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Korean J. Breed. Sci. 49(4):344-350(2017. 12) https://doi.org/10.9787/kjbs.2017.49.4.344 Online ISSN: 2287-5174 Print ISSN: 0250-3360 Fusarium oxysporum f. sp. raphani 에대한무유전자원의저항성평가 전영아 * 성정숙 이주희 허온숙 노나영 백형진 고호철 농촌진흥청국립농업과학원농업유전자원센터 Evaluation of Resistance to Fusarium oxysporum f. sp. raphani in Radish Germplasm Young-Ah Jeon *, Jung-Sook Sung, Juhee Rhee, On-Sook Hur, Na-Young Ro, Hyung-Jin Baek, and Ho-Cheol Ko National Agrobiodiversity Center, National Institute of Agricultural Sciences, Rural Development Administration Abstract : Identification of Fusarium oxysporum f. sp. raphani and investigation on fusarium wilt development by isolates and inoculation methods were conducted to establish a screening method for fusarium wilt-resistance in radish (Raphanus sativus L.) germplasm. Pathogenicity of F. oxysporum f. sp. raphani isolate, Heonggye-1 and Heonggye-2, to radish plants was confirmed by seedling test. Radish seedlings were inoculated by root-dipping and soil-drenching with or without root-wounding. For Heonggye-1 isolate, mean disease indexes were 4.13 and 3.91 by root-dipping and soil-drenching with root-wounding, respectively, but those were 1.87 and 1.88 without root-wounding. For Heonggye-2 isolate, mean disease indexes were 3.83 to 4.37 regardless of inoculation methods. Two-hundred sixty accessions of radish germplasm collected from 9 countries of Asia and Europe were evaluated for fusarium wilt-resistance by soil-drenching with root-wounding with Heonggye-2 isolate. Fifty-four resistant accessions with higher than 70% of the percentage of resistant seedlings in accession (P R ) and lower than 20% of the percentage of susceptible seedlings in accession (P S ) was found. Eighteen susceptible accessions with lower than 20% of P R and higher than 50% of P S were selected. These accessions could be used as breeding and research materials after re-evaluation of disease-resistance and characterization of agronomical traits. Keywords : Disease-resistance, Fusarium oxysporum f. sp. raphani, Radish germplasm, Screening method 서 무 (Raphanus sativus L.) 는배추과에속하는채소작물로, 농림축산식품주요통계 에따르면 2015년국내무생산량은 125만톤, 1인당연간소비량은양 25kg으로전체채소류의약 15% 에해당하며, 생산량으로보면배추다음으로중요한채소작물이다. 전세계적으로재배되어지역특성에따라다양한식물부위가식재료로쓰이고있으며, 바이오디젤 (Chammoun et al. 2013) 과항암성분 (O'Hare et al. 2008, Kim et al. 2011) 에대한연구가진행되고있다. 최근기후변화와연작재배로인한병해발생으로무재배에어려움이증가하고있으며, 국내에서는주요 *Corresponding Author (E-mail: yjeon@korea.kr, Tel: +82-63-23 8-4941, Fax: +82-63-238-4859) (Received on August 8, 2017. Accepted on November 9, 2017.) 언 병해로시들음병 (fusarium wilt), 뿌리혹병 (Clubroot) 등 19종이보고되어있다 (Korean Society of Plant Pathology 2009). 다양한작물에시들음병을일으키는 Fusarium oxysporum은기주식물에대한병원성을기반으로 150개이상의분화형 (formae speciales) 을가진다. 배추과작물의시들음병원인균으로 F. oxysporum f. sp. conglutinans, f. sp. matthioli 및 f. sp. raphani 3가지가작용하는데, F. oxysporum f. sp. raphani는무에만시들음병을일으키는것으로알려져있다 (Kendrick & Snyder 1942, Bosland & Williams 1987). 무시들음병은토양전염성병으로 1942년발생이처음보고되었으며, 이후미국, 일본, 영국등에서연작재배지와배수불량토양에서막대한피해를가져왔다 (Pound & Fowler 1953, Kanebo & Matsuzawa 1993). 시들음병은뿌리혹병과함께무에발생하는주요병해중하나로서, 황화 (chlorosis), 괴사 Copyright c 2017 by the Korean Society of Breeding Science This is an Open-Access article distributed under the terms of the Creative Commons Attribution Non-Commercial License (http://creativecommons.org/licenses/by-nc/3.0) which permits unrestricted non-commercial use, distribution, and reproduction in any medium, provided the original work is properly cited.

