(Microsoft Word MSD\307\321\261\333\277\356\277\265\276\310\263\273\274\255.doc)

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1 5975 한글운영안내서

2 = 목차 = 1 MSD Site prep & Installation 1.1 PC 사양 1.2 Gas installation 1.3 Electronic Power 1.4 설치환경 2 MSD Hardware Installation 2.1 Installing the GC 2.2 Connecting the Helium Lines to the GC 2.3 Configuring the GC 2.4 Cover open 요령 3 Column Install 3.1 Column nut 및 ferrule 3.2 GC inlet에 Column 연결하기 3.3 MSD interface에 column 연결하기 4 MSD Chemstation Install 5 Main menu 설명 6 보조 Menu 의기능설명 6.1 Method menu 6.2 Instrument menu 6.3 Sequence menu 6.4 View menu 6.5 Abort menu 6.6 Help menu 6.7 시료의분석

3 7 Data analysis 7.1 File menu 7.2 Method menu 7.3 Chromatogram menu 7.4 Spectrum menu 7.5 Calibrate menu 7.6 Quantitate menu 7.7 Option menu 7.8 View menu

4 1 MSD Site prep & Installation 1.1 PC PC 사양 - Pentium VI 이상 - RAM : 256 이상 - HardDisk : 20 G 이상 Windows XP Professional Server (Service Pack 2 or later) - LAN card - Hub (5port 이상 ) 1.2 Gas installation EI mode 인경우는 He 만사용되므로반드시초고순도이상의 He( %) 을사용한다. Trap 의경우는 O 2, H 2 O, CO 2, CO 등을잡아내는 Big universal trap(rmsh- 2) 을반드시설치하여야한다. Gas tubing 연결시는 gas cylinder 에서부터연결을하여야되며 union 연결시최소 10 분이상의 purge time 을가져야한다.

5 1.3 Electronic Power GC 7890A MSD 5975 Line voltage (Single phase) VAC 50/ 60 Hz ± 5% VAC 50/ 60 Hz ± 5% Supply circuit rating 15 A 15 A 1.4 설치환경 Temperature Humidity Operation 15 ~ 35 C 40 ~ 80% Storage - 20 ~ 70 C 0 ~ 95%

6 2 MSD Hardware Installation 2.1 Installing the GC 다음과같이 GC 쪽에서 Aux heater line 및 MSD interface 가들어갈 hole 을뚫는다. 다음과같이결합을하여 MSD 를 GC 에연결한다.

7 2.2 Connecting the Helium Lines to the GC Carrier gas line 을 5 ~ 8 psi 정도로 5~ 10 분정도 purge 를한다. Gas purifier inlet 쪽을열어연결시킨후반대쪽을연다. 5~ 10 분정도 purge 를한다. 마지막으로 GC 쪽 carrier gas line 을연결한후 5~ 10 분정도 purge 를한다. Purge 가끝나면 GC 에 carrier gas line 을연결한다. 2.3 Configuring the GC 1 ALS 를사용할경우, GC 를켜기전에장착한다. 2 GC power cord 를전원에꽂는다. 3 GC 의전원을넣고 self- test 가끝날때까지기다렸다가 GC oven 을끊다. 4 GC 안쪽에설치되어있는 MSD column 에대한 column parameters 를입력시킨다. 5 GC keypad, [ Config] [ Col 1] 1] 정보를입력한다. 6 Carrier gas의 pressure을올려서 60 ~ 80 psi 정도되게끔고정시킨다. Length ID Type Part number : 30 M : 0.25 : HP- 5 MS : 19091S- 433

8 2.4 Cover open 요령 위의그림과같이커버를열면다음과같이 vent valve 와 calibration vial 이나타난다. Calibration vial 에 PFTBA(Perfluorotributylamine) 를 6mm 정도남기고채워준다.

9 3 Column install 3.1 Column nut 및 ferrule GC 7890 과 MSD 5975 에설치되는 column nut 와 ferrule 은그림 ( 1 ) 과같이서로다른모양과방향을가지고있다. 따라서표 ( 1 ) 과 ( 2 ) 에명기된 column 내경에맞는 ferrule 을선택하여정확하게설치하여야한다. 그림 ( 1 )

10 Column Nut GC MSD 표 ( 1 ) Column nut Ferrule GC Inlet MSD interface Graphite Ferrules 0.1, 0.2, 0.25,0.32mm id columns mm id, for 0.10mm id columns Graphite Ferrules 0.53mm id conlumn mm id, for 0.20 and 0.25mm id columns %vespel, 15%graphite ferrules 0.1, 0.2, 0.25mm id columns mm id, for 0.32mm id columns %vespel, 15%graphite ferrules 0.32mm id columns mm id, for 0.53mm id columns %vespel, 15%graphite ferrules 0.53mm id columns 표 ( 2 ) Column 내경에따른 ferrule 선택

11 3.2 GC inlet 에 Column 연결하기 1 column 을 GC inlet 쪽에그림 ( 2 ) 와같이설치한다. 그림 ( 2 ) Column cutting 그림 ( 3 ) GC inlet 에 column 연결 그림 ( 3 ) 과같이정확하게길이를맞추어 inlet 에 column 을연결한다.

12 3.3 MSD interface 에 column 연결하기 MSD interface 의경우, GC inlet 에사용되는 ferrule 과 nut 모양이다르므로주의하여연결한다. 그림 ( 4 ) Column installation tool 을이용한 nut 와 ferrule 고정 그림 ( 5 ) MSD interface 에 column 연결방법

13 4 MSD Chemstation install 1) G1701EA MSD ChemStation CD 를 CD- ROM 에넣으면다음과같이진행이된다. 2) 다음화면에서 next 를클릭한다. 3) License Agreement 에서 next 를클릭한다.

14 4) Customer Information 에간단한정보및 ChemStation registration number 를입력하고 next 를클릭한다. 5) Next 를누른다. 설치 directory 를변경할수있으나 default 를권장한다. 6) 특별한특이사항이없을경우는 next 를클릭한다.

15 7) Next 를클릭한다.. 8) Finish 를눌러설치를종료시킨후 PC 를재부팅한다. 9) 바탕화면에서아래와같은 config 아이콘을클릭한다.

