전철민 1 유현미 2 권혁춘 1 * 1 서울대학교치과대학치과보존학교실, 2 성균관대학교의과대학, 삼성서울병원치과진료부보존과 ABSTRACT EFFECT OF PH AND STORAGE TIME ON THE ELUTION OF RESIDUAL MONOMERS FROM POLYMERIZED COMPOSITE RESINS Cheol-Min Jeon 1, Hyun-Mi Yoo 2, Hyuk-Choon Kwon 1 * 1 Department of Conservative Dentistry, College of Dentistry, Seoul National University, 2 Department of Conservative Dentistry, The Institute of Oral Health Science, Samsung Medical Center, Sungkyunkwan University, School of Medicine Objectives : The purpose of this study was to determine whether ph and time has any influence on the degradation behavior of composite restoration by analyzing the leached monomers of dental composites qualitatively and quantitatively after storage in acetate buffer solution as a function of time using high performance liquid chromatography (HPLC) / mass spectrometer. Materials and Methods : Three commercial composite restorative resin materials (Z-250, Heliomolar and Aeliteflo) with different matrix structure and filler composition were studied. Thirty specimens (7mm diameter 2mm thick) of each material were prepared. The cured materials were stored in acetate buffer solution at different ph (4, 7) for 1, 7 and 45days. As a reference, samples of unpolymerized composite materials of each product were treated with methanol (10 mg/ml). Identification of the various compounds was achieved by comparison of their mass spectra with those of reference compound, with literature data, and by their fragmentation patterns. Data were analysed statistically using ANOVA and Duncan s test. Results : 1. Amounts of leached TEGDMA in Aeliteflo were significantly larger than those of UDMA in Z-250 and Heliomolar at experimental conditions of different storage time and ph variation (p < 0.001). 2. As to comparison of the amounts of leached monomers per sorage time, amounts of leached TEGDMA in Aeliteflo and UDMA in Z-250 and Heliomolar were increased in the ph 4 solution more significantly than in the ph 7 solution after 1day, 7days and 45days, respectively (p < 0.001). 3. In total amounts of all the leached monomers with storage times, the overall amounts of ph 4 extracts were larger than those of ph 7 extracts for all resin groups, but there was no significant difference (p > 0.05). [J Kor Acad Cons Dent 29(3):249-266, 2004] Key words : Light cured composite resin, Leaching of residual monomers, ph variation, High performance liquid chromatography (HPLC) * Corresponding author: Hyuk-Choon Kwon Department of Conservative Dentistry, College of Dentistry, Seoul National University 28-2 Yeongun-dong, Chongro-gu, Seoul, Korea, 110-749 Tel: 82-2-2647-2882 Fax: 82-2-2647-7528 E-mail: juhohyun@hanmail.net Ⅰ. 서론 복합레진은향상된물리적성질, 우수한심미성, 상아질과법랑질에대한높은접착력등으로인해치과수복분야에서광범위하게사용되고있다. 광중합복합레진의중합률은 35~77% 로보고되고있으며, 이는복합레진의경화된수복물내에비교 249
대한치과보존학회지 :Vol. 29, No. 3, 2004 적많은양의미반응잔류단량체가있음을의미한다 1-3). Ruyter 등 4) 은중합체내의잔존이중결합은레진의강도, 색안정성과마모저항도등과같은물성의저하원인이된다고하였고, Hank 등 5) 은미중합된레진성분들이수복물로부터유리되어나와상아세관을통해확산되어치수에유해한자극을줄수있음을지적하였다. 광중합복합레진의불완전한중합과구강내와같은수용성환경은복합레진의분해와침식의원인이될수있다 6). 이러한레진표면의분해작용으로미반응잔류단량체들이타액이나다른용매로유출될수있으며그정도는중합률이외에중합깊이, 광도및중합시간등다양한인자에의해영향을받게된다 7). Ferracane 과 Condon 8) 은증류수나에탄올 / 증류수혼합액에복합레진을침지시킬경우침지용액에관계없이거의대부분의용출가능한성분들이 24 시간이내에유출된다고보고하였다. Inoue 와 Hayashi 9) 는복합레진의중합후외부로유출되는잔류단량체량은초기중합체무게의약 0.4~1.2% 정도이며, 3 일후에최대에이른다고하였고, 물로유출될수있는잔류단량체량은전체미반응잔류단량체량의 10% 보다적다고보고하였다. Ferracane 과 Condon 8), Tanaka 10) 등은침지용매로유기용액을사용한결과복합레진의표면이연화되어많은성분들이유출되었으며, 복합레진성분들의유출과정에단량체의화학적조성과구조적크기도중요한역할을한다고하였다. 복합레진기질의대부분은 Bis-GMA (Bisphenol A diglycidyl dimethacrylate) / TEGDMA (triethyleneglycol dimethacrylate) 등과같은여러단량체의가교결합으로형성된다. Bis-GMA / TEGDMA 등으로구성된복합레진의불완전한중합과높은친수성은수분흡수를증가시키며, 강도, 경도, 마모저항도등을저하시켜미반응단량체가유출될수있다 11,12). Gerzina 와 Hume 13) 은고성능액체크로마토그래피 (HPLC-High Perform- ance Liquid Chromatography) 를이용하여유출된 TEGDMA 와 Bis-GMA 단량체들을검출하였고, Tanaka 등 10) 은기체크로마토그래피 (GC-Gas Chromatography) 를이용하여복합레진이침지되어있던물에다량의 TEGDMA 와소량의 Bis-GMA 들이유출되어있음을확인하였다. 중합된복합레진으로부터미반응잔류단량체가유출될수있는과정은생체외에서크게 2 개의과정으로분류될수있으며, 그중한부분은물리적파괴과정에의한것이고, 다른부분은효소에의한가수분해반응과같은화학적파괴에의한것이다 14,15). 물리적과정에의한것은레진기질의연화와마모, 기계적응력의집중등으로인한구성성분의소실을의미하며, 화학적과정은물을매개체로한레진기질의산화와가수분해과정이며, 레진중합체의에스터결합의파괴등으로일어날수있다. 특히이러한가수분해는구강내조직, 세균, 타액등의 esterase 에의해촉진될수있고, 레진중합체로부터미반응잔류단량체들을유출시킬수있다 16). 광중합복합레진의잔류단량체유출과정은기계적, 물리적 과정에의한구성성분의소실만으로설명할수없으며, 구강내의가수분해효소, 음식물에서유출되는알코올과유기산, ph 의변화, 치태내의산등에의한분해등화학적과정과복합적으로이루어진다 17,18). 