Fusarium oxysporum f. sp. raphani 에대한무유전자원의저항성평가 345 (necrosis), 낙엽 (leaf abscission) 및식물체도관부의갈변유발등작물의품질및생산성과직결되어있다 (Kendrick & Snyder 1942). 무시들음병방제용살균제는없으며, 현재사용되고있는윤작, 석회시용, 토양소독방법은경제성및환경적인문제가있다. 또한식물생장촉진근권미생물 (Plant growth-promoting rhizobacteria) 인 Pseudomonas spp. 를이용한생물학적방제연구가진행되고있으나 (Leeman et al. 1995, Raaijmakers et al. 1995, Leeman et al. 1996), 효과를보기위해서는식물근권에일정농도이상의개체가유지되어야하기때문에넓은재배포장에직접적용하기에는한계가있을것으로생각된다. 가장이상적인방법은유전적으로병저항성을가지는품종을재배하는것이다. 미국에서개발한 Red Prince, 일본의 Otabe, 중국의 China Rose 와 Kinmon-Aka 등다양한시들음병저항성무품종이개발되어있으며, 우리나라에서도종자회사들이개발한무시들음병저항성품종들이판매되고있다. 이와함께일본, 중국, 유럽등지에서수집한무품종을대상으로저항성자원선발 (Soh et al. 2013) 등시들음병저항성무품종육성을위한과제들이수행되고있다. 그러나시들음병저항성과함께우수한농업형질을가지는새로운품종의신속하고효율적인개발을위해서는저항성관련유전자탐색, 병저항성유전양식규명및연관분자마커개발연구도함께수행되어야한다. 이를위하여유전적다양성이높은다양한유전자원을대상으로저항성평가를수행하여저항성자원을선발하는작업이필수적이다. 무시들음병저항성평가방법으로서유묘뿌리를병원균현탁액에담그는침지접종법과현탁액을토양에뿌리는관주접종법을기본으로조금씩변형된방법들이사용되고있다. 저항성평가시스템표준화, 대량검정기술개발등효율성제고를위한연구도지속되고있다. 골든시드프로젝트채소종자사업단은수출용무품종개발을위한시들음병저항성분석기술개발및시스템구축프로젝트를수행하고있으며, Lee et al. (2016) 은간단하고편리한 scalpel 접종방법을이용한유묘검정법을확립하였으며, Kim et al. (2017) 은 F. oxysporum f. sp. raphani 를특이적으로검출할수있는 PCR 프라이머세트를개발하였다. 이러한방법들은품질이비교적균일한품종을대상으로할경우평가와결과해석에효과적일것으로예상되나, 유전적 재배적특성이다양한유전자원에대해서는다른방식이적용되어야할것으로판단된다. 본연구는다양한무유전자원에대한효율적인시들음병 저항성평가시스템을확립하고이를통하여시들음병저항성및감수성자원을선발하고자무시들음병원인균 F. oxysporum f. sp. raphani를분리 동정하고, 균주와접종법에따른시들음병발생을조사하여최적접종법과평가기준을설정하고, 우리나라, 무원산지인근국가등 9개국가에서수집된무유전자원 260점의 F. oxysporum f. sp. raphani 저항성을평가하였다. 재료및방법병원균분리및동정시들음병이발생한강원도횡계지역포장에서채취한병든무식물체로부터병원균을분리하기위하여갈변된도관부를포함한줄기절편을잘라내어 1% NaOCl 용액으로 1분간표면살균하고, 멸균수로 3회세척한후물기를제거하고 WA (water agar) 배지에서 5일간배양한후단포자분리하였다. PDA (potato dextrose agar) 배지에서 25, 암조건으로 7~14 일배양하여균사형태와색상, 균사생장속도등배양특성을조사하였다. CLA (carnation leaf agar) 배지에서 22, NUV (near ultra-violet) 광 / 암 (12시간주기 ) 조건으로 15일배양후대형분생포자, 소형분생포자, 후벽포자등형태특성을조사하였다. 형태적동정의한계를보완하기위하여 F. oxysporum f. sp. raphani 검출용프라이머세트 (Kim et al. 2017) 를이용한재확인작업을수행하였다. PDB (potato dextrose broth) 배지에배양한균사를동결건조후마쇄하여 DNeasy plant mini kit (Qiagen) 로 genomic DNA를추출하였다. 프라이머 FOR2-F (5 -TGGATCAGCCAGGAGATAAGCCTCT-3 ) 와 FOR2-R (5 -GCTATCAACCCATAGATGGCTGATCTGT-3 ) 를사용하여초기 DNA 변성 94 에서 5분, 변성 94 에서 20초, 프라이머결합 57 에서 19초, DNA 신장 72 에서 30초과정을 35회실시하고최종신장을 72 에서 5분간실시하고, 해당크기의 PCR 산물생성여부를조사하였다. 