본초학표지

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단율 황
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1 大韓本草學會誌제 31 권제 2 호 (2016 년 3 월 ) Kor. J. Herbol. 2016;31(2):13-19 ISSN (Print), ISSN (Online) LDL Receptor Knockout Mouse 에서부추추출물의죽상경화증예방효과 권오준 1#, 이주영 2, 노성수 2* 1 : 대경지역사업평가원경북지역산업평가단, 2 : 대구한의대학교한의과대학본초약리학교실 Prevention effect of Allium tuberosum extract on ateriosclerosis in LDL Receptor Knockout Mouse OJun Kwon 1#, JooYoung Lee 2, Seong-Soo Roh 2* 1 : Gyeongbuk Regional industry Evalution, Daegyeong Institute for Regional Program Evalution, Republic of Korea 2 : College of Korean Medicine, Daegu Hanny university, Republic of Korea ABSTRACT Objectives : The present study was designed to evaluate the protective effect of Allium tuberosum (AT) extract on atherosclerosis in LDL receptor knockout (LDLr KO) mouse fed western diet. Methods : The AT was extracted 70% ethanol. The experimental groups were divided with four groups of LDLr KO mice, one group fed a normal diet and the others fed a Western diets for 8weeks. Two Western diet groups were orally administered AT extract at dosage of 100 and 300 mg/kg body weight. The body weight and food intake were measured every day. We measured levels of alanine aminotransferase (ALT), aspartate aminotransferase (AST), triglyceride (TG), total cholesterol (TC), high-density lipoprotein (HDL), low-density lipoprotein (LDL), and Glucose in serum. Also, effect of AT extract performed using H&E staining. Results : The AT treatment groups showed decrease in body weight and food efficiency in comparison with control group. Blood biochemistry parameters such as TG, TC, LDL, and glucose levels were increased in control group, while AT treatment groups were reduced. Also, the increased levels of ALT and AST were improved by AT extract. We confirmed that the weights of liver, kidney, subcutaneous fat, epididymal fat, kidney leaf fat, and intraabdominal fat were change in LDLr KO mice treated AT extract. In addition, histopathological changes in liver and aorta were similar to normal group. Conclusions : Based on these results, the AT extract is considered to make prevention of atherosclerosis through reduction and functional improvement of the liver and vascular endothelial cells in the body fat accumulation and lipid content in LDLr ko mouse model. Key words : Allium tuberosum, atherosclerosis, LDL receptor knockout mouse 서론 1) 최근들어우리나라에서도육류등동물성식품및고열량, 고지방식의섭취량증가, 비만, 음주와흡연, 불규칙한식습관등에의해죽상경화증, 뇌질환등혈행저해질환의발생이증가하고있는추세이다 1,2). 혈중총콜레스테롤이나중성지방등은인체의기능을유지하는데필수적인구성성분 이나지방농도가높은상태로지속되는경우심혈관계질환등의원인이되어혈전관련질환이발병된다. 이들은혈관내피의손상과함께동맥벽의기능이상을초래하여그증상을더욱뚜렷이하는것으로보고되었다. 혈관내피의손상은혈전형성이수반되고여기에콜레스테롤을많이함유하고있는 LDL (low density lipoprotein) 등의침착과, 대식세포에의 *Corresponding author : Seong-Soo Roh. College of Korean Medicine, Daegu Hanny university, Republic of Korea Tel : Fax : ddede@dhu.ac.kr #First author : O Jun Kwon, Gyeongbuk Regional industry Evaluation, Daegyeong Institute for Gegional Program Evalution, 27, Sampung-ro, Gyeongsan-si, Gyeongsangbuk-do, Korea Tel : Fax : gbria@hanmail.net Received:25 January 2016 Revised:25 March 2016 Accepted:25 January 2016

