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교진 위
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1 대한수혈학회지 : 제 28 권제 3 호, 2017 The Korean Journal of Blood Transfusion Vol. 28, No. 3, , December pissn eissn Original Article 태아신생아용혈성질환진단에서직접항글로불린검사와항체용출검사의임상적의의 나현진 1 ㆍ이은경 1 ㆍ송재우 1 ㆍ정준원 2 ㆍ김현옥 1 연세대학교의과대학세브란스병원진단검사의학교실 1, 내과학교실 2 The Clinical Significance of Implementing Concurrent Direct Antiglobulin Test and Antibody Elution Test in Diagnosing Hemolytic Disease of the Fetus and Newborn Hyunjin Nah 1, Eunkyung Lee 1, Jaewoo Song 1, June-Won Cheong 2, Hyun Ok Kim 1 Departments of Laboratory Medicine 1 and Internal Medicine 2, Severance Hospital, Yonsei University College of Medicine, Seoul, Korea Background: Hemolytic disease of the fetus and newborn (HDFN) is a condition in which immune hemolytic anemia occurs in fetuses or newborns as a result of maternal alloimunized antibodies transfer. Antibody elution test and direct antiglobulin test (DAT) can be performed to diagnose HDFN; maternal originated antibodies cannot be confirmed if DAT is utilized alone. In this study, we analyzed the clinical significance of implementing concurrent DAT and antibody elution test in diagnosing HDFN. Methods: We retrospectively analyzed the DATs and antibody elution tests that were simultaneously conducted in a period of 11 years, between 2005 and 2015, in newborns that received hemoglobin, reticulocyte, and total bilirubin tests. According to the results of these tests, the number of newborns diagnosed with HDFN was measured. Furthermore, the sensitivity and specificity of DAT and antibody elution test were compared. Results: Among 325 newborns, the results of DATs and antibody elution tests were both negative in 208 (64.0%), negative and positive, respectively, in 80 (24.6%), positive and negative in 10 (3.1%), both positive in 27 (8.3%). When this was compared to the clinical diagnosis of HDFN, more sensitive and specific diagnoses were possible when implementing DAT and antibody elution test together (sensitivity of 76.9% for antibody elution test and specificity of 90.3% for DAT). Twenty-six (8.0%) newborns suspected for HDFN showed clinically significant hemolytic