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상범 서문
5 years ago
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1 저작자표시 2.0 대한민국 이용자는아래의조건을따르는경우에한하여자유롭게 이저작물을복제, 배포, 전송, 전시, 공연및방송할수있습니다. 이차적저작물을작성할수있습니다. 이저작물을영리목적으로이용할수있습니다. 다음과같은조건을따라야합니다 : 저작자표시. 귀하는원저작자를표시하여야합니다. 귀하는, 이저작물의재이용이나배포의경우, 이저작물에적용된이용허락조건을명확하게나타내어야합니다. 저작권자로부터별도의허가를받으면이러한조건들은적용되지않습니다. 저작권법에따른이용자의권리는위의내용에의하여영향을받지않습니다. 이것은이용허락규약 (Legal Code) 을이해하기쉽게요약한것입니다. Disclaimer

2 치의학석사학위논문 복합레진모노머가치아우식증 원인균성장에미치는영향 2015 년 2 월 서울대학교치의학대학원 치의학과 문석준

3 복합레진모노머가치아우식증 원인균성장에미치는영향 지도교수안석준 이논문을치의학석사학위논문으로제출함 2014 년 10 월 서울대학교치의학대학원 치의학과 문석준 문석준의석사학위논문을인준함 2014 년 11 월 위원장임원희 ( 인 ) 부위원장안석준 ( 인 ) 위원양일형 ( 인 )

4 국문초록 복합레진에서모노머가폴리머로전환되는중합율은 50-70% 정도이기때문에복합레진의표면에서중합되지않은자유모노머들이방출된다. 중합이완료된폴리머또한구강내에서추가적으로가수분해되어모노머를방출하게된다. 본연구의목적은여러가지모노머들이구강내에서치아우식증원인균인 Streptococcus mutans 와 Streptococcus sobrinus 의성장에미치는영향을평가하는것이다. 다음 9종류의모노머를실험에사용하였다 : Bisphenolglycidyl methacrylate(bis-gma), 2-Dimethylaminoethyl methacrylate(deama), Ethylene glycol methacrylate phosphate(egmp), Glycidyl methacrylate(ga), 2-hydroxyethyl methacrylate(hema), Methyl methacrylate(mma), Octadecylaminodimethyltrihydroxysilylpropyl ammonium chloride(oac), Triethyleneglycoldimethacrylate(TEGDMA), Urethane dimethacrylate(udma). 각각의모노머들을유기용매인 dimethyl sulfoxide(dmso) 에용해시킨후 1% DMSO 에서최종농도가 0, 5, 10, 50, 100ppm 로제작하여실험에사용하였다. 성장률을비교하기위해 brain heart infusion(bhi) 액체배지에 1:100으로희석되어접종한후밤새배양시킨 S. mutans UA159 와 S. sobrinus SL-1 을접종한후 37 o C, 5% CO 2 환경에서 OAC는 72시간동안, 그리고나머지모노머들은 17시간동안배양시켰다. 세균의성장을관찰하기위해일정한시간간격으로 600nm 파장의흡광도를측정하였다. 세균의성장이정체기에도달했을때 S. mutans 는 10-5, S. sobrinus는 10-4 으로희석한후 BHI agar plate에미생물을

5 spreading 하고 48시간동안 37 o C의배양한후콜로니의숫자를세었다. 콜로니숫자는 CFU/ml 로표현되었다. 모든실험은 3회반복되었다. 본연구의결과 DEAMA, GA, HEMA, MMA는흡광도를이용한성장평가와정량분석을통한성장평가모두미생물의성장에영향을끼치지않는것으로나타났다. Bis-GMA 와 UDMA는흡광도를이용해서성장평가를했을때높은농도에서 S. mutans 와 S. sobrinus 의성장률을억제하는것으로나타났으나배양기간동안미생물군락의수는유의한차이가없었다. EGMP와 TEGDMA는흡광도를이용한성장평가에서는 S. sobrinus 의성장을촉진시켰으나배양기간동안미생물군락의수는유의한차이가없었다. 이러한결과는 Bis- GMA, UDMA, EGMP, 그리고 TEGDMA를이용한실험에서나타난흡광도의변화가세균성장의억제나촉진으로부터기인한것이아니라는것을의미한다. OAC의첨가는 S. mutans와 S. sobrinus 모두에서농도가높아질수록성장을유의하게억제하는것으로나타났다. 특히 S. mutans에서는 10ppm, S. sobrinus에서는 50ppm 의 OAC는세균의성장을완전하게억제하는것으로나타났다. 본연구의결과는복합레진에 OAC의첨가를통해복합레진을통한치아의수복치료시발생하는이차우식증의발생률을낮출수있을가능성을제시하였다. 주요어 : Streptococcus mutans, Streptococcus sobrinus, monomer, 성장분석, 정량분석 학번 :

6 목차 I. 서론 1 II. 연구대상및방법 4 i. 연구대상 4 ii. Cell 접종과 transfer 5 iii. 흡광도를이용한성장평가 5 iv. 정량분석을이용한성장평가 6 III. 연 구 결 과 6 IV. 고 찰 8 V. 결 론 14 참고문헌 15 Fi gur e & Ta bl e 19 Abstract 55