병원성검정무유묘에대한 F. oxysporum f. sp. raphani 횡계-1 과 횡계 -2 균주의병원성을조사하였다. PDB에 5일진탕배양한후균사를 3겹거즈로걸러내고여액을멸균수로희석하여 1.0 10 7 conidia/ml의농도로포자현탁액을만들었다. 무종자는 강호 ( 농협종묘 ) 등 5개시판품종을사용하였으며, 50공육묘포트에원예용범용상토 (( 주 ) 서울바이오 ) 를넣고품종당 5 포트, 포트당종자 1립씩파종하여 20±5 로유지되는유리온실에서육묘하였다. 균접종은단근침지, 침지, 단근관주, 관주 4가지방법을

346 韓育誌 (Korean J. Breed. Sci.) 49(4), 2017 Fig. 1. Disease index of fusarium wilt on radish plants inoculated with Fusarium oxysporum f. sp. raphani. 0, healthy plant; 1, plant with browning of the vascular system; 2, wilted plant with poor leaf development; 3, plant with wilting and chlorosis; 4, plant with wilting and necrosis; 5, dead plant. 사용하였으며, 각방법당 25개체 (5 품종 5 개체 ) 를사용하였다. 단근침지는본엽 2개가전개된유묘를육묘포트에서뽑아뿌리부분의흙을물로씻어내고멸균된가위로뿌리끝부분을약 2 cm 정도잘라상처를낸후포자현탁액에 20분간침지하였다. 단근관주는 Lee et al. (2016) 이보고한방법을참고하여식물을뽑지않고지제부로부터 0.5 cm 떨어진곳에 90도각도로깊이 3 cm 부위까지 scalpel로찔러뿌리에상처를낸후포자현탁액 10 ml을토양에관주하였다. 침지와관주는위방법중뿌리에상처를내는단계만생략하였다. 단근침지와침지접종된유묘는새토양이담긴육묘포트에옮겨심고, 단근관주와관주접종된유묘는기존육묘포트에서계속배양하였다. 대조구는포자현탁액대신멸균수를접종하였다. 접종된유묘는 25±5, 광 / 암 (12 시간주기 ), 상대습도 60~70% 조건에서 14일배양후발병증상에따라발병도 (disease index) 를부여하였는데, 병징없이건강한식물체에 0, 지상부는비교적건강하나도관부가갈변된식물체에 1, 지상부가약간시들고본엽의전개가느린식물체에 2, 지상부가시들고황화된식물체에 3, 지상부가많이시들고조직괴사가일어난식물체에 4, 고사한식물체에 5를부여하였다 (Fig. 1). 통계처리를위하여 R 3.4.0 (R Core Team 2017) 프로그램으로 95% 신뢰수준에서 ANOVA와 Duncan s multiple range test를수행하였다. 무유전자원시들음병저항성평가국립농업과학원농업유전자원센터에서분양받은무유전자원 260점을이용하여 F. oxysporum f. sp. raphani 횡계-2 균주에대한저항성평가를실시하였다. 본엽 2개가전개된유묘를단근관주접종하여 25±2, 광 / 암 (12시간주기 ), 상대습도 60~70% 조건에서 14일배양한후, 발병증상에따라발병도값을각개체에부여하고, 발병주율 (%) 은증상의정도에상관없 이조사개체수에대한발병개체 ( 발병도 1~5 값이부여된개체 ) 수의비율로계산하였다. 저항성또는감수성판단을위하여, 한자원내에서조사한총개체수에대한발병도 0 또는 1인개체의백분율로계산되는저항성개체비율 (P R ) 과총개체수에대한발병도 4 또는 5인개체의백분율을나타내는감수성개체비율 (P S ) 을이용하였다. P R 이 70% 이상이면서 P S 가 20% 이하일경우 저항성, P R 이 20% 이하이고 P S 가 50% 이상일경우 감수성 으로판단하였다. 시들음병저항성대조품종으로 명산무 ( 신젠타코리아 ), 감수성대조품종으로 아시아백춘 ( 아시아종묘 ) 을사용하였다 (Lee et al. 2016). 결과및고찰병원균동정포장에서 F. oxysporum f. sp. raphani에감염된무의주요병징은잎의황화, 시들음, 뿌리도관부의갈변및고사로나타났다 (Fig. 2A~B). 횡계-1 과 횡계-2 균주의형태적특성을조사한결과, PDA 배지에서평균생장속도는 6.8mm/day이었으며보라색균총을형성하였다. CLA 배지에서생성된소형분생포자는원형또는타원형으로격막이없었으며, 대형분생포자는직선또는약간굽은모양이고 3개의격막을가졌다. 