사상체질의학회지

사상체질의학회지 J o f C o n s! M e d V o L 1 1 N o 2 1 9 9 9 유전자를이용한體質類型鐵別의 方法論에 관한考察 : 可萬秀 * 高炳熙 * 宋 - 炳 * A S t u d y o n t h e M e t h o d o l o g i e s f o r t h e O a s s i f i c a t i o n o f S a s a n g C o n s t i t u t i o n b y A n a l y s i s o f G e n e t i c P o l y m o r p h i s m H a M a n - s o o, K o h B y u n g - h e e, S o n g I l - 까 m g D e p t o f O r i e n t a l M e d i c i n e, G r a d u a t e S c h I o f K y u n g H e e U n i v e r s i t y, S u l, K o r e a R e c e n t l y s o m e r e p o r t h a s b e e n p u b l i s h e d o n t h e c l a s s i f i c a t i o n o f S a s a n g c o n s t i t u t i o n b y a n a l y s i s o f g e n e t i c p 이 y m o r p h i s m I n t h i s s t u d y, t o p r e s e n t t h e i d e a s i n t h e s t u d y o n t h e c l a s s i f i c a t i o n o f S a s a n g c o n s t i t u t i o n b a s e d o n t h e g e n e t i c v a r i a t i o n o f i n d i v i d u a l s, w e r e v i e w e d t h e p r e v i o u s s t u d i e s d e a l i n g w i t h r e l a t i o n s h i p b e t w e e n g e n e t i c p o l y m o r p h i s m a n d S a s a n g c o n s t i t u t i o n 뻐 d s u g g e s t e d n e w m o l e c u l a r b i o l o g i c a l m e t h o d o l o g i e s a p p l i c a b l e t o t h e c l a s s i f i c a t i o n o f S a s a n g c o n s t i t u t i o n T h e r e s u l t s w e r e a s f o l l o w ; I I n t h e s t u d i e s o n t h e c l a s s i f i c a t i o n o f c o n s t i t u t i o n b y a n a l y s i s o f g e n e t i c p o l y m o r p h i s m, t h e S 야 c i a l g e n e s w e r e d e s i r a b l e a s s u b j e c t s r a t h e r t h a n t h e n o n - f u n c t i o n a l 뼈 r t o f g e n o m e s u c h a s i n t e r - g e n e a n d i n t r o n S i n c e m i c r o s a t e l l i t e i s u s 때 I y l o c a t e d i n i n t e r - g e n e o r i n t r o n, r e p r e s e n t a t i o n o f c o n s t i t u t i o n s m a y n o t a s s o c i a t e d w i t h t h e p 이 y m o r p h i s m o f c e r t a i n m i c r o s a t e l l i t e 慶 太헬校 @ 후얻훌科人댈四象體깜科 - 1 8 5 -