2 14 大韓本草學會誌 Vol. 31 No. 2, 2016 해만들어지는활성산소에의한 LDL의산화는혈관질환의발생을더욱촉진하는것을알려져있다 3). 부추 (Allium tuberosum Rottler.) 는백합과에속하는다년생초본으로부추의잎을구채 ( 韭菜 ) 라하며性味가溫辛하고, 肝胃腎經에歸經하여溫中, 行氣하며散血하고解毒하는효능이있어反胃, 吐血, 衄血, 尿血, 痢疾, 消渴, 痔漏, 脫肛, 打撲傷, 蟲蝎咬傷등에사용되고있다. 특히胸痺로가슴이송곳으로찌르는듯이몹시아프고몸을굽혔다폈다할수없고식은땀이나는증상에사용된다. Allium 속에속하는마늘, 양파와마찬가지로항암, 항균, 항산화효과등생리적기능뿐만아니라溫中, 下氣, 行氣, 産血, 利尿, 强心, 解毒등의효능이있는것으로알려져있다 4-6). 또한부추는 flavonoid 화합물과 beta-carotene 및식이성페놀인 beta-sitosterol, quercetin, phenolic acid와 kaemperol 등을함유하고있으며부추의식이성페놀은 LDL 산화저해능이높다는연구가보고되었다. 이외에도부추잎에서추출한 purine nucleoside인 adenosine에관한항혈전연구가보고되어있다 7-10). 따라서본연구에서는 LDL receptor knock out (LDLr KO) 마우스모델을이용하여부추추출물의경구투여가죽상경화증의예방효과에미치는영향을살펴보았다. 재료및방법 1. 실험동물모든실험은대전대학교동물실험윤리위원회의승인 (DJUARB ) 을얻어시행하였으며동물관리규정을준수하였다. LDLr KO 마우스 6주령수컷을 Jackson Lab. (( 주 ) 중앙실험동물, 서울 ) 에서분양받아 1주일동안실험실환경에적응시킨후실험에사용하였다. 동물사육실의조건은 conventional system으로온도 22 ± 2, 습도 50 ± 5 %, 명암주기 (light : dark cycle) 는 12시간주기로조절하였다. 사료는고형사료 ( 조단백질 22.1 % 이상, 조지방 8.0 % 이하, 조섬유 5.0 % 이하, 조회분 8.0 % 이하, 칼슘 0.6 % 이상, 인 0.4 % 이상, 삼양사, 항생제무첨가 ) 와물을충분히공급하였다. 2) 죽상경화증동물모델에서의효능평가 (1) LDLr KO 마우스를이용한죽상경화증모델및약물투여 1주간적응기간을거친 LDLr KO 마우스에 2주간 AIN-76A diet 사료 (protein 20.8 %, carbohydrate 67.7 %, fat 11.5 %) 에적응시킨후실험동물을정상군 (NOR), 대조군 (CON), 부추추출물 100 mg/kg body weight 투여군 (AT100), 부추추출물 300 mg/kg body weight 투여군 AT300) 으로군분리하여실험에사용하였다. 군분리후정상군에는기본사료를, 대조군및약물투여군에는 Western diet (D12079B, Research Diets Inc, New Brunswick, NJ) 를 8주간공급하였다 (Table 1). Western diet 사료 (protein 20 %, carbohydrate 50 %, fat 21 %) 를공급하여약물투여군은각각 100, 300 mg/kg body weight 의농도로 8주간투여하였다. 식이섭취량및체중은매주일정한시간에측정하였으며, 식이효율 (food efficiency ratio, FER) 은식 (a) 에따라계산하여산출하였다. 식 (a) FER (%) = [Total weight gain / Total food intake ] 100. Table 1. Western diet formula Product # D12079B gm% kcal % Protein Carbohydrate Fat Total 100 Kcal/gm 4.7 Ingredient gm kcal Casein, 80Mesh DL-Methionine 3 12 Corn Starch Maltodextrin Sucrose Cellulose 50 0 Milk Fat, Anhydrous Corn Oil Mineral Mix S Calcium Carbonate 방법 1) 시료추출충남금산군추부면에서생산된신선부추 Allium tuberosum (AT) 를 10kg 구매하여건조하였다. 건조한 500g을한일분쇄기 (FM-700SS, 한국 ) 로분쇄하여환류추출기 (heating Mantle, MS-DM609/20L) 에넣고 45 에서 70 % 에탄올을 2 L 가하여 60분추출한후다시 70 % 에탄올 2 L를가하여같은조건으로 60분동안재탕하였다. 그후감압증류기 (N-1200A, EYELA. CO. LTD, Japan) 를이용하여유기용매를제거하는농축과정을거치고, 동결건조기 (PF-10/ALPHA 1-2LD, Germany) 를통하여건조된부추 70 % EtOH 추출물 (11.8g) 을얻었다. Vitamin Mix V Choline Bitartrate 2 0 Cholesterol, USP Ethoxyquin Total (2) LDLr KO 죽상경화증마우스의조직및지방무게측정실험이끝난동물은희생 3시간전절식시킨후각실험동물의간, 신장조직및피하 (subcutaneous), 부고환 (epididymal), 신장주변 (kidney leaf), 내장 (intraabdominal) 의지방조직을혈액채취후부위별로즉시적출하여무게를측정하였다.

