대한진단검사의학회지제 27 권제 6 호 2007 Korean J Lab Med 2007;27: DOI /kjlm 조사보고서 진단면역학 Human Leukocyte Antigen 검사신빙도조사결과 ( 년 )

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1 대한진단검사의학회지제 27 권제 6 호 2007 Korean J Lab Med 2007;27: DOI /kjlm 조사보고서 진단면역학 Human Leukocyte Antigen 검사신빙도조사결과 ( 년 ) 김명희 최성은 오흥범 울산대학교의과대학서울아산병원진단검사의학과 Human Leukocyte Antigen Typing Proficiency Surveys in Korea, Myeong-Hee Kim, M.D., Sung-Eun Choi, M.A., and Heung-Bum Oh, M.D. Department of Laboratory Medicine, Asan Medical Center and University of Ulsan College of Medicine, Seoul, Korea Background : To monitor the performance of histocompatibility testing laboratories, HLA proficiency survey in Korea has been conducted biannually since In this report, we summarized the results of the surveys performed in recent two years ( ). Methods : A total of four proficiency surveys were performed, in which laboratories participated. Each survey included three tests for HLA class I (serology and DNA) and class II (DNA) typing and six tests for HLA crossmatch. Results : The overall concordance of serologic typing was 98.9% (355/359) for HLA-A, 97.5% (350/ 359) for HLA-B, and 94.7% (337/356) for HLA-C. The antigens assigned correctly by less than 95% of the participating laboratories were A26 (93.8%), B38 (94.2%), Cw3/Cw10 (90.9%), Cw6 (94.4%), and Cw8 (74.3%). The overall concordance rates of DNA typing were 99.6% (533/535) for HLA-A, 99.8% (539/540) for HLA-B, and 100% (392/392) for HLA-C. Correct assignment of HLA-DRB1 and -DQB1 was reported by 99.2% ( %) and 96.7% ( %) for the generic level and 100% and 95.8% (75-100%) for the allelic level, respectively. On the average 3.8% (0-7.7%) of the total laboratories showed unacceptable results in the crossmatch tests. Conclusions : The rates of correct antigen identification and of unacceptable crossmatch were similar to those of previous surveys, which were considered satisfactory. The Korean proficiency survey program may have contributed to a high quality of HLA tests today and should be continued for further improvements of the tests tomorrow. (Korean J Lab Med 2007;27:442-50) Key Words : Proficiency survey, HLA typing, HLA crossmatch 서론 장기공여자및수혜자간의인간주조직적합성항원 (human major histocompatibility complex, human leukocyte antigen, 접수 : 2007년 9월 13일접수번호 : KJLM2070 수정본접수 : 2007년 10월 29일게재승인일 : 2007년 11월 3일교신저자 : 오흥범우 서울시송파구풍납2 동 울산대학교의과대학서울아산병원진단검사의학과전화 : , Fax: hboh@amc.seoul.kr * 본논문은국립암센터발전기금지원으로이루어졌음. HLA) 의일치는골수이식의성패와신장등고형장기이식의장기생존율에큰영향을미친다. 특히, 뇌사자장기기증이나조혈모세포은행을통한조혈모세포이식의경우에는서로다른기관에서 HLA 검사를시행하고이결과에따라공여자와환자를선정하므로기관간검사결과의호환성이중요하다. 따라서 HLA 관련검사의질관리와표준화가더욱필요하다. 이를위해선진국에서는 1970년대부터 HLA 검사의표준화를위한외부정도관리프로그램을운영하고있으며 [1, 2], 보험지급이나장기이식관련 HLA 검사실시자격을외부정도관리성적에따라제한함으로써이식을위해실시되는조직적합성검사의표준화를의무화하고있다. 국내에서는 1996년부터 HLA 외부정도관리프로그램을연 2회 442

