000~004_6월차례

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시향 평
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1 HPLC 를이용한인삼, 홍삼, 산양산삼및홍산삼의성분비교분석 87 DOI: /KPI 원저 HPLC 를이용한인삼, 홍삼, 산양산삼및홍산삼의성분비교분석 이장호 * ㆍ권기록 * ㆍ차배천 ** * 상지대학교한의과대학침구학교실 ** 상지대학교응용동물과학부 Component Analysis of Cultivated Ginseng, Red Ginseng, Cultivated Wild Ginseng, and Red Wild Ginseng Using HPLC Method Jang Ho, Lee* Ki Rok, Kwon* Bae Chun, Cha** * Department of Acup&Moxi, Korean Medical College, Sangji University ** Devision of Animal Resourses and Life Science, Sangji University ABSTRACT Objectives Methods Results Conclusions The aim of this experiment is to provide an differentiation of ginseng, red ginseng, cultivated wild ginseng(cwg), and red wild ginseng(rwg) through component analysis using HPLC(High Performance Liquid Chromatography, hereafter HPLC). Comparative analyses of ginsenoside Rg3, ginsenoside Rh2, and ginsenosides Rb1 and Rg1 of various ginsengs were conducted using HPLC. 1. CWG was relatively heat-resistant and showed slow change in color during the process of steaming and drying, compared to cultivated ginseng. 2. Ginsenoside Rg3 was not detected in cultivated ginseng and CWG, whereas it was high in red ginseng and RWG. Ginsenoside Rg3 was more generated in red ginseng than in RWG. 3. Ginsenoside Rh2 appreared during steaming and drying of cultivated ginseng, whereas it was more increased during steaming and drying of CWG. 4. Ginsenoside Rg1 content was more increased during steaming and drying of cultivated ginseng, whereas it was more decreased during steaming and drying of CWG. 5. Ginsenoside Rb1 content was increased about 500% during steaming and drying of cultivated ginseng, whereas it was increased about 30% during steaming and drying of CWG, indicating that ginsenoside Rb1 was more generated in red ginseng than in RWG. 6. Ginsenoside Rg3 content was higher, whereas ginsenoside Rg1 content was lower in 11th RWG than in 9th RWG, indicating that ginsenoside Rg3 content was increased and Rg1 content was decreased as steaming and drying continued to proceed. Ginsenoside Rh2 and Rb1 contents began to be increased, followed by decreased after 9th steaming and drying process. Above experiment data can be an important indicator for the identification of ginseng, red ginseng, CWG, and RWG. And the following studies will be need for making good product using CWG. key words cultivated ginseng, red ginseng, cultivated wild ginseng, red wild ginseng, HPLC. 교신저자 : 권기록 강원도원주시우산동 283 상지대학교부속한방병원침구과 Tel : , Fax : , beevenom@ paran.com Received( ), Revised( ), Accepted( )

환류 추출하여 여과 후 농 축한 80% MeOH추출물을 얻었다. 얻어진 80% MeOH 추출물을 증류수에 현탁시켜 n-hexane, EtOAc 및 nbuoh 순으로 분획한 후 농축하여 사포닌 주성분 분획물 인 n-buoh 분획물을 얻었다. 조사포닌 n-buoh 분획물 蔘을 말한다. 을 사포닌의 패턴 분석을 위한 시료로 사용하였다( Fig. 3). I.

)이 야생상태 에서 자연 발아하여 성장한 蔘을 일컬으며1) 山養山蔘(樟腦 예로부터 山蔘은 대표적인 補氣劑로, 신비한 약으로 여 겨졌으며 그 모양새가 사람을 닮았다고 하여 人蔘으로 표 현되어 왔다2). 현재까지 보고된 인삼의 효능은 신경의 기 3) 4) 능을 조절하고, 체액과 신진대사기능을 조절하며, 강심, Fig. 1.