16 10) System Configuration 창이나타난다. 11) Agilent MSD Configuration 1~ 4 중한개를선택하여클릭한다. Offline instrument 의경우, MSD 와실제로 on- line 이안된상태거나다른 PC 에서 data 를분석할경우사용이된다. (1) Instrument Name 및 Serial Number를입력한다. (2) GC와 MS의 Model을선택하고 IP Address를입력한다. (3) Data Analysis Mode를선택한후 OK를클릭한다. Enhanced Quantitation (default, best for first- time users) EnviroQuant (EPA) Aromatics in Gasoline Drug Analysis

17 12) 다음과같이최종적인정보가 configuration 창에뜬다. 정보를확인하고 File - >Exit 를클릭한다.

18 5 Main menu 설명 Agilent Technologies 에서사용하는 ChemStation 의기본적인운영은제품에따라약간씩다른부분은있으나전반적으로하나의제품에대한 ChemStation 운영을이해하고있다면다른 Agilent Technologies 제품을운영할때도기본적인절차에서크게벗어나지않으므로특별한운영체계에대한교육이없이도사용자가바로응용하여운영을할수있도록설계되어있다. Agilent Technologies 사의일반적인 ChemStation 의운영은시작부터자료의출력및해석까지좌측의 Menu 부터우측으로순차적으로실행하면최종원하는자료의출력까지얻을수있으므로처음 Agilent Technologies 사의 ChemStation 을운영하는경우이기본적인순서에의하여쉽게원하는분석조건의개발및분석결과를얻을수있다. 이러한기본 ChemStation 의구성을바탕으로주 Menu 에대한기능을간단히살펴보면 Method Method : 새로운분석조건의저장및저장된분석조건불러오기 분석조건불러오기및저장하기 저장된분석조건수정하기 분석조건의인쇄

19 Instrument Instrument : 최초분석조건의설정, 변경및분석중 GC/ MSD의조건을변경할때사용 최초분석조건의설정, 변경및분석중 GC/ MSD의조건을변경할때사용 GC/ MSD의분석조건설정 분리관의설정및변경 (Column) 오븐온도조건의설정및변경 분리관의운반기체의유량설정및변경 시료주입구의온도, Mode 의설정및변경 기타 Valve 의조절기능 MSD 의 Mass range, SIM/ SCAN Mode 설정및변경 Sequence Sequence : 순차시료주입기를이용한분석 순차시료주입방법조건설정 시료의분석순서및시료정보입력 View View : Main menu의환경설정 저장된분석결과불러보기 Tune이나 vacuum control기능 Abort Abort : 현재실행중인 GC/ MSD의중지 분석조건이잘못설정되어중지하여야할경우 현재분석중인분석법을중지하여야할경우 Checkout Checkout : GC/ MSD Validation 이나간단한상태 check 시사용하는 menu Secured control Window control : 시스템보안을위한 menu Window : window 내의 window나 icon을배열하는 menu Help : 운영중자세한안내가필요할때상세설명기능 Help 기타분석결과를자동으로전자우편으로보내는기능, Microsoft의 Excel로변환하기, 사용자위주의인쇄물출력, Software개발및머무름시간고정 (Retention Time Lock) 등을응용할수있다. 일부기능은추가 Software를설치하여야이용가능하며기타보조기능에대한문의는고객만족센터에 ( 전화 : ) 연락하면자세한안내를받을수있다.

20 6 보조 Menu 의기능설명 보조 Menu 는 main menu 에표시된 menu 를선택하면화면이바뀌면서좀더상세한 menu 가표시된다. 화면이변경된다고해서 main menu 가완전히사라지는것은아니며 ChemStation 을사용하는동안은항상활성화되어있어필요할경우언제든지다른보조 menu 로넘어갈수있다. 이장에서는보조 Menu 에대한각각의간단한기능을설명하며사용자가필요한기능을선택하고자할때어느보조 Menu 를선택해야할지를안내하는데그목적이있다. - Vacuum - : Vacuum Vacuum은 MSD chamber 안에일정수준의진공이걸려야지만 ion source 및 EM의오염을줄일수있으며, vacuum의안정적인상태를유지하는데일정시간이소요된 다. Turbo pump의경우, 최소 2 시간이상소요되며, diffusion pump의경우, 최소 4시간이상이소요된다. 그러나위의시간은 MSD 자체 vacuum이일정수준이상으로걸려져있을경우에해당되며, 기기보호차원에서충분한시간동안 conditioning을해주는것이좋다.

21 - Pump Down - : Pump down Pump down은 vacuum을대기압상태로전환시켜주는것이다. 장비가꺼져있는상태에서장비를켤경우, 자동으로 vacuum 상태로만들기때문에평소에는사용할필요가없다. Vent cycle 시급히장비를재사용하여야될경우 turbo pump 나 diffusion pump를재가동시켜원래의 vacuum 상태로회복시키는것이다. - Vent - : Vent 란? 일반적으로진공상태를깨는것으로알려져있으나, 진공상태를깨지는것이아니라 MSD 내부에있는 turbo pump의경우는회전을멈추게하는것이며, diffusion pump의경우안에있는 oil을식히는시간을말한다. 따라서 MSD chamber 안은아직진공이걸려있다고생각하면된다. MSD chemstation에서 vent cycle이끝나고나면 S/ W를닫은후, MSD의전원을꺼주면된다. 장비를장시간미사용시는이상태로장비를유지하는것이 MSD 오염을줄일수있다. Column 교체나 source cleaning을위하여진공을깰경우는 MSD cover를제거하고 vent valve를열어야한다.. 그러나 vent valve를열기전에 source 온도가 100 이하로떨어진것을확인한후, vent valve를서서히열어외부로부터 air가들어가진공상태를제거하면된다. ( 주의 : vent valve를너무많이열면급격히 air가들어가게되어 analyzer 의오염에주된원인이된다. 만약 source 온도가 100 이상일경우외부에서들어온 air가 analyzer에흡착될수있다.)

