ) 을갖는것으로보여지는돌라스타틴 (dolastatin)/ 아우리스타틴 (auristatin) 유형 ( 미국특허 Nos ; ) 의것이다. D는 y=1 또는 2인경우엔스페이서와, y=0인경우엔아미노산단위의 C-말단카르복실기와, w 및 y=0인경우엔스트레처단위의카르복실기와, 그리고 a, w, 및 y=0인경우엔약물단위의카르복실기와결합을형성할수있는질소원자를갖는약물단위 ( 잔기 ) 이다. " 약물단위 " 및 " 약물잔기 " 라는용어는동의어이고본원에서상호전환가능하게사용된다고이해되어야한다. 한실시양태에서, -D는하기화학식 D E 또는 D F 이다

83 [0798] < 화학식 D E > [0799] [0800] < 화학식 D F > [0801] [0802] [0803] 상기식중에서, 각각의위치에서독립적으로 : R 2 는 H 및 C 1 -C 8 알킬로부터선택되고 ; [0804] R 3 은 H, C 1 -C 8 알킬, C 3 -C 8 카르보사이클, 아릴, C 1 -C 8 알킬 - 아릴, C 1 -C 8 알킬 -(C 3 -C 8 카르보사이클 ), C 3 -C 8 헤테로 사이클및 C 1 -C 8 알킬 -(C 3 -C 8 헤테로사이클 ) 로부터선택되고 ; [0805] R 4 는 H, C 1 -C 8 알킬, C 3 -C 8 카르보사이클, 아릴, C 1 -C 8 알킬 - 아릴, C 1 -C 8 알킬 -(C 3 -C 8 카르보사이클 ), C 3 -C 8 헤테로 사이클및 C 1 -C 8 알킬 -(C 3 -C 8 헤테로사이클 ) 로부터선택되고 ; [0806] [0807] R 5 는 H 및메틸로부터선택되거나 ; 또는 R 4 및 R 5 는결합하여카르보시클릭고리를형성하고, 화학식 -(CR a R b ) n - ( 여기서, R a 및 R b 는독립적으로 H, C 1 -C 8 알킬및 C 3 -C 8 카르보시클로부터선택되고, n 은 2, 3, 4, 5 및 6 로부터선택됨 ) 을가지며 ;; [0808] R 6 은 H 및 C 1 -C 8 알킬로부터선택되고 ; [0809] R 7 은 H, C 1 -C 8 알킬, C 3 -C 8 카르보사이클, 아릴, C 1 -C 8 알킬 - 아릴, C 1 -C 8 알킬 -(C 3 -C 8 카르보사이클 ), C 3 -C 8 헤테로 사이클및 C 1 -C 8 알킬 -(C 3 -C 8 헤테로사이클 ) 로부터선택되고 ; [0810] 각각의 R 8 은독립적으로 H, OH, C 1 -C 8 알킬, C 3 -C 8 카르보사이클및 O-(C 1 -C 8 알킬 ) 로부터선택되고 ; [0811] R 9 는 H 및 C 1 -C 8 알킬로부터선택되고 ; [0812] R 10 은아릴또는 C 3 -C 8 헤테로시클로부터선택되고 ; [0813] Z 는 O, S, NH, 또는 NR 12 ( 여기서, R 12 는 C 1 -C 8 알킬임 ) 이고 ; [0814] [0815] [0816] R 11 은 H, C 1 -C 20 알킬, 아릴, C 3 -C 8 헤테로사이클, -(R 13 O) m -R 14, 또는 -(R 13 O) m -CH(R 15 ) 2 로부터선택되고 ; m 은 범위의정수이고 ; R 13 은 C 2 -C 8 알킬이고 ; [0817] R 14 는 H 또는 C 1 -C 8 알킬이고 ;

84 [0818] R 15 는각각독립적으로 H, COOH, -(CH 2 ) n -N(R 16 ) 2, -(CH 2 ) n -SO 3 H, 또는 -(CH 2 ) n -SO 3 -C 1 -C 8 알킬이고 ; [0819] R 16 은각각독립적으로 H, C 1 -C 8 알킬, 또는 -(CH 2 ) n -COOH 이고 ; [0820] R 18 은 -C(R 8 ) 2 -C(R 8 ) 2 - 아릴, -C(R 8 ) 2 -C(R 8 ) 2 -(C 3 -C 8 헤테로사이클 ), 및 -C(R 8 ) 2 -C(R 8 ) 2 -(C 3 -C 8 카르보사이클 ) 로부터 선택되고 ; 및 [0821] n 은 0 내지 6 범위의정수이다. [0822] 한실시양태에서, R 3, R 4 및 R 7 은독립적으로이소프로필또는 sec- 부틸이고, R 5 는 -H 이다. 예시적인실시양태 에서, R 3 및 R 4 는각각이소프로필이고, R 5 는 H 이고, R 7 은 sec- 부틸이다. [0823] [0824] [0825] 다른실시양태에서, R 2 및 R 6 은각각메틸이고, R 9 는 H 이다. 또다른실시양태에서, 각각의 R 8 은 -OCH 3 이다. 예시적인실시양태에서, R 3 및 R 4 는각각이소프로필, R 2 및 R 6 은각각메틸, R 5 는 H, R 7 은 sec- 부틸, 각각의 R 8 은 -OCH 3 이고, R 9 는 H 이다. [0826] [0827] [0828] [0829] [0830] 한실시양태에서, Z는 -O- 또는 -NH-이다. 한실시양태에서, R 10 은아릴이다. 예시적인실시양태에서, R 10 은 -페닐이다. Z가 -O-인예시적인실시양태에서, R 11 은 H, 메틸또는 t-부틸이다. Z가 -NH인한실시양태에서, R 11 은 -CH(R 15 ) 2 이며, 여기서 R 15 는 -(CH 2 ) n -N(R 16 ) 2 이고, R 16 은 -C 1 -C 8 알킬또는 -(CH 2 ) n -COOH 이다. [0831] [0832] Z 가 -NH 인다른실시양태에서, R 11 은 -CH(R 15 ) 2 이며, 여기서 R 15 는 -(CH 2 ) n -SO 3 H 이다. 예시적인약물단위 (-D) 는하기구조를갖는약물단위및그의제약상허용되는염또는용매화물을 포함한다 : [0833] [0834] [0835]

85 [0836] [0837] [0838] [0839] [0840] [0841] [0842]

86 [0843] [0844] [0845] [0846] [0847] [0848] [0849] [0850] [0851] [0852] [0853] 한측면에서, 상기에서나타낸바와같이비제한적인트리에틸렌글리콜에스테르 (TEG) 와같은친수성기는 R 11 에서약물단위에부착될수있다. 이론에매이지않고, 친수성기는약물단위의내재화및비-응집반응을돕는다. 4.5 리간드단위리간드단위 (L-) 은그범위내에서, 수용체, 항원또는주어진표적-세포집단과연관된다른수용성잔기와결합하거나반응성있게회합하거나또는복합체를형성하는임의의리간드 (L) 단위를포함한다. 리간드는, 치료적으로또는달리생물학적으로변형시키고자하는세포집단의잔기와결합하거나복합체를형성하거나또는반응하는분자이다. 한측면에서, 리간드단위는리간드단위와반응하는특정표적세포집단에약물단위를전달하도록작용한다. 그러한리간드는예를들어, 전장항체, 항체단편, 저분자량단백질, 폴리펩티드또는펩티드, 렉틴, 당단백질, 비-펩티드, 비타민, 영양분-수송분자 ( 트랜스페린을예로들수있지만, 이에한정되지는않음 ), 또는임의의다른세포결합분자또는물질과같은고분자량단백질을포함하지만, 이들에한정되지는않는다. 리간드단위는스트레처단위, 아미노산단위, 스페이서단위, 또는약물단위에대한결합을형성할수있다. 리간드단위는리간드의헤테로원자를통해링커단위에대한결합을형성할수있다. 리간드상에존재할수있는헤테로원자는황 ( 한실시양태에서, 리간드의술프히드릴기로부터유래 ), 산소 ( 한실시양태에서, 리간드의카르보닐, 카르복실또는히드록실기로부터유래 ) 및질소 ( 한실시양태에서, 리간드의일급또는이급아민기로부터유래 ) 를포함한다. 이들헤테로원자들은리간드의천연상태, 예를들어자연-발생항체의리간드상에존재할수있고, 또는화학적변형을통해리간드내로도입될수있다. 한실시양태에서, 리간드는술프히드릴기를가지고, 리간드는술프히드릴기의황원자를통해링커단위에결합한다. 또다른측면에서, 리간드는화학적으로변형되어하나이상의술프히드릴기를도입시킬수있는하나이상의리신잔기를갖는다. 리간드단위는술프히드릴기의황원자를통해링커단위에결합한다. 리신을변형시키는데사용될수있는시약은 N-숙신이미딜 S-아세틸티오아세테이트 (SATA) 및 2-이미노티올란히드로클로라이드 ( 트라우트시약 ) 을포함하지만, 이들에한정되지는않는다. 다른실시양태에서, 리간드는화학적으로변형되어하나이상의술프히드릴기를가질수있는하나이상의탄수화물기를가질수있다. 리간드단위는술프히드릴기의황원자를통해, 스트레처단위와같은링커단위에결합한다. 또다른실시양태에서, 리간드는산화되어알데히드 (-CHO) 기를제공할수있는하나이상의탄수화물기를가질수있다 ( 예를들어, 문헌 [Laguzza, et al., J. Med. Chem. 1989, 32(3), ] 참조 ). 상응하는알데히드는스트레처상의반응성부위와결합을형성할수있다. 리간드상의카르보닐기와반응할수있는, 스트레처상의반응성부위는히드라진및히드록실아민을포함하지만, 이들에한정되지는않는다. 약물단위의부착또는회합을위한단백질변형에대한다른방법이본원에의해참고문헌으로인용되고있는문헌 [Coligan et al., Current Protocols in Protein Science, vol.2, John Wiley & Sons (2002)] 에기재되어있다. 유용한비면역반응성단백질, 폴리펩티드, 또는펩티드리간드는트랜스페린, 상피성장인자 (EGF), 봄베신, 가스트린, 가스트린-방출펩티드, 혈소판-유래성장인자, IL-2, IL-6, TGF-α 및 TGF-β와같은형질전환성장인자 (TGF), 우두성장인자 (VGF), 인슐린및인슐린-유사성장인자 Ⅰ 및 Ⅱ, 렉틴, 및저밀도지단백으로부터의아포단백을포함하나, 이에제한되지않는다. 유용한다클론성항체는면역화된동물의혈청으로부터얻어지는항체분자의비균질적인집단이다. 당업계에잘알려진다양한방법이대상항원에대한다클론성항체의생산에이용될수있다. 예를들어, 다클론성항

87 체의생산을위해, 토끼, 마우스, 래트, 및기니피그를포함하나이에제한되지않는다양한숙주동물이대상항원또는그의유도체를주사함으로써면역화될수있다. 면역성반응을증가시키기위해숙주종에따라프로인트 ( 완전및불완전 ) 아쥬반트, 알루미늄히드록시드와같은미네랄젤, 리소레시틴과같은계면활성물질, 플루론계폴리올, 다가음이온, 펩티드, 오일에멀젼, 키홀림프펫헤모시아닌, 디니트로페놀, 및 BCG( 바실레칼멧-구에린 ) 및코리네박테리움파르붐 (corynebacterium parvum) 과같은잠재적으로유용한인간아쥬반트를포함하나이에제한되지않는다양한아쥬반트가사용될수있다. 이러한아쥬반트들역시당업계에잘알려져있다. [0854] [0855] [0856] [0857] 유용한모노클로날항체는특정한항원결정인자 ( 즉, 암세포항원, 바이러스항원, 미생물항원, 단백질, 펩티드, 탄수화물, 화학물질, 핵산, 또는그단편 ) 에대한항체의균일한집단이다. 대상항원에대한모노클로날항체 (mab) 는배양중인연속적세포주에의한항체분자생산을제공하는당업계에알려진어떤기법으로도제조될수있다. 이러한것들로는쾰러및밀스테인 [1975, Nature 256, ] 에의해처음설명된하이브리도마기법, 인간 B 세포하이브리도마기법 [Kozbor et al., 1983, Immunology Today 4: 72], 및 EBV-하이브리도마기법 [Cole et al., 1985, Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Alan R. Liss, Inc., pp.77-96] 을포함하나이에제한되지않는다. 이러한항체들은 IgG, IgM, IgE, IgA, 및 IgD를포함하는임의의이뮤노글로불린부류및그의하위부류의것일수있다. 본발명에서사용되는 mab를생산하는하이브리도마는시험관내또는생체내에서배양될수있다. 유용한단일클론항체는인간모노클로날항체, 인간화모노클로날항체, 항체단편, 또는인간-마우스 ( 또는다른종 ) 키메라모노클로날항체를포함하나, 이에제한되지않는다. 인간모노클로날항체는당업계에알려진수많은기법 ( 예를들면, [Teng et al., 1983, Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 80, ]; [Kozbor et al., 1983, Immunology Today 4, 72-79]; 및 [Olsson et al., 1982, Meth. Enzymol. 92, 3-l6]) 중어떤것에의해제조될수있다. 항체는이중특이성항체일수도있다. 이중특이성항체를제조하는방법은당업계에알려져있다. 전체길이이중특이성항체의종래생산은서로다른특이성을가지는두개의이뮤노글로불린중쇄-경쇄쌍의공발현을기반으로한다 [Milstein et al., 1983, Nature 305: ]. 이뮤노글로불린중쇄및경쇄의무작위조합때문에, 이러한하이브리도마 ( 쿼드로마 ) 는 10 종의항체분자들의잠재적인혼합물을생산하는데, 이들중단하나만이정확한이중특이성구조를갖는다. 유사한방법이국제공보 WO93/08829 및 [Traunecker et al., EMBO J. 10: (1991)] 에개시되어있다. 다른접근에따르면, 원하는결합특이성 ( 항체-항원결합영역 ) 을가지는항체가변도메인이이뮤노글로불린불변도메인서열에융합된다. 융합은바람직하게적어도경첩부분, C H 2, 및 C H 3 영역을포함하는이뮤노글로불 린중쇄불변도메인과이루어진다. 하나이상의융합부에존재하는, 경쇄결합에필수적인부위를포함하는첫번째중쇄불변영역 (C H 1) 을가지는것이바람직하다. 이뮤노글로불린중쇄융합및, 원한다면, 이뮤노글로불린경쇄를코딩하는서열을가지는핵산이개별적인발현벡터에삽입되고, 적절한숙주생물에함께형질감염된다. 이것은구축에사용된세폴리펩티드사슬의불균등한비율이최적의수율을제공하는실시양태에서세폴리펩티드단편의상호적인비율을조정하는데큰유연성을제공한다. 그러나, 2개이상의폴리펩티드사슬이동등한비율로발현되는것이높은수율을야기하거나, 또는비율이별로중요하지않을때에는폴리펩티드사슬 2개또는 3개모두의코딩서열을하나의발현벡터에삽입하는것이가능하다. [0858] [0859] [0860] 이러한접근의실시양태에서, 이중특이성항원은한쪽팔에첫번째결합특이성을가지는혼성화이뮤노글로불린중쇄를가지고, 다른쪽팔에혼성화이뮤노글로불린중쇄-경쇄쌍 ( 두번째결합특이성을제공하는 ) 을갖는다. 이중특이성분자의한쪽반에만이뮤노글로불린경쇄가존재하는것이손쉬운분리방법 ( 본원에참고자료로전문이포함된국제공보 WO94/04690) 을제공하기때문에, 이러한비대칭적구조는원하지않는이뮤노글로불린사슬조합으로부터원하는이중특이성화합물의분리를용이하게한다. 이중특이성항체생성에대한추가적인세부사항을위해서는예를들어, [ Suresh et al., Methods in Enzymology, 1986, 121: 210]; [Rodrigues et al., 1993, J. of Immunology 151: ]; [Carter et al., 1992, Bio/Technology 10: ]; [Carter et al., 1995, J. of Hematotherapy 4: ]; [ Merchant et al., 1998, Nature Biotechnology 16: ] 을참고하라. 이러한기법을사용하여, 이중특이성항체를본원에한정한질병의치료또는예방에사용될용도로제조할수있다. 양기능항체도유럽특허공보 EPA 호에서설명된다. 본참고자료에개시된것처럼, 혼성화또는양

88 기능항체는생물학적으로, 즉세포융합기법에의해, 또는화학적으로, 특히가교결합제또는디술피드-가교형성시약을이용하여얻어질수있고, 전체항체또는그의단편을포함할수있다. 이러한혼성화항체를얻는방법은예를들어국제공보 WO83/03679, 및유럽특허공보 EPA 호에개시되어있으며, 이들둘다본원에참고자료로포함되어있다. [0861] [0862] 항체는암세포항원, 바이러스항원, 또는미생물항원에면역특이적으로결합하는항체의기능적으로활성있는단편, 유도체또는유사체, 또는종양세포또는매트릭스에결합하는다른항체일수있다. 이러한점에서, " 기능적으로활성있는것 " 은단편, 유도체, 또는유사체가, 단편, 유도체, 또는유사체가유래한항체가인식하는것과동일한항원을인식하는항-항이디오타입항체를유도할수있음을의미한다. 구체적으로, 한예시적실시양태에서이뮤노글로불린분자의이디오타입의항원성은프레임워크, 및특이적으로항원을인식하는 CDR 서열의 C-말단부위인 CDR 서열의결실에의해강화될수있다. 어떤 CDR 서열이항원에결합하는지결정하기위해, CDR 서열을포함하는합성펩티드가당업계에알려진임의의결합검정방법 ( 즉, BIA 코어검정 ) 에의해서도항원을이용한결합검정에사용될수있다 ( 예를들어, [Kabat et al., 1991, Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, National Institute of Health, Bethesda, Md]; [Kabat E et al., 1980, J. of Immunology 125 (3): ] 참조 ). 다른유용한항체는항체분자의펩신분해에의해생산되는가변영역, 경쇄불변구간및중쇄 CH1 도메인을포함하는 F(ab') 2 단편, 및 F(ab') 2 단편의디술피드가교를환원시킴으로써생성되는 Fab 단편을포함하나이에 제한되지않는다. 다른유용한항체는항체의중쇄및경쇄이합체, 또는 Fvs 또는단일사슬항체 (SCAs) 와같은그의극히작은단편중어떤것이나 ( 예를들면, 미국특허제 호 ; [Bird, 1988, Science 242: ]; [Huston et al., 1988, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85: ] ; 및 [Ward et al., 1989, Nature 334: ] 에설명되어있는바와같이 ), 또는항체와동일한특이성을가지는다른임의의분자이다. [0863] [0864] 추가적으로, 표준재조합 DNA 기법을이용하여제조될수있는인간및비인간부분양쪽모두를포함하는키메라및인간화모노클로날항체와같은재조합항체도유용한항체이다. 키메라항체는뮤린모노클로날로부터유래한가변영역및인간이뮤노글로불린불변영역을가지는항체와같이서로다른부분이서로다른동물종에서유래한분자이다 ( 예를들면, 본원에참고자료로전문이포함되어있는카빌리등의미국특허제 호및보스등의미국특허제4,816397호참조 ). 인간화항체는비인간종의하나이상의상보성결정영역 (CDRs) 및인간이뮤노글로불린분자의프레임워크영역을가지는, 비인간종으로부터의항체분자이다 ( 예를들면, 본원에참고자료로전문포함되어있는퀸의미국특허제5,585,089호참조 ). 이러한키메라및인간화모노클로날항체는당업계에알려진재조합 DNA 기법, 예를들어본원에참고자료로전문이포함된국제공보 WO 87/02671; 유럽특허공보제184,187호 ; 유럽특허공보제171496호 ; 유럽특허공보제173494호 ; 국제공보 WO 86/01533; 미국특허제 호 ; 유럽특허공보제12,023호 ; [Berter et al., 1988, Science 240: ]; [Liu et al., 1987, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 84: ]; [Liu et al., 1987, J. Immunol. 139: ]; [Sun et al., 1987, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 84: ]; [Nishimura et al., 1987, Cancer. Res. 47: ]; [Wood et al., 1985, Nature 314: ]; 및 [Shaw et al., 1988, J. Natl. Cancer Inst. 80: ]; [Morrison, 1985, Science 229: ]; [Oi et al., 1986, BioTechniques 4: 214]; 미국특허제 호 ; [Jones et al., 1986, Nature 321: ]; [Verhoeyan et al. (1988) Science 239: 1534]; 및 [Beidler et al., l988, J. Immunol. 141: ] 에설명된방법을이용하여제조될수있다. 완전인간항체가특히바람직하고, 내인성이뮤노글로불린중쇄및경쇄유전자를발현할수없으나인간중쇄및경쇄유전자를발현할수있는트랜스제닉마우스를이용하여생산할수있다. 트랜스제닉마우스는선택된항원, 예를들면본발명의폴리펩티드전체또는일부를이용하여일반적인방법으로면역화된다. 항원에대응하는모노클로날항체는종래의하이브리도마기술을이용하여얻어질수있다. 트랜스제닉마우스에안착한인간이뮤노글로불린형질전환유전자는 B 세포분화중에재배열되고, 그후분류군바꾸기 (class switching) 및체세포돌연변이를겪는다. 따라서이러한기법을이용하여, 치료적으로유용한 IgG, IgA, IgM 및 IgE 항체를제조하는것이가능하다. 인간항체를생산하는이기술의개괄을위해서론버그및휴스자 [1995, Int. Rev. Immunol. 13: 65-93] 를참조하라. 인간항체및인간모노클로날항체를생산하는이기술의상세한논의및이러한항체를생산하는프로토콜에대해서는본원에참고자료로전문이포함된미국특허제 호 ; 제 호 ; 제 호 ; 제 호 ; 및제 호를참조하라. 다른인간항체는예를들어에이비제닉스사 ( 캘리포니아주프리몬트소재 ) 및젠팜 ( 캘리포니아주샌조스소재 ) 에서상업적으로얻을수있다