2 인삼홍삼3교 :3PM 페이지14 HPLC를 이용한 인삼, 홍삼, 산양산삼 및 홍산삼의 성분 비교 분석 대한약침학회지 제 1 1권 제 2 호(2008년 6 월) 88 1) 인삼 및 산양산삼 蔘)은 산삼의 씨앗이나 幼蔘을 인위적으로 산에서 재배한 2) 추출 및 분석시료 음건한 삼류( 1-5g)에 80% MeOH mL를 가 하여 수욕 상에서 3시간씩 3회 환류 추출하여 여과 후 농 축한 80% MeOH추출물을 얻었다. 얻어진 80% MeOH 추출물을 증류수에 현탁시켜 n-hexane, EtOAc 및 nbuoh 순으로 분획한 후 농축하여 사포닌 주성분 분획물 인 n-buoh 분획물을 얻었다. 조사포닌 n-buoh 분획물 蔘을 말한다. 을 사포닌의 패턴 분석을 위한 시료로 사용하였다( Fig. 3). I. 서론 본 실험에 사용한 인삼은 4년 근을 사용하였고, 산양산 삼은 (주)천방농산에서 수령 10년 근을 지원 받아 실험에 山蔘은 五加科(주릅나무과; Araliaceae)에 속한 다년 사용하였다( Fig. 1). 생 초목인 人蔘( panax ginseng C. A. Mey.)이 야생상태 에서 자연 발아하여 성장한 蔘을 일컬으며1) 山養山蔘(樟腦 예로부터 山蔘은 대표적인 補氣劑로, 신비한 약으로 여 겨졌으며 그 모양새가 사람을 닮았다고 하여 人蔘으로 표 현되어 왔다2). 현재까지 보고된 인삼의 효능은 신경의 기 3) 4) 능을 조절하고, 체액과 신진대사기능을 조절하며, 강심, Fig. 1. The shape of various cultivated wild ginseng about 10 years old. These were used for making 항이뇨 및 성기능 증강효과가 있고5), stress에 대한 저항력 6-7) 을 높이며, 소화흡수 및 면역항체생산을 촉진시키는 등 Table 1. HPLC condition for analysis of Rh2 and Instrument Pump Varian 9012 solvent Delivery System, Co. Detector VIS 9050 Variable Wavelength UVDetector, Varian Co. Autosampler Column m ), 9300 Autosampler, Varian Co. Capcell Pak C1 8 ( m m:5 μ Shiseido Co. 3) HPLC의 분석조건 HPLC 조건은 column 은 Capcell Pak C 18 ( mm, 5μm, Shiseido Co.)이며 유속은 1mL/min, column 온도는 40, 시료 주입량은 20 로 UV Operating condition UV Absorbance nm에서 실험하였다. 이동상은 분석하고자 하는 사포 Column temp ) 홍삼 및 홍산삼의 제조 닌의 종류에 따라서 비극성 사포닌류인 ginsenoside Rg3 Injection vol. 2 0 배된 인삼과 관련한 연구 보고이며, 산양산삼이나 자연산 홍삼과 홍산삼을 만들기 위하여 원료 수삼과 산양산삼 와 ginsenoside Rh2의 분석시의 이동상 조건은 Table 1 Mobile phase A 산삼에 대한 관심이 높아지면서 이에 대한 연구의 필요성 을 깨끗이 세척한 후 전통적인 방법으로 찜통에서 2시간 이 요구됨에 따라 품질관리10-12), 효능13-15), 산삼 약침16-19) 등 동안 찌는 과정을 1증으로 하여 인삼은 9증을 시행하였 에, 극성 사포닌류인 ginsenoside Rb1과 ginsenoside Rg1의 이동상의 분석조건은 Table 2에 나타내었다. Mobile phase B 60% Acetonitrile 과 관련한 연구보고들이 최근에야 이루어지고 있다. 고, 산양산삼은 蒸乾 과정이 성분에 어떠한 영향을 미치는 8-9) 많은 연구가 보고되고 있다. 이러한 연구는 밭에서 재 인삼은 밭에서 생물의 상태로 채집된 수삼, 이를 건조한 백삼, 그리고 증기로 쪄서 건조한 홍삼 등 다양한 형태로 가를 알아보기 위하여 9회와 11회 蒸乾한 후 비교 분석하 4) 표준액 및 검액의 제조 였다( Fig. 2 ). 비극성 사포닌류의 패턴 분석을 위한 표준액은 다고 알려지면서 많은 사랑을 받고 있는 인삼제품이다. 거 ginsenoside Rg 3와 ginsenoside Rh 2를 각 50μg 을 HPLC용 MeOH 1mL에 녹여 표준용액으로 하였고, 극 성 사포닌류의 패턴 분석을 위한 표준액은 ginsenoside Rg1과 ginsenoside Rg1 각 150μ g을 HPLC용 MeOH 래 규모면에서 현재 국내에서 유통되는 인삼 시장의 약 1mL에 녹여 표준용액으로 하였다. 검액은 인삼을 패턴 88%를 홍삼제품이 점유하고 있고, 수출품도 백삼보다 월 분석의 기본으로 하여 분석하기 위하여 표준삼의 농도와 사용되고 있는데, 특히 홍삼은 열 자극에 의해 생성되는 특유 성분인 ginsenoside Rg2, Rg3, Rh1, 그리고 Rh2 등 이 암 예방20), 암세포 성장억제21), 혈압 강하 작용22) 등이 있 등히 많은 수입을 올리고 있는 고부가가치 상품이다23). Fig. 2. The shape of red wild ginseng. 이에 저자는 인삼보다 효능이 우수하다고 추정되는 산 유사하도록 7-13mg /ml의 농도가 되도록 검액을 제조하 여 분석하였다. Instrument Pump Varian 는지를 알아보고자 본 연구를 시도하였다. 산양산삼의 증 회수에 따른 홍산삼을 비교 분석한 결과 유의한 결론을 얻 었기에 보고하는 바이다. II. 방법 1. 재료 9012 solvent Delivery System, Co. Detector VIS Column m ), 2. H P L C를 이용한 인삼, 홍삼, 산양산삼 그리고 Table 2. HPLC condition for analysis of Rg1 and R b1. Autosampler 건 과정에서 나타나는 성분변화를 조사하고자 40% Acetonitrile Gradient profiletime(min)% A % B Flow(mL/min) 0 : : : 양산삼을 홍삼화 하여 홍산삼을 만드는 것이 타당성이 있 HPLC (High Performance Liquid Chromatography, 이하 HPLC )를 이용하여 인삼과 홍삼, 산양산삼과 증건 9050 Variable Wavelength UVDetector, Varian Co Autosampler, Varian Co. Capcell Pak C1 8( m m: 5μ Shiseido Co. 홍산삼의 성분분석 Operating condition 1) 실험기기 및 시약 Rotaty vacuum evaporeator는 Eyela Tokyo Co.의 농축기를 사용하였고, 분석용 HPLC로는 Varian 9012 solvent Delivery System, 검출기는 Varian Variable Wavelength 9050 UV-VIS detector, 그리고 Autosampler 는 Varian 9300을 사용하였다. AcCN, MeOH등의 분 석시약은 모두 HPLC용 시약을 사용하여 측정하였으며, 추출 및 분획용 용매는 모두 표준품을 사용하여 실험하였다. UV Absorbance n m Column temp. 4 0 Injection vol. 2 0 Mobile phase A 15% Acetonitrile Mobile phase B 80% Acetonitrile Fig. 3. Manufacturing process of crude saponin by extraction and fraction. 89 Gradient profiletime(min)% A % B Flow(mL/min) 0:

3 인삼홍삼3교 :3PM 페이지14 HPLC를 이용한 인삼, 홍삼, 산양산삼 및 홍산삼의 성분 비교 분석 대한약침학회지 제 1 1권 제 2 호(2008년 6 월) 88 1) 인삼 및 산양산삼 蔘)은 산삼의 씨앗이나 幼蔘을 인위적으로 산에서 재배한 2) 추출 및 분석시료 음건한 삼류( 1-5g)에 80% MeOH mL를 가 하여 수욕 상에서 3시간씩 3회 환류 추출하여 여과 후 농 축한 80% MeOH추출물을 얻었다. 얻어진 80% MeOH 추출물을 증류수에 현탁시켜 n-hexane, EtOAc 및 nbuoh 순으로 분획한 후 농축하여 사포닌 주성분 분획물 인 n-buoh 분획물을 얻었다. 조사포닌 n-buoh 분획물 蔘을 말한다. 을 사포닌의 패턴 분석을 위한 시료로 사용하였다( Fig. 3). I. 서론 본 실험에 사용한 인삼은 4년 근을 사용하였고, 산양산 삼은 (주)천방농산에서 수령 10년 근을 지원 받아 실험에 山蔘은 五加科(주릅나무과; Araliaceae)에 속한 다년 사용하였다( Fig. 1). 생 초목인 人蔘( panax ginseng C. A. Mey.)이 야생상태 에서 자연 발아하여 성장한 蔘을 일컬으며1) 山養山蔘(樟腦 예로부터 山蔘은 대표적인 補氣劑로, 신비한 약으로 여 겨졌으며 그 모양새가 사람을 닮았다고 하여 人蔘으로 표 현되어 왔다2). 현재까지 보고된 인삼의 효능은 신경의 기 3) 4) 능을 조절하고, 체액과 신진대사기능을 조절하며, 강심, Fig. 1. The shape of various cultivated wild ginseng about 10 years old. These were used for making 항이뇨 및 성기능 증강효과가 있고5), stress에 대한 저항력 6-7) 을 높이며, 소화흡수 및 면역항체생산을 촉진시키는 등 Table 1. HPLC condition for analysis of Rh2 and Instrument Pump Varian 9012 solvent Delivery System, Co. Detector VIS 9050 Variable Wavelength UVDetector, Varian Co. Autosampler Column m ), 9300 Autosampler, Varian Co. Capcell Pak C1 8 ( m m:5 μ Shiseido Co. 3) HPLC의 분석조건 HPLC 조건은 column 은 Capcell Pak C 18 ( mm, 5μm, Shiseido Co.)이며 유속은 1mL/min, column 온도는 40, 시료 주입량은 20 로 UV Operating condition UV Absorbance nm에서 실험하였다. 이동상은 분석하고자 하는 사포 Column temp ) 홍삼 및 홍산삼의 제조 닌의 종류에 따라서 비극성 사포닌류인 ginsenoside Rg3 Injection vol. 2 0 배된 인삼과 관련한 연구 보고이며, 산양산삼이나 자연산 홍삼과 홍산삼을 만들기 위하여 원료 수삼과 산양산삼 와 ginsenoside Rh2의 분석시의 이동상 조건은 Table 1 Mobile phase A 산삼에 대한 관심이 높아지면서 이에 대한 연구의 필요성 을 깨끗이 세척한 후 전통적인 방법으로 찜통에서 2시간 이 요구됨에 따라 품질관리10-12), 효능13-15), 산삼 약침16-19) 등 동안 찌는 과정을 1증으로 하여 인삼은 9증을 시행하였 에, 극성 사포닌류인 ginsenoside Rb1과 ginsenoside Rg1의 이동상의 분석조건은 Table 2에 나타내었다. Mobile phase B 60% Acetonitrile 과 관련한 연구보고들이 최근에야 이루어지고 있다. 고, 산양산삼은 蒸乾 과정이 성분에 어떠한 영향을 미치는 8-9) 많은 연구가 보고되고 있다. 