LDL Receptor Knockout Mouse 에서부추추출물의죽상경화증예방효과 15 (3) LDLr KO 죽상경화증마우스의혈장내지질함량의지표측정실험종료후실험동물은희생 3시간전절식시킨후혈액을채취하여 30분이내에 3,000 rpm, 4 에서 15분간원심분리하여혈장 (plasma) 을분리하여 -70 에보관하였다가분석하였다.

3 LDL Receptor Knockout Mouse 에서부추추출물의죽상경화증예방효과 15 (3) LDLr KO 죽상경화증마우스의혈장내지질함량의지표측정실험종료후실험동물은희생 3시간전절식시킨후혈액을채취하여 30분이내에 3,000 rpm, 4 에서 15분간원심분리하여혈장 (plasma) 을분리하여 -70 에보관하였다가분석하였다. 분리한혈장 (plasma) 에서지질함량의지표인총콜레스테롤 (total cholesterol, TC), High-density lipoprotein (HDL), 중성지방 (triglyceride, TG), 혈당 (glucose) 의함량을생화학자동분석기 (Hitachi-720, Hitachi Medical, Japan) 를이용하여측정하였다. Low-density lipoprotein (LDL) 의수치는 Iranian (2008) Formula for LDL Cholesterol을이용하여계산하였다. AT300 투여군에서체중감소를경향을관찰할수있었다 (Fig. 1). 식이효율 (FER, %) 은 western diet를먹인대조군 (5.45 ± 1.08 %) 이일반식이를한정상군 (3.92 ± 0.55 %) 에비하여증가하였으며 AT100 투여군과 AT300 투여군의식이효율이대조군에비하여감소하는경향을보였다 (Fig. 2). (4) LDLr KO 죽상경화증마우스의혈장내간기능지표측정실험종료후각실험동물로부터분리한혈장 (plasma) 에서간기능의지표인 ALT 및 AST를생화학자동분석기 (Hitachi-720, Hitachi Medical, Japan) 를이용하여측정하였다. (5) LDLr KO 죽상경화증마우스의간의조직병리학적변화간조직에서의조직병리학적관찰을수행하기위해간조직을절취하여 10 % neutral buffered formalin에 24시간동안고정시킨다음 graded alcohol 로탈수시키고파라핀으로포매하여 block을제작한다음 microtome 으로 4 μm두께의조직절편을제작하여 hematoxylin & eosin (H&E) 염색을시행한뒤광학현미경위에서특이병변의유무를관찰하였다. Fig. 1. Effect of Allium tuberosum extract on body weight in LDLr KO mice. AT100, Allium tuberosum extract 100mg/kg body weight treated LDLr KO control mice; AT300, Allium tuberosum extract 300 mg/kg body weight treated LDLr KO control mice. All data are expressed means ± SEM, n = 6 mice per group. Results were assessed by one-way ANOVA followed by Tukey Multiple Comparison test ( a,b p < 0.05). (6) LDLr KO 죽상경화증마우스의동맥의조직병리학적변화동맥에서의조직병리학적관찰을수행하기위해동맥을절취하여 10 % neutral buffered formalin 에 24시간동안고정시킨다음 graded alcohol 로탈수시키고파라핀으로포매하여 block을제작한다음 microtome 으로 4 μm두께의조직절편을제작하여 H&E 염색을시행한뒤광학현미경위에서특이병변의유무를관찰하였다. 혈관내막비후도측정은 I-Solution lite (Innerview Co., 한국 ) 프로그램을이용하였다. 3) 통계처리모든수치는평균 ± 표준오차 (Mean ± SE) 로표시하였으며, SPSS (22.0 for Windows program) 을사용하여 one-way analysis of variance (ANOVA) test를실시한후 Tukey Multiple Comparison test로사후검증을실시하여군간의유의성을측정하였다. 유의수준 p-value < 0.05에서검정하였다. 결과 1. 