7 I. 서론 현재치과영역에서우식에이환된치아의수복에사용되는수복재료의종류는매우다양하다. 그중아말감은과거에가장많이사용되었던재료로치과재료에적합한강도를가지고있으며그술식이간단하고재료와기구의조작이쉬워사용하기편리하다는장점이있다 [1]. 그러나수은을포함한아말감이인체에서나타낼수있는독성과심미적이지못한색등을이유로점점사용이줄어들면서복합레진이치아수복재료로가장많이사용되고있다 [1]. 복합레진은 polymer matrix와이 matrix에 siloxane coupling 을통해중합하는 inorganic filler로구성된다 [2]. 이러한 polymer matrix는 monomer 들로구성된다 [2]. 그리고제품에따라사용목적과특성에맞게 initiator, co-initiator, inhibitor 등이추가적으로포함될수있다 [2]. 복합레진은일반적으로열중합, 광중합, 화학중합, 그리고이들의조합인이중중합을통해서폴리머로전환된다 [2, 3]. 이처럼열, 화학물질, 가시광선등의에너지에의해자유라디칼이발생하면개시, 성장, 정지의 3단계를거쳐서복합레진의중합이진행된다 [2, 3]. 하지만분자의구조적제한때문에이런중합반응은완전히이루어지지못하고자유모노머로잔존한다 [4]. 일반적인 1

8 복합레진에서모노머가폴리머로전환되는비율인 degree of conversion 은 50~70% 정도이다 [4]. 이처럼모노머가폴리머로중합될때완전한중합이이루어지지않아중합되지않은자유모노머가표면으로방출될수있으며, 추가적으로중합이완료된복합레진의경우에도구강내환경에서타액에의해가수분해되거나기계적마모에의해점차분해되어모노머를방출할수있다 [5, 6]. 복합레진의중합후에잔존하거나분해되어방출되는자유모노머의독성에대한많은연구가진행되어왔다 [7-11]. 이러한자유모노머들은치아우식증을일으키는미생물의증식을야기할수있으며세포수준에서의독성을통해치수의변성과치은경계의퇴축을야기하고일부환자에서는알레르기반응을나타낸다고알려졌다 [7-11]. 기존연구들은복합레진에서유래한모노머가치아우식증원인균의성장에미치는영향을평가했다 [12,13]. 그러나소수성을띄는모노머때문에실제구강내환경과유사하게충분한양의모노머를녹일만한용매를찾지못하면적은양의모노머를실험에사용할수밖에없다. 하지만복합레진과치아사이의계면에는복합레진에서유리된모노머가구강으로유출되지못해많은양이존재한다는것을고려하면충분한양의모노머를사용하는것이바람직하다 [6]. 이전연구에서 triethyleneglycol dimethacrylate(tegdma) 를 DMSO에녹여 1000ppm 농도에서실험하면치아우식증의원인균으로알려진 Streptococcus sobrinus 의흡광도를 2

9 증가시킨다는것을보여주었다 [13]. 그러나이러한흡광도의증가는미생물의성장을촉진시켜서나타난것이아니라미생물과모노머사이의상호작용에의한 S. sobrinus 주변침전물의증가때문에나타난결과로밝혀졌다 [13]. 이처럼침전물이나타나게되면모노머가실제치아우식증원인균의성장에미치는영향에대한정확한정보를얻기힘들다. 따라서침전물이발생되지않는최대한의모노머농도에서구강내미생물의성장에관한실험이필요하다. 본연구의목적은미생물의성장을억제할수있는 octadecylaminodimethyltrihydroxysilylpropyl ammonium chloride(oac, Vericom, Anyang, Korea) 가포함된모노머와기존복합레진에사용되는모노머들이치아우식증원인균인 Streptococcus mutans와 S. sobrinus 의성장에미치는영향을성장분석을통해서평가하는것이다. 본연구에서는모노머가가지는소수성때문에수용성세균배양액에잘녹지않아서유기용매인 DMSO(Sigma-Aldrich, Milwaukee, WI, USA) 를이용하여모노머를구강내환경과비슷한만큼충분한양을녹이되기존연구에서나타났던미생물과모노머의상호작용으로인한침전물이발생하지않는 100ppm까지의모노머농도를실험에서사용하였다 [13]. 또한기존연구에서는흡광도의증가를이용하여세균의성장을분석하였으나흡광도의증가가미생물의성장을표현하는지아니면미생물과모노머사이의다른상호작용에의한침전물의생성으로 3

10 인한흡광도의변화인지명확하지않았다 [14]. 이처럼흡광도만사용한경우흡광도와미생물성장의연관성을판단하기에부족하므로본연구에서는성장곡선의정체기에도달한세균의정량분석을추가적으로수행하여모노머가 S. mutans와 S. sobrinus의성장에미치는영향을확인하고자하였다. II. 연구대상및방법 i. 연구대상 다음 9 종류의모노머를실험에사용하였다 : Bisphenolglycidyl methacrylate(bis -GMA)(Sigma-Aldrich, Milwaukee, WI, USA), 2-Dimethylaminoethyl methacrylate(deama)(sigma-aldrich), Ethylene glycol methacrylate phosphate(egmp)(sigma-aldrich), Glycidyl methacrylate(ga)(sigma-aldrich), 2-hydroxyethyl methacrylate(hema)(sigma-aldrich), Methyl methacrylate(mma)(fluka, Rokonkoma, NY, USA), OAC(Vericom), TEGDMA(Sigma-Aldrich), Urethane dimethacrylate(udma)(esstech, Essington, PA, USA). 각각의모노머들을유기용매인 DMSO 에녹인후 1% DMSO 에서배지내의모노머의최종농도가 0, 5, 10, 50, 100ppm 가되도록농도를조정한후실험에사용하였다. 4