- 사상의학회지제 1 1 권저 1 2 호 1 9 9 9-2 I t m a y p o s s i b l e t h a t p o l y m o r p h i s m p a t t e r n s o f t h e g e n e s r e l a t e d t o t h e e x p r e s s i o n o f i n d i v i d u a l i t y i s a s s o c i a t e d w i t h t h e t y p e s o f S a s a n g c o n s t i t u t i o n s T h e r e f o r e, a n g i o t e n s i n c o n v e r t i n g e n z y m e ( A C E ) w h i c h k n o w n h a v e s o m e r o l e i n t h e d e t e r m i n a t i o n t h e h u m a n p e r f o n n a n c e i s o n e o f t h e c a n d i d a t e g e n e s c a n 따 e f o r t h e c l a s s i f i c a t i o n o f S a s a n g c o n s t i t u t i o n s 3 I t i s w e l l k n o w n t h a t H L A t y 야 s a r e v e r y v a r i a b l e i n h u m a n a n d c l o s e l y a s s o c i a t e d w i t h t h e d e t e r m i n a t i o n o f s u s c e p t i b i l i t y f o r c e r t a i n d i s e a s e T h e s t u d i e s o n t h e p o l y m o r p h i s m o f H L A t y p e s m a y a p p l i c a b l e t o t h e c l a s s i f i c a t i o n o f S a s a n g c o n s t i t u t i o n s 4 D N A c h i p t e c h n i q u e w h i c h d e v e l o p e d r e c e n t l y f o r t h e a n a l y s i s o f t h e e x p r e s s i o n o f h u m a n g e n e s m a y p o w e 벼 J I t I s i n t h e s t u d y o f S a s a n g m e d i c i n e : x : 를르 - -, 근래에유전지를이용하여밟質을객관화하려는시 1 있었다 이에본인은그동안짧뽑學係에서이루어 진유전자를이용한四象體質의객관화연구와의학계쪽의연구중에서어느정도연관성이있는논문들을 비교검토하여앞으로며象뺨學에서유전자를이용한연구를하는데있어서방향설정을하는데도움이되고자 본논문을쓰게되었다 - 그결과를요약하면다음과같다 1 유전자 p o l y m o r p h i s m ( 다형성 ) 이기능성을가진것을대상으로하여야한다 2 M i c r o s a t e l l i t e 는기능을가지지않는부분이므로이것의 p o l y m o r p h i s m 이體質과관련될가능성은적 을것으로사료된다 3 A n g i o t e n s i n c o n v e r t i n g e n z y m e ( A C E ) 은일반적으로짧質과관련이있다고믿어지는忍耐力을결 정하는데중요한유전자로알려져있는바이효소의 p o l y m o r p h i s m 을이용하여웹質을분류하고자한 시도는의미가있는것으로생각된다 4 H L A 는다형성을가지고있고 H L A 유전자의발현에따라질병에대한감수성이차이가있다는사실을 고려해볼때앞으로이분야는연구해볼충분한가치가있는것으로생각된다 5 D N A c h i p 의사용이보편화되면四象體質의객관화에많은도움이될것으로생각된다 - 1 8 6 -

