Journal of Life Science 2014, Vol. 24. No 에서배설되는시간이길어광역학치료시완전히대사될때까지빛을보지못하는단점을가지고있었다 이런단점과부작용을줄이고치료효과를높이기위해서최근에는더좋은반응성을가지고 체내에서빠른대사를보이는광과민성물질개발

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동원 동
7 years ago
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1 Journal of Life Science 2014 Vol. 24. No ~251 ISSN (Print) ISSN (Online) DOI : μ μ 암치료법에는수술치료법 약물치료법및방사선치료법등 이있으며 이런치료방법은단독치료와병행치료를하므로 치료효과는좋지만치료에의해발생하는많은부작용과경제 적인부담이환자에게커다란고통이된다 하지만광역학치 료법은수술치료법과달리전신요법이아니므로부작용이거 의없고 경제적인부담이적어반복시술이가능하며환자의 고통을덜어주는장점이있다 그래서최근에는폐암 식도암 자궁경부암의치료에광역학치료법이많이행해지고있다 광 역학치료 는기존의암치료법과는달 리광역학활성을갖는광과민성물질을처리하고일정시간이 지난후에광케이블을이용해광을조사하게되면체내의풍부한산소를활성산소로전환시켜활성산소가암세포를파괴하게하는새로운암치료방법이다 암세포가사멸되는형태를보면 와 기작에의해암세포가사멸되는데 는핵이축소되고 미토콘드리아와세포막이팽창되어물풍선처럼부풀어올라터지게되므로암세포의내용물들이유출되어정상세포에영향을미치며 외부적으로는 과 현상으로나타난다 는세포가축소되고 핵이응축되면서 가 에의해단편화되며 세포는 의소낭구조물로분열되어대식세포의식작용으로제거된다 는비생리적인조건에서일어나는강제적인세포사라면 는생리적인조건에서일어나는프로그램세포사이기때문에다른부작용없이암조직이제거된다 광역학치료에사용되는광과민성물질은빛을조사하지않은암조건에서는높은농도에서도세포독성을거의나타내지않지만 특정파장의빛을조사하면 상태로전환되면서활성산소를생성해내면서세포독성을나타내는치료제이다 그러나기존에사용중인광과민성물질인 유도체들은체내

2 Journal of Life Science 2014, Vol. 24. No 에서배설되는시간이길어광역학치료시완전히대사될때까지빛을보지못하는단점을가지고있었다 이런단점과부작용을줄이고치료효과를높이기위해서최근에는더좋은반응성을가지고 체내에서빠른대사를보이는광과민성물질개발의필요성이대두되어 유도체를이용한차세대광과민성물질을개발하기위하여물리화학적특성과작용기전에대한연구가이루어지고있다 약용식물인도라지 생강 칡 등의뿌리와잎을이용하여광역학활성을조사한결과칡잎에서가장활성이높게나타나 구조를갖는광과민성물질을분리하기위하여연구를진행하였다 칡은콩과다년생의활엽덩굴성식물로한국 중국 만주 대만 일본등을포함한극동아시아의온대영역에폭넓게분포하며 칡뿌리는한의학에서갈근이라는생약명으로해열 혈압강하 뇌혈류량증가 관상동맥확장 항부정맥 평활근이완 혈소판응집억제작용등의효능을갖고있어 한국 중국 일본등지에서중요한약용식물로사용되어왔다 칡의성분에대한연구로는칡뿌리에대한연구로주성분은전분이고이외에 계성분인 이상 및 과 β 를함유하고있는것으로알려져있고 칡꽃의성분으로는 등이있으며 칡잎의성분은 등이보고되어있다 칡뿌리의 성분은관상동맥확장 심장근육의산소소모량감소 혈소판응집억제에보고되어있으며 류인 의항산화효과 외에해열 해독 등간장병과관련한약리작용등이알려져있다 또다른약리활성에대한연구로 균의저해활성 장내세균의활성화효과 항산화효과 알코올성간손상보호효과 작용 해독작용 면역력증강등의활성을나타내는것으로보고되었다 최근들어칡에는에스트로겐유사물질인 이콩보다 배 석류보다는 배나많이함유되어있어여성갱년기증후군치료에좋은효과가있는것으로보고되고있으나 칡잎성분에대한생리활성연구보고는없다 연구는국내에자생을하고있는칡잎의용매추출물로부터광역학활성이있는광과민성물질을분리하여구조를동정하고 간암세포 에대한광역학활성을조사하여 광과민성물질을개발하기위한연구결과를보고하고자한다 는 에서구입하였고 과 은 에서구입하였다 형광염료 는 에서 는 에서구입하였다 분리정제를위해서 는 을사용하였으며 는 를사용하였다 물질의분리도를확인하기위해서고성능액체크로마토그래피 분석을실시하였고 구조동정을위해서핵자기공명분광기 은 로측정하였으며 용 은 제품을사용하였다 그리고분자량의측정을위해서는 분석을하였다 암세포배양은 을이용하였고 세포관찰은 를이용하였으며 효소활성등은 를사용하였다 칡잎은 년 월 경남창원시진해구에서채취하여서늘한그늘에서 주간음건하고 뿌리와잎으로나누어분쇄기로분쇄한후중량기준 배량의 을넣어상온에서 일동안정치시킨후 으로 시간동안진탕추출하여 로여과하였다 추출은 회반복추출하였으며 여과액은진공농축기 를이용하여농축하여냉장보관하면서실험에이용을하였다 실험에사용한간암세포주 은한국세포주은행 으로부터분양받았으며 암세포배양을위해 에 의 이포함된성장배지를사용하여 조건하에서배양하였다 세포성장에따른과밀도현상을방지하기위하여세포의생육정도를관찰하면서계대배양을실시하여적정수의세포를유지하였다 의형태적변화를관찰하기위하여세포수를 로조정하고 에 씩첨가하여 시간배양하였다 칡잎에서얻은용매추출물을

