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긔순 옥
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1 약학회지제 58 권제 1 호 62~70 (2014) Yakhak Hoeji Vol. 58, No. 1 종설 초오추출물의 Sprague-Dawley 랫드를이용한 28 일반복경구투여독성시험 이종숙 이지선 * 박영철 * 최선미 이상훈 # 한국한의학연구원의료연구본부침구경락연구그룹, * 대구가톨릭대학교 GLP 센터 (Received October 18, 2013; Revised December 20, 2013; Accepted January 17, 2014) A Repeated-dose 28-Day Oral Toxicity Test of Aconitum jaluense Extract in Sprague-Dawley Rats Lee Jong Suk, Lee Ji Sun*, Park Yeong-Chul*, Sun Mi Choi and Sanghun Lee # Acupuncture, Moxibustion and Meridian Research Group, Medical Research Division, Korean Institute of Oriental Medicine, Daejeon , Korea **GLP Center, Catholic University of Daegu , Korea Abstract A 28-day repeated-dose oral toxicity test was performed to determine the no-observed-effect level (NOEL) and establish an optimum dose of the highly toxic Aconiti Ciliare Tuber (ACT) used as a folk remedy. Repeated oral doses of 1,250, 2,500, and 5,000 mg/kg/day of the hot water extract of ACT were administered to five male and five female Sprague- Dawley rats in each group for 4 weeks. The indicators for toxicity included results of examination of common symptoms and changes in weight and feed intake, eye test, urinalysis, hematological and serum biochemical analyses, and post-mortem weight measurement of organs, and visual inspections. All animals survived at the end of the experiment; in addition, we observed no specific test substance-mediated symptoms. We observed no test substance-mediated changes in body weight and feed intake. We observed statistically significant changes in male OB and ph levels (p<0.05). Further, the biochemical test showed statistically significant changes in the IP value of male rats and CL - valueoffemalerats (p<0.05). However, all changes were within historical data. The post-mortem examinations showed no test substance-mediated changes. Moreover, statistically significant changes under the test conditions were confirmed to have been caused by factors other than the test substance. Thus, the maximum NOEL of ACT extract in rats was estimated to be 5,000 mg/kg/day. Keywords NOEL, Aconiti Ciliare Tuber, toxicity test, folk remedy 초오는미나리아재비과 (Ranunculaceae) 에속하는다년생초본으로우리나라각지에 40여종이자생하고있으며, 1) 이중초오로사용될수있는식물은약 25종으로 Aconitum triphyllum Nakai 세잎돌쩌귀, Aconitum sibiricum ROIR. 노랑투구꽃, Aconitum uchyamai NAKAI. 