anemia. Conclusion: It is necessary to conduct both DAT and antibody elution test when HDFN is suspected. The severity of hemolysis in HDFN can be indirectly anticipated using an antibody elution test confirming maternal originated alloantibodies. (Korean J Blood Transfus 2017;28: ) Key words: Direct antiglobulin test, Antibody elution test, Hemolytic disease of the fetus and newborn Received on November 9, Revised on November 24, Accepted on November 29, 2017 Correspondence to: Hyun Ok Kim Department of Laboratory Medicine, Severance Hospital, Yonsei University College of Medicine, 50 Yonsei-ro, Seodaemun-gu, Seoul 03722, Korea Tel: , Fax: , hyunok1019@yuhs.ac, ORCID: This is an Open Access article distributed under the terms of the Creative Commons Attribution Non-Commercial License ( which permits unrestricted non-commercial use, distribution, and reproduction in any medium, provided the original work is properly cited. Copyright C 2017 The Korean Society of Blood Transfusion

2 나현진외 : 태아신생아용혈성질환에서직접항글로불린검사및항체용출검사 서론태아신생아용혈성질환은산모의면역글로불린 G (immunoglobulin G, IgG) 적혈구동종항체가태반을통과하여태아또는신생아의해당항원을가지는적혈구를파괴하기때문에발생한다. 심각한경우에는태아빈혈이나사망을초래하며, 출생후심한형태의신생아황달과이로인한핵황달 (kernicterus) 을일으켜장애를남길수있다 [1]. 출생후신생아가태아신생아용혈성질환이의심되는경우신생아적혈구에대한 ABO 및 RhD 혈액형검사와직접항글로불린검사를시행하고, 산모에대해서는 ABO 및 RhD 혈액형검사와비예기항체선별검사를시행하도록하고있다 [2]. 직접항글로불린검사는신생아에게나타나는면역성과비면역성용혈반응을구별하기위해시행하는검사로서, 생체내에서적혈구표면에 IgG나보체 C3b 또는 C3d가부착되어있는지를알려준다. 우선다특이성 (polyspecific) 항글로불린시약을사용하여양성을보이면 anti-igg 및 anti-c3 단특이성 (monospecific) 항글로불린시약을이용하여적혈구표면부착단백의종류를결정하게된다 [3]. 항체용출검사는적혈구에부착된다양한종류의항체를분리시켜기능적인상태로얻는방법으로, 감작된항체의특이성을동정할때시행하게된다 [4]. 직접항글로불린검사에서음성이지만용출액으로농축하여소량의적혈구부착항체를검출하거나 [5], 용출액에서항체의특이성을확인하고모체의혈액형과비교함으로써태아신생아용혈성빈혈의원인항체를규명하여진단에도움을주기위해항체용출검사를시행할수있다 [2]. 대한임상검사정도관리협회의혈액은행외부 정도관리에항체용출검사가포함되어있지않아국내의자료는없지만, 항체용출검사를실제로실시하는기관의수는한정되어있을것으로추정한다. 그러나태아신생아용혈성질환에서직접항글로불린검사만시행할경우모체유래항체가증명되지않을수있다. 한연구에의하면 ABO 부적합에의한태아신생아용혈성질환신생아에서직접항글로불린검사가음성으로나온비율이 35% 였다 [6]. 또한직접항글로불린검사는 300에서 500분자이상의 IgG 항체를검출할수있어그보다낮은수의항체가신생아의적혈구에부착되어있는경우에는검출되지않을수있기때문이다 [5]. 따라서본연구에서는태아신생아용혈성질환이의심되는환아에서직접항글로불린검사와항체용출검사가동시에시행되었던결과를후향적으로분석하여, 실제로태아신생아용혈성질환으로진단된환자에서두검사가어떠한결과를보이며, 처음부터이두검사를동시해시행하는경우어떠한임상적인정보를줄수있는지에대한자료를제공하고자하였다. 대상및방법 1. 대상환자세브란스병원혈액은행에서 2005년 1월 1일부터 2015년 12월 31일까지 11년간태아신생아용혈성질환이의심되어직접항글로불린검사와항체용출검사가동시에시행되었던신생아 ( 생후 1 개월미만 ) 를대상으로하였다. 이중용혈의소견을확인하기위한검사로직접항글로불린검사및항체용출검사의뢰일전후 3일에혈색소, 망상적혈구, 총빌리루빈을모두검사한신생아에대하여분석을실시하였다. 대상환자에대해나이,