이러한 연구는 밭에서 재 인삼은 밭에서 생물의 상태로 채집된 수삼, 이를 건조한 백삼, 그리고 증기로 쪄서 건조한 홍삼 등 다양한 형태로 가를 알아보기 위하여 9회와 11회 蒸乾한 후 비교 분석하 4) 표준액 및 검액의 제조 였다( Fig. 2 ). 비극성 사포닌류의 패턴 분석을 위한 표준액은 다고 알려지면서 많은 사랑을 받고 있는 인삼제품이다. 거 ginsenoside Rg 3와 ginsenoside Rh 2를 각 50μg 을 HPLC용 MeOH 1mL에 녹여 표준용액으로 하였고, 극 성 사포닌류의 패턴 분석을 위한 표준액은 ginsenoside Rg1과 ginsenoside Rg1 각 150μ g을 HPLC용 MeOH 래 규모면에서 현재 국내에서 유통되는 인삼 시장의 약 1mL에 녹여 표준용액으로 하였다. 검액은 인삼을 패턴 88%를 홍삼제품이 점유하고 있고, 수출품도 백삼보다 월 분석의 기본으로 하여 분석하기 위하여 표준삼의 농도와 사용되고 있는데, 특히 홍삼은 열 자극에 의해 생성되는 특유 성분인 ginsenoside Rg2, Rg3, Rh1, 그리고 Rh2 등 이 암 예방20), 암세포 성장억제21), 혈압 강하 작용22) 등이 있 등히 많은 수입을 올리고 있는 고부가가치 상품이다23). Fig. 2. The shape of red wild ginseng. 이에 저자는 인삼보다 효능이 우수하다고 추정되는 산 유사하도록 7-13mg /ml의 농도가 되도록 검액을 제조하 여 분석하였다. Instrument Pump Varian 는지를 알아보고자 본 연구를 시도하였다. 산양산삼의 증 회수에 따른 홍산삼을 비교 분석한 결과 유의한 결론을 얻 었기에 보고하는 바이다. II. 방법 1. 재료 9012 solvent Delivery System, Co. Detector VIS Column m ), 2. H P L C를 이용한 인삼, 홍삼, 산양산삼 그리고 Table 2. HPLC condition for analysis of Rg1 and R b1. Autosampler 건 과정에서 나타나는 성분변화를 조사하고자 40% Acetonitrile Gradient profiletime(min)% A % B Flow(mL/min) 0 : : : 양산삼을 홍삼화 하여 홍산삼을 만드는 것이 타당성이 있 HPLC (High Performance Liquid Chromatography, 이하 HPLC )를 이용하여 인삼과 홍삼, 산양산삼과 증건 9050 Variable Wavelength UVDetector, Varian Co Autosampler, Varian Co. Capcell Pak C1 8( m m: 5μ Shiseido Co. 홍산삼의 성분분석 Operating condition 1) 실험기기 및 시약 Rotaty vacuum evaporeator는 Eyela Tokyo Co.의 농축기를 사용하였고, 분석용 HPLC로는 Varian 9012 solvent Delivery System, 검출기는 Varian Variable Wavelength 9050 UV-VIS detector, 그리고 Autosampler 는 Varian 9300을 사용하였다. AcCN, MeOH등의 분 석시약은 모두 HPLC용 시약을 사용하여 측정하였으며, 추출 및 분획용 용매는 모두 표준품을 사용하여 실험하였다. UV Absorbance n m Column temp. 4 0 Injection vol. 2 0 Mobile phase A 15% Acetonitrile Mobile phase B 80% Acetonitrile Fig. 3. Manufacturing process of crude saponin by extraction and fraction. 89 Gradient profiletime(min)% A % B Flow(mL/min) 0:

90 대한약침학회지제 11 권제 2 호 (2008 년 6 월 ) 5) 검량선의작성표준품 ginsenoside Rg3와 ginsenoside Rh2는 500, 200, 100, 80, 50, 20μg/mL농도로희석하여분석하였고, ginsenoside Rg1과 ginsenoside Rb1은 1000, 500, 400, 300, 200, 100,

Function R 2 Fig. 7. Calibration curve of III. 결과 1. 각시료의회수율 Fig. 8. Calibration curve of Ginsenoside-Rg3 y=0.0003x -0.9763 0.9999 Ginsenoside-Rh2 y=0.0003x -0.074 1 Ginsenoside-Rg1 y=0.0004x -0.

4 90 대한약침학회지제 11 권제 2 호 (2008 년 6 월 ) 5) 검량선의작성표준품 ginsenoside Rg3와 ginsenoside Rh2는 500, 200, 100, 80, 50, 20μg/mL농도로희석하여분석하였고, ginsenoside Rg1과 ginsenoside Rb1은 1000, 500, 400, 300, 200, 100, 50μg/mL농도로희석하여분석하였다 (Fig. 4). 여기에서얻은주성분에대한피크면적비 (X축) 와표준품농도 (Y축) 에대한검량선을각각작성하였다. 검량선의그래프는 Fig. 5-8과같고, 각ginsenoside 류의검량선의함수와상관계수 R값은 Table 3에제시하였다. Table 3. Function and R value of ginsenosides. Function R 2 Fig. 7. Calibration curve of III. 결과 1. 각시료의회수율 Fig. 8. Calibration curve of Ginsenoside-Rg3 y=0.0003x Ginsenoside-Rh2 y=0.0003x Ginsenoside-Rg1 y=0.0004x Ginsenoside-Rb1 y=0.0005x 각종삼류에대한수종의 ginsenoside함량을분석하기위하여인삼과홍삼그리고산양산삼및홍산삼에서사포닌주성분을함유한 80% MeOH extract와 n-buoh extract를제조한결과얻어진수율은 Table 4와같았다. 각각의수율은 11회증건한홍산삼 > 홍삼 >9회증건한홍산삼 > 산양산삼 > 인삼의순으로나타내었다. 동일한방법으로인삼을쪄서말린홍삼이산양산삼을쪄서말린홍산삼보다수율이높은이유는인삼은쉽게蒸乾이되면서 9회에이르면흑삼의형태까지변화되지만산양산삼은껍질이두꺼워쉽게수분을소실하지않고본래의형태를잘유지하면서홍삼의색깔을나타내는형태학적차이에서그이유를설명할수있을것으로생각되었다. Table 4. Yield of 80 % MeOH extraction and n-buoh fraction Sample Total weight 80% MeOH n-buoh (g) extract-g(%) extract-g(%) Fig. 4. Chromatogram of standard ginsenosides. 1. Cultivated ginseng (9.79) 0.87(0.80) 2. CWG 10y (16.70) 0.90(2.04) 3. Red Ginseng 9th* (26.05) 1.28(4.93) 4. RWG 9th (20.09) 4.01(3.93) 5. RWG 11th (65.37) 0.75(5.10) * 9th means 9 times repeat the process of steaming and drying for making red ginseng or red wild ginseng(rwg). Fig. 5. Calibration curve of ginsenosides Fig. 6. Calibration curve of ginsenosides

5 HPLC 를이용한인삼, 홍삼, 산양산삼및홍산삼의성분비교분석 Ginsenoside Rg3 함량비교분석 Ginsenoside Rg3의검량선에의해인삼과홍삼그리고산양산삼과홍산삼의함량분석을실시하였다. 그결과인삼과산양산삼에서는 ginsenoside Rg3가검출되지않았고, 9증한홍삼과홍산삼에는 ginsenoside Rg3가함유되어있었으나 0.380mg/g을나타낸홍산삼에비하여홍삼이 0.797mg/g을나타내어인삼이산양산삼보다증건과정에서더욱많은ginsenoside Rg3가생성되었음을알수있었다 (Fig. 9). Rg1이증가되었지만산양산삼은오히려줄어듦을알수있었다 (Fig. 11). Fig. 10. Content of ginsenosides Rh2 in various ginsengs. Red ginseng and red wild ginseng(rwg) are 9 times repeat the process of steaming and drying to used cultivated ginseng and Fig. 9. Content of ginsenosides Rg3 in various ginsengs. Red ginseng and red wild ginseng(rwg) are 9 times repeat the process of steaming and drying to used cultivated ginseng and 3. Ginsenoside Rh2 함량비교분석 Ginsenoside Rh2의검량선에의해인삼과홍삼그리고산양산삼과홍산삼의함량분석을실시하였다. 그결과인삼에서는 ginsenoside Rh2가검출되지않았고, 홍삼에서는 0.011mg/g이함유되어있었고, 산양산삼에는 0.018mg/g, 홍산삼은 0.102mg/g을나타내어인삼과산양산삼모두증건과정에서 ginsenoside Rh2가생성되었고, 특히산양산삼은더욱많이생성됨을알수있었다 ( Fig. 10). Fig. 11. Content of ginsenosides Rg1 in various ginsengs. Red ginseng and red wild ginseng(rwg) are 9 times repeat the process of steaming and dryingto used cultivated ginseng and 5. Ginsenoside Rb1 함량비교분석 4. Ginsenoside Rg1 함량비교분석 Ginsenoside Rg1의검량선에의해인삼과홍삼그리고산양산삼과홍산삼의함량분석을실시하였다. 그결과인삼에서는 0.66mg/g이, 홍삼에서는 1.25mg/g이함유되어있었고, 산양산삼에는 2.55mg/g, 홍산삼은 2.02mg/g을나타내어인삼은증건과정에서 ginsenoside Ginsenoside Rb1검량선에의해인삼과홍삼그리고산양산삼과홍산삼의함량분석을실시하였다. 그결과인삼에서는 0.75mg/g이, 홍삼에서는 3.81mg/g이함유되어있었고, 산양산삼에는 3.36mg/g, 홍산삼은 4.21mg/g 을나타내어인삼은증건과정에서 ginsenoside Rb1이 5 배가량증가되었고, 산양산삼은약 30% 가량증가되었음을알수있었다 (Fig. 12).