22 - Tune - Tuning 이란? MSD에서 Mass spectrum을얻기위해서수행되어야할첫번째과정이다. 정밀하고우수한 MS data를얻기위해서는 MSD의여러가지기기적인 parameter들을조절하여기기를 calibration해주어야하는데, 이러한일련의 calibration 과정이 tuning 이다. 이러한 tuning 과정은기기를사용할때마다해주어야하며 tuning 과정에서정해지는 EM voltage 로실험이진행되기때문에장비가완전안정화된후에 Tuning 을실행하는것이좋다. abundance 의극대화 EM 값과 X- ray 값의조절 high mass abundance 의최적화 Entrance lens, Repeller, Ion focus peak width 의조절 AMU gain, AMU offset mass assignments 의조절 Mass gain, Mass offset Tune and Vacuum Control Control : Tune 을실행하거나 Vacuum 을제어할때사용

23 Quick Tune Tune : mass axis 와 peak width, EM voltage 만조절하여 resolution 과 mass assignment 를조절한다. Autotune : PFTBA(m/ z 69, 219, 502) 를사용하여 mass range전체에걸쳐 instrument sensitivity를최대화한다 MSD는 Mid mass인 69 또는 219를 base peak 로하여 tuning 한다. Tuning 과정은몇분간실시되며 autotune 이끝나면 tune report 가자동적으로 print 되고 tuning 결과는 tune file(atune.u) 에저장해야한다. Print 된 tuning report 는 system 의 maintenance 와 trouble 시를대비해 system performance check를위하여 file에보관해야한다. Low Mass Autotune : PFTBA(m/ z 69, 131, 219) 를사용하여 low mass를이용하여실시한다. Low Standard Spectra Tune : Full mass range 에거쳐 tune. 특히, PFTBA mass 69 가 base peak(100%) 이고, mass 219 가 35-99%, mass 502 가 1% 이상이어야한다. Mass spectral library search 를할경우에 standard spectra tune 을행한다. 그러나감도가떨어진다. DFTPP Tune : EPA method 625 에서요구하는 tuning 으로 DFTPP (difluorotriphenylphosphine) tuning 물질로사용한다. m/ z 51, 127, 198, 442 를 target ion 으로한다. Tuning 이난뒤에는 tune file 인 DFTPP.U 에저장한다. BFB Tune : EPA method 624 에서요구하는 tuning 으로 BFB(Bromofluoro benzene) 를 tuning 물질로사용한다. m/ z 51, 95, 174 를 Target ion 으로한다. Tuning 이끝난뒤에는 tune data 를 BFB.U 에저장한다.

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25 아래기준에맞추어 tuning report 를읽어본다. 1 peak 의모양 : 주 peak 와동위원소 peak 의모양을본다. 2 Base : Base peak 는 69 또는 219 가반드시나와야한다. 그이외의이온이 base peak 으로나오면장비상의문제점이있는것으로생각하면된다. 18(H 2 O), 28(N 2 ) 이 base peak 로나올경우, 18(H 2 O) 이높게나오면 chamber 안에차있는수분이기때문에충분한시간동안 conditioning 을하여야한다. 28(N 2 ) 이높게나올경우, 어딘가에 leak 가있을가능성이높기때문에전체적으로 leak check 를하여야한다. (He gas 순도가나쁘거나, trap 이오염이되어있을때 28(N 2 ) 이높게나올수도있다.) 3 Mass assignment : m/ z 69, 219, 502 에대한 mass assignment 가 ± 0.1 amu 내에있는지확인한다. 4 Peak width: 0.6± 0.1 amu 범위에있는지확인한다. 5 Mass abundance Mass HP HP % 100% 219 >40% >35% 502 >2.4% >1% 위의 spec 에나와있듯이 69 대비 219 비율이 40% 만넘으면통과이나정상적인감도를나타내려면 70% 이상이되어야한다. 또한 High mass 인 502 의경우는 69 대비 3% 이상나와야정상적인감도는나타낼수있다. 6 Isotope mass(70, 220, 503) ratio Mass HP 5975, 5973, % % % 7 M/ z 69 이하의 background 는 20% 미만이어야한다.

26 Parameters - > Manual tune Tune parameter 를직접조절할수있다. Air and Water Check Check : Tuning data에서 leak현상이발견되었을때나충분한시간이지나도압력이제대로걸리지않을때사용한다. m/ z 18의 abundance가 m/ z 69의 abundance보다 20% 미만이어야한다. m/ z 28의 abundance가 m/ z 69의 abundance보다 10% 미만이어야한다.

27 6.1 Method menu Load Method 함. Save Method : 저장된분석법을불러올때사용, 반드시저장된 file 이있어야 Method : 새로작성된분석법을변경하였을경우불러온 file위에덮어쓰기를할경우사용함. Run Method : 저장된분석방법에따라자동으로 GC/ MSD의모든조건을설정하며아울러검량선이작성된경우 Data의출력까지한꺼번에처리할때이용한다. 만일자동시료주입기가설치되어있다면자동으로시료를주입할수있다. Edit Entire Method : GC/ MSD의분석조건을순차적으로작성할경우사용 Print Method : 인쇄를시작할때사용 Acquire RTLock Calibration Data : Retention time locking calibration 데이터를저장하기위해사용함. Export emethod : Electronic Method를보내는 (export) 방법 Import emethod : Electronic Method를가져오는 (import) 방법 Run Edit Print Acquire Export Import

28 6.2 Instrument menu * GC Edit Configuration GC 분석에서가장먼저설정해야하는것은장착된컬럼, 가스등을소프크웨어상에서도인식을시켜주어야만 Inlet, Detector에관여된모든유량을정확히조절할수가있다. Miscellaneous: pressure unit, valves, maximum oven temperature의조건을설정

29 Pressure Units Units: 압력의단위를선택한다. Maxium Oven Temperature Columns Temperature: Oven의한계온도를설정한다. Oven온도는 450 까지조절할수있으나, oven의 maximum temperature는 column을보호할목적으로사용하는것이좋다. Maximum temperature는 column의한계온도와관련지어서설정하는것이좋다. 만약사용하는 column의한계온도가 320 인데, oven의 maximum temperature를 350 로설정하여사용하다가사용자의실수로 oven의온도를 320 이상으로설정하면, column이상하여못쓰게된다. 그렇기때문에 oven의 maximum temperature는 column의한계온도를고려하여서설정하여야한다. Columns: 컬럼및컬럼이연결된위치를설정 (Agilent GC는최대 Inlet 2개, Detector 2개까지장착이가능하다. 따라서컬럼을최대 2개까지장착이가능하므로선택된컬럼의위치를선택해주어야한다.) 새로운컬럼추가등록방법 위의화면에서버튼을누르면아래와같은화면이나타난다.

