곰취를이용한혈행개선용건강기능식품개발
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μ μ μ μ - 4 -
SUMMARY μ - 5 -
μ μ γ α - 6 -
μ μ μ μ μ μ - 7 -
CONTENTS - 8 -
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제 1 장 연구개발과제의개요 - 10 -
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제 2 장 국내외기술개발현황 - 14 -
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μ μ - 18 -
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제 3 장 연구개발수행내용및결과 - 21 -
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Ligularia fischeri 50% EtOH extract G49-C Hexane ext. G49-C-H Aqua layer CH 2 Cl 2 ext. G49-C-M Aqua layer G49-C-E-1... EtOAc ext. G49-C-E prep-hplc ACN/H 2 O(0.1% TFA) G49-C-E-4 caffeic acid G49-C-E-5 hyperoside... G49-C-E-11 2"-acetyl hyperoside G49-C-E-12 ethyl caffeate Aqua layer BuOH ext. G49-C-B Sephadex LH-20 MeOH:H 2 O(2:1) Aqua layer G49-C-W Ligularia fischeri 50% EtOH extract G49-C Diaion HP-20 MeOH/H 2 O G49-C-1 G49-C-2... G49-C-6 G49-C-7 Prep-HPLC ACN/H 2 O(0.1% TFA) G49-C-2-1 G49-C-2-2... G49-C-2-4... chlorogenic acid G49-C-2-6 caffeic acid G49-C-2-7 G49-C-1... G49-C-7 hyperoside G49-C-8 3,5-DCQA... G49-C-12 CHCl 3 =Chloroform CH 2 Cl 2 =Methylene chloride EtOAc=Ethyl acetate BuOH=Butanol MeOH=Methanol H 2 O=Water ACN=Acetonitrile - 25 -
Hexane ext. G49-C-H CH 2 Cl 2 ext. G49-C-M Ligularia fischeri 50% EtOH extract G49-C Aqua layer Aqua layer CHCl 3 =Chloroform CH 2 Cl 2 =Methylene chloride EtOAc=Ethyl acetate BuOH=Butanol MeOH=Methanol H 2 O=Water ACN=Acetonitrile G49-C-E-1... G49-C-E-4... prep-hplc ACN/H 2 O(0.1% TFA) EtOAc ext. G49-C-E prep-hplc ACN/H 2 O(0.1% TFA) G49-C-E-6... G49-C-E-8... G49-C-E-13 Aqua layer BuOH ext. G49-C-B Sephadex LH-20 MeOH:H 2 O(2:1) Aqua layer G49-C-W G49-C-E-4-1... G49-C-E-4-4 G49-C-E-4-5 Methyl caffeate prep-hplc ACN/H 2 O(0.1% TFA) G49-B-1 G49-B-2... G49-B-7 prep-hplc ACN/H 2 O(0.1% TFA) G49-C-E-8-1... G49-C-E-8-8 G49-C-E-8-9 G49-C-E-8-10 Mehtyl 3,5-dicaffeoyl quinate Quercetin G49-B-1-1 G49-B-1-2 Fukinolic acid - 26 -
δ δ μ δ δ δ HO 8 7 9 O 6 4 10 5 OH O OH 5' 6' 1' 2 2' 3 O O 1" HO 4' 3' OH HO 2" 5" 3" 6" OH OH 4" 그림 6. 1 H-NMR spectrμm 그림 7. 13 C-NMR spectrμm G49-17-5C #111 RT: 2.89 AV: 1 NL: 1.81E5 F: - c ESI Q1MS [100.000-1500.000] 463.04 100 95 90 85 80 75 70 65 60 55 50 45 40 35 30 25 20 15 10 526.09 576.94 927.01 112.96 709.91 5 356.90 618.96 963.31 300.00 778.37 863.00 1436.30 1322.69 1041.22 1202.97 0 200 400 600 800 1000 1200 1400 m/z 그림 8. HMBC NMR spectrμm 그림 9. Mass spectrμm - 27 -