89 [0865] [0866] [0867] [0868] [0869] 선택된에피토프를인식하는완전인간항체는 " 인도된선택 " 으로불리는기법을이용하여생성될수있다. 이접근에서, 선택된비인간모노클로날항체, 예를들어마우스항체는동일한에피토프를인식하는완전인간항체의선택을인도하는데사용된다 [Jespers et al. (1994) Biotechnology 12: ]. 인간항체는또한파지전시라이브러리를포함하는당업계에알려진다양한기법을이용하여생산될수있다 ([Hoogenboom and Winter, J. Mol. Biol., 227: 381 (1991)]; [Marks et al., J. Mol. Biol., 222: 581 (1991)]; [Quan, M. P. and Carter, P The rise of monoclonal antibodies as therapeutics. In Anti-IgE and Allergic Disease, Jardieu, P. M. and Fick Jr., R. B, eds., Marcel Dekker, New York, NY, Chapter 20, pp ]). 다른실시양태에서, 항체는예를들어항체가항체가아닌다른단백질 ( 또는그의일부, 바람직하게단백질의아미노산 10, 20, 또는 50개이상인일부 ) 의아미노산서열의 N-말단또는 C-말단에공유결합 ( 즉, 펩티드결합 ) 을통해융합된것과같은기능적으로활성있는항체의융합단백질, 또는, 그의단편이다. 바람직하게, 항체또는그의단편은다른단백질의불변도메인의 N-말단에공유적으로연결된다. 항체는임의의종류의분자의공유적부착이항체가항원결합면역특이성을유지하게하는한, 다른종류의분자의그러한공유적부착에의해변형된유사체및유도체를포함한다. 예를들어, 하지만제한하지않는방식으로, 항체의유도체및유사체는당화, 아세틸화, PEG화, 인산화, 아미드화, 알려진보호기 / 차단기에의한유도화, 단백질분해성절단, 세포항체단위또는다른단백질과의연결등에의해추가로변형된적이있는것들을포함한다. 수많은화학변형중임의의것은특이적인화학적절단, 아세틸화, 포르밀화, 튜니카마이신존재하의대사합성등을포함하나이에제한되지않는알려진기법에의해수행될수있다. 또한, 유사체또는유도체는 1 이상의비천연적인아미노산을포함할수있다. 항체는 Fc 수용체와상호작용하는아미노산잔기에변형 ( 즉, 치환, 결실또는첨가 ) 을가지는항체를포함한다. 특히, 항체는항-Fc 도메인및 FcRn 수용체간의상호작용에관여하는것으로알려진아미노산잔기에변형을가진항체를포함한다 ( 본원에참고자료로전문이포함된국제공보 WO97/34631 참조 ). 암세포항원에면역특이적인항체는예를들어, 제넨테크 ( 캘리포니아주샌프란시스코소재 ) 에서상업적으로얻을수있거나, 또는화학적합성또는재조합발현기법과같이당업자에게알려진임의의방법으로제조될수있다. 암세포항원에면역특이적인항체를코딩하는뉴클레오티드서열은진뱅크데이터베이스또는그와같은데이터베이스, 문헌으로부터, 또는통상적인클로닝및시퀀싱에의해얻을수있다. 특정한실시양태에서, 암치료및예방을위한알려진항체가사용될수있다. 암세포항원에면역특이적인항체는상업적으로얻거나또는재조합발현기법과같이당업자에게알려진임의의방법에의해생산될수있다. 암세포항원에면역특이적인항체를코딩하는뉴클레오티드서열은진뱅크데이터베이스또는그와같은데이터베이스, 문헌으로부터, 또는통상의클로닝및시퀀싱에의해얻어질수있다. 암치료에이용가능한항체의예는인간화된항-HER2 모노클로날항체, 전이성유방암환자의치료를위한헤르셉틴 ( 제넨테크사의트라츠주 마브 ); 비-호지킨림프종환자의치료를위한항-CD20 키메라모노클로날항체인리턱산 ( 제넨테크사의리턱시마브 ); 난소암의치료를위한뮤린항체인오바렉스 ( 마이애미주소재알타렉스주식회사 ); 결장암치료를위한뮤린 IgG 2a 항체인파노렉스 ( 노스캐롤라이나주소재글락소웰컴 ); 두부및목의암과같은상피성장인자양성암의치료를위한항-EGFR IgG 키메라항체인세턱시마브에르비턱스 ( 뉴욕주소재임클론시스템즈사 ); 육종의치료를위한인간화항체인비탁신 ( 매릴랜드주소재메드이뮨사 ); 만성림프구백혈병 (CLL) 의치료를위한인간화된 IgG 1 항체인캠패쓰 I/H( 매사츄세츠주소재루코사이트 ); 급성골수성백혈병 (AML) 의치료를위한인간화된항- CD33 IgG 항체인스마트 MI95( 캘리포니아주소재프로테인디자인랩사 ); 비-호지킨림프종의치료를위한인간화된항-CD22 IgG 항체인림포사이드 ( 뉴저지주소재이뮤노메딕스사 ); 비-호지킨림프종의치료를위한인간화된항-HLA-DR 항체인스마트 ID10( 캘리포니아주소재프로테인디자인랩사 ); 비-호지킨림프종의치료를위한방사성표지된뮤린항-HLA-Dr10 항체인옹코림 ( 캘리포니아주소재테크니클론사 ); 호지킨병또는비-호지킨림프종의치료를위한인간화된항-CD2 mab인올로뮨 ( 캘리포니아주소재바이오트랜스플랜트 ); 폐암및결장암의치료를위한항-VEGF 인간화항체인아바스틴 ( 캘리포니아주소재제넨테크사 ); 비-호지킨림프종의치료를위한항-CD22 항체인에프라투자마브 ( 뉴저지주소재이뮤노메딕스사및캘리포니아주소재암젠 ); 및결장암의치료를위한인간화된항-CEA 항체인 CEA사이드 ( 뉴저지주소재이뮤노메딕스 ) 를포함하나, 이에제한되지않는다. [0870] 암치료에유용한다른항체들로는 CA125 ( 난소 ), CA15-3 ( 암종 ), CA19-9 ( 암종 ), L6 ( 암종 ), 루이스 Y ( 암 종 ), 루이스 X ( 암종 ), 알파태아단백질 ( 암종 ), CA 242 ( 결장 ), 태반알칼리인산분해효소 ( 암종 ), 전립선특이

90 적항원 ( 전립선 ), 전립선산인산효소 ( 전립선 ), 상피성장인자 ( 암종 ), MAGE-1 ( 암종 ), MAGE-2 ( 암종 ), MAGE-3 ( 암종 ), MAGE-4 ( 암종 ), 항-트랜스페린수용체 ( 암종 ), p97 ( 흑색종 ), MUC1-KLH ( 유방암 ), CEA ( 결장 ), gplo0 ( 흑색종 ), MART1 ( 흑색종 ), PSA ( 전립선 ), IL-2 수용체 (T세포백혈병및림프종 ), CD20 ( 비-호지킨림프종 ), CD52 ( 백혈병 ), CD33 ( 백혈병 ), CD22 ( 림프종 ), 인간융모성성선자극호르몬 ( 암종 ), CD38 ( 다발골수종 ), CD40 ( 림프종 ), 뮤신 ( 암종 ), P21 ( 암종 ), MPG ( 흑색종 ), 및 Neu 종양유전자생성물 ( 암종 ) 과같은항원에대한항체를포함하나, 이에제한되지않는다. 몇몇특정한, 유용한항체는 BR96 mab [Trail, P. A., Willner, D., Lasch, S. J., Henderson, A. J., Hofstead, S. J., Casazza, A. M., Firestone, R. A., Hellstroem, I., Hellstroem, K. E., "Cure of Xenografted Human Carcinomas by BR96-Doxorubicin Immunoconjugates" Science 1993, 261, ], BR64 [Trail, PA, Willner, D, Knipe, J., Henderson, A. J., Lasch, S. J., Zoeckler, M. E., Trailsmith, M. D., Doyle, T. W., King, H. D., Casazza, A. M., Braslawsky, G. R., Brown, J. P., Hofstead, S. J., Greenfield, R. S., Firestone, R. A., Mosure, K., Kadow, D. F., Yang, M. B., Hellstrom, K. E., and Hellstrom, I. "Effect of Linker Variation on the Stability, Potency, and Efficacy of Carcinoma-reactive BR64-Doxorubicin Immunoconjugates" Cancer Research 1997, 57, ], CD40 항원에대한 mabs, 예를들어 S2C6 mab [Francisco, J. A., Donaldson, K. L., Chace, D., Siegall, C. B., and Wahl, A. F. "Agonistic properties and in vivo antitumor activity of the anti-cd-40 antibody, SGN-14" Cancer Res. 2000, 60, ], CD70 항원에대한 mabs, 예를들어 1F6 mab 및 2F2 mab, 및 CD30 항원에대한 mabs, 예를들어 AC10 ([Bowen, M. A., Olsen, K.J., Cheng, L., Avila, D., and Podack, E.R. "Functional effects of CD30 on a large granular lymphoma cell line YT" J. Immunol., 151, , 1993]; [Wahl et al., 2002 Cancer Res. 62(13): ]) 을포함하나, 이에제한되지않는다. 종양관련항원에결합하는많은다른내재화항체가사용될수있고, 검토되어왔다 ([Franke, A. E., Sievers, E. L., and Scheinberg, D. A., "Cell surface receptor-targeted therapy of acute myeloid leukemia: a review" Cancer Biother Radiopharm. 2000, 15, ]; [Murray, J. L., "Monoclonal antibody treatment of solid tumors: a coming of age" Semin Oncol. 2000, 27, 64-70]; [Breitling, F., and Dubel, S., Recombinant antibodies, John Wiley, and Sons, New York, 1998]). [0871] 특정실시양태에서, 항체는트라츠주마브 ( 전체길이, 인간화된항 -HER2 (MW )), 헤르셉틴 F(ab') 2 ( 항 - HER2로부터효소적으로얻어짐 (MW )), 4D5 ( 전체길이, 뮤린항HER2, 하이브리도마로부터유래됨 ), rhu4d5 ( 일시적으로발현되는, 전체길이인간화항체 ), rhufab4d5 ( 재조합인간화된 Fab(MW 47738)), 4D5Fc8 ( 전체길이, 뮤린항HER2, 돌연변이된 FcRn 결합도메인을가짐 ), 또는 Hg (" 무힌지 " 전체길이인간화된 4D5, 중쇄경첩시스테인이세린으로돌연변이됨. 이콜라이에서발현됨 ( 따라서글리코실화되지않음 )) 가아니다. [0872] 다른특정한실시양태에서, 자가면역질환의치료또는예방을위한알려진항체는본발명의조성물및방법에따라사용된다. 자가면역항체생산을담당하는세포의항원에대해면역특이적인항체들은임의의기관 ( 즉, 대학과학자또는회사 ) 으로부터입수할수있거나, 또는화학적합성또는재조합발현기법과같이당업자에게알려진임의의방법에의하여생산될수있다. 다른실시양태에서, 자가면역질환의치료에면역특이적인유용한항체는항-핵항체 ; 항-dsDNA; 항-ssDNA, 항-카디올리핀항체 IgM, IgG; 항-인지질항체 IgM, IgG; 항-SM 항체 ; 항-미토콘드리아항체 ; 티로이드항체 ; 마이크로솜항체 ; 티로글로불린항체 ; 항-SCL-70; 항- Jo; 항-U 1 RNP ; 항-La/SSB; 항 SSA; 항-SSB; 항-Perital 세포항체 ; 항-히스톤 ; 항-RNP; C-ANCA; P-ANCA; 항 동원체 ; 항 - 피브릴라린, 및항 -GBM 항체를포함하나, 이에제한되지않는다. [0873] [0874] [0875] 특정실시양태에서, 유용한항체는활성화된림프구상에서발현되는수용체또는수용체복합체양쪽모두에결합할수있다. 수용체또는수용체복합체는이뮤노글로불린유전자상과구성원, TNF 수용체상과구성원, 인테그린, 시토카인수용체, 케모카인수용체, 주요조직적합단백질, 렉틴, 또는보체조절단백질을포함할수있다. 적절한이뮤노글로불린상과구성원의제한하지않는예는 CD2, CD3, CD4, CD8, CD19, CD22, CD28, CD79, CD90, CD152/CTLA-4, PD-1, 및 ICOS이다. 적절한 TNF 수용체상과구성원의제한하지않는예는 CD27, CD40, CD95/Fas, CD134/OX40, CD137/4-1BB, TNFR-1, TNFR-2, RANK, TACI, BCMA, 오스테오프로테게린, Apo2/TRAIL-Rl, TRAIL-R2, TRAIL-R3, TRAIL-R4, 및 APO-3이다. 적절한인테그린의제한하지않는예는 CD11a, CD11b, CD11c, CD18, CD29, CD41, CD49a, CD49b, CD49c, CD49d, CD49e, CD49f, CD103, 및 CD104이다. 적절한렉틴의제한하지않는예는 C형, S형, 및 I형렉틴이다. 한실시양태에서, 리간드는자가면역질환과연관된활성화된림프구에결합한다. 다른특정한실시양태에서, 바이러스또는미생물항원에면역특이적인유용한리간드는모노클로날항체이다

91 항체는키메라, 인간화된또는인간모노클로날항체일수있다. 본원에서사용될때, " 바이러스항원 " 이라는용어는면역반응을유발할수있는임의의바이러스펩티드, 폴리펩티드단백질 ( 즉, HIV gpl20, HIV nef, RSV F 당단백질, 인플루엔자바이러스뉴라미니다아제, 인플루엔자바이러스헤마글루티닌, HTLV tax, 단순헤르페스바이러스당단백질 ( 예를들면, gb, gc, gd, 및 ge) 및 B형간염표면항원 ) 을포함하나이에제한되지않는다. 본원에서사용될때, " 미생물항원 " 이라는용어는면역반응을유발할수있는임의의미생물펩티드, 폴리펩티드, 단백질, 당류, 다당류, 또는지질분자 ( 즉, 박테리아, 진균류, 병원성원생동물, 또는 LPS 및캡슐다당류 5/8을포함하는효모폴리펩티드 ) 를포함하나, 이에제한되지않는다. [0876] [0877] 바이러스또는미생물항원에면역특이적인항체는예를들어 BD 바이오사이언스 ( 캘리포니아주샌프란시스코소재 ), 케미콘인터내셔널사 ( 캘리포니아주테메큘라소재 ), 또는벡터래버러토리즈사 ( 캘리포니아주벌링엄소재 ) 에서상업적으로얻을수있거나, 또는화학적합성또는재조합발현기법과같이당업자에게알려진임의의방법에의해생산될수있다. 바이러스또는미생물항원에면역특이적인항체를코딩하는뉴클레오티드서열은진뱅크데이터베이스또는그와같은데이터베이스, 문헌으로부터, 또는통상의클로닝및시퀀싱에의해얻을수있다. 특정한실시양태에서, 유용한리간드는본원에개시된방법에따른바이러스또는미생물감염의치료또는예방에유용한것들이다. 바이러스감염또는미생물감염의치료에유용한이용가능한항체의예는호흡기세포융합바이러스 (RSV) 감염환자의치료에유용한인간화된항-RSV 모노클로날항체인시나지스 ( 매릴랜드주소재메드이뮨사 ), HIV 감염의치료에유용한 CD4 융합항체인 PRO542( 프로제닉스 ); B형간염바이러스의치료에유용한인간항체인오스타비르 ( 캘리포니아주소재프로테인디자인랩사 ), 시토메갈로바이러스 (CMV) 의치료에유용한인간화된 IgG 1 항체인프로토비르 ( 캘리포니아주소재프로테인디자인랩사 ); 및항-LPS 항체를포함하 나, 이에제한되지않는다. [0878] 감염성질병의치료에유용한다른항체는박테리아의병원성균주 ( 스트렙토코커스파이오진스 (Streptococcus pyogenes), 스트렙토코커스뉴모니아 (Streptococcus pneumoniae), 네이저리아고너리아 (Neisseria gonorrheae), 네이저리아메닌지티디스 (Neisseria meningitidis), 코리네박테리움디프테리아 (Corynebacterium diphtheriae), 클로스트리디움보툴리눔 (Clostridium botulinum), 클로스트리디움퍼프링엔스 (Clostridium perfringens), 클로스트리디움테타니 (Clostridium tetani), 헤모필러스인플루엔자 (Hemophilus influenzae), 클레브시엘라뉴모니아 (Klebsiella pneumoniae), 클레브시엘라오재나 (Klebsiella ozaenas), 클레브시엘라리노스클레로모티스 (Klebsiella rhinoscleromotis), 스타필로코크어레우스 (Staphylococc aureus), 비브리오콜레라 (Vibrio colerae), 에쉐리히아콜라이 (Escherichia coli), 슈도모나스애루지노사 (Pseudomonas aeruginosa), 캠파일로박터 ( 비브리오 ) 페터스 (Campylobacter (Vibrio) fetus), 에어로모나스히드로필라 (Aeromonas hydrophila), 바실러스세레우스 (Bacillus cereus), 에드워드시엘라타르다 (Edwardsiella tarda), 예르시니아엔테로콜리티카 (Yersinia enterocolitica), 예르시니아페스티스 (Yersinia pestis), 예르시니아슈도튜버큘로시스 (Yersinia pseudotuberculosis), 쉬겔라디센터리아 (Shigella dysenteriae), 쉬겔라플렉스너리 (Shigella flexneri), 쉬겔라손네이 (Shigella sonnei), 살모넬라티피무리움 (Salmonella typhimurium), 트레포네마팔리덤 (Treponema pallidum), 트레포네마퍼테뉴 (Treponema pertenue), 트레포네마카라테늄 (Treponema carateneum), 보렐리아빈센티 (Borrelia vincentii), 보렐리아부르그도르페리 (Borrelia burgdorferi), 렙토스피라익테로헤모라지아 (Leptospira icterohemorrhagiae), 미코박테리움튜버큘로시스 (Mycobacterium tuberculosis), 뉴모시스티스카리니 (Pneumocystis carinii), 프란시셀라툴라렌시스 (Francisella tularensis), 브루셀라아버투스 (Brucella abortus), 브루셀라수이스 (Brucella suis), 브루셀라멜리텐시스 (Brucella melitensis), 미코플라즈마종 (Mycoplasma spp.), 리켓치아프로와제키 (Rickettsia prowazeki), 리켓치아츄츄구무시 (Rickettsia tsutsugumushi), 클라마이디아종 (Chlamydia spp.)); 병원성진균류 ( 코키디오이데스이미티스 (Coccidioides immitis), 아스페르길러스푸미가터스 (Aspergillus fumigatus), 칸디다알비칸스 (Candida albicans), 블라스토미세스더마티티디스 (Blastomyces dermatitidis), 크립토코커스네오포만스 (Cryptococcus neoformans), 히스토플라스마캡슐라툼 (Histoplasma capsulatum)); 원생동물 ( 엔토모에바히스톨리티카 (Entomoeba histolytica), 톡소플라스마곤디 (Toxoplasma gondii), 트리초모나스테나스 (Trichomonas tenas), 트리초모나스호미니스 (Trichomonas hominis), 트리초모나스바지날리스 (Trichomonas vaginalis), 트리오아노소마잠비엔스 (Tryoanosoma gambiense), 트리파노소마로데시엔스 ( Trypanosoma rhodesiense), 트리파노소마크루지 (Trypanosoma cruzi), 레이슈마니아도노바니 (Leishmania donovani), 레이슈마니아트로피카 (Leishmania tropica), 레이슈마니아브라질리엔시스 (Leishmania braziliensis), 뉴모시스티스뉴모니아 (Pneumocystis pneumonia), 플라스모디움비박스 (Plasmodium vivax), 플라스모디움팔시파룸 (Plasmodium

