J Koren So Food Si Nutr 한국식품영양과학회지 39(11), 1611~1618(21) DOI: 1.3746/jkfn.21.39.11.1611 2,4-Dinitrohloroenzene으로유도된아토피피부염동물모델에서비파엽및삼백초추출발효물의항아토피활성 최명진 1 정희경 2 정유석 2 박승춘 1 홍주헌 3 1 경북대학교수의과대학 2 ( 재 ) 대구테크노파크바이오산업지원센터 3 대구가톨릭대학교외식식품산업학부 Anti-Allergi Ativities of Fermented Eriootry jponi nd Surus hinensis Extrts in 2,4-Dinitrohloroezene-Indued BALB/ Mie Myung-Jin Choi 1, Hee Kyoung Jung 2, Yoo Seok Jeong 2, Seung-Chun Prk 1, nd Joo-Heon Hong 3 1 College of Veterinry Mediine, Kyungpook Ntionl University, Degu 72-71, Kore 2 Bio Industry Center, Degu Tehnoprk, Degu 74-81, Kore 3 Dept. of Food Siene nd Tehnology, Ctholi University of Degu, Gyeonguk 712-72, Kore Astrt This study ws onduted to evlute the effets of Eriootry jponi nd Surus hinensis extrts nd their fermented extrts on immune prmeters in BALB/ mie treted with 1% 2,4-dinitrohloroenzene (DNCB). The groups were Eriootry jponi extrt (BI), Surus hinensis extrt (SA), mixture with E. jponi extrt nd S. hinensis extrt (FB) nd fermented mixture with E. jponi extrt nd S. hinensis extrt (FA) nd distilled wter treted ontrol. The level of serum immunogloulin (Ig) E ws deresed in FA ompred to ontrol group, ut signifint differene ws not oserved (p<.5). The histmine nd ontents in FA nd ontrol group were 1.47±.2 ng/ml nd 1.9±.4 ng/ml, respetively (p<.5). Cermide ontents were signifintly inresed in FA ompred to BI, SA, FB nd ontrol group (p<.5). These results suggest tht FA supplementtion in the DNCB treted BALB/ mie ffet nti-llergi tivities positively, nd my e used s funtionl mteril for suppression of topy dermtitis in food industry. Key words: Eriootry jponi, Surus hinensis, topi dermtitis, BALB/ mie 서론비파 (Eriootry jponi L.) 는장미과의상록교목으로우리나라에서는제주도, 경남및전남지방등온화한기후조건에서주로자생하고예로부터민간요법으로청폐, 진해, 거담, 건위, 이뇨, 패혈해소, 기관지염, 구역질, 딸국질및부종등에효능이있다고알려져있다 (1). 비파엽에는 terpenoid 와 flvonoid 등의유용한화합물을다량함유하고있어항산화, 항염증, 항HIV, 항돌연변이및항암활성이보고되고있다 (2,3). 삼백초 (Sururus hinensis Bill) 는삼백초과의다년생초본으로꽃이피는 7~8월에 3~4개의잎이백색이기때문에삼백초라부른다. 삼백초의주성분은 queretin, queritrin, isoqueritrin, rutin 및수용성 tnnin 등이알려져있으며이중 queretin, queretrin은플라보노이드의일종으로항균및항산화효과를나타내는것으로보고되며, 항암성및모세혈관강화작용등의효과들이알려져있다 (4,5). Jeong 등 (6) 은 RBL-2H3 세포를이용하여비파엽열수추출물이항염증효과와항알레르기활성이있음을확인하였으나비파엽과삼백초의항알레르기활성에대한 in vivo상연구는거의없어기능성소재로활용은여전히미진한실정이다. 국내외소아기의주요질환으로보고되고있는아토피는항원에따라말단장기의과민반응이다르게나타나는것을말하였으나현재에는항원자극으로 IgE가생산되는천식과아토피성습진까지모두를일컫는제 1형과민반응이다 (7,8). 아토피가유발되는원인은아직정확하게밝혀지지는않았지만유전적소인, 면역학적요인및환경적영향이복합적으로관여되는것으로알려져있다 (9). 최근 Lee 등 (1) 은아토피피부염의발생과기작을규명하기위해생물정보학적방법을기초로하여아토피관련질병단백체를확보하였으며, 아토피질병네트워크를구축하기도하였다. 그러나이러한방법은분자수준에서발병기작을해석하는것으로 Corresponding uthor. E-mil: jhhong@u..kr Phone: 82-53-85-3218, Fx: 82-53-85-3218
