동의생리병리학회지제 22 권 1 호 Korean J. Oriental Physiology & Pathology 22(1):137 141, 2008 마진열 유영법 하혜경 황대선 신현규 * 한국한의학연구원 Subacute Toxicity Study on Samultang in Rats Jin Yeul Ma, Young Beob Yu, Hye Kyung Ha, Dae Sun Huang, Hyun Kyoo Shin* Korea Institute of Oriental Medicine Samultang(Siwutang) has been traditionally prescribed as a restorative. The present study was undertaken to determine the possible toxic effects of Samultang on rats. In this study, we investigated the subacute toxicity of waterextracted Samultang(Siwutang) on rats. Twenty rats were orally adiministered Samultang for 28 days at a dose of 0 mg /kg(control group) or 1500 mg /kg(treated group), respectively. All of subjects was survived. No significant difference in abnormal clinical signs, related to hematological values, serum biochemical values, water and feed intake, coagulation time, autopsy analysis, organ weight, tissue microscopically, funduscopy, urine intake and urinalysis, was detected. Compared with the control group, we could not find any subacute toxic alteration in treated group (1500 mg /kg) for 28 days. This result suggests that Samultang(Siwutang), a herbal medicine prescription, is a safe prescription to body. Key words : Samultang(Siwutang), Subacute toxicity, Safety 서 론 축에미치는영향을평가한실험 5) 및자궁수축력에미치는효과 6), 세포독성에대한방어작용 7), 항스트레스효과 8), 四物湯복용 四物湯은營衛氣血과衝任脈이虛損된病症을해결하는補劑로중국宋代陳師文의 太平惠民和劑局方 에최초로수재된것으로알려져있다. 이후四物湯은月經不調, 崩漏, 下血, 少腹痛, 胎動不安, 惡露不下등血虛및血不和로인한증세를다스리는대표적인補血劑로사용되어왔고, 金元代에이르러서는氣虛를다스리는대표처방인四君子湯과합하여氣血이모두虛한것을치료하는八物湯의부속처방이기도하다. 韓醫學의관점에서造血작용을하는四物湯에대해보다객관적인효능을확인하기위해다양한효능평가가이루어지고있다. 이러한시도는 4가지원료만으로구성된四物湯을비롯하여다른약재를첨가한加味四物湯에까지광범위하게시도되고있다. 四物湯의효능연구에는면역기능 13) 에미치는영향을평가하기위해수행된실험이다수있으며, 혈당 4) 에미치는효과를확인하기위해스트렙토조톡신으로유도된당뇨쥐에서의인슐린함량실험과항당뇨효과에대한실험이실행되기도하였다. 이외에도난소가적출된실험동물에서의골대사지표와뇌위 * 교신저자 : 신현규, 대전시유성구전민동한국한의학연구원한약제제연구부 Email : hkshin@kiom.re.kr, Tel : 0428689464 접수 : 2007/11/05 채택 : 2008/01/21 이성장 9) 에미치는영향등이연구된바있다. 본연구에서는方劑學에서가장기본적이고널리사용되는대표적處方중하나인四物湯을대상으로독성과안전성문제에대한자료를확보하기위해실험동물 (, 랫트 ) 을이용하여 1 일임상용량의 20배 (1500 mg / kg ) 용량으로 4주간반복경구투여하여亞急性毒性 10) 을실험적으로평가하였다. 재료및방법 1. 시험물질본연구의시험물질인當歸 (Angelica Gigas Root), 川芎 (Cnidium Rhizome), 熟地黃 (Steamed Rehmannia Root), 芍藥 (Peony Root) 은생산자및제조자, 소매자가명확한韓藥材를구입을하여 (Table 1), 전탕추출법 ( 한국, 경서추출기 cosmos600) 에의한시험물질조제를실시하였다. 각韓藥材 100 g 11) 을 8000 ml의증류수에넣어 120분간열탕추출한후, 건조분무기 (Japan, Eyela 1000) 를사용하여분말형태로조제하였다. 이를투여직전에 3차증류수에용해하여실험에공시하였다 ( 수율 21.1). 137