복합레진의화학적분해과정은독립적, 혹은복합적으로일어나는산화와가수분해과정이고물이중요한역할을한다. 물의흡수는확산과정을통해복합레진의기질에서일어나며침지시간과레진의 filler 함량에의해서영향을받는다 19). 확산된물분자는화학적분해를촉발시키며레진기질의분해산물들은중합체로부터유출될수있다. 또한 filler 의침식이일어날수도있으며이러한 filler 의침식으로복합레진의성분이유출될수도있다 20). Filler 와같은무기산물이외에분해된유기산물의유출은구성분자의크기에영향을받는다. 분자량이보다작은단량체들은큰단량체들에비해큰운동성으로인해보다빨리유출된다. TEGDMA 는유연성이있는긴이중기능성레진으로단단한방향성단량체인 Bis-GMA 의점조도를감소시키고조작성을향상시키기위해사용하는희석제로복합레진중에대략 30% 내외의비율로함유되어있으며, Bis-GMA 와 TEGDMA 의비율은 3:1 정도이다. 또한 UDMA (urethane dimethacylate) 는광원에민감하여중합률증가를위해 Bis-GMA 와더불어보조단량체로사용된다. 여러연구에의하면수용액에침지된복합레진에서유출될수있는주요성분들은약 7 일내에상당부분유출되며분자량이작고친수성인 TEGDMA 가대부분이고, 분자량이비교적큰 Bis-GMA 와 UDMA 는소량검출되었다 6,10). 레진기질을구성하고있는단량체들은생화학적측면에서생체에무해하지않다. Hanks 21) 는생체외연구에서 Bis-GMA, Bis-EMA (ethoxylated Bisphenol A dimethacrylate) UDMA,TEGDMA 등이모두세포독성이있으며, 세포의 50% 가실활되는 LD50 이 Bis-EMA 의경우 1~10μmol 라고하였다. 또한 Bis-GMA, TEGDMA, UDMA, Bisphenol-A 의 LD50 은 10~100μmol 로, Bis-EMA 가가장독성이강한것으로보고하였다. 또한 Nassiri 등 22) 은 UDMA 의 25ppm 은구강상피세포의치사량으로보고하였다. 또한 Bis-GMA 의합성단계에서사용하는 Bisphenol-A 성분이타액으로유출되어인체에서여성호르몬인에스트로젠과유사한성질을띤다고주장하는보고도있어 23,24) Bis-GMA 계통레진의유해성여부가논란이되고있다. 생체내에서수복된복합레진은타액과식음료의유기산등에지속적으로노출된다. 이러한물질들은음식물잔사나치석, 치태등의매개체를통해레진수복물의변연부에흡착될수있고수복물내부로의수분확산과수복물과치질계면의미세균열을일으킨다. 이러한균열은지속적으로확장되며, 수복물내부로빠르고많은수분과유기산의침투를가능하게하여수복물의분해를가속시킨다 25,26). 또한치태내에도세균들의대사산물인많은종류의산들이존재한다. 아세트산과젖 250
산등이주성분이며치태내의산도는활동성인경우낮은수치를나타낸다 26). 치태내유기산인아세트산은 Bis-GMA 계통의복합레진의표면을연화시킬수있고, 표면연화에이은수분침투로인한표면팽창은수복물의마모저항도를감소시키고, 표면변색의원인이될수있다 27). 그러나치태내또다른유기산의한종류인젖산은아세트산보다레진표면의연화작용이낮은것으로알려져있다. 복합레진의침지용액은많은종류의용출단량체들을함유하고있으며, 침지용액의분석은레진의분해양상에관한많은정보를제공해줄수있다. 용액내의잔류단량체의정성, 정량분석을위해서는기체크로마토그래피 (GC) 나고성능액체크로마토그래피 (HPLC) 를 Mass spectrometer (MS) 와결합하여사용하는방법이유용하다. 기체크로마토그래피는레진에서의유출된잔류단량체를분석하는방법으로다른화학적인측정법보다신속성과높은감도로널리사용되어왔다. 그러나휘발성기체로시료를처리해야하며시료의분말화과정에서발생되는열에의한화합물의불안정성등의단점이있다. HPLC 를이용한분석법은높은감도를가지며비휘발성이나열에불안정한물질을빠르게분석할수있기때문에수용액으로유출된잔류단량체분석에더유용한방법이다. HPLC 에서분리된시료는 Mass spectrometer (MS) 로보내지며이온화과정을거친후전기장이나자기장으로보내진다. 이온화된성분들은질량대하전비값 (m/z) 의차이에의해각각독특한질량스펙트럼을나타내게되어각성분의분자량및화학구조를확인할수있다 28). 구강내산도는구내환경에따라가변적이다 29). 침샘의파괴나구강건조증등으로인해구강내자정작용이없는경우, 구강내산도는치태나치석등의지속적인침착과내부세균들의대사산물로인해낮아질수있으며레진수복물위에침착된치태로부터유리된유기산은레진표면에기공을형성하고지속적인침투가용이하게된다. 이경우레진의생분해 (biodegradation) 는더욱가속화될것으로생각된다. Chadwick 등 30) 은낮은산도가복합레진의마모저항도와같은기계적물성에미치는영향은적다고하였다. Carboxylic anhydrase 나 cholesterol esterase 등과같은효소에의한복합레진의가수분해에관한많은연구가있었다 31-35). 그러나산도가복합레진의화학적용해에미치는영향에관한분자수준의연구는미미한실정이며단지물리, 기계적인간접적실험방법만으로는규명하는것에는한계가있다. 이에본연구에서는임상에서사용중인수종의광중합복합레진을중성과산성으로조절된아세트산완충용액에침지후, HPLC 와 mass spectrometer (LC / MS) 를이용해시간경과에따른용출용액의성분을직접확인하고정량분석함으로써산도변화가단량체유출에미치는영향에관해연구한결과다소의지견을얻었기에보고하는바이다. 1. 실험재료 Ⅱ. 실험재료및방법 본실험에서사용한광중합복합레진은 hybrid type 인 Z- 250 (3M Co, U.S.A.), Heliomolar (Ivoclar Vivadent, U.S.A.) 와 flowable type 인 Aeliteflo (Bisco, U.S.A.) 등 3 종이며, 구성성분, 제조회사및제품번호는 Table 1 과같다. Table 1. Commercial light-cured dental composite resins used in this study. Brand name (Code) Z 250 (Z) Heliomolar (H) Aeliteflo (E) Manufacturer 3M Dental Products Ivoclar Vivadent U.S.A. U.S.A. Bisco, U.S.A. Lot number 3KUJ L39042 59087 Resin matrix Bis-GMA / Bis-EMA (6) / Bis-GMA / UDMA / UDMA / TEGDMA D3MA Bis-EMA / TEGDMA Filler type Zirconia / silica Silicon Dioxide / YtterbiumⅢ Fluride Barium / silica Filler contents 60~66%/vol,77~87%/wt 46%/vol, 59%/wt 50~56%/wt Filler size 0.01~3.5μm 0.04~0.2μm 0.7~0.8μm Bis-GMA = Bisphenol A diglycidyl ether dimethacrylate TEGDMA = Triethyleneglycol dimethacrylate Bis-EMA = Etoxylated Bisphenol A dimethacrylate Bis-EMA (6) = Bisphenol A polyetheylene glycol diether dimethacrylate UEDMA = Urethane dimethacrylate D3MA = Decamethacrylate 251
대한치과보존학회지 :Vol. 29, No. 3, 2004 Z-250 은 Bis-GMA, Bis-EMA, UDMA 등이구성성분이며, 희석제인 TEGDMA 의대부분을 UDMA 와 Bis-EMA (6) 로대체하였으며, Heliomolar 는 Bis-GMA, UDMA 등이주요구성성분이며희석제로 TEGDMA 대신 Decamethacrylate(D3MA) 를사용한다. Aeliteflo 는 Bis-EMA, TEGDMA 를기본구성으로한다. 광중합복합레진의중합에는 XL-3000 (3M Co, U.S.A.) 광조사기를사용하였으며, 광도측정계 (Demetron Research, U.S.A.) 로 460-480mW/cm 2 의범위내에서사용하였다. 산성완충용액 (ph 4) 은 0.2N acetic acid (CH3COOH) 820ml 와 0.2N sodium acetate (CH3COONa) 180ml 를혼합해만든 0.2M acetate buffer 용액을사용하였으며, 중성완충용액 (ph 7) 은 0.2M acetate buffer 100ml 와 1M ammonium acetate (CH3COONH4) 250ml 를이용해제작하였다. 완충용액으로 acetic acid 완충용액을사용한이유는 LC/MS 분석시에 phosphate buffer 용액과같은무기완충용액은피크가강해서다른물질들의피크들이거의보이지않고세척하기용이하지않아유기완충용액을사용해야하기때문이다. 2. 실험방법 1) 시편제작일정한양을중합하기위해직경 7mm, 깊이 2mm 의양쪽끝이개방된원통형 Teflon 몰드를제작하였다. 실온에서유리슬라이드위에 Mylar strip 을대고몰드를위치시킨후광중합복합레진을기포가발생하지않도록유의하면서약간의잉여량이생기도록충전하였다. 