1612 최명진 정희경 정유석 박승춘 홍주헌 많은시간과노력이필요한실정이다. 따라서연구자들은여전히면역학적관점에서아토피피부염의발병원인을규명하려고노력하고있다 (8,11). 아토피피부염은그병인이불분명함에도불구하고환경오염과공해에의해발병률과질환의심각성은지속적으로높아지고있으며, 아토피환자들은질환의치료에있어염증과소양감조절을위해부신피질호르몬제와항히스타민제를사용하고있다 (12). 그러나이는장기간투여시부작용이보고되고있어최근천연항알레르기제의개발이고려되고있다. 현재까지아토피저감화에대한효능이기대되는천연소재로는황금열수추출물 (13), 두충추출물 (14), 천년초추출물 (15), 김치추출물 (16) 등이보고되고있다. 이와더불어식품시장에서는식품의기능성이강조됨에따라건강기능식품개발을위한다양한신소재의개발도활성화되고있다. 따라서본연구에서는국민보건상의위협을가하고있는아토피질환예방을위한기능성소재의발굴을위해비파엽열수추출물과삼백초열수추출물및이들추출혼합물과혼합물의발효물을대상으로 DNCB로유도된아토피동물모델에서의항아토피적유효성을조사하였다. 재료및방법재료및실험시료제조실험시료인비파엽 ( 전남화순군 ) 및삼백초 ( 제주도 ) 는대구시약령시장에서구입하였으며, 비파엽과삼백초추출물은각약재 1 g을수세하고 2배가수한후압력식추출기 (KyungSeo Mhines, Inheon, Kore) 에서 95 o C, 4시간열수추출한후여과하고감압농축기 (Rotry Vuum Evportor, N-1, EYELA, Tokyo, Jpn) 로농축한다음증류수로 1 ml로하여준비하였다. 또한비파엽과삼백초혼합물은상기에서준비한비파엽열수추출물과삼백초열수추출물을동일비율로혼합하여제조하였으며, 발효물제조는대구광역시소재젠팩스코리아 ( 주 ) 에서비파엽과삼백초추출물을 1:1 비율로혼합하고끓는물로세척한독에담아독을통기가될수있는천으로밀봉한후상온에서 3일간햇빛에노출되지않게보관하여자연발효시켜준비하였다. 실험동물 5주령의특정병원체부재 (speifi pthogen free) mle BALB/ 마우스 (Orient Co., Seongnm, Kore) 를구입하여 1주일간적응시킨다음실험에사용하였다. 실험기간동안사육실의온도는 21~23 o C, 습도는 6% 전후로유지하였으며광주기와암주기는 12시간으로조절하여실험동물은무균적으로관리하였다. 실험군은 2,4-dinitrohloroenzene (DNCB, Sigm, St. Louis, MO, USA) 를도포하고물을경구투여한군을대조군으로하고시료투여군으로써 DNCB 도포및비파엽추출물과삼백초추출물을각각경구투여시킨 BI군과 SA군, 그리고비파엽과삼백초열수추출물을 1:1 비율로혼합하여투여시킨 FB군과이혼합물을 3일간자연발효시킨발효물을투여시킨 FA군등총 5개군으로나누어각군에 5마리씩배정하여실험하였다 (13). DNCB 제조및아토피유발 DNCB용액은아세톤과올리브유를 3:1로혼합된용액에 2.5% 와 1% 로희석하여사용하였다. 실험동물을 1주일간적응시킨후시험물질도포하루전실험동물의등부위를목에서부터골반쪽으로제모하고제모의상처가치유되도록 24시간방치하였다. 그후 2.5% DNCB 용액을마우스목뒤피부에도포하여 1차면역반응을유발한지 4일후, 1% DNCB 용액 2 μl를마우스양쪽귀에도포하고, 15 μl를등부위에도포하여아토피피부염을유발하였다. 자연치유에의한오차를막기위해경구투여기간에도 DNCB를주 2회씩 2주동안마우스의등과귀부위에도포하여 DNCB short-term 모델로실험에사용하였다 (15,17). 경구투여각실험시료는 2차 DNCB 도포와함께 BI, SA, FB, FA군에매일정해진시간에각각.64 μl/g의농도로멸균된생리식염수 2 μl에희석하여경구투여하였으며, DNCB군은증류수를 2 μl씩 2주동안경구투여하였다. 혈액및조직채취채혈은희생일에마우스를 12시간절식시킨다음 CO 2 로마취시키고주사기를이용해심장으로부터혈액을채취하여일부는 omplete lood ount(cbc) 를실시하였으며, 나머지혈액은 4 o C에서 1,8 rpm으로 1분간원심분리를하여혈장만분리하여 -7 o C에보관하였다. 또한심장채혈후바로경추탈구로마우스를희생시킨다음등부위의피부조직을 1 2 m 2 크기로잘라서피부조직을채취하고이어서양쪽귀를잘라서채취하였다 (17). 혈액내혈구수치측정 1 주사기로심장천자를시행하여얻은혈액을 EDTA tue(edta KE/1.3, Srstedt, Numreht, Germny) 에담은후충분히흔들어혈액의응고를방지하였다. 경북대학교수의과대학부속동물병원에의뢰하여혈액검사기 (Automti full digitl ell ounter, Melet Shloesing Lortories, Cergy-Pontoise, Frne) 로혈구수치를측정하였다. 혈장중 immunogloulin E(IgE) 및 histmine 변화측정각시험군별혈장중의 IgE와 histmine 변화측정은희생일에심장천자를통해얻은혈액으로부터분리한혈장을이용하여 mouse IgE ELISA kit(shiygi Co. Ltd, Gunm, Jpn) 를이용하여측정하였으며, histmine 측정은 mouse histmine ELISA kit(ibl-ameri, In., Minnepolis, MN, USA) 를이용하였다 (18,19).