92 falciparum), 플라스모디움말라리아 (Plasmodium malaria)); 또는연충 ( 엔테로비우스버미큘라리스 (Enterobius vermicularis), 트리추리스트리츄라 (Trichuris trichiura), 아스카리스럼브리코이즈 (Ascaris lumbricoides), 트리치넬라스피랄리스 (Trichinella spiralis), 스트롱일로이즈스터코랄리스 ( Strongyloides stercoralis), 쉬스토소마자포니쿰 (Schistosoma japonicum), 쉬스토소마만소니 (Schistosoma mansoni), 쉬스토소마해마토비움 (Schistosoma haematobium), 및구충 ) 으로부터의항원에대한항체를포함하나, 이에제한되지않는다. [0879] [0880] [0881] [0882] [0883] [0884] [0885] [0886] 바이러스성질병의치료를위한본발명의다른유용한항체는폭스바이러스과 ( 科 ), 헤르페스바이러스과, 단순헤르페스바이러스 1, 단순헤르페스바이러스 2, 아데노바이러스과, 파포바바이러스과, 엔테로바이러스과, 피코나바이러스과, 파보바이러스과, 레오바이러스과, 레트로바이러스과, 인플루엔자바이러스, 파라인플루엔자바이러스, 유행이하선염, 홍역, 호흡기세포융합바이러스, 풍진, 아보바이러스과, 랩도바이러스과, 아레나바이러스과, A형간염바이러스, B형간염바이러스, C형간염바이러스, E형간염바이러스, A/B이외간염바이러스, 리노바이러스과, 코로나바이러스과, 로토바이러스과, 및인간면역결핍바이러스를예로하나이에제한되지않는병원성바이러스의항원에대한항체를포함하나, 이에제한되지않는다. 암진단및치료법을위한효과적인세포표적을발견하려는시도에서, 연구자들은 1종이상의정상비암성세포와비교했을때 1종이상의특정유형의암세포의표면에서특이적으로발현되는막횡단또는종양-관련된폴리펩티드를밝혀내려고해왔다. 종종, 이러한종양-관련된폴리펩티드들은비-암성세포의표면상에비해암세포의표면상에더욱풍부하게발현된다. 이러한종양-관련된세포표면항원폴리펩티드의확인은항체-기반치료법을통한표적암세포를특이적으로파괴하는것을가능하게했다. 식 Ⅰc 항체약물접합체 (ADC) 의 Ab를포함하며암치료에유용할수있는항체는종양관련항원 (TAA) 에대한항체를포함하나, 이에제한되지않는다. 이러한종양관련항원은당업계에알려져있고, 당업계에잘알려진방법및정보를이용하여항체를생성하는용도로제조될수있다. TAA의예는 (1) 내지 (35) 를포함하나, 아래열거된 TAA (1) 내지 (35) 에제한되지않는다. 편의를위해, 당업계에모두알려진이러한항원에관한정보를아래에열거했고, 명칭, 대체명칭, 진뱅크수탁번호및일차적참조문헌을포함한다. 항체의표적이되는종양-관련된항원은열거된대응서열 ( 서열번호 : 1 내지 35) 에서확인되는서열또는언급된참조에서확인되는서열과비교하여약 70%, 80%, 85%, 90%, 또는 95% 이상의서열동일성을가지는모든아미노산서열변이및이소형을포함한다. 특정실시양태에서, 아미노산서열변이를가지는 TAA는열거된대응서열 ( 서열번호 : 1 내지 35) 에서발견되는서열을가지는 TAA와실질적으로동일한생물학적성질또는특성을나타낸다. 예를들어, 변이서열을가지는 TAA는일반적으로열거된대응서열을가지는 TAA에특이적으로결합하는항체에특이적으로결합할수있다. 본원에구체적으로열거된서열및개시내용은참고자료로명백히포함되었다. 종양-관련된항원 (1) 내지 (35) : (1) BMPRIB ( 골형태형성단백질수용체-IB형, 진뱅크수탁번호 NM_001203, [ten Dijke, P., et al. Science 264 (5155): (1994)], [Oncogene 14(11) : (1997)]); WO ( 청구항 2); WO ( 청구항 12); US A1 (38-39 쪽 ); WO ( 청구항 13; 296 쪽 ); WO (91-92 쪽 ); WO ( 실시예 2; 쪽 ); WO ( 청구항 6); WO ( 청구항 2; 도 112); WO ( 청구항 1; 183 쪽 ); WO ( 쪽 ) ; WO ( 쪽 ); WO ( 청구항 27; 376 쪽 ); WO ( 실시예 ; 도 4) NP_ 골형태형성단백질수용체, IB형 /pid=np_ 상호참조 : MIM: ; NP_ ; NM_001203_1 아미노산 502 개 [0887]

93 [0888] [0889] [0890] [0891] [0892] [0893] ( 서열번호 : 1) (2) E16 (LAT1, SLC7A5, 진뱅크수탁번호 NM_003486); [Biochem. Biophys. Res. Commun. 255 (2), (1999)], [Nature 395 (6699): (1998)], [Gaugitsch, H. W., et al. (1992) J. Biol. Chem. 267 (16): ]); WO ( 실시예 2); WO ( 실시예 Ⅳ); WO ( 청구항 12); WO ( 청구항 1); WO ( 실시예 2); WO ( 청구항 19; 쪽 ); WO ( 청구항 27; 222,393 쪽 ) ; WO ( 청구항 10; 293 쪽 ); WO ( 청구항 33; 쪽 ) ; WO ( 청구항 5; 쪽 ); US ( 도 3); WO ( 청구항 12; 150 쪽 ); NP_ 용질담체족 7 ( 양이온성아미노산전달체, y+ 계 ), 5 원 /pid=np_ 호모사피엔스상호참조 : MIM: ; NP_ ; NM_ ; NM_003486_1 아미노산 507 개 [0894] [0895] [0896] [0897] [0898] [0899] [0900] ( 서열번호 : 2) (3) STEAP1 ( 전립선의 6개의막횡단상피항원, 진뱅크수탁번호 NM_ [Cancer Res. 61 (15), (2001)], [Hubert, R. S., et al. (1999) Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 96 (25): ]); WO ( 청구항 6); WO ( 도 1L); EP ( 실시예 11); WO ( 청구항 2); WO ( 청구항 12); US ( 실시예 5); US ( 실시예 5); US ( 도 2); WO ( 실시예 5; 쪽 ); WO ( 실시예 9; 도 13A, 실시예 53; 173 쪽, 실시예 2; 도 2A); NP_ 전립선의 6개의막횡단상피항원상호참조 : MIM: ; NP_ ; NM_012449_1 아미노산 339 개 [0901] [0902] [0903] [0904] [0905] ( 서열번호 : 3) (4) 0772P (CA125, MUC16, 진뱅크수탁번호 AF [J. Biol. Chem. 276 (29): (2001)]); WO ( 청구항 14); WO ( 청구항 6; 도 12); WO ( 청구항 15; 쪽 ); US ( 실시예 16); US ( 청구항 6); WO ( 청구항 6; 쪽 ); 상호참조 : GI: ; AAK ; AF361486_1-93 -

94 [0906] 아미노산 6995 개 [0907]

95 [0908]

96 [0909] [0910] [0911] [0912] [0913] ( 서열번호 : 4) (5) MPF (MPF, MSLN, SMR, 거대핵세포강화인자, 메소텔린, 진뱅크수탁번호 NM_ [Yamaguchi, N., et al. Biol. Chem. 269(2), (1994)], [Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 96 (20): (1999)], [Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 93 (1): (1996)], [J. Biol. Chem. 270 (37): (1995)]); WO ( 청구항 14); WO ( 청구항 13; 쪽 ); WO ( 청구항 4; 쪽 ); WO ( 쪽 ); WO (52-57 쪽 ); 상호참조 : MIM: ; NP_ ; NM_005823_1-96 -

97 [0914] 아미노산 622 개 [0915] [0916] [0917] [0918] [0919] [0920] ( 서열번호 : 5) (6) Napi3b (NAPI-3B, NPTⅡb, SLC34A2, 용질담체족 34 ( 인산나트륨 ), 2 원, 제Ⅱ형나트륨-의존포스페이트전달체 3b, 진뱅크수탁번호 NM_006424, [J. Biol. Chem. 277 (22): (2002)], [Genomics 62 (2): (1999)], [Feild, J. A., et al. (1999) Biochem. Biophys. Res. Commun. 258 (3): )]; WO ( 청구항 2); EP ( 실시예 11); WO ( 청구항 13; 326 쪽 ); EP ( 청구항 1 ; 쪽 ) ; WO ( 청구항 20; 329 쪽 ); WO ( 실시예 Ⅳ); WO ( 청구항 24; 쪽 ); 상호참조 : MIM: ; NP_ ; NM_006424_1 아미노산 690 개 [0921] [0922] [0923] [0924] [0925] ( 서열번호 : 6) (7) Sema 5b (FLJ10372, KIAA1445, Mm.42015, SEMA5B, SEMAG, 세마포린 5b Hlog, 세마도메인, 7개의트롬보스폰딘반복체 ( 제1형및유사제1형 ), 막횡단도메인 (TM) 및짧은세포질도메인, ( 세마포린 ) 5B, 진뱅크수탁번호 AB040878, [Nagase T., et al. (2000) DNA Res. 7 (2): ]); WO ( 청구항 1); WO ( 청구항 1); WO ( 청구항 1; 50 쪽 ); WO ( 청구항 l; 41-43, 쪽 ); WO ( 청구항 20); WO ( 청구항 11); 수탁 : Q9P283; EMBL; AB ; BAA Genew; HGNC: 10737;

98 [0926] 아미노산 1093 개 [0927] [0928] [0929] [0930] [0931] [0932] ( 서열번호 : 7) (8) PSCA hlg ( C12Rik, C530008O16Rik, RIKEN cdna C12, RIKEN cdna C12 유전자, 진뱅크수탁번호 AY358628); US ( 청구항 2); US ( 청구항 12); US ( 청구항 11); US ( 청구항 11) ; US ( 실시예 5); WO ( 청구항 12); US ( 실시예 5); EP ( 청구항 1); WO ( 청구항 20); 상호참조 : GI: ; AAQ ; AY358628_1 아미노산 141 개 [0933] [0934] [0935] [0936] ( 서열번호 : 8) (9) ETBR ( 엔도텔린 B형수용체, 진뱅크수탁번호 AY275463); [Nakamuta M., et al. Biochem. Biophys. Res. Commun. 177, 34-39, 1991]; [Ogawa Y., et al. Biochem. Biophys. Res. Commun. 178, , 1991]; [Arai H., et al. Jpn. Circ. J. 56, , 1992]; [Arai H., et al. J. Biol. Chem. 268, , 1993]; [Sakamoto A., Yanagisawa M., et al. Biochem. Biophys. Res. Commun. 178, , 1991]; [Elshourbagy N. A., et al. J. Biol. Chem. 268, , 1993]; [Haendler B., et al. J. Cardiovasc. Pharmacol. 20, s1-s4, 1992]; [Tsutsumi M., et al. Gene 228, 43-49, 1999]; [Strausberg R. L., et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 99, , 2002]; [Bourgeois C., et al. J. Clin. Endocrinol. Metab. 82, , 1997]; [Okamoto Y., et al. Biol. Chem. 272, , 1997]; [Verheij J. B., et al. Am. J. Med. Genet. 108, , 2002]; [Hofstra R.M.W., et al. Eur. J. Hum. Genet. 5, , 1997]; [Puffenberger E. G., et al. Cell 79, , 1994]; [Attie T., et al, Hum. Mol. Genet. 4, , 1995]; [Auricchio A., et al. Hum. Mol. Genet. 5: , 1996]; [Amiel J., et al. Hum. Mol. Genet. 5, , 1996]; [Hofstra R.M.W., et al. Nat. Genet. 12, , 1996]; [Svensson P. J., et al. Hum. Genet. 103, , 1998]; [Fuchs S., et al. Mol. Med. 7, , 2001]; [Pingault V., et al. (2002) Hum. Genet. 111, ]; WO ( 청구항 1); WO ( 실시예 2); WO ( 청구항 151); WO ( 청구항 1); WO ( 청구항 1); WO ( 도 1); WO ( 도 6); WO ( 청구항 12; 144 쪽 ); WO ( 청구항 1; 쪽 ); EP ( 청구항 8; 도 2); WO ( 청구항 1; 쪽 ); US ; US ( 도 3); US ( 청구항 1a; Col 31-34); WO ;

99 [0937] 아미노산 442 개 [0938] [0939] [0940] [0941] [0942] [0943] ( 서열번호 : 9) (10) MSG783 (RNF124, 가상단백질 FLJ20315, 진뱅크수탁번호 NM_017763) ; WO ( 청구항 1); WO ( 실시예 2); WO ( 청구항 12); WO ( 청구항 14; 61 쪽 ); WO ( 청구항 1); WO ( 청구항 2; 도 93); WO ( 실시예 6); 상호참조 : LocusID: 54894; NP_ ; NM_017763_1 아미노산 783 개 [0944] [0945] [0946] [0947] [0948] [0949] ( 서열번호 : 10) (11) STEAP2 (HGNC_8639, IPCA-1, PCANAP1, STAMP1, STEAP2, STMP, 전립선암관련유전자 1, 전립선암관련단백질 1, 전립선의 6개의막횡단상피항원 2, 6개의막횡단전립선단백질, 진뱅크수탁번호 AF455138, [Lab. Invest. 82 (11): (2002)]); WO ; US ( 청구항 1; 도 1); WO ( 청구항 13; 쪽 ) ; WO ( 청구항 1; 도 4B); WO ( 청구항 11); WO ( 청구항 16); US ( 청구항 22); WO ( 청구항 12); US ( 청구항 12; 도 10); WO ( 청구항 23; 도 2); WO ( 청구항 12; 도 10); 상호참조 : GI: ; AAN ; AF455138_1 아미노산 490 개 [0950] [0951] [0952] [0953] ( 서열번호 : 11) (12) TrpM4 (BR22450, FLJ20041, TRPM4, TRPM4B, 일시적수용체잠재적양이온채널, M 아족, 4 원, 진뱅크수탁번호 NM_ [Xu, X. Z., et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 98 (19): (2001)], [Cell 109 (3):

100 (2002)], [J. Biol. Chem.278 (33): (2003)]); US ( 청구항 4); WO ( 청구항 14; 쪽 ); WO ( 청구항 1; 도 9A); WO ( 청구항 12); WO ( 청구항 27; 391 쪽 ); US ( 청구항 4); WO ( 청구항 14; 도 1A 내지 D); [0954] [0955] 상호참조 : MIM: ; NP_ ; NM_017636_1 아미노산 1214 개 [0956] [0957] [0958] [0959] [0960] [0961] ( 서열번호 : 12) (13) CRIPTO (CR, CR1, CRGF, CRIPTO, TDGF1, 기형암종-유래성장인자, 진뱅크수탁번호 NP_ 또는 NM_003212, [Ciccodicola, A., et al. EMBO J. 8 (7): (1989)], [Am. J. Hum. Genet. 49 (3): (1991)]); US ( 청구항 1); WO ( 실시예 1); WO ( 청구항 12); WO ( 청구항 2; 쪽 ); WO ( 청구항 2; 도 58); WO ( 청구항 1; 쪽, 105 쪽 ); WO ( 청구항 2; 도 1); US ( 실시예 2; Col 17-18); US ( 도 2); 상호참조 : MIM: ; NP_ ; NM_003212_1 아미노산 188 개 [0962] [0963] [0964] [0965] [0966] ( 서열번호 : 13) (14) CD21 (CR2 ( 보체수용체 2) 또는 C3DR (C3d/ 엡스타인바바이러스수용체 ) 또는 Hs 진뱅크수탁번호 M26004, [Fujisaku et al. (1989) J. Biol. Chem. 264 (4): ]); [Weis J. J., et al. J. Exp. Med. 167, , 1988]; [Moore M., et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 84, , 1987]; [Barel M., et al. Mol. Immunol. 35, , 1998]; [Weis J. J., et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 83, , 1986]; [Sinha S. K., et al. (1993) J. Immunol. 150, ]; WO ( 실시예 4); US ( 실시예 1); WO ( 청구항 9); WO ( 실시예 4); WO ( 도 ); WO ( 청구항 1); 수탁 : P20023; Q13866; Q14212; EMBL; M26004; AAA

101 [0967] 아미노산 1033 개 [0968] [0969] [0970] [0971] [0972] [0973] ( 서열번호 : 14) (15) CD79b (CD79B, CD79β, IGb ( 이뮤노글로불린-연관베타 ), B29, 진뱅크수탁번호 NM_ 또는 , [Proc. Natl. Acad. Sci. USA. (2003) 100 (7): ], [Blood (2002) 100 (9): ], [Muller et al. (1992) Eur. J. Immunol. 22 (6): ]); WO ( 청구항 2, 도 140); WO , US ( 청구항 1, 102 쪽 ); WO ( 청구항 9); WO ( 실시예 2); US ( 청구항 5, 15 쪽 ); US ; WO ( 청구항 1, 306 및 309 쪽 ); WO99/558658, US ( 청구항 13, 도 17A/B); WO ( 청구항 11, 쪽 ); 상호참조 : MIM: ; NP_ ; NM_000626_1 아미노산 229 개 [0974] [0975] [0976] [0977] [0978] [0979] ( 서열번호 : 15) (16) FcRH2 (IFGP4, IRTA4, SPAP1A (SH2 도메인함유포스파타아제고정단백질 1a), SPAP1B, SPAP1C, 진뱅크수탁번호 NM_030764, [Genome Res. 13(10) : (2003)], [Immunogenetics 54 (2): (2002)], [Blood 99 (8): (2002)], [Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 98 (17): (2001)], [Xu, M. J., et al. (2001) Biochem. Biophys. Res. Commun. 280 (3): ]; WO ( 청구항 2); WO ; WO ( 청구항 5; 도 18D-1 내지 18D-2); WO ( 청구항 12); WO ( 청구항 25); 상호참조 : MIM: ; NP_ ; NM_030764_1 아미노산 508 개 [0980]