3 Korean J Blood Transfus Vol. 28, No. 3, , Dec 성별을조사하였으며, 환자의혈액형과모체의혈액형, 그리고모체의비예기항체검사결과를조사하였다. 모체가비예기항체양성인경우신생아의해당항원여부도조사하였다. 본연구는연세의료원세브란스병원임상연구보호센터연구심의위원회의승인을통과하였다 (IRB 승인번호 : ). 2. 검사방법직접항글로불린검사는우선원주응집법을시행하였다. 다특이성항글로불린이첨가된 ID-Card LISS/Coombs (BioRad, Cressier, Switzerland) 에 ID- Diluent II (modified LISS, BioRad) 로희석한 % 적혈구부유액을 50 L 분주하여원심침전후반응을보았다. 양성이나올경우시험관법을시행하였다. 3개의시험관에각각 3 5% 적혈구부유액을 1방울넣어 3번세척한후, 각시험관에다특이성항글로불린시약 (BioClone Anti-IgG, -C3d Polyspecific Green, Ortho-Clinical Diagnostics, Pencoed, UK), 단특이성항글로불린시약 (Ortho Anti-IgG, Ortho-Clinical Diagnostics), 항 C3b, 항 C3d (Anti-C3b, -C3d BioClone, Ortho-Clinical Diagnostics) 을각각두방울가하여응집여부를관찰하였다. 응집이없는경우는위음성을배제하기위하여 IgG 감작적혈구를한방울첨가하여응집을확인하였다. 항체용출검사는 2005년부터 2007년까지가열용출법 (heat elution method) 을사용하였다. 가열용출법은우선적혈구를 5 6회세척한뒤동량의알부민 (Ortho Bovine Albumin Solution Polymerized Bovine Albumin, Ortho- Clinical Diagnostics, Raritan, USA) 을 6% 로희석하여혼합하였다. 56 o C 수조에서 10분간흔들면서항온한뒤원심침전하여상층액을이용하여검사를진행하였다. 2008년부터 2015년까지는 AABB Technical manual method를변형하여 glycine acid EDTA 법으로항체용출검사를시행하였다 [7]. Glycine acid EDTA 법의시약은 ethylenediaminetetraacetic acid disodium salt dehydrate (Sigma- Aldrich, Saint Louis, USA), Glycine hydrochlorid (Sigma-Aldrich), TRIZMA base 용액 (Sigma-Aldrich) 으로자가제조하여사용하였다. 6회세척한적혈구 500 L에 TRIZMA 용액을 50 L를첨가하고원심침전하였다. 상층액을다른시험관에옮겨 TRIZMA 용액을 25 L씩첨가하여 ph 에맞춘뒤원심침전하여상층액을이용하여검사를진행하였다. 두검사법모두분리한용출액을이용하여선별용혈구 (SELECTOGEN I & II, Ortho-Clinical Diagnostics) 와 ID-Micro Typing System IgG, -C3d Card (Ortho-Clinical Diagnostics) 에서비예기항체선별검사를실시하였으며, 여기서반응이없는경우 A1 및 B 혈구 (Affirmagen A1 and B, Ortho-Clinical Diagnostics, Pencoed, UK) 와의반응을검사하였다. 3. 항체용출검사의방법에따른항체회수율비교 본기관에서시행된가열용출법과 glycine acid EDTA법에따른항체회수율을비교하기위하여 2005년부터 2007년까지의뢰된신생아의검사결과와 2008년부터 2015년까지의뢰된검사결과를나누었다. 그리고직접항글로불린검사가다특이성시약과의반응양성및 anti-igg 시약과의반응양성인신생아검체가운데항체용출검사가양성으로나오는신생아검체의수를구하였다. 이를독립표본 t-검정을통하여서로비교하였다. 4. 직접항글로불린검사와항체용출검사결과의분석방법 태아신생아용혈성질환이의심되었고, 혈색소, 망상적혈구, 총빌리루빈을모두검사한신생아를