δ δ OH HO 8 7 9 O 6 4 10 5 OH O 5' 6' 1' 2 2' 3 O O 1" RO R = acetyl 4' 3' OH HO 2" 5" 3" 6" OH OH 4" μ μ - 28 -
δ δ HO 2 7 3 1 HO 4 5 6 O 8 9 OH 그림 14. 1 H-NMR spectrμm 그림 15. 13 C-NMR spectrμm δ δ - 29 -
HO 2 7 3 1 HO 4 5 6 O 8 9 O 10 11 HO HO O O 그림 17. 1 H-NMR spectrμm 그림 18. 13 C-NMR spectrμm caffeic-acid-ethylester #279 RT: 5.17 AV: 1 NL: 1.80E5 F: - c ESI Q1MS [100.000-1500.000] 207.07 100 95 90 85 80 75 70 65 60 55 50 45 40 321.02 35 30 25 20 15 10 5 0 270.06 274.93 242.95 337.18 381.16 316.96 351.34 291.36 211.02 116.92 131.58 161.84 174.87 198.72 120 140 160 180 200 220 240 260 280 300 320 340 360 380 400 m/z 그림 19. HMBC NMR spectrμm 그림 20. Mass spectrμm - 30 -
7 HOOC 6 1 OH OR 5 4 2 3 OH OH HO 9' 4' 8' 3' 5' 7' 6' OH 2' O 1' R = caffeoyl Caffeoyl 그림 22. 1 H-NMR spectrμm 그림 23. 13 C-NMR spectrμm 그림 24. Mass spectrμm - 31 -
7 HOOC 6 1 OH OH 5 4 2 3 OR OH HO 9' 4' 8' 3' 5' 7' 6' OH 2' O 1' R = caffeoyl Caffeoyl - 32 -
7 HOOC 6 1 OH OR 5 4 2 3 OR OH HO 9' 4' 8' 3' 5' 7' 6' OH 2' O 1' R = caffeoyl Caffeoyl - 33 -
μ μ 3-5-DCQA #183 RT: 3.39 AV: 1 NL: 3.07E5 F: - c ESI Q1MS [100.000-1500.000] 515.06 100 95 90 85 80 75 70 65 60 55 50 45 40 35 30 25 1031.17 20 612.91 15 353.05 10 5 0 216.84 578.06 628.92 373.49 817.43 328.99 901.08 1078.11 1193.11 1289.96 1402.13 200 400 600 800 1000 1200 1400 m/z μ 7 HOOC 6 1 OH OR 5 4 2 3 OH OR HO 9' 4' 8' 3' 5' 7' 6' OH 2' O 1' R = caffeoyl Caffeoyl - 34 -
δ δ HO 6 7 8 9 5 OH O 4 10 O 2' OH OH 3' 4' 2 5' 1' 6' 3 OH - 35 -
μ μ δ δ OH HO 6' 7' 5' 8' 4' 9' 3' 2' 1' O O 5 6 O OH 4 3 1 2 7 O OH O 1" O 2" 5" 3" 4" OH 6" 9" OH 7" 8" - 36 -
μ μ μ μ - 37 -
δ δ O 6 7 10 HO 1 O 5 8 9 HO 2 4 3 μ μ - 38 -
δ δ HO HO 3' 1' HOOC HO O COOH O 4 3 2 9" 7" 1" 3" OH OH μ μ - 39 -
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μ μ μ μ - 42 -
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μm μl - 44 -
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1,500 1,200 곰취추출물의직선성시험 1 y = 13.92280 x - 15.66441 R² = 0.99997 피900 크면 600 적 300 0 0 20 40 60 80 100 검체량 (mg) - 50 -
1,500 1,200 곰취추출물의직선성시험 2 y = 13.80895 x - 10.58874 R² = 0.99997 피크면적 900 600 300 0 0 20 40 60 80 100 검체량 (mg) - 51 -