광중합복합레진이충전된몰드위로유리슬라이드를손으로가압하여잉여레진이밀려나오도록하였다. 몰드위의잉여레진제거후 air-inhibited layer 의형성을방지하기위해다시 Mylar strip 으로덮은후광조사기로 40 초간광중합하였다. 중합된시편은전자저울 (Sartorious, Germany, 최소표시 0.1mg) 로무게를측정한후 2ml 의멸균된유리병에넣었으며, 37 항온기에서 1ml 의 ph 4, 7 완충용액에 1, 7, 45 일간침지하였다. 시편의표면적은 1.21cm 2 였으며, 평균무게는 Z-250 이 0.2537g, Heliomolar 는 0.2056g, 그리고 Aeliteflo 는 0.1953g 이었다. 시편처리조건은산도와침지시간을조합하여각각의레진에대해 6 개군으로하였으며각군당시편수는 5 개씩하여총 90 개의시편을제작하였다. Table 2. Experimental conditions according to different ph and storage time. Storage solution acidic buffer solution, ph 4 neutral buffer solution, ph 7 Storage time 1day 7days 45days 1day 7days 45days 2) 고성능액체크로마토그래피 (HPLC) 측정침지기간이경과한후침지용액은시편제거후분석시기까지냉동고에보관하였다. 각광중합복합레진의중합전시료 10mg 씩을전자저울로정확히측정해 1ml 메탄올에녹인후 1500g 의원심분리기로무기충전재를제거해표준용액 (STD) 으로사용하였다. 또한, 기계적조작의편차를최소화하기위해순도 99% caffeine (Aldrich Co.) 을 100ppm 으로희석해 internal standard 로사용하였다. 표준용액 (STD) 과침지용액 (storage solution) 의 HPLC 주입시농도조건은 Table 3 과같다. 실험에사용한 HPLC 는 Nanospace SI-2 (Shiseido, Japan) 이며, 희석용액 1μL 을 HPLC 장치에부착된 1.0 250mm C18 컬럼에투입한후 5% Acetonitile ( 용매 A) 와 Table 3. Dilution of standard solution (STD) and storage solution STD 10mg/mL (10,000ppm) 1000μL (1,000ppm) 100μL/mL (100ppm) Caffeine 10mg/10mL (1,000ppm) 100μL/ ml (100ppm) * ppm = mg/l STD 100ppm 200μL + caffeine 100ppm 200μL 1μL injection Storage solution 100μL + caffeine 100ppm 100μL 1μL injection 252
Table 4. Conditions of HPLC Column Capcell Pak, C18, 1.0 250mm, 5μm (Shiseido, Japan) Mobile phase A ; 5% acetonitile (0.1% formic acid) B ; 95% acetonitile (0.1% formic acid) Gradient condition 50% B (5 ) - 100% B (15 ) - 100% B (60 ) Flow rate 50μL/min Detector UV 215nm (wavelength) 100% Acetonitile ( 용매 B) 를조합한용매조성을갖는이동상을이용하여 50μL/min 의유출속도로용리하였다. 검출기는자외선검출기를사용하였으며파장은 215nm 로하였다. HPLC 사용조건은 Table 4 와같다. 3) Mass spectrometer 를통한유출단량체의정성, 정량분석 HPLC 에서분리된단일물질들을 electrospray ionization (ESI) 방법으로이온화시켜질량분석기 (Iontrap, LCQ Deca XP; Thermo Finnigan, U.S.A) 로질량대하전비가 m/z 100-1000 인범위내에서분석하였다. 표준용액 (STD) 과모든시편의침지용액들은동일한 HPLC 환경하에서분리하였고, 침지용액의 HPLC 크로마토그램과질량분석기 (Mass spectrometer, MS) 의질량스펙트럼을표준용액의것과비교분석함으로써침지용액내의잔류단량체조성을확인하였다. 독특한질량스펙트럼, 분자량, fragmentation pattern 등을통해단량체들을확인할수있었다. 농도를알고있는표준용액의단량체피크의적분값과유출단량체피크의적분값을비교하여유출단량체들의농도를구하였다. Internal caffeine standard 를이용해모든단량체들의피크값을 %CF 으로표준화했고, 표준용액의단량체량에대한침지용액내의단량체량을 %Sol 로나타냈다. 각시료들은 3 회씩반복분석하였다. 4) 통계분석통계분석을위하여각군당 5 개의시편에대해 3 회씩분석으로표본의크기를 15 로하였다. 각각의레진에대해침지시간과산도변화에따른잔류단량체의유출량차이에대한유의성을검증하기위하여일원배치분산분석법 (ANOVA) 을이용하였으며 Duncan's test 로사후검정하였다. Ⅲ. 실험결과 1. 유출단량체검출 (Isolation & Identification) 본실험에서표준용액으로사용한 3 종의중합전레진시료 와중합된시편을 ph 4 와 ph 7 용액에침지시킨후얻어진전형적인 HPLC chromatogram 은 Figures 1 9 와같다. 유보시간 (retention time) 에따라나타나는전형적인형태의 peak 들이 3 종의복합레진에서거의공통적으로관찰되었으며레진의기질조성에따라약간의차이가있었다. Table 5 는각각의유보시간에따라유출될수있는단량체의종류와그화학적분자구조를나타내고있다. TEGDMA 와분자량 490 의단량체가검출된주요화합물이었다. 시료의유기혼합물은 HPLC 를통해단일성분으로분리된후연결되어있는 Mass spectrometer (MS) 로이동되었다. Mass spectrometer (MS) 를통해 HPLC 에서분리된 peak 들중주요 peak 들을확인하고관련된단량체들의화학적구조식을결정하였다. Mass spectrometer 를써서주어진화합물로부터얻을수있는기본적인정보는분자량과이온화양상이다. 분리된화합물은전자와충돌되어양이온으로전환된다. Figures 10 13 은각각 9 분, 14 분, 21 분, 23 분대에검출된화합물의질량스펙트럼과이온화분자들의화학적구조를나타내고있다. 이온화과정에서수소이온 (H + ) 이결합되는것이이상적이나액체크로마토그래피의이동상과침지용액으로사용된완충용액내의다양한이온의존재와실험기구등의오염으로인해여러이온들이결합될수있다. 이번실험의질량스펙트럼에서실제분자량보다높은전하값의 peak 는 H +, Na +, NH3 + 등의이온결합으로생긴것이다. Figure 10 에서 9 분대 peak A 의화합물과연관된물질은 internal standard 인분자량 195 의 caffeine 으로나타났다. 질량수치 195.2 의가장큰 peak 는 caffeine 의어미이온이며옆의 peak 는어미이온에수소이온이결합되어 196 의질량수치를보이고있다. Figure 11 에서 14 분대 peak B 의화합물은질량스펙트럼의질량대하전비로볼때 TEGDMA 일확률이가장높다. Table 6 은 TEGDMA 의질량대하전비와이에맞는화학적구조식이다. TEGDMA 의어미이온에 H +, Na + 결합되어다양한질량대하전비수치를나타내고있다. Figures 12, 13 은각각 21 분대의 peak C, 23 분 peak D 의유기화합물이며, 질량스펙트럼분석을통해각각 UDMA 와 Bis- GMA 인것으로판명되었다. Table 7 은 UDMA 의질량대하 253
대한치과보존학회지 :Vol. 29, No. 3, 2004 E F G A B Figure 1. LC / MS-chromatogram of STD from Aeliteflo (Unpolymerized material) 4E45 A E B F G Figure 2. LC / MS-chromatogram of ph 4 extract from Aeliteflo (Polymerized material) 254
7E45 A E F G B Figure 3. LC / MS-chromatogram of ph 7 extract from Aeliteflo (Polymerized material) E A C D F G B Figure 4. LC / MS-chromatogram of STD from Z-250 (Unpolymerized material) 255
대한치과보존학회지 :Vol. 29, No. 3, 2004 4Z45 A E B C F G Figure 5. LC / MS-chromatogram of ph 4 extract from Z-250 (Polymerized material) 7Z45 E A F G B C Figure 6. LC / MS-chromatogram of ph 7 extract from Z-250 (Polymerized material) 256