4 나현진외 : 태아신생아용혈성질환에서직접항글로불린검사및항체용출검사 대상으로직접항글로불린검사와항체용출검사의결과에따라각각음성과음성, 음성과양성, 양성과음성, 양성과양성으로분류하였다. 각각에해당하는신생아수를조사하고, 항체용출검사가양성일경우용출액에서동정된항체에따라 anti-a 또는 anti-b 항체, anti-d 항체, anti-d를제외한동종항체에해당하는신생아의수를조사하였다. 위신생아중다음의세가지기준을모두만족하는경우태아신생아용혈성질환의추정진단 [8] 으로간주하고해당하는신생아의수를구하였다. 첫째, 모체와환자의 ABO 또는 RhD 형, 기타다른혈액형의부적합이있으며, 모체가태아적혈구항원에부착가능한 anti-a, anti-b, 비예기항체를가지고있다. 둘째, 신생아의검사결과상혈색소가 14.0 g/dl 미만, 망상적혈구가 2.31% 를초과, 총빌리루빈이 1.2 mg/dl를초과하는수치를모두만족한다 ( 혈색소, 망상적혈구, 총빌리루빈결과치는본의료기관에설정된환자연령에해당하는참고치를기준으로함 ). 셋째, 다른면역성또는비면역성용혈의증거를찾을수없다. 앞서구한태아신생아용혈성질환으로추정진단된신생아를질병이있는집단으로, 이에속하지않는신생아를질병이없는집단으로보고, 질병이있는집단가운데직접항글로불린검사또는항체용출검사양성신생아의수를각각구하여검사의민감도 (sensitivity) 를계산하였다. 또한질병이없는집단가운데직접항글로불린검사또는항체용출검사음성신생아의수를각각구하여검사의특이도 (specificity) 를계산하였다. 5. 통계분석통계분석은 Microsoft Excel (version , Microsoft Corporation, Redmond, WA), SPSS (PASW Statistics 18, SPSS Inc., Chicago, IL), MedCalc (version , MedCalc software, Mariakerke, Belgium) 를이용하였다. 모든통계적유의수준은 P value 0.05를기준으로하였다. Table 1. Comparison of recovery between Heat method and Glycine EDTA method for antibody elution test in eluates from antecedent positive DATs using polyspecific and anti-igg antihuman globulin Results 결과 1. 항체용출검사방법에따른회수율비교 2005 년부터 2007 년까지직접항글로불린검사의 다특이성시약과 anti-igg 시약에서양성을보인신생아의검체는 7개였고, 이가운데가열용출법으로 5개 (71.4%) 의검체에서항체용출검사가양성을보였다. 그특이성은 anti-d가 3개, anti-a 와 anti-b가각각 1개씩동정되었다. 2008년부터 2015년까지직접항글로불린검사의다특이성시약과 anti-igg 시약에서양성을보인신생아의검체는 25개였고, 이가운데 glycine acid EDTA법으로 19개 (76.0%) 의검체에서항체용출검사가양성 Heat method* Glycine acid EDTA method* Reactive eluates 5 (71.4%) 19 (76.0%) Nonreactive eluates 2 (28.6%) 6 (24.0%) Total positive DATs 7 (100%) 25 (100%) *No significant difference between reactive rates of antibody elution tests performed with heat method and glycine acid EDTA method (P=0.818); The specificity of eluates from heat methods are three anti-d, one anti-a, and one anti-b; The specificity of eluates from glycine acid EDTA methods are nine anti-d, five anti-a, three anti-b, one anti-a and anti-d, and one anti-e and anti-c. Abbreviation: DAT, direct antiglobulin test