102 [0981] [0982] [0983] [0984] ( 서열번호 : 16) (17) HER2 (ErbB2, 진뱅크수탁번호 M11730, [Coussens L., et al. Science (1985) 230(4730): ]); [Yamamoto T., et al. Nature 319, , 1986]; [Semba K., et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 82, , 1985]; [Swiercz J. M., et al. J. Cell Biol. 165, , 2004]; [Kuhns J. J., et al. J. Biol. Chem. 274, , 1999]; [Cho H.-S., et al. Nature 421, , 2003]; [Ehsani A., et al. (1993) Genomics 15, ]; WO ( 실시예 2); WO ( 도 1Ⅰ) ; WO ; WO ; WO ( 청구항 9); WO ( 청구항 1); US ; WO ( 청구항 1); WO ( 청구항 29; 도 1A 내지 B) ; WO ( 청구항 37; 도 5C); WO ( 실시예 13; 쪽 ); WO ( 청구항 68; 도 7); WO (71-74 쪽 ); WO ( 쪽 ) ; WO ( 청구항 2; 쪽 ); WO (15 쪽 ); WO ( 청구항 52; 도 7); WO ( 청구항 3; 도 2); US ( 청구항 3; Col 31-38); WO ( 청구항 2; 쪽 ); EP ( 청구항 7); WO ( 청구항 7); WO ; WO ( 실시예 3; 도 4); 수탁 : P04626; EMBL; M11767 ; AAA EMBL; M11761 ; AAA 아미노산 1255 개 [0985] [0986] [0987] [0988] [0989] [0990] ( 서열번호 : 17) (18) NCA (CEACAM6, 진뱅크수탁번호 M18728); [Barnett T., et al Genomics 3, 59-66, 1988]; [Tawaragi Y., et al. Biochem. Biophys. Res. Commun. 150, 89-96, 1988]; [Strausberg R. L., et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 99: , 2002]; WO ; EP ( 청구항 7); WO ( 실시예 4); WO ; WO ( 청구항 12); WO ( 실시예 2); WO ( 청구항 27; 427 쪽 ); WO ( 청구항 2); 수탁 : P40199; Q14920; EMBL; M29541; AAA EMBL; M18728; 아미노산 344 개 [0991] [0992] [0993] ( 서열번호 : 18) (19) MDP (DPEP1, 진뱅크수탁번호 BC017023,

103 [0994] [0995] [0996] [Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 99 (26): (2002)]); WO ( 청구항 1); WO ( 청구항 33; 쪽 ); JP ( 도 6-8); WO ( 도 9); 상호참조 : NIM: ; AAH ; BC017023_1 아미노산 411 개 [0997] [0998] [0999] [1000] [1001] [1002] ( 서열번호 : 19) (20) IL20Rα (IL20Ra, ZCYTOR7, 진뱅크수탁번호 AF184971); [Clark H. F., et al. Genome Res. 13, , 2003]; [Mungall A. J., et al. Nature 425, , 2003]; [Blumberg H., et al. Cell 104, 9-19, 2001]; [Dumoutier L., et al. J. Immunol. 167, , 2001]; [Parrish-Novak J., et al. J. Biol. Chem. 277, , 2002]; [Pletnev S., et al. (2003) Biochemistry 42: ]; [Sheikh F., et al. (2004) J. Immunol. 172, ]; EP ( 실시예 11); US ( 실시예 5); WO (74-75 쪽 ); WO ( 청구항 2; 63 쪽 ); WO (45-47쪽) ; US (20-21쪽); WO (57-59 쪽 ); WO (63-65쪽); WO ( 청구항 1; 쪽 ); 수탁 : Q9UHF4; Q6UWA9; Q96SH8; EMBL ;AF ; AAF 아미노산 553 개 [1003] [1004] [1005] [1006] ( 서열번호 : 20) (21) 브레비칸 (BCAN, BEHAB, 진뱅크수탁번호 AF229053) [Gary S. C., et al. Gene 256, , 2000]; [Clark H. F., et al. Genome Res. 13, , 2003]; [Strausberg R. L., et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 99, , 2002]; US ( 청구항 11); US ( 청구항 11); US ( 청구항 1; 도 52); US ( 청구항 1; 도 52); US ( 청구항 1); US ( 청구항 1; 도 52); US ( 청구항1) ; US ( 청구항 1); US ( 청구항 l; 도 52) ; US ( 청구항 1); WO ( 청구항 1); WO ( 청구항 1);

104 [1007] 아미노산 911 개 [1008] [1009] [1010] [1011] [1012] [1013] ( 서열번호 : 21) (22) EphB2R (DRT, ERK, Hek5, EPHT3, Tyro5, 진뱅크수탁번호 NM_004442) [Chan, J. and Watt, V. M., Oncogene 6 (6), (1991)], [Oncogene 10 (5): (1995)], [Annu. Rev. Neurosci. 21: (1998)], [Int. Rev. Cytol. 196: (2000)]); WO ( 청구항 12); WO ( 청구항 1; 41 쪽 ); WO ( 청구항 1); WO ( 청구항 9); WO ( 쪽 ); WO ( 청구항 1; 42 쪽 ); 상호참조 : MIM: ; NP_ ; NM_004442_1 아미노산 987 개 [1014] [1015] [1016] [1017] ( 서열번호 : 22) (23) ASLG659 (B7h, 진뱅크수탁번호 AX092328) US ( 청구항 2); WO ( 청구항 11); WO ( 도 3); US ( 청구항 1) ; US ( 실시예 2) ; US ( 도 60); WO ( 청구항 13; 299 쪽 ); US ( 실시예 2); WO ( 청구항 6; 도 10); WO ( 청구항 12; 도 7b); WO ( 청구항 13; 도 1A 내지 1B); US ( 청구항 54; 쪽 ); WO ( 실시예 2; 쪽, 청구항 34; 쪽 ); WO ( 쪽 ); WO ( 실시예 1; 도 1); WO ( 실시예 3; 쪽 ); WO ( 실시예 2; 쪽 ); WO ( 청구항 12); WO ( 청구항 1); WO ( , 쪽 ); WO ;

105 [1018] 아미노산 282 개 [1019] [1020] [1021] [1022] [1023] [1024] ( 서열번호 : 23) (24) PSCA ( 전립선줄기세포항원전구체, 진뱅크수탁번호 AJ297436) [Reiter R. E., et al. Proc. Natl. Acad Sci. USA. 95, , 1998]; [Gu Z., et al. Oncogene 19, , 2000]; [Biochem. Biophys. Res. Commun. (2000) 275 (3): ]; WO ; EP ( 실시예 11) ; US ( 청구항 17); WO ( 청구항 1); WO ( 청구항 1; 164 쪽 ); WO ( 청구항 10; 288 쪽 ); WO ( 실시예 1; 도 17); US ( 실시예 1; 도 1b) ; WO ( 청구항 18 ; 도 1); WO ( 청구항 17; 97 쪽 ); WO ( 청구항 10; 94 쪽 ); WO ( 청구항 2; 도 1B); 수탁 : O43653; EMBL; AF043498; AAC 아미노산 123 개 [1025] [1026] [1027] [1028] [1029] [1030] [1031] [1032] ( 서열번호 : 24) (25) GEDA ( 진뱅크수탁번호 AY260763); AAP14954 리포마 HMGIC 융합-협동자-유사단백질 /pid=aap 호모사피엔스종 : 호모사피엔스 ( 인간 ) WO ( 청구항 20); WO ( 청구항 1); WO ( 실시예 3, 청구항 20); US ( 청구항 45); 상호참조 : GI: ; AAP ; AY260763_1 아미노산 236 개 [1033] [1034] [1035] [1036] [1037] [1038] [1039] ( 서열번호 : 25) (26) BAFF-R (B 세포활성화인자수용체, BLyS 수용체 3, BR3, 진뱅크수탁번호 NP_ ); NP_ BAFF 수용체 /pid=np_ 호모사피엔스 [Thompson, J. S., et al. Science 293 (5537), (2001)]; WO ; WO ; WO ( 실시예 ; 쪽 ); WO ( 청구항 35; 도 6B); WO ( 청구항 70; 쪽 ); WO (Col ); WO ( 청구항 3; 133 쪽 ); WO ( 실시예 3; 도 3); 상호참조 : MIM : ; NP_ ; NM_052945_1 아미노산 184 개 [1040]

106 [1041] [1042] [1043] [1044] [1045] ( 서열번호 : 26) (27) CD22 (B 세포수용체 CD22-B 이소형, 진뱅크수탁번호 NP ); [Stamenkovic, I. and Seed, B., Nature 345 (6270), (1990)]; US ; US ; WO ( 청구항 9); WO ( 청구항 1; 도 1) ; WO ( 실시예 2); 상호참조 : MIM: ; NP_ ; NM_001771_1 아미노산 847 개 [1046] [1047] [1048] [1049] [1050] ( 서열번호 : 27) (28) CD79a (Ig 베타 (CD79B) 와공유적으로상호작용하고 IgM 분자와표면에서복합체를형성하는 B 세포특이적단백질인 CD79A, CD79α, 이뮤노글로불린-연관알파는 B 세포분화에관여하는신호를전달함 ) 단백질서열전체 mpggpgv dvqlekp (1번내지 226번 ; 아미노산 226개 ), pi : 4.84, MW: TM: 2 [P] 진크로모좀 : 19ql3.2, 진뱅크수탁번호 NP_ ; WO , US ; WO ( 청구항 9); US ( 청구항 4, 쪽 ); WO ( 청구항 13; 도 16); WO ( 도 1); US ; [Ha et al. (1992) J. Immunol. 148(5) : ]; [Mueller et al. (1992) Eur.J. Biochem. 22: ]; [Hashimoto et al. (1994) Immunogenetics 40 (4): ] ; [Preud'homme et al. (1992) Clin. Exp. Immunol. 90(1) : ]; [Yu et al. (1992) J. Immunol. 148 (2) ]; [Sakaguchi et al. (1988) EMBO J. 7 (11): ]; 아미노산 226 개 [1051] [1052] [1053] [1054] ( 서열번호 : 28) (29) CXCR5 (CXCL13 케모카인에의해활성화된 G 단백질커플링된수용체인버킷림프종수용체 1은림프구이동및체액성방어에작용하며, HIV-2 감염에참여하며, AIDS, 림프종, 골수종, 및백혈병의발병에혹시관련될수있음 ) 단백질서열전체 mnypltl atslttf (1번내지 372번 ; 아미노산 372개 ), pi : 8.54 MW: TM: 7 [P] 진크로모좀 : 11q23.3, 진뱅크수탁번호 NP_ ; WO ; WO ; US ( 실시예 2); US ( 실시예 2); WO ( 도 1); WO ( 청구항 20, 269 쪽 ); WO (12-13 쪽 ); WO ( 실시예 1, 쪽, 실시예 2, 쪽 ); WO ( 청구항 1, 38 쪽 ); US ( 실시예 2, col 49-52); WO (56-58 쪽 ); WO ( 청구항 7, 도 5); [Dobner et al. (1992) Eur. J. Immunol. 22: ]; [Barella et al. (1995) Biochem.J. 309: ];

107 [1055] 아미노산 372 개 [1056] [1057] [1058] [1059] [1060] ( 서열번호 : 29) (30) HLA-DOB ( 펩티드에부착하여 CD4+ T 림프구에제시하는 MHC 클래스 Ⅱ 분자 (Ia 항원 ) 의베타서브유닛 ) 단백질서열전체 mgsgwvp vllpqsc (1번내지 273번 ; 아미노산 273 개, pi : 6.56 MW: TM:1 [P] 진크로모좀 : 6p21.3, 진뱅크수탁번호 NP_ ; [Tonnelle et al. (1985) EMBO J. 4 (11): ]; [Jonsson et al. (1989) Immunogenetics 29 (6): ]; [Beck et al. (1992) J. Mol. Biol. 228: ]; [Strausberg et al.(2002) Proc. Natl. Acad. Sci USA 99: ]; [Servenius et al. (1987) J. Biol. Chem. 262: ]; [Beck et al. (1996) J. Mol. Biol. 255: 1-13]; [Naruse et al. (2002) Tissue Antigens 59: ]; WO ( 청구항 13, 도 15); US (Col 35-38); US (col ) ; US (col ); [Kasahara et al. (1989) Immunogenetics 30(1) : 66-68]; [Larhammar et al. (1985) J. Biol. Chem. 260 (26): ]; 아미노산 273 개 [1061] [1062] [1063] [1064] [1065] ( 서열번호 : 30) (31) P2X5 ( 세포외 ATP에의해조절되는이온채널인, 퓨린성수용체 P2X 리간드-게이트이온채널 5는시냅스전달및신경발생에관여할수있으며, 그의결핍은특발성배뇨근불안정의병태생리학에기여할수있음 ) 단백질서열전체 mgqagck lephrst (1번내지 422번 ; 아미노산 422 개 ), pi : 7.63, MW: TM:1 [P] 진크로모좀 : 17pl3.3, 진뱅크수탁번호 NP_ ; [Le et al. (1997) FEBS Lett. 418 (1-2): ]; WO ; WO ( 청구항 10); [Touchman et al. (2000) Genome Res. 10: ]; WO ( 청구항 20); WO ( 청구항 1); WO ( 청구항 1); WO (page 82); 아미노산 422 개 [1066] [1067] [1068] [1069] ( 서열번호 : 31) (32) CD72 (B 세포분화항원 CD72, Lyb-2) 단백질서열전체 maeaity tafrfpd (1번내지 359번 ; 아미노산 359 개 ), pi : 8.66, MW: TM: 1 [P] 진크로모좀 : 9pl3.3, 진뱅크수탁번호 NP_ ; WO ( 청구항 65); WO (51-52, 쪽 ) ; WO ( 쪽 ); [Von Hoegen et al. (1990) J. Immunol. 144 (12): ]; [Strausberg et al. (2002) Proc. Natl. Acad. Sci USA 99: ];

108 [1070] 아미노산 359 개 [1071] [1072] [1073] [1074] [1075] ( 서열번호 : 32) (33) LY64 ( 류신풍부반복체 (LRR) 족의제Ⅰ형막단백질인, 림프구항원 64(RP105) 은 B 세포활성화및아팝토시스를조절하며, 기능을상실하면전신홍반루푸스환자의질병활성증가와관련됨 ) 단백질서열전체 mafdvsc rwkyqhi (1번내지 661번 ; 아미노산 661 개 ), pi : 6.20, MW: TM: 1 [P] 진크로모좀 : 5ql2, 진뱅크수탁번호 NP_ ; US ; WO ( 청구항 11, 쪽 ); [Miura et al. (1996) Genomics 38 (3): ]; [Miura et al. (1998) Blood 92: ]; WO ; WO ( 청구항 8, 쪽 ); WO (24-26 쪽 ); 아미노산 661 개 [1076] [1077] [1078] [1079] [1080] ( 서열번호 : 33) (34) FCRH1 (C2형 Ig-유사및 ITAM 도메인을포함하는이뮤노글로불린 Fc 도메인에대한잠정적수용체인, Fc 수용체유사단백질 1은 B 림프구분화에참여할지도모른다.) 단백질서열전체 mlprlll vdyedam (1번내지 429번 ; 아미노산 429 개 ), pi : 5.28, MW: TM: 1 [P] 진크로모좀 : lq21-lq22, 진뱅크수탁번호 NP_ ; WO ; WO ( 청구항 6, 도 18E-1 내지 18-E-2); [Davis et al. (2001) Proc. Natl. Acad. Sci USA 98 (17): ]; WO ( 청구항 8); EP ( 청구항 1); WO ( 청구항 7); 아미노산 429 개 [1081] [1082] [1083] [1084] ( 서열번호 : 34) (35) IRTA2 (B 세포발달및림프종발생에작용할수도있는잠정적면역수용체인이뮤노글로불린상과수용체전위연관 2; 전위에의한유전자탈조절은특정 B 세포악성종양에서일어난다 ) 단백질서열전체 mllwvil assaphr(1번내지 977번 ; 아미노산 977 개 ), pi : 6.88 MW: TM: 1 [P] 진크로모좀 : lq21, 진뱅크수탁번호 NP_ ; WO ( 청구항 2, 도 97); [Nakayama et al. (2000) Biochem. Biophys. Res. Commun. 277(1):

109 127]; WO ; WO ( 청구항 3, 도 18B-1 내지 18B-2); [1085] 아미노산 977 개 [1086] [1087] [1088] [1089] ( 서열번호 : 35) 또한, 모두본원에참고자료로전문이포함되어있는 WO04/ (03 Jun 2004); WO03/ (03 Jan 2003); WO02/ (28 Feb 2002); WO02/16581 (28 Feb 2002); WO03/ (27 Mar 2003); WO04/ (26 Feb 2004); WO01/40309 (07 Jun 2001), 및 2003년 11월 17일에출원된미국가특허출원제60/520842호 ( 발명의명칭 : "COMPOSITIONS AND METHODS FOR THE TREATMENT OF TUMOR OF HEMATOPOIETIC ORIGIN") 도참조하라. 실시양태에서, 리간드-링커-약물접합체는구조식 Ⅲa를가지고, 여기서이간드는 CD30, CD40, CD70, 루이스 Y 항원중적어도하나에결합하는항체를포함하는항체 Ab이고, w=0, y=0, 및 D는구조식 Ⅰb를갖는다. 구조 식 Ⅲa의예시적인접합체는 R 17 이 -(CH 2 ) 5 -인것을포함한다. 또한 D가실시예 3의화합물 2의구조및그의에스테르를가지는것도구조식 Ⅲa의예시적인접합체에포함된다. 또한약 3 내지약 8개, 한측면에서, 약 3 내지약 5개의약물잔기 D를포함하는구조식 Ⅲa의이러한접합체, 즉 p가약 3 내지 8 범위, 예를들어약 3 내지 5의값을가지는구조식 Ⅰa의접합체도포함된다. 본문단에기록된구조적특징의조합을포함하는접합체도역시본발명의화합물의권리범위내인것으로여겨진다. [1090] 다른실시양태에서, 리간드 - 링커 - 약물접합체는구조식 Ⅲa 을가지고, 여기서리간드는 CD30, CD40, CD70, 루이 스 Y 항원중하나에결합하는항체 Ab이고, w=1, y=0, 및 D는구조식 Ⅰb를갖는다. R 17 이 -(CH 2 ) 5 -인 Ⅲa의이러한접합체가포함된다. 또한 W는 -Val-Cit-이고( 이거나 ), D는실시예 3의화합물 2의구조및그의에스테르를가지는이러한구조식 Ⅲa의이러한접합체도포함된다. 또한약 3 내지약 8개, 바람직하게약 3 내지약 5개의약물잔기 D를포함하는이러한구조식 Ⅲa의접합체, 즉 p가약 3 내지 8 범위, 바람직하게약 3 내지 5의값을가지는구조식 Ⅰa의접합체도포함된다. 본문단에기록된구조적특징의조합을포함하는접합체도역시예시적이다. [1091] 실시양태에서, 리간드 - 링커 - 약물접합체는구조식 Ⅲa 을가지고, 여기서리간드는 CD30, CD40, CD70, 루이스 Y 항원중하나에결합하는항체 Ab이고, w=1, y=1, 및 D는구조식 Ⅰb를갖는다. R 17 이 -(CH 2 ) 5 -인이러한 Ⅲa의접합체가포함된다. 또한 W는 -Val-Cit-이고; Y는구조식 X를가지고 ; D는실시예 3의화합물 2의구조및그의에스테르를가지고 ; p는약 3 내지약 8 범위, 바람직하게약 3 내지약 5개의약물잔기 D인구조식 Ⅲa의이러한접합체도포함된다. 본문단에기록된구조적특징의조합을포함하는접합체도역시본발명의화합물의권리범위내인것으로여겨진다. [1092] [1093] [1094] 추가적인실시양태는항체약물접합체 (ADC), 또는제약학적으로허용되는그의염또는용매화합물이며, 여기서 Ab는위에기록된종양관련항원 ("TAA 화합물 ") (1) 내지 (35) 중하나에결합하는항체이다. 다른실시양태는단리형및정제형인 TAA 화합물또는제약학적으로허용되는그의염또는용매화합물이다. 다른실시양태는환자, 예를들어과증식성장애를가진인간에게 TAA 화합물또는제약학적으로허용되는그의염또는용매화합물을, 종양세포또는암세포를사멸시키거나또는그증식을저해하기위한유효량으로투여