2 HLA 검사신빙도조사결과 ( 년 ) 443 시행하고있으며, HLA 검사실설문조사와워크숍을병행함으로써국내 HLA 검사실의질향상및표준화에크게기여하고있다 [3-9]. 1996년 35개기관이신빙도조사에참가한이래로 2006년에는 60개기관이참여하고있다 [6]. 본연구는 2005년부터 2006 년까지 4회 (15차, 16차, 17차, 18차 ) 에걸쳐시행된국내 HLA 검사신빙도조사결과를분석하였다. HLA 항원검사 ( 혈청학적검사, DNA 검사 ), HLA 교차시험, panel reactive antibody (PRA) 검사등세가지검사분야에서신빙도조사를시행하였으나 PRA 검사는방법별참여기관수가적어평가에서제외하였다. 재료및방법 1. 검사항목과검체배포기존의 14차에걸친국내 HLA 검사신빙도조사에이어 15차 (2005년 4월 ), 16차 (2005년 11월 ), 17차 (2006년 4월 ), 18차 (2006 년 10월 ) 등 4회에걸쳐조사가이루어졌다. HLA 항원검사및 HLA 교차시험를위한검체는박등 [6] 이제시한방법에따라다음과같이제작배포하였다. HLA 항원검사검체는 HLA 고해상 Table 1. HLA proficiency surveys performed during and response rates of the surveys Trial date No. of laboratories (participants/reply) No. of laboratories (reply) HLA class I serology HLA class I DNA HLA class II DNA Crossmatch / / / / Table 2. HLA DNA typing kits used by the laboratories participating in the HLA proficiency survey* HLA tests No. of laboratories Methods Kits (No. of laboratories) HLA-A, B, C 52 SSOP reverse Murex INNO LiPA HLA-A,B,C (19) Dynal RELI HLA A,B,C (13) SSP Biotest HLA-A,B,C SSPtray Kit (3) Biotest HLA-AB/DR SSPtray Kit (2) Biotest HLA-A SSPtray Kit (1) Biosewoom HLA-AB/DR PCR/SSP Kit (2) One lambda Micro Generic HLA Class I DNA Typing (ABC) (1) One lambda Micro Generic HLA Class I & Class II DNA Typing (AB/DR) (1) SBT Biosewoom HLA-A,B,C PCR/SBT Kit (2) In house (1) Other (7) HLA-DR 56 SSOP reverse Murex INNO LiPA HLA-DRB1 (21) Dynal RELI HLA-DRB1 (14) Biotest ELPHA HLA-DRB1 LowRes (1) SSP Biotest HLA-DRB SSP Kit (3) Biotest HLA-AB/DR SSPtray Kit (1) Biosewoom HLA-AB/DR PCR/SSP Kit (3) One lambda Micro Generic HLA Class II DNA Typing (DR) (2) One lambda Micro Generic HLA Class I & Class II DNA Typing (AB/DR) (1) SBT Biosewoom HLA-DRB1 PCR/SBT Kit (2) In house (1) Other (7) HLA-DQ 9 SSOP reverse Murex INNO LiPA HLA-DQB (1) Dynal RELI HLA-DQB (1) SSP Biotest HLA-DQB SSP Kit (1) One lambda Micro Generic HLA Class II DNA Typing (DQ) (1) SBT Biosewoom HLA-DQB1 PCR/SBT Kit (1) In house (1) Other (2) RFLP In house (1) * Test methods reported in 18 ( ). Abbreviations: SSOP, sequence specific oligonucleotide probe; SSP, sequence specific primer; SBT, sequence-based typing; RFLP, restriction fragment length polymorphism.

3 444 김명희 최성은 오흥범 도검사를시행하여대립유전자형별을명확히알고있는 3명의기증자로부터 400 ml를채혈한후한튜브당전혈 3 ml씩을분주하여각기관으로배송하였다. HLA 교차시험및 PRA 검체는경산부혹은장기이식후체액성거부반응이있었던환자의혈액을취하여혈청을분리한후 (0.1% sodium azide 포함 ) 각기관에 1.5 ml씩발송하였다. HLA 교차시험은매회 6개를시행하도록하였다. 항혈청의선정을위하여소량의혈액을채혈한후 HLA 항체특이성을동정하고이어항원검사용세포와교차시험시행한후적절한반응을보이는지여부를판단하는과정을거쳤다. 검체는국내특급우편을이용하여실온에서발송후 24-48시간내에검사실에도착될수있도록하였다. 2. 결과보고검체발송후 6주내에결과회신을마감하였으며결과회신후 6주내에검사결과를평가하여작성한결과보고서를해당검사실에발송하였다. 결과보고서에는정답 (consensus) 과함께모든검사실의검사결과를무기명으로나열하였고각기관에서는기관고유번호로결과를알수있도록하였다. 결과 1. 참여기관및회신율 4회의신빙도조사에참여한기관수는 15차 59개, 16차 59개, 17 차 61개, 18차 60개이었다. 검체발송후대부분의기관 (90-100%) 에서발송당일오후, 또는다음날오전에검체를수령하였고분리한림프구의생존도는대부분의기관에서 90% 이상으로검사에적절한것으로나타났다. 검사결과는 17차에서 1개기관이누락된것을제외하고 4회에걸쳐모든기관이회신하였다 (Table 1). 2. 검사시약혈청학적항원검사를실시하는검사기관에서는 16차와 18차에서한기관씩을제외하고모두 One Lambda와 Biotest의 HLA- A, B, C typing tray를사용하고있었다. DNA 검사의경우에는검사시약이다양하였는데이를 Table 2에요약하였다. 