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성령 전
5 years ago
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1 대한안과학회지 2009 년제 50 권제 3 호 J Korean Ophthalmol Soc 2009;50(3): DOI : /jkos 접수번호 : 저출력 - 장시간조사와고출력 - 단시간조사에의한역치하레이저광응고반의조직학적변화 이주은 1 김경환 1 제승연 2 이지은 2 이종수 2 엄부섭 2 메리놀병원안과 1, 부산대학교의학전문대학원안과학교실 2 목적 : 각각 60 초, 1 초간레이저를조사하여만든형태학적으로유사한역치하응고반의세포자멸사의발현양상과조직변화를비교하고자하였다. 대상과방법 : 유색가토에 810 nm 다이오드레이저를이용하여 3,000 μm 직경으로 60 초 (LD 군 ), 혹은 1 초 (SD 군 ) 간레이저를조사하여역치하광응고반을만든뒤시간대별로안구를적출하여 H&E, toluidine blue, TUNEL 염색을시행하고광학현미경및전자현미경을이용한조직의형태학적소견과세포자멸사의발현양상을관찰하였다. 결과 : 육안적으로는관찰되지않는비슷한역치하레이저치료임에도불구하고두군에서의조직학적변화나세포자멸사의발현은망막내층에서차이를보였는데, LD 군의경우에는 6 시간째망막의전층에서세포자멸사가관찰되었으며, 외과립층의세포손상이더많이일어났다. 반면 SD 군에서는망막의세포자멸사가일어나지않았으며, 내측망막의손상도적었다. 결론 : 1 초의역치하레이저치료가 60 초간의역치하레이저치료에비해망막색소상피주변의효과는비슷하면서망막내층의손상은더줄일수있었으며보다구체적인연구가필요하다. < 대한안과학회지 2009;50(3): > 맥락막신생혈관은맥락막모세혈관, Bruch 막, 망막색소상피세포복합체의이상에서발생하게되는데, 진행되면인접한신경망막의심한변성을초래하여결국에는실명을야기하게된다. 이신생혈관을없애기위해이전부터아르곤레이저등을이용하여강한출력으로신생혈관부위에단시간레이저를조사하여맥락막신생혈관을광응고시키는방법이이용되어왔다. 그러나맥락막신생혈관이황반중심에위치할경우에는고출력의레이저에의해인접한정상망막까지파괴되므로치료후시력저하를초래하게되는문제점이있다. 1,2 이러한문제점을해결하기위해동공경유온열요법이나광역학레이저치료와같은새로운형태의레이저치료법이개발되었다. 동공경유온열요법 (Transpupillary thermotherapy, TTT) 은낮은출력의레이저를비교적장시간조사하여조직온도상승을유발하여정상망막의손상은최소한으로줄이고신생혈관만을선택적으로치료하는방법이다. 과거에는맥락막흑색종, 망막혈관종등안내종양의치료에이용되다가 접수일 : 2008 년 2 월 13 일 심사통과일 : 2008 년 10 월 21 일 통신저자 : 이주은부산시중구대청동 4 가 12 메리놀병원안과 Tel: , Fax: jooeun2@korea.com * 본논문요지의일부는 2005 년미국 ARVO 학회에서포스터로발표되었음. 3-6 최근에는맥락막신생혈관을폐쇄시키는목적으로사용되고있다. 7-9 그러나이런역치하의온열법에의해서도망막의전층에걸쳐조직손상이일어난다는실험결과들이보고되고있다. 10,11 맥락막신생혈관의치료를위한온열요법에는안내종양의치료와는달리치료후레이저응고반이보이지않을정도인역치미만의레이저조사가사용되며, 60초가량의긴시간동안레이저를조사하게되므로맥락막의혈류흐름에의한열전도의발생과각개체별색소침착의차이등으로항상일정한강도의역치하응고반을얻기가쉽지않다는것이임상적인문제점으로지적되어왔다 레이저를조사할때망막과맥락막의온도평형 (thermal equilibration) 은열전도의영향으로인해레이저조사약 1초뒤에레이저응고반내부의망막색소상피, 맥락막모세혈관, 그리고상부의광수용체의온도가비슷해진다고한다 그러나, 동공경유온열요법에는일반적인레이저광응고술에비해서는비교적큰레이저직경이사용되는데, 이런경우작은레이저직경에서는레이저응고반중심부조직의온도상승이주변부로쉽게전도되어서효율적으로열이분산되는것과달리, 레이저직경이큰경우에는레이저응고반주변부의조직도온도가상승되어있기때문에중심부의온도가쉽게주변부로분산되지못하고고온이지속된다. 17 따라서주변부에비해중심부에서조직의손상이더많이일어날수있다. 440

- 이주은외 : 역치하레이저광응고반의조직변화 - 따라서, 저자는통상적인온열요법의방법인 60초간레이저를조사하여만든역치하응고반과 1초간의짧은시간에순간적온도상승을유발하여만든역치하의응고반에서세포자멸사의발현양상을포함한망막의조직변화를알아보고자하였다.