5 Korean J Blood Transfus Vol. 28, No. 3, , Dec 을보였다. 그특이성은 anti-d 가 9 개, anti-a 가 5 개, anti-b 가 3 개, anti-a 및 anti-d 가 1 개, anti-e 및 anti-c가 1개동정되었다. 따라서본기관에서일정기점을기준으로변경된두방법의회수율의통계적인차이가없음 (P=0.818) 을확인하였다 (Table 1). 2. 태아 / 신생아용혈성질환에서직접항글로불린검사와항체용출검사결과의임상적의의 신생아를대상으로두검사가동시에의뢰된숫자는 332명이었으며남아 186명, 여아 146명이었다. 이중용혈의소견을확인하기위한검사로혈색소, 망상적혈구 (%), 총빌리루빈을모두검사한신생아는 325명으로이에대하여분석을실시하였다. 직접항글로불린검사와항체용출검사결과에따른신생아의수와이가운데태아신생아용혈성질환으로추정진단된신생아의수를 Table 2 에정리하였다. 직접항글로불린검사와항체용출검사모두음성인신생아가 208명 (64.0%) 으로가장많았다. 여기서태아신생아용혈성질환으로진단될수있는신생아는 5명이었다. 이환자들은모체에서유래한항체가환아의적혈구를감작시킨증거가없었지만, 신생아와모체간에혈액형부적합이존재하고명백히검사소견상용혈성빈혈을보이며, 다른면역성또는비면역성용혈의원인도찾을수없어태아신생아용혈성질환에포함하였다. 직접항글로불린검사와항체용출검사중한검사에서라도양성인경우는 117명으로양성율은 Table 2. Results of DATs and antibody elution tests in 325 patients and correlation with the clinical diagnosis of HDFN DAT Elution Total No. of patients Red cell sensitization of the patients Antibody specificity in eluates No. of patients No. of patients diagnosed as HDFN* Negative Negative 208 (64.0%) Negative Positive 80 (24.6%) Anti-A or B 39 7 Anti-D 39 6 Anti-B+Anti-D 1 0 Unidentified antibody 1 0 Positive Negative 10 (3.1%) Positive Positive 27 (8.3%) Anti-A or B 11 2 Anti-D 13 4 Anti-A+Anti-D 1 0 Anti-E 1 1 Anti-E+Anti-c 1 0 Total 325 (100%) *The presumptive diagnosis of HDFN was made when the patient meets all of the following three criteria: 1) incompatibility of ABO, RhD, and other blood types between mother and child with detection of corresponding antibody in the maternal serum was confirmed, 2) laboratory test results are Hb <14.0 g/dl and reticulocyte (%) >2.31% and total bilirubin >1.2 mg/dl, 3) evidence of other immune or non-immune causes of hemolytic anemia could not be found. Abbreviations: DAT, direct antiglobulin test; HDFN, hemolytic disease of the fetus and newborn

6 나현진외 : 태아신생아용혈성질환에서직접항글로불린검사및항체용출검사 Table 3. Diagnostic performance of DAT and antibody elution test in HDFN True positive False positive True negative False negative Sensitivity (95% CI) DAT % (14.33% to 51.79%) Antibody % elution test (56.35% to 91.03%) Specificity (95% CI) 90.30% (86.37% to 93.41%) 70.90% (65.40% to 75.99%) Abbreviations: DAT, direct antiglobulin test; HDFN, hemolytic disease of the fetus and newborn; CI, confidence interval. 36.0% 였다. 직접항글로불린검사가음성이나항체용출검사에서양성인신생아는 80명 (24.6%) 으로, anti-a 또는 B가용출된경우가 39명, anti-d 가용출된경우가 39명, anti-b와 anti-d가동시에용출된경우가 1명, 특이성을동정할수없었던경우가 1명이었다. 여기서태아신생아용혈성질환이진단가능한경우가 13명이었다. 