3 244 생명과학회지 2014, Vol. 24. No. 3 에용해시켜 μ 농도가되게조절한다음각 에 최종농도가 가되게처리하였다 광역학활성을조사하기위하여 추출물을처리하고 시간이경과한후에광조건의 에는광을 분간조사시키고 광을조사한지 시간후에 를이용하여변화된세포주의형태적특징을관찰하였다 암조건의 는물질을처리한후계속암상태로배양한후 시간후에동일한방법으로현미경관찰을실시하였다 차활성검정에서칡잎의용매추출물을처리하고광을조사한곳에서광역학활성이나타나물질의분리와정제에이용하였다 물질의분리단계와순수분리한 생물검정법도식물체추출물검정법과동일하게하였으며 순수분리한 는 에용해시켜 μ μ 농도로각 에 최종농도가 가되게처리하여광역학활성을조사하였다 광역학활성물질의분리정제를위해서추출물을먼저 을실시하였다 칡잎추출물은 순으로용매의극성을높여가면서순차적으로용출하여 개의분획물을얻었으며물질분리 을확인하기위하여 를실시하여 값이 유사한것을그룹으로하여 개그룹으로나누어회수하였다 분획물로부터광역학활성을갖는물질을순수분리하기위하여활성을조사해가며 번의 로서 물질을순수분리하였다 순수분리한물질의불순물함유를조사하기위하여 와 분석으로확인했으며 순수도가확인된물질은구조동정과활성실험을실시하였다 분석조건은 에나타냈으며 용매 은 과 를이용하여실시하였다 은 조건으로하여 분까지 를 까지상승시키고 분까지는 를 까지상승시켰으며 분까지는 가되게 농도를증가시키며분석을실시하