- 유전자를이용한뼈質類휠홉 5 J I J 의方 ; 去論에관한考쩔 - I 績論 { 李햄馬가四象밝質醫을만든지 1 0 0 여년이지 * 난지금四象웰웰은많은 M f 究와臨 * 의축적으로 상당한학문적발전을이루었고아울러일반인들에 게도지대한관심의대상이되었다그러나많은쩌 究에도불구하고실제臨 1 未에서며象을적용하기에 는 質의정확한분류가여전히어려운과제로남 아있다 그동안밟質짧斷의 객관화연구는여러가지각 도로다양하게진행되어오고있다 그대체적인방 향은추濟馬가제시한容親혜氣와 g 릎形氣像을중심 으로한形態學的인 M f 풋가있으며性質才幹을중심 으로설문지를이용한性템과心性의객관화에대한 M f 究가있고 짧質病證을중심으로病理現象을이용 하여짧質을분류하는 / i f f 究가있었다 최근유전자분석을통한며象짧質類 의객 관화 M f 究가시도되었는데짧醫學 M f 究院의 유전 자분석법에의한사상체질의연구 와경희대학 교한의과대학병리학교실의 사상체질유형과 A C E ( a n g i o t e n s i n c o n v e r t i n g e n z y m e ) 유전 자 T y p e ( p o l y m o r p h i s m ) 과의상관관계 에대한연구가보고된바있다 유전자분석을통한體質의객관화연구는體質이 유전되는경향성이있다는사실과四象體質醫學에서 體質별로 껴탓끊과病證이四象 A 별로차이가난다는 측면등을고려해볼때성공가능성이 있는분야라 볼수있다따라서본인은유전자를이용하여체질 을분류하고자시도한이전 M f 풋들의유용성을분석 하고체질분류에도입가능한유전자들과새로운 분자유전학적인기술에대하여고찰하였다 1 유전자의구조 I I 本論 핵산 ( n u c l e i c a c i d ) 은유전적인물질로 R N A ( r i b o n u c l e i c a c i d ) 와 D N A ( d e o x y r 매 o - n u c l e i c a c i d ) 로구분되는데전자는세포질에서발견되고후 자는핵내에존재한다핵산은알칼리로처리하면 가수분해되어 n u c l e o t i d e 로되며이 n u c l e o t i d e 는 l 분자의인산과 1 분자의 r i b o s e ( R N A 일때 ) 또는 d e o x y r i b o s e ( O N A 일때 ) 와염기 ( p u r i n e 또는 p y r i m i d i n e ) 1 분자로구성되어있다 퓨린염기에는 아데닌 ( a d e n i n e ) 과구아닌 ( g u a n i n e ) 이있으며피 리미딘은 R N A 의경우는시토신 ( c y t o s i n e ) 과우라 실 ( U I ' a s i J ), D N A 의경우는시토신과티민 ( t h y m i n e ) 으로되어있다 D N A 는유전정보를가지고있는데 W a t s o n 과 C r i c k 이이중나선의구조를가지고있다는것을밝 힌이후로다 O J 한분자생물학적인기술들에의하여 구조가올 1 핵지고있는데인간의 D N A 는약 1 0 만개 의유전자 ( g e n e ) 를포함하고있을것으로추산되고 있다 D N A 의극히일부분만이특정단백질을만드 는데관여하는부분인유전자에해당되며대부분은 유전정보를가지지않는다 유전자에해당하는 D N A 에서단백질합성을위하여우선 R N A 가만들어지는 과정을전사 ( t r a n s c r i p t i o n ) 라고하는데핵내에서 D N A 를주형 ( t e m p e r a t e ) 으로하여한가닥의 R N A 가만들어진후단백질합성에필요한부분인 e x o n 만 이남고단백질합성에필요하지않은부분인 i n t r o n 이제거되어세포질로이동하게된다 이렇게 e x o n 만으로구성되어세포질에서단백질합성을위한주형 으로제공되는 R N A 를 m R N A ( m e s s e n g e r R N A ) 라고한다일반적으로유전암호라고하는것은이 - 1 8 7 -