30 Inventory 항목에현재장착된컬럼이없다면아래 튼을눌러컬럼을추가한다. 버 버튼을누르면다음과같 은화면이나타난다.

31 위의화면에서추가될컬럼제조사를 Filter list by Manufacturer(Agilent/ Supelco/ J&W) 에서선택하면 Agilent Technologies 사, Supelco 사, J&W 사에서공급하는대부분의컬럼이등록되어있어사용자가쉽게선택하여등록시킬수있다. 그러나등록되어있지않은컬럼은사용자가직접컬럼의정보를입력하여 Setting 해야사용할수가있다. 방법은다음과같다. 위화면에서죄측하단에 버튼을누르면아래와같 은화면이나타난다. 입력할정보들은보통컬럼박스측면이나 Sheet 형식으로첨부되어있으므로그것을참고하면된다. Manufacturer : Manufacturer : 컬럼을생산하는회사이름을입력한다. Ex) SUPELCO, J&W, etc. Model Number : Model Number : 컬럼의 Part Number 를입력한다. Ex) 19091J Description : Description : 컬럼및충진물에대한간단한설명을입력한다. Ex) Ultra- 1 Methyl siloxane. Column Type : Column Type : Capillary column 인지 Packed column 인지선택한다. Max Temperature : Max Temperature : 컬럼의한계온도를설정한다 ( 컬럼박스참고 ). Length : Length : 컬럼의길이를입력한다 ( 단위 : m).

32 Diameter : Diameter : 컬럼의내경을입력한다 ( 단위 : μm ). Film Thickness : Film Thickness : 컬럼재질의두께를입력한다 ( 단위 : mm). 컬럼의정보입력이완료되면버튼을누르고빠져나온다.

33 * GC Edit Parameters GC 분석조건을설정한다. Inlet/ Injection Types Types : inlet, injection source, inlet의위치, MS사용여부에대해선택한다. (MS 사용시 Use MS 란을반드시 Check) 시료주입방법은직접시료를주입하는 manual 방식, auto sampler 를이용하는방식, valve 를이용하는방식과 external device 를이용하는방식이있다.

34 Injection Location : 시료가주입되는주입구의방향을나타낸다. GC Edit Parameters : GC의모든분석조건을변경할수있는부분이며새로운분석법의개발및분석조건의변경시활용 (1) Injector Syringe Size Injection Volumn Size : Configure 를클릭하여 syringe size 를조절할수있다. Washes and pumps : Volumn : 실제적으로 GC 에시료가주입되는양을나타낸다. PreInjection & PostInjection 나타낸다.(3~ 6 회 ) Solvent A Washes (1.0~ 5.0ul 까지선택적으로입력할수있다.) ction : 시료주입전후를나타내며 solvent 세척횟수를 Solvent A Washes : 첫번째 solvent 로세척하는횟수를나타낸다. Solvent B Washes : 두번째 solvent로세척하는횟수를나타낸다. (Solvent A로만세척을하면 Solvent A가점점오염이되어횟수가거듭될수록 syringe 자체및 Solvent A의오염을증가시켜시료에영향을줄수있기때문에 Solvent B로재세척하여오염의원인을제거한다. Solvent A는자주교체요망 ) Sample washes : Solvent로오염이되었을가능성이있는 syringe를 sample로재세척하는횟수를표시한다. Sample Pumps Sample Pumps : Syringe 내부에있는기포를제거시키는횟수를나타낸다.

35 (2) Inlets Split- Splitless Inlet modes Heater Heater : 주입구의온도로시료성분의 Boiling Point +20 를설정함. ( 일반적으로 200~ 300 ) Pressure Pressure : 운반기체를컬럼안으로도입하기위한압력으로유량에의해자동결정됨. Total Flow : GC에주입되는운반기체의전체유량 Total Flow (Column Flow + Split Vent Flow + Septum Purge Flow) Septum Purge Flow : 실린지바늘에의한 Septum 가루가컬럼안으로유입되는것을막기위한유량이며, Septum 을세척해주는효과도있다. Agilent 7890 GC 모델에서는그값이약 2~ 3 ml / min 으로고정되어있음. Gas Saver : 일정시간이지난후의전체유량을조절할수있는기능으로대략적으로 2~ 3분동안이면 Split모드에서시료는희석되어대부분이컬럼안으로들어가기때문에컬럼유량을유지하기위한유량만을흘려줌으로써사용되는기체의양을절약할수있다. ( 그러나전체유량이 Gas saver 유량보다클경우적용해야하며작을경우는오히려사용되는가스가낭비된다. 이때 Total Flow 는 Gas Saver Flow + Septum Purge Saver Flow Flow + Septum Purge 유량만큼만흐른다.) Saver Flow : 최소한 20 ml / min 이상유지해야한다.(Purge 기능포함 )

36 Saver Time : 시료성분마다다소차이는있으나, 대략적으로 2~ 3분정도선택한다. 이전실험에서 Gas saver를선택하여 Split vent 유량이 20ml / min에서시작된다. GC 본체의키보드상에서 Config를누른후을이용해서 Instrument에서 Enter 를누른후, AutoPrepRun을 ON key를눌러주면모든 Mode가 Ready가되면서자동으로 Split vent 유량을정상적으로 50 ml / min으로맞춘다 ( 유량이 20ml / min에서 50ml / min로맞추어질때까지키보드위에있는 PrepRun 불이깜박거리며유량이 50ml / min가되면자동으로불이꺼지며다른조건이모두맞추어진후시료주입을할수있다.). 직접시료를주입하는경우시료주입후 Start 키를누르면 Split vent유량은 Gas saver time 인 3 분동안은 50 ml / min 을유지한다. 시료주입후 3 분후에는 Split vent 유량이실험이진행되는동안계속해서 (20 ml / min + Septum Purge Flow) 을유지한다. [ Prep run] 키를사용하는경우 Gas saver 기능사용시 : Gas saver flow를제거하고 inlet flow를 set point 까지증가시킨다. Splitless injection 시 : Purge time 이후 split 모드로전환되기때문에 purge valve를닫아 splitless injection을준비한다. Pulsed split or splitless injection 시 Split t Modes : pulse pressure time 이후정상적인 set point 압력으로돌아가기때문에 pulse pressure 까지압력을증가시킨다. : Capillary 컬럼을사용하는경우연결되어지는주입구로서대다수화합물의분석시사용되며, 시료가고농도인경우시료전체를컬럼안으로도입하게되면주입구, 컬럼및검출기의오염을유발할수있으므로시료를이동상가스와혼합함으로써시료를희석하여컬럼안으로도입할수있다. 희석비율은하단부의 Split Ratio를가지고결정할수있다. Split Ratio Split Ratio : Split Vent 유량과컬럼유량의비율로일반적으로 20~ 200까지시료의농도에따라선택가능예 ) Split Ratio가 100:1인경우컬럼유량을 1ml / min으로했을경우, Split Vent Flow Rate는 100ml / min으로시료 1μl의 / 100 만큼만컬럼안으로들어감을의미. Split Flow Split Flow : 컬럼유량과 Split Ratio 가결정되면자동으로그값이변함. Splitless Mode : 미량분석시사용되며, Split Mode 와달리시료가운반기체와혼합되어