대부분의기관에서상품화된키트를사용하여 DNA 검사를시행하고있었는데 18차조사의경우 INNO-LiPA 키트가가장많이사용되어 HLA class I은 19개, HLA-DRB1은 21개, HLA-DQB1은 1개기관에서이용되고있었다. 18차조사에서는 HLA class I, -DRB1, -DQB1에대해자가제조한시약을이용하여 sequence-based ty- Table 3. Laboratory consensus in serological identification of HLA-A, -B, and -C in four trials of proficiency survey Cell No. HLA-A (%) HLA-B (%) HLA-C (%) Consensus False positive Consensus False positive Consensus False positive 15 C05-1 A2 (97.2) A1 (2.8) B13 (100) Cw1 (100) A30 (100) B27 (100) Cw6 (94.4) Cw2 (2.8), Blank (2.8) C05-2 A26 (100) B13 (100) Cw1 (100) Blank (100) B61 (97.2) Blank (2.8) Cw3 (100) C05-3 A2 (100) B14/B64 (100) Cw7 (100) A30 (100) B38 (94.2) B63 (2.9), Blank (2.9) Cw8 (74.3) Blank (25.7) 16 C05-4 A2 (100) B35 (100) Cw3/Cw10 (100) A26 (100) B54 (100) Blank (100) C05-5 A2 (100) B27 (100) Cw1 (100) A26 (100) B54 (100) Cw3/Cw10 (90.9) Blank (9.1) C05-6 A11 (100) B8 (100) Cw7 (100) A26 (93.8) A10 (6.2) B39 (100) Blank (100) 17 C06-1 A24 (100) B51 (100) Cw1 (100) Blank (100) B59(100) Blank (100) C06-2 A2 (100) B39 (100) Cw4 (100) A24 (100) B62 (100) Cw7 (100) C06-3 A2 (100) B60 (100) Cw3 (100) Blank (100) B70/B71 (100) Cw7 (100) 18 C06-4 A2 (100) B51 (100) Cw4 (100) A11 (100) B62 (100) Blank (100) C06-5 A11 (100) B35 (100) Cw3 (100) A24 (100) B60 (100) Blank (100) C06-6 A2 (100) B13 (100) Cw4 (100) A11 (100) B60 (100) Blank (95.2) Cw6 (4.8) Total % (N) 98.9% (355/359) 97.5% (350/359) 94.7% (337/356)

4 HLA 검사신빙도조사결과 ( 년 ) 445 Table 4. HLA-A, -B, -C antigens showing a low consensus (<95%) in serological identification and comparison of typing kits used HLA antigen Cell No. Consensus % (No. of labs) A kit B kit C kit Total A26 C (23/25) 100 (7/7) 93.9 (30/32) B38 C (25/27) 100 (8/8) 94.2 (33/35) Cw3/Cw10 C (24/25) 85.7 (6/7) 0.0 (0/1) 90.9 (30/33) Cw6 C (25/27) 100 (9/9) 94.4 (34/36) Cw8 C (26/27) 0.0 (0/8) 74.3 (26/35) Table 5. Laboratory consensus in DNA typing of HLA-A, -B, and C in 4 trials of proficiency survey Trial No. Cell No. HLA-A (%, N) HLA-B (%, N) HLA-C (%, N) Consensus Consensus Consensus 15 C05-1 A2 (100, 39/39), A30 (97.4, 38/39)* B13 (100, 39/39), B27 (100, 39/39) Cw1 (100, 29/29), Cw6 (100, 29/29) C05-2 A26 (100, 40/40), Blank (100, 40/40) B13 (100, 39/39), B40/B61 (100, 39/39) Cw1 (100, 29/29), Cw3/Cw10 (100, 29/29) C05-3 A2 (100, 39/39), A30 (100, 39/39) B14/B64 (100, 41/41), B38 (100, 41/41) Cw7 (100, 29/29), Cw8 (100, 29/29) 16 C05-4 A2 (97.7, 42/43), A26 (100, 43/43) B35 (100, 43/43), B54 (100, 43/43) Cw3 (100, 31/31), Cw14 (100, 31/31) C05-5 A2 (100, 42/42), A26 (100, 42/42) B27 (100, 43/43), B54 (100, 43/43) Cw1 (100, 31/31), Cw3 (100, 31/31) C05-6 A11 (100, 42/42), A26 (100, 42/42) B8 (100, 43/43), B39 (100, 42/42) Cw7 (100, 31/31), Cw7/Blank (100, 27/27) 17 C06-1 A24 (100, 45/45), Blank/A24 (100, 45/45) B51 (100, 45/45), B59 (100, 45/45) Cw1 (100, 32/32), Cw14/Blank (100, 32/32) C06-2 A2 (100, 45/45), A24 (100, 45/45) B39 (100, 46/46), B15 (100, 46/46) Cw4 (100, 32/32), Cw7 (100, 