11 ii. Cell 접종과 transfer Brain heart infusion(bhi, Difco, Sparks, MD, USA) 액체배지에 S. mutans UA159 와 S. sobrinus SL-1 콜로니를접종한후 CO 2 incubator(forma Direct Heat, Thermo scientific, Mississauga, ON, Canada) 에서정체기까지 16 시간성장시켰다. 성장한미생물을 준비해둔 BHI 액체배지에옮기고다시 CO 2 incubator 에서 대수기까지성장시킨미생물들을 Hekios beta(thermo scientific, Mississauga, ON, Canada) 를통해 OD 600 을측정하였다. iii. 흡광도를이용한성장평가 OD 600 값이 0.5에가장근접하게성장한미생물을 200ul 을 20ml 의 BHI 액체배지에접종한후혼합해서 900ul 씩 1.5ml tube에나눠담았다. 각각의 1.5ml 튜브에각농도별로모노머를 1/100 인 9ul씩넣었다. 96 well plate의각 well 당치아우식증원인균과함께각각의모노머농도가 0, 5, 10, 50, 100ppm 이되도록 250um씩배분한후산소와의접촉을막아주기위해미네랄오일을 1~2 방울떨어뜨린후 37 o C, 5% CO 2 환경에서정체기까지 17시간성장시켰다. 17시간동안미생물의성장과정을 Infinite F200 pro(tecangmbh, Grödig, Salzburg, Austria) 를이용하여 600nm 5

12 파장에서흡광도를측정한후모노머농도가미생물성장에미치는영향을분석하였다. OAC는성장이지연되어늦게자라는경향이있으므로정체기까지미생물을성장시키기위해 72시간동안흡광도를측정하였다. iv. 정량분석을이용한성장평가 세균의성장이정체기에도달하였을때총 3번의반복실험중두실험의 cell suspension 에서채취한미생물을 S. mutans는 10-5, S. sobrinus는 10-4 으로희석한후 Easy spiral pro(interscience, St. Nom, France) 를사용하여 2개의 BHI agar plate 에희석한미생물을 10ul씩 spreading 하고 48시간동안 37 o C의혐기성환경에서성장시킨후 colony counting 을수행하여정량분석을이용한성장평가를하였다. 수행한결과는희석배수인 S. mutans는 10-5, S. sobrinus는 10-4 정을곱하여보정하였다. 정량분석을이용한성장평가결과는 SPSS ver. 10.2(SPSS Inc., Chicago, IL, USA) 를이용하여 Kruskal-Walis 검정후 Mann-Whitney 검정을수행하였다. III. 연구결과 9 가지의모노머중에 DEAMA(Figs. 3, 4, 21 and 22), GA(Figs. 7, 8, 25 and 26), HEMA(Figs. 9, 10, 27 and 28), MMA(Figs. 11, 12, 6

13 29 and 30) 에서는모노머의첨가가 S. mutans와 S. sobrinus 두미생물의성장에영향을끼치지않았다. 흡광도를이용한성장평가와정량분석을이용한성장평가 (p>0.05) 사이의결과차이를나타내지않았다. OAC의첨가는 S. mutans(figs. 13 and 14) 와 S. sobrinus(figs. 31 and 32) 두미생물의성장을유의하게억제하는것으로나타났다. S. mutans 에서 5ppm 은흡광도를이용한성장평가에서그래프의변화를살펴보았을때성장의총량을억제시키는효과도있지만성장의속도를지연시키는효과가더크게나타났다. 10ppm 이상에서는성장을완전히억제시켰다. S. sobrinus 에서 5ppm 은흡광도를이용한성장평가에서그래프의변화를살펴보았을때성장의총량을다소성장시키는경향을나타냈지만성장의속도를지연시키는효과가또한나타났다. 10ppm 에서는성장속도의지연효과와성장량의억제효과가크게나타나며 50ppm 과 100ppm에서는성장을완전히억제시켰다. 흡광도를이용한성장평가와정량분석을이용한성장평가 (p<0.05) 사이의결과차이를나타내지않았다. 흡광도를이용한성장평가에서 Bis-GMA는 S. mutans(figs. 1 and 2) 와 S. sobrinus(figs. 19 and 20) 모두에서첨가된모노머의농도가높아질수록성장을억제하였다. 그러나흡광도를이용한성장평가와정량분석을이용한성장평가 (p>0.05) 사이의결과차이가있었다. 정량분석을이용한성장평가결과를 Mann-Whitney 검정하였을때모노머의농도에따라유의한차이가나타나지않았다. EGMP는 S. sobrinus(figs. 23 and 24) 에서는농도가높아짐에따 7