그늘돌쩌귀, Aconitum kusnezofii REICHB. 이삭바꽃, Aconitum kusnezoffii Reichb. 놋젓가락나물등이있다 2,3). 민간에서초오는관절염, 신경통, 중풍, 당뇨병, 냉증등에많이사용되고있지만 4) 일반적인약효만이알려져있어오남용에 # Corresponding Author Sanghun Lee Acupuncture, Moxibustion and Meridian Research Group, Medical Research Division, Korean Institute of Oriental Medicine, Daejeon , Korea Tel.: Fax.: ezhani@kiom.re.kr 따른급성중독사례가종종보고되고있다. 5-7) 이는초오에많이함유되어있는 aconitine류의알칼로이드성분때문으로초오를복용하게되면오심, 구토, 복통과같은위장관증상, 전신감각이상, 전신무기력과같은신경학적증상, 그리고현기증, 심계항진, 실신등과같이심장독성으로인한중독증상이나타난다. 8) 초오와비슷한성질을가지는부자는기원식물인 Aconitum Carmichaeli Debx. 바꽃의자근을가공한것으로부자에도 aconitine류의알칼로이드라는성분이다량으로함유되어있어혈압하강, 사지궐냉 ( 四肢厥冷 ), 심실세동등의부작용을일으킬수있다. 9) 초오와부자에다량으로함유되어있는 aconitine은 1~2 mg 에노출되어도사망한다고보고되고있다. 10) 초오와부자가독성이강한약재임에도불구하고 aconitine 함량과통상적인투여량의안전성에대한객관적인연구검증은아직까지도많이부족한실정으로초오는김 3) 등, 부자는박 11) 등에의한연구가보 62

2 초오추출물의 Sprague-Dawley 랫드를이용한 28 일반복경구투여독성시험 63 Table I Experimental groups in SD rats Treatment groups Sex No. of rats Number of rats Inject volume (ml/kg/day) Dose ((mg/kg/day) Normal control (G1) a) M / F 5 / ~1105 / 2101~ Low (G2) M / F 5 / ~1205 / 2201~ ,250 Medium (G3) M / F 5 / ~1305 / 2301~ ,500 High (G4) M / F 5 / ~1405 / 2401~ ,000 a) G1: Vehicle control. 고된바있으나민간에서사용하고있는법제되지않은부자의열수추출방식에대한연구는이뤄지지않았다. 따라서본연구에서는민간에서사용하고있는방법을그대로적용하여 SD계통의암수랫드에 28일간반복경구투여하는방법으로식품의약품안전청고시 ( 제 호 ) 에준하여실험을수행하여초오에대한 NOEL(no observed effect level, 최대무영향용량 ) 을확인하고자하였다. 그러나본연구에서는조직병리를분석하지않아초오의 28일반복투여독성시험이기에는한계가있으며오히려 90일또는 180일반복투여독성시험에있어서용량결정시험이라고할수있다. 시험군의구성및투여량설정입수한모든동물중군분리일에측정한평균체중에가장가까운암수각 20마리를선정하여체중에따라각군평균체중이균등하도록무작위로암수각 4군, 군당 5마리로시험군을구성하였다 (Table I). 일반적으로천연물추출물의경우에는예상임상용량이높을수있기때문에가능한높은 NOEL을얻기위해반복투여독성시험에서일반적으로이용되고있는한계용량인 1,000 mg/kg/day보다 5배높은 5,000 mg/ kg /day 최고용량으로하여공비 2를두어 2,500, 1,250 mg/kg/day을중용량군및저용량군으로각각설정을하였다. 재료및방법시험기관 GLP기관인대구가톨릭대학교 GLP센터에서전과정시험을시행하였다. SD계통의암수랫드에 28일반복경구투여독성시험은동물보호법에근거한대구가톨릭대학교동물실험윤리위원회의승인을받아실시되었다 ( 승인번호 : 제IACUC 호 ). 시험물질본시험에사용한초오는법제를하지않은것으로광명당제약 ( 원산지 : 경주양복면 ) 에서구입하여잡질을제거한후사용하였으며상온보관하였다. 실험동물및사육환경본시험에서는특정병원균부재 (SPF) 5주령암수 50마리 Sprague Dawley계랫드 (SD 랫드 ) 를 ( 주 ) 대한바이오링크에서구입하여 1주일동안검수검역및순화를시켰다. 동물실의사육환경은온도 23±3 o C, 상대습도 50±20%, 형광등조명 12 hr (08:00 점등 ~20:00 소등 ) 및조도 150~300 Lux, 환기횟수 10~20회 / 시간, 소음 60 db 이하, 암모니아농도 20 ppm 이하인환경에서사육하였다. 순화, 투여및관찰기간중 Polysulfone 사육상자 (260W 420L 150H mm) 에수용하였고, 사육상자당동물수는검역 순화기간 2~3마리 / 관찰기간 1마리로하였다. 모든사육기자재는고압증기멸균기 (121 o C 20분 ) 로멸균하여사용하였고, 실험동물용방사선멸균사료 (Zeigler Bros., Inc. USA) 와음용수는자유섭취하도록하였다. 