110 하는것을포함하는, 종양세포또는암세포의사멸또는그증식저해방법이다. [1095] [1096] [1097] 다른실시양태는환자, 예를들어과증식성장애를가진인간에게 TAA 화합물또는제약학적으로허용되는그의염또는용매화합물을, 단독으로또는추가적인항암제의유효량과함께, 암을치료하기위한유효량으로투여하는것을포함하는, 암치료방법이다. 다른실시양태는환자, 예를들면과증식성장애를가진인간에게 TAA 화합물또는제약학적으로허용되는그의염또는용매화합물을자가면역질환을치료하기위한유효량으로투여하는것을포함하는, 자가면역질환치료방법이다. 본발명에사용되기에적합한항체는항체합성을위해당업계에알려진임의의방법, 특히화학적합성또는재조합발현에의해생산될수있고, 바람직하게는재조합발현기법에의해생산된다. [1098] [1099] [1100] [1101] [1102] [1103] [1104] 재조합항체의생산본발명의항체는항체합성에유용하다고알려진당업계의임의의방법, 특히화학적합성또는재조합발현에의해생산될수있다. 항체, 또는그의단편, 유도체또는유사체의재조합발현은항체를코딩하는핵산의구축을필요로한다. 항체의뉴클레오티드서열이알려졌다면, 항체를코딩하는핵산은항체를코딩하는서열의일부분을포함하는겹치는올리고뉴클레오티드의합성, 그올리고뉴클레오티드의어닐링및라이게이션, 및그후라이게이션된올리고뉴클레오티드의, 예를들어 PCR에의한증폭을포함하는, 화학적으로합성된올리고뉴클레오티드로부터조립될수있다 ( 예를들어, [Kutmeier et al., 1994, Biotechniques 17: 242] 에설명된바와같이 ). 대안적으로, 항체를코딩하는핵산분자는적절한공급원으로부터생성될수있다. 특정항체를코딩하는핵산을포함하는클론이준비되지않았으나항체의서열은알려져있다면, 항체를코딩하는핵산은적절한공급원 ( 즉, 이뮤노글로불린을발현하는임의의조직또는세포로부터생성된항체 cdna 라이브러리, 또는 cdna 라이브러리 ) 으로부터서열의 3' 및 5' 말단에혼성화할수있는합성프라이머를이용한 PCR 증폭또는특정유전자서열에특이적인올리고뉴클레오티드탐침을이용한클로닝에의해얻어질수있다. 특정항원을특이적으로인식하는항체가상업적으로 ( 또는이러한이뮤노글로불린을코딩하는핵산의클로닝을위한 cdna 라이브러리의공급원이 ) 이용가능하지않다면, 특정항원에특이적인항체는당업계에알려진임의의방법, 예를들어환자또는토끼또는마우스와같이적절한동물모델을면역화하여다클론성항체를생성하는것에의하는, 더욱바람직하게는콜러및밀스테인 ([1975, Nature 256: ]) 에의해설명된바와같이, 또는코츠버외 [1983, Immunology Today 4: 72] 또는콜등 [1985 in Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Alan R. Liss, Inc., pp ] 에의해설명된바와같이모노클로날항체를생성하는것에의하는방법에의해생성될수있다. 대안적으로, 적어도항체의 Fab 일부분을코딩하는클론은 Fab 발현라이브러리에서특정항원에결합하는 Fab 단편의클론을스크리닝하는것 ( 예를들어, [Huse et al., 1989, Science 246: ] 에설명된바와같이 ) 에의하거나, 또는항체라이브러리를스크리닝하는것 ([ ㅊlackson et al., 1991, Nature 352: 624; Haneet al., 1997 Proc. Natl. Acad. Sci. USA 94: 4937] 참조 ) 에의해얻어질수있다. 일단항체의적어도가변도메인을코딩하는핵산서열이얻어지면, 그것은항체의불변구간을코딩하는뉴클레오티드서열을포함하는벡터에삽입될수있다 ( 예를들어, 국제공보 WO 86/05807; WO 89/01036; 및미국특허제 호참조 ). 완전한항체분자가발현되도록하는완전한경쇄또는중쇄가포함된벡터가준비된다. 그후, 항체를코딩하는핵산이술프히드릴기를포함하지않는아미노산잔기를가진내부사슬디술피드결합에참여하는 1 이상의가변구간시스테인잔기를치환 ( 또는삭제 ) 하는데필수적인뉴클레오티드치환또는삭제를도입하는데사용될수있다. 이러한변형은뉴클레오티드서열에서특이적돌연변이또는삭제를도입하기위해당업계에알려진임의의방법, 예를들어, 화학적돌연변이유발및시험관내영역지정돌연변이유발 [Hutchinson et al., 1978, J. Biol. Chem. 253: 6551] 과같은, 그러나이에제한되지않는방법에의해실시될수있다. 또한, 적절한생물학적활성을가진인간항체분자의유전자와함께적절한항원특이성을가진마우스항체분자의유전자를스플라이싱하는것에의한 " 키메라항체 " 의생산을위해개발된기법 ([Morrison et al., 1984, Proc. Natl. Acad. Sci. 81: ]; [Neuberger et al., 1984, Nature 312: ]; [Takeda et al.,

111 1985, Nature 314: ]) 이사용될수있다. 키메라항체는뮤린모노클로날항체에서유래한가변구간 및인간이뮤노글로불린불변구간을가지는항체, 예를들어인간화항체와같이, 서로다른동물종으로부터 유래한서로다른일부분을가지는분자이다. [1105] [1106] 대안적으로, 단일사슬항체의생산을위해설명된기법 ( 미국특허제4,694,778호 ; [Bird, 1988, Science 242: ]; [Huston et al., 1988, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85: ]; 및 [Ward et al., 1989, Nature 334:544-54]) 이단일사슬항체를생산하는데적용될수있다. 단일사슬항체는아미노산다리로 Fv 영역의중쇄및경쇄단편을연결함으로써, 단일사슬폴리펩티드로형성된다. 이콜라이에서기능적 Fv 단편의조립에대한기법역시사용될수있다 [Skerra et al., 1988, Science 242: ]. 특이적인에피토프를인식하는항체단편은알려진기법에의해생성될수있다. 예를들어, 이러한단편은항체분자의펩신분해에의해생산될수있는 F(ab') 2 단편및 F(ab') 2 단편의디술피드가교를환원시킴으로써 생성되는 Fab 단편을포함하나, 이에제한되지않는다. [1107] [1108] [1109] [1110] [1111] 일단항체를코딩하는핵산서열이얻어지면, 항체의생산을위한벡터가당업계에널리알려진재조합 DNA 기술에의해생산될수있다. 당업자에게잘알려진방법이항체코딩서열및적절한전사및번역조절신호를포함하는발현벡터를구축하는데사용될수있다. 이러한방법은예를들어실험관내재조합 DNA 기법, 합성기법, 및생체내유전적재조합을포함한다. 예를들어샘브룩등 [1990, Molecular Cloning, A Laboratory Manual, 2nd Ed., Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, NY] 및오수벨등 [eds., 1998, Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, NY] 에설명된기법을참조하라. 항체의뉴클레오티드서열을포함하는발현벡터또는항체의뉴클레오티드서열은종래기법 ( 즉, 전기천공법, 리포솜형질감염, 및인산칼슘침전법 ) 에의해숙주세포로전달될수있고, 형질감염된세포는그후종래기법으로배양되어항체를생산한다. 특정한실시양태에서, 항체의발현은구조성, 유도되는, 또는조직특이적프로모터에의해조절된다. 재조합항체를발현시키는데이용되는숙주세포는이. 콜라이와같은박테리아세포, 또는특히재조합이뮤노글로불린분자전체의발현을위해서는바람직하게진핵세포일수있다. 특히, 인간시토메갈로바이러스의주요조기발현유전자프로모터요소와같은벡터와접합된중국햄스터난소세포 (CHO) 와같은포유동물세포는이뮤노글로불린에대한효과적인발현시스템이다 ([Foecking et al., 198, Gene 45: 101]; [Cockett et al., 1990, BioTechnology 8:2]). 숙주-발현벡터시스템의다양성은이뮤노글로불린항체를발현시키는데이용될수있다. 이러한숙주-발현시스템은항체의코딩서열이생산되고그후정제되는운반체를나타내지만, 또한계내에서항체이뮤노글로불린분자를발현하는적절한뉴클레오티드코딩서열로형질전환또는형질감염된세포를나타낼수도있다. 이러한것들로는이뮤노글로불린코딩서열을포함하는재조합박테리오파지 DNA, 플라스미드 DNA 또는코스미드 DNA 발현벡터로형질전환된박테리아 ( 즉, 이. 콜라이및비. 섭틸리스 ); 이뮤노글로불린코딩서열을포함하는재조합효모발현벡터로형질전환된효모 ( 예를들어, 사카로마이세스피키아 ); 이뮤노글로불린코딩서열을포함하는재조합바이러스발현벡터 ( 예를들어, 바큘로바이러스 ) 로감염된곤충세포시스템 ; 이뮤노글로불린코딩서열을포함하는재조합바이러스발현벡터 ( 예를들어, 콜리플라워모자이크바이러스 (CaMV) 및타바코모자이크바이러스 (TMV)) 로감염되거나또는재조합플라스미드발현벡터 ( 예를들어, Ti 플라스미드 ) 로형질전환된식물세포시스템 ; 또는포유동물세포 ( 예를들어, 메탈로티오네인프로모터 ) 의게놈또는포유동물바이러스 ( 예를들어, 아데노바이러스만기프로모터 ; 우두바이러스 7.5K 프로모터 ) 로부터유래한프로모터를포함하는재조합발현구조물을가지는포유동물세포시스템 ( 예를들어, COS, CHO, BH, 293, 293T, 3T3 세포 ) 가있지만이에제한되는것은아니다. 박테리아시스템에서, 다수의발현벡터는유리하게는발현되는항체에대하여의도된용도에따라선택될수있다. 예를들어, 상기단백질을다량제조하는경우, 쉽게정제되는융합단백질생성물의높은수준의발현을지시하는벡터가바람직할수있다. 이러한벡터로는, 항체코딩서열이벡터내에서 lac Z 코딩영역과인 -프레임 (in-frame) 으로개별적으로라이게이션될수있어서융합단백질이제조되는대장균발현벡터 pur278 [Ruther et al., 1983, EMBO J. 2:1791] 및 pin 벡터 ([Inouye & Inouye, 1985, Nucleic Acids Res. 13: ]; [Van Heeke & Schuster, 1989, J. Biol. Chem. 24: ]) 등을들수있으나, 이에한정되지않는다. 또한, pgex 벡터를사용해서글루타티온 S-트랜스퍼라제 (GST) 와의융합단백질로서외래폴리펩티드를발현시킬수도있다. 일반적으로, 그러한융합단백질은가용성이며, 매트릭스글루타티온-아가로스비드로흡착및결합시킨다음, 유리글루타티온의존재하에서용출시킴으로써용해된세포로부터쉽게정제할수있다. 클

112 로닝된표적유전자생성물이 GST 잔기로부터방출될수있도록, 트롬빈또는인자 Xa 프로테아제분해가능한 부위를포함하게끔 pgex 벡터를설계한다. [1112] [1113] [1114] [1115] [1116] 곤충시스템에서, 아우토그라파칼리포르니카 (Autographa californica) 핵폴리헤드론형성바이러스 (AcNPV) 또는드로소필라멜라노가스터 (Drosophila Melanogaster) 유래의유사한바이러스를벡터로사용해서외래유전자를발현시킨다. 상기바이러스는스포도프테라프루기페르다 (Spodoptera frugiperda) 세포중에서증식한다. 항체코딩서열은바이러스의비필수영역 ( 예를들어, 폴리헤드린유전자 ) 내에개별적으로클로닝할수있으며, AcNPV 프로모터 ( 예를들어, 폴리헤드린프로모터 ) 의조절을받도록위치시킬수있다. 포유동물숙주세포에서, 다수의바이러스-기초발현시스템을이용할수있다. 아데노바이러스를발현벡터로사용하는경우, 관심항체코딩서열을아데노바이러스전사 / 번역조절복합체, 예를들면후기프로모터및세부분으로된 (tripartite) 리더서열에라이게이션할수있다. 이후, 상기키메라유전자를시험관내또는생체내재조합에의해아데노바이러스게놈내에삽입할수있다. 바이러스게놈의비필수영역 ( 예, 영역 E1 또는 E3) 에삽입함으로써감염된숙주내에서생존가능하며이뮤노글로불린분자를발현시킬수있는재조합바이러스가얻어진다 ( 예를들어, 문헌 [Logan & Shenk, 1984, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81: ] 참조 ). 또한, 삽입된항체코딩서열의효과적인번역을위해특정개시신호가필요할수도있다. 이들신호는 ATG 개시코돈및인접한서열을포함한다. 또한, 전체삽입체의번역을보장하도록, 개시코돈이원하는코딩서열의리딩프레임과같은상으로존재해야한다. 이들외인성번역조절신호및개시코돈은천연및합성둘다의다양한기원의것일수있다. 적절한전사인핸서요소, 전사종결자등을포함시켜발현효율을증대시킬수있다 ( 문헌 [Bittner et al., 1987, Methods in Enzymol. 153:51-544] 참조 ). 또한, 숙주세포균주는삽입된서열의발현을조절하도록선택될수있거나, 또는원하는특정한방식으로유전자생성물을변형및프로세싱한다. 단백질생성물에대한이러한변형 ( 예, 글리코실화 ) 및프로세싱 ( 예, 절단 ) 은단백질의기능에있어서중요할수있다. 상이한숙주세포는단백질및유전자생성물의번역후프로세싱및변형에있어서특징적이고특정한메카니즘을갖는다. 발현된외래단백질의정확한변형및프로세싱을보장하도록, 적절한세포주또는숙주시스템을선택할수있다. 이를위해, 유전자생성물의 1차전사체, 글리코실화및인산화의적절한프로세싱을위한세포기구를보유하는진핵숙주세포를사용할수있다. 이러한포유동물숙주세포로는 CHO, VERY, BH, Hela, COS, MDCK, 293, 293T, 3T3, WI38, BT483, Hs578T, HTB2, BT20 및 T47D, CRL7030 및 Hs578Bst를들수있지만, 이에한정되지않는다. 재조합단백질을장기간높은수율로제조하기위해서는, 안정한발현이바람직하다. 예를들어, 항체를안정하게발현하는세포주를조작할수있다. 바이러스복제기점을함유하는발현벡터를사용하기보다는, 적절한발현조절요소 ( 예, 프로모터, 인핸서, 서열, 전사종결자, 폴리아데닐화부위등 ) 에의해조절된 DNA, 및선택가능한마커로숙주세포를형질전환시킬수있다. 외래 DNA의도입후, 조작된세포가풍부해진배지중에서 1일내지 2일동안배양될수있도록하고, 이어서선택적배지로바꿔준다. 재조합플라스미드내의선택가능한마커는선별에대한내성을부여하고, 세포가플라스미드를그의염색체내로안정하게통합하여포커스 (focus) 를형성하도록성장시킴으로써, 이후세포가클로닝되어세포주로확장될수있도록한다. 이방법은항체를발현하는세포주를조작하는데유리하게사용될수있다. 이와같이조작된세포주는항체와직접적으로또는간접적으로상호작용하는종양항원을스크리닝및평가하는데있어서특히유용할수있다. 단순헤르페스바이러스티미딘키나제 [Wigler et al., 1977, Cell 11:223], 히포크산틴-구아닌포스포리보실트랜스퍼라제 [Szybalska & Szybalski, 192, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 48:202], 및아데닌포스포리보실트랜스퍼라제 [Lowy et al., 1980, Cell 22:817] 유전자를포함하지만이에한정되지않는다수의선별시스템이사용될수있는데, 이러한시스템은각각 tk-, hgprt- 또는 aprt-세포내에서사용될수있다. 또한, 다음과같은유전자에대한선별의기초로서항대사물질내성을이용할수있다 : 메토트렉세이트에대한내성을부여하는 DHFR ([Wigler et al., 1980, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:357]; [O'Hare et al., 1981, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 78:1527]); 미코페놀산에대한내성을부여하는 gpt [Mulligan & Berg, 1981, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 78:2072]; 아미노글리코시드 0-418에대한내성을부여하는 neo ([Clinical Pharmacy 12: ]; [Wu and Wu, 1991, Biotherapy 3:87-95]; [Tolstoshev, 1993, Ann. Rev. Pharmacol. Toxicol. 32: ]; [Mulligan, 1993, Science 260: ]; [Morgan and Anderson, 1993, Ann. Rev. Biochem. 62: ]; 및 [May, 1993, TIB TECH 11(5): ]); 및히그로마이신에대한내성을부여하는 hygro [Santerre et al., 1984, Gene 30:147]. 재조합 DNA 기술분야에서통상적으로사용될수있는공지된방법은문헌 ([Ausubel et al. (eds., 1993, Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, NY]; [Kriegler, 1990, Gene Transfer and Expression, A Laboratory Manual, Stockton Press, NY]; [Chapters

113 and 13, Dracopoli et al. (eds), 1994, Current Protocols in Human Genetics, John Wiley & Sons, NY.]; 및 [Colberre-Garapin et al., 1981, J. Mol. Biol. 150:1]) 에기재되어있다. [1117] [1118] [1119] [1120] [1121] [1122] [1123] [1124] [1125] [1126] [1127] 항체의발현수준은벡터증폭에의해증가시킬수있다 ( 검토를위해서는, 문헌 [Bebbington and Hentschel, The use of vectors based on gene amplification for the expression of cloned genes in mammalian cells in DNA cloning, Vol. 3. (Academic Press, New York, 1987)] 을참조한다 ). 항체를발현하는벡터시스템내의마커가증폭가능한경우, 숙주세포의배양물중존재하는억제제의수준이증가하면마커유전자의카피수가증가하게될것이다. 증폭된영역은항체의뉴클레오티드서열과관련이있기때문에, 항체의생산이또한증가하게될것이다 [Crouse et al., 1983, Mol. Cell. Biol. 3:257]. 숙주세포는두가지발현벡터, 즉중쇄유래의폴리펩티드를코딩하는제1 벡터및경쇄유래의폴리펩티드를코딩하는제2 벡터로공동형질감염시킬수있다. 상기두벡터는중쇄및경쇄폴리펩티드의동등한발현을가능하게하는동일한선택가능한마커를함유할수있다. 또는, 중쇄및경쇄폴리펩티드둘다를코딩하는단일벡터를사용할수있다. 이러한경우, 과량의독성유리중쇄를방지하기위해서는경쇄가중쇄앞쪽에위치해야한다 ([Proudfoot, 1986, Nature 322:52]; [Kohler, 1980, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:2197]). 중쇄및경쇄에대한코딩서열은 cdna 또는게놈 DNA를포함할수있다. 일단항체가재조합적으로발현되었다면, 항체의정제를위한당업계에공지된임의의방법을이용해서, 예를들어크로마토그래피 ( 예, 이온교환, 친화성, 특히단백질 A 이후특정항원에대한친화성, 및사이징컬럼크로마토그래피 ), 원심분리, 용해도차등, 또는단백질정제를위한임의의다른표준기술에의해항체를정제할수있다. 또다른예시적인실시양태에서, 항체는모노클로날항체이다. 임의의경우에서, 하이브리드항체는이중특이성을갖는데, 바람직하게는선택된합텐에대해특이적인하나이상의결합부위, 또는표적항원, 예를들어종양, 자가면역질환, 감염성생물체또는다른질환상태와관련된항원에대해특이적인하나이상의결합부위를갖는다 항체제조항체의제조는항-CD30 항체에대하여예시될것이지만, 유사한방식으로 TNF 수용체족의다른구성원들에대한항체를제조및변형할수있다는것은당업계의숙련가에게자명할것이다. 항체의제조에있어서 CD30의용도는예시적인것일뿐이며, 제한하고자하는것은아니다. 항체의제조를위해사용될 CD30 항원은, 예를들어원하는에피토프를함유하는 CD30의가용성형태의세포외도메인또는그의일부일수있다. 또는, 세포표면에서 CD30을발현하는세포 ( 예, L540 (T 세포표현형을갖는호지킨 (Hodgkin's) 림프종유래의세포주 ) 및 L428 (B 세포표현형을갖는호지킨림프종유래의세포주 )) 를사용해서항체를제조할수있다. 항체를제조하는데유용한 CD30의다른형태는당업계의숙련가에게자명할것이다. 다른예시적인실시양태에서, 항체의제조에사용될 ErbB2 항원은, 예를들어원하는에피토프를함유하는 ErbB2의가용성형태의세포외도메인또는그의일부일수있다. 또는, 세포표면에서 ErbB2를발현하는세포 ( 예, ErbB2를과발현하도록형질전환된 NIH-3T3 세포 ; 또는암종세포주, 예를들어 SK-BR-3 세포, 문헌 [Stancovski et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 88: (1991)] 참조 ) 를사용해서항체를제조할수있다. 항체를제조하는데유용한 ErbB2의다른형태는당업계의숙련가에게자명할것이다. (i) 폴리클로날항체폴리클로날항체는바람직하게는동물에게관련항원및아쥬반트를수회피하 (sc) 또는복강내 (ip) 주사함으로써생성된다. 폴리클로날항체는, 양기능성또는유도체화 (derivatizing) 작용제, 예를들어말레이미도벤조일술포숙신이미드에스테르 ( 시스테인잔기를통한접합 ), N-히드록시숙신이미드 ( 리신잔기를통함 ), 글루타 르알데히드, 숙신산무수물, SOCl 2 또는 R 1 N=C=NR (R 및 R 1 은상이한알킬기임 ) 을사용해서, 관련항원을면역화 될종에서면역원성인단백질, 예를들어키홀림펫헤모시아닌, 혈청알부민, 소티로글로불린, 대두트립신 억제제에접합시키는데유용할수있다. [1128] 단백질또는컨쥬게이트 100 μg또는 5 μg ( 각각, 토끼또는마우스의경우 ) 을 3 부피의프로인트 (Freund's) 완전아쥬반트와배합하고, 용액을여러부위에서피내주사함으로써동물을항원, 면역원성컨쥬게이트또는