1,500 1,200 곰취추출물의직선성시험 3 y = 13.82797 x - 10.48635 R² = 0.99999 피크면적 900 600 300 0 0 20 40 60 80 100 검체량 (mg) - 52 -
400 300 곰취추출물의직선성시험 1 y = 3.81830 x - 6.75401 R² = 0.99996 피크면적 200 100 0 0 20 40 60 80 100 검체량 (mg) - 53 -
400 곰취추출물의직선성시험 2 y = 3.84523 x - 6.00562 R² = 0.99992 300 피크면적 200 100 0 0 20 40 60 80 100 검체량 (mg) - 54 -
400 곰취추출물의직선성시험 3 y = 3.82885 x - 3.73166 R² = 0.99999 300 피크면적 200 100 0 0 20 40 60 80 100 검체량 (mg) - 55 -
- 56 -
2,000 곰취추출물의직선성시험 1 y = 20.72118 x - 30.63264 R² = 0.99994 1,500 피크 1,000 면적 500 0 0 20 40 60 80 100 검체량 (mg) - 57 -
2,000 곰취추출물의직선성시험 2 y = 20.75572 x - 30.64895 R² = 0.99995 1,500 피크 1,000 면적 500 0 0 20 40 60 80 100 검체량 (mg) - 58 -
2,000 곰취추출물의직선성시험 3 y = 20.63434 x - 24.26704 R² = 0.99999 1,500 피크 1,000 면적 500 0 0 20 40 60 80 100 검체량 (mg) - 59 -
1,200 곰취추출물의직선성시험 1 y = 11.37243 x - 37.31933 R² = 0.99992 900 피크면적 600 300 0 0 20 40 60 80 100 검체량 (mg) - 60 -
1,200 곰취추출물의직선성시험 2 y = 11.48056 x - 33.09173 R² = 0.99988 900 피크면적 600 300 0 0 20 40 60 80 100 검체량 (mg) - 61 -
1,200 곰취추출물의직선성시험 3 y = 11.47620 x - 26.08995 R² = 0.99995 900 피크면적 600 300 0 0 20 40 60 80 100 검체량 (mg) - 62 -
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시험성적서 (Initial) 순서시험항목시험기준시험결과시험일자 1 확인시험 1) 함량시험법에따라시험할때검액은표준액과같은유지시간에서피크를나타낸다. 검액은표준액과같은유지시간에서피크를나타낸다. 2014.10.28 Chlorogenic acid (C 16H 18O 9 : 354.31) 으로서 2.0% 이상 2.612% 2 함량시험 3,4-dicaffeoylquinic acid (C 25H 24O 12 : 516.45) 으로서 0.5% 이상 3,5-dicaffeoylquinic acid (C 25H 24O 12 : 516.45) 으로서 2.7% 이상 0.649% 3.359% 2014.10.29 4,5-dicaffeoylquinic acid (C 25H 24O 12 : 516.45) 으로서 1.5% 이상 1.888% - 75 -
시험기록서 검체명 G49(001) 시험지시번호 - 페이지수 - 시험일자 2014.10.28 ~ 10.29 시험규격별첨작성일자 2015.03.06 Ⅰ. 시험방법및시험결과 가. 확인시험 ⑴ 아래의함량시험법에따라시험할때검액은표준액과같은유지시간에서피크를나타낸다. 시험결과 : 검액은표준액과같은유지시간에서피크를나타낸다. 나. 함량시험 : Chlorogenic acid(c 16H 18O 9 : 354.31) 으로서 2.0% 이상 3,4-dicaffeoylquinic acid(c 25 H 24 O 12 : 516.45) 으로서 0.5% 이상 3,5-dicaffeoylquinic acid(c 25H 24O 12 : 516.45) 으로서 2.7% 이상 4,5-dicaffeoylquinic acid(c 25H 24O 12 : 516.45) 으로서 1.5% 이상 1 표준액조제 : Chlorogenic acid 표준품 7.4mg, 3,4-dicaffeoylquinic acid 표준품 2.7mg, 3,5-dicaffeoylquinic acid 표준품 9.8mg, 4,5-dicaffeoylquinic acid 표준품 5.9mg을정밀히달아 50% EtOH로녹여정확히 50mL로한다. 이액 10mL 을 50% EtOH로 50mL로한다. 2 검액 (SA) 조제 : 곰취추출물 60mg 을취하여 50% EtOH 로정확히 50mL 로한다. 3 분석조건 ᄀ검출기 : 330nm ᄂ칼럼 : C18 (4.6 x 250mm, 5μM) ᄃ이동상 A : 0.1% TFA in H 2O ᄅ이동상 B : 아세토니트릴 시간 ( 분 ) 이동상 A(%) 이동상 B(%) 0 90 10 20 90 10 30 82 18 64 82 18 65 0 100 75 0 100 ᄆ유속 : 1.0mL/min ᄇ주입량 : 10uL 4 함량계산 표준품취한량의평균 (mg)/50 x 10/50 x SA 면적 검체취한량 (mg)/50 x 표준액의피크면적의평균 표준품순도 (%) - 76 -