아토피피부염동물모델에서비파엽및삼백초추출발효물의항아토피활성 1613 조직에서세라마이드총함량변화측정실험동물의피부조직으로부터세라마이드함량측정을위해우선채취한피부조직에 4 ml의 Tris-HCl uffer(1 M, ph 7.5) 를첨가하고분쇄한후동량의 folh 용액 (hloroform : methnol=2:1, v/v) 을첨가하고 3, rpm, 5 분간원심분리를하였다. 하층액을 N₂gs로건조시킨후 2% isopropnol을함유한 hexne을 1 ml 첨가하여필터한후이를 HPLC 분석에이용하였다. 분석에이용한 olumn은 APS Hypersil(2 mm 4.6 mm ID, Agilent Tehnologies, In, Snt Clr, CA, USA) 이며, moile phse로는 hexne 과 2% isopropnol(ipa) 혼합액을사용하였다. 또한 flow rte는.6 ml/min이며, 흡광도는 23 nm에서측정하였다 (17). 귀조직에서의 ytokine 변화조사 Cytokine 측정을위해실험동물을희생후바로양쪽귀조직을채취하여 protese inhiitor가있는 phosphte uffer.5 ml를첨가한후 ell striner(7 μm nylon, Miltenyi Biote, Auurn, CA, USA) 를이용하여충분히분쇄하였다. 이분쇄액을 2, rpm, 3분간원심분리를하고상등액만을회수하여 mouse IFN-γ ELISA kit(kom Bioteh, Seoul, Kore) 와 mouse IL-1β ELISA kit(biosoure Interntionl, In., Cmrillo, CA, USA) 를사용하여 ytokine의양을정량하였다 (15). 귀의무게변화측정및등피부육안병리소견희생일에채취한양쪽귀조직을그룹별로무게를측정하였다. 피부육안병변관찰은희생직전각시험군별로시험시료의경구투여에따른등피부에나타나는염증, 출혈, 홍반, 가피탈피등의피부염관련된병변을육안으로관찰하여평가하였다 (7). 통계분석모든데이터분석은 Sttistil Anlysis System(SAS, Ver. 8.1) 을이용하여기술적인통계치를산출하였다. 결과는평균 (men) 과표준편차 (stndrd devition, SD) 로표시하였으며, 실험군의평균간의유의성을 one wy ANOVA 검증에따라 Dunn's multiple rnge test로 p<.5 수준에서검증하였다. 결과및고찰식이섭취량및체중변화각실험군별식이섭취량및체중변화는시간이지남에따라증가하는경향을나타내었으며, DNCB군, FA군, FB 군, BI군, SA군에서증감의차이는있었으나유의적차이는관찰되지않았다 (p<.5). 이러한결과로미루어볼때, 아토피저감화효능이기대되는삼백초추출물, 비파엽추출물및이들추출물의혼합물, 그리고추출물혼합발효물은안 Food intke (g/dy). Body weight (g). 3 25 2 15 1 5 22 2 18 16 14 DNCB FA FB BI 1 2 3 wks 1 2 3 wks SA DNCB FA FB BI SA Fig. 1. Food intke (A) nd ody weight (B) of the experimentl groups. DNCB: Treted 1% 2,4-dinitrohloroenzene nd orl injet distilled wter, FA: Treted 1% 2,4-dinitrohloroenzene nd fermented Eriootry jponi nd Surus hinensis wter extrt, FB: Treted 1% 2,4-dinitrohloroenzene nd Eriootry jponi nd Surus hinensis wter extrt, BI: Treted 1% 2,4-dinitrohloroenzene nd Eriootry jponi wter extrt, SA: Treted 1% 2,4-dinitrohloroenzene nd Surus hinensis wter extrt. 전성에큰영향을미치지않음을확인할수있었다 (Fig. 1). 혈구수치의변화 각실험군별혈액내에서총백혈구수와호산구, 호염기구비율의변화를측정한결과, 호염기구비율에서는 DNCB 군과시험시료투여군인 FA군, FB군, BI군및 SA군과유의적차이는관찰되지않았다 (p<.5). 그러나백혈구수와호산구비율에서는 DNCB군과비교시 FA군, FB군, BI군, SA 군모두에서유의적감소를나타내었다 (Fig. 2). 이러한결과로미루어볼때, 실험시료인비파엽및삼백초추출물, 그리고각추출물의혼합물과혼합물의발효물들은모두아토피실험동물에있어유의적으로호산구비율을감소시킬수있음을확인하였다. 아토피피부염은호산구의과다증식으로호산구증을유발하는것 (2) 으로알려져있으며, Kng 등 (21) 은중증아토피환자보다경증경우에서호산구수가유의적으로증가된다고보고하였다. 이러한선행연구로미루어볼때, 아토피환자에있어초기임상적특징은호산구증가로볼수있으며, 실험시료의호산구증식억제효과는특히아토피초기증상을가진환자들에게호전효과를줄수있음을알수있다. 또한, 아토피피부염은만성염증성 (A) (B)