시험물질의조제및투여시험물질추출은민간에서초오를달여사용하는방법을바탕으로초오 900 g을 3000~5000 ml의음용수에넣어 2시간동안전탕하였다. 증발되고남은용액을최종투여액 5g/10ml로맞추어경구투여용존데를장착한주산관을통해위내에직접투여되었다. 초오추출물은투여기간동안냉장보관 ( 보관고번호 : K-4) 하였으며, 투여횟수및기간은 1회 / 일, 7일 / 주, 4주간으로투여는오전에이루어졌다. 관찰및검사항목일반증상관찰및체중측정 모든동물에대해서 1일 1회 90 일동안일반증상의종류와및증상의정도와더불어사망및빈사동물을관찰하였다. 모든동물의체중을투여개시일, 주 1회, 부검전일및부검일에측정하였다. 부검일체중은절식을실시하였으므로, 체중평가에서제외하고부검전일체중을평가하였다. 사료섭취량산정 투여개시전의사료섭취량은군분리일부터투여개시일까지 1일간의섭취량을측정하였고, 투여기간에는 7 일간의섭취량을측정하여 1일의평균섭취량을산출하였다. 투여 13주째에는 6일간의섭취량을측정하여 1일의평균섭취량을산출하였다. 안검사 동물도입시모든동물에대하여육안으로눈의외관을관찰하였다. 투여마지막주에는모든동물을육안으로눈의외관을관찰한후, 각군당 5마리에대해서는안구에산동제를점적하여안저사진기로전안부, 중간투광체및안저를관찰하였다. 요검사 각군당 5마리에대하여투여 13주에요검사를실시하였다. 동물을대사케이지에수용하여 3~4시간동안채뇨한 Vol. 58, No. 1, 2014

3 64 이종숙 이지선 박영철 최선미 이상훈 신선뇨중약 1ml을취하여 0.3 ml의요를요검사용시험지에묻힌후, 요자동분석기를이용하여 GLU(glucose), BIL(bilirubin), KET(ketone body), LEU(leukocyte), OB(occult blood), PRO (protein), URO(urobilinogen), NIT(nitrite), SG(specific gravity), ph, Color의항목을측정하였다. 일반검사후남은요를 1,500 rpm으로 5분간원심분리한후, 그침전물을 S.M(Sternheimer- Malbin) 법으로염색하여 RBC(red blood cell), WBC(white blood cell), Epithelial cell 및 Cast를관찰하였다. 요총량은 24 시간동안계속채집한요로측정하였다. 부검및장기중량측정 부검전날절식 (17시간) 한계획부검동물에대하여부검당일에 Isoflurane으로흡입마취하여복대동맥에서혈액학적검사및혈액생화학적검사를위한채혈을실시하였다. 이후복대동맥및복대정맥을절단하여방혈 / 치사시킨다음, 모든장기에대해부검소견을관찰한후기록지에기록하였다. 부검시적출한장기난소, 부신, 뇌하수체, 가슴샘, 전립샘, 고환, 부고환, 비장, 신장, 심장, 폐, 뇌, 간장을전자저울을이용하여중량을측정하였다. 양측성장기는양측장기를각각측정하였다. 중량측정장기에대하여는부검시체중에대한상대중량을산출하였다. 혈액학적검사 부검시채혈한혈액일부를항응고제인 EDTA2K가들어있는 CBC bottle에주입한후자동혈액분석기로일반혈액학적검사 (WBC, RBC, HGB, HCT, MCV, MCH, MCHC, RDW, HDW, PLT, MPV, RET) 와백혈구감별계수 (NEU, LYM, MONO, EOS, BASO, LUC) 를측정하였다. 혈액생화학적검사 혈액일부를 clot activator가들어있는 vacutainer tube에주입하고 15~20분간상온에방치하여응고시켰다. 이후, 3,000 rpm으로 10분간원심분리하여얻은혈청으로혈액생화학분석기를활용하여 AST, ALT, ALP, BUN, CRE, GLU, CHO, PRO, CPK, ALB, BIL, TG, IP, A/G ratio를측정하였다. 전해질은전해질분석기로측정하였다. 혈액응고시간검사 부검시채혈한혈액중 1.8 ml을 3.2% sodium citrate 0.2 ml이들어있는 Microtube에주입한후, 3,000 rpm으로 10분간원심분리하여얻은혈장으로 PT(prothrombin time), APTT(activated partial thromboplastin time) 를측정하였다. 혈액응고시간검사기를사용하여 Nephelometric Analysis 방법으로초단위로측정하였다. 통계처리대조군과투여군간의평균비교에는모수적인다중비교혹은비모수적인다중비교를사용하였으며, 통계학적분석은상용으로널리사용되고있는통계패키지인 SPSS 14.0을이용하였다. Kruskal-Wallis' Htest를실시한후, 유의성이있으면 Mann- Whitney U-test를적용하여대조군과의유의성을확인하였다. 요색조는 Fisher's exact test를적용하였다. 