시험기록서 검체명 G49(001) 시험지시번호 - 페이지수 - 시험일자 2014.10.28 ~ 10.29 시험규격별첨작성일자 2015.03.06 함량결과 * Chlorogenic acid(c 16H 18O 9 : 354.31) 순도 (%) 취한량 (mg) 피크면적 표준액 1 7.4 767.34491 99.3 표준액 2 7.3 755.42975 평 균 7.35 761.38733 SA1 60 814.55585 SA2 60 819.38074 SA3 60 830.51892 평균함량 2.612% * 3,4-dicaffeoylquinic acid(c 25H 24O 12 : 516.45) 순도 (%) 취한량 (mg) 피크면적 표준액 1 2.7 296.87939 98.9 표준액 2 2.6 290.06403 평 균 2.65 293.47171 SA1 60 217.27562 SA2 60 218.41983 SA3 60 221.80043 평균함량 0.649% * 3,5-dicaffeoylquinic acid(c 25H 24O 12 : 516.45) 순도 (%) 취한량 (mg) 피크면적 표준액 1 9.8 1160.30029 99.2 표준액 2 9.8 1144.09448 평 균 9.8 1152.197385 SA1 60 1188.82227 SA2 60 1195.08215 SA3 60 1216.76282 평균함량 3.359% - 77 -
* 4,5-dicaffeoylquinic acid(c 25H 24O 12 : 516.45) 순도 (%) 취한량 (mg) 피크면적 표준액 1 5.9 688.01331 99.6 표준액 2 5.8 675.73352 평 균 5.85 681.873415 SA1 60 659.25122 SA2 60 663.21356 SA3 60 675.90869 평균함량 1.888% 시험성적서 ( 가속 2 개월 ) 검체명 G49 제조번호 001 시험규격별규검체량 10g 시험기간 2014.12.29 ~ 2014.12.30 발행일자 2015.03.06 순서시험항목시험기준시험결과시험일자 1 확인시험 1) 함량시험법에따라시험할때검액은표준액과같은유지시간에서피크를나타낸다. 검액은표준액과같은유지시간에서피크를나타낸다. 2014.12.29 Chlorogenic acid (C 16H 18O 9 : 354.31) 으로서 2.0% 이상 2.630% 2 함량시험 3,4-dicaffeoylquinic acid (C 25H 24O 12 : 516.45) 으로서 0.5% 이상 3,5-dicaffeoylquinic acid (C 25H 24O 12 : 516.45) 으로서 2.7% 이상 0.640% 3.369% 2014.12.30 4,5-dicaffeoylquinic acid (C 25H 24O 12 : 516.45) 으로서 1.5% 이상 1.920% - 78 -
시험기록서 검체명 G49(001) 시험지시번호 - 페이지수 - 시험일자 2014.12.29 ~ 12.30 시험규격별첨작성일자 2015.03.06 함량결과 * Chlorogenic acid(c 16H 18O 9 : 354.31) 순도 (%) 취한량 (mg) 피크면적 표준액 1 7.3 744.24603 99.3 표준액 2 7.3 746.55127 평 균 7.3 745.39865 SA1 60 824.08807 SA2 60 848.37946 SA3 60 817.82770 평균함량 2.630% * 3,4-dicaffeoylquinic acid(c 25 H 24 O 12 : 516.45) 순도 (%) 취한량 (mg) 피크면적 표준액 1 2.7 288.17245 98.9 표준액 2 2.7 288.50494 평 균 2.7 288.33869 SA1 60 209.29111 SA2 60 215.25241 SA3 60 212.09200 평균함량 0.640% * 3,5-dicaffeoylquinic acid(c 25H 24O 12 : 516.45) 순도 (%) 취한량 (mg) 피크면적 표준액 1 9.7 1116.70789 99.2 표준액 2 9.7 1118.95386 평 균 9.7 1117.830875 SA1 60 1179.13232 SA2 60 1226.42310 SA3 60 1179.15784 평균함량 3.369% - 79 -