14 라성장을촉진시키는역할을하는것으로나타났으나 S. mutans(figs. 5 and 6) 에서는유의한변화가없는것이흡광도를이용한성장평가에서확인되었다. 그러나흡광도를이용한성장평가와정량분석을이용한성장평가 (p>0.05) 사이의결과차이를나타냈다. 정량분석을이용한성장평가결과를 Mann-Whitney 검정하였을때모노머의농도에따라유의한차이가나타나지않았다. 흡광도를이용한성장평가에서 TEGDMA는 S. sobrinus(figs. 33 and 34) 에서는농도가높아짐에따라성장을촉진시키는역할을하는것으로나타났으며 S. mutans(figs. 15 and 16) 는유의한변화가없는것이흡광도를이용한성장평가에서확인됐다. 그러나흡광도를이용한성장평가와정량분석을이용한성장평가 (p>0.05) 사이의결과차이를나타냈다. 정량분석을이용한성장평가결과를 Mann- Whitney 검정하였을때모노머의농도에따라유의한차이가나타나지않았다. UDMA는 S. mutans(figs. 17 and 18) 에서는저농도에서는변화가없다가 100ppm 에서, S. sobrinus(figs. 35 and 36) 에서는첨가된모노머의농도가높아질수록미생물의성장을억제하는것이흡광도를이용한성장평가에서확인됐다. 그러나흡광도를이용한성장평가와정량분석을이용한성장평가 (p>0.05) 사이의결과차이를나타냈다. 정량분석을이용한성장평가결과를 Mann-Whitney 검정하였을때모노머의농도에따라유의한차이가나타나지않았다. IV. 고찰 8

15 치아우식증의수복치료나교정치료등치과영역에서복합레진의사용이점차늘어나고있다 [2]. 이로인해복합레진의사용목적또한다양해지면서이에따라다양한물성이요구되었고복합레진을구성하는성분도점점다양해지고있다. 복합레진의사용에서중합되지못한자유모노머들과중합이완료된복합레진의분해산물이구강내의치은열구나수복물계면에상당량존재하게되고 [6] 이런중합되지못한모노머들과중합이완료된복합레진의분해산물이체내에서나타내는독성에대한연구들이많이이루어진상태이다 [5-11]. 이러한자유모노머들은치아우식증원인균들의증식을야기할수있으며세포수준에서의독성을통해치수의변성과치은경계의퇴축을야기하고일부환자에서는알레르기반응또한나타낼수있다고알려졌다 [7-11]. 본연구에서는모노머가구강내존재하는구강내에서치아우식증을유발하는것으로알려진S. mutans와 S. sobrinus 의성장에어떤영향을끼치는지를알아보고자하였다. 대부분의모노머는소수성을지니기때문에일반적으로사용하는수용성용매에잘녹지않아구강으로유리가잘되지않아실제구강내에서치은열구나수복물의계면등구강내에상당한양이존재하는만큼 [6] 이렇게충분한양의농도를용해시킬만한적절한용매를찾는것이중요하다. 본연구에서는이런문제를해결하고자유기용매인 DMSO 를이용하여모노머들을충분히용해시켜구강내환경을재현할정도의농도를실험에사용하고자하였다 [13]. 9

16 DMSO는 (CH 3 ) 2 SO의분자식을가지는황화합물이다 [18]. 무색의액체이며극성과무극성물질을모두녹일수있는극성비양자성용매로 [18] 물이외에도상당히넓은범위의유기물질들을용해시킬수있어소수성모노머를사용한본실험에적합하다. 예비실험결과미생물의성장에영향을미치지않는 DMSO 의농도가 2% 로나타나, 본실험의배지에사용되는 DMSO 의농도는 1% 로사용하였다. 기존연구에서고농도의 TEGDMA와 DEGDMA를사용한성장평가실험에서 OD 550 에대한흡광도의증가를나타냈는데이결과를주사전자현미경을통해서확인해본결과이는미생물의실제적인성장으로인한흡광도의증가가아니라미생물과모노머의상호작용에의해서미생물주변에폴리머결정이생성되어흡광도가증가한것으로나타났다 [13]. 해당연구에서폴리머의결정으로인한흡광도증가가나타난농도는 500ppm, 1000ppm 이었으므로본연구에서는이렇게미생물의성장이외의영향으로인한흡광도증가를피하기위해해당연구에서사용된고농도는실험에서배제하였다 [13]. 또한흡광도를이용한성장평가와실제적인미생물의성장과의연관성을추가적으로확인하기위해정량분석을통한성장평가도같이수행하였다 [13]. OAC는 S. mutans(figs. 13 and 14) 와 S. sobrinus(figs. 31 and 32) 모두에서흡광도를이용한성장평가와정량분석을통한성장평가가같은결과를나타냈기때문에결론적으로치아우식증원인균의성장억제에유의한효과를나타내는것으로볼수있다. 특히 S. 10