2 - 이주은외 : 역치하레이저광응고반의조직변화 - 따라서, 저자는통상적인온열요법의방법인 60초간레이저를조사하여만든역치하응고반과 1초간의짧은시간에순간적온도상승을유발하여만든역치하의응고반에서세포자멸사의발현양상을포함한망막의조직변화를알아보고자하였다. 대상과방법 실험동물 전실험과정동안모든동물은 ARVO (Association of Research in Vision and Ophthalmology) 에서제시한눈과시력연구에서의동물사용에관한원칙 (the ARVO Statement on the Use of Animals in Ophthalmic and Vision Research) 을준수하였다. 역치레이저강도 (threshold laser burn) 를확인하기위한예비실험을위해 2마리, 본실험을위해 21마리의모피색상이유사한체중 2.0~2.5 kg의유색가토를이용하였다. 가토에 xylazine (10 mg/kg; Bayer Korea, Seoul, Korea) 을근육주사하여마취를유도한뒤 Tropicamide 0.5% 와 Phenylephrine 10% 안약을점안하여산동시켰다. 장시간노출 (LD: long duration exposure) 및단시간노출 (SD: short duration exposure) 의역치하레이저 810 nm diode laser (Iris Medical OcuLight SLx, Iridex Corporation, Mountain View, U.S.A.) 를세극등에부착하여레이저용접촉렌즈 (Transequater; Volk Optical, Mentor, U.S.A.) 를이용하여역치하레이저를시행하였다. 1) 예비실험 : 역치출력의확인본실험에서역치하레이저를시행하기위한준비단계로우선레이저의역치출력을확인하기위한예비실험을시행하였다. 2마리의가토에 3,000 µm의레이저직경으로출력을달리해가며통상적동공경유온열요법에사용되는 60초간레이저를조사하여, 육안적으로레이저조사부위가희미하게확인되기시작하는 LD군의레이저역치강도 (threshold power) 를찾았다. 다시동일한레이저직경으로출력을달리해가며 1초간레이저를조사하여 SD군의레이저역치강도를찾았다. Figure 1. Fundus photograph of marker laser burns: Single laser (*) was applied as a superior and inferior marker for the long duration subthreshold laser treatment (LD) and two juxtaposed lasers (**) for the short duration subthreshold laser treatment (SD). Subthreshold lasers of 3.0 mm in spot size had been applied for 60 seconds in the LD group, and for 1 second for SD group within the marker burns. LD군은 60초, SD군은 1초간레이저를조사하였으며, 레이저에대한조직반응의개체에따른차이및레이저조사위치에따른차이가있음을감안하여각개체별로레이저출력을조절하였다. 즉예비실험을통해얻은역치출력으로레이저를시행하여레이저조사부위의망막에육안적변화가관찰되면 10 mw 단위로출력을낮추어서다른부위에다음레이저를시행하고, 변화가전혀나타나지않으면 10 mw 단위로출력을높여서다음레이저를시행하는과정을반복하여역치바로아래의출력으로레이저가이루어진역치하응고반을만들었다. 적절한역치하응고반이만들어지면추후조직표본을만들때눈에보이지않는레이저응고반의위치를확인할수있도록하기위해, 동일한레이저로출력을충분히높여역치하응고반의상, 하, 좌, 우에 800~1,200 µm 크기로강하게 레이저를조사하여표지응고반을만들었다 (Fig. 1). 조직제작시 LD군과 SD군을쉽게구별하도록하기위해 LD군의상, 하표지응고반은 1개를만들고, SD군의경우에는 2개를만들어서두군의구별이용이하도록하였다. 조직표본제작 2) 본실험 : 역치하레이저조사 21마리의가토를대상으로역치하레이저광응고반을만들었다. 레이저조사가끝난후 6, 12, 24, 72시간, 1주, 2주, 4주뒤에가토를희생시킨후안구를적출하였다. 안구를적출한즉시날카로운면도칼을이용하여적도부에서전안부를잘라 441