* 4,5-dicaffeoylquinic acid(c 25H 24O 12 : 516.45) 순도 (%) 취한량 (mg) 피크면적 표준액 1 5.8 670.82953 99.6 표준액 2 5.8 671.19983 평 균 9.7 1117.830875 SA1 60 677.55359 SA2 60 694.14099 SA3 60 682.21863 평균함량 1.920% 시험성적서 ( 가속 4 개월 ) 검체명 G49 제조번호 001 시험규격 별규 검체량 10g 시험기간 2015.03.02 ~ 2014.03.05 발행일자 2015.03.06 순서시험항목시험기준시험결과시험일자 1 확인시험 1) 함량시험법에따라시험할때검액은표준액과같은유지시간에서피크를나타낸다. 검액은표준액과같은유지시간에서피크를나타낸다. 2015.03.04 Chlorogenic acid (C 16H 18O 9 : 354.31) 으로서 2.0% 이상 2.579% 2 함량시험 3,4-dicaffeoylquinic acid (C 25H 24O 12 : 516.45) 으로서 0.5% 이상 3,5-dicaffeoylquinic acid (C 25H 24O 12 : 516.45) 으로서 2.7% 이상 0.613% 3.304% 2015.03.05 4,5-dicaffeoylquinic acid (C 25H 24O 12 : 516.45) 으로서 1.5% 이상 1.896% - 80 -
시험기록서 검체명 G49(001) 시험지시번호 - 페이지수 - 시험일자 2015.03.02 ~ 03.05 시험규격별첨작성일자 2015.03.06 함량결과 * Chlorogenic acid(c 16 H 18 O 9 : 354.31) 순도 (%) 취한량 (mg) 피크면적 표준액 1 6.0 621.56189 99.3 표준액 2 6.0 621.94910 평 균 6.0 621.755495 SA1 60 813.43677 SA2 60 841.74719 SA3 60 822.30182 평균함량 2.579% * 3,4-dicaffeoylquinic acid(c 25H 24O 12 : 516.45) 순도 (%) 취한량 (mg) 피크면적 표준액 1 2.0 229.81808 98.9 표준액 2 2.0 229.31035 평 균 2.0 229.564215 SA1 60 212.83231 SA2 60 223.65436 SA3 60 217.97708 평균함량 0.613% * 3,5-dicaffeoylquinic acid(c 25H 24O 12 : 516.45) 순도 (%) 취한량 (mg) 피크면적 표준액 1 7.3 849.08142 99.2 표준액 2 7.2 845.42346 평 균 7.25 847.25244 SA1 60 1168.50708 SA2 60 1219.35083 SA3 60 1194.92212 평균함량 3.304% - 81 -
* 4,5-dicaffeoylquinic acid(c 25H 24O 12 : 516.45) 순도 (%) 취한량 (mg) 피크면적 표준액 1 4.5 530.66968 99.6 표준액 2 4.4 528.83844 평 균 4.45 529.75406 SA1 60 678.01508 SA2 60 711.90356 SA3 60 695.96338 평균함량 1.896% 시험성적서 ( 가속 6 개월 ) 검체명 G49 제조번호 001 시험규격별규검체량 10g 시험기간 2015.04.28 ~ 2014.04.29 발행일자 2015.06.16 순서시험항목시험기준시험결과시험일자 1 확인시험 1) 함량시험법에따라시험할때검액은표준액과같은유지시간에서피크를나타낸다. 검액은표준액과같은유지시간에서피크를나타낸다. 2015.04.28 Chlorogenic acid (C 16H 18O 9 : 354.31) 으로서 2.0% 이상 2.509% 2 함량시험 3,4-dicaffeoylquinic acid (C 25H 24O 12 : 516.45) 으로서 0.5% 이상 3,5-dicaffeoylquinic acid (C 25H 24O 12 : 516.45) 으로서 2.7% 이상 0.611% 3.117% 2015.04.29 4,5-dicaffeoylquinic acid (C 25H 24O 12 : 516.45) 으로서 1.5% 이상 1.983% - 82 -