17 mutans는 10ppm 부터, S. sobrinus 는 50ppm 부터완전한성장억제효과가나타났다. Bis-GMA(Figs. 1, 2, 19 and 20) 와 UDMA(Figs. 17, 18, 35 and 36) 는흡광도를이용한성장평가에서는두치아우식증원인균에대해유의한성장억제가있는것으로나타났으나정량분석을통한성장평가에서는성장억제에대한효과가없는것으로나타났기때문에치아우식증원인균의성장에대한유의한효과가없는것으로생각된다. EGMP(Figs. 5, 6, 23 and 24) 와 TEGDMA(Figs. 15, 16, 33 and 34) 는흡광도를이용한성장평가에서는 S. sobrinus 의성장증진에대한유의한효과가있고 S. mutans에의성장에대한효과가없는것으로나타났으나정량분석을통한성장평가에서는두치아우식증원인균에대한성장억제에대한효과가없는것으로나타났기때문에결론적으로치아우식증원인균의성장에대한유의한효과가없는것으로생각된다. 이러한결과는 Bis-GMA, EGMP, TEGDMA 그리고 UDMA를이용한실험에서나타난흡광도의변화가세균성장의억제나촉진으로부터기인한것이아니라는것을의미한다. DEAMA(Figs. 3, 4, 21 and 22), GA(Figs. 7, 8, 25 and 26), HEMA(Figs. 9, 10, 27 and 28), MMA(Figs. 11, 12, 29 and 30) 는흡광도를이용한성장평가와정량분석을통한성장평가에서같은결과가나타났기때문에결론적으로치아우식증원인균의성장에대한유의한효과가없는것으로생각된다. 이런연구의결과는새로운복합레진의설계에사용될수있을 11

18 것이다. 치아우식증원인균의성장을억제하는것으로나타난 OAC 함량을높인다면치아우식증의복합레진을통한수복치료시이차우식증의발생률을낮출수있을것이다 [2]. 이처럼흡광도를이용한성장평가와정량분석을이용한성장평가사이에차이가나타나는이유를밝히기위한추가적인실험과논의가필요할것이다. OAC는다른모노머들에비해결과값들의편차가다소큰것으로나타났는데이는 OAC의성장지연효과로인한것으로매실험마다주변조건들의미세환경이정확하게조절되지않아 S. mutans 와 S. sobrinus 가자라는속도가달라서대수기에접어드는시간이다르기때문인것으로보인다. Bis-GMA 와 TEGDMA, 그리고 UDMA를사용한실험에서기존연구와는다른결과가나타났다. Bis-GMA(Figs. 1, 2, 9 and 20) 는 S. mutans와 S. sobrinus 의성장에유의한영향이없는것으로나타났지만기존연구에서는성장을억제한다는결과 [7] 와유의한영향이없다는결과 [12] 가있었다. TEGDMA(Figs. 15, 16, 33 and 34) 는 S. mutans와 S. sobrinus 의성장에유의한영향이없는것으로나타났지만기존연구에서는 S. sobrinus 의성장을촉진시킨다는결과 [16] 와흡광도는증가하지만이런증가가미생물성장에의한것은아니라는결과 [13] 가있었다. UDMA(Figs. 17, 18, 35 and 36) 에서는 S. mutans와 S. sobrinus의성장에유의한영향이없는것으로나타났지만기존연구에서는 S. sobrinus 의성장을약간억제한다는결과 [16] 와유의한영향이없다는결과 [12] 가있었다. 이처 12

19 럼기존연구들사이에서도상이한결과가나온것들이있었다. 이러한결과의차이는실험설계의차이로부터기인할것이다. 우선실험에사용된미생물균주의차이를생각해볼수있다. 본연구에서는 S. mutans UA159 와 S. sobrinus SL-1을실험에사용하였지만다른연구에서는 S. sobrinus B13을사용하거나 [13] S. sobrinus NCT 을사용하였다 [12]. 또한본연구에서는 0, 5, 10, 50, 100ppm 의모노머를사용하였지만기존연구에서는 0, 10, 100, 500, 1000ppm 의상대적으로농도의간격이큰모노머를연구에사용하였다 [13]. 또다른연구에서는 Bis-GMA 에서 0, 0.5, 5, 50ppm, UDMA에서 0, 1, 10, 100ppm 을사용하였다 [12]. 기존연구에서는 Columbia 5% sheep blood agar plates(becton Dickson, Heidelberg, Germany) 에서균주가배양되었고 trypticase soy broth(tsb, Oxoid, Basingstoke, UK) 에서 growth assay를수행하였다 [12]. 본연구에서는 brain heart infusion agar plate(difco, Sparks, MD, USA) 에서균주가배양되었고 brain heart infusion(bhi, Difco, Sparks, MD, USA) 에서 growth assay 를수행하였다. 본실험에서복합레진에사용가능한모든모노머와모든치아우식증원인균에대한실험을수행한것이아니기때문에사용되지않은다른모노머와미생물에대한추가적인연구가필요할것이다. 또한실험에사용되는모노머의농도를더세분화하는것이도움이될것이다. 그리고같은모노머농도에서도미생물들의상이한성장 13

20 을나타낼수있는것으로알려진수소이온농도나온도차이의영향 [15] 을고려한연구들도진행되어야할것이다. V. 결론 본연구는복합레진으로부터유래하는모노머들이치아우식증원인균인S. mutans 와 S. sobrinus 의성장에어떠한영향을미치는지알아보기위한것이다. 실험에사용한 9가지모노머중 OAC가치아우식증원인균의성장에대해유의한억제효과를나타낸다는것을알수있었다. 따라서앞으로제작할복합레진에서는 OAC의함량을높인다면복합레진을통한치아의수복치료시발생하는이차우식증의발생률을낮출수있을것으로기대된다. 14