32/32) C06-3 A2 (100, 45/45), Blank/A2 (100, 45/45) B40 (100, 46/46), B15 (100, 46/46) Cw3 (100, 32/32), Cw7 (100, 32/32) 18 C06-4 A2 (100, 52/52), A11 (100, 52/52) B51 (100, 52/52), B15 (98.1, 51/52) Cw4 (100, 39/39), Cw14/Blank (100, 39/39) C06-5 A11 (100, 51/51), A24 (100, 51/51) B35 (100, 51/51), B40 (100, 51/51) Cw3 (100, 38/38), Cw3/Blank (100, 38/38) C06-6 A2 (100, 52/52), A11 (100, 52/52) B13 (100, 52/52), B40 (100, 52/52) Cw4 (100, 39/39), Cw14/Blank (100, 39/39) Total% (No. of tests) 99.6% (533/535) 99.8% (539/540) 100% (392/392) *A3 was reported in 1 lab.; A blank was reported in 1 lab.; B78 was reported in 1 lab. ping을시행하는곳이 1개기관이있었다. 3. HLA class I 혈청학적검사결과 15차부터 18차조사까지총 12개의검체에대한 HLA-A, B, C 항원검사의정답률은 Table 3과같다. HLA-A의경우전체적인정답률은 98.9% 이었는데 15차조사에서 1개기관이 A2를 A1으로, 16차조사에서 2개기관이 A26을 A10으로보고하였다. HLA-B 의경우전체적인정답률은 97.5% 이였고 15차에서 B61을 B blank 로, B38을 B blank와 B63으로보고한기관이각각 1개기관씩있었다. HLA-C의경우전체적인정답률은 94.7% 였는데오답을보인경우는 15차에서 Cw6를 Cw2와 blank로보고한예가각각 2.8 %, Cw8을 blank로판정한예가 25.7% 였고, 16차에서 Cw3/Cw10 을 blank로판정한예가 9.1% 였으며, 18차에서 blank를 Cw6로보고한예가 4.8% 였다. 95% 이하의정답률을보인항원은 A26 (93.8%), B38 (94.2%), Cw3/Cw10 (90.9%), Cw6 (94.4%), 그리고 Cw8 (74.3%) 였다 (Table 4). 4. HLA class I DNA 검사결과 15차부터 18차조사까지총 12개의검체에대한 HLA class I DNA 검사의정답률은 Table 5와같다. HLA-A의경우전체적인정답률은 99.6% (533/535) 이었는데 15차조사에서 A30을 A3 로, 16차조사에서 A2를 A blank로보고한기관이각각 1개기관씩있었다. HLA-B의경우전체적인정답률은 99.8% (539/540) 이었는데 18차에서 B15을 B78로잘못보고한 1개기관이있었다. HLA-C는정답률이 100% (392/392) 이었다. 5. HLA-DRB1, -DQB1 DNA 검사결과 15차부터 18차까지총 12개검체에대한 HLA-DRB1, -DQB1 DNA 형별검사결과는 Table 6, 7과같다. HLA-DRB1 DNA 검사를실시한기관은 15차 56개, 16차 52개, 17차 55개, 18차 56개기관이었다. 저해상도수준에서의정답률은 99.2% ( %) 로매우높았으며, 고해상도대립유전자수준에서는 6-11개기관에서보고하였는데정답률이 100% 이었다. HLA-DQB1 DNA 검사를실시한기관은 15차조사에서 12개였고 16차 11개, 17차와 18차조사에서는각각 9개기관이참가하였다. 저해상도수준에서의정답률은 96.7% ( %) 였으며, 고해상도대립유전자수준에서는 4개기관에서보고하였는데정답률이 95.8% (75-100%) 이었다.

5 446 김명희 최성은 오흥범 Table 6. Laboratory consensus in identification of HLA-DRB1 alleles in 4 trials of proficiency survey Cell No. Generic or serologic equivalent typing HLA-DRB1 consensus (%, N) Allele typing 15 C05-1 DR1 (100, 56/56), DR7 (100, 56/56) *0101 (100, 6/6) *0701 (100, 6/6) C05-2 DR12 (100, 56/56), DR15 (100, 56/56) *1202 (100, 6/6) *1501 (100, 6/6) C05-3 DR4 (100, 56/56), DR15 (100, 56/56) *0404 (100, 6/6) *1502 (100, 6/6) 16 C05-4 DR9 (98.1, 51/52)*, DR14 (98.1, 51/52) *0901 (100, 7/7) *1401 (100, 7/7) C05-5 DR1 (100, 52/52), DR4 (98.1, 51/52) *0101 (100, 7/7) *0405 (100, 7/7) C05-6 DR3 (100, 52/52), DR4 (100, 52/52) *0301 (100, 8/8) *0405 (100, 7/7) 17 C06-1 DR4 (100, 55/55), Blank/DR4 (100, 55/55) *0404 (100, 9/9) *0405 (100, 9/9) C06-2 DR4 (100, 55/55), DR8 (100, 55/55) *0406 (100, 9/9) *0803 (100, 9/9) C06-3 DR3 (100, 55/55), DR9 (100, 55/55) *0301 (100, 9/9) *0901 (100, 9/9) 18 C06-4 DR4 (98.2, 55/56), DR11 (100, 56/56) *0406 (100, 12/12) *1101 (100, 11/11) C06-5 DR9 (98.2, 55/56), DR15 (100, 56/56) *0901 (100, 11/11) *1501 (100, 11/11) C06-6 DR7 (100, 56/56), DR12 (100, 56/56) *0701 (100, 11/11) *1202 (100, 11/11) Total% (No. of tests) 99.2% (652/657) 100% (101/101) *DR14 was reported in 1 lab.; DR6 was reported in 1 lab.; DR1 was reported in 1 lab.; DR99 was reported in 1 lab.; DR7 was reported in 1 lab. Table 7. Laboratory consensus in identification of HLA-DQB1 antigens in 4 trials of proficiency survey Cell No. Generic or serologic equivalent typing HLA-DQB1 consensus (%, N) Allele typing 15 C05-1 DQ2 (100, 12/12), DQ5 (100, 12/12) *0202 (75.0, 3/4)* *0501 (100, 4/4) C05-2 DQ3/DQ7 (100, 12/12), DQ6 (100, 12/12) *0301 (100, 4/4) *0602 (100, 4/4) C05-3 DQ4 (91.7, 11/12), DQ5 (100, 12/12) *0402 (100, 4/4) *0501 (100, 4/4) 16 C05-4 DQ3 (100, 11/11), DQ5 (100, 11/11) *0303 (100, 4/4) *0502 (100, 4/4) C05-5 DQ4 (100, 11/11), DQ5 (100, 11/11) *0401 (100, 4/4) *0501 (100, 4/4) C05-6 DQ2 (100, 11/11), DQ3 (100, 11/11) *0201 (100, 3/3) *0303 (100, 4/4) 17 C06-1 DQ4 (100, 9/9), DQ3 (100, 9/9) *0401 (100, 4/4) *0302 (100, 4/4) C06-2 DQ6 (88.9, 8/9), DQ3 (100, 9/9) *0601 (100, 4/4) *0302 (100, 4/4) C06-3 DQ2 (100, 9/9), DQ3 (88.9, 8/9) *0201 (100, 4/4) *0303 (100, 4/4) 18 C06-4 DQ3 (100, 9/9), DQ3 (100, 9/9) *0301 (75.0, 3/4) *0302 (100, 4/4) C06-5 DQ6 (100, 9/9), DQ3 (100, 8/9) *0602 (100, 4/4) *0303 (100, 4/4) C06-6 DQ2 (100, 9/9), DQ3 (100, 9/9) *0202 (100, 4/4) *0301 (100, 4/4) Total% (No. of tests) 96.7% (119/123) 95.8% (46/48) *DQ*0201 was reported in 1 lab.; DQ Blank was reported in 1 lab.; DQ99 was reported in 1 lab.; DQ99 was reported in 1 lab.; DQ*0303 was reported in 1 lab.; DQ99 was reported in 1 lab. 6. HLA 교차시험결과총 24건의교차시험중각조사별참여검사실의검사방법 (T- NIH/T-Warm, T-Long, T-AHG) 에따른양성 / 음성보고율을 Table 8에정리하였다. 각각의혈청 / 세포교차시험에대해 unacceptable로평가된기관은 0-7.7% ( 평균 3.8%) 의분포를보였다. 10차신빙도조사에서부터적용된다음의평가제외기준에해당하는검사는평가에서제외하였다 [7]. 네가지검사방법에서 90% 이상의 consensus를보이지않는경우에평가에서제외하였고, T- NIH/T-Warm, T-Long 방법의음성결과가 90% 이상의 consensus를보이지만 T-AHG 또는 T-Flow 방법에서양성이 10% 이상이면 T-NIH/T-Warm, T-Long 방법의양성결과는평가에서제외하였다. 또한, T-NIH/T-Warm, T-Long 방법의양성결과가 80-90% 이상의 consensus를보이면서 T-AHG 또는 T- Flow 방법에서 90% 이상의양성 consensus를보이면 T-NIH/ T-Warm, T-Long 방법의음성결과는평가제외하였다. 교차시험 24건중 9개교차시험 (C05-1 X S05-1, C05-1 X S05-2, C05-3 X S05-1, C05-6 X S05-3, C06-1 X S06-2, C06-4 X S06-3, C06-4 X S06-4, C06-5 X S06-4, C06-6 X S06-4) 에서 T-NIH/T-Warm, T-Long, T-AHG가 90% 이상의 consensus 를보이지않아평가제외되었고, T-AHG 검사에서는 90% 이상의 consensus를보였지만 T-NIH/T-Warm 검사와 T-Long 검사에서는 90% 이상의 consensus를보이지않아 T-NIH/T-Warm 검사와 T-Long 검사에서평가제외된경우가 3건의교차시험 (C05-5 X S05-3, C05-5 X S05-4, C05-6 X S05-4) 에서있었다. T- NIH/T-Warm, T-Long 방법의양성결과가 80-90% 의 consensus를보이면서 T-AHG 또는 T-Flow 방법에서 90% 이상의양성 consensus를보이면 T-NIH/T-Warm, T-Long의양성결과

