bag 내의저산소증유발시에는해당작용에영향을주어그부산물인 lactic acid의증가로인하여 ph가 6.2 이하로급속하게떨어지며, 이는곧혈소판의에너지대사가중단됨을의미한다 (Murphy & G따der, 1975; Murphy et al.,1982; Snyder et al.,

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임상범리검사과악외 ^I: 저 134 권저 12 호, 16-21, 2002 5 알보존용채혈백에따른보존일자별농축혈소판의 생화학및성상분석 대한적십자사서울남부혈액원 서울보건대학임상병리과 1 이동범 유태종 김태전김승곤신종관 양대형 고광임 박성훈 Biochemical Changes and Icon on Platelet Concentrates Preserved for a 5 Ðays Term in Several Plastic Containers Lee, Dong Beom., Yoo, Tae Joung., Kim, Tai Jeon.,l Kim, Seung Kon., 1 S 피 n, Jong Kwan., Yang, Dae Hyung., Ko,. Goung Yim., Park, Seung H 뻐 The Republic of Korea Red Cross, Seoul Nambu Blood Center, Seoul, Korea. Department of M edicαl Technology, Seoul HeQlth College, SlingnQrn, KoreQl Biochemical changes and icon of platelets on platelet concentrates preserved for a 5 day term in several plastic containers were investigated. The authors evaluated the TOTM-PVC second generation container produced by Green Cross Medical Corp. and Boin medica. Blood obtained from 40 persons was manufactured for platelet concentrates within 4 hours and each divided into 20 뻐ts of pl따elet concentrations. Samples were taken at 0, 3, and 5 days and the platelet count, ph, p02, pc02, HC0 3 -, glucose, LDH, lactate, electrolytes, and mineral element were tested. fhe number and MPV, for platelets icon, were well preserved on two different platelet concentrates during storage. A test for biochemical function appeared to be effective data. ph was maintained above 6.8 on two different platelet concentrates during storage. The results suggest that the TOTM-PVC second generation platelets storage container produced by Green Cross Medical Corp. and Boin medica was able to preserve platelets for at least five days without lesion and was it concluded to have biochemical efficacy on patients with transfusions. Key Words : TOTM-PVC, ph, Platelet icon, Biochemical changes 1. 서로 - 농축혈소판은백혈병및혈소판감소증이수반되 는혈액학적질환에펼수적인치료제이며그사용 이증가되고있는추세이다. 생체외에서의혈소판의생존능력유지는호기성대사에필요한충분한산소와이산화탄소를높이는데있다. 적절한저장 bag 내의산소포화도유지는혈소판의효능과관련되어있으며, 이는 5 일내지 7 일보관시에도 ph를 6.2 이상유지시켜준다. 저장 16