/ - 사상의학회지제 1 1 권저 1 2 호 1 9 9 9 - m R N A 의염기배열을말하는것으로유전암호는하 s e q u e n c e 이므로이들부분이직접적으로체질을결 나의아마노산을규정하는 3 개의염기가하나의단위가데는데이를 c o d o n 이라고한다 C o d o n 에는실제로단백질합성에필요한부분이외에단백질합성을시작하게하는 i n i t i a t i o n c o d o n A U G 와단백질합성을끝내게만드는 t e r m i n a t i o n c o d o n 인 U M U A G 및 U G A 가있다단백질합성은리보좀에서일어나는데 m R N A 의정보에따라 t R N A 가 m R N A 에결합하게되고 m R N A 에결합된아미노 정하는유전형질과관련이있을가능성은없다라고 결론지운바와같이 m i c r o s a t e l l i t e 는대부분 i n t e r g e n e 또는 i n t r o n 부분에존재하기때문에단 백질의합성에관여하지않아생명현상의유지에어 떤기능을가지고있지않기때문에고도의유전자 상호작용에의하여체질이표현됨을고려해볼때 m i c r o s a t e l l i t e 의다양성을이용하여체질을분류한다는것은큰의미를찾기어려울것으로사료된다 산이연결됨으로서단백질이합성되는것이다 2 유전자분석법에의한사상체질의연구 3 사 & 쩨질유형과 A C E ( a n g i o t e n s i n c o n v e r t i n g e n z y m e ) 유전자 T y p e 에 대하여 ( p o l y m o p h y s m ) 과의상관관계 라는논문에 대하여 이연구는주로 D N A 중유전정보를가지고있지 않는부분인유전자와유전자사이의 i n t e r g e n e 또 는 i n t e r o n 에존재하는 2-5 염기쌍이반복되는 r n i c r o s a t e l l i t e 들의반복횟수가체질과관련되어있 는지를조사한것이다 M i c r o s a t e l l i t e 는개인마다 그반복된횟수가다르기때문에 D N A 지문 l 라불 리며친자확인 골수이식의성과확인및법의학에서 많이이용되고있는데사람에는 5 만에서 1 0 만개정도 존재하는것으로추산된다 이연구에서네 7 찌의 m i c r o s a t e l l i t e 를 p o l y m e r a s e c h a i n r e a c t i o n ( P C R ) 로증폭한후젤에전개히여반복횟수가사 상체질과의연관성이있는지를알아본결과조사된 네가지의 m i c r o s a t e l l i t e 의반복횟수는채질과는통계적으로유의한관련이없음을보여주었다 이논문은체질을유전물질의다양성을이용하여 분류하고자한의마있는시도이기는하나저자들이 " 본연구에쓰인 4 종의 l o c u s ( D 3 S 1 7 4 4 D 1 3 S 3 1 7 L P L T P O X ) 들은실제로유전정보를가지고있는 g e n e 부분이아니고 i n t r o n 부분의 r e p e t i t i v e 이논문은 1 9 9 8 년 " N a t u r e " 지에 a n g i o t e n s i n c o n v e r t i n g e n z y m e ( A C E ) t y p e 의발현 o j :, o 상 l 인간의지구력에관련이있다고보고에착안하여 A C E 유전자 t y p e 과사상체질유형간의관계에대하 여실험적으로연구한것이다 A C E e n z y m e 을생 산 " 6 \ - 는유전자는두가지가있는데 2 5 0 b a s e p a i r 의 D N A f r a g m e n t 의존재의유무에의해 I ( i n s e r t i o n ) t y p e D ( d e l e t i o n ) t y p e 으로나누고 이들이이루는유전자 t y p e 은 I I! D D D 의세가 지가된다 이들유전자 t y p e 은 A C E 를생산하는 양과관계가있는데 I I t y p e 은 A C E 를가장적게 생산하고 D D t y p e은 A C E 를가장많이생산하며! D t y p e 은중간정도이다 N a t u r e " 지에서는인 내력의정도는 A C E 의생산량과는반비례의관계로 I I t y p e 이가장인내력이강하고 D D t y p e 이인내 력이제일약하고! D t y p e 은중간정도임을밝힌 바있다 이연구에서 A C E 유전자 t y p e 과체질과의연관 - 1 8 8 -