분생자경은단경자를형성하였고후막포자는균사말단또는중간에형성되었다. 이러한형태적특성은 Leslie & Summerell (2006) 의 F. oxysporum의특성과유사하였으며, 기주식물이무인점을고려하여 F. oxysporum f. sp. raphani로판단하였다. F. oxysporum f. sp. raphani 검출용프라이머세트를이용한 PCR 분석결과 450bp 크기의산물이확인되었으며 (data not shown) 두균주모두 F. oxysporum f. sp. raphani 로동정하였다. 두균주를국립농업과학원미생물은행 (Korean Agricultural Culture Collection)

Fusarium oxysporum f. sp. raphani 에대한무유전자원의저항성평가 347 Fig. 2. Disease symptoms of fusarium wilt in the field and resistant/susceptible plants in seedling test. A and B, wilting and chlorosis of leaves and browning of root vascular tissues in diseased plants; C and D, resistant and susceptible plants after inoculation with Fusarium oxysporum f. sp. raphani Heonggye-2 isolate. Table 1. Fusarium wilt development according to isolates of Fusarium oxysporum f. sp. raphani and inoculation methods. Isolates Soil-drenching + root-wounding Soil-drenching Mean disease index Root-dipping + root-wounding Root-dipping Heonggye-1 1.87 c z 1.88 bz 4.13 ay 3.91 ay Heonggye-2 4.12 ay 3.83 ay 4.37 ay 4.12 ay Each value represents the mean disease index with 5 replicates of 5 radish cultivars. Means followed by the same letters in a column did not differ significantly by Duncan s new multiple range test at p=0.05. Means followed by the same letters in a row did not differ significantly by Duncan s new multiple range test at p=0.05. 에기탁하여 횡계-1 균주에 KACC 48265, 횡계-2 균주에 KACC 48266 번호가부여되었다. 무에대한병원성과접종법 F. oxysporum f. sp. raphani 횡계-1 과 횡계-2 균주로단근침지와침지접종된유묘는접종후 7일, 단근관주와관주접종된유묘는 8일부터병징이나타나기시작하였으며, 14일후모든접종구에서유묘의황화, 시들음, 고사증상이관찰되었다. 접종방법에따른평균발병도는 횡계-1 균주의경우단근관주 1.87, 관주 1.88, 단근침지 4.13, 침지 3.91이었으며, 횡계-2 균주의경우단근관주 4.12, 관주 3.83, 단근침지 4.37, 침지 4.12로조사되었다 (Table 1). 접종방법에따른병원성은두균주간차이가있었는데, 횡계-2 균주가접종방법의영향을크게받지않고높은발병도를나타낸반면, 횡계-1 균주는단근침지와침지접종에서만높은값을나타내었다. Baik et al. (2010) 은무시들음병저항성검정법연구에서무유묘에뿌리에상처를내지않고포자현탁액을관주접종할경우시들음병이전혀발생하지않았다고보고하였다. 그런데본연구에서 횡계-2 균주의경우관주접종또한시들음병발생에효과가있는것으로 나타났으며, 이는균주의병원성정도에따른차이때문인것으로생각된다. 양배추에서시들음병발생이관주접종보다침지접종에서다소높았다는보고가있으며 (Song et al. 1996), 본연구결과에서도균주들의병원성차이를고려하지않는다면침지접종이관주접종보다병발생에효과적일것으로예상된다. 하지만침지접종은유묘뿌리세척및절단, 병원균현탁액에뿌리침지, 접종한유묘의토양이식등처리과정이복잡하고노동력과시간소요가많은단점이있다. Lee et al. (2016) 은비록본연구과다른균주를사용하기는하였으나무품종들의시들음병발생및저항성반응에있어단근침지와단근관주 (scalpel 접종 ) 모두효과적이었다고보고하였다. 따라서접종법에따른발병도의차이가없었던 횡계-2 균주를이용한다면비교적간단한단근관주접종법으로많은유전자원을빠르게평가할수있을것으로예상된다. 무유전자원시들음병저항성우리나라, 중국, 일본, 인도, 이집트, 터키, 아프가니스탄, 이란, 미국등 9개나라에서도입된자원 260점에대하여단근관주접종으로 F. oxysporum f. sp. raphani 횡계-2 균주를접종한