독성판정기준초오열수추출물의반복투여독성시험을통해얻어진변화또는독성은독성의정도와양상에따라 weight-based classification (WBC, 독성강도에따른분류 ) 로이루어졌다. WBC는이전연구 12,13) 를참고하여시험물질유래중요한변화, 시험물질유래경미한변화및비시험물질유래변화의 3단계로이루어졌다. WBC의 3단계는본시험의목적인 NOEL, NOAEL(No Observed Adverse Effect Level, 최대무독성용량 ) 및 LOAEL (Lowest Observed Adverse Effect Level, 최소독성용량 ) 등의독성지표를얻기위해이들각각의정의에따라시험물질-유래중요한변화는 adverse effect로분류되었고시험물질-유래경미한변화는시험물질에의한 non-adverse effect로분류되었다. 일반적으로 NOAEL은시험물질에의해심각한독성를유발하지않는최대독성영향이지만경미한영향인 non-adverse effect 를나타내는최대무독성용량이며 LOAEL은 adverse effect를유발하는 Table II Definitions of LOAEL, NOAEL and NOEL by three steps of weight-based classification in toxicity test Weight-based classification Important compoundrelated changes Minor compoundrelated changes Noncompoundrelated changes Definitions of Criteria (In Korean) Criteria of toxicity 모든투여용량에서용량 - 의존성을가진통계적및생물학적유의성있는임상병리적및조직병리적변화. 용량 - 의존성이없지만대조군에서발생하지않고통계적유의성을가진조직병리학적변화. 일부용량에서경미한용량의존성또는용량 - 의존성이없는특정투여용량에서의임상병리학적변화. 시험물질의약리작용으로고려되는통계적, 생물학적유의성 을지닌용량의존성또는용량비의존성변화. 대조군에서발생하거나가역서이있는용량 - 의존성조직병리학적변화. Historical data 벗어나는대조군의결과와의비교를통해얻은통계적유의성을가진변화. 실험과정에서실수로발생하는변화와자연발생적변화를포함. Adverse effect Non-adverse effect No effect Biological significance: Statistical significance between the control and test groups outside the historical data of test system Historical data: The range of the control group data obtained by testing (Mean±SD) Evaluation endpoints (In Korean) LOAEL NOAEL NOEL J. Pharm. Soc. Korea

4 초오추출물의 Sprague-Dawley 랫드를이용한 28 일반복경구투여독성시험 65 최소독성용량을의미한다. 13,14) NOEL은시험물질에의한경미한변화도없는최대무영향용량을의미한다. 이러한독성지표의정의에따라 WBC에의한독성지표를 Table II와같이도출하였다. 체중암수모두에서대조군과비교하여유의성있는체중변화는관찰되지않았다 (Table IV). 결과일반증상및사망동물실험기간중대조군을포함한모든시험군에서사망동물은없었으며, 투여중일반증상관찰결과시험물질에영향으로보이는특이증상은없었다 (Table III). 사료섭취량암컷에서는대조군과비교하여사료섭취량에차이가거의없었다. 수컷사료섭취량에서는대조군 (G1:19.9) 과비교하여고용량군 (G2:21.5, G3:21.5. G4:22.2) 에서통계적으로유의한증가를 (p<0.05) 보였으나정상범위내변화로비시험물질-유래변화로추정된다 (Table V). Table III Clinical signs of male and female rats Days Observed signs Male groups (mg/kg/day) 0 No finding 0 / 5 a) 0 / 5 0 / 5 0 / 5 0 / 5 a) 0 / 5 0 / 5 0 / No finding 0 / 5 a) 0 / 5 0 / 5 0 / 5 0 / 5 a) 0 / 5 0 / 5 0 / No finding 0 / 5 a) 0 / 5 0 / 5 0 / 5 0 / 5 a) 0 / 5 0 / 5 0 / No finding 0 / 5 a) 0 / 5 0 / 5 0 / 5 0 / 5 a) 0 / 5 0 / 5 0 / No finding 0 / 5 a) 0 / 5 0 / 5 0 / 5 0 / 5 a) 0 / 5 0 / 5 0 / 5 29 Terminal Sacrifice 5 / 5 a) 5 / 5 5 / 5 5 / 5 5 / 5 a) 5 / 5 5 / 5 5 / 5 a) Number of animals with the sign / Number of animals examined. Table IV Body weight changes of male and female rats Weeks Male groups (mg/kg/day) ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ±6.890 