6 HLA 검사신빙도조사결과 ( 년 ) 447 Table 8. Laboratory consensus in HLA crossmatch results by cytotoxicity tests in 4 trials of proficiency survey Cell X serum Identification of incompatible crossmatch % (N) T-NIH or T-Warm T-Long T-AHG Positive Negative Positive Negative Positive Negative Unacceptable % (N of tests) 15 C05-1 X S (13/44) 70.5 (31/44) 35.3 (6/17) 64.7 (11/17) 77.1 (27/35) 22.9 (8/35) NA C05-1 X S (8/44) 81.8 (36/44) 29.4 (5/17) 70.6 (12/17) 60 (21/35) 40 (14/35) NA C05-2 X S (2/44) 95.5 (42/44) 5.9 (1/17) 94.1 (16/17) 5.7 (2/35) 94.3 (33/35) 5.2 (5/96) C05-2 X S (37/44) 15.9 (7/44) 88.2 (15/17) 11.8 (2/17) 94.3 (33/35) 5.7 (2/35) 5.7 (2/35) C05-3 X S (19/43) 55.8 (24/43) 62.5 (10/16) 37.5 (6/16) 85.7 (30/35) 14.3 (5/35) NA C05-3 X S (0/43) 100 (43/43) 0 (0/16) 100 (16/16) 0 (0/35) 100 (35/35) 0 (0/94) 16 C05-4 X S (32/39) 17.9 (7/39) 85.7 (12/14) 14.3 (2/14) 97.2 (35/36) 2.8 (1/36) 2.8 (1/36) C05-4 X S (34/40) 15 (6/40) 100 (14/14) 0 (0/14) 100 (36/36) 0 (0/36) 0 (0/50) C05-5 X S (25/41) 39 (16/41) 80 (12/15) 20 (3/15) 97.2 (35/36) 2.8 (1/36) 2.8 (1/36) C05-5 X S (24/41) 41.5 (17/41) 80 (12/15) 20 (3/15) 97.2 (35/36) 2.8 (1/36) 2.8 (1/36) C05-6 X S (5/42) 88.1 (37/42) 13.3 (2/15) 86.7 (13/15) 25 (9/36) 75 (27/36) NA C05-6 X S (21/42) 50 (21/42) 66.7 (10/15) 33.3 (5/15) 97.2 (35/36) 2.8 (1/36) 2.8 (1/36) 17 C06-1 X S (33/40) 17.5 (7/40) 93.3 (14/15) 6.7 (1/15) 91.9 (34/37) 8.1 (3/37) 7.7 (4/52) C06-1 X S (32/40) 20 (8/40) 20 (3/15) 80 (12/15) 29.7 (11/37) 70.3 (26/37) NA C06-2 X S (33/40) 17.5 (7/40) 80 (12/15) 20 (3/15) 94.6 (35/37) 5.4 (2/37) 5.4 (2/37) C06-2 X S (35/40) 12.5 (5/40) 86.7 (13/15) 13.3 (2/15) 100 (37/37) 0 (0/37) 0 (0/37) C06-3 X S (0/40) 100 (40/40) 0 (0/15) 100 (15/15) 5.4 (2/37) 94.6 (35/37) 2.2 (2/92) C06-3 X S (37/40) 7.5 (3/40) 93.3 (14/15) 6.7 (1/15) 100 (37/37) 0 (0/37) 4.3 (4/92) 18 C06-4 X S (22/44) 50 (22/44) 46.7 (7/15) 53.3 (8/15) 80 (32/40) 20 (8/40) NA C06-4 X S (18/44) 59.1 (26/44) 33.3 (5/15) 66.7 (10/15) 62.5 (25/40) 37.5 (15/40) NA C06-5 X S (43/44) 2.3 (1/44) 93.3 (14/15) 6.7 (1/15) 100 (40/40) 0 (0/40) 2 (2/99) C06-5 X S (15/44) 65.9 (29/44) 26.7 (4/15) 73.3 (11/15) 52.5 (21/40) 47.5 (19/40) NA C06-6 X S (39/44) 11.4 (5/44) 93.3 (14/15) 6.7 (1/15) 100 (40/40) 0 (0/40) 1.8 (1/55) C06-6 X S (18/44) 59.1 (26/44) 40 (6/15) 60 (9/15) 72.5 (29/40) 27.5 (11/40) NA Abbreviation: NA, not applicable. 는 good으로평가하였고음성결과는평가에서제외하였는데이런경우가 7개교차시험 (C05-2 X S05-2, C05-4 X S05-3, C05-4 X S05-4, C06-1 X S06-1, C06-2 X S06-1, C06-2 X S06-2, C06-6 X S06-3) 에서보였다. 이들평가에서제외된항목중 C05-6 X S05-3과 C06-1 X S06-2를제외한나머지검사결과에서 T-/ T-Warm과 T-Long 검사의평균 86.3% ( %) 에서 1:4 이하의낮은역가를보였다. 고찰본연구에포함된총 4회의신빙도조사에 59-61개검사기관이참가하였다. HLA class I 혈청학적항원검사에대한전체적인정답률은 HLA-A 항원 98.9%, HLA-B 항원 97.5%, HLA-C 항원 94.7% 로지난 의 2년간의신빙도조사와비슷한결과를보였다 [8]. 16차조사에서 HLA-A 항원검사에서 A26을 A10으로보고한기관이 1개기관있었다. HLA-B 항원검사는 15 차조사에서 3개기관이오답을보고하였는데, HLA-B61을 B blank로, HLA-B38을 B63과 B blank로각각보고하였다. HLA- C의경우에는 HLA-A와 HLA-B에비하여낮은정답률을보였다. HLA-Cw의경우는세포표면의표현정도가 HLA-A, B에 비해 10% 이하로매우낮고적절한항혈청을구하기어렵기때문에형별판정이어려운것으로알려져있다 [10, 11] 년사이의 CAP survey 결과를보면 HLA-C 형별판정이대부분 90% 이하로낮은정답률을보이는것을알수있다 [12]. 반면, 국내신빙도조사에서는 HLA-C 형별판정의정답률이 90% 이상을보이고있으므로매우양호한성적이라고할수있다. 