3 - 대한안과학회지 2009 년제 50 권제 3 호 - 내고, 조심스럽게유리체를제거한다음, 주변부공막에방사상절개를시행하여안구를펼쳐서 2.5% glutaraldehyde 용액에담갔다. 2시간이상전고정을시행한후안구를꺼내서수술현미경으로관찰하면서표지레이저의영향을최소화하기위해표지응고반내부의역치하응고반만이포함되도록중심부의약 11 cm 크기의조직절편을만들었다. H&E 및 TUNEL 염색조직학적변화를관찰하기위해 Hematoxylin and Eosin (H&E) 염색을시행하고, 세포자멸사의확인을위해 terminal deoxynucleotidyl transferase biotin-dutp nick end labeling (TUNEL) 염색을시행하였다. TUNEL 염색에는 TdT-FragEL TM DNA fragmentation detection Kit (Calbiochem, USA) 를이용하여매뉴얼에따라시행하였다. 조직절편의파라핀을제거한후농도순의알코올에처리하여재수화 (rehydration) 시킨후 TUNEL 반응혼합액에처리하였다. Diaminobenzidine (DAB) 을발색소로사용하고슬라이드를 methyl green 으로대조염색하였다. 전자현미경관찰전자현미경으로미세구조를관찰하기위해 2.5% glutaraldehyde 용액에전고정된조직을 0.1 M phosphate 완충액에세척한뒤 1% OsO 4 용액에고정하고알코올농도상승순으로탈수한다음 Polybed 812 resin 혼합액 (Electron Microscopy Sciences, USA) 으로포매하였다. 1~2 µm 두께로절편을만들어 1% toluidine blue로염색하여검사하고자하는부위를광학현미경으로확인하고초미세절단기 (Reichert SuperNova, Leica, Vien, Austria) 로 50~60 nm 두께의초미세절편을만들어 uranyl acetate와 lead citrate로전자염색한다음투과전자현미경 (JEM 1200EX-II, JEOL, Tokyo, Japan) 으로관찰하였다. 결과 예비실험역치출력의확인예비실험을통해, 3 mm 직경의레이저를사용할경우 60 초간레이저를조사한 LD군은 130~150 mw, 1초간레이저를조사한 SD군은 700~800 mw가레이저후망막의육안적변화가일어나기시작하는역치강도임을확인할수있었다. 역치하레이저치료적절한역치하레이저응고반은 LD군의경우 90~120 mw, SD군의경우 500~650 mw에서얻을수있었다. 광학현미경관찰 LD군의경우 72시간까지의레이저초기에는신경망막, 맥락막이부종으로인해두께가증가되어있었다. 망막색소상피의세포질은팽창되어있었으며, 내, 외과립층의세포질내공포 (vacuole) 의형성등이보였고, 응고반의중심부에서국소적으로시세포내외절이분절되면서부종이일어난형태가많이보였다 (Fig. 2A). 1주일이지나면서신경망막, 맥락막의부종이감소하면서두께가감소하기시작하였고, 2주가지나면서내, 외과립층및신경절세포층의세포수가감소하고시세포층의두께가줄어드는양상을보였다 (Fig. 2C). 그러나, 관찰하는동안맥락막모세혈관의조직변화는없었다. SD군의경우망막색소상피와맥락막모세혈관의변화는비슷하였다. 24시간까지는망막색소상피의부종이관찰되었고, 72시간까지맥락막의부종은지속되었으나맥락막모세혈관의변화는보이지않았다. 내, 외과립층의세포질내공포형성과시세포의부종은 LD군에비해미약하였다 (Fig. 2B). 1주일이지나면서맥락막의부종은감소하였고, 내, 외과립층은정상조직과유사한소견이었다 (Fig. 2D). Toluidine blue로염색한광학현미경소견도이와유사한결과를보였다. 세포자멸사의비교 LD군에서는 6시간이경과한조직의신경절세포층, 내, 외과립층에서갈색으로 TUNEL 염색에양성을보이는세포가관찰되었다 (Fig. 3A). TUNEL 양성세포는이후급격히감소하여 12시간이후의조직에서는잘관찰되지않았다 (Fig. 3C). SD군에서는 TUNEL 양성세포가거의보이지않았다 (Fig. 3B, D). 전자현미경관찰시세포외절의파괴는두군모두비슷한양상으로관찰되었는데, 시세포외절의전체적인윤곽은유지된채내부의 disc 구조가파괴되는형태였다 (Fig. 4A, C). LD군의경우 72시간이내의조직에서는시세포외절과 442

- 이주은 외 : 역치하 레이저 광응고반의 조직 변화 - Figure 2. H&E stained histological findings of the long duration (LD, A and C) and short duration (SD, B and D) subthreshold laser group. 400.