1614 최명진 정희경 정유석 박승춘 홍주헌 WBC (m/mm 3 ). 7 6 5 4 3 2 1 (A) Totl IgE level (ng/ml).] 4 3 2 1 Eosinophil (%). Bsophil (%). 1.5 1.5 1.5 1.5,, DNCB FA FB BI Bi SA S DNCB FA FB SA S Bi BI Fig. 2. Chnges of WBC (white lood ells), eosinophil nd sophil levels in eh group. Complete lood ount test ws done t srifie dy. DNCB: Treted 1% 2,4-dinitrohloroenzene nd orl injet distilled wter, FA: Treted 1% 2,4-dinitrohloroenzene nd fermented Eriootry jponi nd Surus hinensis wter extrt, FB: Treted 1% 2,4-dinitrohloroenzene nd Eriootry jponi nd Surus hinensis wter extrt, BI: Treted 1% 2,4-dinitrohloroenzene nd Eriootry jponi wter extrt, SA: Treted 1% 2,4-dinitrohloroenzene nd Surus hinensis wter extrt. Vlues were expressed s men ±SD (n=5). Different supersripts on the rs indite signifint differenes t p<.5. 피부질환으로발생기전이즉시형과민반응으로나타나는것이다 (22). 염증이발현되면백혈구의수가증가되는것 (23) 으로알려져있는데실험시료투여에따른아토피질환동물모델에서의백혈구수의감소는실험시료가아토피피부염의근본적원인인염증반응을감소시킬수있음을보여준다. 혈청중 IgE 및히스타민의변화 혈청에서 IgE 수준의상승은아토피성피부염의면역학 (B) (C) Fig. 3. Totl serum IgE levels in mle BALB/ mie t srifie dy. DNCB: Treted 1% 2,4-dinitrohloroenzene nd orl injet distilled wter, FA: Treted 1% 2,4-dinitrohloroenzene nd fermented Eriootry jponi nd Surus hinensis wter extrt, FB: Treted 1% 2,4-dinitrohloroenzene nd Eriootry jponi nd Surus hinensis wter extrt, BI: Treted 1% 2,4-dinitrohloroenzene nd Eriootry jponi wter extrt, SA: Treted 1% 2,4-dinitrohloroenzene nd Surus hinensis wter extrt. Vlues were expressed s men±sd (n=5). 적지표 (8) 로알려져있는데본연구에서도각실험시료의아토피저감화유효성을평가하기위해혈청중의 IgE 수치를측정한결과, DNCB군에서 227.21±6.4 ng/ml를나타내었으며, FA군에서는 154.78±78.99 ng/ml로 IgE 생성량이감소되었다 (Fig. 3). IgE는피부백혈구에결합하여침입된항원과반응하여알레르기반응을일으키는것으로보고되고있다 (24). 특히, IgE는아토피피부염환자에서임상적중증도와비례하는것으로알려져있다 (25). 따라서비록유의적차이는관찰되지않았지만아토피질환동물모델에서비파엽및삼백초추출물혼합발효물섭취는비파엽과삼백초추출물보다 IgE 발현이크게억제되는것으로보아아토피치료에긍정적영향을미칠수있을것으로판단되어진다. 희생일에채취한혈액중혈청내의히스타민농도는 DNCB군에서 1.9±.4 ng/ml였으며, FA, FB, BI, SA군에서각각 1.47±.2 ng/ml, 1.41±.7 ng/ml, 1.61±.5 ng/ml, 1.8±.7 ng/ml로 DNCB군과비교시유의적인감소를나타내었다 (p<.5, Fig. 4). 아토피피부염에서히스타민은소양감의주요한원인으로정상인과비교시아토피환자에서히스타민이특히증가되는것으로보고되고있다 (26). 따라서상기의유의적인결과는비파엽추출물, 삼백초추출물, 이들의추출물혼합물과혼합물의발효물들이모두히스타민농도를감소시켜소양감완화에도움을줄수있음을나타내며, 이는항히스타민제부작용에대한대안의하나로천연항히스타민제개발을위한기능성소재로의활용이가능함을보여준다. 피부조직에서세라마이드총함량변화 조직학적관점에서살펴볼때, 아토피질환이유발된피부조직에서는수분보유능력과장벽기능손상이되어있는것으로보고되고있다 (7). 특히아토피환자에서는각질층의