4 Journal of Life Science 2014, Vol. 24. No μ μ 였다 각분리단계별 세포에광역학활성에의한세포독성이있는지확인하기위해 에 로 당 씩첨가하여 시간배양한다음 처리할물질을 에용해시켜 μ 농도로각각 처리하였다 순수분리한광과민성물질의구조분석을위해질량분석은 방법으로분자량을측정 하였으며 물질의기본골격을조사하기위하여물질을 에녹여 과 을실시하였다 세포독성을측정하기위한 는부유세포를 로세포수를조정하여 에 씩첨가 하고 시간동안 조건으로 에서배 양하였다 시간배양한후 를 μ 농도로각각처리한다음 시간후에광조건 에 만광을 분간조사하고 시간후에광조건과암조건의 에 를실시하였다 광조건과암조건의 에 용액을첨가하여 시간배양한다음 형성이확인되면 배지를완전히제거하고 바닥에형성된 을녹이기위해 μ 의 를 첨가하여 를이용해 에서흡광도를측 정하였다 측정값은 회반복하여평균값으로얻었다 가유도되면 세포의모양과핵 의모양에 변화가일어난다 핵 형태적변화를관찰하기위하여 형광염료 로염색한후에형광현미경으로관찰하였 다 세포수를 로조정하고 에 씩분주하여 시간동안 조건으로배양하였 다 시간배양후 를 에용해시켜 μ 농도로처리하였으며 물질처리후 시간이경과한뒤광 조건의 에광을 분간조사하고 시간후에세포를 로회수하였다 원심분리하여배양액을제거하고 과 μ 를혼합하여암조건 상온에서염색시켰다 염색 분후에형광현미경 을이용하여세포의핵 형태변화를관찰하였다 가유도되었을때관찰되는특징중에하나가 현상이다 을확인하기위하여세포를 로조정한후 에 씩첨가하고 시간동안 조건으로배양하였다 는 에용해시켜 μ μ 농도로처리 최종농도 하였으며 처리후 시간이경과한뒤광조사조건에만광을 분간조사하고 시간후에세포를회수한다 회수한세포부유액을원심분리하여상층액을버리고인산완충용액으로세척하였다 를 위에서 분간반응시킨뒤상층액에 와 용액을첨가하고 에서 분간반응시켰다 원심분리하여얻어진상층액에동량의 을첨가하여원심분리하고상층액을제거한다 얻어진 에 을넣고현탁시킨다음 원심분리하여상층을제거하고건조시킨다 를첨가하고 에서 시간방치한후 를혼합한후 을이용하여 로 분간전기영동한다음 로염색하고 하에서관찰하였다 칡잎을 로추출하여농축한다음 과 으로각각녹여용해물을얻어 세포에대한세포독성을조사한결과 칡잎의 용해물을처리하고 광을조사한곳에서간암세포가심하게손상을받았으며 광을조사하지않은곳에서는세포손상이없는것을확인되었기때문에칡잎의 용해물에서광과민성물질에의한광역학활성이있는것을알수있었다 세포에대한 의광역학활성을조사하기위하여 물질을처리한후에세포의형태학적변화가어떻게일어나는지관찰하였다 세포는흡착세포이기때문에세포를분주한후 시간이지나면대부분의세포가 에착상을하게되는데 무처리의대조군은세포가 하게 에부착하여정상적인생육을하는반면 μ 을처리한곳은대부분의세포가탈리되어원형의형태로부유하는현상을볼수있었다 그리고