Gains a) 164.6± ± ± ± ± ± ± ±10.66 a) Weight gains in the main groups are body weight difference between week 4 and 1 st dosed day. Table V Food consumptions of male and female rats Weeks ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ±1.32 Total mean 19.9± ± ± ± ± ± ± ±0.82 Table VI Ophthalmic findings of male and female rats Sites Observed signs Left eye No observed signs 5 / 5 a) 5 / 5 5 / 5 5 / 5 5 / 5 a) 5 / 5 5 / 5 5 / 5 Right eye No observed signs 5 / 5 a) 5 / 5 5 / 5 5 / 5 5 / 5 a) 5 / 5 5 / 5 5 / 5 a) Number of animals with the sign / Number of animals examined Vol. 58, No. 1, 2014

5 66 이종숙 이지선 박영철 최선미 이상훈 Table VII Urinalysis of male and female rats Sex Male Female Tests a) Result Grade G1 G2 G3 G4 G1 G2 G3 G4 0 1,250 2,500 5, ,250 2,500 5,000 GLU BIL KET / SG ph PRO / URO NIT OB / LEU / a) The unit of Urobilinogen is Ehrlich unit/dl GLU: Glucose, BIL: Bilirubin, KET: Ketone body, SG: Specific gravity, RO:Urobilinogen, PRO: Protein, NIT: Nitrite, OB: Occult blood, LEU: Leukocyte. Table VIII Hematological values of male and female rats Tests Units G1 (0) G2 (1,250) G3 (2,500) G4 (5,000) G1 (0) G2 (1,500) G3 (3,000) G4 (5,000) WBC 103/µl 3.47± ± ± ± ± ± ± ±0.92 RBC 106/µl 7.84± ± ± ± ± ± ± ±0.13 HGB g/dl 16.26± ± ± ± ± ± ± ±0.270 HCT % 45.44± ± ± ± ± ± ± ±0.550 MCV fl 57.96± ± ± ± ± ± ± ±0.720 MCH pg 20.74± ± ± ± ± ± ± ±0.340 MCHC g/dl 35.80± ± ± ± ± ± ± ±0.390 RDW % 10.34± ± ± ± ± ± ± ±0.24 HDW g/dl 2.49± ± ± ± ± ± ± ±0.18 PLT 103/µl ± ± ± ± ± ± ± ± MPV fl 8.12± ± ± ± ± ± ± ±0.31 RET % 1.98± ± ± ± ± ± ± ±0.55 NEU % 9.28± ± ± ± ± ± ± ± /µl 0.32± ± ± ± ± ± ± ±0.09 LYM % 87.26± ± ± ± ± ± ± ± /µl 3.03± ± ± ± ± ± ± ±0.79 MONO % 1.62± ± ± ± ± ± ± ± /µl 0.05± ± ± ± ± ± ± ±0.04 EOS % 1.40± ± ± ± ± ± ± ± /µl 0.05± ± ± ± ± ± ± ±0.01 BASO % 0.06± ± ± ± ± ± ± ± /µl 00.00± ± ± ± ± ± ± ±0.00 LUC % 0.30± ± ± ± ± ± ± ± /µl 0.01± ± ± ± ± ± ± ±0.01 J. Pharm. Soc. Korea

6 초오추출물의 Sprague-Dawley 랫드를이용한 28 일반복경구투여독성시험 67 안검사시험전군분리시외안검사와투여마지막주에수행된안저검사결과에서특이한소견은관찰되지않았다 (Table VI). 요검사수컷 OB 수치가대조군과비교하여저용량군및중용량군에서통계적으로유의한감소를 (p<0.05) 보였으나정상범위내변화이며용량의존성이없어비시험물질 -유래변화로추정된다. 그리고수컷 ph 수치가중용량군에서통계적으로유의한증가 를 (p<0.05) 보였으나정상범위내변화로비시험물질-유래변화로추정된다 (Table VII). 혈액학적및혈액응고검사암컷 HCT 수치가저용량군에서통계적으로유의한감소를 (p<0.05) 나타냈으나정상범위내변화이며용량의존성이없어비시험물질 -유래변화로추정된다 (Table VIII). 