시험기록서 검체명 G49(001) 시험지시번호 - 페이지수 - 시험일자 2015.04.28 ~ 04.29 시험규격별첨작성일자 2015.03.06 지표성분의함량결과 * Chlorogenic acid(c 16H 18O 9 : 354.31) 순도 (%) 취한량 (mg) 피크면적 표준액 1 5.8 605.49188 99.3 표준액 2 5.9 606.91699 평 균 5.85 606.204435 SA1 60 779.65460 SA2 60 796.29578 SA3 60 810.50690 평균함량 2.509% * 3,4-dicaffeoylquinic acid(c 25 H 24 O 12 : 516.45) 순도 (%) 취한량 (mg) 피크면적 표준액 1 2.0 222.01392 98.9 표준액 2 1.9 221.89496 평 균 1.95 221.95444 SA1 60 209.10794 SA2 60 214.40971 SA3 60 217.14032 평균함량 0.611% * 3,5-dicaffeoylquinic acid(c 25H 24O 12 : 516.45) 순도 (%) 취한량 (mg) 피크면적 표준액 1 7.0 819.47009 99.2 표준액 2 7.0 819.65503 평 균 7.0 819.56256 SA1 60 1102.48059 SA2 60 1123.07239 SA3 60 1127.86719 평균함량 3.117% - 83 -
* 4,5-dicaffeoylquinic acid(c 25H 24O 12 : 516.45) 순도 (%) 취한량 (mg) 피크면적 표준액 1 4.2 513.85345 99.6 표준액 2 4.2 511.32504 평 균 4.2 512.589245 SA1 60 725.40924 SA2 60 743.48706 SA3 60 746.24640 평균함량 1.983% 시험성적서 ( 장기 2 개월 ) 검체명 G49 제조번호 001 시험규격별규검체량 10g 시험기간 2014.12.29 ~ 2014.12.30 발행일자 2015.03.06 순서시험항목시험기준시험결과시험일자 1 확인시험 1) 함량시험법에따라시험할때검액은표준액과같은유지시간에서피크를나타낸다. 검액은표준액과같은유지시간에서피크를나타낸다. 2014.12.29 Chlorogenic acid (C 16H 18O 9 : 354.31) 으로서 2.0% 이상 2.642% 2 함량시험 3,4-dicaffeoylquinic acid (C 25H 24O 12 : 516.45) 으로서 0.5% 이상 3,5-dicaffeoylquinic acid (C 25H 24O 12 : 516.45) 으로서 2.7% 이상 0.639% 3.411% 2014.12.30 4,5-dicaffeoylquinic acid (C 25H 24O 12 : 516.45) 으로서 1.5% 이상 1.892% - 84 -
시험기록서 검체명 G49(001) 시험지시번호 - 페이지수 2 / 6 시험일자 2014.12.29 ~ 12.30 시험규격별첨작성일자 2015.03.06 지표성분의함량결과 * Chlorogenic acid(c 16H 18O 9 : 354.31) 순도 (%) 취한량 (mg) 피크면적 표준액 1 7.3 744.24603 99.3 표준액 2 7.3 746.55127 평 균 7.3 745.39865 SA1 60 811.28644 SA2 60 843.82672 SA3 60 822.43268 평균함량 2.642% * 3,4-dicaffeoylquinic acid(c 25H 24O 12 : 516.45) 순도 (%) 취한량 (mg) 피크면적 표준액 1 2.7 288.17245 98.9 표준액 2 2.7 288.50494 평 균 2.7 288.338695 SA1 60 207,07619 SA2 60 213.51787 SA3 60 208.30698 평균함량 0.639% * 3,5-dicaffeoylquinic acid(c 25H 24O 12 : 516.45) 순도 (%) 취한량 (mg) 피크면적 표준액 1 9.7 1116.70789 99.2 표준액 2 9.7 1118.95386 평 균 9.7 1117.830875 SA1 60 1184.28381 SA2 60 1230.73340 SA3 60 1198.45740 평균함량 3.411% - 85 -
* 4,5-dicaffeoylquinic acid(c 25H 24O 12 : 516.45) 순도 (%) 취한량 (mg) 피크면적 표준액 1 5.8 670.82953 99.6 표준액 2 5.8 671.19983 평 균 5.8 671.01468 SA1 60 657.35132 SA2 60 681.95465 SA3 60 665.12085 평균함량 1.892% 시험성적서 ( 장기 4 개월 ) 검체명 G49 제조번호 001 시험규격 별규 검체량 10g 시험기간 2015.03.02 ~ 2014.03.05 발행일자 2015.03.06 순서시험항목시험기준시험결과시험일자 1 확인시험 1) 함량시험법에따라시험할때검액은표준액과같은유지시간에서피크를나타낸다. 검액은표준액과같은유지시간에서피크를나타낸다. 2015.03.04 Chlorogenic acid (C 16H 18O 9 : 354.31) 으로서 2.0% 이상 2.606% 2 함량시험 3,4-dicaffeoylquinic acid (C 25H 24O 12 : 516.45) 으로서 0.5% 이상 3,5-dicaffeoylquinic acid (C 25H 24O 12 : 516.45) 으로서 2.7% 이상 0.604% 3.359% 2015.03.05 4,5-dicaffeoylquinic acid (C 25H 24O 12 : 516.45) 으로서 1.5% 이상 1.854% - 86 -