5 246 생명과학회지 2014, Vol. 24. No. 3 전체에 소낭구조물과 파열된 듯한 작은 조각들이 부유하고 그룹의 물질들을 이용하여 SK-HEP-1세포에 대해 광역학활성 있는 것을 관찰할 수 있었다. M4-3 compound를 처리하고, 을 조사하였다. 그 결과 M1-5그룹의 물질이 SK-HEP-1세포를 광을 조사한 well에서는 처리농도에 따라 세포손상에 차이를 심하게 손상시키는 것을 확인할 수 있었다. 처리한 물질에 의 보였으나, 광을 조사하지 않은 암조건에서는 대조구처럼 정상 한 세포독성은 세포가 사멸되거나 다양한 형태로 형태적인 적인 생육을 하였다. M4-3 compound를 0.1 μg과 0.5 μg을 변화가 일어나는 것이 전형적인 현상이다. 세포가 사멸되는 처리한 처리구에서는 커다란 변화를 볼 수 없었고, 1 μg을 처 리한 처리구에서는 50%의 세포가 apoptosis가 유도될 때의 대표적인 경우는 apoptosis와 necrosis현상으로 볼 수 있는데, apoptosis의 경우는 세포가 축소된 후 소낭구조로 되고 소낭 전형적인 형태, 즉 세포 모양이 길쭉해지고, well에서 탈리도 안에 밀도가 높은 물질들이 검은 입자로 현미경에서 apoptotic 되었으며, 소낭구조물이 형성되는 현상이 나타났다. 5 μg을 body가 관찰된다. Necrosis의 경우에는 세포가 물의 endocy- 처리한 처리구에서는 12시간 이전에 ADCL을 처리한 곳과 같 tosis에 의해 세포소기관들은 한쪽 극으로 몰려있고, 빈 공백 이 대부분의 세포가 부유되고, 형태적인 변화를 심하게 일으 을 갖는 큰 풍선처럼 부풀어진 것을 확인할 수 있다. 칡잎 추출 켜 광역학활성에 의한 apoptosis 가 높게 일어난 것을 확인할 수 있었다. ADCL의 경우에는 광조건과 암조건에서 동일하게 물의 1차 컬럼에서 얻은 M1-5분획물을 처리한 곳에서 apoptosis에 의한 apoptotic body 들을 확인 할 수 있었는데, 비정상 세포 손상을 일으키는 것으로 볼 수 있었고, M4-3 물질은 광을 적인 세포모양을 하는 것들과 세포구조물이 파괴되어 이물질 조사한 곳에서만 apoptosis가 유도되는 것으로 보아 M4-3물 같은 것들이 well에 가득한 것을 확인할 수 있었다. 또 세포가 질은 광과민성 물질로서 광조사에 따라 세포에 독성을 일으키 물풍선처럼 부풀어 오른 모양의 세포들도 확인할 수 있어 는 것을 확인하였다. M1-5를 처리한 곳에서 apoptosis와 necrosis가 동시에 일어난 광과민성물질의 순수분리 것으로 추정할 수 있었다. M1-4와 M1-6의 분획물을 처리한 곳에서도 세포의 형태가 기형을 나타난 것을 확인할 수 있어 칡잎 추출물로부터 apoptosis 유도물질을 분리하기 위하여 활성을 나타내는 물질이 M1-5를 중심으로 전후로 일부 함유 1차로 column chromatography를 실시한 결과 61개의 분획물 된 것을 판단하였다. 활성이 확인된 M1-5분획물을 회수하여 을 얻었으며, 분획물의 물질 분리패턴을 TLC로 확인한 결과는 SK-HEP-1에 독성을 나타내는 물질을 순수분리하기 위하여 3 Fig. 2와 같다. A는 UV short wave (254 nm)로 조사했을 때 나타난 물질의 전개패턴이고, B는 UV long wave (365 nm)로 차에 걸쳐 TLC를 실시하였으며, 분리과정에서 회수한 물질을 조사했을 때 물질의 전개패턴이다. Visible 상태에서도 물질의 이 나타났고, 광을 조사하지 않은 곳에서 세포손상이 없었으 전개패턴을 확인할 수 있었는데 254 nm에서 관찰된 것과 비슷 므로 광역학활성에 의한 apoptosis 유도라는 것을 확인할 수 한 패턴으로 확인되었다. 확인된 물질의 분리패턴에 따라 Rf 있었다. Column과 TLC로서 순수분리한 물질은 chloroform 치가 비슷한 물질들을 같은 그룹으로 하여 6개의 그룹 M1-1(Rf 에 용해성이 뛰어났으며 용해시켰을 때 dark green의 색을 0.88~1.0), M1-2(Rf 0.71), M1-3(Rf 0.58~0.62), M1-4(Rf 0.4~ 0.49), M1-5(Rf 0.18~0.44), M1-6(Rf 0~0.1)으로 나누었고, 6개 띄었다. Column과 3차례의 TLC로 얻어진 물질은 구조동정과 처리한 SK-HEP-1세포는 apoptosis의 전형적인 형태학적 특성 apoptosis 유도활성을 농도에 따른 변화를 확인하기 위하여 순수 분리정도를 TLC와 HPLC로 확인하였다. TLC분석결과 Rf 0.43에서 single spot를 확인되었으며 (Fig. 3A), HPLC로 분 A 석한 결과는 Fig. 3B와 같다. Methanol과 ethyl acetate 두 용매 를 gradient system으로 분석한 결과 Rt 6.546에서 분리한 물 질의 peak를 확인할 수 있었고, Rt 5.68과 5.91의 작은 peak는 물질을 용해시킬 때 사용한 CHCl3 peak로 확인되었다. 분리 한 물질의 흡광도를 측정한 결과 410 nm에서 최대 흡수를 보 였고, 668 nm에서는 410 nm 흡수의 50% peak를 보였으며, B 502, 533, 607 nm에서 작은 흡수 peak를 확인할 수 있었다. 이는 chlorophyll a, b의 흡광도와 비교하면 chlorophyll a는 430 nm와 662 nm에서 최대흡수를 나타내고, chlorophyll b 는 453 nm와 632 nm에서 최대흡수를 나타낸다. 이는 chlorst Fig. 2. TLC developing patterns of subfractions by 1 column chromatography of P. thunbergiana leaves MeOH extract. (A) Phenomena in the 254 nm, (B) Phenomena in the 365 nm. ophyll a와 b와는 다른 구조를 하고 있음을 나타낸다. 그리고 장파장대의 668 nm에서 흡수대를 갖는다는 것은 임상에서 암조직에 조사했을 때 조직 내로 깊이 침투할 수 있어 치료효 과를 높일 수 있는 장점이 있다.