4 - 이주은 외 : 역치하 레이저 광응고반의 조직 변화 - Figure 2. H&E stained histological findings of the long duration (LD, A and C) and short duration (SD, B and D) subthreshold laser group (A) LD at 12 hours, (B) SD at 12 hours, (C) LD at 4 weeks, and (D) SD at 4 weeks after the laser treatment. Retina became swollen soon after the subthreshold laser treatment in both groups. Vacuole formation in the cytoplasm of inner nuclear layer is more evident in the LD group (A and B). Altered photoreceptor inner and outer segments, and intracytoplasmic vacuolization in the retinal pigment epithelium are noted. Choroid did not show any remarkable alteration except for mild stromal edema. Retinal thickness has decreased with time in the both group, while reduction of cellularity was more marked in the LD group. 망막색소상피의 손상이 많이 관찰되었다. 그러나 조직 내에 적어진 채 망막색소상피세포의 손상 받은 첨단부 미세융모 서의 위치에 따라 다양성을 보여, 광학현미경에서 관찰되었 (apical microvilli)와 접해있었다(Fig. 4D). 망막색소상피 던 국소적인 시세포 손상부위의 망막색소상피세포에는, 세 세포의 세포질 내부의 공포는 줄어들었으며, 포식소체는 잘 포질 내에 공포(vacuole)가 다수 형성된 경한 정도의 손상 관찰되지 않았다. 맥락막 모세혈관, Bruch 막의 이상은 보 에서 세포질이 파열되는 심한 정도까지 다양한 형태의 손 이지 않았다. 상이 관찰되기도 한 반면(Fig. 4A), 전혀 손상이 일어나지 SD군의 경우 망막색소상피와 시세포 주변부의 변화 소견 않은 부위도 공존하고 있었다. 손상된 망막색소상피뿐 아니 은 LD군과 유사하였다. 레이저 후 초기에는 망막색소상피세 라 정상적인 망막색소상피의 세포질 내에서도 많은 수의 포의 세포질 내에 다수의 공포가 형성된 경우도 있었던 반면 포식소체(phagosome)가 관찰되었다(Fig. 4C). 맥락막모 (Fig. 5A), 변화가 거의 일어나지 않은 부분도 한 조직 내에 세혈관은 대부분에서 손상 없이 잘 유지되었다. 외과립층에 혼재하고 있었다. 세포질 내에는 포식소체가 흔하게 관찰되 도 핵이 농축되거나(pyknosis) 비정형적인 모양으로 변해 었다(Fig. 5A, C). 손상된 첨단부 미세융모와 시세포외절 사 가는 형태가 다수 관찰되었다(Fig. 4B). 이에 공간이 형성되기도 하였다(Fig. 5A). 외과립층에는 핵 1주일이 경과하면서 시세포 내절 및 외절의 수가 현저히 농축 현상과, 핵 내의 이질염색질(heterochromatin)이 수축 443

5 - 대한안과학회지 2009 년제 50 권제 3 호 - Figure 3. TUNEL staining of the long duration (LD, A and C) and short duration (SD, B and D) subthreshold laser group, 400. (A) LD at 6 hours, (B) SD at 6 hours, (C) LD at 24 hours, and (D) SD at 24 hours after the laser treatment. Numerous TUNEL-positive cells stained brown are observed in GCL, INL and ONL at 6 hours after long duration subthreshold laser treatment. They decreased rapidly with time. GCL=ganglion cell layer; INL=inner nuclear layer; ONL=outer nuclear layer. 되고세포질이팽창되면서빈공간이형성된세포들이일부에서관찰되었지만 (Fig. 5B), 변화정도는 LD군에비해미약하였다. 맥락막모세혈관은일부에서적혈구가변형되고혈전으로폐쇄되어있는경우가관찰되기도하였으나대부분에서손상없이잘유지되었다 (Fig. 5C). 1주일이상경과한뒤에도망막색소상피의첨단부미세융모의손상은계속남아있었고, 시세포외절의수도다소감소하였다. 고찰 역치하강도의동공경유온열요법의치료기전에는세포동공경유온열요법에사용되는 810 nm의적외선파장은혈색소나엽황소 (xanthophylls) 에는거의흡수되지않는반면, 맥락막과망막색소상피의멜라닌에의해주로흡수되 고, 망막맥락막조직에의높은투과성을가지기때문에망막광수용체세포의손상을줄여망막독성을최소화할수있으므로 21,23,24 맥락막신생혈관과같은망막하질환의치료에서망막의손상을최소화할수있다. 따라서동공경유온열요법으로역치이하의열손상을이용하면정상적인망막조직의손상을최소한으로줄일수있으면서혈관부위의병변을매우유용하게치료할수있을것으로생각된다. 그러나최근 She et al 11 은쥐를이용한실험에서역치하레이저를시행하고 TUNEL 염색을이용하여망막의전층에서세포자멸사를확인할수있었으며, 역치하레이저를시행하더라도망막에악영향을미쳐서장기적인장애를초래할수있다고보고하였다. 본연구에서도 60초간레이저조사시완전한역치하레이저치료였음에도불구하고 6시간째망막의전층에서세포자멸사가유발됨을확인할수있었다. 이것은 6시간째 TUNEL 염색에양성인세포가가장 444