348 韓育誌 (Korean J. Breed. Sci.) 49(4), 2017 Fig. 3. Distribution of the incidence rates of fusarium wilt (A) and mean disease indexes (B) in radish germplasm after inoculation with Fusarium oxysporum f. sp. raphani Honggye-2 isolate by soil-drenching with root-wounding. Resistant check cultivar is Myeonsanmoo and susceptible one is Asia baekchun. 결과, 시들음병증상은접종 8일경부터나타났으며 12일전후로저항성과감수성이육안으로구분되었다 (Fig. 2C~D). 접종 14 일후발병주율 (%) 은저항성품종 명산무 36%, 감수성품종 아시아백춘 84% 로조사되었으며, 무유전자원은 5~100% 범위내에서다양하게분포하였다 (Fig. 3A). 전체자원중 68점은 명산무 보다낮은발병주율을보였는데, 그중 8점은 10% 이하값을나타내었다. 57점은 아시아백춘 보다발병주율이높았는데, 발병주율 100% 를나타내는자원으로 12점이관찰되었다. 평균발병도는 명산무 0.8, 아시아백춘 3.2로 Lee et al. (2016) 에서단근관주접종으로조사한값과유사하였으며, 무유전자원은 0.2~4.4 범위에서다양한분포를나타내었다 (Fig. 3B). 전체자원중 16점은 명산무 보다낮은값을나타내었고, 23점은 아시아백춘 보다높은값을나타내었다. 그런데한자원내에서개체별발병도는 0에서 5까지다양한값으로나타났다. 명산무 의경우 25 개체중발병도 0, 1, 2, 3, 4로조사된개체수가각 16, 2, 4, 1, 2로평균발병도는 0.8이지만표준편차가 1.3이었다. 아시아백춘 은발병도 0, 1, 2, 3, 4, 5로조사된개체수가각 4, 1, 4, 4, 2, 10으로평균발병도 3.2, 표준편차는 1.9이었다. 무유전자원들도 0~2.6 범위의다양한표준편차를나타내었다. 이러한이유로평균발병도를저항성 / 감수성판정기준으로사용하기는어려울것으로판단되었다. 따라서본연구에서는 저항성개체비율 (P R ) 과 감수성개체비율 (P S ) 을기준으로사용하였는데, 명산무 는 P R 72% 와 P S 8%, 아시아백춘 은 P R 20% 와 P S 48% 이었다. 두대조품종의결과에따라, 저항성 기준을 P R 70% 이상이면서 P S 20% 이하로, 감수성 기준을 P R 20% 이하이면서 P S 50% 이상으로설정하였다. 무유전자원에이기준을적용하였을때, 저항성 54점과감수성 18점이선발되었다 (Table 2). 저항성자원비율이높은터키를비롯하여이집트, 이란, 아프가니스탄은무원산지중하나로알려져있는지중해와카스피해인근국가이며, 무야생종의근원지로생각되는중국과함께우리나라와일본은식품재료로서무가중요한나라이다. 작물의원산지는유전적다양성의중심지이며야생근연종및우성유전자가많이분포하므로이들국가에저항성자원이많을것으로추정되기때문에저항성자원이가지는의미가크다하겠다. 특히터키원산 23점이저항성으로관찰되었는데, 미국국가식물유전자원시스템 (National Plant Germplasm System) 에의하면이자원들은 1930~40년대미국농업연구청 (Agricultural Research Service) 이터키 11개지역에서수집한것으로다양한뿌리형태특성을가지고있어육종소재로활용가능성이클것으로보인다. 한국, 중국, 일본원산자원중저항성자원이있었으나조사자원수에비하면비율이낮았다. 한국자원은 14점이감수성으로평가되었는데, 그중 2점은 P R 0, P S 80% 이상으로매우높은감수성을보였다. 작물재배중발생하는병의가장효과적인방제방법은저항성품종의재배로서, 무품종개발에서관련업계가가장공을들이고있는것중하나가시들음병저항성품종이다. 연작장해등으로인하여시들음병이급격히번지고있으나약제로는방제가어렵고감염된무는상품성이떨어지므로농가들이저항성품종을원하고있기때문이다. 일본등외국에서개발된품종을수입하여재배하더라도소비자입맛에맞지않아시장성이없는경우가