6 Journal of Life Science 2014, Vol. 24. No A B 칡잎에서순수분리한 물질을 에처리 하고광을조사시켰을때광의존적으로 를유도시 켰다 순수분리한물질의기본골격을확인하기위하여 과 을실시하였다 분석결과일반 적으로 과같은 환을갖는화합물에서 볼수있는특징적인 중의하나가 개의 기의 인데 기의 을제외하면 환 주위의 은 개로 이 범위에서나타 나고 기의 이 에서나타난다 순수분리한 물질의 을보면 개의 기가 에각각나타나는것을확인할 수있어 환을갖는물질이라는것을확인할수있었 다 구조에는약 개에이르는 기가존재 하는데이 는 부근에 이나 타나는데순수분리한물질에서는 기의 을확인 할수없었으므로 기가잘려나간구조라는것을알수 있었다 그리고 의 환의중심에는 이온이결합하고있는데 이온은구조적결합이약해서쉽 게떨어져나가는데 이온이떨어져나가면 결합이 형성되어 부분에 이나타나게된다 분리한물질 의 에서는 에 이있는 것이확인되어 이온이탈리되어 환에 가 존재하는것을확인하였다 과 에결합하 고있는 은 에서확인할수있었고 에 기가결합하 고있으면 이고 가결합하게되면 가된다 결과 이 에서 으로나타남으로써 구조라는것을알수있었다 순수분리한물질의 분석결과 개의 을확인할수있었 다 의 수는 개이기때문에 기가 잘려져나간특정구조를하고있다는것을알수있으며 사이에나타나는 기의 이분리한물 질의 에서는나타나지않음으로 기가없다는 증거로확인할수있었다 의 에는 와 과 의 이특징적으로나타나는구조이다 분리한물질의 값 을보면 δ δ δ δ δ δ δ δ 의 이 과동일하게나타났다 그

7 248 생명과학회지 2014, Vol. 24. No. 3 H 3 C H 3 C H 2 C NH N NH H 3 C CH 12 3 O H H O 17 HO O N 22 CH O 8 10 O CH 3 CH 3 리고광역학활성을갖는 화합물에는 와 사이에 구조를갖는화합물들이존재한다 분리한물질의 에서 가 에 는 에서 이확인되어 구조가아님을알수있었다 지금까지 과 결과를종합해보면 의기본 환을갖는구조에 이온이탈리되었고 기가잘려진구조를하고있는것으로확인되었다 그리고분리한물질의분자량을측정하기위하여 분석을실시한결과 와 의 이확인되어분자량 라는것을알수있었다 과 를종합해보면칡잎에서분리한광과민성물질은분자량 의 로구조를동정하였으며 의 화합물이라는것을알수있었다 가 세포의증식에미치는영향을알아보기위해 를실시하였다 에나타난바와같이 광을조사한처리구에순수분리한 의처리농도가높아짐에따라 세포의증식억제율이증가하여 μ 처리에서는 μ 처리에서는 의증식억제효과가나타났다 반면에 를동일한농도로처리하고 광을조사하지않은곳에서는암세포의증식억제에변화를일으키지않았다 에서나타난결과에서도 는광의조사에의해세포독성을나타내는 라는것을알수 μ μ μ μ 있었다 의첨가에따른 세포의사멸효 과가 와연관성을확인하고자형광염료인 으로염색을실시하고 형광현미경을이용하여핵의형태를 관찰하였다 는 로서핵은타원형의온전한형 태의균질한형광염색을나타냈으며 단편화를확인할 수없었고 크기도정상적인것을확인할수있었다 을