- 유전자를이용한體質類휠엎 5 J 1 ] 의方 ; : 1 ; 論에관한考! 쯤 성을조사한결과 I I t y p e 에는소음인이 5 9 % 로비 4 H L A 와체질과의관계 교적많은것으로나타났으며 소양인은 D D t y p e 이 1 5 4 % 로적게냐타났고태음인과 D D t y p e 은상관성이비교적높은것으로나타났다이연구는실제적으로지구력과같이일반적으로체질과관련이있는것으로믿어지는요소를결정하는데주요한기능을가지고있는유전자의차이점을체질유형과연관시킨것으로의미가있다고생각되는데연구에사용된각체질집단의수가너무작아통계적으로유의성을가지기어렵다는사실이아쉬우며다양한체질의특정이하나의유전적인발현만가지고는부족하다는생각이든다 성숙된 T 서 l 포는 a n t i g e n p r e s e n t i n g c e l l 에의 해 p r o c e S S I n g 되어 M H C ( M a j o r H i s t o - c o m p a t i b i l i t y C o m p l e x ) 분자에결합된항원만을인식 한다 M H C 는 c l a s s! c l a s s I I 유전자가밀집해있 는유전자군으로마우스에서는 H - 2 복합체 사람에게 는 H L A ( h u m a n l e u k o c y t e a n t i g e n ) 쥐에서는 R T l 기니아픽에서는 G P L A ( g u i n e a p i g l e u k o c y t e a n t i g e n ) 닭에서는 B 복합체로불리운다 H L A 복합체는제 6 염색체단완 ( s h o r t a r m ) 에위 치하며공식적으로인정된유전자좌는 5 개로 H L A - A I - I L A - B H L A - C H L A - D 및 H L A - D R 인데그림 1 은염색체내배열상태를도식화한것이 다 H L A - A, B 및 C 유전자 ( C l a s s I ) 는보체 사랍의 6 번연색채 2 C M S B 0 / D R C 2 C 4-1 C 4-2 S f 4 QνT m 뼈B C A C l a s s I 口미 a s s 0 觸 C l a s s i l l 觀 C l a s s N 그림 1 > H L A 복합체의염색체내배열모식도 - 1 8 9 -

- 사상의학회지저 1 1 1 권제 2 호 1 9 9 9 ( C l a s s i l l ) 와세포표연표지자 ( c e l l S U I 떠 c e m a r k e r, C l a s s I V ) 유전자사이에존재하며 C l a s s i l l 유전자는 D / D R ( C l a s s [ ] ) 유전자와인접하고있다 H L A 복합체는멘델의유전법칙에따라유전되며, 유전자의특성은상호우성 ( c o - d o m i n a n t ) 으로표현 되는데한부모에서낳은자식간에 H L A 형이같을 확률은 2 5 % 이고, 전혀다를확률은 2 5 % 이며 반 이같을확률은 5 0 % 이다 1 9 7 0 년부터 1 9 7 2 년까지 2 년동안세계적으로 각종족의 H L A 검사가시행된바있는데 H L A 항원 의발현빈도는종족에따라유의하게다르고 어떤 H L A 항원은한종족에국한되어발현하거나다른종족보다훨씬빈발하는것이밝혀지게되었다 사람에게밝혀진 H L A 대립유전자는 표 1 ) 과같다 조직이나장기이식에서장기공여자의적합성여부 판정은이식성공의중요한관건으로, H L A 항원검사 는가장신뢰 7 t 높은판정방법으로인식되고있, 다 H L A 형이똑같을경우이식의성공률은 9 0 % 이상이며이식편도 1 0 년이상을유지하며일배체형 만같을경우에는이식편은약 7 0-8 0 % 에서 1-2 년 간생존하고, H L A 가맞지않으연예후는아주나 쁜것으로알려져있다 시체에서장기를제공받는 경우에는 D R 형이맞는것이제일중요하고다음이 B 형, A 형의순서이다 H L A 복합체와연관하여많은질병이보고되고있 는데강직성척수염 ( a n k y l o s i n g s p o n d y l i t i s ) 이 그대표적인예이다 코카시안에서보면이 질환을 가지고있는환자의약 9 0 % 는 H L A - B 2 7 유전자를 7 찌고있다일반인에서는이유전자의발현빈도가 7 % 이나강직성척수염환자군에서는그발 1 ) 표 1 ) 사람에서의 H L A 대립유전자 l o c u s A l o c u s B l o c u s 0 A l B s * O w l A 2 B 7 + O w 2 ' \ 3 B 8 + O w 3 A 9 B 1 2 + O w 4 A l O B 1 3 * O w s A 1 1 B 1 4 + O w 6 A 2 s ( 1 0 ) B 1 s + O w 7 A 2 6 ( 