D E F G A C Figure 7. LC / MS-chromatogram of STD from Heliomolar (Unpolymerized material) 4H45 A E F G C Figure 8. LC / MS-chromatogram of ph 4 extract from Heliomolar (Polymerized material) 257
대한치과보존학회지 :Vol. 29, No. 3, 2004 7H45 E A F G C Figure 9. LC / MS - chromatogram of ph 7 extract from Heliomolar (Polymerized material) Peak A ; Internal caffeine standard, fragmented methyl methacrylate, methacrylic acid, etc. Peak B ; TEGDMA (triethyleneglycol dimethacrylate) Peak C ; UDMA (urethane dimethacrylate) Peak D ; Bis-GMA (Bisphenol A diglycidyl ether dimethacrylate) Peak E ; Unidentified, probably related to Bis-EMA (Ethoxylated bisphenol A dimethacrylate) Peak F,G ; A certain dimer or oligomer Table 5. Isolated monomers released at its specific retention time. Monomer Retention time (min) Peak Molecular formula Mol. wt. Caffeine 9 A C8 H10 O2 N4 195 TEGDMA 14 B C14 H22 O6 286 UDMA 21 C C23 H38 O8 N2 470 Bis-GMA 23 D C29 H36 O8 512 Bis-EMA (6) 29 E C35 H48 O10 628 * Bis-EMA (6) ; Bisphenol A polyetheylene glycol diether dimethacrylate. 전비와이에맞는화학적구조식이다. H + 가결합되어 471 을, Na + 가결합되어 493 의수치를나타내고있다. Figures 1 3 의 Aeliteflo group 에서는미중합시료분석에서 5 개의전형적인 peak 가관찰되었고이들 peak 들은중합시편의침지용액분석에서도공통적으로나타났다. 중합전시료의 peak E 는여러성분들이혼합되어있는경우가있었다. 그러나, 침지용액에서의단량체들은질량스펙트럼으로볼때중합전시료보다단순화되어 peak 를구성하는성분들은분자량 490 의단일성분으로확인되었다. 중합전시료에서 Bis- GMA 는미량관찰되었고중합후시편침지용액에서는관찰 되지않았다. Figures 4 6 의 Z-250 group 들중미중합시료에서나타난 peak 는 7 개로 3 종의레진들중가장많은 peak 가관찰되었으며 Aeliteflo 에없는 peak C (UDMA) 와 peak D (Bis-GMA) 가있었다. 침지용액에서는 peak C 인 UD- MA 만이용출되었다. Figures 7 9 의 Heliomolar group 에서는미중합시료의 peak D 인 Bis-GMA 가비교적다량포함되었음에도침지용액에서는검출되지않았다. 모든레진에서침지시간의차이에따른단량체의유출성분의차이는없었고, 침지시간이증가함에따라 Aeliteflo 의 TEGDMA peak 와 Z-250, Heliomolar 의 UDMA peak 가증가하였다. 258
4Z45 4Z45 Figure 10. MS spectra of Caffeine (9min) Figure 11. MS spectra of TEGDMA (14min) Table 6. Chemical structure of fragmented ions related to TEGDMA Mass-to-Charge Ratio 287 Ion Chemical Structure Table 7. Chemical structure of fragmented ions related to UDMA Mass-to-Charge Ratio 471 Ion Chemical Structure 304 488 305 493 309 2. 유출단량체의정량적분석 (Quantification of residual monomers) LC / MS 의 peak 면적을적분함으로써흡수도를평가하였다. Table 8 10 은중합전시료들과침지용액내의유출된잔류량체량을정량화하기위하여기준물질인 caffeine 의유출량에대한상대적인유출량을 %CF 으로나타낸것이다. Table 11 은 3 종의레진에서 ph 변화에따라유출량의차이를보이는 TEGDMA 와 UDMA 의통계학적분석이다. Aeliteflo group 들은침지시간및산도에따른 6 개의실험조 건에서 TEGDMA 의유출량변화에있어서유의성있는차이를보였다 (p < 0.001). Z-250 과 Heliomolar 의 UDMA 유출량은침지시간이증가함에따라중성에서보다산성에서유출량이증가하는경향을보였으나, 6 개조건에따른군들사이에는통계적으로유의적인차이를보이지는않았다 (Z: P = 0.303, H: P = 0.261). Figures 14 16 은침지시간별 TEGDMA 와 UDMA 유출량의평균값을비교한것으로제 1 일, 7 일, 45 일각각에서 3 종의레진모두가 ph 7 에서보다 ph 4 에서유의성있게높은유출량을보였고 (p < 0.001), 산도별비교에서는 1 일과 7 일과 45 일사이에서침지기간이증가함에 259
대한치과보존학회지 :Vol. 29, No. 3, 2004 Figure 12. MS spectra of UDMA (21min) Figure 13. MS spectra of Bis-GMA (23min) Table 8. Leached monomer content of Aelitflo groups Retention Compound ph 4 extract (%CF) ph 7 extract (%CF) STD (%CF) time (min) mol.wt. 1day 7days 45days 1day 7days 45days 9.5 caffeine 100 100 100 100 100 100 100 14.78 TEGDMA 955 3218 4097 5069 1651 2411 2816 29.86 m:490 5281 7365 7575 7808 6080 6027 6764 36.43 m:877 498 696 755 777 635 649 748 45.04 m:816 1597 1852 1956 2031 1694 1687 1923 *%CF = percentage related to the internal caffeine standard * STD = standard solution (unpolymerized material) Table 9. Leached monomer content of Z-250 groups Retention Compound ph 4 extract (%CF) ph 7 extract (%CF) STD (%CF) time (min) mol.wt. 1day 7days 45days 1day 7days 45days 9.5 caffeine 100 100 100 100 100 100 100 14.63 TEGDMA 69 622 631 663 225 338 351 21.76 UDMA 572 423 432 459 218 241 263 23.42 Bis-GMA 420 - - - - - - 29.69 m:490 6192 6359 6587 7035 5392 5628 5540 36.37 m:877 472 588 605 649 619 623 641 44.01 m:816 1428 1638 1689 1799 1357 1432 1441 260