이중 anti-a 또는 B가용출된 7명의환아의산모는모두 O형이었다. Anti-D가용출된 6명의신생아는모두 RhD 양성으로, RhD 음성산모에서태어났으며, 1명을제외하고산모의 RhD 면역글로불린투여이력을확인할수있었다. Anti-B와 anti-d가동시에용출된 1명의신생아와특이성이동정불가한항체가용출된 1명의신생아모두태아신생아용혈성빈혈이관찰되지않았다. 직접항글로불린검사가양성이나항체용출검사가음성인경우도 10명 (3.1%) 에서관찰되었다. 태아신생아용혈성질환으로진단가능한신생아는 1명이었다. 이신생아는모체에서유래한것으로의심되는항체가환아의적혈구에서용출되지는않았지만, 정주용면역글로불린 (intravenous immunoglobulin, IVIG) 을사용한이력은없었으며, O형의산모에서출생한 B형신생아였다. 직접항글로불린검사및항체용출검사모두양성인경우는총 27명 (8.3%) 으로, anti-a 또는 B가용출된경우가 11명, anti-d가용출된경우가 13 명이었다. 그리고 3명에서각각 anti-a와 anti-d, anti-e와 anti-c, 그리고 anti-e가 1명씩용출되었다. 이를바탕으로민감도와특이도를계산해보았을때, 직접항글로불린검사의민감도는 30.8% (8/26), 특이도는 90.3% (270/299) 였고, 항체용출검사의민감도는 76.9% (20/26), 특이도는 70.9% (212/299) 였다 (Table 3). 고찰직접항글로불린검사와항체용출검사는혈액은행에서면역용혈성빈혈의진단에가장중요한검사로특히태아신생아용혈성질환에서직접항글로불린검사를통하여모체에서유래한 IgG 항체가태아의적혈구표면에부착되어있음을확인할수있으며, 항체용출검사를통하여이를동정하고모체와태아또는신생아의혈액형상의부적합을증명하는데시행되고있다 [2]. 직접항글로불린검사는비교적표준화되어있는반면항체용출검사의방법은다양하며, 온도변화를이용한방법, 산도 (ph) 변화를이용한방법, 화학물질 (chemical) 을사용하는방법, 유기용매 (organic solvent) 를이용하는방법등이있다 [9-13]. 각항체용출검사법에따라항체의회수율에는차이가있으며, 이중 glycine acid EDTA 법이비교적가장민감한방법으로소개되고있다

7 Korean J Blood Transfus Vol. 28, No. 3, , Dec [10,12,13]. 또한가열용출법을사용할수있지만 ABO 항체이외에는검출이잘되지않아 ABO 부적합에의한태아신생아용혈성질환에서만사용하도록하고있다 [14]. 본기관에서는 2008년을기점으로항체용출검사의방법을가열용출법에서 glycine acid EDTA법으로변경한바있으며, 후향적인자료를바탕으로분석해보았을때이두방법사이에회수율에는통계적으로유의미한차이가없었다. 그러나이를통하여본기관에서항체용출검사의방법을변경하였을때회수율의차이가없었음을알수있었을뿐이며, 두방법상의동등성을엄격하게비교한것은아니다. 실험에영향을주는조건과변수를충분하게통제하여평가를한다면적혈구부착항체의종류에따른각항체용출검사방법의회수율은이전문헌들과마찬가지로차이가날것으로보인다 [9-13]. 본연구에서두검사가동시에의뢰되고혈색소, 망상적혈구, 총빌리루빈검사를시행한 325명의신생아중 27명이직접항글로불린검사와항체용출검사가모두양성을보였으며, 직접항글로불린검사에서는음성이었으나항체용출검사에서양성을확인할수있었던신생아는 80명으로태아신생아용헐성질환의유무에관계없이모체에서유래한항체가태아와신생아의적혈구를감작시킬수있음을알수있었다. 이렇게신생아에따라서로감작되는수준이다른가장큰요인은모체의혈청에존재하는항체의역가가다르기때문으로해석하였다. 특히 ABO 태아신생아용혈성질환의경우항체용출검사에서 anti-a 또는 anti-b가용출되고, 태아신생아용혈성질환으로진단된신생아 9명이모두 O형산모에서출생하였다. O형인사람은 IgG인 anti-a 및 anti-b의역가가 A형이나 B형의산모보다더높게존재함은이미잘알려져있다 [2]. Rh 태아신생아용혈성질 환도산모의혈청에원인이되는 anti-d나 anti-e 등항체의역가가이전임신또는수혈여부등에의하여다를수있다 [2,8,14]. 그러나본연구에서직접항글로불린검사와항체용출검사가음성임에도임상적으로태아신생아용혈성질환으로진단된신생아가 208명중 5 명 (2.4%) 있었다. 이신생아들은다른용혈의원인이될만한증거도찾을수없었다. Desjardins 등 [15] 에의하면만약태아와모체사이에혈액형의부적합이존재한다면직접항글로불린검사나항체용출검사에서환아적혈구의감작이증명되지않더라도용혈의증거가존재할수있다고하였다. 또한본연구에서는 10명에서직접항글로불린검사가양성이나항체용출검사가음성인신생아가있었다. 적혈구에부착된항체의수가작거나결합력이약하여직접항글로불린검사가음성이나항체용출검사가양성으로나올수는있으나그반대의경우는통상적으로적혈구에부착된단백이 IgG 항체가아닌다른단백 (IgM, IgA, 그리고보체 ) 이거나, IgG 항체의비면역성결합, 또는약제에의한용혈성빈혈을의심하게된다 [16-18]. 