1 0 ) B l 7 * O w 8 A 2 8 B 1 8 + O w 9 A 2 9 ( 1 9 ) B 2 7 * O w 1 0 A w 1 9 B 3 7 * O w 1 1 A w 2 3 ( 9 ) 8 4 0 + O w 1 2 A w 2 4 ( 9 ) B 1 6 * A w 3 0 ( 1 9 ) B w 2 1 * + l o c u s D R A w 3 1 ( 1 9 ) B w 2 2 + O R 1 A w 3 2 ( 1 9 ) B w 3 s + O R 2 A w 3 3 ( 1 9 ) B w 3 8 * ( 1 6 ) O R 3 A w 3 4 B w 3 9 + 9 1 6 ) O R 4 A w 3 6 B w 4 1 + O R s A w 4 3 B w 4 2 + O R 6 B w 4 4 * ( 1 2 ) O R w 7 l o c u s C B w 4 s + ( 1 2 ) O R w 8 C w 1 B w 4 6 + O R w 9 C w 2 B w 4 7 + O R w 1 0 C w 3 B w 4 8 + C w 4 B w 4 9 ( 2 1 ) C w s B w s O + ( 2 1 ) C w 6 B w s 1 * ( s ) C w 7 B w s 2 * ( s ) C w 8 B w s 3 * B w 5 4 + ( 2 2 ) B w s 5 + ( 2 2 ) B w s 6 + ( 2 2 ) B w s 7 + ( 1 B w s 8 + ( 1 B w 5 9 * ( 8 ) B w 6 Q + ( 4Çt B w 6 1 + ( 4Çt B w 6 2 + ( l s ) B w 6 3 * ( l s ) 현빈도가일반인의 1 5 배에이른다, H L A 와관련 된질병을보면 표 2 ) 와같다 1 ) A l e l l e, 상동염색체의동일한부분에존재하는한쌍의유전자 - 1 9 0 -

- 유전자를이용한體質짧쩔앓당 I ) 의方초論에관한考흉 - 표 2 ) 자가면역질환의소인을가진유전자 질벼 감수성유전자 류마토이드관절염 D R 4 -ÅDÖ ' I D w 4, D w 1 4, O w l S D R 1 -ÅDÖ D w 1 4 십상성전포창 D R 4 -ÅDÖ D w l O D R l, D Q w l l D R 2, D Q w 1 A Z H * 제1형 당뇨병 D R 3, D Q w 2 * D R 4, D Q w 3 2 * D R w 6, D Q w 1 1 9 B 8 D R 2 D R 2, D Q 1, A Z H 전신성 루푸스 D R 3 D Q l, D Q 2 D Q l, D Q 2 C 4 A, Q O 원발성쇼그헨증후군 다발성 근염 D R 3 ( a n t i - J o - l + ) D R w S 2 ( a n t i - J o - l - ) D R 3 ( a nµ 0-1 + ) D r w S 2 ( a n t i - J o - l - ) 강직성척추염 H L A - B 2 7 라이터증후군 H L A - B 2 7 D R S 전신성 경화증 C 4 A, Q O D 4 B, Q O 이상에서살펴본바와같이 H L A 는연역계의 을결정하는기능성유전자로서다형성 ( p o l y - m o r p h i s m ) 을가지고있다 즉 A 라는사람 과 B 라는사람이가지고있는 c l a s s I 또는 c l a s s I I H L A 는서로다른항원결정기를가지고있다따 라서병에대한연역력이사람마다차이가나타나는것은이것때문이다 질 李 혐 κ 의 w 떠은각體質 I J 로鷹밟의大小가나 타나고짧質 5 ] I J 로素짧과삼異病認이있어病이걸리 는것도짧質別로차이가있음을이야기하고있다 H L A 가인종이나개인적인다양성을나타내고유전 자의말현에따라잘걸리는병이결정되는것등을 고려할때 I - I L A 유전자와體質과연관성이있을가 능성이높을것으로사료되는바이부분에대한연구들이필요하리라생각된다 5 D N A c h i p 을아용한체질관련유전자의검색 현재수년내에완성을목표로전세계에서진행 중인게놈 ( g e n o m e ) 프로젝트의가시적인성과가도 출되고있다 즉 1 0 만개로추산되는유전자들의염 기서열이밝혀짐으로써우리의몸을구성하는기본 요소인단백질의성격을유추할수있어궁극적으로 생명의신비를밝히는데결정적인도웅이될것이다 또한약 1 만종류로알려진유전질환을유발하는유 전자의이상양상을규영할수있게되어유전질환의 