114 유도체에대하여면역화한다. 1 개월후, 동물에게프로인트완전아쥬반트중펩티드또는컨쥬게이트의본래의양의 1/5 내지 1/10을피하주사에의해여러부위에추가로주사한다. 7일내지 14일후, 동물을채혈하고, 혈청을항체역가에대하여검정한다. 역가평탄역 (titer plateaus) 에이를때까지동물에게추가로주사한다. 바람직하게는, 동물에게동일한항원의컨쥬게이트이지만상이한단백질에접합되고 ( 되거나 ) 상이한가교결합시약을통해접합된컨쥬게이트를추가로주사한다. 또한, 컨쥬게이트는재조합세포중에서단백질융합으로제조할수도있다. 또한, 응집제, 예를들어백반을적합하게사용해서면역반응을증진시킨다. [1129] [1130] [1131] [1132] [1133] [1134] [1135] [1136] [1137] [1138] (ii) 모노클로날항체모노클로날항체는실질적으로균일한항체의집단으로부터얻어지는데, 즉이러한집단을포함하는개별적인항체는소량으로존재할수있는가능한자연발생적인돌연변이를제외하고는동일하다. 따라서, " 모노클로날 " 이라는수식어는항체의특징이별개의항체들의혼합물이아니라는것을암시한다. 예를들어, 모노클로날항체는문헌 [Kohler et al., Nature, 256:495 (1975)] 에최초로기재된하이브리도마방법을이용하여제조할수있거나또는재조합 DNA 방법 ( 미국특허제 호 ) 에의해제조할수있다. 하이브리도마방법에서, 마우스또는다른적절한숙주동물, 예를들어햄스터를상기기술된바와같이면역화하여, 면역화를위해사용된단백질에특이적으로결합하는항체를제조하거나제조할수있는림프구를유도한다. 또는, 림프구를시험관내에서면역화할수있다. 이어서, 적합한융합제, 예를들어폴리에틸렌글리콜을사용하여림프구를골수종세포와융합시킴으로써하이브리도마세포를형성시킨다 [Goding, Monoclonal Antibodies: Principles and Practice, pp (Academic Press,1986)]. 이와같이제조된하이브리도마세포를, 바람직하게는융합되지않은모골수종세포의성장또는생존을억제하는하나이상의물질을함유하는적합한배양배지중에파종하여배양시킨다. 예를들어, 모골수종세포에효소히포크산틴구아닌포스포리보실트랜스퍼라제 (HGPRT 또는 HPRT) 가결여되어있다면, 하이브리도마에대한배양배지는전형적으로, HGPRT-결핍된세포의성장을방지하는물질인히포크산틴, 아미노프테린, 및티미딘 (HAT 배지 ) 을포함할것이다. 바람직한골수종세포는효과적으로융합되고, 선택된항체-생산세포에의해항체를안정하게높은수준으로제조하며, HAT 배지와같은배지에민감한세포이다. 이들중에서, 바람직한골수종세포주는뮤린골수종세포주, 예를들어설크인스티튜트셀디스트리뷰션센터 (Salk Institute Cell Distribution Center, San Diego, California USA) 로부터이용가능한 MOPC-21 및 MPC-11 마우스종양으로부터유래하는세포, 및아메리칸타입컬쳐콜렉션 (American Type Culture Collection, Rockville, Maryland USA) 으로부터이용가능한 SP-2 또는 X63-Ag8-653 세포이다. 또한, 인간골수종및마우스-인간헤테로골수종세포주는인간모노클로날항체의제조를위한것으로도기술되어있다 ([Kozbor, J. Immunol., 133:3001 (1984)]; 및 [Brodeur et al., Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications, pp (Marcel Dekker, Inc., New York, 1987)]). 하이브리도마세포가성장하는배양배지를항원에대해지정된모노클로날항체의제조에대하여검정한다. 바람직하게는, 하이브리도마세포에의해제조된모노클로날항체의결합특이성을면역침전법에의해또는시험관내결합검정법, 예를들어방사성면역검정법 (RIA) 또는효소-연결면역흡착검정법 (ELISA) 에의해결정한다. 모노클로날항체의결합친화성은예를들어문헌 [Munson et al., Anal. Biochem., 107:220 (198 0)] 의스캐챠드 (Scatchard) 분석법에의해결정할수있다. 원하는특이성, 친화성및 ( 또는 ) 활성의항체를제조하는하이브리도마세포를동정한다음, 클론을제한희석과정에의해서브클로닝할수있으며, 표준방법에의해배양할수있다 [Goding, Monoclonal Antibodies: Principles and Practice, pp (Academic Press, 1986)]. 이러한목적을위한적합한배양배지로는예를들어 D-MEM 또는 RPMI-1640 배지를들수있다. 또한, 하이브리도마세포는동물에서복수종양으로서생체내에서성장시킬수있다. 서브클론에의해분비된모노클로날항체는적합하게는통상의항체정제과정, 예를들어단백질 A-세파로스, 히드록실아파티트 (hydroxylapatite) 크로마토그래피, 겔전기영동, 투석, 또는친화성크로마토그래피에의해배양배지, 복수유체, 또는혈청으로부터분리한다. 모노클로날항체를코딩하는 DNA는통상의과정을이용해서 ( 예, 뮤린항체의중쇄및경쇄를코딩하는유전자에특이적으로결합할수있는올리고뉴클레오티드프로브를사용함으로써 ) 쉽게단리하여서열분석한다. 하이

115 브리도마세포는상기 DNA의바람직한공급원으로작용한다. 일단단리되면, DNA는발현벡터내로위치시킬수있으며, 이어서상기벡터로숙주세포, 예를들어대장균세포, 시미안 COS 세포, 차이니스햄스터난소 (CHO) 세포, 또는골수종세포 ( 항체단백질을제조하지않음 ) 를형질감염시켜재조합숙주세포내에서모노클로날항체를합성한다. 항체를코딩하는 DNA의박테리아중의재조합발현에대한검토문헌으로는문헌 ([Skerra et al, Curr. Opinion in Immunol., 5: (1993)] 및 [Pluckthun, Immunol. Revs., 130: (1992)]) 을들수있다. [1139] [1140] [1141] [1142] [1143] [1144] [1145] 추가의실시양태에서, 모노클로날항체또는항체단편은문헌 [McCafferty et al., Nature, 348: (1990)] 에기재된기술을이용해서생성된항체파지라이브러리로부터단리할수있다. 문헌 [Clackson et al., Nature, 352: (1991)] 및 [Marks et al., J. Mol. Biol., 222: (1991)] 은파지라이브러리를이용해서각각뮤린및인간항체를단리하는것을기술한다. 이후의간행물들은매우거대한파지라이브러리를구성하기위한전략으로서조합감염및생체내재조합 [Waterhouse et al., Nuc. Acids. Res., 21: (1993)] 뿐만아니라체인셔플링 [Marks et al., Bio/Technology, 10: (1992)] 에의한고친화성 (nm 범위 ) 인간항체의제조를기술한다. 따라서, 이들기술은모노클로날항체의단리를위한전통적인모노클로날항체하이브리도마기술에대한실행가능한대안이다. DNA는예를들어상동성뮤린서열대신인간중쇄및경쇄불변도메인에대한코딩서열을치환함으로써 ( 미국특허제 호및문헌 [Morrison, et al. (1984) Proc. Natl Acad. Sci. USA 81:6851]) 또는비-이뮤노글로불린폴리펩티드에대한코딩서열의전체또는일부를이뮤노글로불린코딩서열에공유적으로연결시킴으로써변형시킬수도있다. 전형적으로, 상기비-이뮤노글로불린폴리펩티드로항체의불변도메인을치환하거나또는항체의하나의항원- 결합 (combining) 부위의가변도메인을치환함으로써, 항원에대한특이성을갖는하나의항원-결합부위및상이한항원에대한특이성을갖는다른항원-결합부위를포함하는키메라 2가항체를생성시킨다. (iii) 인간화항체인간화항체는비인간공급원으로부터상기항체내로도입된하나이상의아미노산잔기를가질수있다. 흔히, 이들비인간아미노산잔기는전형적으로는 " 임포트 " 가변도메인으로부터취해지는 " 임포트 " 잔기로서지칭된다. 본질적으로, 인간화는원터 (Winter) 및그의동료들의문헌 ([Jones et al., Nature 321: (1986)]; [Riechmann et al., Nature, 332: (1988)]; [Verhoeyen et al., Science 239: (1988)]) 의방법에따라초가변영역서열로인간항체의상응하는서열을치환함으로써수행할수있다. 따라서, 이러한 " 인간화 " 항체는온전한인간가변도메인보다실질적으로더적은것이비인간종으로부터의상응하는서열로치환된키메라항체이다 ( 미국특허제4,816,567호 ). 실제로, 인간화항체는전형적으로일부초가변영역잔기및가능하게는일부 FR 잔기가설치류항체내의유사한부위로부터의잔기에의해치환된인간항체이다. 인간화항체의제조에사용될경쇄및중쇄둘다의인간가변도메인의선택은항원성을감소시키는데있어서매우중요하다. 이른바 " 베스트-핏 (best-fit)" 방법에따라, 설치류항체의가변도메인의서열을공지된인간가변-도메인서열의전체라이브러리에대하여스크리닝한다. 이어서, 설치류의서열에가장가까운인간서열은인간화항체에대한인간프레임워크영역 (FR) 으로서허용된다 ([Sims et al., J. Immunol., 151:2296 (1993)]; [Chothia et al., J. Mol. Biol., 196:901 (1987)]). 다른방법은경쇄또는중쇄의특정하위군의모든인간항체의컨센서스서열로부터유래된특정프레임워크영역을이용한다. 여러상이한인간화항체에대하여동일한프레임워크가사용될수있다 ([Carter et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89:4285 (1992)]; [Presta et al., J. Immunol., 151:2623 (1993)]). 다른실시양태에서, 항체는항원에대한고친화성및다른바람직한생물학적특성을보유하도록인간화될수있다. 인간화항체는모서열및인간화서열의 3-차원모델을이용하여모서열및다양한개념적인간화생성물을분석하는과정에의해제조할수있다. 3-차원이뮤노글로불린모델이통상적으로이용가능하며, 당업계의숙련가에게잘알려져있다. 선택된후보이뮤노글로불린서열의가능한 3-차원형태구조를예시하고디스플레이하는컴퓨터프로그램을이용할수있다. 이들디스플레이를조사하여후보이뮤노글로불린서열의기능에서잔기의가능한역할을분석할수있으며, 즉후보이뮤노글로불린이그의항원과결합하는능력에영향을주는잔기를분석할수있다. 이러한방식으로, FR 잔기가수용자및임포트서열로부터선택및조합될수있어서, 표적항원에대한증가된친화성과같은원하는항체특징이달성된다. 일반적으로, 초가변영역잔기는항원결합에영향을주는데있어서직접적이며, 가장실질적으로관여한다

116 [1146] [1147] [1148] [1149] 다양한형태의인간화항체가고려된다. 예를들어, 인간화항체는항체단편, 예를들어 Fab일수있다. 또는, 인간화항체는온전한항체, 예를들어온전한 IgG1 항체일수있다. 예로서예시적인인간화항-ErbB2 항체의제조를기술한다. 인간화항체는예를들어인간가변중쇄도메인내로혼입된비인간초가변영역잔기를포함하며, 문헌 [Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (1991)] 에기재된가변도메인넘버링시스템을이용하는경우에 69H, 71H 및 73H로이루어진군으로부터선택된위치에서프레임워크영역 (FR) 치환을추가로포함할수있다. 한실시양태에서, 인간화항체는위치 69H, 71H 및 73H 중두군데또는모두에서의 FR 치환을포함한다. 다른예는헤르셉틴 (HERCEPTIN; 등록상표 ) 제제로부터의정제된트라츠주마브항체의제조를기술한다. (iv) 인간항체인간화에대한대안으로서, 인간항체를생성시킬수있다. 예를들어, 면역화하는경우내인성이뮤노글로불린제조의부재하에인간항체의전체레퍼토리를제조할수있는트랜스제닉동물 ( 예, 마우스 ) 을생성시킬수있다. 예를들어, 키메라및생식세포돌연변이체마우스에서항체중쇄연결영역 (J H ) 유전자를동종접합성 결실시키면내인성항체제조가완전히억제되는것으로기술되어있다. 인간생식세포이뮤노글로불린유전자배열을상기생식세포돌연변이체마우스에전달하면항원접종시에인간항체가제조될것이다 ( 예를들어, 문헌 [Jakobovits et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90:2551 (1993)]; [Jakobovits et. al., Nature, 362: (1993)]; [Bruggermann et al., Year in Immuno., 7:33 (1993)]; 및미국특허제5,591,669호, 동제5,589,369호및동제5,545,807호참조 ). [1150] [1151] [1152] 또는, 면역화되지않은공여자유래의이뮤노글로불린가변 (V) 도메인유전자레퍼토리로부터시험관내에서인간항체및항체단편을제조하기위해파지디스플레이기술 [McCafferty et al., Nature 348: (1990)] 을이용할수있다. 이기술에따라, 항체 V 도메인유전자는사상 (filamentous) 박테리오파지, 예를들면 M13 또는 fd의메이저또는마이너코트단백질유전자내에인-프레임으로클로닝되며, 상기파지입자의표면상에서기능성항체단편으로서디스플레이된다. 사상입자는파지게놈의단일가닥 DNA 카피를함유하기때문에, 항체의기능적특성을기준으로선별함으로써이러한특성을나타내는항체를코딩하는유전자가또한선별된다. 따라서, 파지는 B 세포의일부특성을모방한다. 파지디스플레이는다양한포맷으로수행될수있으며, 이에대한검토를위해서는문헌 [Johnson, Kevin S. and Chiswell, David J., Current Opinion in Structural Biology 3: (1993)] 을참조한다. 파지디스플레이를위해 V 유전자절편에대한여러공급원을이용할수있다. 클랙슨 (Clackson) 등은문헌 [Nature, 352: (1991)] 에서면역화된마우스의비장에서유래하는 V 유전자에대한작은무작위조합라이브러리로부터다양한배열의항-옥사졸론항체를단리하였다. 면역화되지않은인간공여자유래의 V 유전자의레퍼토리를구성할수있으며, 다양한배열의항원 ( 자가항원포함 ) 에대한항체는본질적으로문헌 ([Marks et al., J. Mol. Biol. 222: (1991)] 또는 [Griffith et al., EMBO J. 12: (1993)]) 에기재된기술에따라단리할수있다. 또한, 미국특허제 5,565,332호및동제5,573,905호를참조한다. 상기논의된바와같이, 인간항체는시험관내활성화된 B 세포에의해생성시킬수도있다 ( 미국특허제5,567,610호및동제5,229,275호참조 ). 인간항-CD30 항체는미국특허출원제10/338,366호에기재되어있다. (v) 항체단편항체단편을제조하기위한다양한기술들이개발되어왔다. 전통적으로, 항체단편은온전한항체의단백질분해절단을통해유도되었다 ( 예를들어, 문헌 [Morimoto et al., Journal of Biochemical and Biophysical Methods 24: (1992)] 및 [Brennan et al., Science, 229:81 (1985)] 참조 ). 그러나, 이들단편은재조합숙주세포에의해직접적으로제조할수있다. 예를들어, 항체단편은상기논의된항체파지라이브러리로부터단리할수있다. 또는, Fab'-SH 단편은대장균으로부터직접적으로회수할수있으며, 화학적으로커플링시켜 F(ab') 2 단편을형성시킬수있다 [Carter et al., Bio/Technology 10: (1992)]. 다른접근법 에따라, F(ab') 2 단편은재조합숙주세포배양물로부터직접적으로단리할수있다. 항체단편의제조를위한다른기술은당업자에게는자명할것이다. 다른실시양태에서, 선택된항체는단일쇄 Fv 단편 (scfv) 이다. WO 93/16185; 미국특허제5,571,894호 ; 및미국특허제5,587,458호를참조한다. 또한, 항체단편은예를들어미국특허제5,641,870호에기재된바와같은 " 선형항체 " 일수도있다. 이러한선형항체단편은단일특이적또는이중특이성일수있다

117 [1153] [1154] [1155] [1156] [1157] [1158] (vi) 이중특이성항체이중특이성항체는 2개이상의상이한에피토프에대한결합특이성을갖는항체이다. 예시적인이중특이성항체는 CD30 단백질의두상이한에피토프에결합할수있다. 또는, 항-CD30 아암 (arm) 은 IgG에대한 Fc 수용체 (FcγR), 예를들어 FcγRI (CD64), FcγRII (CD32) 및 FcγRIII (CD16) 에결합하는아암과결합함으로써 CD30-발현세포에대한세포방어메카니즘에집중될수있다. 또한, 이중특이성항체를사용해서 CD30을발현하는세포에세포독성제를국소화할수있다. 전장이중특이성항체의전통적인제조는두이뮤노글로불린중쇄-경쇄쌍의공동발현을기초로하는데, 상기 2 개의쇄는상이한특이성을갖는다 [Millstein et al., Nature, 305: (1983)]. 이뮤노글로불린중쇄및경쇄의무작위분류로인해, 이들하이브리도마 ( 쿼드로마 ; quadroma) 는 10 가지상이한항체분자들로이루어진잠재적인혼합물을생성하는데, 이중하나만이정확한이중특이성구조를갖는다. 일반적으로친화성크로마토그래피단계들에의해수행되는정확한분자의정제는다소번거로우며, 생성물의수율은낮다. 유사한과정들이 WO 93/08829, 및문헌 [Traunecker et al., EMBO J., 10: (1991)] 에개시되어있다. 상이한접근법에따라, 원하는결합특이성 ( 항체-항원결합부위 ) 을갖는항체가변도메인을이뮤노글로불린불변도메인서열에융합시킨다. 융합은바람직하게는힌지, CH2 및 CH3 영역중적어도일부를포함하는이뮤노글로불린중쇄불변도메인과의융합이다. 융합물의적어도하나에존재하는, 경쇄결합에필요한부위를함유하는제1 중쇄불변영역 (CH1) 을갖는것이바람직하다. 이뮤노글로불린중쇄융합물및원한다면이뮤노글로불린경쇄를코딩하는 DNA를별도의발현벡터에삽입시켜적합한숙주생물체를공동형질감염시킨다. 이는, 구조물에사용된상이한비율의세가지폴리펩티드쇄가최적의수율을제공하는경우, 실시양태에서세가지폴리펩티드단편의상호비율을조정하는데있어서큰유연성을제공한다. 그러나, 동등한비율의두가지이상의폴리펩티드쇄가높은수율을나타내거나또는이러한비율이특별히중요하지않은경우, 두가지또는세가지폴리펩티드쇄에대한코딩서열을하나의발현벡터내에삽입할수있다. 이러한접근법의한실시양태에서, 이중특이성항체는하나의아암에제1 결합특이성을갖는하이브리드이뮤노글로불린중쇄및다른아암에서의 ( 제2 결합특이성을제공하는 ) 하이브리드이뮤노글로불린중쇄-경쇄쌍으로구성된다. 이중특이성분자의절반에만있는이뮤노글로불린경쇄의존재가용이한분리방식을제공하기때문에, 상기비대칭구조는원치않는이뮤노글로불린쇄배합물로부터원하는이중특이성화합물의분리를촉진시키는것으로밝혀졌다. 이러한접근법은 WO 94/04690에개시되어있다. 이중특이성항체를생성시키는추가의세부사항에대하여는, 예를들어문헌 [Suresh et al., Methods in Enzymology, 121:210 (1986)] 을참조한다. 미국특허제5,731,168호에기재된다른접근법에따르면, 항체분자의쌍사이의계면을조작하여, 재조합세포배양물로부터회수되는이종이량체의비율을최대화할수있다. 바람직한계면은항체불변도메인의 CH3 도메인의적어도일부를포함한다. 이러한방법에서, 제1 항체분자의계면으로부터하나이상의작은아미노산측쇄를더큰측쇄 ( 예, 티로신또는트립토판 ) 로대체한다. 더큰아미노산측쇄를더작은측쇄 ( 예, 알라닌또는트레오닌 ) 로대체함으로써, 더큰측쇄와동일또는유사한크기의보상성 " 공동 " 을제2 항체분자의계면상에생성시킨다. 이는이종이량체의수율이동종이량체와같은다른원치않는최종생성물의수율을초과하도록증가시키는메카니즘을제공한다. 항체단편으로부터이중특이성항체를생성시키기위한기술은또한문헌에기술되어있다. 예를들어, 화학결합을사용해서이중특이성항체를제조할수있다. 문헌 [Brennan et al., Science, 229:81 (1985)] 에는온전한항체를단백질분해에의해절단하여 F(ab') 2 단편을생성시키는과정이기재되어있다. 이들단편을디티 올복합체인나트륨아르세니트의존재하에환원시켜근처의디티올을안정화하고분자간디술피드형성을방지한다. 이어서, 생성된 Fab' 단편을티오니트로벤조에이트 (TNB) 유도체로전환시킨다. 이후, Fab'-TNB 유도체들중하나를메르캅토에틸아민을사용한환원에의해 Fab'-티올로재전환시키고, 등몰량의다른 Fab'-TNB 유도체와혼합하여이중특이성항체를형성시킨다. 제조된이중특이성항체는효소의선택적고정을위한작용제로서사용할수있다. [1159] 최근의진전에의해대장균으로부터 Fab'-SH 단편을직접회수하는것이용이해졌으며, 이를화학적으로커플링 시켜이중특이성항체를형성시킬수있다. 문헌 [Shalaby et al., J. Exp. Med., 175: (1992)] 에는 완전한인간화이중특이성항체 F(ab') 2 분자를제조하는것에대하여기술되어있다. 각각의 Fab' 단편이대장 균으로부터별도로분비되었으며, 시험관내에서지정된화학적커플링처리함으로써이중특이성항체를형성시