아토피피부염동물모델에서비파엽및삼백초추출발효물의항아토피활성 1615 2.5 2 Histmine level (ng/ml). 2 1.5 1.5 d Totl ermide (µg/g). 15 1 5 Fig. 4. Totl serum histmine levels in mle BALB/ mie t srifie dy. DNCB: Treted 1% 2,4-dinitrohloroenzene nd orl injet distilled wter, FA: Treted 1% 2,4-dinitrohloroenzene nd fermented Eriootry jponi nd Surus hinensis wter extrt, FB: Treted 1% 2,4-dinitrohloroenzene nd Eriootry jponi nd Surus hinensis wter extrt, BI: Treted 1% 2,4-dinitrohloroenzene nd Eriootry jponi wter extrt, SA: Treted 1% 2,4-dinitrohloroenzene nd Surus hinensis wter extrt. Vlues were expressed s men±sd (n=5). Different supersripts on the rs indite signifint differenes t p<.5. 전체지질량이감소되어있으며, 지질중함습과장벽기능을맡고있는세라마이드함량이감소되어있어피부장벽의기능을저하시킨다 (27). 따라서실험시료에의해아토피의면역적병리효과의개선과함께피부장벽기능을증진시킬수있는가를조사하고자 2주간아토피가유도된실험군인 DNCB군과 FA, FB, BI, SA군의피부조직으로부터 HPLC 를이용하여세라마이드총함량을측정한결과, FA군에서 1,35±357 μg/g으로 DNCB와비교시세라마이드함량이유의적으로증가되었으며, FB군, BI군에서는세라마이드함량은증가되었으나통계적유의성은없었다 (p<.5, Fig. 5). 아토피피부염에서의피부건조증에따른각질층의기능손상은 2차적으로외부의자극물질이나항원에쉽게반응하여면적학적이상반응을일으킴으로더욱악화시킬수있다 (9). 따라서상기의결과로미루어볼때, 삼백초와비파엽혼합추출물의발효물은아토피질환동물모델에서유의적세라마이드를증가시킴으로수분보유능력을향상시켜피부건조증을감화하고피부장벽기능의강화로항원에대한반응을완화시켜아토피질환개선에도움을줄수있을것으로사료된다. 귀부유액에서의 ytokine 수준변화 아토피피부염은염증반응과도연계되어있어 inflmmtory ytokine도아토피질환호전에있어중요한역할을한다. IFN-γ 의경우, DNCB군에서 2.5±.5 ng/ml로분석되었으며, FA, FB, BI 및 SA군에서각각 7.1±1.3 ng/ml, 7.7±.2 ng/ml, 11.5±.6 ng/ml 및 6.9±.2 ng/ml로 DNCB 군과비교시모두유의적인증가를나타내었다 (p<.5). 반면 IL-1β에서는 DNCB군이 82.5±2.9 pg/ml, FA 군, FB군, BI군, SA군이각각 54.±.9 pg/ml, 57.±.7 pg/ml, 51.6±1.5 pg/ml, 55.5±2.2 pg/ml로유의적인감소 Fig. 5. Totl ermide ontents in the epidermis of BALB/ mie. DNCB: Treted 1% 2,4-dinitrohloroenzene nd orl injet distilled wter, FA: Treted 1% 2,4-dinitrohloroenzene nd fermented Eriootry jponi nd Surus hinensis wter extrt, FB: Treted 1% 2,4-dinitrohloroenzene nd Eriootry jponi nd Surus hinensis wter extrt, BI: Treted 1% 2,4-dinitrohloroenzene nd Eriootry jponi wter extrt, SA: Treted 1% 2,4-dinitrohloroenzene nd Surus hinensis wter extrt. Vlues were expressed s men±sd (n=5). Different supersripts on the rs indite signifint differenes t p<.5. IFN-γ (ng/ml). IL-1β (pg/ml). 15 1 5 9 8 7 6 5 4 3 2 1 Fig. 6. Chnges of IFN-γ (A) nd IL-1β (B) in er of BALB/ mie. DNCB: Treted 1% 2,4-dinitrohloroenzene nd orl injet distilled wter, FA: Treted 1% 2,4-dinitrohloroenzene nd fermented Eriootry jponi nd Surus hinensis wter extrt, FB: Treted 1% 2,4-dinitrohloroenzene nd Eriootry jponi nd Surus hinensis wter extrt, BI: Treted 1% 2,4-dinitrohloroenzene nd Eriootry jponi wter extrt, SA: Treted 1% 2,4-dinitrohloroenzene nd Surus hinensis wter extrt. Vlues were expressed s men±sd (n=5). Different supersripts on the rs indite signifint differenes t p<.5. 를보였으나각실험시료별큰차이는없었다 (p<.5, Fig. 6). 아토피환자에서는 T-ell의손상에의해 IFN-γ 농도가 (A) (B)