체중과식이효율의변화 8주간에걸쳐실험한결과대조군에비해 AT100 투여군과 Fig. 2. Effect of Allium tuberosum extract on food efficiency ratio (FER) in LDLr KO mice. AT100, Allium tuberosum extract 100mg/kg body weight treated LDLr KO control mice; AT300, Allium tuberosum extract 300 mg/kg body weight treated LDLr KO control mice. All data are expressed means±sem, n=6 mice per group. Results were assessed by one-way ANOVA followed by Tukey Multiple Comparison test. 2. 조직과지방무게변화 실험결과간과신장조직무게는정상군에비해대조군에서유의성있는증가를보였지만 (p < 0.05), AT100, 300 투여군은대조군에비해감소하는경향을보였다. LDLr KO 마우스의부위별지방무게측정결과피하지방무게는대조군이정상군에비해 77 % 증가하였고 (p < 0.05), AT100과 AT300 투여군은대조군에비해각각 35.9 % 와 62.5 % 감소하였다 (p < 0.05). 부고환지방무게는대조군이정상군에비해 76.4 % 증가하였고 (p < 0.05), AT300 투여군은대조군에비해유의성있게감소하였다 (p < 0.05). 신장주변지방무게는대조군이정상군에비해 56.8 % 증가하였고

16 大韓本草學會誌 Vol. 31 No. 2, 2016 (p < 0.05), AT100과 AT300 투여군은대조군에비해각각 48.6 % 와 64.9 % 의유의성있는감소를나타내었다 (p < 0.05). 내장지방무게는대조군이정상군에비해 57.1% 증가를보였고 (p < 0.05), AT100과 AT300 투여군은대조군에비해각각 25.7 % 와 51.

06 a Kidney 0.20 ± 0 b 0.36 ± 0.03a 0.29 ± 0.03ab 0.28 ± 0.01 ab Subcutaneous fat 0.29 ± 0.02 b 1.28 ± 0.22a 0.82 ± 0.09ab 0.48 ± 0.02 b Epididymal fat 0.21 ± 0 b 0.89 ± 0.17a 0.54 ± 0.11ab 0.31 ± 0.

4 16 大韓本草學會誌 Vol. 31 No. 2, 2016 (p < 0.05), AT100과 AT300 투여군은대조군에비해각각 48.6 % 와 64.9 % 의유의성있는감소를나타내었다 (p < 0.05). 내장지방무게는대조군이정상군에비해 57.1% 증가를보였고 (p < 0.05), AT100과 AT300 투여군은대조군에비해각각 25.7 % 와 51.4 % 의감소를나타내었다 (Table 2). Table 2. Effect of Allium tuberosum extract on tissue weight change in LDLr KO mice. Group Nor Con AT100 AT300 Liver 0.67 ± 0.05 b 1.19 ± 0.13 a 1.04 ± 0.08 ab 1.13 ± 0.06 a Kidney 0.20 ± 0 b 0.36 ± 0.03a 0.29 ± 0.03ab 0.28 ± 0.01 ab Subcutaneous fat 0.29 ± 0.02 b 1.28 ± 0.22a 0.82 ± 0.09ab 0.48 ± 0.02 b Epididymal fat 0.21 ± 0 b 0.89 ± 0.17a 0.54 ± 0.11ab 0.31 ± 0.03 b Kidney leaf fat 0.16 ± 0.02 b 0.37 ± 0.06a 0.19 ± 0.02b 0.13 ± 0.01 b Intraabdominal fat 0.15 ± 0.02 a 0.35 ± 0.08a 0.26 ± 0.04a 0.17 ± 0.04 a AT100, Allium tuberosum extract 100 mg/kg body weight treated LDLr KO control mice; AT300, Allium tuberosum extract 300 mg/kg body weight treated LDLr KO control mice. All data are expressed means ±SEM, n=6 mice per group. Results were assessed by one-way ANOVA followed by Tukey Multiple Comparison test ( a,b p <0.05). 3. 