bag 내의저산소증유발시에는해당작용에영향을주어그부산물인 lactic acid의증가로인하여 ph가 6.2 이하로급속하게떨어지며, 이는곧혈소판의에너지대사가중단됨을의미한다 (Murphy & G따der, 1975; Murphy et al.,1982; Snyder et al., 1983). 이러한혈소판의특이적인생화학적인특성은저장 bag 에대한연구를활발하게자극이되어졌다. 1990년초까지 di-2-ethyhexl phthalate (DEHP) 를사용한 PVC bag은그유효기간이 2 일밖에되지않아적절한양의수급의어려움과폐기량및수혈시의생화학적효능및효과에문제점이노출되어산소투과도를훨씬높힌 TOTM을가소제로처리한 PVC 2 연구방법채혈당일, 3 일, 5 일에걸쳐 sterile connecting device (rscd Terumo사, made in Japan) 로검체를무균적으로채취하였으며혈소판수와 MPV는 Baker sero 9020 cell counter로검사하였고, 혈소판의생화학적분석을위해 lactate, Na+, K+, ct 와 ph, p02, pc02, HC0 3 -은 BGA Blood Gas Analyzer로, Glucose, LDH, Ca, Mg은 Hitach-7170 auto analyzer을사용하여실시하였다. 세균배양검사는채혈당일, 2 일 5 일및 7 일의 4회에걸쳐 thioglycolate 배지로 3TC 세균배양기에서 7 일간배양하여세균오염유무를판별 bag 으로그보존기간을 5 내지 7 일까지 연장시켜 하였다. 수급불균형에탄력성을주었다. 그후현재까지국 내 혈액 bag 제조사는 TOTM 을가소제로처리된 PVC bag 을 해왔다. 기술적인 knowhow 로품질향상을거듭 III. 결과 본연구는대한적십자사남부혈액원에공급되어지고있는제조된국내용 PVC bag ( 녹십자의료공업 ( 주 ) 과보인메디차 ( 주 ) 로채혈제조된농축혈소판의생화학적변화및성상변화를비교분석함으로써양질의농축혈소판을공급하며진일보적인품질향상에기여함에그의의가있다. II. 재료및밤법 1. 연구대상건강한공혈자 40명을대상으로하여항응고제 CPDA-l 이 56ml 씩들어있는녹십자의료공업 ( 주 ) 와보인메디가 ( 주 ) 의 TOTM을가소제로처리한채혈 bag에각각 20 명으로배분하여 4ωml 의혈액을채혈하였다. 채혈후 4시간이내에혈액냉장원심분리기 (Sorvall made in USA) 로 18900로혈소판풍부혈장을만든후다시 4651G로고속원섬시켜농축혈소판을제조하였다. 제조후 1 시간방치후수평교반형혈소판부란기 (Helmer사, made USA) 에서 22 oc 에서수평 교반상태 (62 회 / 분 ) 로보관하였다. 1. 보존기간에따른혈소판수및성상변화 제조당일평균혈소판수는녹십자의료공업 ( 주 ) 1,570x103/μL 보인메디차 ( 주 ) 1,675xl0 3 jμm 이었으며, 3 일째는각각 1,574xl0 3 jμm, 1,751x103/ 따이며또한 5 일째는각각 1,660x103/ 따, 1, 765xl0 3 jμ4로서혈소판 수가증가하는양상을보였으며, 농축혈소판내의 혈소판총수에서도두제조사는별다른유의성을 보이지않았다. 또한혈소판평균용적치 (MPV) 에서도보존당일 6.3ft, 6.5ft 이며 3 일째는 6.3ft, 6. 6ft, 5 일째는 6.4ft, 6.6ft 로서유의성을보이지않았다 (Table 1). 2. 혈액배양검사와농축혈소판의대사상의변화 혈액배양검사는 모두 음성으로 판정되었으며, ph는녹십자의료공업 ( 주 ), 보인메디카 ( 주 ) 모두 5 일 보존기간동안모두 6.8 이상잘유지되었으며, p02와 pc02 에서는보존당일및 3 일째에는변화에차이를 보이지 않다가보존 5 일째에 녹십자의료공업 ( 주 ) p02 가 28.2 mmhg, pc02 가 63.8mmHg 이고보인메디 카 ( 주 ) 가 p02가 68.2mmHg, pc0 2가 38.6mmHg로서 17

Table 1. In vitro data for platelet concentrates on 0, 3 and 5 days of storage (M 않 n :t SD) Green Gross Med. Corp. 1,570:t373 PLT Count(x1031따 ) Day-3 1,574:t375 1,660:t370 6.9:t0.5 MPV(fl) Day-3 6.9:t0.5 7.2:t0.8 6.3:t1.4 Total PLT(x lololμ) Day-3 6.3:t1.5 6.4:t1.4 Boin Medica 1,675 :t372 1,75 l:t378 1,765 :t336 7.4:t0.9 8.2:t1.9 8.6:t2.1 6.5 :t1.4 6.6:t l.5 6.6 士 1. 5 통계적유의성을보였다 (Table 2). Glucose 는보존기간이지남에따라두제조사모 두가감소하는일치된경향을보였으며 LDH, lactate 는세포내대사로인하여증가하는경향을나 타났다 πable 3). Table 2. ph, p02, pc02, HC03- of platelet concenσat 않 on 0, 3 and 5 day of storage Green Gross Med. Corp. 7.45:t0.Ol ph(22t) Day-3 7.10:t0.04 6.80:t0.15 155.8:t2.2 p02(mmhg) Day-3 105.7:t8.8 28.2:tl1.4 11.5:t0.5 pc02(mmhg) Day-3 32.7:t5.9 63.8:t8.7 14.3:t0.9 HC03-(mmolfL) Day-3 1O.2:t1.7 8.513.5 Boin medica 7.45:t0.02 7.02:t0.05 6.97:t0.10 160.4:t5.0 125.7:t7.2 68.2:t3.3* 13.7:t1.5 20.4:t5.7 38.6:t8.2* 15.0:t 1.0 10.512.2 6.612.8 Table 3. Biochemincal changes of platelet concentrates on 0, 3 and 5 days of storage (Mean1SD) Green Gross Med.Corp. 510.4123.9 Glucose Day-3 427.7122.0 335.0149.4 257.0142.5 LDH (IU/L) Day-3 427.5158.2 746.6180.2 3.01 1.1 Lactate(mmolfL) Day-3 8.5:t2.7 18.815.7 Boin Medica 487.8:t8.4 462.717.2 248.2175.2 31 3.4149.6 398.2 土 2 1. 