6 - 이주은 외 : 역치하 레이저 광응고반의 조직 변화 - Figure 4. Transmission electron micrograph of LD group. (A) Six hours after the laser. Focal eruption of retinal pigment epithelium with severe cytoplasmic alteration is observed. (Original magnification 2,000; bar indicates 2 µm) (B) At 6 hours. Damaged ONL with pyknosis and altered cytoplasm of the cells are noted. ( 2,500; bar, 2 µm) (C) At 12 hours. Vacuolizations in the cytoplasm of retinal pigment epithelial cell and disrupted photoreceptor outer segments are observed. Several phagosomes dislodged from the outer segment are scattered in the cytoplasm. ( 2,500; bar, 2 µm) (D) One week after LD laser. Damaged photoreceptor inner and outer segments are closely associated with retinal pigment epithelial cells that had lost their apical microvillus. Vacuoles are still present in the RPE cytoplasm. ( 2,500; bar indicates 2 µm) 11 많이 나타나고 이후에는 감소하였다는 She et al 의 연구 염색에 양성으로 나타났으나 그 수는 미미하였으며, 이후에 결과와 일치한다. 1초간 레이저를 조사한 SD군의 경우 6시 서는 망막의 조직층에서는TUNEL 양성반응이 관찰되지 않 간째 망막의 내과립층과 외과립층의 일부 세포들이 TUNEL 았다. 동공경유온열요법의 레이저 출력을 더 높일수록 세포 445

7 - 대한안과학회지 2009년 제 50 권 제 3 호 - Figure 5. Transmission electron micrograph of SD group. (A) Six hours after the laser. Apical microvilli were destroyed and numerous vacuoles are observed in the cytoplasm of the RPE. (original magnification 6,500; bar indicates 1 µm) (B) At 6 hours. ( 3,000; bar, 2 µm) Pyknosis and abnormal cytoplasm with heterochromatin condensation is observed but is less significant than LD group. (C) At 12 hours. Deformed erythrocyte and obstructed capillary lumen beneath the well preserved Bruch membrane is seen. Photoreceptor outer segments are disrupted and several phagosomes engulfed in the cytoplasm of the retinal pigment epithelium are noted. ( 3,000; bar, 2 µm) (D) At 1 week. The number of photoreceptor outer segment decreased. Note the altered apical microvilli and vacuoles in the cytoplasm of retinal pigment epithelial cell. ( 2,500; bar, 2 µm) 11 자멸사의 발현이 더 적게 나타났던 She et al 의 결과와 비 포자멸사 반응이 관찰되기 힘들었던 것으로 생각된다. 향후 추어볼 때 SD군의 경우 순간적인 온도상승이 세포자멸사 보다 광범위하고 구체적인 실험연구가 필요할 것으로 생각 를 유발하기에는 높고, 온도상승 지속 시간이 너무 짧아 세 된다.광학현미경을 통한 관찰에서는 망막의 전 층에서 세포 446