간기능지표측정 ALT 측정결과대조군 (62.60 ± IU/L) 은정상군 (23.75 ± 0.83 IU/L) 에비해 62.1 % 증가하였고 AT100 투여군 (14.75 ± 2.80 IU/L, p < 0.05) 과 AT300 투여군 (17.60 ± 1.28 IU/L) 은대조군에비해유의성있는감소를보였다. AST 측정결과정상군 ( ± 8.82 IU/L) 에비해대조군 ( ± IU/L) 이증가하였고 AT100 투여군 (99 ± IU/L) 과 AT300 투여군 (80.40 ± 7.87 IU/L) 은대조군에비해감소하는경향을보였다 (Fig. 3). 였고 AT300 투여군 ( ± mg/dl) 은대조군에비해약 30% 유의성있게감소하였다 (Fig. 4). 2) 중성지방 (TG) 함량혈장내중성지방함량은정상군 ( ± 6.60 mg/dl, p < 0.01) 에비해대조군 ( ± mg/dl) 은유의성있는증가를보였고 AT300 투여군 ( ± mg/dl) 은대조군에비해감소하는경향을보였다 (Fig. 4). 3) 고밀도지단백콜레스테롤 (HDL-cholesterol) 함량 HDL-cholesterol 의측정결과모든군에서개선효과를확인할수없었다 (Fig. 4). 4) 저밀도지단백콜레스테롤 (LDL-cholesterol) 함량대조군 ( ± mg/dl) 은정상군 ( ± mg/dl, p < 0.001) 에비해 LDL-cholesterol 함량이약 893 % 증가하였다. 그러나 AT300 투여군 ( ± mg/dl) 은대조군에비해 40 % 감소하는경향을보였다 (Fig. 4). 5) 혈당 (Glucose) 함량정상군 (109 ± mg/dl, p<0.05) 에비해대조군 ( ± mg/dl) 은유의성있는증가를보였다. 대조군에비해 AT100 투여군 ( ± 4.74 mg/dl) 은감소하는경향을보였고 AT300 투여군 ( ± mg/dl) 은유의성있게감소하였다 (Fig. 4). Fig. 3. Effect of Allium tuberosum extract on ALT and AST in LDLr KO mice. ALT, Alanine aminotransferase; AST, Aspartate aminotransferase. AT100, Allium tuberosum extract 100 mg/kg body weight treated LDLr KO control mice; AT300, Allium tuberosum extract 300mg/kg body weight treated LDLr KO control mice. All data are expressed means ± SEM, n = 6 mice per group. Results were assessed by one-way ANOVA followed bytukey Multiple Comparison test ( a,b p < 0.05). 4. 혈장내지질함량지표측정결과 1) 총콜레스테롤 (TC) 함량 TC 측정결과대조군 ( ± mg/dl, p < 0.001) 은정상군 ( ± mg/dl) 에비해약 329 % 증가하 Fig. 4. Effect of Allium tuberosum extract on blood biochemistry parameters in LDLr KO mice. TC ; Total cholesterol, TG; Triglyceride, HDL; High-density lipoprotein, LDL; Low-density lipoprotein AT100, Allium tuberosum extract 100mg/kg body weight treated LDLr KO control mice; AT300, Allium tuberosum extract 300 mg/kg body weight treated LDLr KO control mice. All data are expressed means ± SEM, n = 6 mice per group. Results were assessed by one-way ANOVA followed bytukey Multiple Comparison test ( a,b,c p < 0.05). 5. 간의조직병리학적변화 간조직의개선활성을직접적으로확인하고자간조직고정후 H&E 염색을하였다. 정상군의간조직 (A) 에서는간세포가정상적인형태를이루고있지만대조군 (B) 에서정상군에비해간조직에서지방조직의축적과지방방울 (fat droplets) 의수가크게증가하였음을관찰할수있었다. 약물투여군에서는지방방울과지방조직의축적정도가감소하는것을관찰하였고, 특히 AT300 투여군은정상군과유사한모습을보였다 (Fig. 5).