6 92 대한약침학회지제 11 권제 2 호 (2008 년 6 월 ) Fig. 12. Content of ginsenosides Rb1 in various ginsengs. Red ginseng and red wild ginseng(rwg) are 9 times repeat the process of steaming and drying to used cultivated ginseng and 6. 증건의횟수가산양산삼의 ginsenoside 함량에미치는영향 Ginsenoside Rh2와 Rg3 그리고 Rg1과 Rb1의검량선에의해산양산삼과 9회, 그리고 11회증건한홍산삼의함량을비교분석하였다. 그결과Table 5에서제시한것처럼횟수가증가할수록 ginsenoside Rg3는증가하였고, ginsenoside Rh2와 Rb1은처음에는증가하다가 9회가넘어가면서오히려감소하였으며, ginsenoside Rg1은홍삼화과정에의해횟수가늘어날수록점차줄어드는경향이있음을알수있었다 (Table 5, Fig. 13). Table 5. The variation of ginsenoside s contents to the process of steaming and drying in IV. 고찰 Rg3 Rh2 Rg1 Rb1 (mg/g) (mg/g) (mg/g) (mg/g) C W G Not detected RWG 9th RWG 11th 인삼은파낙스 (Panax) 속에속하는다년생식물로, 한국한의학이나중의학에서가장많이사용하는대표적인보기제중의하나이다. Panax속식물은분류학상오가과 (Araliaceae) 에속하는다년생식물로서지구상에십여종이알려져있다. 대표적인종으로고려삼 ( Panax ginseng, C. A. Meyer), 서양삼 (Panax quinquefolia, L), 전칠삼 (Panax notoginseng), 죽절삼 (Panax japonica), 삼엽삼 (Panax trifolia), 히말라야삼 (Panax pseudoginseng, var), 베트남삼 (Panax vietnamensis) 등이있다 11). 인삼의효능에관한연구는 Brekhman 등 24) 이인삼의사포닌이인체의비특이적저항성을증가시킨다고보고한후, Shibata 등 25) 이 Panax ginseng, C. A. Meyer, Panax quinquefolia, L, Panax pseudoginseng, var 와 Panax japonica 등을대상으로 TLC에의해사포닌의이동pattern에따른ginsenosides의이름을붙인결과를발표한것이계기가되어인삼사포닌에대한연구가활발하게진행되어왔다. 홍삼은인삼을증숙, 건조하여만들어지는인삼의가공품으로홍삼이라고불리는이유는인삼의증건과정에서나타나는특유의갈색때문에붙여진이름이다. 홍삼은열자극에의해생성되는특유성분인 ginsenoside Rg2, Rg3, Rh1 그리고 Rh2 등이암예방 20), 암세포성장억제 21), 혈압강하작용 22) 등이있다고알려져있고, 우수한효능이나복용의편리성등으로국내 외에서가장많은수익을올리고있는인삼가공제품이다. 홍삼이갈색을띄는이유는증건의특이성때문에일어나는비효소적갈변반응이라고추측되며, 김 26) 은 aminocarbonyl 반응과 polyphenol의자동산화가주원인이라고추정하였다. 산양산삼은천연산삼의종자나어린삼, 혹은인삼을수대에걸쳐산에서재배한삼으로최근이에대한가치가재조명되면서표준화연구, 효능연구등이활발하게진행되고있다 10-19). 이에저자는산양산삼을홍삼화하였을때어떠한성분변화를나타내는지를알아보고자본연구를시도하였다. 연구방법으로는인삼과산양산삼을원재료로하여동일한방법으로전통적인증삼과건조의과정을통하여홍삼과홍산삼을제조하였다. 먼저찜통에소량의물을넣고잘씻은인삼과산양산삼을각각 2시간증기에찐후陰乾하는것을하나의증건과정으로하여총 9회의과정을동일하게반복하였다. 그결과인삼은 4-5회부터홍삼의색

HPLC 를이용한인삼, 홍삼, 산양산삼및홍산삼의성분비교분석 93 깔을나타내었으나산양산삼은 7-9회의단계에서인삼과같은색깔을나타내었고, 인삼을 9회반복하였을때에는거의흑삼에가까운형태로색상의변화를나타내었다. 이는인삼이산양산삼에비하여열에쉽게반응하고변화함을의미하는데아마도껍질의두께나구조에서산양산삼에비하여약하기때문이아닌가추정되었다.