118 켰다. [1160] 재조합세포배양물로부터이중특이성항체단편을직접적으로제조및단리하는다양한기술들이또한기술되어있다. 예를들어, 류신지퍼를사용해서이중특이성항체를제조하였다 [Kostelny et al., J. Immunol., 148(5): (1992)]. Fos 및 Jun 단백질로부터의류신지퍼펩티드를유전자융합에의해두가지상이한항체의 Fab' 부위에연결하였다. 항체동종이량체를힌지영역에서환원시켜단량체를제조한다음, 재산화시켜항체이종이량체를형성시켰다. 이러한방법은항체동종이량체를제조하는데이용될수도있다. 문헌 [Hollinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90: (1993)] 에기재된 " 디아바디 " 기술은이중특이성항체단편을제조하기위한다른메카니즘을제공하였다. 단편은, 너무짧아서동일쇄상의두도메인사이에쌍을이루게할수없는링커에의해경쇄가변도메인 (V L ) 에접속된중쇄가변도메인 (V H ) 을포함한다. 따라서, 하나의단편의 V H 및 V L 도메인이다른단편의상보적 V L 및 V H 도메인과강제로쌍을이루게됨으로써 2 개의항원 - 결합부위를형성한다. 단일쇄 Fv (sfv) 이량체를사용해서이중특이성항체단편을제조하는다른 전략이또한보고되었다. 문헌 [Gruber et al., J. Immunol., 152:5368 (1994)] 을참조한다. [1161] [1162] [1163] [1164] [1165] [1166] [1167] [1168] [1169] 결합가가 2를초과하는항체가고려된다. 예를들어, 삼중특이적항체를제조할수있다 [Tutt et al. J. Immunol. 147:60 (1991)]. (vii) 다른아미노산서열변형본원에기재된항체의아미노산서열변형이고려된다. 예를들어, 항체의결합친화성및 ( 또는 ) 다른생물학적특성을향상시키는것이바람직할수있다. 항체의아미노산서열변이체는항체핵산에적절한뉴클레오티드변화를도입하거나또는펩티드합성에의해제조한다. 이러한변형으로는예를들어항체의아미노산서열내의잔기들로부터의결실및 ( 또는 ) 그러한잔기들로의삽입및 ( 또는 ) 상기잔기들의치환을들수있다. 최종구조물이원하는특징을보유한다면, 결실, 삽입및치환의임의의조합을최종구조물에적용한다. 또한, 아미노산변화는항체의번역후프로세스를변화시킬수도있으며, 예를들어글리코실화부위의수또는위치를변화시킨다. 돌연변이유발을위한바람직한위치인항체의특정잔기또는영역을확인하는유용한방법은문헌 [Cunningham and Wells Science, 244: (1989)] 에기재된바와같이 " 알라닌스캐닝돌연변이유발 " 이라고불린다. 여기서, 잔기또는표적잔기들의군이확인되며 ( 예, 하전된잔기, 예를들면 arg, asp, his, lys 및 glu), 아미노산과항원의상호작용에영향을주는중성또는음으로하전된아미노산 ( 가장바람직하게는알라닌또는폴리알라닌 ) 에의해대체된다. 이어서, 치환부위에서또는이부위에대한추가의또는다른변이체를도입함으로써, 치환에대한기능적민감도를입증하는아미노산분류를상세하게설명한다. 따라서, 아미노산서열변화를도입하기위한부위는미리결정되지만, 돌연변이그자체의특성은미리결정될필요가없다. 예를들어, 주어진부위에서돌연변이의성능을분석하기위해, 표적코돈또는영역에서 ala 스캐닝또는무작위돌연변이유발을수행하고, 발현된항체변이체를원하는활성에대하여스크리닝한다. 아미노산서열삽입은단일또는복수개아미노산잔기의서열내삽입뿐만아니라, 하나의잔기로부터수백개이상의잔기를함유하는폴리펩티드에이르는길이범위에서의아미노- 및 ( 또는 ) 카르복실-말단융합을포함한다. 말단삽입의예는 N-말단메티오닐잔기를갖는항체또는세포독성폴리펩티드에융합된항체를포함한다. 항체분자의다른삽입변이체는항체의혈청반감기를증가시키는폴리펩티드또는효소에대한항체 ( 예, ADEPT의경우 ) 의 N- 또는 C-말단으로의융합을포함한다. 다른유형의변이체는아미노산치환변이체이다. 이들변이체는상이한잔기에의해대체된항체분자내에하나이상의아미노산잔기를갖는다. 치환돌연변이유발에대한가장큰관심부위는초가변영역을포함하지만, FR 변화가또한고려된다. 항체의생물학적특성에서의실질적인변화는, (a) 치환영역에서폴리펩티드주쇄의구조, 예를들어시트또는나선형형태, (b) 표적부위에서분자의전하또는소수성, 또는 (c) 측쇄의벌크 (bulk) 를유지하는데있어서상당히다른효과를나타내는치환을선택함으로써달성된다. 자연발생적인잔기는공통적인측쇄특성을기준으로하기와같은군으로분류된다 : (1) 소수성 : norleucine, met, ala, val, leu, ile; (2) 중성친수성 : cys, ser, thr;

119 [1170] [1171] [1172] [1173] [1174] [1175] [1176] [1177] (3) 산성 : asp, glu; (4) 염기성 : asn,gln, his, lys, arg; (5) 쇄배향에영향을주는잔기 : gly, pro; 및 (6) 방향족 : trp, tyr, phe. 비-보존적치환은이들종류중어느한구성원을다른종류의것으로교환하는것을수반할것이다. 치환변이체의특히바람직한유형은모항체 ( 예, 인간화또는인간항체 ) 의하나이상의초가변영역잔기를치환하는것을포함한다. 일반적으로, 추가의개발을위해선택된생성된변이체는그의생성이유래되는모항체에비해향상된생물학적특성을갖게될것이다. 이러한치환변이체를생성시키는편리한방식은파지디스플레이를이용하는친화성성숙을포함한다. 요약하면, 여러초가변영역부위 ( 예, 6-7 부위 ) 를돌연변이시켜각부위에서모든가능한아미노치환을일으킨다. 이와같이제조된항체변이체는각입자내에패키지화된 M13의유전자 III 생성물에대한융합물로서사상파지입자로부터 1가방식으로디스플레이된다. 이후, 파지-디스플레이된변이체를본원에개시된바와같이상기변이체의생물학적활성 ( 예, 결합친화성 ) 에대하여스크리닝한다. 변형을위한후보초가변영역부위를확인하기위해, 알라닌스캐닝돌연변이유발을수행하여, 항원결합에상당히기여하는초가변영역잔기를확인할수있다. 별법으로또는추가로, 항체와항원사이의접촉점을확인하기위해항원-항체복합체의결정구조를분석하는것이유익할수있다. 이러한접촉잔기및인접잔기는본원에상술된기술에따라치환하기위한후보이다. 일단이러한변이체가생성되면, 변이체패널을본원에기재된바와같이스크리닝하고, 하나이상의관련검정에서우수한특성을나타내는항체를추가의개발을위해선택할수있다. 이펙터기능과관련하여, 예를들면항체의항원-의존성세포-매개세포독성 (ADCC) 및 ( 또는 ) 보체의존성세포독성 (CDC) 을증대시키기위해본발명의항체를개질시키는것이바람직할수있다. 이는항체의 Fc 영역에하나이상의아미노산치환을도입함으로써달성될수있다. 별법으로또는부가적으로, 시스테인잔기 ( 들 ) 를 Fc 영역에도입하여, 이영역에서의사슬간디술피드결합형성을가능하게할수있다. 그결과생성된동종이량체항체는향상된내재화능및 ( 또는 ) 증가된보체-매개세포사멸및항체-의존성세포성세포독성 (ADCC) 을가질수있다 ( 문헌 [Caron et al. J. Exp Med. 176: (1992)] 및문헌 [Shopes, B. J. Immunol. 148: (1992)] 참조 ). 증대된항-종양활성을갖는동종이량체항체를또한문헌 [Wolff et al. Cancer Research 53: (1993)] 에개시된헤테로양기능성가교제를사용하여제조할수도있다. 별법으로, 2개의 Fc 영역을갖는항체가엔지니어링될수있고그에따라증대된보체용해및 ADCC 능력을가질수있다 ( 문헌 [Stevenson et al. Anti-Cancer Drug Design 3: (1989)] 참조 ). 항체의혈청반감기를연장시키기위해, 예를들면, 미국특허제 호에개시되어있는바와같이재이용 (salvage) 수용체결합에피토프를항체 ( 특히항체단편 ) 에도입할수있다. 본원에서사용되는 " 재이용수용체결합에피토프 " 라는용어는 IgG 분자의생체내혈청반감기를연장시킬수있는 IgG 분자 ( 예를들면, IgG 1, IgG 2, IgG 3, 또는 IgG 4 ) 의 Fc 영역의에피토프를지칭한다. [1178] [1179] (viii) 글리코실화변이체본발명의 ADC의항체는그들의불변영역보존위치에서글리코실화될수있다 ( 문헌 [Jefferis and Lund, (1997) Chem. Immunol. 65: ]; 문헌 [Wright and Morrison, (1997) TibTECH 15:26-32]). 이뮤노글로불린의올리고당측쇄는단백질의기능 ( 문헌 [Boyd et al., (1996) Mol. Immunol. 32: ]; 문헌 [Wittwe and Howard, (1990) Biochem. 29: ]) 및배좌 (conformation) 에영향을미칠수있는당단백질부분과당단백질의현재 3차표면간의분자내상호작용 ( 상기 Hefferis 및 Lund의문헌 ; 문헌 [Wyss and Wagner, (1996) Current Opin. Biotech. 7: ]) 에영향을미친다. 올리고당은또한특정인식구조에따라특정분자에대해해당당단백질을표적화하는작용을할수있다. 예를들면, 갈락토실화된 IgG에서, CH 2 사이공 간으로부터의올리고당잔기 ' 플립 (flip)' 및말단 N-아세틸글로코사민잔기는만노스결합단백질을결합시키는데이용된다는것이보고되었다 ( 문헌 [Malhotra et al., (1995) Nature Med. 1: ]). 중국햄스터난소 (CHO) 세포에서생산된 CAMPATH-1H ( 인간림프구의 CDw52 항원을인식하는재조합인간화뮤린모노클로날 IgG1 항체 ) 로부터의올리고당을글리코펩티다제에의해제거하는것은보체매개용해 (CMCL) 의완전한감소를초래하고 ( 문헌 [Boyd et al., (1996) Mol. Immunol. 32: ]), 반면뉴라미니다제를사용하여시알산잔기를선택적으로제거하는것은 DMCL의감소를초래하지않는다. 항체의글리코실화는또한항체-의존성세

120 포성세포독성 (ADCC) 에영향을미치는것으로보고되었다. 특히, β(1,4)-n- 아세틸글루코사미닐트랜스퍼라제 III (GnTIII) 의테트라시클린 - 조절발현, 이분지형 GlcNAc 의글리코실트랜스퍼라제촉매형성이일어난 CHO 세 포는향상된 ADCC 활성을갖는것으로보고되었다 ( 문헌 [Umana et al. (1999) Mature Biotech. 17: ]). [1180] [1181] [1182] [1183] [1184] [1185] [1186] [1187] 항체의글리코실화는전형적으로 N-연결형또는 O-연결형이다. N-연결형은탄수화물잔기가아스파라긴잔기의측쇄에부착되는것을지칭한다. 트리펩티드서열 (X가프롤린을제외한임의의아미노산인, 아스파라긴-X-세린및아스파라긴-X-트레오닌 ) 은탄수화물잔기가아스파라긴측쇄에효소작용으로부착되기위한인식서열이다. 따라서, 폴리펩티드에서상기트리펩티드서열의존재는잠재적인글리코실화부위를형성한다. O-연결형글리코실화는당 N-아세틸갈락토사민, 갈락토스, 또는크실로스중하나가히드록시아미노산 (5-히드록시프롤린또는 5-히드록시리신또한사용될수있지만, 가장통상적으로는세린또는트리오닌 ) 에부착되는것을지칭한다. 항체의글리코실화변이체는항체의글리코실화패턴이변화된변이체이다. 변화란항체에존재하는하나이상의탄수화물잔기를결실시키고, 하나이상의탄수화물잔기를항체에부가하고, 글리코실화조성 ( 글리코실화패턴 ), 글리코실화정도를변화시키는것등을의미한다. 글리코실화부위를항체에부가하는것은아미노산서열을하나이상의전술한트리펩티드서열을함유하도록변화시킴으로써편리하게행해진다 (N-연결형글리코실화부위일경우 ). 또한오리지널항체의서열에하나이상의세린또는트레오닌잔기를부가하거나또는치환함으로써변화시킬수도있다 (O-연결형글리코실화부위일경우 ). 마찬가지로, 글리코실화부위의제거는항체의천연글리코실화부위내에서아미노산을변화시킴으로써행해질수있다. 아미노산서열은통상적으로기본핵산서열을변화시킴으로써변화된다. 상기방법에는천연기원으로부터의단리 ( 자연발생하는아미노산서열변이체일경우에 ) 또는올리고뉴클레오티드- 매개 ( 또는부위-지정 ) 돌연변이유발, PCR 돌연변이유발, 및항체의앞서제조된변이체또는비-변이체버전의카셋트돌연변이유발에의한제조가포함되나, 이들로한정되지는않는다. 항체의글리코실화 ( 글리코실화패턴을포함함 ) 는또한아미노산서열또는기본뉴클레오티드서열을변화시키지않으면서변화될수있다. 글리코실화는항체를발현시키기위해사용되는숙주세포에크게좌우된다. 잠재적인치료제로서의재조합당단백질, 예를들어항체의발현을위해사용되는세포유형은거의천연세포가아니기때문에, 항체의글리코실화패턴의상당한변이가예상될수있다 ( 예를들면, 문헌 [Hse et al., (1997) J. Biol. Chem. 272: ] 참조 ). 숙주세포의선택과함께, 항체의재조합생산중에글리코실화에영향을미치는인자에는성장모드, 배지제형, 배양밀도, 산소공급, ph, 정제방법등이포함된다. 올리고당생산에관여하는특정효소를도입하거나또는과발현시키는것을비롯한, 특정숙주유기체에서달성되는글리코실화패턴을변화시키기위한다양한방법이제안되었다 ( 미국특허제 호 ; 동제 호 ; 동제 호 ). 글리코실화, 또는특정유형의글리코실화는예를들면, 엔도글리코시다제 H (Endo H) 를사용하여당단백질로부터효소작용에의해제거될수있다. 또한, 재조합숙주세포는유전공학적조작될수있는데, 예를들면특정유형의다당류를프로세싱할때손상을일으킬수있다. 상기기술및유사기술은당업계에널리공지되어있다. 항체의글리코실화구조는렉틴크로마토그래피, NMR, 질량분석법, HPLC, GPC, 단당류조성분석법, 연속효소분해및 HPAEC-PAD ( 전하기준으로올리고당을분리하기위해고 ph 음이온교환크로마토그래피를사용함 ) 를비롯한, 통상적인탄수화물분석기술을사용하여용이하게분석할수있다. 분석목적의올리고당방출방법또한공지되어있으며, 효소처리 ( 통상적으로펩티드-N-글리코시다제 F/ 엔도-β-갈락토시다제를사용하여수행됨 ), 주로 O-연결형구조물을방출하기위한극한알칼리성환경을사용하는제거, 및 N- 및 O- 연결된올리고당을둘다방출하기위한무수히드라진을사용하는화학적방법이포함되고, 이들로한정되지는않는다 a 항체-약물접합체 (ADC) 의스크리닝트랜스제닉동물및세포주는루이스 Y, CD30, CD40, 및 CD70을비롯한단백질의과발현과관련있는질환또는장애의예방적또는치료적처치로서잠재력을갖는항체약물접합체 (ADC) 를스크리닝하는데있어서특히유용하다. 트랜스제닉동물및세포주는 HER2의과발현과관련있는질환또는장애의예방적또는치료적처치로서잠재력을갖는항체약물접합체 (ADC) 를스크리닝하는데있어서특히유용하다 ( 미국특허제 호 ). 유용한 ADC의스크리닝은소정의투여량범위에걸쳐서후보 ADC를트랜스제닉동물에투여하고, 수많은시점에서 ADC가평가되는질환또는장애에미치는영향 ( 들 ) 을검정하는단계를포함할수있다. 별법으로, 또는부