의단편화에따른작은염색질들이 매우증가된것이관찰되었다 그리고세포가손상을받아부 유가되어부착되어있는세포수가적은것도확인할수있었 다 반면 를처리하고광을조사하지않은 에서는핵의단편화와응축을관찰할수없었으므로 의광조사에따른 세포의사멸이 유도에의해일어나는현상으로확인할수있었다 의전형적인현상중에하나가 이일어나는것이다 염색질의응축이 일어나고 활성에따라 가끊어지

8 Journal of Life Science 2014, Vol. 24. No A B C D μ 처리하면 가유도되어 관찰에 서도세포가소낭구조로변형이된것을확인할수있고 형광 염료 으로염색을한다음형광현미경관찰을하면소 낭에단편화된 를관찰할수있으며 과비교했을 때도작은발광물질들의단편을확인할수있다 의 사진이 을처리한것으로서전형적인 가 형성된것을확인할수있다 를처리하고광 을조사한 의사진에서도 와동일하게 가일어나 전형적으로관찰되는 의단편화에따른작은염색질들이 매우증가된것이관찰되었다 그리고세포가손상을받아부 유가되어부착되어있는세포수가적은것도확인할수있었 다 반면 를처리하고광을조사하지않은 에서는핵의단편화와응축을관찰할수없었으므로 의광조사에따른 세포의사멸이 유도에의해일어나는현상으로확인할수있었다 의전형적인현상중에하나가 이일어나는것이다 염색질의응축이 일어나고 활성에따라 가끊어지 기때문에전기영동을하면 현상이나타난다 를처리하고광을조사한 의현미경관찰에서 가유도되는것을관찰했기때문에 현상도일어나는지를확인하기위하여 를처리하고세포를배양한다음 세포를회수하여 를 μ μ 분리하고전기영동을실시한결과 형성을관찰 하였다 그결과는 에나타냈으며 무처리와 를처리하고암조건에서배양한곳에서는 가손상을받지않았기때문에 의 현상 을확인할수없었고 를처리하고광을조사 한곳에서는 현상을확인할수있었다 그리고 의경우에는암조건과광조건모두에서 현상을확인할수있었다 에서 가유도된곳의 양상이 끌림으로깨끗한 를볼수없었다 하지만광을조사한곳은 가끌 리는현상을확인할수있었지만광을조사하지않은곳에서 는 가전혀보이지않은것은 과같았으며 물질을처리하고광을조사한곳의 전개양상은 을처리한곳과동일하게나타난것을볼수있다 이것은 를유도하는 과동일한활성을나타내는것 으로판단되며 좀더명확한 현상을확인하기 위해서는세포배양량과물질처리및 분리에주의를기 울여확인을해볼필요가있을것이다 를 처리하고광을조사하게되면 세포의증식에치명 적인영향을미치는데그것은 유도에따른세포사 멸기작으로확인되었다