21 참고문헌 1. Clarkson TW, Magos L. The toxciology of mercury and its chemical compounds.crit Rev Toxicol 2006;36: Ferrancane JL, Stansbury JW. Self-adhesive resin cements chemistry, properties and clinical considerations. J Oral Rehabil. 2011;38: Albers HF. Tooth-colored restorations. 9th ed. BC Decker Inc; Albers HF. Tooth-colored restorations. 9th ed. BC Decker Inc; Park SH. Comparison of degree of conversion for light-cured and additionally heat-cured composites. J Prosthet Dent 1996;76: Finer Y, Santerre JP. The influence of resin chemistry on a dental composite' s biodegradation. J Biomed Mater Res A 2004;69: van Landuyt KL, Nawrot T, Geebelen B, De Munck J. How much do resin-based dental materials release. Dent Mater. 2010;27: Singh J, Khalichi P, Cvitkovitch DG. Composite resin degradation products from BisGMA monomer modulate the expression of genes associated with biofilm formation and other 15

22 virulence factors in Streptococcus mutans. J Bio Mat. 2007;88: Hamade S, Slade HD. Biology, immunology, and cariogenicity of Streptococcus mutans. Microbial Rev. 1980;44: Schweikl H, Spagnuolo G. Genetic and cellular toxicology of dental resin monomers. J Dent Res. 2006;10: Gwinnett AJ, Tay F. Early and intermediate time response of the dental pulp to an acid etch technique in vivo. Am J Dent. 1998;10:S35-S Emmler J, Seiss M, Kreppel H, Reicgl FX, Hickel R, Kehe K. Cytotoxicity of the dental composite component TEGDMA and selected metabolic by-products in human pulmonary cells. Dent Mater 2008;24: Hansel C, Leyhausen G, Mai UE. Effects of various resin composite (co)monomers and extracts on two caries-associated micro-organisms in vitro. J Dent Res. 1998;77: Kawai K, Torii M, Tuschitani Y. Effects of resin components on the growth of Streptococcus mutans. J Osaka Dent Univ. 1988;28: Takahashi Y, Imazoto S, Russell RR. Influence of resin monomers on growth of oral streptococci. J Dent Res 2004;83: Kawai K, Torii M, Tuschitani Y. Effects of resin components on the growth of Streptococcus mutans. J Osaka Dent Univ. 16

23 1988;28: Khalichia P, Cvitkovitcha DG, Santerrea JP. Effects of composite resin biodegradation products on oral streptococcal growth.j Bio Mat. 2004;25: Geurtsen W. Biocompatibility of resin-modified filling materials. Crit Rev Oral Biol Med. 2000;11: Hahnel S, Rosentritt M, Burgers R, Handel G. Surface properties and in vitro Streptococcus mutans adhesion to dental resin ploymers. J Mater Sci Mater Med. 2008;19: Stefels J, Steinke M, Turner S, Malin S, Belviso A. Environmental constraints on the production and removal of the climatically active gas dimethylsulphide and implications for ecosystem modeling. Biochemistry. 2007;83:

24 Figure & Table S. mutans Bis-GMA OD ppm 5 ppm 10 ppm 50 ppm 100 ppm days Figure 1. Bis-GMA 의농도에따른 S. mutans 의 17 시간동안의성 장곡선. 18

25 log(cfu) S. mutans Bis-GMA ppm 5 ppm 10 ppm 50 ppm 100 ppm concentraion Figure 2. 다양한농도의 Bis-GMA 와함께 17 시간성장시킨후정 체기에서채취한 S. mutans 의정량분석결과. 19

26 S. mutans DEAMA OD ppm 5 ppm 10 ppm 50 ppm 100 ppm days Figure 3. DEAMA 의농도에따른 S. mutans 의 17 시간동안의성장 곡선. 20

27 log(cfu) S. mutans - DEAMA ppm 5 ppm 10 ppm 50 ppm 100 ppm concentraion Figure 4. 다양한농도의 DEAMA 와함께 17 시간성장시킨후정체 기에서채취한 S. mutans 의정량분석결과. 21

28 S. mutans EGMP OD ppm 5 ppm 10 ppm 50 ppm 100 ppm days Figure 5. EGMP 의농도에따른 S. mutans 의 17 시간동안의성장곡 선. 22

29 log(cfu) S. mutans - EGMP ppm 5 ppm 10 ppm 50 ppm 100 ppm concentraion Figure 6. 다양한농도의 EGMP 와함께 17 시간성장시킨후정체기 에서채취한 S. mutans 의정량분석결과. 23

30 S. mutans GA OD ppm 5 ppm 10 ppm 50 ppm 100 ppm days Figure 7. GA 의농도에따른 S. mutans 의 17 시간동안의성장곡 선. 24

31 log(cfu) S. mutans - GA ppm 5 ppm 10 ppm 50 ppm 100 ppm concentraion Figure 8. 다양한농도의 GA 와함께 17 시간성장시킨후정체기에 서채취한 S. mutans 의정량분석결과. 25