121 가적으로, 적용가능하다면, 약물을질환유발인자에노출되기전에또는노출과동시에투여할수있다. 후보 ADC를연속적으로및개별적으로, 또는중간- 또는고-처리량스크리닝포맷하에서병행하여스크리닝할수있다. 질환또는장애의예방적또는치료적처치를위해사용되는 ADC가스크리닝될수있는속도는단지데이타의검출 / 측정 / 분석을비롯한, 합성또는스크리닝방법의속도에의해서제한된다. [1188] [1189] [1190] [1191] [1192] [1193] [1194] [1195] [1196] [1197] 한실시양태는 (a) 안정한신장세포암세포주로부터의세포를비-인간동물에이식하고, (b) ADC 약물후보를비-인간동물에투여하고, (c) 후보가이식된세포주로부터의종양형성을억제하는능력을측정하는단계를포함하는스크리닝방법이다. 또다른실시양태는 (a) 안정한호치킨병 (Hodgkin's disease) 세포주로부터의세포를 ADC 약물후보와접촉시키고 (b) ADC 후보가 CD40의리간드활성화를차단하는능력을평가하는단계를포함하는스크리닝방법이다. 또다른실시양태는 (a) 안정한호치킨병세포주로부터의세포를 ADC 약물후보와접촉시키고 (b) ADC 후보가세포사멸을유도하는능력을평가하는단계를포함하는스크리닝방법이다. 한실시양태에서 ADC 후보가아팝토시스를유도하는 A능력을평가한다. 한실시양태는 (a) 안정한암세포주로부터의세포를비-인간동물에이식하고, (b) ADC 약물후보를비-인간동물에투여하고, (c) 후보가이식된세포주로부터의종양형성을억제하는능력을측정하는단계를포함하는스크리닝방법이다. 본발명은또한 (a) 안정한유방암세포주로부터의세포를약물후보와접촉시키고 (b) ADC 후보가안정한세포주의성장을억제하는능력을평가하는단계를포함하는, HER2의과발현을특징으로하는질환또는장애의치료를위한 ADC 후보의스크리닝방법에관한것이다. 또다른실시양태는 (a) 안정한암세포주로부터의세포를 ADC 약물후보와접촉시키고 (b) ADC 후보가 HER2의리간드활성화를차단하는능력을평가하는단계를포함하는스크리닝방법이다. 한실시양태에서 ADC 후보가헤레굴린결합을차단하는능력을평가한다. 또다른실시양태에서, ADC 후보가리간드-자극티로신인산화를차단하는능력을평가한다. 또다른실시양태는 (a) 안정한암세포주로부터의세포를 ADC 약물후보와접촉시키고 (b) ADC 후보가세포사멸을유도하는능력을평가하는단계를포함하는스크리닝방법이다. 한실시양태에서, ADC 후보가아팝토시스를유도하는능력을평가한다. 또다른실시양태는 (a) ADC 약물후보를젖샘세포에서천연인간 HER2 단백질또는그의단편이과발현된트랜스제닉비-인간포유동물, 또는상기트랜스제닉비-인간포유동물로부터이식된종양을지닌비-인간포유동물에투여하고, (b) ADC 후보가표적질환또는장애에미치는영향을평가하는단계를포함하는스크리닝방법이며, 상기트랜스제닉포유동물은젖샘으로의발현을지시하는전사조절서열에작동가능하게연결된, 천연인간 HER2의생물학적활성을갖는천연인간 HER2 단백질또는그의단편을코딩하는핵산서열이그의게놈으로안정하게통합되고, 항-HER2 항체처치에반응하지않거나또는약하게반응하는유방종양을발달시킨다. 상기질환또는장애는 HER2-과발현암, 예컨대유방암, 난소암, 위암, 자궁내막암, 침샘암, 폐암, 신장암, 결장암, 갑상선암, 췌장암및방광암일수있으나, 이들로한정되지는않는다. 암은바람직하게는세포당약 500,000 카피이상, 보다바람직하게는세포당약 2,000,000 카피이상으로 HER2가발현된유방암이다. 당업계에널리공지되어있고후술되어있는검정방법을사용하여, ADC 약물후보를, 예를들면세포사멸및 ( 또는 ) 아팝토시스를유도하는능력에대해평가할수있다. 한실시양태에서, 후보 ADC를소정의투여량범위로트랜스제닉동물에투여하고, 시간에따른동물의화합물에대한생리반응을평가함으로써스크리닝한다. 평가될화합물의화학적특성에따라, 경구투여되거나, 또는적합한주사에의해투여될수있다. 몇몇경우에, 화합물의효능을증대시키는보조인자와함께화합물을투여하는것이적합할수있다. 대상체트랜스제닉동물로부터유래된세포주를사용하여각종장애를치료하는데유용한화합물을스크리닝한다면, 시험화합물을적합한시간에세포배양배지에첨가하고, 화합물에대한세포반응을적합한생화학적및 ( 또는 ) 조직학적검정법을사용하여시간에따라평가한다. 몇몇경우에, 해당화합물을화합물의효능을증대시킬보조인자와함께배양배지에적용하는것이적합할수있다. 따라서, 단백질의존재가비정상적인세포기능과상관관계가있고, 때로는종양의발달과관련있는세포증식및 ( 또는 ) 분화의발병과상관관계가있는, 표적단백질을특이적으로표적화하고그와결합하는 ADC를확인하기위한검정법이제공된다. ErbB ( 예를들면, ErbB2) 수용체의리간드활성화를차단하는 ADC를확인하기위해, ErbB 리간드가 ErbB(ErbB2) 수용체 ( 예를들어, 해당 ErbB 수용체가 ErbB 헤테로-올리고머를형성하는또다른 ErbB 수용체와함께 ) 를발현

122 하는세포에결합하는것을차단하는화합물의능력을측정할수있다. 예를들면, HER2가과발현된트랜스제닉동물로부터단리되고형질감염되어또다른 ErbB 수용체 (HER2가함께헤테로-올리고머를형성함 ) 를발현하는세포를 ADC와함께인큐베이션, 즉배양하고, 그후에표지된 ErbB 리간드에노출시킬수있다. 리간드가 ErbB 헤테로-올리고머의 ErbB 수용체에결합하는것을차단하는화합물의능력을그후에평가할수있다. [1198] 본원에서, 예를들면, HER2 가과발현되고, 트랜스제닉비 - 인간포유동물 ( 예, 마우스 ) 로부터확립된, 유방종양 세포주에헤레굴린 (HRG) 이결합하는것을후보 ADC 에의해억제하는것은 24- 웰 - 플레이트포맷으로빙상에서단 층배양물을사용하여행히질수있다. 항 -ErbB2 모노클로날항체를각웰에첨가하고 30 분동안인큐베이션할 수있다. 125 I- 표지된 rhrgβ (25,000 cpm) 를그후에첨가하고, 인큐베이션을 4 내지 16 시간동안계속 할수있다. 투여량반응곡선을작성하고해당화합물의 IC 50 값 ( 세포독성활성 ) 을계산할수있다. [1199] [1200] 별법으로, 또는부가적으로, ADC가 ErbB 헤테로-올리고머에존재하는 ErbB 수용체의 ErbB 리간드-자극티로신인산화를차단하는능력을평가할수있다. 예를들면, 본원에서트랜스제닉동물로부터확립된세포주를시험 ADC와함께인큐베이션하고그후에항-포스포티로신모노클로날항체 ( 검출가능한표지와임의로접합됨 ) 를사용하여 ErbB 리간드-의존성티로신인산화활성을검정할수있다. 미국특허제 호에개시된키나제수용체활성화검정법또한 ErbB 수용체활성화및화합물에의한상기활성의차단을측정하기위해이용가능하다. 한실시양태에서, 본질적으로후술된바와같이 MCF7 세포에서 pl80 티로신인산화의 HRG 자극을억제하는 ADC 를스크리닝할수있다. 예를들면, HER2-트랜스제닉동물로부터확립된세포주를 24-웰플레이트에플레이팅할수있고화합물을각웰에첨가하고실온에서 30분동안인큐베이션할수있으며, 그후에 rhrgβ 를 0.2 nm의최종농도까지각웰에첨가할수있고, 인큐베이션을약 8분동안계속할수있다. 배지는각웰로부터흡인될수있고, SDS 샘플완충액 (5% SDS, 25 mm DTT, 및 25 mm 트리스-HCl, ph 6.8) 100 μl를첨가함으로써반응을중지시킬수있다. 각샘플 (25 μl ) 을 4 내지 12% 구배의겔 ( 노벡스 (Novex)) 상에서전기영동하고그후에폴리비닐리덴디플루오라이드막으로전기영동에의해이동시킬수있다. 항포스포티로신 (1 μg /ml) 이뮤노블롯이발달될수있고, M r -180,000에서우세한반응밴드의강도를반사농도계측기로정량화할수있다. 수용체인산화의억제를평가하기위한별법은문헌 [Sadick et al. (1998) Jour. of Pharm. and Biomed. Anal.] 의 KIRA ( 키나제수용체활성화 ) 검정법이다. p180 티로신인산화의 HRG 자극을억제하는것으로공지되어있는, HER2에대한잘확립된모노클로날항체몇몇이이검정법에서양성대조군으로서사용될수있다. 반사농도계측기에의해측정된 p180 티로신인산화의 HRG 자극의억제에대한투여량-반응곡선을작성할수있고해당화합물의 IC 50 을계산할수있다. [1201] [1202] [1203] 또한시험 ADC가 HER2-트랜스제닉동물로부터유래된세포주에미치는성장억제영향을, 예를들면본질적으로문헌 [Schaefer et al. (1997) Oncogene 15: ] 에개시된바와같이평가할수있다. 상기검정법에따라, 세포를다양한농도의시험화합물로 4일동안처리하고크리스털바이올렛또는레독스염료 ( 알라마르블루 (Alamar Blue)) 로염색할수있다. 화합물과함께인큐베이션하면 MDA-MB-175 세포에서모노클로날항체 2C4에의해나타나는효능과유사하게상기세포주에서성장억제효과를확인할수있다 ( 상기 Schaefer 등의문헌 ). 추가의실시양태에서, 외인성 HRG는이러한억제를유의하게역전시키지않을것이다. 해당항원을특이적으로표적화하는성장억제화합물을확인하기위하여, 트랜스제닉동물로부터유래된해당항원이과발현된암세포의성장을억제하는화합물을스크리닝할수있고, 미국특허제 호에개시된검정법을행할수있다. 상기검정법에따라, 해당항원이과발현된암세포를 10% 의소태아혈청, 글루타민및페니실린스트렙토마이신이보충된, F12와 DMEM 배지의 1:1 혼합물에서성장시킨다. 세포를 35 mm의세포배양디쉬에 20,000개의세포 (2 ml/35 mm 디쉬 ) 로플레이팅하고시험화합물을다양한농도로첨가한다. 6일후에, 비처리된세포와비교하여, 세포수를전자카울터 (COULTER; 상표명 ) 세포개수측정기를사용하여카운팅한다. 약 20 내지 100% 또는약 50 내지 100% 세포성장을억제하는화합물이성장억제화합물로선별될수있다. 세포사멸을유도하는화합물을선별하기위해, 예를들면, PI, 트립판블루또는 7AAD 흡수에의해표시되는, 막무결성의손상을대조와비교하여평가할수있다. PI 흡수검정법은트랜스제닉동물의해당종양조직으로부터단리된세포를사용한다. 상기검정법에따라서, 세포를 10% 의가열-불활성화된 FBS ( 하이클론 (Hyclone)) 및 2 mm의 L-글루타민이보충된, D-MEM(Dulbecco's Modified Eagle Medium):Ham's F-12 (50:50) 에서배양한다. 따라서, 상기검정법은보체및면역이펙터세포의부재하에행해진다. 세포를 100 x 20 mm 디

123 쉬에디쉬당 3 x 10 6 의밀도로접종하고부착되도록밤새둔다. 그후에배지를제거하고신선한배지단독으로또는다양한농도의화합물을함유하는배지로교체한다. 세포를 3일동안인큐베이션한다. 각처리후에, 단층을 PBS로세척하고트립신화에의해분리한다. 그후에세포를 1200 rpm으로 5분동안 4 에서원심분리하고, 펠렛을 3 ml의냉 Ca 2+ 결합완충액 (10 mm Hepes, ph 7.4, 140 mm NaCl, 2.5 mm CaCl 2 ) 에재현탁시키고, 세포덩어리를제거하기위해 35 mm 스트레이너 (strainer)-캡핑 12 x 75 mm 튜브에나눈다 ( 튜브당 1 ml, 처리군당 3개의튜브 ). 그후에튜브에 PI (10 μg /ml) 를가한다. 샘플을파스칸 (FACSCAN; 상표명 ) 유세포분석기및파스컨버트 (FACSCONVERT; 상표명 ) 셀퀘스트 (CellQuest) 소프트웨어 ( 벡톤디킨슨 (Becton Dickinson)) 를사용하여분석할수있다. PI 흡수로측정하였을때통계적으로유의한수준의세포사멸을유도하는화합물이세포사멸-유도화합물로선별될수있다. [1204] [1205] [1206] [1207] [1208] 아팝토시스를유도하는화합물을선별하기위해, 트랜스제닉동물의해당종양조직으로부터확립된세포를사용하는아넥신 (annexin) 결합검정법을행한다. 상기단락에기재된바와같이세포를배양하고디쉬에접종한다. 그후에배지를제거하고신선한배지단독으로또는항체약물접합체 (ADC) 10 μg /ml를함유하는배지로교체한다. 3일간인큐베이션한후에, 단층을 PBS로세척하고트립신화에의해분리한다. 그후에세포를, 세포사멸검정법에대해전술한바와같이, 원심분리하고, Ca 2+ 결합완충액에재현탁시키고, 튜브에나눈다. 그후에튜브에표지된아넥신 ( 예를들면, 아넥신 V-FITC) (1 μg /ml) 을가한다. 샘플을파스칸 ( 상표명 ) 유세포분석기및파스컨버트 ( 상표명 ) 셀퀘스트소포트웨어 ( 벡톤디킨슨 ) 를사용하여분석할수있다. 대조와비교하여통계적으로유의한수준의아넥신결합을유도하는화합물이아팝토시스-유도화합물로선별된다 시험관내세포증식검정법일반적으로, 항체약물접합체 (ADC) 의세포독성또는세포분열억제활성은, 수용체단백질을갖는포유동물세포를세포배양배지에서 ADC의항체에노출시키고, 세포를약 6시간내지약 5일동안배양하고, 세포생존률을측정함으로써측정된다. 세포-기재시험관내검정법을사용하여생존률 ( 증식 ), 세포독성, 및본발명의 ADC에의한아팝토시스유도 ( 카스파제활성화 ) 를측정한다. 항체약물접합체의시험관내효능을세포증식검정법 ( 실시예 18, 도 7 내지 10) 에의해측정한다. 셀타이터 -글로(CellTiter-Glo; 등록상표 ) 발광세포생존률검정법 ( 딱정벌레목루시퍼라제의재조합발현기재의순일 (homogeneous) 검정방법 ) 이상업적으로이용가능하다 ( 미국위스콘신주매디슨소재의프로메가코포레이션 (Promega Corp.)) ( 미국특허제 호, 동제 호, 및동제 호 ). 상기세포증식검정법은물질대사적활성세포의지표인, 존재하는 ATP의정량화를기초로배양물중생존가능한세포수를측정한다 ( 문헌 [Crouch et al. (1993) J. Immunol. Meth. 160:81-88], 미국특허제 호 ). 셀타이터-글로 ( 등록상표 ) 검정법을 96 웰포맷으로행하여, 자동화된고-처리량스크리닝 (HTS) 에적용할수있도록한다 ( 문헌 [Cree et al. (1995) AntiCancer Drugs 6: ]). 순일검정법절차는단일시약 ( 셀타이터-글로 ( 등록상표 ) 시약 ) 을혈청-보충된배지에서배양된세포에직접첨가하는것을포함한다. 세포세척, 배지의제거및수차례의피펫팅단계는필요하지않다. 상기시스템은시약을첨가하고혼합한 10분후에 384-웰포맷으로 15개의세포 / 웰정도까지검출한다. 세포를 ADC로계속해서처리하거나, 또는 ADC로처리하고 ADC로부터분리할수있다. 일반적으로, 잠시동안 (3시간) 처리한세포는계속해서처리한세포와동일한효능을나타낸다. 순일 " 첨가-혼합-측정 " 포맷은세포용해및존재하는 ATP의양에비례하는발광신호발생을초래한다. ATP의양은배양물에존재하는세포수에정비례한다. 셀타이터-글로 ( 등록상표 ) 검정법은루시퍼라제반응에의해발생되고, 사용된세포유형및배지에따라일반적으로 5시간보다긴반감기를갖는 " 글로형 (glow-type)" 발광신호를발생시킨다. 생존가능한세포는상대발광단위 (RLU) 로서나타난다. 기질 ( 딱정벌레루시페린 (Beetle Luciferin)) 은재조합개똥벌레루시퍼라제에의해산화적탈카르복실화되고, 이때 ATP의 AMP로의전환및광자의발생을수반한다. 반감기연장은시약주입기를사용할필요성을제거하고다수개의플레이트의연속식또는배치식프로세싱에서유동성을제공한다. 상기세포증식검정법은다양한멀티웰포맷, 예를들면 96 또는 384 웰포맷과함께사용될수있다. 데이타는발광계또는 CCD 카메라영상화장치로기록할수있다. 발광결과는시간에따라측정한, 상대광단위 (RLU) 로나타낸다. [1209]

124 [1210] 항체약물접합체의항 - 증식효과를세포증식에의해측정한다 (4 가지의상이한유방종양세포주에대한상기 시험관내세포사멸검정법 ) ( 도 7 내지 10). HER2 수용체단백질이과발현된것으로알려져있는 SK-BR-3 및 BT-474 의 IC 50 값을측정한다. 표 2a 는 SK-BR-3 세포의세포증식검정법에서예시항체약물접합체의효능 (IC 50 ) 측정치를나타낸다. 표 2b 는 BT-474 세포의세포증식검정법에서예시항체약물접합체의효능 (IC 50 ) 측정치를나타낸다. [1211] [1212] [1213] 항체약물접합체 : 트라츠주마브-MC-vc-PAB-MMAF, 3.8 MMAF/Ab; 트라츠주마브-MC-(N-Me)vc-PAB-MMAF, 3.9 MMAF/Ab; 트라츠주마브-MC-MMAF, 4.1 MMAF/Ab; 트라츠주마브-MC-vc-PAB-MMAE, 4.1 MMAE/Ab; 트라츠주마브-MC- vc-pab-mmae, 3.3 MMAE/Ab; 및트라츠주마브-MC-vc-PAB-MMAF, 3.7 MMAF/Ab는 MCF-7 세포의증식을억제하지않는다 ( 도 9). 항체약물접합체 : 트라츠주마브-MC-vc-PAB-MMAE, 4.1 MMAE/Ab; 트라츠주마브-MC-vc-PAB-MMAE, 3.3 MMAE/Ab; 트라츠주마브-MC-vc-PAB-MMAF, 3.7 MMAF/Ab; 트라츠주마브-MC-vc-PAB-MMAF, 3.8 MMAF/Ab; 트라츠주마브-MC-(N- Me)vc-PAB-MMAF, 3.9 MMAF/Ab; 및트라츠주마브-MC-MMAF, 4.1 MMAF/Ab는 MDA-MB-468 세포의증식을억제하지않는다 ( 도 10). MCF-7 및 MDA-MB-468 세포는 HER2 수용체단백질을과발현하지않는다. 따라서본발명의항-HER2 항체약물접합체는 HER2를발현하는세포의억제에대한선택성을보인다

125 표 2a [1214]

126 표 2b [1215] [1216] [1217] [1218] [1219] [1220] [1221] [1222] H = 트라츠주마브 7C2 = 트라츠주마브과는상이한에피토프를결합시키는항-HER2 뮤린항체 Fc8 = FcRn과결합하지않는돌연변이체 Hg = 중쇄힌지시스테인이세린으로돌연변이된 " 힌지리스 (hingeless)" 전장인간화 4D5, 대장균에서발현됨 ( 따라서비-글리코실화 ) 항-TF Fab = 항-조직인자항체단편 * MDA-MB-468 세포에대한활성놀랍고도예상밖으로, 표 2a 및 2b에서 ADC의시험관내세포증식활성결과는일반적으로항체당적은평균갯수의약물잔기를갖는 ADC가예를들어,IC 50 이 0.1 μg ADC/ml 미만인효능을나타낸다는것을입증한다. 상기 결과는적어도트라츠주마브 ADC 의경우에, 항체당약물잔기의최적의비율이 8 미만일수있고, 약 2 내지약 5 일수있다는것을설명해준다. [1223] [1224] 생체내혈장클리어런스 (clearance) 및안정성 ADC의약물동력학적혈장클리어런스및안정성을래트및사이노몰거스 (cynomolgus) 원숭이에서조사한다. 시간에따른혈장농도를측정한다. 표 2c는래트에서항체약물접합체및기타투여된샘플의약물동력학적데이타를나타낸다. 래트가 HER2 수용체단백질을발현하지않는것으로알려져있기때문에, 래트는 ErbB 수용체항체에대한비-특이적모델이다