LDL Receptor Knockout Mouse에서 부추추출물의 죽상경화증 예방 효과 17 고 찰 Fig. 5. Effect of Allium tuberosum extract on liver histological profiles in LDLr KO mice.

mg/kg body weight treated LDLr KO control mice. (n = 6) The black arrows were means lipid drop and hepatocyte injury. (Original magnification 50), n = 6 mice per group. 6. 동맥의 조직병리학적 변화 동맥의 개선을 직접 확인하고자 H&E 염색을 실시하였다.

. Fig. 6. Effect of Allium tuberosum extract on aorta histological profiles in LDLr KO mice. mg/kg body weight treated LDLr KO control mice; (E) Thickness of aorta.

5 LDL Receptor Knockout Mouse에서 부추추출물의 죽상경화증 예방 효과 17 고 찰 Fig. 5. Effect of Allium tuberosum extract on liver histological profiles in LDLr KO mice. (A) Nor, LDLr KO mice; (B) Con, LDLr KO control mice fet Western diet; (C) AT100, Allium tuberosum extract 100 mg/kg body weight treated LDLr KO control mice; (D) AT300, Allium tuberosum extract 300 mg/kg body weight treated LDLr KO control mice. (n = 6) The black arrows were means lipid drop and hepatocyte injury. (Original magnification 50), n = 6 mice per group. 6. 동맥의 조직병리학적 변화 동맥의 개선을 직접 확인하고자 H&E 염색을 실시하였다. 대조군의 동맥조직 (B)에서는 혈관 내막의 비후도가 정상군 (A)에 비해 확연히 증가한 것을 관찰 할 수 있었으며, AT100 투여군 (C)과 AT300 투여군 (D)에서는 혈관 내막의 비후도가 감소하는 것을 확인 할 수 있었다. 특히 AT300 투 여군은 정상군과 유사한 모습을 보였다(Fig. 6). Fig. 6. Effect of Allium tuberosum extract on aorta histological profiles in LDLr KO mice. (A) Nor, LDLr KO mice; (B) Con, LDLr KO control mice fet Western diet; (C) AT100, Allium tuberosum extract 100 mg/kg body weight treated LDLr KO control mice; (D) AT300, Allium tuberosum extract 300 mg/kg body weight treated LDLr KO control mice; (E) Thickness of aorta. The black arrows were means thickness of aorta wall and plaque. (Original magnification 50), n = 6 mice per group. Results were assessed by one-way ANOVA followed by Tukey Multiple Comparison test (a,b,cp<0.05). 우리나라에서는 최근 서구화된 식습관과 운동부족으로 인 한 비만 발생이 증가 추세에 있으며 이로 인한 고혈압, 뇌졸 중 및 혈관질환과 같은 심각한 질환의 발생 또한 증가하고 있 다1,2). 죽상경화증이란 주로 혈관의 가장 안쪽을 덮고 있는 내막에 콜레스테롤이 침착하고 내피세포의 증식이 일어난 결 11) 과 죽종 (atheroma)이 형성되는 혈관질환을 말한다. 비만, 당뇨병, 고지혈증 등의 요인들에 의해 동맥벽을 이루는 내막 에 국소적으로 손상이 발생하고 그 결과 내피세포의 기능이상 과 함께 단핵구 (monocyte), T-임파구 (T-lymphocyte), 혈 소판 및 지질단백질 등이 혈관벽에 부착한다. 