1616 최명진 정희경 정유석 박승춘 홍주헌 감소하며, IL-1β는증가된다고보고되고있다 (8,12). 특히 IFN-γ는만성염증단계의인자로아토피피부염에서중증에서나타나는면역적지표이다 (28). 따라서상기의결과를통해실험시료인비파엽추출물, 삼백초추출물, 비파엽및삼백초추출물의혼합물, 이들혼합물의발효물들에의해아토피질환동물에서 IFN-γ 및 IL-1β 농도의조절을확인할수있었으며, 이는실험시료에의해아토피환자에있어염증반응을개선이가능할것으로사료된다. 그러나실험시료에의한각 ytokine 조절에대한상호간연관성은향후연구가진행되어져야할것이다. 양쪽귀의무게변화및등피부의육안병리 DNCB에의한감작반응은알레르겐에의해알레르기및염증반응을유발시켜귀에서 swelling이일어나귀의무게를증가시킨다고보고되고있다 (11). 따라서본연구에서는아토피저감화가기대되는시료들이알레르기반응이저하되어귀의무게를감소시킬수있는지를조사하였다. 따라서희생일에채취한양쪽귀의무게는측정한결과, DNCB 군에서는 122.5±2.6 mg으로측정되었으며, FA군에서는 9±28.2 mg으로감소를나타내었으나유의적차이는없었다 (Fig. 7). 모든실험군들의등부위피부의육안증상을관찰한결과, Lee 등 (9) 의보고와동일하게 2주간 1% 의 DNCB를등부위에도포한 DNCB군은가피형성과염증및발적소견을보였으며, FA군과 BI군에서는가피형성과발적의소견이감소됨을육안상관찰할수있었다 (Fig. 8). 상기의결과들과육안적병리를관찰한결과를종합해볼때, 비파엽과삼백초추출물의혼합발효물섭취는아토피피부염유발동물에서히스타민생산을감소시키며, 세라마 Er weight (mg). 2 15 1 5 Fig. 7. Chnges of er weight of BALB/ mie mesured t srifie dy. DNCB: Treted 1% 2,4-dinitrohloroenzene nd orl injet distilled wter, FA: Treted 1% 2,4-dinitrohloroenzene nd fermented Eriootry jponi nd Surus hinensis wter extrt, FB: Treted 1% 2,4-dinitrohloroenzene nd Eriootry jponi nd Surus hinensis wter extrt, BI: Treted 1% 2,4-dinitrohloroenzene nd Eriootry jponi wter extrt, SA: Treted 1% 2,4-dinitrohloroenzene nd Surus hinensis wter extrt. Vlues were expressed s men ±SD (n=5). 이드함량은증가시켜아토피질환에있어소양증감소시키고피부장벽은강화하여피부물리적자극을최소화하여아토피질환의근본원인인피부의물리적손상을감소시킬수있음을제시하였다. 또한비파엽과삼백초추출물의혼합발효물섭취에의한만성염증사이토카인인 IFN-γ 감소는아토피피부염에있어피부의물리적손상감소가단지피부장벽의강화뿐만아니라알레르기원이나 2차감염에의한염증반응유발을보호하여아토피질환악화를감소시킬수있음을의미한다. 아토피피부염은만성적으로지속되며재발되는것이특징으로막대한경제적비용과함께환자뿐만 (A) (B) (C) (D) (E) Fig. 8. Clinil skin fetures nd severity of DNCB-indued topi dermtitis in BALB/ mie. DNCB group (A), FA group (B), FB group (C), BI group (D), nd SA group (E) mie skin fetures. DNCB: Treted 1% 2,4-dinitrohloroenzene nd orl injet distilled wter, FA: Treted 1% 2,4-dinitrohloroenzene nd fermented Eriootry jponi nd Surus hinensis wter extrt, FB: Treted 1% 2,4-dinitrohloroenzene nd Eriootry jponi nd Surus hinensis wter extrt, BI: Treted 1% 2,4-dinitrohloroenzene nd Eriootry jponi wter extrt, SA: Treted 1% 2,4-dinitrohloroenzene nd Surus hinensis wter extrt.