2 674.2:t 12.7 3.61 1.1 9.716.5 17.214.2 18

Table 4. Mineral elements and e1ectrolytes of plate1et concentrates on 0, 3 and 5 days of storage (Mean :1:SD) Calcium (mg/dl) Magnesium(mg/dl) Sodium (meqfl) Potassium (meqfl) Chloride (m벼/1) Green Cross med.corp. 6.8 :1:0.3 Day-3 7.5:1:0.3 7.6 :1:0.3 2.1:1:0.1 Day-3 2.1:1:0.1 2. 1:1:0.1 154.0 :1: 1.5 Day-3 155.2 :1:1.7 159.3:1:2.1 2.9 :1:0.1 Day-3 3.0 :1:0.1 3.2:1:0.2 74.8 :1:1.8 Day-3 74.9 :1:2.2 75.8 :1:2.8 Boin medica 6.9 :1:0.2 7.0 :1:1.2 7.0 :1:1.2 2.2 :1:0.2 2.2 :1:0.2 2.2 :1:0.2 153.6:1:1.1 157.5:1:3.5 162.8 :1:4.2 3.1 :1:0.2 3.3 :1:0.5 3.5:1:0.7 76.6 :1:2.3 75.5:1:2.5 77.0:1:1.4 3. 보존기간에따른전해질농도및 mineral element 의변화 Valeri, 1969; Sivertsen, 1972; Beker et al., 1973). 혈 소판을실온에서보관함에따라혈소판대사에펼 두제조사의농축혈소판내의 Na+, K+,Ct, 의 전해 요한에너지인 A TP (adenosine triphosphate) 는산소 를이용하지못하는혐기성의조건보다는호기성 질의농도와 Ca, Mg 등은보존 5 일까지변화를보이 지않았다 (Table 4). 대사에서훨씬효과적이며, 혐기성대사에서논포 도당의대사로인한많은양의 lactic acid 의축적으 N. 고화E 로인하여 ph가급격하게감소하게된다. 이러한이유로장기보존에서의혈소판의 ph의변화는혈소판의기능과밀접한관련이있어중요한평가요소로간주되고있다. 혈소판은적혈구에비해생체외에서보존방법에따라서손상을받기쉬운혈액세포로서생존능력의여부에따라서생체내의상태내에서그본래의기능인생화학적효능에실효성을발휘하게된다. 그러나혈소판의저장에대한가장적절한상태는아직도확고하게확립되어있지않으며 1970년이전에는농축혈소판을 4 0 C 에보존하였는데 18시간보존시혈소판생존능이 1-2 일정도밖에되지않아농축혈소판을 24시간이상저장하는것은불가능하였으며, 1970년대에들어혈소판이냉장온도에노출됨으로서생존능이감소되는것임이알려지게됨에따라혈소판을실온에서보존하는노력이이루어지게되었다 (Murphy & Gardner, 1969; Habdin & 1970년대초에혈소판보조bag 내의혈소판의저장및보존에관한연구는 PVC만을소재로한보조bag은산소와이산화탄소의 bag내투과도가낮아 Fenwal사에서 PVC 에 DEHP를가소제로첨가한결과종래의보존 bag보다산소투과도가뛰어난새로운보존 bag (PL-146) 을개발하였는데 DEHP는다른지용성가소저1 와는달리 PVC 표면에공유결합을하지않으므로시간이지남에따라 bag내의혈액성분으로녹아들어감으로써결과적으로산소투과도가떨어지게되고동물세포에대한독성작용을가지고있어혈소판에응집능저하를초래한다고보고되고있다. 이러한이유로 1970후반부터 1980년대초저112세대보존 bag<{l TEHTM을가소제로처리한 19

보존 bag (PL 1240, CLX) 과 polyoletin 을소재로한 성과효능성이우수하리라고사료되며, 5 일보존용 보존 bag (PL732) 들이개발되어국내에서는임상적실험을거쳐 1990년대초에그실용화에들어갔다 (Simon et al., 1983; Snyder et al., 1983; Murpy et al., 1984; Hdge et al., 1986). 본연구에서는 Grode (1986) 등이 PL1240 bag내에 bag 으로서수급의불균형을완화한다면그사용이 선뢰될수있을것으로판단된다. 잠고문흰 서의연구결과와거의동일하게두제조사모두가 보존 5 일째까지 ph가 6.8 이상유지하였다. 