9 250 생명과학회지 2014, Vol. 24. No. 3 약용식물 잎의 추출물로부터 과 용해물을얻고 각용해물을 세포에대한 세포독성을조사한결과 잎의 추출물 을처리한군에서세포독성을확인하였다 세포독성은광의 조사에따라활성이다르게나타나광과민성물질에의한광역 학활성에의한것으로확인할수있었다 잎의 추출물을이용하여 와 를 실시하면서각단계마다세포독성을조사해가며 를순수분리하였다 분리한물질은 와 로서 를확인한결과 와 로확인되었 고 구조동정을위하여 및 등의분석 을실시한결과 환을가진 유도체라 는것을알수있었고 환의중심에 이온이탈리 된것을 기의 로알수있었다 그리고탄소수가 개로확인되어 구조에 기가잘려진특 정구조라는것을확인할수있었다 과 과 분석결과를종합해서해석한결과분자량 의 로동정하 였다 물질을 세포에처리하여세포에미치는 영향을먼저현미경관찰로확인한결과 형성 과함께세포가사멸되는현상을확인하였다 물질의분리과 정에서는도립현미경으로 현상을확인해가며활성 분획만을회수하여다음단계로진행을계속했다 순수분리한 후에 물질을이용하여형광현미경관찰 등을실시한결과세포의축소 핵의응축 및세포의소낭으로분열화등을관찰할수있었고 형광물질 을처리하여형광현미경으로관찰한결과소낭구조물에서 단편들을확인이되어염색체 가단편화된것을 확인할수있었다 그래서물질을처리하고배양한세포로부 터 를분리하여전기영동으로 현상을확인 한결과 을처리한곳에서 현상을확인할 수있어칡잎에서분리한 물질은 유도하는 것으로결론지었다 그리고물질을분리하는과정에물질을 처리하고광을조사한것과조사하지않은것에서활성에큰 차이를보였으며 순수분리한 물질을처리하고광조건 과암조건에서세포사멸과 유도현상을조사한결과 암조건에서는세포가정상적으로생육한반면광조건에서는 세포가대부분사멸되었다 결과에서도 세포배양에 를 μ 처리하고광을조사 한결과 의세포증식억제작용을확인하였다 그리고 실험에서도광을조사한곳에서 활성을확인할수있었지만광을조사하지않은곳에서 는 을전혀확인할수없었다 따라서 의잎으로부터분리한 는 유도체로간암세포에 를유도하는 라는것을확인되어졌기때문에칡잎을이용한 광역학치료물질개발이가능할것으로사료되며 칡은산림 생태계를심각하게파괴하는덩굴성식물로수목의생육을억 제시키고 고사시키는피해를일으키므로칡을식의약소재나 의약소재로개발한다면농민의고소득창출은물론산림생태 계보호에도기여할것으로사료된다 이논문은부산대학교자유과제학술연구비 년 에의하여 연구되었음

10 Journal of Life Science 2014, Vol. 24. No κ 부산대학교생명환경화학과 중앙대학교피부과학교실 마산대학교임상병리과 국내에서자생하는 잎의메탄올추출물로부터사람의간암세포주 에 를유도하는광과민성물질을찾기위해연구를시작하였다 를유도하는광과민성물질을순수분리하기위해 법과 법을이용하였으며 순수분리한물질의구조동정을위하여 과 및 분석을실시하였다 잎으로부터크로마토그래피법을이용해순수분리한 화합물의흡광도를측정한결과 에서최대흡수를보였고 에서흡수 가나타나는녹색의물질로 와는다른물질이었다 분석결과와 분석결과 분자량 의 화합물로 환으로부터 이온이떨어져나간 유도체화합물로동정되었다 화합물을 세포에대한세포독성을조사한결과 μ 농도로처리한곳에서는 세포증식억제효과가나타났고 μ 농도로처리한곳에서는 세포증식억제효과가나타나농도의존적이었다 그리고 화합물을동일한농도로처리하고 광의조사유무에따른활성차이를조사한결과 광을조사한곳에서만세포독성이나타났기때문에 화합물은광과민성물질이라는것을알수있었다 화합물을처리하고세포의형태학적변화를관찰한결과 핵이응축되었고 소낭이형성되었으며 단편화가일어나는등 의대표적인현상들이일어났기때문에 화합물의세포사멸은광역학활성에의한 유도로확인하였다

Journal of Life Science 2011, Vol. 21. No μ μ

Journal of Life Science 2011 Vol. 21. No. 8. 1120~1126 ISSN : 1225-9918 DOI : http://dx.doi.org/10.5352/jls.2011.21.8.1120 μ μ μ α β Journal of Life Science 2011, Vol. 21. No. 8 1121 μ μ 1122 생명과학회지 2011,