32 S. mutans HEMA OD ppm 5 ppm 10 ppm 50 ppm 100 ppm days Figure 9. HEMA 의농도에따른 S. mutans 의 17 시간동안의성장 곡선. 26

33 log(cfu) S. mutans - HEMA ppm 5 ppm 10 ppm 50 ppm 100 ppm concentraion Figure 10. 다양한농도의 HEMA 와함께 17 시간성장시킨후정체 기에서채취한 S. mutans 의정량분석결과.. 27

34 S. mutans MMA OD ppm 5 ppm 10 ppm 50 ppm 100 ppm days Figure 11. MMA 의농도에따른 S. mutans 의 17 시간동안의성장 곡선. 28

35 log(cfu) S. mutans - MMA ppm 5 ppm 10 ppm 50 ppm 100 ppm concentraion Figure 12. 다양한농도의 MMA 와함께 17 시간성장시킨후정체 기에서채취한 S. mutans 의정량분석결과. 29

36 S. mutans - OAC OD ppm 5 ppm 10 ppm 50 ppm 100 ppm days Figure 13. OAC 의농도에따른 S. mutans 의 72 시간동안의성장곡 선. 30

37 log(cfu) S. mutans - OAC ppm 5 ppm 10 ppm 50 ppm 100 ppm concentration Figure 14. 다양한농도의 OAC 와함께 17 시간성장시킨후정체기 에서채취한 S. mutans 의정량분석결과. 31

38 S. mutans TEGDMA OD ppm 5 ppm 10 ppm 50 ppm 100 ppm days Figure 15. TEGDMA 의농도에따른 S. mutans 의 17 시간동안의 성장곡선. 32

39 log(cfu) S. mutans - TEGDMA ppm 5 ppm 10 ppm 50 ppm 100 ppm concentraion Figure 16. 다양한농도의 TEGDMA 와함께 17 시간성장시킨후 정체기에서채취한 S. mutans 의정량분석결과. 33

40 S. mutans UDMA OD ppm 5 ppm 10 ppm 50 ppm 100 ppm days Figure 17. UDMA 의농도에따른 S. mutans 의 17 시간동안의성장 곡선. 34

41 log(cfu) S. mutans - UDMA ppm 5 ppm 10 ppm 50 ppm 100 ppm concentraion Figure 18. 다양한농도의 UDMA 와함께 17 시간성장시킨후정체 기에서채취한 S. mutans 의정량분석결과. 35

42 S. sobrinus Bis-GMA OD ppm 5 ppm 10 ppm 50 ppm 100 ppm days Figure 19. Bis-GMA 의농도에따른 S. sobrinus 의 17 시간동안의 성장곡선. 36

43 log(cfu) S. sobrinus Bis-GMA ppm 5 ppm 10 ppm 50 ppm 100 ppm concentraion Figure 20. 다양한농도의 Bis-GMA 와함께 17 시간성장시킨후 정체기에서채취한 S. sobrinus 의정량분석결과. 37

44 S. sobrinus DEAMA OD ppm 5 ppm 10 ppm 50 ppm 100 ppm days Figure 21. DEAMA 의농도에따른 S. sobrinus 의 17 시간동안의성 장곡선. 38

45 log(cfu) S. sobrinus - DEAMA ppm 5 ppm 10 ppm 50 ppm 100 ppm concentraion Figure 22. 다양한농도의 DEAMA 와함께 17 시간성장시킨후정 체기에서채취한 S. sobrinus 의정량분석결과. 39

46 S. sobrinus EGMP OD ppm 5 ppm 10 ppm 50 ppm 100 ppm days Figure 23. EGMP 의농도에따른 S. sobrinus 의 17 시간동안의성 장곡선. 40

47 log(cfu) S. sobrinus - EGMP ppm 5 ppm 10 ppm 50 ppm 100 ppm concentraion Figure 24. 다양한농도의 EGMP 와함께 17 시간성장시킨후정체 기에서채취한 S. sobrinus 의정량분석결과. 41

48 S. sobrinus GA OD ppm 5 ppm 10 ppm 50 ppm 100 ppm days Figure 25. GA 의농도에따른 S. sobrinus 의 17 시간동안의성장곡 선. 42

49 log(cfu) S. sobrinus - GA ppm 5 ppm 10 ppm 50 ppm 100 ppm concentraion Figure 26. 다양한농도의 GA 와함께 17 시간성장시킨후정체기 에서채취한 S. sobrinus 의정량분석결과. 43

50 S. sobrinus HEMA OD ppm 5 ppm 10 ppm 50 ppm 100 ppm days Figure 27. HEMA 의농도에따른 S. sobrinus 의 17 시간동안의성 장곡선. 44

51 log(cfu) S. sobrinus - HEMA ppm 5 ppm 10 ppm 50 ppm 100 ppm concentraion Figure 28. 다양한농도의 HEMA 와함께 17 시간성장시킨후정체 기에서채취한 S. sobrinus 의정량분석결과. 45

52 S. sobrinus MMA OD ppm 5 ppm 10 ppm 50 ppm 100 ppm days Figure 29. MMA 의농도에따른 S. sobrinus 의 17 시간동안의성장 곡선. 46

53 log(cfu) S. sobrinus - MMA ppm 5 ppm 10 ppm 50 ppm 100 ppm concentraion Figure 30. 다양한농도의 MMA 와함께 17 시간성장시킨후정체 기에서채취한 S. sobrinus 의정량분석결과. 47