혈액응고검사결과는대조군과비교하여특이변화가관찰되지않았다 (Table IX). Table IX Plasma coagulation values of male and female rats Tests (sec) PT 09.06± ± ± ± ± ± ± ±0.50 APTT 16.14± ± ± ± ± ± ± ±1.50 Table X Serum biochemical values of mael and female rats Tests Units ALB g/dl 03.05± ± ± ± ± ± ± ±0.06 ALP U/l ± ± ± ± ± ± ± ±30.95 ALT U/l 22.33± ± ± ± ± ± ± ±1.92 AST U/l ± ± ± ± ± ± ± ±8.88 BIL mg/dl 00.10± ± ± ± ± ± ± ±0.072 BUN mg/dl 11.67± ± ± ± ± ± ± ±1.53 CHO mg/dl 56.33± ± ± ± ± ± ± ±8.76 CPK U/l ± ± ± ± ± ± ± ±58.97 CRE mg/dl 00.33± ± ± ± ± ± ± ±0.06 GLU mg/dl ± ± ± ± ± ± ± ±35.61 IP mg/dl 06.03± ± ± ± ± ± ± ±0.49 PRO g/dl 05.21± ± ± ± ± ± ± ±0.16 TG mg/dl ± ± ± ± ± ± ± ±17.46 A/G ratio 01.41± ± ± ± ± ± ± ±0.07 Na + mg/dl 139.3± ± ± ± ± ± ± ±1.13 K + mmol/l 04.26± ± ± ± ± ± ± ±0.16 Cl - mmol/l 110.6± ± ± ± ± ± ± ±1.30 Table XI Absolute and Relative organ weights of female rats Organ weight (g) Absolute organ weights Relative organ weights G1 (0) G2 (1,250) G3 (2,500) G4 (5,000) G1 (0) G2 (1,500) G3 (3,000) G4 (5,000) Adrenal(L) 0.03± ± ± ± ± ± ± ±0.001 Adrenal(R) 0.03± ± ± ± ± ± ± ±0.001 Pituitary 0.01± ± ± ± ± ± ± ±0.000 Ovary(L) 0.07± ± ± ± ± ± ± ±0.006 Ovary(R) 0.06± ± ± ± ± ± ± ±0.003 Thymus 0.54± ± ± ± ± ± ± ±0.021 Spleen 0.63± ± ± ± ± ± ± ±0.036 Kidney(L) 0.77± ± ± ± ± ± ± ±0.021 Kidney(R) 0.79± ± ± ± ± ± ± ±0.016 Heart 0.76± ± ± ± ± ± ± ±0.013 Lung 1.15± ± ± ± ± ± ± ±0.014 Brain 1.88± ± ± ± ± ± ± ±0.025 Liver 6.66± ± ± ± ± ± ± ±0.218 Vol. 58, No. 1, 2014

7 68 이종숙 이지선 박영철 최선미 이상훈 Table XII Absolute and relative organ weights of male rats Organ weight (g) Absolute organ weights Relative organ weights Adrenal(L) 0.02± ± ± ± ± ± ± ±0.001 Adrenal(R) 0.02± ± ± ± ± ± ± ±0.001 Pituitary 0.01± ± ± ± ± ± ± ± Testis(L) 1.64± ± ± ± ± ± ± ±0.063 Testis(R) 1.62± ± ± ± ± ± ± ±0.050 Epididymis(L) 0.41± ± ± ± ± ± ± ±0.009 Epididymis(R) 0.42± ± ± ± ± ± ± ±0.005 Thymus 0.63± ± ± ± ± ± ± ±0.017 Prostate 0.34± ± ± ± ± ± ± ±0.016 Spleen 0.80± ± ± ± ± ± ± ±0.008 Kidney(L) 1.19± ± ± ± ± ± ± ±0.015 Kidney(R) 1.20± ± ± ± ± ± ± ±0.025 Heart 1.11± ± ± ± ± ± ± ±0.006 Lung 1.36± ± ± ± ± ± ± ±0.022 Brain 1.97± ± ± ± ± ± ± ±0.052 Liver 9.48± ± ± ± ± ± ± ±0.055 혈액생화학적및전해질검사수컷의 IP 수치가대조군과비교하여중용량군에서통계적으로유의한감소가 (p<0.05) 나타냈으나용량의존성이없고정상범위내변화로판단되어비시험물질-유래변화로추정된다. 또한암컷 CL - 수치가대조군과비교해고용량군에서통계적으로유의한감소를 (p<0.05) 나타냈으나정상범위내변화이며용량의존성이없어비시험물질-유래변화로추정된다 (Table X). 장기중량암컷가슴샘중량이고용량군에서통계적으로유의한감소를 (p<0.05) 나타냈으나정상범위내변화이며용량의존성이없어비시험물질 -유래변화로추정된다 (Table XI). 부검소견암수모두에서가슴샘의발적 (Table XII), 암컷에서자궁내맑은액체저류가관찰되었다. 