8 - 이주은외 : 역치하레이저광응고반의조직변화 - 수의감소나세포질내공포의형성, 광수용체외절및내절의파괴와같은조직변화를확인할수있었다. 맥락막에서는레이저초기의간질부종을제외하고는뚜렷한변화를볼수없었는데, 이것은역치하레이저후맥락막에는큰변화가없었다는다른연구결과들과도일치한다. 10,11,19,25 조사시간을달리한두가지형태의역치하레이저를시행한후의조직변화는망막색소상피와시세포접합부에서는대체로비슷하였다. 다만응고반의중심부에서국소적으로시세포외절주변부가더심한손상을보인경우가 LD군에서더흔하게나타났다. 두군의확연한차이가났던것은망막내층이었다. SD 군의경우레이저후초기에외과립층의세포들에는변화가전혀없거나경한세포질부종을동반한핵농축이관찰되었다. 이에비해 LD군의경우외과립층에더심한세포변성이일어나고후기에는세포수도감소되었다. 이것은 LD 군에서 6시간째세포자멸사가망막전층에걸쳐일어났던것과관계가있을것으로생각되는데, 60초간지속적으로레이저를조사하여온도상승을유발할경우신경망막에도세포자멸사가유발되어결국에는손상을초래하게된것으로보인다. 이러한레이저조사의시간및파워에의한조직손상의차이는레이저로인해상승된온도가주변부로전도되는데따른정도의차이로생각된다. 망막색소상피와맥락막의색소에서레이저광을흡수하면이에너지는열로바뀌어주변부와내측의망막으로전달된다. 16 이때 SD군의경우에는 1초간레이저를조사하여망막색소상피와시세포층사이의온도가평형상태를이룬뒤더이상의열공급이없으므로신속히주변부로열이전도되어소실되지만, LD 군의경우에는 60초간지속적으로열공급이되므로, 망막주변부의온도상승으로인해망막중심부의열이바깥으로전도되지못하고계속상승되어있는상태가유지된다. 그러나망막하부에위치하는맥락막조직의경우는맥락막자체내에혈류가풍부하게유지되어이로인한열전도가원활히이루어지므로망막에비해맥락막과인접한망막색소상피에는비교적손상이적게일어날것으로생각된다. 두군에서망막에전달된총에너지를계산해보면 LD군의경우는 5.4~7.2 J에이르는반면 SD군의경우는 0.5~ 0.65 J로 LD군이약 10배의에너지를받게된다. 따라서 LD군의경우에는망막, 특히응고반의중심부에가까운신경망막에는열소실이잘일어나지않으므로 SD군에비해많은손상이일어나지만, 망막색소상피와맥락막에는맥락막혈류흐름에의한열전도로인해쉽게열이주변부로소실되므로손상이최소화되어 SD군과비슷한정도의손상이생겼을것으로생각된다. 육안적으로는관찰되지않는비슷한역치하레이저치료 임에도불구하고레이저조사시간이다른두군에서조직학적변화나세포자멸사의발현은다르게나타났다. 망막색소상피와시세포외절접합부주변으로는두군모두비슷한양상의세포손상이관찰되었다. 맥락막에는두군모두초기에일어난간질부종이외에는큰변화가없었다. 그러나망막내층에서는다른반응을보여 60초간역치하레이저를시행할경우에는 6시간째망막의전층에서세포자멸사가일어났으며, 뚜렷한외과립층의세포손상이일어나고 2주일이상경과한뒤에는망막전층의세포수가감소한반면, 1초간역치하레이저를시행한경우에는망막의세포자멸사가일어나지않았고, 내측망막의손상도적었다. 1초의역치하레이저치료가 60초간의역치하레이저치료에비해망막색소상피주변의효과는비슷하면서망막내층의손상은더줄일수있다는것을알수있었다. 하지만본연구의경우레이저에대한개체및조사부위에따른차이를감안하여레이저출력을조절하여동일한정도의적절한역치하레이저응고반을만들어조직검사에비교하고자하였으나, 이렇게할경우비교대상이된레이저응고반의위치가제각각달라지게되어또다른오류가있다는한계가있으며, 맥락막신생혈관과같은병소부위에선택적으로치료효과를보일수있을지에대해서도추가적인연구가필요할것이다. 참고문헌 1) Macular Photocoagulation Study Group. Laser photocoagulation of subfoveal neovascular lesions in age-related macular degeneration: results of a randomized clinical trial. Arch Ophthalmol 1991;109: ) Macular Photocoagulation Study Group. Subfoveal neovascular lesions in age-related macular degeneration: results of a randomized clinical trial. Arch Ophthalmol 1991;109: ) Oosterhuis JA, Journee-de Korver HG, Kakebeeke-Kemme HM, Bleeker JC. Transpupillary thermotherapy in choroidal melanomas. Arch Ophthalmol 1995;113: ) Shields CL, Shields JA, Cater J, et al. Transpupillary thermotherapy for choroidal melanoma: tumor control and visual results in 100 consecutive cases. Ophthalmology 1998;105: ) Kim US, Yu SY, Kim SW, Kwak HW. Five cases of transpupillary thermotherapy for intraocular tumors. J Korean Ophthalmol Soc 2003;44: ) Oh JW, Yun IH. Transpupillary thermotherapy in circumscribed choroidal hemangioma. J Korean Ophthalmol Soc 2003;44: ) Reichel E, Berrocal AM, Ip M, et al. Transpupillary thermotherapy of occult subfoveal choroidal neovascularization in patients with age-related macular degeneration. Ophthalmology 1999;106: ) Newsom RS, McAlister JC, Saeed M, McHugh JD. Transpupillary thermotherapy (TTT) for the treatment of choroidal neovascularization Br J Ophthalmol 2001;85: ) Algvere PV, Libert C, Seregard S. Transpupillary thermotherapy of occult CNV with no or minimally classic CNV in age-related 447