37 희석되지않고모두컬럼안으로유입된다. Purge Flow to Split Vent : 주입된시료가모두컬럼안으로들어갈경우, 시료의대부분을차지하고있는용매 (Solvent) 의피크가너무커서시료성분의피크를방해하게된다. 이와같은현상을줄이기위해시료주입후정해진시간 ( 일반적으로 0.75 min) 후에 Splitless Mode 를 Split Mode 로전환하기위해흘려주는유량이다. 단, 반드시 Split vent time 을주어야만그시간동안 Splitless Mode 로 Sample 이주입된다. 이전실험에서 Gas saver 를선택하여 Split vent 유량이 20 ml / min 에서시작된다. GC 본체의키보드상에서 Prep run 키를눌러 Split vent 유량을 0 ml / min 으로줄인다. 단지가스는컬럼유량과 Septum purge vent 유량의합만큼만흐른다. ( 유량이 20 ml / min 에서 0 ml / min 로맞추어질때까지키보드위에있는 PreRun 불이깜박거리며유량이 0 ml / min 가되면자동으로불이꺼지며다른조건이모두맞추어졌다면 Not Ready 불이꺼지고시료주입을할수있다.) 직접시료를주입하는경우, 시료주입후 Start 키를누르면 Split vent 유량은 2 분동안 0 ml / min 을유지하다 Purge time 인 2 분후에는 Split 모드로변환되며 30 ml / min 의유량이흐른다. 다시시료주입후 Gas saver time 인 5 분후부터실험이진행되는동안계속해서 Split vent 유량을 20 ml / min 로유지한다. Pulsed Split Mode : Split Mode 와유사하나, 일정한시간동안과량의압력을주입구에가해, 시료를빠르게컬럼안으로들어가도록하는모드로쉽게분해되는시료에유용하며, 짧은시간내에시료가주입되므로피크의모양을좋게할수있다. Injection Pulse Pressure : 만약정상적인압력을 10 psi. 로맞추었다면, 시료주입과동시에주어진압력으로주어진시간까지유지한다. Pulsed Splitless Mode : Pulsed Split Mode 와마찬가지로 Splitless 모드에서일정한시간동안과량의압력을주입구에가해주는모드로쉽게분해되는분자의시료에유용하며, 짧은시간내에시료가주입되므로피크의모양을좋게할수있다. Purge Packed Inlet : Inlet 은높은분리도가요구되지않을때 Packed 컬럼 (1/ 4 와 1/ 8 ) 또는 0.53mm capillary 컬럼을사용하여분석할수있다.

38 (3) Column Control Mode: Flow Flow : Oven 온도에관계없이컬럼유량을일정하게유지한다. Pressure Pressure : Oven 온도에관계없이컬럼압력을일정하게유지한다.

39 (4) Oven Oven 은 GC 를사용하는데있어서매우중요한부분이다. oven program 을어떻게만드냐에따라서 sample 이나오는시간 (R.T.) 이변할수도있고, peak 의모양에도변화를줄수있다. Equilibration min. : oven 온도를설정하여놓고, oven 안의온도가평형에도달하는시간을의미한다. default 값이 3 분이지만, 낮은온도에서실험이하였을경우, 1 분이라는시간으로도충분하다판단이되면 1 분으로다시설정하여도무관하다. Oven Ramping : GC 7890 의 oven program 은 20 단계까지가능하다. oven 의온도를설정하는것에따라서그림상맨위에있는 graph 변화가생긴다. 그림왼편에 oven set point 와 actual 값이있다. Set point 값은사용자가설정한값이고, actual 값은 GC oven 상에실제값이다. 사양 Oven 사양 Temperature range : ( 액체 He), - 80 ( 액체 N 2 ) 또는 60 ( 액체 CO 2 ) 까지냉각해서실험할수있다. Maximum temperature : 450 까지견딜수있게끔만들어졌다. Temperature programming : 20 단계까지 oven program 을작성할수있다.

40 (Column Flow + Split Vent Flow + Septum Purge Flow) Maximum run time : minutes Oven 을켤때는 oven 에클릭을하고, apply 또는 ok 를눌러야 oven 이켜진다. Post Run Run: 분석종료후, 일정시간동안컬럼한계온도로오븐온도를올려서컬럼세척및오염물질제거등의목적으로사용된다.

41 (5) Aux Heater Heater : 검출기온도를설정한다. Setpoint에실험온도를입력하고 On 부분에 Check를하고난후 Apply버튼을누른다. Actual 값이설정한온도로서서히올라간다. 보통검출기온도는주입구온도와같거나 20~ 30 정도높게설정한다. Temperature Programming Programming : 3단계까지 oven program을작성할수있다. Monitors : 기기가가동을하게되면사용중인 GC조건들이정상적으로나타나는지확인하여야한다. 이보조 menu는사용자가 GC조건을볼수있도록화면에표시해주는매우중요한기능이다. GC Monitors

42 * MS SIM/SCAN Parameters MS SIM/Scan Scan Parameters : Scan/ SIM, EM Voltage, Solvent delay, Acq, mode, - SCAN - Mass scan parameters 를선택