내피세포 안으 로 유입된 단핵구는 대식세포 (macrophage)로 변형되어 산 화된 LDL을 포함한 지질단백질을 활발하게 탐식하고 내막에 지질함유 대식구가 축적되어 죽상경화증의 초기 단계인 지방 선조 (fatty streak)를 형성한다. 그 후 내막에서 평활근 세포 의 증식 및 활성화가 일어나 죽종판 (atheromatous plaque) 이 형성된다. 이로 인해 혈관 내막의 비후도가 증가하고 혈관 내벽이 좁아지면서 혈류의 흐름이 감소하고 점차 병이 진행되 면서 혈관을 막아 버리는 경우도 발생한다12-16). 부추의 식이성 페놀은 LDL 산화저해능이 높다는 연구와 함께 항혈전 성분으로 부추잎에서 추출한 purine nucleoside 인 adenosine에 관한 연구 보고되었다4-6). 그러나 아직까지 부추추출물이 죽상경화증에 미치는 영향에 대해 연구는 수행 되지 않았기에 LDLr KO 마우스 모델에 부추 추출물을 투여 하여 죽상경화증 예방효과를 조사하였다. LDLr KO 마우스는 정상식이 시에는 죽상경화 병변을 나 타내지 않지만 western diet를 섭취시킬 경우 죽상경화증를 일으키며, apoe-/- 마우스와는 달리 고지질 식이를 할 경우, 사람과 비슷한 유형으로 콜레스테롤 수치가 올라가는 성향을 나타내기 때문에 본 연구에서 LDLr KO 마우스에 21 % fat 을 포함한 Western diet를 8주간 진행하였다17-19). 그 결과 체중과 식이효율 변화에 있어서, 대조군에 비해 약물투여군 모두 체중과 식이효율에 감소하는 경향을 보였다. 실험 그룹 별 간, 신장 및 지방 무게 변화는 정상군에 비해 대조군에서 유의성 있는 증가를 보였다. 간 조직 무게의 증가는 고지방 섭취 시 지방대사가 일어나지만 정상적으로 중성지방이 제거 되지 않아 지방이 쌓이면서 간 조직의 무게가 증가한 것으로 생각된다. 그리고 피하, 부고환, 신장주변 그리고 내장지방의 무게 또한 대조군과 비교하여 약물투여군 모두 지방무게 감소 를 나타내었다. 과다한 지방질의 축적은 혈액순환장애를 일으 키고 이로 인하여 죽상경화증을 초래할 수 있다20-21). 본 연 구에서 실험한 동물들의 혈장 내 지질함량을 살펴보면 정상군 에 비해 대조군의 총콜레스테롤, 중성지방 및 LDL-콜레스테 롤의 함량이 유의적으로 증가하였다. 대조군에 비해 약물투여 군 모두 지질함량이 감소하였지만 특히 AT300 투여군이 AT100 투여군보다 더 큰 감소를 나타내었다. 또한 정상군에 비해 대조군은 혈당 함량이 유의적으로 증가하였으며, 대조군 에 비해 AT300 투여군에서 유의적인 감소를 나타냈다. 이와 같이 체내 지방축적 및 지질함량을 평가한 결과, AT300 투 여는 체내 총콜레스테롤, 중성지방, LDL-콜레스테롤 및 지 방축적을 감소시킴으로써 죽상경화증을 효과적으로 예방할 수 있을 것으로 기대된다. 스트레스, 고지방식이나 알콜로 인하

6 18 大韓本草學會誌 Vol. 31 No. 2, 2016 여간조직에손상이발생하면 ALT와 AST 효소는혈액중그수치가증가한다 22). 간기능의지표로 ALT와 AST를측정한결과, ALT는약물투여군모두대조군에비해감소하였고, AST는약물투여군모두대조군에비해감소하는경향을보였다. 이러한결과부추추출물의투여는간조직의손상을어느정도보호할수있는것으로생각된다. 간과대동맥의조직병리학적변화를확인한결과, 정상군에비해대조군의간조직에서지방방울과지방조직의축적이뚜렷하게나타났으며동맥의경우혈관내막의비후도과확연히증가한것을확인할수있었다. 대조군과비교했을때 AT300 투여군은정상군과유사한모습을보였다. 이러한실험결과와부추의항혈전및높은 LDL 산화저해능 4-6) 을바탕으로부추추출물은 LDLr KO 마우스모델에서체내지방축적및지질함량의감소와간및혈관내피세포의기능적개선을통해죽상경화증을예방할수있을것으로사료된다. 결론 부추추출물을 LDLr KO 마우스모델에경구투여한후, 죽상경화증예방효과를연구한결과는다음과같은결론을얻었다. 1. 체중변화와식이효율측정결과대조군에비해모든투여군에서감소하는경향을보였다. 2. 간및신장조직과내장지방무게를측정한결과모든투여군에서감소하는경향을보였고피하, 부고환, 신장주변지방의경우 AT300 투여군은유의성있게지방무게를감소시켰다 (p <0.05). 3. 간기능지표인 ALT와 AST를측정한결과, ALT의경우모든투여군에서유의성있는감소를보였고 (p < 0.05), AST 측정결과투여군모두에서대조군에비해감소하는경향을나타내었다. 4. 혈장내지질함량을평가한결과, AT300 투여는체내총콜레스테롤과혈당수치를유의적으로감소하였다 (p <0.05). 5. 간조직과대동맥을분석한결과, 대조군의간조직에서지방방울과지방조직의축적을관찰하였으며대동맥의경우혈관내막의비후도과확연히증가한것을확인할수있었다. 