Table 10. Leached monomer content of Heliomolar groups Retention Compound ph 4 extract (%CF) ph 7 extract (%CF) STD (%CF) time (min) mol.wt. 1day 7days 45days 1day 7days 45days 9.55 caffeine 100 100 100 100 100 100 100 21.23 UDMA 498 236 246 257 126 143 153 23.42 Bis-GMA 1189 - - - - - - 29.55 m:490 6852 6418 6624 6697 5529 5850 6028 36.28 m:877 532 657 661 673 638 668 669 44.42 m:816 1543 1664 1695 1701 1571 1650 1679 Table 11. Amount of leached TEGDMA and UDMA according to storage time (%CF), n = 15 ph 4 extract (Mean ± SD) ph 7 extract (Mean ± SD) Monomer 1day 7days 45days 1day 7days 45days TEGDMA of 3218.8 ± 381.97 *a 4097.53 ± 464.82 *b 5069.62 ± 484.76 *c 1651.15 ± 70.95 *a 2412.05 ± 95.37 *b 2826.48 ± 314.24 *c Aeliteflo UDMA of Z-250 UDMA of Heliomolar 423.07 ± 24.92 a 431.97 ± 21.19 a 459.52 ± 16.68 b 218.74 ± 21.87 a 241.43 ± 20.10 b 263.67 ± 13.60 c 236.13 ± 18.56 a 246.27 ± 18.26 ab 257.70 ± 18.78 bc 126.92 ± 13.00 a 143.27 ± 5.45 b 152.78 ± 10.91 c *: significantly different on the horizontal line (p < 0.001) values with the same subscript letter in the same row are not significantly different (p > 0.05) Figure 14. Leached TEGDMA of Aeliteflo Figure 15. Leached UDMA of Z-250 따라 ph 4 와 ph 7 모두에서유의성있는유출량의증가를보였다. 각각의레진에대한여섯개의실험군에서동일군의형성유무를유의수준 p = 0.05 로하는 Duncan s test 로검정하였다. Z-250 의 ph 4 의제 1 일, 7 일군이동일군을형성하였으며, 이는 7 일이후 45 일까지의 UDMA 유출량이이전보다유의적으로더많았음을의미한다. Figure 17 은전체잔류단량체유출량의산도별평균값의비교를나타내고있다. 유보시간이 29 분대이후인화합물들은산도나침지시간의변화모두에유의적인차이를보이지않았다 (p > 0.05). 3 종의복합레진모두가 1 일, 7 일, 45 일에 ph 4 용액에서유출량이증가하기는하였으나통계적으로유의성이인정되지는않았다 (p > 0.05). 그러나 Aeliteflo 의경우 261
대한치과보존학회지 :Vol. 29, No. 3, 2004 Figure 16. Leached UDMA of Heliomolar Figure 17. Total amount of leached monomers according to storage time Table 12. Relative percentage of cumulative monomers following 45days storage as to original concentration ph 4 extract, 45days ph 7 extract, 45days Material Compound STD (%CF) (%Sol)* (%Sol)* TEGDMA 373 10 7 0.272 0.151 Aeliteflo m:490 2060 10 7 0.076 0.065 m:877 194 10 7 0.080 0.077 m:816 623 10 7 0.065 0.062 TEGDMA 35 10 7 0.379 0.201 UDMA 286 10 7 0.032 0.018 Z-250 m:490 3096 10 7 0.045 0.036 m:877 236 10 7 0.055 0.054 m:816 714 10 7 0.050 0.040 UDMA 199 10 7 0.026 0.015 Heliomolar m:490 2741 10 7 0.049 0.044 m:877 213 10 7 0.063 0.063 m:816 617 10 7 0.055 0.054 %CF = percentage related to the internal caffeine standard *%Sol = percentage related to original concentration of STD 는유의확률이침지시간별로각각 0.14, 0.09, 0.13 으로다른 2 종의레진보다높았으며 (Z: p = 0.28~0.42, H: p = 0.53~0.65) 이는 Aeliteflo 가침지시간이증가함에따라다른 2 종의레진보다단량체유출량의증가율이높았음을시사한다. 단량체의유출량은 flowable type 인 Aeliteflo 가가장많았으며 Heliomolar, Z-250 순이었다. Heliomolar 와 Z- 250 은유사한유출량을나타내었다. Table 12 는 45 일동안침지용액내에축적되어있는단량체량을미중합시료의단량체량에대해 %Sol 로표시한것이다. 3 종의레진시편의평균무게에대하여 HPLC 주입시의 희석비율을역산하여표준용액의원래농도의 %CF 를산출하였고, 침지용액의경우도마찬가지로원래부피인 1ml 시의 %CF 를얻어표준용액에대한 %Sol 수치를구하였다. 가장많은유출량을보인것은 ph 4 용액의 Aeliteflo 와 Z-250 의 TEGDMA 로각각 0.272%, 0.379% 였다. ph 7 의경우에는각각 0.151%, 0.201% 를나타냈다. Z-250 과 Heliomolar 의 UDMA 의유출비율은 ph 4 일때 0.026% (H), 0.032% (Z) 로 ph 7 일때의.015%, 0.018% 보다높았다. 단량체의유출범위는대략 0.015 0.379% 였다. 262
Ⅳ. 고찰 광중합복합레진은구강내에서다양한종류의수용성환경에지속적으로노출된다. 수분으로인한가수분해반응과수분흡수로인한기질표면의팽창은복합레진의화학적분해의주요원인이다 36). 복합레진의물흡수는주로레진의기질에서일어나며일종의확산과정이다. 복합레진은수용액내의유리된산물이나수용액성분을흡수하기도하고레진자체성분을소실하기도한다. 레진구성성분이수용액내로용해된다면결과적으로표면의미세공간을형성하게되며, 외부적인기계적응력이나외형의변형없이도물성저하에심각한영향을미칠수도있다. 수분으로인한레진기질표면의팽창과성분유출은확산과정에기인한다. 용매는레진기질내로침투하여중합체내에미세기공을형성, 확장시키고미반응잔류단량체들을유출시킬수있다. 레진기질의화학적파괴가아니라이와같은확산과정으로인해수용액내로미반응잔류단량체가유출될수있다. Örtengren 등 37) 은용매로증류수를사용한경우, 중합후 7 일내에복합레진으로부터유출될수있는거의대부분의유기성분들이유출되었다고하였다. Ferracane 과 Condon 8) 은용매로에탄올과물을혼합하여사용한경우, 중합후 24 시간내에미중합잔류단량체들중유출가능한양의대부분이유출되었다고보고하였다. 본연구에서용매로에탄올과같은유기용매가아닌중성과약산성의완충용액을사용했음에도다양한종류의성분들이유출되었다. 중합후 7 일째유출량의상당부분이검출되었고유의성은없었으나시간의경과에따른유출량의증가는이전의많은연구결과와일치한다 6,7,9,10). 치태내유기산으로가정된아세트산완충용액은젖산이나프로피온산등과같은다른유기산들보다분자량이작아레진기질로의확산이용이하고시편내부로보다깊이, 빠르게침투되어레진기질을파괴할수있다 38). 복합레진의침지시간경과와산도변화에따른용해도는기질의친수성정도와사용된 filler 의조성에영향을받는다 39,44,45). 본연구에서 Aeliteflo 가다른 2 종의레진에비해유출단량체량이많았고높은용해도를보인것은기질내의친수성단량체의높은비율에기인한다. Aeliteflo 의기질중 5~15% 를차지하는 TEGDMA 는작은분자량 (m:286.3g/mol) 을갖고있으며 hydroxyl group 은갖고있지않으나 ether linkage 가있어높은친수성을나타낸다. Braden 과 Davy 40) 는 ether linkage 가있는 ethyleneglycol dimethacrylates 가복합레진의기질에서수분흡수를증가시켰다고보고하였다. Z-250 은 TEGDMA 의대부분을 UDMA (m:470.6g/mol) 로대체시킨레진으로 TEGDMA 보다고분자인 UDMA 는분자량당이중결합수가 TEGDMA 보다적고광화에민감하여중합률을높이는데기여한다. Z-250 은 Bis-EMA (6) / UDMA 기질로분자량이크고수분에민감하지않아 Aeliteflo 보다미반응단 량체가수용액내로유출되는양이적었던것으로보인다 (Figure 17). 또한높은 filler 함량 (70 80%/vol) 으로인한적은양의기질도 Aeliteflo 보다유출단량체의양이적었던원인중의하나라고사료된다. Heliomolar 는희석제로 TEGDMA 대신 Decamethacrylate 를사용한것으로알려져있다. Lee 등 38) 은아세트산, 에탄올, 증류수등의다양한수용액에서 TEGDMA 와유사한유보시간대에 Heliomolar 의 Deca methacrylate 의검출을보고하였으나본실험에서는알려져있는분자량이나제조사에서제시한화학적구조식등이없어 Decamethacrylate 의검출을할수없었다. Figure 7 의 Heliomolar 의크로마토그램에서보면중합전시료에상당부분의 Bis-GMA (23 분대 peak D) 가포함되어있었으나침지용액으로유출되지는않았다 (Figures 8, 9). 이는 Bis- GMA 가분자량이크고친수성이높지않으며비교적견고한결합을형성하고있기때문인것으로사료된다. 본연구에서 TEGDMA 와 UDMA 등은중합시편에서의유출성분으로확인되었다. 