43 MS SIM/Scan Scan Parameters EM Voltage : Tuning 에서설정된 EM 값을 sample 의분석조건에맞게조절할때사용한다. Abs(Absolute) 는 Tune 에서설정된값을그대로사용하거나절대치를직접선택할수있으며, Rel.(Relative) 는 Tune 에서설정된값에어느정도의값을증가시킬때, 즉감도를높일때사용한다. EM 의 voltage 가증가할수록감도는증가하지만 EM 의수명은감소한다. 일반적인 EM 값의사용범위는 volts 이다. Solvent Delay : MS filament 를보호하기위하여시료를 GC 에주입했을때, column 으로 solvent 가 elution 되는시간동안 MS 를 OFF 시켜주는기능이다. 즉, 주어진시간부터 MS 가 ON 된다. (Default : 3min.) Fast scanning : High- performance electronics 을이용하여전기전자적인신호전달속도를향상시켜사중극자의 scan rate 를 10,000amu/ sec 까지가능하도록하였다. Acquire Scan/SIM SIM data : 정성분석을위해서는 Scan mode 로정량분석을위해서는 SIM mode 로분석을하는것이일반적이나향상된스캔속도및신호전달속도의향상은한번의시료주입으로 Scan/ SIM mode 가동시에가능하다. Real Time Plot : Sample이분석되어지는동안진행과정을두가지형태, 즉 TIC(total ion chromatogram) 와 EIC(Extracted ionchromatogram) 로볼수있으며그때의 chromatogram scale을정해줄수있다. 그러나이러한 scale은분석도중에도변화가가능하며분석결과에영향을주지않는다.

44 Edit Scan Params 부분이다. Params : 시료에대한 MS spectrum 을얻기위한조건을입력시켜주는 Mass Range Mass Range : MS spectrum을얻기위한분자량의 range를말하며분석하는 sample에적절하게맞춘다. Start at Mass는 backgronud를 check한후 background의영향을받지않도록설정하고 End at mass는 EI의경우 Sample의예상 M.W. 보다 30정도높게설정하고 CI의경우 50정도높게설정한다. 분석시간별로 3단계로나누어 mass range를프로그램할수있다. Threshold : Instrument에따른 typical한값은 150이다. 일반적으로낮은값은 spectrum에서낮은 abundance를갖는 ion도나타낼수있어감도를증가시킬수있지만 data의용량은더많이차지한다. Sampling : PC가 MS에서나오는 data를받는 sampling rate로서수치는 Sampling 2의지수로들어가며 default 값은 2이다. : 단위시간당 scan할수있는횟수를나타낸다. 사용자가임의의값을입력할수없으며단지 MS Scan range와 sampling에의해결정된다. Scan/Sec Start Time : 시간에따라 mass range를변화시킬때사용되며초기의 mass range에따른 start time은 solvent delay time이자동적으로들어간다. 다음의 start time 은원하는시간을넣어준다.

45 - SIM SIM SIM : SCAN data에서 time과 group에대한 ion을선택해야한다. Group은 100개까지, ion은 60개까지선택가능하다. 일반적으로, 하나의물질당 2-3개의이온을선택한다.

46 Edit SIM Params Params : 선택된 2~ 3 개의 ion 을 Group 별로작성한다. Add New Group Add/Modify Ion Group: 최대 50 개까지 group 를추가할수있다. Ion: 선택한 ion 을추가하거나수정할때사용한다. Dwell time Dwell time : 선택된한 ion을 scan할때머무르는시간으로시간이길수록감도가좋으나너무길면오히려감도가떨어진다. Resolution Resolution : High 인경우분리능이좋아 peak 가 sharp 하나감도는떨어진다. Low 인경우분리능은낮으나감도는좋다.

47 * GC/ MSD Chemstation - > Instrument - > Change MSD Temperatures Temperatures : source 와 quad. 의온도변화 MS Monitors Monitors : 사용자가 MS 조건을볼수있도록화면에표시해주는기능이다. Edit MS Tune Parameters Perform MS Autotune Parameters : Tune parameter 를직접조절할수있다. Autotune : Autotune 을실행할수있음.

48 6.3 Sequence menu Edit Sequence Type Vial Type : Sample, Blank, Calibration 등알맞은것으로선택. Vial : Auto sampler tray 에서해당되는위치의 number 를적는다. Sample Sample : Sample 의이름을넣는곳으로반드시입력할필요는없다. Method Method : 분석에사용하고자하는 method 를지정한다. Data file : 저장하고싶은 data file의이름을넣는다. Sequence : 저장된 Sequence를불러올때사용, 반드시저장된 file이있어야함. Save Sequence : 새로작성된 Sequence를변경하였을경우불러온 file위에덮어쓰기를할경우사용함. Load Sequence Save Run Sequence Sequence : 저장된 Sequence에따라자동으로분석조건에따라 GC/ MSD 의모든조건을설정하며자동시료주입기를이용하여자동으로시료를주입할수있다.

49 6.4 View menu Instrument Control Data Analysis Control : 주 Menu 활성화 : Data analysis 화면으로이동 Control : tune과 vacuum제어하는기능 Tune and Vacuum Control 6.5 Abort menu Abort 는현재분석중인모든동작을중지시키며아울러수집된기록도저장을하지않고활성화되어있는모든 Software를중지시킨다. 순차시료주입기를사용하였을경우 Table에작성이되어있다하더라도더이상분석을시행하지않는다. 따라서순차시료주입기를이용한분석법을이용하는중간에중지하여야할경우 Abort를선택하여모든기능을중단시킬수있다.

50 6.6 Help menu Help 기능은사용자가좀더자세한정보나설명이필요할경우내장된도움만이표시되며사용중오류가발생하였거나또는 Menu에대한상세한설명및절차, 기능에대한안내가필요할때유익하게활용할수있다. 만일 Computer가 internet에접속되어있다면직접 Agilent Technologies 의 Web 에접속하여최근의정보를검색할수있다. Help Topics : 각각의주 Menu별, 보조 menu에대한기능설명, Menu에대한기능을자세히알고자할때이용하면매우편리하다. Using Help : ChemStation의 Version 및개발연도표시. 기기의 Version을확인할경우에이용. Using

51 6.7 시료의분석 시료의분석조건을모두입력시켰으면 instrument 화면의 icon 중 sample name 의 icon 을 click 하여다음화면으로들어간다. Operator Name Data File Name 저장된다. Sample Name Name : 분석자의이름 Name : 시료를주입하기전에반드시입력시켜야만 data file이 : 시료에대한정보 모두입력이되었으면 Start Run Key 를 click 하여 Prepare To Inject Box 가나타나고 GC 의 Not Ready 불이꺼지면시료를주입하고 GC 의 Start key 를누른다. Solvent Delay Time 이지난후 real time plot 화면이나타나면서분석이진행되고있음을보여준다. Run Time 이경과하면분석이종료되고, 그 sample 에대한 data 는앞에서입력시킨 data file name 에저장된다.