총 4회의신빙도조사에서총 12개의세포에서 A항원 5종, B항원 14종, C항원 6종이평가되었는데 HLA-A 항원 3종 (A11, A24, A30), HLA-B항원 12종 (B8, Bl3, B14/B64, B27, B35, B39, B51, B54, B59, B60, B62 B70/71), HLA-C 항원 3종 (Cw1, Cw4, Cw 7) 에대해서 100% 의정답률을보였다 (Table 9). Cw8은 74.4% 의매우낮은정답률을보였는데, 오답을낸기관들에서는 blank 로보고하였다. 반면, 동일검체에대한 DNA 검사에서는 100% (29/29) 의정답률을보였다. Cw8의경우는이전의신빙도조사결과에서도상품 tray 에따라검사결과에상당한차이를보인다는보고가있었는데 [6], 이번조사에서도상품 tray 의항혈청의반응도가약했던것이주요원인으로생각된다. Cw6의경우는지난 2004년의신빙도조사에서 77.1% 로매우낮은정답률을보였었는데, 2005년에는 94.4% 로정답률이향상된것을확인할수있었다. 2004년도에 Cw6에서오답을보낸모든검사실에서같은회사의제품을사용하였었는데, 15차신빙도조사에서오답을보낸검사실은

7 448 김명희 최성은 오흥범 Table 9. Laboratory consensus in identification of various HLA-A, -B and -C antigens on 12 whole blood specimens Consensus % Consensus % HLA antigen No. of tests HLA antigen No. of tests Mean Range Mean Range A B A B A B14/B A B A B B B B Cw B Cw B Cw B Cw B Cw B Cw B70/B Bw Bw 년도와동일검사실은아니었으나사용하는 tray는동일회사의제품이었다. 따라서항혈청반응도가개선되었거나혹은외부정도관리를통해검사의신빙도가향상된것이아닌가사료되었다. HLA DNA 검사는 class I의경우참여기관이 2004년 41개에서 2006년현재 52개로늘어나많은기관에서 DNA 검사법을시행하고있음을알수있었고, 본연구에포함된 4회의신빙도조사에서 % 의정답률로매우우수한성적을보였다. 16차조사부터는 DNA 분석의경우 generic type과 serologic equivalent를구분하여입력하도록하여별도로평가를시행하였는데, 각기관별로한개의대립유전자형이나오는경우같은대립유전자를두번표기하는경우와한대립유전자를적고두번째대립유전자는 blank로표시하는경우가있었다. 예를들면 A2 한개의대립유전자가나온경우, A2, A2로표기한기관이 52기관중 22기관 (42.3 %) 이었고, 나머지 30기관 (57.7%) 에서는 A2, Blank로표기하였다. 따라서, 이에대하여표기방식을통일해야할필요성이있는데, CAP survey에서와같이한가지대립유전자만동정되는경우두번째대립유전자는 blank로표기하는것이바람직하다고생각된다. HLA-DRB1 검사는신빙도조사기간 2년동안 55-57개의기관에서실시하고있었으며이중 6-11기관에서고해상도검사를실시하고있었다. 고해상도검사의경우 15차신빙도조사당시 6 개기관에서시행하고있었는데, 16차에서는 7개, 17차에서는 9개, 18차에서는 11개기관으로증가하는추세를보였다. 저해상도또는혈청학적수준에서정답률은 99.2% 였고, 고해상도검사를시행한기관에서는모두정확한답을제시하였다. HLA-DQB1의경우에는저해상도및고해상도수준에서각각 96.7%, 95.8% 로 2004 년에보고된 99.2%, 98.1% 보다낮은정답률을보였다. 고해상도검사에서는 15차와 18차에서각각한기관에서오답을제시하였는데, HLA-DQB1*0202를 HLA-DQB1*0201로, HLA-DQB1* 0301을 HLA-DQB1*0303으로각각보고하였다. 이들두기관중한기관에서는자가제조시약을사용하였고한기관은구체적인정보를제공하지않아시약을확인할수없었다. 이들기관에서는널리사용되지않는시약을이용하여검사하므로사용하는시약에대한평가가이루어져야할것이다. HLA 교차시험은장기이식시초급성거부반응을예방하기위한검사로신빙도조사에있어서가장중요한부분이라고할수있다. HLA 교차시험은항온시간, 세포세척회수, 보체의종류, 항글로불린제제의사용여부등에따라검사결과가달라질수있기때문에검사실간의표준화가힘들고신빙도조사에서양성기준을정하기가어렵다. 국내신빙도조사에서는박등 [6] 에의해 5차조사부터 T-NIH/T-Warm, Amos washing, T-long, T-AHG 4가지군으로나누어평가하기시작하였는데본연구에포함된 2 년간의조사에서는 T-NIH/T-Warm, T-long, T-AHG의직접세포독성법과유세포분석법으로나누어평가하였다. 본연구에포함된 4회의신빙도조사에서 T-NIH/T-Warm, T- Long, T-AHG 3가지단계결과의 43% (62/144) 가앞서기술한기준에따라평가에서제외되었다. T-NIH/T-Warm, T-Long, T-AHG 모두에서 90% 이상의 consensus를보이지않아평가에서제외된 9개교차시험중 7건 (C05-1 X S05-1, C05-1 X S05-2, C05-3 X S05-1, C06-4 X S06-3, C06-4 X S06-4, C06-5 X S06-4, C06-6 X S06-4) 은양성으로판정해야하나 T-NIH/T- Warm, T-Long 검사대부분에서 50% 이상의기관이음성으로보고하였고, 양성으로답한기관에서도대부분 1:1-1:4의낮은역가를보였다. 그러나 T-AHG 검사에서는음성으로답한기관이 T-NIH/T-Warm, T-Long 검사에서음성으로답한기관의절반이하로감소하고양성결과의역가도높아짐을볼수있었다. 또한 3개의교차시험에서 T-AHG 검사는 90% 이상의 consensus를보였지만 T-NIH/T-Warm와 T-Long 검사는 90% 이상의 con-