아토피피부염동물모델에서비파엽및삼백초추출발효물의항아토피활성 1617 아니라보호자의삶의질까지저하시키고있다 (29). 결론적으로본연구는비파엽과삼백초추출물의혼합발효물섭취가아토피환자에게있어피부보호와면역조절에복합적영향을주어아토피피부염을저감화시키는데도움을줄수있을것으로사료되며항아토피관련기능성식품소재로의활용이기대된다. 요 본연구는 in vitro 실험결과아토피피부염의억제효능이기대되는비파엽추출물 (BI군), 삼백초추출물 (SA군), 비파엽추출물과삼백초추출혼합물 (FB군) 그리고삼백초와비파엽추출혼합발효물 (FA군) 을경구투여하여 DNCB 처리한아토피실험동물을대상으로아토피질환개선에대한유효성을평가하였다. 혈청중의 IgE 수치를측정한결과, DNCB군에서 227.21±6.4 ng/ml를나타내었으며, FA군에서는 154.78±78.99 ng/ml로 IgE 생성량이감소되었다. 혈청내의히스타민농도는 DNCB군에서 1.9±.4 ng/ml 였으며, FA, FB, BI, SA군에서각각 1.47±.2 ng/ml, 1.41±.7 ng/ml, 1.61±.5 ng/ml, 1.8±.7 ng/ml로 DNCB군과비교시유의적인감소를나타내었다. 세라마이드총함량을측정한결과, FA군에서 1,35±357 μg/g으로 DNCB와비교시세라마이드함량이유의적으로증가되었다. IFN-γ 의경우, DNCB군에서 2.5±.5 ng/ml로분석되었으며, FA, FB, BI 및 SA군에서각각 7.1±1.3 ng/ml, 7.7±.2 ng/ml, 11.5±.6 ng/ml 및 6.9±.2 ng/ml로 DNCB 군과비교시모두유의적인증가를나타내었다. 특히비파엽및삼백초추출물혼합발효물은등부위피부의육안증상을관찰한결과, 가피형성과발적감소가가장우수하여아토피피부염질환개선에도움을줄수있을것으로기대된다. 문 1. Kim HJ, Jo CH, Kim TH, Kim DS, Prk MY, Byun MW. 26. Biologil evlution of the methnoli extrt of Eriovotry jponi nd its irrdition effet. Koren J Food Si Tehnol 38: 684-69. 2. GO JK, Prk SI. 25. Sensory property nd keeping qulity of urd yoghurt dded with Loqut (Eriootry jponi Lindley) extrt. Koren J Food Nut 18: 192-199. 3. Ferreres F, Gomes D, Vlento P, Gonlves R, Pio R, Chgs EA, Ser RM, Andrde PB. 29. Improved loqut (Eriootry jponi Lindl.) ultivrs: vrition of phenolis nd ntioxidtive potentil. Food Chem 114: 119-127. 4. Shin HH, Kng MJ, Cho HY, Kim BC, Cho EK. 28. Optimiztion of extrtion onditions for Houttuyni ordr Thun nd Sururus hinensis Bill mixture y response surfe methodology. Food Eng Prog 12: 247-255. 5. Kim SK, Bn SY, Kim JS, Chung SK. 25. Chnge of ntioxidnt tivity nd ntioxidnt ompounds in Sururus hinensis y extrtion onditions. J Koren So Appl Biol 약 헌 Chem 48: 89-92. 6. Jeong YS, Jung HK, Youn KS, Kim MO, Hong JH. 29. Physiologil tivities of the hot wter extrt from Eriootry jponi Lindl. J Koren So Food Si Nutr 38: 977-982. 7. Yun MY, Noh YH, Shin GR, Cheong KJ. 28. Effets of ELL on vrious immunologil ftors in spleen relted to pthogenesis of topy dermtitis in DNCB-indued NC/ Ng mie. J Kor So Cosm 14: 954-963. 8. Lee SH, Bek SJ, Kim HA, Heo Y. 26. 2,4-dinitrohloroenzene-indued topi dermtitis like immune ltertion in mie. J Toxiol Pu Helth 22: 357-364. 9. Lee SH, Min KJ, Lee KO, Sin JS, Kim YC. 28. Effet of Germn hmomile oil pplition to topi dermtitis mie on the hnge of serum IgE level. J Kor So Cosm 14: 337-345. 