52 7 Data analysis Top menu 에서 Data analysis icon 을선택하거나 instrument 의 view 에서 data analysis 를선택해도된다. 7.1 File menu Load Data File Next Data File List Header File : 저장된 data 를불러낼때사용된다. File : 현재파일다음에저장된 data 를불러낼때사용된다. Header : 시료분석시입력한정보를볼수있다. Take Snapshot : Data analysis도중에현재분석중인 data를보고싶을경우에선택하면그때까지분석한 data를보여준다. Print : 인쇄를시작할때사용 Take Print

53 7.2 Method menu 실험조건에관한 method 를 edit, load, save 할수있다. - AutoSIM Method 작성법 - Generate AutoSIM Method: Scan Mode로분석한 data를 SIM Mode로자동전환한다. 1 SCAN Mode로분석한 Data를 load한후, Chromatogram- >AutoIntegrate를실시한다.

54 2 Calibrate- > AutoQuant Setup 을클릭하여, 각각의 RT, SIM 정보를입력한다. 3 Quantitation Database Globals 창에서 OK 를클릭한후, Compound 별 RT 정보를추가한다. 4 Calibrate- >Edit Compound- >View 를선택하여, 각 Compounds 별정보를확인한후 OK 를클릭한다.

55 5 Method- >Generate AutoSIM Method 를선택한다. 단축아이콘 - > 6 Automatic SIM Setup 창에적당한 parameter 값을입력한다.

56 Min. Time between Peak and Group Start, 0-1 min.:(default=0.1min(6secs)) SIM Group( 현재그룹의마지막피이크와다음그룹의첫번째피이크 ) 사이의최소시간. 이파라미터는 SIM Group 수에영향을준다. Minimum # of Scans or SIM cycles on Peak: (Default=10scans per peak) 하나의 Group 에존재하는 Scan or SIM Cycles 횟수. Cycles 횟수가감소하면 dwell times 은증가한다. Group Start Location in Gap, 0-100%: 현재 Group 에마지막피이크와다음 Group 의첫번째피이크사이의시간을 gap 으로표시한다. Peak Broadening Factor, 0-100%: (Default=10%), 꼬리끌림이있는피이크의 Broadening percentage 를설정한다 (safety margin). 7 Method 를저장한다.

57 8 Edit SIM Parameters 를클릭하면작성된 SIM Group Table 을확인할수있다. 아래작성된 SIM Group table 정보를저장한다.

58 9 위에서저장한 Method 를 load 한후, Instrument- >MS SIM/ Scan Parameters- > Edit SIM Params 을클릭하면 Auto SIM 작성결과를확인할수있다.

59 7.3 Chromatogram menu Chromatogram Scailing Scailing : Chromatogram 의 scale 을조절 1 Chromatogram- >Chromatogram Scaling 을클릭한다. 2 설정하고싶은 TIC 의 Y 축값을입력한다.

60 3 0 을입력하면가장큰 abundance 값을갖는물질을기준으로 Y 축 Scale 이조절된다. Draw Chromatogram Chromatogram : Chromatogram에 lable을표시하는기능 Chromatogram Labels: TIC에 name, retention time등의정보를표기하는 Select Chromatogram 기능 Extracted Ion Chromatogram : 시간의범위와 ions 을선택할수있으며, 이 menu 를실행할경우주어진시간내에서선택된 ions 만을보여준다.

61 Select Integrator integrator사용 Integrator : Data 의 integration 방식의선택, 일반적으로 chemstation MS Signal Integration Parameters : Chromatogram 을 integration 하는데필요한여러가지 event(parameter) 들이있고이러한 event 에대해시간과 value 를넣어줄수있다 (Enter). OK 를클릭하고 Chromatogram- >Integrate 를실행시키면적분결과를확인할수있다. integration event 값을다른이름으로저장할수있다 (Save). Initial Area Reject Initial Area Reject는단어의미그대로지정해준값보다 peak의 area가경우, Peak 로서인식을하지않고무시하는기능이다. Initial Peak Width 는 peak가처음시작되는부분부터의 peak폭을이야기하는것으로서 peak area( 면적 ) 계산을할때 peak이시작부터나온값만큼의넓이내의 peak면적만계산하는기능이다. 그러므로 peak가브로드한경우는 peak width 를조금더증가시켜야만정확하게 area를계산할수있다. Initial

62 Shoulder Detection Shoulder Detection는 peak가정점을지나서 baseline가까이도달해서작은 peak( 같은물질인데 tailing을형성하면서마치작은 peak처럼보이는것 ) 가새로형성되는경우가있는데이런경우에는같은 peak의 area로계산을해주는것이좋다. 따라서 Shoulders는 off로하는것이좋다. 즉따로분리하지않고하나의 peak 로인식하는기능이다. Initial Threshold Threshold 는 baseline에서 peak가처음시작되는부위의높이라고보면된다. 즉, peak의시작되는부위의높이보다높을때는 peak로인식하지않는다. Auto integrate Integrate integrate : S/ W 내의기본값을가지고적분을실행한다. Integrate : 변화시킨 events 를가지고 integration 한다. Integraion Results, Percent Report Report : Integration 의결과를보여준다.

63 7.4 Spectrum menu Add, Subtract Subtract : Peak의정점에서 mass spectrum을얻고다시원하는 peak이나 base line을오른쪽 mouse버튼으로두번 click한뒤 Add나 Subtract를선택하면앞에서선택한두 spectra를더하거나빼준 spectrum이 2번 window에나타난다. Tabulate : Mass spectrum상에나타난 mass peak에대한 m/ z와 Tabulate abundance 를보여준다. Select Library Library : Browse 버튼을클릭하여저장되어있는 library 를선택할수있다.