7 HPLC 를이용한인삼, 홍삼, 산양산삼및홍산삼의성분비교분석 93 깔을나타내었으나산양산삼은 7-9회의단계에서인삼과같은색깔을나타내었고, 인삼을 9회반복하였을때에는거의흑삼에가까운형태로색상의변화를나타내었다. 이는인삼이산양산삼에비하여열에쉽게반응하고변화함을의미하는데아마도껍질의두께나구조에서산양산삼에비하여약하기때문이아닌가추정되었다. 증건의과정이산양산삼의성분에어떠한변화를나타내는지를알아보기위하여산양산삼은 9회와 11회로나누어시료를준비하였다. 이후각종삼류에대한수종의 ginsenoside 함량을분석하기위하여인삼과홍삼그리고산양산삼및홍산삼에서사포닌주성분을함유한 80% MeOH extract와 n-buoh extract를제조한결과얻어진수율은 11회증건한홍산삼 > 홍삼 >9회증건한홍산삼 > 산양산삼 > 인삼의순으로나타내었다. 사포닌제조방법 27) 에따라분획물을제조한후홍삼이나산삼에서소량으로존재하는것으로알려진 28) 비극성사포닌인 ginsenoside Rg3와 ginsenoside Rh2 29) 를비교하여분석조건에따라비극성사포닌류의패턴을분석하였다. 또한극성사포닌류의주성분인 ginsenoside Rb1과 ginsenoside Rg1의패턴분석을 HPLC를이용하여측정, 비교분석하였다. ginsenoside Rg3를분석한결과인삼과산양산삼에서는 ginsenoside Rg3가검출되지않았고, 9증한홍삼과홍산삼에는 ginsenoside Rg3가함유되어있었으나홍산삼에비하여홍삼이더욱많은함량을나타내어인삼이증건과정에서더욱많은 ginsenoside Rg3가생성되었음을알수있었다. ginsenoside Rh2를분석한결과인삼에서는함유되어있지않았으나홍삼에서는미량검출되어증건과정에서생성됨을알수있었고, 산양산삼은증건과정에서인삼에비하여많이생성됨을알수있었다. ginsenoside Rg1을분석한결과인삼은증건과정에서 ginsenoside Rg1이증가되지만산양산삼은오히려손실이발생됨을알수있었다. ginsenoside Rb1을분석한결과인삼은증건과정에서 ginsenoside Rb1이 5배가량증가되었고, 산양산삼은약 30% 가량증가되어산양산삼에비하여인삼에서많이증가됨을알수있었다. 증건과정에서어떠한성분변화가나타나는지를알아보고자산양산삼과 9회, 그리고 11회증건한홍산삼의함량을비교분석한결과횟수가증가할수록 ginsenoside Rg3는증가하였고, ginsenoside Rh2와 Rb1은처음에는 증가하다가 9회가넘어가면서오히려감소하였으며, ginsenoside Rg1은홍삼화과정에의해횟수가늘어날수록점차줄어드는경향이있음을알수있었다. 인삼이나홍삼의유효성분과효능에대하여많은연구가시도되고있지만아직까지그실체는규명되지않은것같다. 최근에는인삼에함유되어있는성분중에서가장많은비율을차지하고있는당류에대한관심이높아지고있고, 향기성분또한주목받고있다. 인삼에비하여산양산삼이가지고있는장점을어떠한방법으로극대화할것인가하는문제는고려인삼의위상제고나산양산삼의산업화에도중요한역할을할수있으리라생각되며, 본연구에서시도한산양산삼의홍산삼화도하나의해답이될수있으리라생각된다. 향후이에대한효능평가등이이루어져홍산삼의가능성을보다객관적이고과학적으로평가하길기원한다. V. 결론인삼과산양산삼을원료로하여홍삼과홍산삼을만든후 HPLC를이용하여분석한결과다음과같은결론을얻었다. 1. 인삼에비하여산양산삼은비교적열에강한특성을나타내었다. 2. Ginsenoside Rg3는인삼과산양산삼에서는검출되지않았으나홍삼과홍산삼에는검출되었고, 인삼이산양산삼에비하여증건과정에서더욱많이생성됨을알수있었다. 3. Ginsenoside Rh2를분석한결과인삼은증건과정에서 0.01mg/g 생성되었고, 산양산삼은증건과정에서 0.09mg/g 생성되는특징을나타내었다. 4. Ginsenoside Rg1을분석한결과인삼은증건과정에서 mg/g 증가되었지만산양산삼은오히려 0.6mg/g 줄어들었음을알수있었다. 5. Ginsenoside Rb1을분석한결과인삼은증건과정