마진열 유영법 하혜경 황대선 신현규 Table 1. Buy of Raw Material Herbs 약재명 생산자 ( 수입자 ) 제조자 소매자 당귀 강원도평창 강원평창진부하진부 6811 천궁 전북무주군설천면삼거리 226 전북무주군무주읍가옥리 6312 남영제약 숙지황 전북정읍 전북정읍시옹동면칠석리 1502 칠보농협옹동제약사 작약 전남화순 2. 실험동물및사육환경 전남화순군능주면백암리 8711 전남화순군화순읍교리 2435 전남생약농업협동조합 흰쥐수컷 ( 오리엔트, 서울시금천구가산동 45924) 4주령을사용하였다. 동물입수시, 외관을육안으로검사한후, 7일간시험을실시하는동물실에서순화시키고그중건강한동물을골라실험에사용하였다. 순화기간중, 일반임상증상을관찰하여건강한동물을 20마리씩선정하여체중범위에따른무작위법에의하여군분리를실시한후, 본실험에사용하였다. 순화및실험기간동안의사육환경은온도 23±3, 상대습도 50±10, 환기횟수는시간당 12~16회, 조명은 12시간명암주기 ( 점등 7:00, 소등 19:00), 조도는 150~300 Lx로조정하여일정한사육환경조건을유지하였다. 그리고실험동물용고형사료 ( 삼양사료주식회사 ) 와물은자유섭취조건으로하였다. 5. 통계처리대조군과투여군사이의통계학적유의차는 Dunnett test에의하여평균과표준편차를구하고통계처리 (*p<0.05, **p<0.01) 하였다. 결과 1. 치사율시험기간중사망동물은관찰되지않았다. 2. 임상증상임상용량의 20배인사물탕 4주간연속경구투여에의한, 어떠한독성증상도관찰되지않았다. 3. 체중변화 Fig. 1에나타난것과같이사물탕투여에의한체중변화는관찰되지않았다. 3. 실험군및韓藥材투여 급성독성실험시고농도 (5000 mg /kg/day) 군에서아무런임상증상이관찰되지않았으므로, 본실험에서는아급성경구독성을평가하기위하여임상 1일복용용량의 20배인 1500 mg /kg/day으로투여량을설정하였다 (Table 2). 투여경로는韓方임상에서가장널리이용되고있는경구투여법을사용하였다. Table 2. Experimental Groups Group Number of animal Volume Dose ( mg / kg /day) Control 10 10 0 Treatment 10 10 1500 4. 임상증상및부검 임상증상은투여기간 (1일 1회 ) 동안의일반증상관찰법에의하여조사되었다 (Hayes, 1984). 모든동물에대하여매주체중변화및사료음수섭취량을관찰하였으며, 실험 4주차에뇨검사, 안저검사등을실시하였다. 실험종료후, 에테르로마취하여후대정맥에서채혈후혈구검사, 혈액생화학검사등을분석하였다. Fig. 1. body weight changes of rat orally treated with herbal prescriptions for 4 weeks. V.C; Vehicle control group, S.M; Samultang group. 4. 부검소견 실험종료시모든동물의장기에대하여육안적으로관찰하였으나, 이상병변은관찰되지않았다. 5. 혈구검사 팔물탕 4주간연속경구투여후, 혈구검사에서는모두정상범위내의수치로분석되었다 (Table 3). 6. 혈액생화학검사 사물탕의열수추출액 28일연속경구투여시, 혈액생화학적변화는관찰되지않았다 (Table 4). Table 3. Hematological values of male rats orally treated with Samultang. WBC x1000 #LYM #MO #NE #EO #BA RBC x10 6 HGB g/dl HCT MCV f1 MCH pg MCHC g/dl PLT x1000 17.96 4.82 82.71 5.68 3.34 1.64 10.18 4.51 0.98 0.49 2.78 0.78 7.52 5 15.34 0.52 40.57 1.30 53.97 1.48 20.43 0.51 37.83 0.57 1061.3 135.6 15.94 3.56 81.74 10.67 3.40 2.16 11.39 8.37 0.85 4 2.63 0.51 7.33 3 15.09 0.52 39.76 1.14 54.25 1.52 20.59 0.59 37.96 0.5 990.4 156 All hematological values were measured at 4 weeks treatment of herbal prescriptions, V.C; Vehicle control group, S.M; Extraction of Samultang group. a ;Values were expressed as mean, b ;±S.D., Statistically significantly different from vehicle control group. 138
