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소현 목
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1 소동물혈액질병에대한임상병리학적진단방법 제 3 장혈액도말표본 채준석

2 문진 현증 임상병리검사 검사 예후

3 임상병리검사 혈액검사 혈청화학검사 면역화학검사 호르몬검사 뇨검사 분변검사 세균검사 세포학적검사 분자유전검사 기타검사

4 임상병리검사건수가왜늘어가는가? 경제성장에따른반려동물에대한가치인식변화 양질의진료를받기를원하는보호자의증가 수의사의정확한진단 진단장비의개발및가격하락

5 혈액도말검사 혈액검사의기본 다른어떤단일검사항목보다가치있는정보제공 기계적으로수치화하지못함 수의사의바쁜진료 임상병리사 / 수의간호사 / 수의보조원등의교육 시간의소요 직접경험하지못한중요성의인식부족

6 혈액도말검사의중요성 표준혈액학적검사 환자건강진단에있어서매우기본적인중요한진단법 백혈구감별계산 적혈구의형태변화 적혈구및백혈구내병원체감염 외인성독소의노출 면역매개성질환 특정세포의숫적변화 ; 백혈병등

7 혈액도말검사의목적 질병의진단 ; 확진 치료방법의결정 치료반응에대한관찰 단기또는장기의예후판정

8 혈액도말검사의가치및주의사항 혈액검사에의한수치의보충 혈액검사수치에대한객관성제공 환자의병력 과거실험실검사결과 현재환자의상태파악 최대한의정보획득

9 혈액도말검사의경제성 / 문제점 경제성 고가장비의불필요 값싼소모품 빠른시간내에결과해석 정확한진단 문제점 숙달 전문지식 의지

10 장비 현미경 ( 쌍안 ): 100, 200, 400, 1,000 배용 준비물 염색시약 : Diff-Quick Staining Kit (International Reagents Corp. Kobe, Japan) 또는다른제품 염색용병 (Coplin jar) 슬라이드 커버글라스 유리봉 이멀존오일 기타 장비및준비물

11 시료채취 큰정맥에서 항응고제 (EDTA) 냉장보관시 4시간전에사용 냉장보관혈액은실온으로올려사용 채혈량과항응고제의비율을맞출것

12 혈액수치의정상범위 표준혈액학적정상범위적용 지역및환자의품종등을고려하여각병원에맞는정상범위설정 생리적인요인에의한수치의변화 어린동물, 임신, 일시적인흥분, 특정품종등

13 혈액도말제작 슬라이드법 새 slide 를사용 diamond pencil 로표시 항응고제혼합하지않은신선혈액이제일좋음 EDTA- 혈액은 15 분이내에도말 신속하게건조 : crenation 방지 1 시간이내염색또는무수 methanol 로고정 (15 분간 ) Giemsa 염색을할때는사전에고정이필수적

14 혈액도말제작 커버글라스법 표시하기불편 다른슬라이드방법

15 고정 세포의자가용해성변성을방지 초생체염색이외의염색에서준비과정 고정액의종류 무수 methanol, ethanol, formaldehyde Wright 염색과같은 Romanowsky type 의염색은고정불필요

16 염색 Romanowsky-type 의염색 Wright 염색 Giemsa 염색 Leishman 염색 Wright-Giemsa 염색 Quick stains New methylene blue (Basic blue 24, Sigma Chemical CO.) Camco Quick stain (Cambridge Chemical Products Inc.) Diff-Quick (Hartman-Leddon Co. Inc.) Hemal Stain set (Hemal Stain Co.)

17 Romanowsky-type 의염색 a. polychromed methylene blue + eosin b. 염색원리 polychromed methylene blue( 알카리성 ) --- 산성부분염색 eosin( 산성 ) --- 세포의알카리성부분염색 c. 물 (ph 6.6~6.8) ph NaH 2 PO 4.H2O (9.2g/L) ml Na 2 HPO 4 (9.5g/L) ml

18 Wright 염색 완제품 ( 용액 ) Wright 염색분말 0.5g + 무수 methanol 300ml 약절구와약공이를이용하여 grinding 2~4 주간숙성. 숙성기간 1 일 1 회흔들어줄것. 숙성완료후여과하여사용. 염색절차 염색액올려놓고 3 분 완충증류수를동량올려놓고입으로불어서혼합 3~5 분간염색 물로철저하게세척 슬라이드뒷면의염색액을천으로훔친다 건조