Fusarium oxysporum f. sp. raphani 에대한무유전자원의저항성평가 349 Table 2. Number of accession of radish germplasm resistant or susceptible to Fusarium oxysporum f. sp. raphani by the country of origin. Country of origin No. of accession No. of accession investigated Resistant a Susceptible b South Korea 75 7 14 Chinese 5 1 - Japan 6 3 - India 33 3 3 Egypt 1 1 - Afghanistan 17 6 - Turkey 51 23 1 Iran 42 6 - United States 9 2 - Unknown 20 2 - Total 260 54 18 a Accessions with more than 70% of the percentage of resistant seedlings (with disease index 0 or 1) in accession (P R ) and lower than 20% of the percentage of susceptible seedlings (with disease index 4 or 5) in accession (P S ). b Accessions with lower than 20% of P R and more than 50% of P S. 있어, 병저항성을가지면서도국내시장에서선호하는농업적형질을가진고유품종을개발이중요해지고있다. 본연구에서시들음병저항성으로평가된자원들은선발강도를높여병저항성을재평가하고포장재배를통하여농업적형질조사를거친다면가치있는육종재료로활용될수있을것이다. 시들음병감수성으로평가된자원들은저항성관련유전자탐색이나저항성작용기작연구재료로활용가치가있을것으로기대된다. 적요무 (Raphanus sativus L.) 유전자원에대한효율적인시들음병저항성평가시스템을확립하기위하여병원균을분리 동정하고접종법과균주에따른시들음병발생도를조사하였다. 시들음병발생식물체로부터확보한 Fusarium oxysporum f. sp. raphani 횡계-1 과 횡계-2 균주의무에대한병원성을유묘검정으로확인하였다. 접종법 ( 침지, 단근침지, 관주, 단근관주 ) 과균주에따른시들음병발생도를조사한결과, 횡계-1 균주를접종한경우평균발병도 (disease index) 가단근침지 4.13, 단근관주 3.91로높았으나, 단근처리없이는 1.87과 1.88로낮았다. 반면 횡계-2 균주를접종한경우, 접종법에상관없이평균발병도 3.83~4.37로높았다. 아시아와유럽 9개국가에서수집된무유전자원 260점의시들음병저항성을평가하기위하여 F. oxysporum f. sp. raphani 횡계-2 균주를단근관주접종하여저항성을평가한결과, 저항성개체비율 (P R ) 이 70% 이상이면서감수성개체비율 (P S ) 20% 이하로서 저항성 으로판단되는자원 54점, P R 20% 이하이면서 P S 50% 이상으로서 감수성 으로판단되는자원 18점이선발되었다. 이자원들은포장재배를통한농업적형질조사를거친후시들음병저항성무품종육성재료및저항성관련연구재료로서활용가치가높을것으로기대된다. 사사본연구는농촌진흥청연구개발사업 ( 과제번호 PJ011922) 의지원에의하여이루어진것임. REFERENCES 1. Baik SY, Kim JC, Jang KS, Choi YH, Choi GJ. 2010. Development of effective screening method and evaluation of radish cultivars for resistance to Fusarium oxysporum f. sp. raphani. Res Plant Dis 16: 148-152. 2. Bosland PW, Williams PH. 1987. An evaluation of Fusarium oxysporum from crucifers based on pathogenicity, isozyme

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