예방이나치료를위한기초재료가 확립될것이며종 양과같이여러유전자의이상에의하여발병하는 질환들의발생이나진행기전이밝혀짐으로써이들 질환에대한우리들의이해가깊어져이들질환의조기진단이나치료에활용될수있을것이다 지난 2 0 년동안유전공학의비약적인발전에힘 입어유전정보를해독하는기술이놀라운발전을거 듭하였다 그러나하루에도수백개이상의유전정 보들이새롭게밝혀지고있다는사실을고려해볼 때기존의연구방법으로특정질환에관련된유전자 를검색하는것은한계가있다 이한계를극복하고 궁극적으로인간이가진모든유전자를한꺼번에검 2 ) 동일한기능음가진단백절에대한정보를가지나구조가서로다른유전자 - 1 9 1 -

- 사상의학회지제 1 1 권저 1 2 호 1 9 9 9 - 색하고자최근에도입된망법이 D N A c h i p율이용 한유전자검색방법이다 D N A c h i p 분석은 c h i p 제작과 ' J I c D Np Ar o b e 의제조후 h y b r i d i z a t i o n 4 ) 및 d e t e c t i o n S I 의 과정 대조군세포 R N A 실험군세포 R N A c D N A 합성 적색의형광물질로표지된 c D N A 녹색의형광물질로표지된 c D N A \ 분석한후 D N A c h i p 의 대조군에은 저비해설험군에서발현이낮은유전자 O 대조군에비해설헝군에서발현이높은유전자 O 대조군과설협군모두에서발현이아주낮은유전자 그림 2 ) D N A c h i p 을이용한유전자분석방법의모식도 3 ) m R N A 를주형으로 하여 역전사반응을 통해 m R N A 에 상보적으로 합성된 D N A 를 c D N A 라하며 c D N A 가 R N A 와결합한 후결합여부를 확인하기 위하여 방사성 동위원소나 형광물질 등으로 표시된 것을 p r o b e 라 한다 4 ) 제조된 c D N A p r o b e 가상보적인 염기서열을 가지고 R N A 나 D N A 에 결합하도록 반응시키는 과정 5 ) c D N A p r o b 가 h y b r i d i z a t i o n 을통하여 R N A 나 D N A 에 결합시킨 후 씻는 과장을 통하여 비 득이적 결합 음 제거하는 과첫 - 1 9 2 -

- 유전자률이용한뼈質짧휠짧영 I J 의方法論에관한考쩔 - 이있다 D N A c h i p 제작은기본적으로컴퓨터에 의해조절되는로봇에부착된 q u i l l - p e n - t y p e p r o b e 로슬라이드글라스에주로 P C R 로제조된 c D N A 단편을함유한용액을점석한후건조시키는 방법이사용된다 이때 c h i p 에붙이게되는 c D N A 는염기서열이밝혀지고그기능이알려져있는것 뿐만아니라비록현재까지세포에서의기능은알 려져있지않으나염기서열이밝혀진 1 5 0 0 0 7 H 이상의 c D N A 가사용된다 H y b i d i z a t i o n 을위한 p r o b e 는대조군세포 ( 또는조직 ) 와검색하고자 는 실험군세포 ( 또는조직 ) 에서 m R N A 를분리한후적 당한 6 ) p n m e r 를사용하여역전사 ( r e v e r s e t r a n s c r i p t i o n ) 반응 7 ) 을통하여제조하게되는데역 전사반응시대조군에는 r h o d a m i n e - d U T P 나 C y 3 - d U T P 을가하여형광현미경하에서적색으로 나타나게 c D N A 를제조하며 실험군에서추출된 m R N A 는 F I T C - d U T P 를첨가한후역전사반응을 시행하여녹색으로관찰될수있게한다 이렇게제조된 p r o b e 는서로혼합한후 S e p h a d e x G - 5 0 c o l u m n 이나반복적인에타놀 p r e c i p i t a t i o n 방법으로표지되지않은 d U T P 를 제거하고 h y b r i d i z a t i o n s o l u t i o n 에녹인다음가 열하여변성시킨후준비된 D N A c h i p 에가하여 1 2 시간이상 h y b r i d i z a t i o n 시킨다 H y b r i d i z a t i o n 이끝난 D N A c h i p 은수세후고 감도의 t w o - c o l o r l a s e r s c a n n i n g