19 Giemsa 염색 - 주혈기생충과봉입체염색이양호 - 완제품용액 - Giemsa stock solution Giemsa powder 3.8g glycerin 200ml 60 도에서 2 시간정치 methanol 312ml 첨가 - 염색절차 a. 완충증류수 7~10 : Giemsa stock sol. 1 여과 b. 30~60 분간염색 c. 물로세척

20 Wright-Giemsa 염색 (modified Wright's stain) Wright염색분말 300mg + Giemsa 30mg + 무수methanol 100ml 24~48시간정치, 여과 염색절차는 Wright염색과동일

21 Quick stains A. New methylene blue (Basic blue 24, Sigma Chemical CO.) B. Camco Quick stain (Cambridge Chemical Products Inc.) C. Diff-Quick (Hartman-Leddon Co. Inc.) D. Hemal Stain set (Hemal Stain Co.)

22 New methylene blue (Basic blue 24, Sigma Chemical CO.) 가. 조제 New methylene 0.5g 0.85% 식염수 100ml Formalin 1ml * 여과하여착색병에보관 나. 완제품용액시판됨다. 염색절차도말표본 --- 건조고정안함 라. 장점 --- 신속한 screening( 세망적혈구, Heinz 소체 ) 마. 단점호산성과립 --- 염색불량 Haemobartonella --- 세망적혈구와혼동영구보존불가

23 염색 세망적혈구염색 생체염색 (New methylene blue*, Brilliant cresyl blue) Prussian blue 반응 담적혈구, 담백혈구

24 세망적혈구염색 생체염색 (New methylene blue*, Brilliant cresyl blue) * New methylene blue 0.5g Potassium oxalate 1.6g 증류수 100ml 염색절차 ( 건조표본또는습윤표본 ) 가. 건조표본혈액 1 vol + 염색액 1 vol 혼합 (cavity slide glass) 5~20 분간염색혼합액 1 방울로도말표본제작 Romanowsky 염색으로 counterstain 나. 습윤표본 (wet preparation) 혈액 1 방울 + 염색액 2 방울 혼합 (15 초간 ) 다. 결과라. 세망적혈구의계산 세망적혈구적혈구수 (500~1000) X 100

25 Prussian blue 반응 적응증용혈성빈혈 ( 담철적혈구와담철백혈구의출현, 예 : 말의전염성빈혈 ) 골수의철분저장상태 A. 담철적혈구 (siderocyte) -- 비혈색소성철분과립을함유하는적혈구염색액 ( 사용직전제조 ) 2% potassium ferrocyanide 25ml 1% HCl 75ml 염색절차 Romanowsky type 염색으로염색한표본 10 분간염색 물로세척 (pink 색을나타낼때까지 ) 판단 --- siderotic granule 은청색

26 B. 담철백혈구 (sideroleukocyte) 백혈구도말표본 (leukocyte smear) 제작혈액 9ml + 10% sodium citrate 1ml 적혈구가가라앉도록 1 시간정치 상청액을 2000rpm 으로 5 분간원심분리 상청액은버리고침전물을재부유 ( 농축백혈구 ) 두껍게도말, 건조, 고정 염색새로제조한염색액으로 20 분간염색 10~20% HCl 1 vol. 10% potassium ferrocyanide 1 vol. 흐르는물로 3~5 분간세척다음중한가지로 counterstain 0.2% pyronine 10 분 1% safranine 1 분 2% carbol fuchsin 30 초 계산유침렌즈사용 100 개의시야에나타나는총백혈구수와담철백혈구수를계산총백혈구 10,000 개중담철백혈구수로표현

27 염색불량의원인 전체적으로너무푸르게염색 완충증류수, 세척용물, 염색액등이너무알카리성 도말이너무두꺼울때 슬라이드에알카리성오염물질 세척부족 완충증류수로희석하기전너무오래염색 백혈구의핵이희미한청색이고, 적혈구가너무붉게염색 완충증류수, 세척용물, 염색액등이너무산성 슬라이드에산성오염물질

28 염색불량의원인 전체적으로너무희미하게염색 염색시간부족 염색액의과도한희석 과도한세척 더운물로세척 침전물 척부족 여과하지않은염색액 염색시간과잉으로알콜성염색액의증발