이들은 Bis-GMA 보다분자량이작아보다빠른시간내에비교적많은양이유출되었고 ph 7 의중성에서보다 ph 4 의산성에서많은양이유출되었으며이는아세트산이레진의기질을연화시켜수분흡수를유도함으로써미반응단량체들의유출에어느정도영향을미쳤음을시사한다. 특히 Z-250 의 UDMA 는 ph 4 에서 1 일과 7 일때보다이후 45 일경과시에유의적으로높은유출량을보인것으로보아 UD- MA 는 TEGDMA 보다늦게방출되는단량체로이와같은경향은 TEGDMA 보다큰분자량과소수성에기인하는것으로보인다. 분자량이 490 (peak E) 인미확인단량체와분자량 800 이상인올리고머 (peakf, G) 등은유출량에있어산도의영향을많이받지않은것으로보이며, TEGDMA 와같은저분자량의단량체가산도변화에민감한것으로보인다. Figure 1 에서 Aeliteflo 의주요구성성분으로제조회사에서제시한 TEGDMA 는 14 분대에검출되었으나 Bis-EMA (mol.:452) 나 Bis-EMA (6) (mol.:628) 에해당하는 peak 는없었다. 그러나 29 분대의유보시간에미량이기는하나전형적인 Bis-EMA 의질량스펙트럼이보이는점과 TEGDMA 와의조성비율로보아분자량 490 의 peak 가 Bis-EMA 일확률이가장높으며변형된 Bis-EMA 형태로존재하고있는것으로보인다. 그러나변형된 UDMA (urethane modified Bis- GMA) 나다른 Bis-GMA 유도체의파절편일가능성도배제할수없다. Ferracane 7) 은레진중합체로부터미반응잔류단량체의유출에영향을미치는중요한요소로중합률, 용매의조성, 그리고유출단량체의화학적특성과크기를제시하였으며, 복합레진의미반응물질의 5~10% ( 레진기질의 2 wt%) 가수용액내로유출될수있다고하였다. Tanaka 등 10) 은분자량이큰단량체보다작은단량체가유의성있게많은양이유출되었다고하였으며, 작은분자들은운동성의향상등으로인해 263
대한치과보존학회지 :Vol. 29, No. 3, 2004 보다빨리유출될수있음을보고하였다. Müller 등 41) 은 Bis- GMA / TEGDMA 로구성된실험적레진에서 TEGDMA 의유출량이 UDMA / TEGDMA 로구성된경우보다약 2 배가량높다고하였고, 이는 UDMA 와 TEGDMA 의높은활동성으로인한중합률의증진때문이라고보고하였다. 본연구에서는 TEGDMA 이외에고분자들도늦은시간대에유출되는것으로확인되었으며, 이는 2mm 후경의시편제작시에윗면만중합하였으므로밑면의중합률저하때문일가능성이있는것으로생각된다. Munksgaard 와 Freund 41) 는레진중합체기질의가수분해가효소에의해촉매되며분해산물로 methacrylic acid 가생성된다고하였다. 비록산성도가높은경우에해당되지만산에의한레진분해도효소에의한가수분해반응과유사하다 46). 레진의가수분해과정은다음과같다. 복합레진의분해는이상과같은레진기질의파괴이외에 filler 의유출과부식의측면에서도연구되었다 37,39). Braden 과 Clarke 42), O/ ysaed 와 Ruyter 43) 는 filler 함량 ( 높은레진기질함량 ) 이낮은복합레진은 filler 함량이높은복합레진보다물흡수가많다고보고하였다. 본실험에서 Aeliteflo 는 filler 함량이 55~56%/wt 로 Z-250 의 77~87%/wt 보다낮다. 이는 Aeliteflo 가 Z-250 보다레진의기질비율이높다는것으로중합전시료의 LC / MS 분석에서도 Aeliteflo 가 Z-250 보다많은양의단량체들을함유한것으로나타났다 (Figure 1). 침지용액에서 Aeliteflo 가 Z-250 보다높은유출단량체량을나타낸것은높은단량체함유량에기인한것으로보인다. Heliomolar 의경우는 Z-250 보다낮은 filler 함량 (50~60%/vol) 에도불구하고 Z-250 과유사한수준의단량체유출을보인것은희석제로 TEGDMA 대신에 Decamethacrylate 를사용했으며 Bis-GMA / UDMA 계통인구성이 Aeliteflo 의 Bis-EMA / TEGDMA 계통보다견고하다고가정해볼수있다. Heliomolar 는침지기간이끝난후표면미세경도를측정한결과 Z-250 과유사한 90Mpa 정도를기록하였다. 낮은 filler 함량을갖는 Heliomolar 가용해도나미세경도측면에서 Z-250 과유사한수치를보인것은경도가강한 filler 의사용과 filler 와레진기질의견고한결합때문이라고도볼수있다. 과거레진의생분해 (biodegradation) 과정을연구하는데보편적으로사용했던방법은무게감소와표면미세경도를측정하는것이었다. 그러나이러한방법들을통해서는분자수준에서의화학적정보를얻는데한계가있고생화학적으로발생하는레진의분해양상을측정하는데오차가크다. 유출단량체의정성, 정량분석등에서얻을수있는레진의생분해에대한정보는세포, 세균혹은효소작용에영향을미칠수있기때문에생물학적으로유의하다. Santerre 등 35) 은레진의생분 해를측정하는 3 가지방법 ( 무게감소, 표면미세경도, LC / MS) 들중 LC / MS 가가장민감하고정확한정보를줄수있다고하였고, 표면미세경도측정도어느정도연관성을갖는다고하였다. 본실험에서는 GC / MS 대신에 LC / MS 를사용하였다. GC / MS 는휘발성인화합물을분리, 분석하는데그신속성과감도때문에널리사용되어왔다. 그러나천연물, 생체성분, 합성물질등의화학물질의약 80~85% 는휘발성이낮고기체상으로처리하기보다는용액으로취급하는것이더편리하기때문에이들물질은액체크로마토그래피의대상이된다. 즉적당한용매에녹일수있는물질이라면그것의휘발성, 열에대한안정성, 무기화합물또는유기화합물등에관계없이액체크로마토그래피에의해분리, 분석이가능하다. LC / MS 는높은감도를가지며쉽고정확하게분석할수있고비휘발성이나열에불안정한물질을빠르게분석할수있기때문에모든분리분석중에서가장널리응용된다. 레진성분분석시에 GC 는단량체들이분해되어많은성분들의 peak 들이나오는경우가있으므로단량체들의분자구조확인이어려울수있다. 본실험에서 LC / MS 의높은분리능으로제조사에서제시하였던기본적인단량체들은상당부분확인가능하였다. MS 분석시에확인이어려운 m490 은추후 NMR 분석을추가로실시한다면성분확인에도움이되리라생각한다. LC / MS 분석의처음단계에서실효분자들은기화되어이온원 (ion sorurce) 으로주입된다. 여기서실효들은높은에너지의전자들에의하여충돌되고, 그결과전자를잃어양이온으로전환된다. 이때생성된 M + 은어미이온이라불리우며양전하를띠고있고동시에짝지어지지않은전자를가지고있는양이온라디칼이다. 이들양이온들은모두 (+) 전위에의해가속되고자장이있는고도진공의질량분리장치로들어가게된다. 이때가벼운이온들은무거운이온들보다쉽게구부러지기때문에자장의세기를조절하여이온들을질량에따라분리시킬수있다. 보통어미이온의질량이실효화합물의분자량에해당한다. 복합레진의미중합시료들을표준용액으로사용하는장점은표준용액의농도만정확히알고있다면추가로순도 99% 의표준물질의검량선을작성할필요가없다는것이고단점은유출량의절대치를알수없고비율만알수있다는것이다. 그러나, 제조사에서복합레진의함유된원래의단량체량을제시해준다면 %wt 로서절대치를알수도있다. 본실험에서중합후 ph 4 용액에서 UDMA 의유출량은 0.026~0.032% 로이수치는무게 200mg, 표면적약 1.2cm 2 로레진충전시에 UDMA 의원래함유량을 5% 미만으로가정하였을경우, 대략 0.002~0.003mg/ml 이유출된다고볼수있다. 이는치수세포를대상으로한세포독성실험 48,49) 에서제시한 ED50 의 264
0.31mg/ml 농도에훨씬못미치는수치이다. 또한 Bis-GMA 의 ED50 은 0.09mg/ml 라고하였으나본시험에서 Bis- GMA 는검출되지않았다. Rathbun 등 53) 은유기용매로경화된 Bis-GMA 레진을유출시킨후분석하여유출된주요성분이 Bis-GMA 이며유출되는물질은전체유기성분의 30% 정도이며유출후독성이 90% 이상감소되었음으로독성물질은 Bis-GMA 라고간접적으로결론내렸었다. 그러나본연구에서는 Bis-GMA 가유출되지않았고설사유출되었다하더라도정량이불가능할정도의미량이었음으로본실험에사용된 hybrid type 레진의주단량체인 Bis-GMA 와 UDMA 는생체친화적측면에서문제점이없을것으로사료된다. Aeliteflo 와 Z-250 의보조단량체인 TEGDMA 의유출량은 ph 4 에서각각 0.272, 0.379% 이고, ph 7 에서 0.151, 0.201% 였다. Aeliteflo 의경우위와같은가정하에 ph 4 에서약 0.027mg, ph 7 에서약 0.015mg 정도의 TEGDMA 가유출될수있으며, 이는치수섬유세포의 ED50 인 0.08mg/ml 에근접한수치이다. 그럼으로, 레진의불충분한중합과부적절한와동이장재의사용으로인한 TEGDMA 의치수로의유출은 TEGDMA 자체의독성으로인한세포손상을일으킬수있으며, TEGDMA 에서유리된 polyethylene glycol 이수복물계면에서미생물들의증식을유도해이차우식증을유발시킬수도있다 50-52). TEGDMA 를주요기질성분으로사용하는복합레진의경우충분한중합을통해 TEGDMA 의유출을최소화하여야한다. Z-250 에존재하는 TEGDMA 는대부분이 UD- MA 로대체되어미량존재함으로비록중합전시료의 0.4% 정도가유출되었다하더라도그양은극미량일것으로사료된다. 