또한항체용출검사에서시약에의하여항체의분리가실패한경우도가능하다 [5]. 즉, 직접항글로불린검사에서 anti-igg가양성이라고하더라도항상항체가용출되는것은아니고, 특히용출방법에따라그회수율이다를수있다 [9-13]. 실제로본연구에서 10명의신생아가운데태아신생아용혈성질환으로진단할수있었던환자는 1명으로, 이신생아는 O형산모에서출생한 B형으로직접항글로불린검사에서다특이성및 anti-igg 시약에만양성이고 IVIG도사용하지않았으며, 다른비면역성용혈의증거도찾을수없어항체용출검사가위음성이었을것으로추정하였다. 신생아의적혈구가감작됨을직접항글로불린

8 나현진외 : 태아신생아용혈성질환에서직접항글로불린검사및항체용출검사 검사와항체용출검사에서확인하더라도모든신생아가빈혈이나타나는것은아니었다. 직접항글로불린검사음성, 항체용출검사양성신생아 80명가운데 13명 (16.3%) 만이태아신생아용혈성질환에의한빈혈이관찰되었는데직접항글로불린검사와항체용출검사가모두양성인신생아 27 명가운데조금더많은비율인 7명 (25.9%) 에서빈혈이관찰되었다. 즉, 태아신생아용혈성질환은단지태아적혈구의 IgG 감작만을보이는경우부터태아사망까지다양한양상을보일수있으며 [15], 이를진단하기위해서는직접항글로불린검사및항체용출검사뿐만아니라환자의임상양상이나다른검사도같이참고해야할것으로판단된다. 즉, 신생아의적혈구에모체유래항체가부착된정도는용혈의심한정도와잘연관되지않을수있다 [15]. 이는적혈구표면에부착된항체의양이외에도 IgG subgroup 등다른요소가용혈의정도에관여함을의미하는데 [19], 본연구에서는 IgG에대한 subgroup을검사하지않아그부분까지는검증하지못하였다. 태아신생아용혈성질환이의심되는경우일반적으로직접항글로불린검사를시행하게된다. 본기관에서는항체용출검사와병행하여시행한결과직접항글로불린검사에서음성이었던환아의 80명에서항체용출검사양성의결과를보여주었으며, 항체용출검사의민감도가 76.9% 로직접항글로불린검사의 30.8% 보다높았다. Song 등 [6] 에의하면원인항체에따라직접항글로불린검사의민감도는항체의종류마다달랐으며, 전체적으로는 88.1% 였다. 그리고항체용출검사의민감도는전체적으로 100% 였다. 본연구에비하여직접항글로불린검사와항체용출검사의민감도는각각더높았지만, 항체용출검사의민감도가직접항글로불린검사보다더높은점은본연구와일치하였다. 그리고다른문헌에의하면특히 ABO 및 Kell 혈액형불일치에의한경우직접항글로불린검사가음성으로나올수있다고기술하고있었다 [8]. 이를볼때신생아가태아신생아용혈성질환이의심될경우직접항글로불린검사뿐만아니라항체용출검사를동시에실시해야하며, 직접항글로불린검사가음성이라고해서항체용출검사를시행하지않고태아신생아용혈성질환을배제해서는안될것으로판단되었다 [2,6]. 결론적으로본연구에서는혈액은행으로의뢰되었던검사결과를바탕으로후향적으로그임상적의의를분석하여신생아에서태아신생아용혈성질환이의심되는경우두검사를동시에시행하고연관하여해석하는경우좀더민감하게질환을진단할수있음을알수있었다. 또한태아신생아용혈성질환이임상적으로심한정도를두검사가직접적으로반영하지는않겠지만, 항체용출검사로증명한모체유래항체의종류를통하여임상적으로심한정도를간접적으로예측하는데도움을줄수있을것으로보인다. 요약배경 : 태아신생아용혈성질환은모체유래의동종항체로인하여태아및신생아에서면역용혈성빈혈이발생하는질환이다. 진단을위해직접항글로불린검사와더불어항체용출검사가시행될수있으나직접항글로불린검사만단독으로시행하는경우모체유래항체가증명되지않을수있다. 이에본연구에서는태아신생아용혈성질환을진단하기위해두검사가동시에의뢰되었던신생아를대상으로두검사를동시에시행하는것의임상적의미를분석하고자하였다. 방법 : 2005년부터 2015년도까지최근 11년간세브란스병원에서직접항글로불린검사와항체

9 Korean J Blood Transfus Vol. 28, No. 3, , Dec 용출검사가동시에의뢰된신생아에서혈색소, 망상적혈구, 총빌리루빈검사소견이있는신생아에대해의무기록을후향적으로조사하여분석하였다. 그리고각검사결과에따라태아신생아용혈성질환이진단된환자의수를분류하고, 직접항글로불린검사와항체용출검사의민감도및특이도를구하였다. 결과 : 대상신생아 325명중직접항글로불린검사와항체용출검사결과가각각음성과음성인경우는 208명 (64.0%), 음성과양성인경우는 80명 (24.6%), 양성과음성은 10명 (3.1%), 그리고양성과양성인경우는 27명 (8.3%) 이었다. 임상적진단을연관하여분석한결과태아신생아용혈성질환에서두검사를동시에시행할경우더민감하고특이적으로진단이가능하였다 ( 항체용출검사의민감도 76.9%, 직접항글로불린검사의특이도 90.3%). 