29 도말표본검사 저배율 고배율

30 적혈구의검사의대요 A. 크기부동세포증 ( 적혈구대소부동증 ) anisocytosis 정적혈구성 normocytic 대적혈구성 macrocytic 소적혈구성 microcytic B. 형태변형적혈구 poikilocyte 비박적혈구 leptocyte 표적적혈구 target cell folded cell 유극적혈구 acanthosis 구상적혈구 spherocyte 분열적혈구 schistocyte C. 분포단독 single 연전형성 rouleau formation 응집 agglutination D. 색정색소성 normochromic 저색소성 hypochromic 다염성 polychromasia E. 비정상적구조 Howell-Jolly 소체 Heinz 소체 Pappenheimer 소체 ( 호염기성철분과립 ) 호염기성점 basophilic stippling 유핵적혈구기생충봉입체 ( 예 : 디스템파봉입체 ) 핵의파열

31 백혈구검사의대요 A. 백혈구수의추산 B. 관찰사항크기세포질 - 색 - 상대적인양 - 과립핵 - 형태 - 색 - 염색질구조 - 핵소체 C. 형태학적이상 - 독성변화 : azur 호성과립, 공포, 거품형 (foamy), 호염기성, 호중구의 Döhle 봉입체 - 핵의변성 - 호중구핵의과분엽 (hypersegmentation) - 호중구핵의 hyposegmentation (Pelger-Huët anomaly): 유전성 - giant bizarre forms D. 세포질내봉입체 : Ehrlichia, distemper, 적혈구와세균의탐식 E. 백혈구감별계산최소한 100 개관찰백혈구의상대수와절대수

32 혈소판검사의대요 A. 분포 B. 혈소판수의추산 ( 유침시야당 4 개이상이면정상 ) C. 형태적이상 : 저과립, 호염기성, 공포, 거대혈소판 * giant form 의증가는골수의활성증가를제시 ( 예 :theileriosis)

33 기타소견 A. 비만세포, 형질세포, 대식세포, 거대핵세포, 종양세포 B. 주혈기생충 ( 예 :Trypanosomes) C. Microfilariae (Dirofilaria)

34 조혈작용의개관

35 정상적혈구의발육과정

36 White blood cells Neutrophil Monocyte Lymphocyte Eosinophil Basophil

37 적혈구의형태

38 적혈구검사의개요 크기 부동세포증 ( 적혈구대소부동증 ) anisocytosis 정적혈구성 normocytic 대적혈구성 macrocytic 소적혈구성 microcytic 형태 변형적혈구 poikilocyte 비박적혈구 leptocyte 표적적혈구 target cell folded cell 유극적혈구 acanthosis 구상적혈구 spherocyte 분열적혈구 schistocyte 분포 단독 single 연전형성 rouleaux formation 응집 agglutination 색 정색소성 normochromic 저색소성 hypochromic 다염성 polychromasia 비정상적구조 Howell-Jolly 소체 Heinz 소체 Pappenheimer 소체 ( 호염기성철분과립 ) 호염기성점 basophilic stippling 유핵적혈구 기생충 봉입체 ( 예 : 디스템파봉입체 ) 핵의파열

39 백혈구검사의개요 백혈구수의추산 관찰사항 크기 세포질 : 색, 상대적인양, 과립 핵 : 형태, 색, 염색질구조, 핵소체 형태학적이상 독성변화 : azur 호성과립, 공포, 거품형 (foamy), 호염기성, 호중구의 Döhle 봉입체 핵의변성 호중구핵의과분엽 (hypersegmentation) 호중구핵의 hyposegmentation (Pelger-Huët anomaly): 유전성 Giant bizarre forms 세포질내봉입체 : Ehrlichia, distemper, 적혈구와세균의탐식 백혈구감별계산 최소한 100 개관찰 백혈구의상대수와절대수

40 혈소판검사의개요 분포 혈소판수의추산 ( 유침시야당 4 개이상이면정상 ) 형태적이상 : 저과립, 호염기성, 공포, 거대혈소판 * Giant form 의증가는골수의활성증가를제시 ( 예 : Theileriosis)

41 기타소견 비만세포 형질세포 대식세포 거대핵세포 종양세포 리케치아 주혈기생충 ( 예 : Babesia, Trypanosoma, Ehrlichia, Anaplasma 등 ) Microfilariae (Dirofilaria)

42 적혈구형태 특징 경우 기전 圓鉅齒狀赤血球 Crenated cell / 有棘赤血球 Acanthocyte 기술적인실수 요독증 Pyruvate kinase 결핍증 시간이경과된혈액의수혈 위암 출혈성위궤양 삼투압변화 圓鉅齒狀赤血球 짧은돌기가전표면에고른간격으로존재 돌기의수가 10 개이상 가역적반응 有棘赤血球 돌기의형태가길고, 끝이둥글고, 간격이불규칙 돌기의수가 5-10 개 불가역적변화 선천성무베타진방단백혈증 알콜성간 비장적출술 흡수장애 잘밝혀지지않음 막지질변화 (?)