Table 4. Serum biochemical values of rats orally treated with Samultang. AST(IU/I) ALT(IU/I) ALP(IU/I) BUN( mg / dl ) CRE( mg / dl ) CPK(IU/I) GLU( mg / dl ) CHO( mg / dl ) 139.8 a (44.3) b 36.38 (9.06) 185.38 (49.38) 16.47 (1.82) 375.07 (237.66) 144.33 (17.67) 70.05 (19.47) 134.46 (31.36) 29.82 (3.16) 165.26 (29.74) 16.56 (2.66) 0.41 390.09 (182.34) 132.02 (15.83) 58.42 (14.81) TG( mg / dl ) PRO(g/ dl ) ALB(g/ dl ) A/G( mg / dl ) TBIL( mg / dl ) Ca( mg / dl ) IP( mg / dl ) Na(nmol/l) 56.60 (20.71) 6.01 (2) 3.15 (0.12) 1.11 (0.05) 0.13 (0.01) 9.40 (7) 8.82 (0.56) 143.1 (0.99) 49.53 (12.86) 5.84 (4) 3.09 1.12 (0.01) 9.00 (0.35) 8.88 (0.94) 142.1 (0.99) Serum biochemical values at 28 days after treatment of herbal prescriptions, V.C; Vehicle control group, S.M; Extraction of Samultang group. a ;Values were expressed as mean, b ;±S.D., Statistically significantly different from vehicle control group. 7. 음수및사료섭취량 음수및사료섭취량의변화는관찰되지않았다. 8. 혈액응고시간 시험물질사물탕은혈액응고기전에관련된 PT 및 aptt 인자에영향을주지않는것으로나타났다. 9. 장기무게의변화 사물탕 28일연속경구투여후, 상대적장기무게의변화는신장에서유의성 (p<0.05) 있게증가되었다 (Table 5). Table 5. Relative organ weight of rats orally treated with herbal prescriptions. Sex Group V.C S.M Dose( mg / kg ) 0 1500 No. of animal 10 10 Body weight(g) 350.6 a 347.7 (32.0) b (27.4) Pituitary gland 0.0030 0.0030 (0.0005) (0.0004) Brain 0.59 0.56 (0.14) Lung Heart 0.37 0.38 Liver 3.05 3.14 (0.17) Spleen 0 0.19 Thymus adrenal gland left 0.0091 0.0085 (0.0009) (0.0007) adrenal gland right 0.0082 0.0087 (0.0008) (0.0010) Kidney left 0.39 * Kidney right 0.39 * Testis left 0.44 (0.09) Testis right 0.47 0.45 Relative organ weight at 28 days after treatment of herbal prescriptions, a ; Values were expressed as mean, b ; ±S.D., Statistically significantly different from vehicle control group(*p<0.05) 10. 장기조직변화 (Fig. 23, Table 6) 한약복합처방사물탕 4주간독성시험에서용매대조군의경우, 부신에서는피질공포형성 (Cortical vacuolation) 이 1/10 례에서관찰되었고뇌하수체는낭포형성 (Cyst formation) 이 1/10 례에서관찰되었다. 신장에서는만성경색 (Chronic renal infarct) 이 1/10 례에서나타났다. 그외에폐장에서는간질성폐렴 (Interstitial pneumonia) 이 4/10 례와출혈성폐포염 (Hemorrhagic alveolitis) 이 1/10 례에서각각관찰되었다. 사물탕처리시부신에서는피질공포형성이 4/10 례에서관찰되었고간장에서는다발국소성간염 (Multifocal hepatitis) 이 1/10 례에서관찰되었다. 