시험기록서 검체명 G49(001) 시험지시번호 - 페이지수 3 / 6 시험일자 2015.03.02 ~ 03.05 시험규격별첨작성일자 2015.03.06 지표성분의함량결과 * Chlorogenic acid(c 16H 18O 9 : 354.31) 순도 (%) 취한량 (mg) 피크면적 표준액 1 6.0 621.56189 99.3 표준액 2 6.0 621.94910 평 균 6.0 621.755495 SA1 60 845.45154 SA2 60 829,94586 SA3 60 825.44562 평균함량 2.606% * 3,4-dicaffeoylquinic acid(c 25 H 24 O 12 : 516.45) 순도 (%) 취한량 (mg) 피크면적 표준액 1 2.0 229.81808 98.9 표준액 2 2.0 229.31035 평 균 2.0 229.564215 SA1 60 218.44104 SA2 60 214.94099 SA3 60 214.50040 평균함량 0.604% * 3,5-dicaffeoylquinic acid(c 25H 24O 12 : 516.45) 순도 (%) 취한량 (mg) 피크면적 표준액 1 7.3 849.08142 99.2 표준액 2 7.2 845.42346 평 균 7.25 847.25244 SA1 60 1232.94543 SA2 60 1215.66626 SA3 60 1205.24609 평균함량 3.359% - 87 -
* 4,5-dicaffeoylquinic acid(c 25H 24O 12 : 516.45) 표준액에대한결과 순도 (%) 취한량 (mg) 피크면적 표준액 1 4.5 530.66968 99.6 표준액 2 4.4 528.83844 평 균 4.45 529.75406 SA1 60 684.39258 SA2 60 680.94043 SA3 60 680.39221 평균함량 1.854% 시험성적서 ( 장기 6 개월 ) 검체명 G49 제조번호 001 시험규격별규검체량 10g 시험기간 2015.04.28 ~ 2014.04.29 발행일자 2015.06.16 순서시험항목시험기준시험결과시험일자 1 확인시험 1) 함량시험법에따라시험할때검액은표준액과같은유지시간에서피크를나타낸다. 검액은표준액과같은유지시간에서피크를나타낸다. 2015.04.28 Chlorogenic acid (C 16H 18O 9 : 354.31) 으로서 2.0% 이상 2.532% 2 함량시험 3,4-dicaffeoylquinic acid (C 25H 24O 12 : 516.45) 으로서 0.5% 이상 3,5-dicaffeoylquinic acid (C 25H 24O 12 : 516.45) 으로서 2.7% 이상 0.596% 3.276% 2015.04.29 4,5-dicaffeoylquinic acid (C 25H 24O 12 : 516.45) 으로서 1.5% 이상 1.854% - 88 -
시험기록서 검체명 G49(001) 시험지시번호 - 페이지수 3 / 6 시험일자 2015.04.28 ~ 04.29 시험규격별첨작성일자 2015.06.16 지표성분의함량결과 * Chlorogenic acid(c 16H 18O 9 : 354.31) 순도 (%) 취한량 (mg) 피크면적 표준액 1 5.8 605.49188 99.3 표준액 2 5.9 606.91699 평 균 5.85 606.204435 SA1 60 794.17743 SA2 60 801.78058 SA3 60 873.32104 평균함량 2.532% * 3,4-dicaffeoylquinic acid(c 25 H 24 O 12 : 516.45) 순도 (%) 취한량 (mg) 피크면적 표준액 1 2.0 222.01392 98.9 표준액 2 1.9 221.89496 평 균 1.95 221.95444 SA1 60 204.77802 SA2 60 207.43884 SA3 60 228.55199 평균함량 0.596% * 3,5-dicaffeoylquinic acid(c 25H 24O 12 : 516.45) 순도 (%) 취한량 (mg) 피크면적 표준액 1 7.0 819.47009 99.2 표준액 2 7.0 819.65503 평 균 7.0 819.56256 SA1 60 1160.32507 SA2 60 1176.50464 SA3 60 1276.22119 평균함량 3.276% - 89 -