c o n f o c a l m i c r o s c o p e 를이용하여적색과녹색의형광을각각 잡은후두형광을혼합한다이때대조군과실험 군에서의유전자발현이동일하다연적색과녹색이 혼합된주황색깔로나타나게되며실험군에서과발 현되는유전자는실험군세포 m R N A 가녹색으로 표지되게 p r o b e 가만들어졌다면녹색에가깝게나 타나고실험군세포에서발현이감소한유전자는적 색에가깝게나타나게된다 따라서적색에대한녹 색의비율이높으연높을수록실험군세포에서과발 현된것인데컴퓨터프로그램을이용하면쉽게과발현또는발현감소의여부를확인할수있다 이와같이 D N A c h i p 분석기술은한번의실험 으로수만개의유전자의발현양상을비교할수있 기때문에실로그활용범위는다양한데 훌質의발 현에관련된유전자의검색에도이방법을도입할 수있을것으로생각된다 즉體質들간에발현이 현저히차이가있는유전자들을우선이방법으로 조사한후다수의體質群에서 이유전자들의발현의 보편성을확인하여만일體質에특이적으로발현되 는유전자들을밝힐수있다연體質짧 I J 을위한재 료로활용할수있는것으로기대된다 비록현재 국내의 D N A c h i p 기술은초기단계에머물고있으 며분석에막대한비용이소요되나이기술의확립 을위해국가적인투자가이루어지고있는바조만 간에저렴한비용으로이용할수있을것이다 I V 結 1 유전자 p o l y m o r p h i s m 을 & a 빼 가진것을대상으로하여야한다 ( ) 다형성이 기능성을 2 M i c r o s a t e l l i t e 는기능을가지지않는부분이 므로이것의 p o l y m o r p h i s m 이體質과관련될 6 ) R N A 를주형으로하여 c D N A 를합성하거나 D N A 의일부분을증폭할때새로운 D N A 가닥이합성되도록제 공되는이 j g o n u c l e o t i d e 7 ) R N A 를주형으로 c D N A 를합성하는과정 - 1 9 3 -

- 사상의학회지제 1 1 권제 2 호 1 9 9 9 가능성은적을것으로사료된다 3 A n g i o t e n s i n c o n v e r t i n g e n z y m e ( A C E ) 은 일반적으로 體質과 관련이 있다고 믿어지는 인내력을결정하는데중요한유전자로알려져 있는바이효소의 p o l y m o r p h i s m 을이용하 여밟質을 분류하고자 한시도는 의미가 있는 것으로생각된다 4 H L A 는다형성을 가지고 있고 H L t \ 유전자의 발현에 따라 질병에 대한 감수성이 차이가 있다는 사실을 고려해 볼때앞으로 이분야 는연구해볼 충분한 가치가 있는것으로 생각 된다 5 D N A c h i p 의 사용이 보편화되연 四象體質의 객관화에 많은 도움이 될 것으로 생각된다 參考文敵 1 김민회 : 유전자분석법에의한사상체질의연구 사상체질의학회지 V o l 1 1 N o 1 1 9 9 9 p 1 8 1 2 박동기역생화학 유한문화사, 서울 1 9 8 8 년 p 1 3 8-1 5 0 3 서울대학교의과대학편 : 연역학, 서울대학교출 판부 서울 1 9 9 7 년 p 5 3-6 0 1 3 0-1 5 4, 교문사 서울 1 9 8 2 년 : 4 이택준 유전학 p 2 3 9-3 0 2 5 최승훈 사상체질유형과 A C E ( a n g i o t e n s i n c o n v e r t i n g e n z y m e ) 유전자 T y p e ( p o l y -,,, m o r p h i s m ) 과의 상관관계 사상체질의학회 지 V o l l O N o 2 1 9 9 8 p 2 8 4-2 8 9 6 D a n i e l L H a r l 외 3 인 ( 이연수역 ) : 일반유전학도서출판아카데미서적서울 1 9 9 1 년 p 3 7-5 2 1 6 7-1 8 1 7 J a m e s D W a s t s o n ( 김종협 이형환공역 ) : 유전자의분자생물학대광문화사서울 1 9 8 2 년 p 5 8-7 4 1 1 3-1 3 2 8 L u b e r t S t y r y e r : B i o c h e m i s t r y W H F R E E M A N A N D C O M P A N Y S a n F r a n c i s c o 1 9 8 1 p I 5 6-1 7 8 2 0 3-2 1 1-1 9 4 -