갑상선에서는아가미끝소체 (Ultimobranchial cyst) 가 1/10 례에서나타났다. 전립선에서는전립선염 (Prostatitis) 이 1/10 례에서관찰되었고폐장에서는간질성폐렴이 6/10 례에서관찰되었다. Fig. 2. Focal hemorrhagic alveolitis. Note scattered of hematoidin crystal (arrows) and erythrophages in the alveolar spaces (arrowheads). H&E. x200. Fig. 3. Focal lymphoid cell infiltration in the thyroid gland (arrow). H&E.x400. 139
마진열 유영법 하혜경 황대선 신현규 Table 6. Incidence of nonneoplastic microscopic in rats orally treated with herbal prescriptions. \Sex Variable \Group V.C S.M \Dose( mg / kg ) 0 1500 \No. of animal 10 10 Hypophysis cyst formation 1 0 Thyroid gland Ultimobranchial cyst 0 1 Liver Multifocal hepatitis 0 1 Adrenal gland Cortical vacuolation 1 4 Kidney Choronic renal infarct 1 0 Lung Interstitial pneumonia 4 6 Hemorrhagic alveolitis 1 f.2) 0 Prostate gland Focal lymphoid cell infiltration 0 1 f.3) V.C; Vehicle control group, S.M; Extraction of Samultang group. 11. 안저검사 시험물질투여 4주후안저촬영시, 시험물질투여와관련된이상소견은관찰되지않았다. 12. 뇨검사 사물탕 4주연속경구투여후, 신선뇨및 24시간뇨량을채뇨하여뇨분석기를통하여분석하였다. 그결과시험물질에의한뇨량및요의화학적변화는나타나지않았다 (Table 7). Table 7. Urinalysis in rats orally treated herbal prescriptions subacute toxicity. \Sex \Urine Fresh 24 hour Urine Parameter \Group V.C S.M V.C S.M \Dose( mg / kg ) 0 1500 0 1500 \No. of animal 5 5 5 Glucose (g/dl) Bilirubin Ketone body (mg/dl) Gravity ph 15 10 10 15 9.0 Protein (mg/dl) Urobilinogen (Ehrilich unit/dl) Nitrite Occult Blood WBC 고 찰 + + 四物湯추출분말 28일간연속경구투여에의한아급성독성및안전성을조사하기위하여, 계통의랫트수컷에四物湯임상복용 1일용량의 20배 (1500 mg /kg/day) 의용량으로각 10마리씩 4주간경구투여하고사망동물, 일반증상, 체중변화, 혈액검사, 생화학검사, 음수및사료섭취량, 혈액응고시간, 부검소견, 병리조직검사, 장기무게변화, 안구촬영및뇨검사등을분석하여四物湯의독성정도을판단하였다. 이와같이실험한결과시험기간중사망동물, 부검소견및시험물질투여와관련된일반독성증상은관찰되지않았다. 분석항목인체중변화, 혈구분석, 음수및사료섭취량, 혈액생화학적변화, 혈액응고와관련된지표, 24시간뇨량및뇨의성분변화등에도이상변화가관찰되지않았다. 용매대조군과四物湯에서나타난병리조직소견은 (Table 6), 자연에서발생할수있는병변 1214) 으로시험물질과는무관하게나타난것으로사료된다. 또한상대적장기무게의변화는신장에서유의성 (p<0.05) 있게증가되었으나정상범위내의변화로사료된다. 이상의실험결과에서, 수컷랫드에한방처방四物湯湯추출분말 4주간연속경구투여시, 용매대조군에비해시험물질투여군에서다른특별한毒性症狀이나타나지않았으므로본시험물질四物湯은랫트에서無毒하게작용하는것으로사료된다. 참고문헌 1. 조무상, 이봉교. 사물탕의계절별배미, 가미가체중변화및면역기능에미치는실험적연구. 동서의학, 4: 4166, 1990. 2. 김성훈. 사군자탕, 사물탕및팔물탕이 prednisolone으로유발된생쥐의면역반응저하에미치는영향. 대한동의병리학회지 1: 4259, 1978. 3. 김길수. 월국환합사물탕이전기자극스트레스를받는 Mouse의면역기능에미치는영향. 동국대학교대학원석사 140
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