태아신생아용혈성질환이의심되어검사가의뢰된신생아가운데용혈성빈혈까지의임상증상을보인경우는 26명 (8.0%) 이었다. 결론 : 태아신생아용혈성질환이의심되는경우직접항글로불린검사와항체용출검사를병행하여시행할경우그진단율을높일수있으며항체용출검사로증명한모체유래항체의종류를통하여용혈의임상적중증도를간접적으로예측할수있을것으로보인다. References 1. de Haas M, Thurik FF, Koelewijn JM, van der Schoot CE. Haemolytic disease of the fetus and newborn. Vox Sang 2015;109: Han KS, Park KU, Song EY. Transfusion medicine. 4th ed. Seoul: Korea Medical Book Publisher, 2014: Han KS, Park KU, Song EY. Transfusion medicine. 4th ed. Seoul: Korea Medical Book Publisher, 2014: Yazer MH, Triulzi DJ. The role of the elution in antibody investigations. Transfusion 2009; 49: Garratty G. Immune hemolytic anemia associated with negative routine serology. Semin Hematol 2005;42: Song EY, Han BY, Hwang DH, Choi JH, Park SS, Kim EC, et al. Analysis of antibodies causing hemolytic disease of the newborn. Korean J Blood Transfus 1998;9: Byrne PC. Use of a modified acid/edta elution technique. Immunohematology 1991;7: Kliegman R, Stanton B, Geme JS, Schor NF, Behrman RE. Nelson textbook of pediatrics. 20th ed. Philadelphia, PA: Elsevier/Saunders, 2016: South SF, Rea AE, Tregellas WM. An evaluation of 11 red cell elution procedures. Transfusion 1986;26: Burin des Roziers N, Squalli S. Removing IgG antibodies from intact red cells: comparison of acid and EDTA, heat, and chloroquine elution methods. Transfusion 1997;37: Alvarez A, Rives S, Montoto S, Sanz C, Pereira A. Relative sensitivity of direct antiglobulin test, antibody's elution and flow cytometry in the serologic diagnosis of immune hemolytic transfusion reactions. Haematologica 2000;85: Lee SH, Oh YC, Kim KH, Han KS, Han BY, Kim SI. IgG elution methods using glycine acid EDTA: comparison to chloroquine method. Korean J Blood Transfus 1993;4: Katharia R, Chaudhary RK. Removal of antibodies from red cells: comparison of three elution methods. Asian J Transfus Sci 2013;7: Fung MK. Technical manual. 18th ed. Bethe

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untitled 대한수혈학회지 : 제 27 권제 2 호, 2016 The Korean Journal of Blood Transfusion Vol. 27, No. 2, 183-187, August 2016 http://dx.doi.org/10.17945/kjbt.2016.27.2.183 pissn 1226-9336 eissn 2383-6881 Case Report 항 -S 항체에의한태아신생아용혈성질환