1. Lee YK, Yeo MH, Kng TH, Yoo JS, Kim HY. 28. Identifition of disesoml proteins from topy-relted disese network. J Kor Contents Assoition 9: 114-12. 11. Yun JW, Kim H, Kng HJ, Koh JY, Kim BH. 28. Comprtive evlution of niml models for topi dermtitis in NC/Ng mie. L Anim Res 24: 59-66. 12. Young HT, Choi HJ. 25. Clinil effiy of funtionl herl extrts liquid in topi dermtitis ptients. Koren J Food & Nutr 18: 38-384. 13. Kim YH, Prk YS. 26. Effet of Sutellri ilensis wter extrt on ntioxidtive tivity nd epiderml thikness in DNCB-indued llergi ontt dermtitis niml model. J Koren So Food Si Nutr 35: 543-548. 14. Shon MY, Nm SH. 27. Effet of Euommi ulmoides extrts on llergi ontt dermtitis nd oxidtive dmge indued y repet eliittion of DNCB. J Koren So Food Si Nutr 36: 1517-1522. 15. Kim KS, Ahn MJ, Kim GS, Prk SC, Rhee MH, In JG, Kim BH, Nh YL, Kim HH, Hn SH. 27. Effets of Opunti humifus extrt on DNCB-indued llergi ontt dermtitis in BALB/ Mie. L Anim Res 23: 169-173. 16. Lee IH, Lee SH, Lee IS, Prk YK, Chung DK, Choue RW. 28. Effets of proioti extrts of Kimhi on immune funtion in NC/Ng mie. Koren J Food Si Tehnol 4: 82-87. 17. Kim KH, Choi YS, Kim HE, Lee KG, Yeo JH, Jung DH, Kim SH, Cho YH. 27. Dietry effet of silk protein on ermide synthesis nd the expression of ermide metoli enzymes in the epidermis of NC/Ng mie. J Koren So Food Si Nutr 36: 554-562. 18. Kim SH, Jung HS, Cho BG, Lee JY, Kim DG. 24. Effet of Lithospermum erythrorhizon on the topi dermtitis. J Koren Orientl Peditris 18: 63-75. 19. Kim SH, Kim HJ, Jung JY. 29. Effets of Bilein on piryl hloride-indued ontt dermtitis in BALB/ mie. J Koren So Food Si Nutr 38: 16-165. 2. Yun MY, Noh YH, Cheong KJ. 27. Suppression of DNCB-indued dermtitis in NC/Ng mouse model y RMC. J Kor So Cosm 13: 851-861. 21. Kng JW, Jung JJ, Lee EE, Kim WS. 29. Clinil investigtion of hildren with severe topi dermtitis. Peditr Allergy Respir Dis 19: 392-4. 22. Kim, HA, Yoon SW, Yum MG, Kim CR, Lee SM, Lee HB, Oh JW. 28. Long-term effet of reominnt interferon-gmm on moderte nd severe topi dermtitis in hildhood. Peditr Allergy Respir Dis 18: 236-242. 23. Aristedis R, Serfim K. 27. Assoition of plsm neutrophil elstse levels with other inflmmtory meditors nd linil fetures in dult ptients with moderte nd
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