대조군과비교했을때 AT300 투여군의간조직과대동맥은정상군과유사한모습을보였다. 따라서부추추출물의투여가죽상경화증에예방효과가있다고사료된다. 감사의글 본연구는한국보건산업진흥원을통해보건복지부 " 양 한방융합기반기술개발사업 " 의재정지원을받아수행된연구입니다 (HI15C0256). References 1. Kim the Korea national health and nutrition examination survey (KNHANES): current status and challenges. Epidemiol Health ; 36 : Kannel WB, Castelli WP, Gordon T, McNamara PM. Serum cholesterol, lipoproteins and the risk of coronary heart disease. The Framingham study. Ann Intern Med ; 74 : Nigel Mackman. Triggers, targets and treatments for thrombosis. Nature ; 451 : Ryu SH. Antioxidative effects of kimchi and kimchi ingredients in vitro and in vivo systems. Inje Univ Wenzel U, Kuntz S, Brendel MD, Daniel H. Dietary flavone is a potent apoptosis inducer in human colon carcinoma cells. Cancer Res ; 60 : Ahn JM, Lee SH, Song YS. Biological functions in leek. Food Ind Nutr ; 6 : Lim TS, Oh HI, Do JR, Kim HK. Physiological Actives of Leek Extracts from Allium tuberosum and Allium senescenes. J Kor Soc Food Sci Nutr ; 35(3) : Do JR, Kang SN, Kim KJ, Jo JH, Lee SW. Antimicrobial and Antioxidant Activities and Phenolic Contents in the Water Extract of Medicinal Plants. Food Sci Biotechnol ; 13(5) : Chung HD, Youn SJ. The Physioecological Characteristics and Productivity of the Korean Native Allium tuberosum Rottl. J Kor Soc Hort Sci ; 37(4) : Cha JY, Kim SK, Kim HJ, Song JY, Cho YS. Chemical Compositions and Antioxidative Activity of Leek (Allium turberusum) Seeds. Kor J Life Sci ; 10(3) : Park YC, Lee JS, Kim MH, Kim DY, Lee SD. Pharmacological action and Toxicity of Angelica sinensis. Korean J Orient Med Pre ; 19(2) : Gesina L. Longenecker. The Platelet: Phys iology and Pharmacology. Academic Press INC : Kumar V, Abbas AK. Robbins Basic Pathology. Elsevier INC. 8th ed : Srivastava RA, Mistry S, Sharma S. A novel antiinflammatory natural product from Sphaeranthus indicus inhibits expression of VCAM1 and ICAM1, and slows atherosclerosis progression independent of lipid changes. Nutr Metab (Lond) ; 12 : 20.

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α α α α α α α α 太陰調胃湯加減方 dbdb 마우스 肝에 대한 아디포사이토카인 및 발현에 미치는 영향 SREBPs 와 섞어서 하고 마커 또한 하여 전기 영동을 하였다 전기영동을 한 후에 에 를 쪼여서 각 를 확인하였다 이 를 프로그램을 이용해 수치화하 여 분석하였다 肝 조직 동결 절편 분리한 조직은 로 시간 동안 고정 시킨 후 에 세척한 후 물기를