8 94 대한약침학회지제 11 권제 2 호 (2008 년 6 월 ) 에서 5배가량증가되었고 (0.75mg/g 3.81mg/g), 산양산삼은약 30% 가량증가 (3.36mg/g 4.21mg/g) 되어산양산삼에비하여인삼에서많이증가됨을알수있었다. 6. 산양산삼의증건과정에서어떠한성분변화가나타나는지를알아보고자 9회, 11회증건한홍산삼의함량을비교분석한결과횟수가증가할수록 ginsenoside Rg3는증가하였고, Rg1은감소하였으며 Rh2와 Rb1은처음에는증가하다가 9회가넘어가면서오히려감소하는경향을나타내었다. VI. 참고문헌 1. 신순식. 산삼감정기준의객관성. 한의학연구소동의한의연제 5집. 2001; 전국한의과대학본초학교수공편저. 본초학. 영림사. 1994; 이상인. 한약임상응용. 성보사. 1982; 하대유. 인삼에대한세포학및면역학적연구. 대한면역학회지. 1979;1(1): 山田昌之. 朝鮮人蔘의硏究. 日本藥理學會誌. 1955;51: Brekhman. I.I, Panax ginseng, Gosudarst Isdat et Med, Lit. Leningard, 1957;1. 7. 최진호. 인삼의신비, 서울, 교문사, 1984; 남기열. 최신고려인삼, 천일인쇄소, 1996; Takagi, K, Proceedings International Ginseng Symposium, The Central Research Institute, Office of Monopoly, Seoul, Korea, p.119, 권기록, 서정철. 산삼과장뇌삼중고려삼과서양삼의 Pyrosequencing법에의한감별. 대한본초학회지. 2004;19(4): 한영주, 권기록, 차배천, 권오만. 인삼과산양삼, 산삼의 HPLC를이용한부위별성분분석. 대한약침학회지. 2007;10(1): 위종성, 박희수, 권기록. 인삼과산양삼및산삼의부위별 proteom 분석. 대한약침학회지. 2007;10(2): 안영민, 박희수, 권기록. 산삼과산양삼추출물의항 암및항산화효능. 대한약침학회지. 2007;10(1): 민병일, 김호연, 서일복, 권기록. 산양산삼추출액의항암효과및 doxorubicin에의한고환독성방어효과. 대한약침학회지. 2007;10(1): 김형석, 박희수, 권기록. HepG2 세포의산화적손상에대한산삼추출물의보호효과. 대한약침학회지. 2007;10(1): 권기록, 윤휘철, 김호연. B16/F10세포를이식한 C57/BL6생쥐에서산삼약침의항암효과및 Doxorubicin에의한생식독성완화효과. 대한침구학회지. 2006;23(1): 임세영, 이수진, 권기록. 산삼약침이 Colon26-L5 암세포주를이용한간전이모델의항암및면역증진에미치는영향. 대한침구학회지. 2006;23(1): 조병준, 권기록. Colon26-L5 대장암세포를이용한간전이모델에산삼약침처치가혈중 cytokine에미치는영향. 대한약침학회지. 2006;9(1): 이동희, 권기록. 산양산삼증류약침의혈맥주입후나타나는혈장의 Proteom분석. 대한약침학회지. 2006;9(2): Keum, YS., Park, KK., Lee, JM., Chun, KS., Park, JH., Lee, SK., Kwon, H. and Su고, YJ. Antioxident and anti-tumor promoting activities of the methanol extract of heatprocessed ginseng. Cancer Lett., 1999;150: Kim, SE., Lee, YH., Park, JH. and Lee, SK. Ginsenoside-Rs3, a new diol-type ginseng saponin, selectively elevates protein levels of p53 and p21waf1 leading to induction of apoptosis in SK-HEP-1 cells, Anticancer Res., 1999;19: Kim WY., Kim, JM., Han, SB., Lee, SK., Kim, ND., Park, MK., Kim, CK. and Park, JH. Steaming of ginseng at high temperature enhances biological activity. J. Nat. Prod. 2000;63: 손창규, 유사라. 한의계의한국인삼세계화노력제고를위한국내외의시장분석연구. 대한한의학회지. 2007;28(3):

9 HPLC 를이용한인삼, 홍삼, 산양산삼및홍산삼의성분비교분석 Brekhman, I.I. and Dardymov, I.V. New substances of plant origin which increase nonspecific resistance. Ann Rev. Pharmacol. 1969;9: Shibata, S., Tanaka, O., Soma, K., lita, Y., Ando, T. and Nakamura, H. Studies on saponins and sapogenins of ginseng. The structure of panaxatriol. Tetrahedron Lett.,1965;3: Kim, DY. Studies on the browning of red ginseng. J. Korean Agri, Chem. Soc. 1973;16: Ko, S. R., Choi, K. J., Kim, S. C. and Han, K. H. Content and composition of saponin compounds of Panax species. Korean J. Ginseng Sci. 1995;19: Morita, T. Chemical studies on Panax genus plants grown in Asia. Hiroshima univ. Doctoral Thesis, 1986; Fuzzati, N., Gabetta, B., Jayakar, K., Pace, R. and Peterlongo, F. Liquid chromatographyelectrospray mass spectrometric identification of ginsenosides in Panax ginseng roots. J. Chromatogr., 1999;854:69-79.

063~078 인삼

063~078 인삼 ginsenoside 63 DOI : 10.3831/KPI.2010.13.1.063 ginsenoside Received : 10. 01. 25 Accepted : 10. 02. 25 Key Words: ginsenoside, cultivated wild ginseng, wild ginseng, cultivated ginseng, HPLC Component