43 적혈구생산증가의징후 적혈구대소부동증 (anisocytosis) 대적혈구 (macrocyte) 유핵적혈구 (metarubricyte) 세망적혈구 (reticulocyte) 다염성적혈구 (polychromasia) Howell-Jolly 소체 Basophilic stippling

44 기타적혈구이상 A. 유극적혈구 (acanthosis) B. Bowl or cup-shaped erythrocyte( 습윤표본 ), 또는 Punched out center( 염색도말표본 ) 부적합한적혈구기질구조 모세혈관통과후영구적변형 (ATP) (1) 급성질병 --- 모든동물에공통적 (2) 만성질병 --- 개에서흔히발견 (3) 인공산물 (artifact) C. Distemper 봉입체 --- 다양한크기의담청색봉입체 (1) 희귀하게출현 (2) Howell-Jolly 소체보다큼

45 기타적혈구이상 D. ER 소체 (erythrocyte refractile body) - 비염색습윤표본 - Heinz 소체 : new methylene blue 염색도말표본 ( 흑청색 ) (1) 고양이혈액에정상적으로 10% 까지 (2) 변질된 Hb --- 중독성변화 ( 양파 ) (3) 독성약물에의한용혈성빈혈 - phenothiazine 과그유도체 - methylene 을함유하는요로방부제 - phenylhydrazine -sod. nitrate - naphthalene - G-6-phosphate dehydrogenase 결핍증환축 primaquine, methylene blue, sulfapyridine, chloramphenicol

46 기타적혈구이상 E. 저색소성적혈구 (hypochromasia) MCHC (1) Hb 합성에대한대사성또는중독성간섭 (2) 결핍증 --- 철분, 구리, pyridoxine, riboflavin, pyruvate kinase F. 비박적혈구 (leptocyte) : target cell, folded cell (1) 다음과관련이있을때에 - 골수억제성빈혈 ( 예 : 말기신장질병 ) - 노령화 - 만성감염 --- 적혈구조혈의감소를제시 - 비장질병과비장적출술 - 과지방혈증, 과콜레스테롤혈증 - 담관폐쇄 (2) buffy coat 의핑크빛

47 기타적혈구이상 G. 소적혈구 (microcyte) --- MCV (1) 철분결핍성빈혈 H. 난원형적혈구 (ovalocyte) (1) 낙타과동물 ---alpaca, llama, camel, vicuna (2) 대적혈구성빈혈일때증가 I. 변형적혈구 (poikilocyte) (1) 혈관종양 (2) 혈관염 (3) 혈전증 (4) 심장사상충 (5) 요독증 --- 실험실내에서적혈구가쪼개짐 J. 연전형성 (rouleaux formation)

48 기타적혈구이상 K. 분열적혈구 (schistocyte) --- 불규칙하게쪼각난적혈구 (1) 노령화 (2) 용혈성빈혈 (3) 미세혈관병변 - 소혈관의혈전 - 비장종양 (splenic neoplasm) L. 담철적혈구 (siderocyte) - 용혈성빈혈, 비장적출술 - Prussian blue reaction 에의해청색으로염색 - Romanowsky 염색에의해호염기성 rod(pappenheimer 소체 ) - Howell-Jolly 소체와의감별 Howell-Jolly 소체는 Prussian blue reaction 에음성, Romanowsky 염색에양성

49 기타적혈구이상 M. 구순적혈구 (stomatocyte) (1) 유전성용혈성빈혈 --- Alaskan Malamute 종 ( 개 ) N. 원거치상적혈구 (crenation)

156 Korean J Clin Lab Sci. 2011, 43(4) : ISSN Change of Blood Cells Number from Capillaries and Venous Blood of 20 s Healthy Adults

156 Korean J Clin Lab Sci. 2011, 43(4) : ISSN Change of Blood Cells Number from Capillaries and Venous Blood of 20 s Healthy Adults 156 ISSN 1738-3544 Change of Blood Cells Number from Capillaries and Venous Blood of 20 s Healthy Adults Ji-Yeong Seon and Jae Sik Lee Department of Clinical Laboratory Science, Hyejeon College, Hongseong