* 4,5-dicaffeoylquinic acid(c 25 H 24 O 12 : 516.45) 순도 (%) 취한량 (mg) 피크면적 표준액 1 4.2 513.85345 99.6 표준액 2 4.2 511.32504 평 균 4.2 512.589245 SA1 60 671.89618 SA2 60 682.05865 SA3 60 770.59235 평균함량 1.854% - 90 -
(1) 제조공정 (2) 공정, 식품, 식품첨가물 (3) 수율 (kg) - 91 -
- 92 -
- 93 -
- 94 -
- 95 -
- 96 -
- 97 -
- 98 -
3. IRB 승인 - 99 -
- 100 -
μ μ μ μ μ - 101 -
μ α γ μ μ μ γ α β μ - 102 -
μ μ μ μ α μ - 103 -
- 104 -
μ μ μ μ μ μ - 105 -
μ - 106 -
- 107 -
μ μ μ μ - 108 -
μ μ μ μ - 109 -
μ μ μ μ - 110 -
μ μ - 111 -
μ - 112 -
μ μ μ μ μ μ - 113 -
μ μ μ μ μ γ α μ γ α - 114 -
γ α - 115 -
γ α μ μ μ μ μ μ - 116 -
- 117 -
- 118 -
- 119 -
Control Plasmin 0.25 unit/ml Plasmin 0.5 unit/ml Plasmin 1 unit/ml Control 1 mg/ml 2 mg/ml - 120 -
Control 500 μm 1 mm Control 500 μm 1 mm Control 500 μm 1 mm Control 500 μm 1 mm - 121 -
Control 500 μm 1 mm Control 500 μm 1 mm Control 500 μm 1 mm Control 500 μm 1 mm - 122 -
μ - 123 -
μ α α Control TNF-α 1μg/ml DHA 10 μm - 124 -
곰취추출물 50 μg/ml Chlorogenic acid A 50 μm Chlorogenic acid B 50 μm Chlorogenic acid C 50 μm 곰취추출물 100 μg/ml Chlorogenic acid A 100 μm Chlorogenic acid B 100 μm Chlorogenic acid C 100 μm Control TNF-α 1μg/ml DHA 10 μm 곰취추출물 50μg/ml Chlorogenic acid A 50μM Chlorogenic acid B 50μM Chlorogenic acid C 50μM 곰취추출물 100μg/ml Chlorogenic acid A 100μM Chlorogenic acid B 100μM Chlorogenic acid C 100μM μ - 125 -
μ - 126 -
- 127 -
- 128 -
μ - 129 -
- 130 -
μ - 131 -
- 132 -
- 133 -
- 134 -
- 135 -
- 136 -
- 137 -
μ μ μ μ μ μ μ μ μ μ - 138 -
μ μ μ μ μ μ μ μ - 139 -
μ μ μ μ μ β μ μ μ μ μ - 140 -
μ μ - 141 -
μ μ - 142 -
μ μ - 143 -
μ - 144 -
μ μ μ - 145 -
μ μ - 146 -
μ - 147 -
- 148 -
제 4 장 목표달성도및관련분야에의기여도 - 149 -
- 150 -
- 151 -
제 5 장연구개발성과및성과활용계획 μ β - 152 -
μ μ - 153 -
- 154 -
- 155 -
μ μ μ α β - 156 -
- 157 -
제 6 장연구개발과정에서수집한해외과학기술정보 제약사제품명비고 릴리에피언트국내시판승인, 2011 년출시 아스트라제네카브릴린타임상 3 상완료 노바티스헤리노그렐임상 2 상완료 - 158 -
제 7 장연구시설 장비현황 - 159 -
제 8 장연구실안전관리이행실적 < 법이행사 - 160 -
- (2015 4 1 ) ( 2011 9 10 ; 10446, 2011 3 9 ),,.. -, ( : )., ( : (); : ). -.., - :,, /. - :,.,,,.,.. - :,...., - :,,. - 161 -
- :,,,. - :. - :. - :. - :,.. -, ( ) (, 1;, 3;,, 1; 1), (, ). - : 18 4 10 1. - 162 -
제 9 장참고문헌 μ μ - 163 -
μ μ - 164 -
[ 별첨 1] 특허, 논문, 제품 ( 시장 ) 분석보고서 나. 특허분석에따른본연구과제와의관련성 - 165 -
- 166 -
- 167 -
- 168 -
- 169 -
- 170 -
- 171 -
- 172 -
- 173 -
- 174 -