54 S. sobrinus - OAC OD ppm 5 ppm 10 ppm 50 ppm 100 ppm days Figure 31. OAC 의농도에따른 S. sobrinus 의 72 시간동안의성장 곡선. 48

55 log(cfu) S. sobrinus - OAC ppm 5 ppm 10 ppm 50 ppm 100 ppm concentration Figure 32. 다양한농도의 OAC 와함께 17 시간성장시킨후정체기 에서채취한 S. sobrinus 의정량분석결과. 49

56 S. sobrinus TEGDMA OD ppm 5 ppm 10 ppm 50 ppm 100 ppm days Figure 33. TEGDMA 의농도에따른 S. sobrinus 의 17 시간동안의 성장곡선. 50

57 log(cfu) S. sobrinus - TEGDMA ppm 5 ppm 10 ppm 50 ppm 100 ppm concentraion Figure 34. 다양한농도의 TEGDMA 와함께 17 시간성장시킨후 정체기에서채취한 S. sobrinus 의정량분석결과. 51

58 S. sobrinus UDMA OD ppm 5 ppm 10 ppm 50 ppm 100 ppm days Figure 35. UDMA 의농도에따른 S. sobrinus 의 17 시간동안의성 장곡선. 52

59 log(cfu) S. sobrinus - UDMA ppm 5 ppm 10 ppm 50 ppm 100 ppm concentraion Figure 36. 다양한농도의 UDMA 와함께 17 시간성장시킨후정체 기에서채취한 S. sobrinus 의정량분석결과. 53

60 Abstract Effects of various resin monomers on the growth of cariogenic streptococci Suok-Joon Moon School of dentistry The Graduate School Seoul National University Free monomers usually leak from the surface of composite resins immediately after polymerization, because the degree of conversion of conventional composite resin is 50-70%. Even free monomers can be leached from fully polymerized composite resin through hydrolysis in the oral cavity. The purpose of this study was to evaluate the effects of various monomers on the growth of Streptococcus mutans and Streptococcus sobrinus, the major cariogenic oral microbes. Nine different monomers are used in this study: Bisphenolglycidyl methacrylate(bis -GMA), 2- Dimethylaminoethyl methacrylate(deama), Ethylene glycol methacrylate phosphate(egmp), Glycidyl methacrylate(ga), 2- hydroxyethyl methacrylate(hema), Methyl methacrylate( MMA), Octadecylaminodimethyltrihydroxysilylpropyl ammonium chloride(oac), Triethyleneglycoldimethacrylate(TEGDMA), Urethane dimethacrylate(udma). After each monomer was 54

61 dissolved in 1% dimethyl sulfoxide (DMSO), the final concentrations in liquid media were set to 0, 5, 10, 50, and 100ppm, respectively. To compare growth rates, BHI media contained various concentrations of monomers were inoculated with 1:100 dilutions of overnight cultures of S. mutans UA159 and S. sobrinus SL-1 and incubated at 37 o C for 72 hours for OAC and 17 hours for other monomers, respectively. The optical density at 600 nm was recorded to monitor bacterial growth at routine time intervals. When bacterial growth was reached to stationary phase, the cell suspensions were serially diluted, plated on BHI agar and incubated at 37 o C for 2 days before colonies were counted. Colony counts were expressed as a colony forming unit per ml. All assays were performed in triplicate. The results showed that DEAMA, GA, HEMA and MMA did not affect growth of S. mutans and S. sobrinus in both growth curve and quantitative colony counting assays. Bis-GMA and UDMA inhibited growth rate of S. mutans and S. sobrinus in a high concentration, but there was no significant difference in bacterial numbers during the incubation time. EGMP and TEGDMA promoted growth rate of S. sobrinus, but no significant differences in bacterial numbers were observed during the incubation time. The results showed that the changes in optical density during incubation with Bis-GMA, UDMA, EGMP, and TEGDMA is due not to promotion and inhibition of bacterial 55

62 growth. However, OAC significantly inhibited growth of S. mutans and S. sobrinus in a concentration dependent manner. In particular, 10ppm of OAC for S. mutans, and 50ppm of OAC for S. sobrinus completely inhibited bacterial growth. This study suggests that addition of OAC to composite resin may help to decrease the incidence rate of secondary caries around composite-resin based restorative materials. keywords: Streptococcus mutans, Streptococcus sobrinus, monomer, growth assay, colony counting Student Number:

법학박사학위논문 실손의료보험연구 2018 년 8 월 서울대학교대학원 법과대학보험법전공 박성민

법학박사학위논문 실손의료보험연구 2018 년 8 월 서울대학교대학원 법과대학보험법전공 박성민 저작자표시 2.0 대한민국 이용자는아래의조건을따르는경우에한하여자유롭게 이저작물을복제, 배포, 전송, 전시, 공연및방송할수있습니다. 이차적저작물을작성할수있습니다. 이저작물을영리목적으로이용할수있습니다. 다음과같은조건을따라야합니다 : 저작자표시. 귀하는원저작자를표시하여야합니다. 귀하는, 이저작물의재이용이나배포의경우, 이저작물에적용된이용허락조건을명확하게나타내어야합니다.