그러나시험물질의영향이아닌일반 Rat에서흔히나타나는증상으로비시험물질-유래변화로추정된다. 고찰민간에서초오는다양한효능으로사용되고있지만부작용에관한내용은잘알려지지않아오남용으로인한중독사례가종종보고되고있다. 김 7) 등에의하면헛개나무로만든술인줄알았는데술을만드는과정에서초오가혼합되어들어가있어이를마시고집단으로구토, 구강및손발마비감, 흉부불편감등의중독증상을보였다는증례보고가있다. 이 15) 등도초오와부 자를관절염과중풍후유증으로발생한감각장애와통증때문에복용하였다가흉민, 사지무력, 감각이상, 현운등의중독증상을보이는환자가있었다고보고하였다. 초오에는독성성분인 aconitine계알칼로이드가가장많이함유되어있기때문에매우적은양으로도독성이나타날수있다. 3) Aconitine 성분은사람에게있어 0.2 mg만복용하여도중독이되고 3~4 mg은치사량으로조사되었다. 16) 그래서민간에서는초오에명태또는돼지족을같이넣고삶아서먹는데, 실제명태와초오를같이삶아먹으면독성이줄어든다는연구결과도보고되어있다. 17) 그리고초오는가열하는시간에따라서독성성분이줄어든다는보고도있어, 김 18) 등에의하면수치하지않은초오의총 alkaloid 함량에비하여 0.5시간및 1시간가열하여수치를행한초오의총 alkaloid 함량은 6.7% 와 36.0% 의감소된다고한다. 본실험에서도초오를민간에서사용하는방법그대로 2 시간전탕하였기때문에독성성분이많이감소되었을것으로예상된다. 초오는옛날에사약으로쓰였을만큼독성이강한약재임에도불구하고독성시험에관한연구는별로많지않다. 그래서이를바탕으로본연구에서는초오열수추출물을 1,250, 2,500 및 5,000 mg/kg/day으로경구투여하여반복투여독성시험을실시하였으나사망동물은관찰되지않았으며, 일반증상및시험물질에의한영향으로보이는증상도관찰되지않았다. 초오의 aconitine 함량의변화를보면수치전에는 µg/g이였으나 6시간열수추출후에는 18.6 µg/g으로 1/10 이상감소했다는보고가있다. 19) 본시험에서는전탕후 aconitine 함량을측정하진않았지만 aconitine 함량이현저하게감소했을것으로추정되며, 이때문에초오추출물투여에서독성이잘나타나지않은것으로생각되어진다. 우리와비슷한결과로초오와부자연구인김 3) 등의연구 J. Pharm. Soc. Korea

8 초오추출물의 Sprague-Dawley 랫드를이용한 28 일반복경구투여독성시험 69 에서초오전탕액을 ICR mouse에 2, 5, 10 g/kg/day을 2주간경구투여하여관찰한결과, 임상증상및부검소견에서도별다른이상이발견되지않았다. 박 11) 등에따르면부자온탕추출물을 SD 랫드에경구투여하였을경우 LD 50 은 10 g/kg 이상이며, 5.0 g/ kg씩 14일간경구투여하여관찰한결과투여군 1례가 7일째설사를나타낸것을제외하고는별다른이상이발견되지않았다고한다. 그러나전임상과는달리임상에서는초오의중독증상이나타나고있다. 증례보고를보면초오를끊이거나소주에담구거나환약으로복용했을경우위장관증상 ( 오심, 구토, 복통 ), 전신감각이상, 신경학적증상, 심계항진, 실신등의증상들이 2시간이내에발생했다고한다. 8) 관절통과소화불량치료를위해초오를복용했다가중독증상 ( 심계항진, 흉통, 어지럼증, 실신등 ) 이발생한경우도있었다. 5) 본시험조건에서초오의투여농도에따라서통계적으로유의한변화가관찰되었으나이는비시험물질-유래변화가확인되었다. 따라서본시험의독성판정기준에따라암수모두 NOEL은 5,000 mg/kg/day으로추정할수있었다. 그러나초오열수추출물에서아무런독성현상이확인되지않았기때문에더높은용량과열수추출물이아닌유기용매추출물에대한독성정도를파악할필요성이있을것으로사료된다. 결론본연구는민간에서초오를사용하고있는방법을이용하여 NOEL을알아보기위하여 SD 계통암, 수랫드를이용하여 28 일반복투여독성시험을시행하였다. 실험결과투여기간중사망동물은관찰되지않았으며, 일반증상관찰소견에서도시험물질에영향으로보이는특이증상은없었다. 체중변화, 증체량및사료섭취량에서도시험물질에의한변화는관찰되지않았다. 임상병리소견에서요검사결과, 수컷 OB 및 ph 수치가통계적으로유의한변화를 (p<0.05) 보였고, 생화학적검사에서도수컷의 IP 수치및암컷 CL - 수치가통계적으로유의한변화가 (p<0.05) 나타났으나이는모두정상범위내결과로보여진다. 부검결과에서도시험물질에의한변화가관찰되지않았다. 이상의시험결과로보아본시험조건에서는초오의투여농도에따라서통계적으로유의한변화가관찰되었으나이는비시험물질 -유래변화가확인되었다. 따라서초오추출물의랫드에대한 NOEL은 5,000 mg/kg/day으로추정된다. 감사의말씀본연구는한국한의학연구원민간요법발굴 보존및 DB구축을통한지식자원화 (K12210) 의지원으로이루어졌다. 참고문헌 1) 한국한의학연구원 : 초오수치전, 후의함량변화에관한연구, 누리미디어, 서울 p (2001). 2) 이창복 : 원색대한식물도감, 향문사, 서울 p (2003). 