비록 TEGDMA 의유출량이적지는않았으나 ED50 을초과하지않았고상아세관액에의한희석및무기질침착에따른치수로의침투가능성이적어상아질을통과해치수까지도달하는 TEGDMA 의양은극소량일것임으로치수에대한유해성은크지않을것으로사료된다. 본실험의결과로미루어보아복합레진은그기질의구성차이에따라차이는있으나산도변화에영향을받으며변화가심할수록그차이는클것으로예상된다. 이는외부적응력없이도구강내의다양한수용액이나조직산물, 치태나치석의세균들이생산하는유기산등으로인한낮은산도에의해생분해과정이진행될수있음을의미한다. 레진의용해에의한유기산물의유출을최소화하기위한신개념의레진기질연구와이들유기물들이미치는생물학적영향에관한연구는지속되어야할것으로사료된다. Ⅴ. 결론 상용중인광중합복합레진을치태내산인아세트산완충용액과중성완충용액에 1, 7, 45 일간침지후유출되는미반응단량체와분해산물을확인하고산도와침지시간변화에따 른유출량의차이와유해성범위를보기위하여정량화하였다. 분석은 LC / MS (HPLC; Shiseido, Japan, MS; Thermo Finnigan, U.S.A.) 를이용하였으며, 단량체의유출량을중합전시료와침지용액내의단량체량의비율로정량화하여다음과같은결론을얻었다. 1. 시료의 TEGDMA, UDMA, Bis-GMA, Bis-EMA 단량체를유보시간 14, 21, 23, 29 분에검출하였고, 중합전시료의 Bis-GMA 는중합시편에서유출되지않았다. 2. 침지시간과산도변화에따른단량체유출량비교에서 Aeliteflo 군의 TEGDMA 는 Z-250, Heliomolar 군의 UD- MA 보다유의적으로큰유출량의차이를보였다 (p < 0.001). 3. 침지시간별단량체유출량비교에서 Aeliteflo 의 TEGDMA 와 Z-250, Heliomolar 의 UDMA 의유출량은 1, 7, 45 일에 ph 7 용액에서보다 ph 4 용액에서유의하게증가하였고 (p < 0.001), 산도별단량체비교에서는침지기간의증가에따른 1, 7, 45 일간의유출량의변화가 ph 4 용액과 ph 7 용액모두에서유의성있게증가하였다 (p < 0.05). Z-250 의 UDMA 의유출량은 1, 7 일사이에서보다 7, 45 일사이에더많은유출량을보였다. 4. 잔류단량체전체유출량비교에서는 3 종의레진모두에서 ph 4 에서유출량이증가하는경향이있었으나유의성은없었다 (p > 0.05). 단량체유출량은 Aeliteflo 가가장많았으며 Heliomolar 와 Z-250 은유사한유출량을보였다. 5. 가장큰단량체유출비율을보인것은 ph 4 에서 Aeliteflo 의 TEGDMA 로 0.272% 였고, 가장작은유출비율을보인것은 ph 7 에서 Heliomolar 의 UDMA 로 0.015% 이었다. 참고문헌 1. Antonucci JM, Bowen RL. Dimethacrylates derived from hydroxylbenzoic acid. J Dent Res 55:8-15, 1976. 2. Asmussen E. Factors affecting the quantity of remaining double bonds in restorative resin polymers. J Dent Res 90:490-496, 1982. 3. Antonucci JM, Toth EE. Extent of polymerization of dental resins by differential scanning calorimetry. J Dent Res 62(2):121-125, 1983 4. Ruyter IE, Oysaed H. Compressive creep of light cure resin based restorative materials. Acta Odontol Scand 40:359-24, 1982. 5. Hank CT, Craig RG, Diehl ML, Pashley DH. Cytotoxity of dental composites and other materials in a new in vitro device. J Oral Pathol 17:396-403, 1988. 6. Ferracane JL, Berge HX, Condon JR. In vitro aging of dental composites in water-effect of degree of conversion, filler volume, and filler/matrix coupling. J Biomed Mater Res 42:465-472, 1998. 7. Ferracane JL, DeWald JP. A comparison of four modes of evaluating depth of cure of light activated composite. J Dent Res 66(3):727-730, 1987. 8. Ferracane JL, Condon JR. Rate of elution of leachable components from composite. Dent Mater 6:282-287, 1990. 9. Inoue K, Hayashi I. Residual monomer (Bis-GMA) of 265
대한치과보존학회지 :Vol. 29, No. 3, 2004 composite resins. J Oral Rehab 9:493-497, 1982. 10. Tanaka K, Taira M, Shintani H, Wakasa K. Residual monomer(tegdma and Bis-GMA)of a set visablelight-cured dental composite resin when immersed in water. J Oral Rehab 18:353-360, 1991. 11. Dickens SH, Stansbury JW, Floyd CJ. Effects of chemical composition on cure properties of dental resins. J Dent Res 78:1459-1463, 1999. 12. Ferracane JL. Elution of leachable components from composites. J Oral Rehab 21:441-452, 1994. 13. Gerzina TM, Hume WR. Effect of Dentin on the release of TEGDMA from resin composite in vitro. J Oral Rehab 21:463-468, 1994. 14. Santerre JP, Shajii L, Leung BW. Relation of dental composite formulations to their degradation and the release of hydrolyzed polymeric-resin-derived product. Crit Rev Oral Biol Med 12(2):136-151, 2001. 15. Van Groeningen G, Arends J. Composite degradation in vivo. Dent Mater 2: 225-227, 1986. 16. Gopferich A. Mechanism of polymer degradation and erosion. Biomater 17:103-114, 1996. 17. Wu W, Toth EE, Moffa JF, Ellison JA. Subsurface damage layer of in vivo worn dental composite restorations. J Dent Res 63(5):675-680, 1984. 18. Wu W, Mckinney JE. Influence of chemicals on wear of dental composites. J Dent Res 61(10):1180-1183, 1982. 19. Soderholm KJ, Zigan, M, Ragan M, Bergman M. Hydrolytic degradation of dental composites. J Dent Res 63:1248-1254, 1984. 20. Soderholm KJ. Degradation of glass filler in experimental composites. J Dent Res 60:1867-1872, 1981. 21. Hanks CT. Cytotoxic Effects of resin components on culture mammalian fibroblasts. J Dent Res 70:1450-1455, 1991. 22. Nassiri MR, Hanks CT, Cameron MJ, Strawn SE, Craig RG. Application of Flow cytometry to determine the cytotoxicity of urethane dimethacrylate in human cells. J Biomed Mater Res 28:153-158, 1994. 