농축혈소판의보존기간에따른혈소판의기능및생존능의검사방법으로는응집유발제에의한혈소판응집능검사, a과립의유리정도를반영하는 p -thromboglobulin π'0) 의측정, 저장속반응, serotonin 유리, swirling 현상, melonaldehyde 형성측정등다양한방법이있으며혈소판의 disk form에서 spere form으로의변형, 응집능감소, 저장속반응에대한회복능감소, swirling 현상감소및 ß-TG의감소하는성상변화를보존기간이지남에따라기존의연구결과를토대로가늠해볼수있었다. 본연구결과를토대로국내제조사인녹십자의료공업 ( 주 ) 과보인메디카 ( 주 ) 의 TOTM을가소제로사용한 PVC bag은 5 일보존동안비교적혈소판의성상및생화학적변화에문제점이노출되지않았으며, 생화학적으로수혈후그효능이실효성이있으리라사료된다. v. 결를를 저자들은국내채혈 bag 제조사인녹십자의료공업 ( 주 ) 와보인메디카 ( 주 ) 가각각제조한채혈백을사용하여채혈된제제에서혈소판의생화학적변화및성상분석에서보존당일, 3 일째, 5 일째에모두혈소판수, 혈소판평균용적치, Gas 투과도, Gluscose, LDH, lactate 및전해질, mineral element를시 험해본결과다소의변화가있었지만우수한결과로나타났다. 또한저장 bag의 Gas 투과도에서 p02, pc02는보인메디카 ( 주 ) 가녹십자의료공업 ( 주 ) 보다조금나은결과를보였다. 두제조사의 TOTM을가소제로만든 PVC bag은이러한결과를토대로생화학적으로수혈후실효 1. Beker GA, Tuccelli M, Kunicki TJ, αrnlos MK, Aster RH. Studies of platelet concentrates stored at 22 0 C and 4 0 C. Trans짜 sion 13:61-68, 1973 2. G. Grode, 1. ~ 힘ripol, 1. Garber, T. Baber, bechholz DH. Extend storage of platelets in a new palstic container. Tranfusion 25:204-208 1986 3. Habdin RI, Valeri CR. Hemostatic effectiveness of platelets storaged at 22 0 C. N Engl J Med 285: 538-543, 1971 4. Hdge DE, Thompson BW, Schiffer CA. Platelet storage for 7 days in second generation blood bag storage blood bag. Transfusion 26: 131-135, 1986 5. Murphy S., Gardner FH. Platelet preservation effect of storage temperature on maintenance of platelet viability deleterious effect of refrigerated storage. N Engl J Med 280:1094-1098, 1969 6. Murphy S, Gardner 판f. Platelet storage at 22 0 C: Role of gas transport across plastic containers in maintenance of viability. Blood 46:209-218, 1975 7. Murpy S, Holme S, Nelson E, Carmen R. paires comparision of the in vivo results of storage of platelet concentrate in two containers. Transfusion 24:31-34, 1984 8. Murphy S, Kahn RA, Holme S, et. al. Improvement storage of platelets for transfusion in a new container. Blood 60: 197-200, 1982 9. Sivertsen U. πle influence of storage on ADP induced platelet aggregation. Sacnd J Haematol 9:215-221, 1972 10. Simon TL, Nelson EJ, Carmen R, Murphy S. Extension of platelet concentrates storage. Transfusion 23:207-212, 1983 20

11. Snyder Er, Bookbiner M, Kakaiya R, Ferri P, 12. Snyder 표, Koerner TA Jr, Ka Kayia R, Moore P, Kiraly T. 5 days storage of platelet concentrates in Kiraly T. Effect of mode of agitation on storage CLX containners. : Effect of type of agitation. Vox of platelet concentrates in PL-732 containers for sang 45:432-437, 1983 5days. Vox sang 44:300-304, 1983 21