3) Kim, Y. K., Lee, J. H., Song, K. Y., Park, S. K. and Kim, C. : Studies on the liver toxicities with different dosage of wild aconiti tuber decoction. The Korean Journal of Oriental Medical Prescription. 13, 123 (2005). 4) 조식제 : 특허로만나는우리약초, 도서출판사아카데미북, 서울 p. 510 (2012). 5) Mun, J. M., Lee, B, K., Chun, B. J., Yoon, D. Y., Heo, T. and Min, Y. I. : Analysis of cardiovascular change of an Aconitumcontaining Chinese Remedy. The Korean Society of Emergency Medicine 13, 55 (2002). 6) Kim, M. R. : Ventricular arrhythmia following aconitineingestion 2 Case Reports -. The Korean Society of Clinical Toxicology 4, 180 (2006). 7) Kim, S. C., Kim, Y. S., Ha, Y. R. and Kim, H. J. : An outbreak of Caowu-intoxication after drinking home-brewed alcohol. The Korean Society of Emergency Medicine 19, 339 (2008). 8) Lee, J. H. and Kim, K. R. : A clinical study of aconitine poisoning. The Korean Society of Emergency Medicine 6, 154 (1995). 9) 전국한의과대학공동교재편찬위원회 : 본초학, 영림사, 서울 p. 375 (2004). 10) Duke, J. A. : Handbook of Medicinal Herbs, Second edition control after acquired brain injury, CRC Press, USA p (2002). 11) Park, H. S., Kim, S. H., Kim, P. Y. and Chang, I. M. : Toxicological studies on raw and processed (prebrewed) Aconiti tubers; Acute, subacute toxicity studies and assay of Aconitine Alkaloids. Korean. J. Toxicol. 6, 41 (1990). 12) Pack, Y. C. and Cho, M. H. : A new way in deciding NOAEL based on the findings from GLP-toxicity test. Toxicol. Res. 27, 133 (2011). 13) Lewis, R. W., Billington, R., Debryune, E., Gamer, A., Lang, B. and Carpanini, F. : Recognition of adverse and nonadverse effects in toxicity studies. Toxicol. Pathol. 30, 66 (2002). 14) US FDA : Guidance for Industry Estimating the Maximum Safe Starting Dose in Initial Clinical Trials for Therapeutics in Adult Healthy Volunteers. Pharmacology and Toxicology (2005). 15) 이승무, 안일회, 이언정, 김병균, 김동웅 : 급성부자초오중독에서감두탕과고삼의응용. 대한한의학회지 14, 399 (1993). 16) 김호철 : 한약약리학, 집문당, 서울 p. 250 (2004). 17) Ha, J. Y. and Kim, S. N. : An experiment on the toxic change by the effect of Aconiti Ciliare Tuber effect with "Aiaska Pollack - Decoction" and "Kam Doo - Decocion" upon the mice. Vol. 58, No. 1, 2014

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025~038-오공약침의

025~038-오공약침의 25 DOI : 10.3831/KPI.2008.11.4.025 A Study on Subchronic Toxicity Test and Method of Increasing Output of Scolopendrid Pharmacopuncture Kim Sung-chul *Dept. of Acupuncture & Moxibustion, Gwang-Ju Oriental