8 HLA 검사신빙도조사결과 ( 년 ) 449 sensus를보이지않았고, 7개교차시험에서는 T-NIH/T-Warm, T-Long 검사가 80-90% 의양성 consensus를보이면서 T-AHG 와 T-Flow 검사는 90% 이상의양성 consensus를보였다. 이들결과들을볼때낮은역가의양성검체에서는덜예민한방법으로검사할경우위음성을보이는경우가많으므로평가에서제외되는경우가많았다. 또한교차시험에서위음성을보일경우에는이식시급성거부반응을일으킬수있으므로 [13-16] 모든검사실에서는반드시예민한방법을동시에시행해야함을보여주었다. 세가지 phase 모두에서 90% consensus를이루지못한교차시험중 C05-6 X S05-3과 C06-1 X S06-2의경우는음성결과를보일것으로예상하였으나 90% consensus에미치지못하였는데특히 C05-6 X S05-3의경우는 75-88% 의기관에서음성으로답을보내왔고양성으로보고한기관도 2-9기관으로소수였으며대부분낮은양성역가를보였다. 교차시험의결과는장기이식시장기배분및이식거부반응과관련이높기때문에검사방법의표준화가이루어져야하며 [17], 따라서유사방법을사용하는타기관의결과는반드시면밀히검토하여검사실의질향상을위한기초자료로활용하여야한다. 그런데국내에서는 HLA 교차시험참여기관이 45기관가량이므로 5기관이상에서다른결과를보고할경우 평가제외 로판정되고있어해당검사결과는자칫무시될수있는문제점을안고있다. 평가제외 의경우는많은경우항체역가가낮은경우이므로신빙도조사결과의전체적인경향을자세히분석하는것이필요하다. 예를들어 70-80% 기관이양성을보고하는혈청들에서해당기관이항상음성을보고했다면검사가덜예민하다고판단할수있을것이다. 그런데어떠한경우에검사의질관리를적극적으로개선할필요가있는지에대한가이드라인은없는실정이다. 따라서평가기준을개정하여신빙도조사가검사실질관리에적극적으로활용될수있도록하는방안도고려해볼필요가있을것이다. 예를들어 80% 이상의 consensus가있는경우에는 good 으로처리하고나머지기관에대해서는 분석자료참조 라는별도의평가기준을추가하는방안등이다. 이를위해서는전체참여기관을대상으로설문조사등의방법을통한의견수렴과정이필요할것이다. 결론적으로지난 2년간국내 HLA 검사신빙도조사결과를종합해볼때대부분의기관이매우높은신빙도수준을유지하고있으며, 더높은수준의신빙도를유지하기위해서는지속적인연구를통한신빙도조사프로그램의개선과운영이필요하다고생각된다. 요약배경 : 국내에서는 1996년처음 HLA 검사신빙도조사가시작되어현재까지년 2회실시되고있다. 본연구에서는최근 2년간의국내 HLA 검사신빙도조사결과를종합보고하고자한다. 방법 : 국내 59-61개 HLA 검사실을대상으로 4회에걸쳐신빙도조사를실시하였다. 각신빙도조사시검사항목은 HLA class Ⅰ 혈청학적검사및 DNA 검사 3건, class Ⅱ DNA 검사 3건, HLA 교차시험검사 6건이었다. 결과 : 혈청학적검사의정답률은 HLA-A 98.9% (355/359), HLA-B 97.5% (350/359), HLA-C 94.7% (337/356) 이었다. 95% 이하의정답률을보인항원은 A26 (93.9%), B38 (94.2%), Cw3/Cw10 (90.9%), Cw6 (94.4%), 그리고 Cw8 (74.3%) 이었다. DNA 검사의정답률은 HLA-A 99.6% (533/535), HLA-B 99.8% (239/540), HLA-C 100% (392/392) 였다. HLA-DRB1 DNA검사의저해상도수준정답률은 99.2% ( %) 이었고, 고해상도대립유전자정답률은 100% 였다. HLA-DQB1 DNA 검사는저해상도 96.7% ( %), 고해상도 95.8% (75-100%) 의정답률을보였다. 교차시험에서 unacceptable로평가된기관은 0-7.7% ( 평균 3.8%) 의분포를보였다. 결론 : 항원검사의정답률과교차시험의 unacceptable 비율은지난신빙도조사와유사한수준으로만족할만한신빙도를보여주었다. 신빙도조사프로그램이국내 HLA 검사신빙도향상에일부기여하였으며높은수준의신빙도를유지하기위해신빙도조사프로그램의지속적인운영과개선이필요하다. 참고문헌 1. Appendix one; proficiency testing programs. In: ASHI laboratory manual. 2nd ed. American Society for Histocompatibility and Immunogenetics 1990: Shroyer TW. Proficiency testing. In: Nikaein A, ed. ASHI laboratory manual. 3rd ed. American Society for Histocompativility and Immunogenetics 1996:VI.8.1-VI Park MH. A questionnaire survey of HLA laboratories in Korea (1993). J Korean Soc Transplant 1993;7: ( 박명희. 전국 HLA 검사실현황설문조사 (1993). 대한이식학회지 1993;7:245-8.) 4. Park MH and Yang YS. A questionnaire survey of HLA laboratories in Korea (1995). Korean J Clin Pathol 1996;16: ( 박명희및양윤선. 전국 HLA 검사실현황설문조사 (1995). 대한임상병리학회지 1996;16: ) 5. Park MH and Whang DH. A questionnaire survey of HLA laboratories in Korea (1997). Korean J Clin Pathol 1998;18: ( 박명희및황동희. 전국 HLA 검사실현황설문조사 (1997). 대한임상병리학회지 1998;18:650-9.) 6. Park MH, Whang DH, Kim BC. A two-year study on the HLA typing proficiency survey in Korea, Korean J Clin Pathol 1999; 19: ( 박명희, 황동희, 김병철. HLA 검사신빙도조사결과 ( 년 ). 대한임상병리학회지 1999;19: ) 7. Park MH, Kim BC, Han BY. Results of the HLA typing proficiency survey in Korea, Korean J Lab Med 2005;25: ( 박명희, 김병철, 한복연. HLA 검사신빙도조사결과 ( 년). 대한진

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