23. Cherry BA, Moon PC, Kalini MY. Estrogenic activity of combined admistration of two possible dental resins. J Dent Res 77 (AADR abst):1080, 1998. 24. Arenholt-Bindslev D, Breinholt V, Schmalz G, Preiss A. Time-related bisphenol-a content and estrogenic activity in saliva samples collected in relation to placement of fissure sealants. J Dent Res 77(B):481-484, 1998. 25. McKinney JE, Wu W. Chemical softening and wear of dental composites. J Dent Res 64:1326-1331, 1985. 26. Geddes DA. Acids produced by human dantal plaque metabolism in situ. Caries Research 9:98-104, 1975. 27. Asmussen E. Softening of Bis-GMA based polymers by ethanol and by organic acids of plaque. Scand J Dent Res 92:257-261, 1984. 28. 최주환. 기기분석개론및응용, 100-165, 1998. 29. Lingstrom P, Imfeld T, Birkhed D. Comparison of three different methods for measurement of plaque-ph in humans after consumption of soft bread and potato chips. J Dent Res 72(5):865-870, 1993. 30. Chadwick RG, McCabe JF, Walls AW, Storer R. The effect of storage media upon the surface microhardness and abrasion resistance if three composites. Dent Mater 6:123-128, 1990. 31. Larsen IB, Freund M, Munksgaard EC. Change in surface hardness of BIS_GMA/TEGDMA polymer due to enzymatic action. J Dent Res 71(11):1851-1853, 1992. 32. Yap AU, Tan SH, Wee SS, Lee CW. Chemical degradation of composite restoratives. J Oral Rehab 28:1015-1021, 2001. 33. Freund M, Munksgaard EC. Enzymatic degradation of Bis-GMA/TEGDMA-polymers causing decreased microhardness and greater wear in vitro. Scand J Dent Res 98:351-356, 1990. 34. Jaffer F, Finer Y, Santerre JP. Interaction between resin monomer and commercial composite resins with human saliva derived esterases. Biomater 23(7):1707-1719, 2002. 35. Santerre JP, Shajii L. Biodegradation of commercial dental composites by Cholesterol Esterase. J Dent Res78(8):1459-1468, 1999. 36. Ruyter IE. Physical and chemical aspects related to substances released from polymer materials in an aqueous environment. Advan Dent Res 9:344-349, 1995. 37. Ortengren U, Wellendorf H, Karlsson S, Ruyter IE. Water sorption and solubility of dental composite and identification of monomers released in an aqueous environment. J Oral Rehab 28(12):1106-1115, 2001. 38. Lee SY, Huang HM. Leached components from dental composites in oral simulating fluids and the resultant composite strengths. J Oral Rehab 25:575-588, 1998. 39. Ortengren U, Andersson F. Influence of ph and storage time on the sorption and solubility behaviour of three composite resin materials. J Dent 29:35-41, 2001. 40. Braden M, Davy KW. Water absorption characteristics of some unfilled resins, Biomater 7:474-483, 1986. 41. Muller H, Olsson S, Soderholm KJ. The effect of comonomer composition, silane heating and filler type on aqueous TEGDMA lechability in model resin composites. Eur J Oral Sci 105:362-376, 1997. 42. Braden M, Clarke RL. Water absorption characteristics of dental microfine composite filling materials. Biomater 5:369-374, 1984. 43. O/ysaed H, Ruyter IE. Water sorption and filler characteristics of composites for use in posterior teeth. J Dent Res 66:1315-1319, 1986. 44. Geurtsen W. Substances released from dental resin composites and glass ionomer cements. Eur J Oral Sci 106:687-695, 1998. 45. Soderholm KJ. Degradation of grass filler in experimental composites. J Dent Res 60(11):1867-1875, 1981. 46. Gopferich A. Mechanism of polymer degradation and erosion. Biomater 17: 103-114, 1996. 47. Munksgaard EC, Freund M. Enzymatic hydrolysis of(di) methacrylates and their polymers. Scand J Dent Res 98:261-267, 1990. 48. Qvist V. Pulp reactions in human teeth to tooth colored filling material. Scand J Dent Res 83:54-66, 1975. 49. Geurtsen W, Spahl W, Leyhausen G, Residual monomer/additive release and variability in cytotoxicity of light-curing glass-ionomer cement and compomers, J Dent Res 77:2012-2019, 1998. 50. Hume WR, Hood AM. Comparing cytotoxicity in vitro between cured and uncured composite resins. J Dent Res 69:943-951, 1990. 51. Stanley HR. Compatability of various materials with oral tissues. J Dent Res 58:1507-1517, 1979. 52. Stanley HR. Pulpal consideration of adhesive material. Oper Dent 17:151-164, 1992. 53. Rathbun MA, Craig RG, Hanks CT. Cytotoxity of a Bis-GMA dental composite before and after leaching in organic solvent. J Biomed Mater Res 25:443-457, 1991. 266