64 Edit Library Selector Library Selector Library : library 의선택 Add New Entry : library 에이미지정되어진 compound 외의성분에대한 mass spectrum 을추가하거나새로운 library 에 compound 의 mass spectrum 을추가하는 menu 이다. 다음과같은화면에빈칸을채운뒤 OK 하면 mass spectrum 이추가된다. 이때시료의이름, 분자량, 분자식의정보는반드시입력해야한다. 단, 반드시해당 compound 의 mass spectrum 이화면에띄워져있어야한다. Edit Existing Entry Edit Existing Entry : Entry number를선택하면위와같은화면이뜨고해당항목만수정하면된다. Create Library : Library를새로이직접만들고자할때선택한다. 알맞은 Create Library library 이름을넣고 OK 한다. Delete Library Delete Library : Library 를지울때사용한다.

65 Library Search Report : TIC에서 integration된 peak를자동적으로 library search하는방법으로 Library Search Report를선택하면된다. Spectrum to use는 library search할때사용되는 peak의 spectrum을선택한 option으로아래와같이 4가지가있다. Apex : Peak의정점에서의 spectrum을이용한다. Apex- start of peak : Peak의정점에서 peak의시작부분을뺀 spectrum을 search에사용한다. Apex- background at time : Peak 의정점에서 chromatogram 중 item에서 spectrum을뺀결과를 search에사용한다. Peak average : Peak에서모든 spectra를평균해서사용한다.

66 7.5 Calibrate menu - 검량선작성하는방법 - Set Up Quantitation Calibration Title Calibration Title : 간단한분석물질이나코멘트를달수있다. Default Multiplier : 분석물질의희석배수로서만약, 분석물질을 10배희석하였을때그희석배수를 10으로지정한다면계산되어진 report값은실제계산된값에 10을곱해서최종결과를계산한다. Default Sample Concentration : 분석결과를총 sample양의 percent값으로얻고싶을경우에사용한다. 일반적으로는 default(0.0000) 값을그대로준다. Default Multiplier Default Sample Concentration

67 Reference/Non- Reference Window Reference Window : Peak의 Retention time Window를지정하는항목으로 R.T. 에대한시간이나 percent로지정한다. Use RTEINT Use RTEINT : RTE Integration 방식을사용하고자할때 check 한다. Integration Parameter File : Peak integration 에사용할 file 을설정한다. 설정해야만적분이가능하다. Measure Measure : Area 으로계산할것인지 Height 를사용할것인지설정한다. OK 버튼을클릭하면다음과같이 Edit Compounds 화면이나타난다. Insert Above 버튼을 click 하면 Quant Setup Box 가뜬다. 선택하고자하는스펙트럼에마우스를가져다놓고오른쪽 / 왼쪽마우스를동시에클릭하여 Tgt, Q1, Q2, Q3 이온, R.T. 및 Name 정보를입력한다.

68 Measure Measure : Area 으로계산할것인지 Height 를사용할것인지설정한다. Name : 시료성분의이름을입력한다. Cursor를해당하는 mass peak위에두고 mouse의양쪽을동시에 click하면 Quant Setup 의 Tgt, Q1, Q2, Q3 에해당하는 mass 와 ratio 가입력된다. 한성분에대한입력이끝나면 save 하고다음성분 (peak) 에대해서도똑같이입력한다. 모든성분에대한입력이끝나면 Exit 로빠져나온다. 다음과같은화면이뜬다. Exit 로위화면을빠져나온뒤 Update 로들어간다. (1) Update One Level : 일반적인 calibration 일때사용한다. (2) Quick Levels Update : 현재의 quantitation database 의모든 levels 를 updating 하는방법제공한다. (3) Global Update : quantitation database 의몇가지 parameters 를변화시킨다. Update One Level 로들어가면다음과같은화면이뜬다. Add New Level 을 click 하면 Add New Level, Recalibrate, Delete Menu 가있다. 초기 Calibration 이라면 Add New Level 로들어가고기존의 Calibration 을다시 Calibration 한다면 Recalibrate 를선택하고하나의 level 을지운다면 Delete 를선택한다. 농도 (Cmpd Conc) 와 level ID 을각각입력한다.

69 Do Update 로나오면다음의화면이나타난다. View 나 Insert Above 로들어가면각성분에대한새로운사항의추가나, 각항목에선택사항의변화, Calibration curve 작성, 농도변화등을시킬수있다. View 로들어가면다음의 box 가나타난다. Next Key 를 click 하면다음 compound 로넘어간다. 위의 Edit Compounds 항목을통해각각의농도 (Conc.) 에대한 Response 값, Calibration curve 를확인할수있다. OK 로빠져나온다. 각각의농도에대한 STD file 을 load 하고, Quantitation 과정을진행한다. 위의과정을통해작성된 Calibration curve 를저장한다 (method 를저장함 ). 저장된 method 를 load 하면 calibration table 과 curve 가함께 load 된다.

70 7.6 Quantitate menu Calibration curve( 검량선 ) 를이용하여미지시료의농도를정량하기위해 data를 load하고 Quantitate- >calibrate를클릭하면결과 report가나타난다. Calculate Calculate : 검량선을이용하여정량된결과를확인할수있다. Generate Reports : View- >Qedit Quant Results를이용하여수정된결과를출력할때사용한다. Report Options : 각각의 report양식으로출력할때포함되는항목을선택할수있다. Generate Report - Custom Reports 작성법 - Custom Reports Reports : 출력양식을 user 가직접작성할수있다. Data analysis 화면에서 Quantitate - > custom Reports 를클릭한다.

71 Create New Report Template 로설정하고 OK 를클릭한다. 출력하고자하는정보를선택하고 Add 를누른다.

72 .CRT 파일로저장한다. 저장된 Report 형식을보기위해서 Edit Template 1.CRT 로설정하고 OK 를누른다.

73 Print 를하거나 report 형식변경이가능하다.

74 7.7 Options Menu Show Toolbar Toolbar 1 : Tool 아이콘에첫번째열을표시하거나숨기는 menu Show Toolbar Toolbar 2 : Tool 아이콘에두번째열을표시하거나숨기는 menu Show Navigation Panel Panel : 네비게이션창을표시하거나숨기는 menu 7.8 View Menu Easy ID R.T. 와 ion ratios 를 update 하는 menu Qedit Quant Result Integration 이가능한 menu : 이미존재하는 quantitation database 에서 MS data 에대한 Result : 각각의 compound 에대한성분을확인하고 manual