9 - 대한안과학회지 2009 년제 50 권제 3 호 - macular degeneration. Semin Ophthalmol 2001;16: ) Morimura Y, Okada AA, Hayashi A, et al. Histological effect and protein expression in subthreshold transpupillary thermotherapy in rabbit eyes. Arch Ophthalmol 2004;122: ) She H, Li X, Yu W. Subthreshold transpupillary thermotherapy of the retina and experimental choroidal neovascularization in a rat model. Graefes Arch Clin Exp Ophthalmol 2006;244: ) Welch AJ, Wissler EH, Priebe LA. Significance of blood flow in calculation of temperature in laser irradiated tissue. IEEE Trans Biomed Eng 1980;27: ) Welch AJ, Polhamus GD. Measurement and prediction of thermal injury in the retina of the rhesus monkey. IEEE Trans Biomed Eng 1984;31: ) Parver LM, Auker C, Carpenter DO. Choroidal blood flow as a heat dissipating mechanism in the macula. Am J Ophthalmol 1980; 89: ) Parver LM. Temperature modulating action of choroidal blood flow. Eye 1991;5: ) Mainster MA, White TJ, Tips JH, Wilson PW. Retinal- temperature increases produced by intense light sources. J Opt Soc Am 1970; 60: ) Vassiliadis A. Laser sources and ocular effects. In : Francis A, L esperance, JR, eds. Ophthalmic lasers, 3rd ed. St. Louis: The C.V. Mosby company, 1989; v. 1. chap ) Mainster MA. Decreasing retinal photocoagulation damage: principles and techniques. Semin Ophthalmol 1999;14: ) Desmettre T, Maurage CA, Mordon S. Heat shock protein hyperexpression on chorioretinal layers after transpupillary thermotherapy. Invest Ophthalmol Vis Sci 2001;42: ) Desmettre T, Maurage CA, Mordon S. Transpupillary thermotherapy (TTT) with short duration laser exposure induce heat shock protein (HSP) hyperexpression on choroidoretinal layers. Lasers Surg Med 2003;33: ) Mainster MA, Reichel E. Transpupillary thermotherapy for age-related macular degeneration: long-pulse photocoagulation, apoptosis, and heat shock proteins. Ophthalmic Surg Lasers 2000;31: ) Samali A, Orrenius S. Heat shock proteins: regulators of stress response and apoptosis. Cell Stress Chaperones 1998;3: ) Mainster MA. Wavelength selection in macular photocoagulation. Tissue optics, thermal effects, and laser systems. Ophthalmology 1986;93: ) Berger JW. Thermal modelling of micropulsed diode laser retinal photocoagulation. Lasers Surg Med 1997;20: ) Ming Y, Alqvere PV, Oderqren A, et al. Subthreshold transpupillary thermotherapy reduces experimental choroidal neovascularization in the mouse without collateral damage to the neural retina. Invest Ophthalmol Vis Sci 2004;45:

10 - 이주은외 : 역치하레이저광응고반의조직변화 - =ABSTRACT= Histopathological Changes by Low-Power-Long-Duration and High-Power-Short-Duration Subthreshold Laser Treatment in the Rabbit Retina Joo Eun Lee, MD, PhD 1, Kyeong Hwan Kim, MD 1, Seung Youn Jea, MD, PhD 2, Ji Eun Lee, MD, PhD 2, Jong Soo Lee, MD, PhD 2, Boo Sup Oum, MD, PhD 2 Department of Ophthalmology, Maryknoll Hospital 1, Pusan, Korea Department of Ophthalmology, School of Medicine, Pusan National University 2, Pusan, Korea Purpose: To compare histopathological and apoptotic changes of ophthalmoscopically similar subthreshold laser burns made by a low power-long duration (LD) and a high power-short duration (SD) subthreshold laser treatment. Methods: Ophthalmoscopically invisible subthreshold laser burns with a 3.0 mm spot size were made using an 810 nm diode laser on the rabbit retina. Lasers were applied for 60 seconds in the LD group, and 1 second in the SD group. Laser power was adjusted to achieve ophthalmoscopically invisible burns just below the threshold. The rabbits were sacrificed at 6, 12, 24, and 72 hours, 1, 2, and 4 weeks after laser treatment. The eyes were processed for light microscopic examination using hematoxylin and eosin (H&E), toluidine blue, and TdT-dUTP terminal nick-end labeling (TUNEL) staining. Eyes were also processed for electron microscopic examination. Results: The changes in the retina were different between the two groups. The LD group showed abundant TUNEL positive cells in all the retinal layers at 6 hours after laser treatment, and distinct histological changes in the outer nuclear layer. Conversely, in the SD group, apoptosis did not occur and histological alteration in the outer nuclear layer was minimal. Conclusions: Subthreshold laser treatment for 1 second reduced damage of the inner retinal layer and did not result in apoptosis in the neurosensory retina while maintaining a similar effect on the RPE and its adjacent region. J Korean Ophthalmol Soc 2009;50(3): Key Words: Apoptosis, CNV, Macular degeneration, Transpupillary thermotherapy Address reprint requests to Joo Eun Lee, MD, PhD Department of Ophthalmology, Maryknoll Hospital #12 Daecheong-dong 4 Jung-gu Busan , Korea Tel: , Fax: , jooeun2@korea.com 449

<283732372D3733312920B4D9C3CAC1A120BCD2C7C1C6AEC4DCC5C3C6AEB7BBC1EEC0C720B3EBBEC8C0C720BDC3B7C2BAB8C1A4BFA120B4EBC7D120C0AFBFEBBCBA20C6F2B0A1283035292E687770>

<283732372D3733312920B4D9C3CAC1A120BCD2C7C1C6AEC4DCC5C3C6AEB7BBC1EEC0C720B3EBBEC8C0C720BDC3B7C2BAB8C1A4BFA120B4EBC7D120C0AFBFEBBCBA20C6F2B0A1283035292E687770> 대한안과학회지 제 49 권 제 5 호 2008 J Korean Ophthalmol Soc 49(5):727-731, 2008 DOI : 10.3341/jkos.2008.49.5.727 다초점 소프트콘택트렌즈의 노안의 시력보정에 대한 유용성 평가 김현경 1 김효명 2 정성근 1 가톨릭대학교 의과대학 성모병원 안과학교실 1, 고려대학교 의과대학 안암병원 안과학교실