대한임상병리학회지 : 제 19 권제 5 호 1999 Korean J Clin Pathol 1999; 19: 임상화학 혈장내호모시스틴측정을위한고속액체크로마토그래피와형광편광면역측정법의비교평가 강문수 최종원 남정현 이종욱 이효원 이철훈 김진주 배수환 인하대학교의과

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유준 영
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1 대한임상병리학회지 : 제 19 권제 5 호 1999 Korean J Clin Pathol 1999; 19: 임상화학 혈장내호모시스틴측정을위한고속액체크로마토그래피와형광편광면역측정법의비교평가 강문수 최종원 남정현 이종욱 이효원 이철훈 김진주 배수환 인하대학교의과대학임상병리과학교실 Comparison of High Performance Liquid Chromatography and Fluorescence Polarization Immunoassay for Determination of Total Homocysteine in Human Plasma Moon Soo Kang, M.D., Jong Weon Choi, M.D., Chung Hyun Nahm, M.D., Jong Wook Lee, M.D., Hyo Won Lee, M.D., Chul Hoon Lee, M.T., Jin Ju Kim, M.D., and Soo Hwan Pai, M.D. Department of Clinical Pathology, Inha University College of Medicine, Inchon, Korea Background : It was purposed to estimate correlation between fluorescence polarization immunoassay (FPIA) and high performance liquid chromatography (HPLC), and precision of individual methods. It was also objected to describe distribution of plasma total homocysteine in Korean adults. Methods : The subjects were 100 adults admitted to Inha University Hospital during the month of October, The total plasma homocysteine concentration was measured by FPIA (IMx analyzer, Abbott Laboratories, IL, USA) and by HPLC (ACCLAIM Biogenic Amines Testing System, Bio- Rad Laboratories, CA, USA) using Bio-Rad Homocysteine. Results : Plasma homocysteine levels (mean±sd) from Korean healthy adults by FPIA and HPLC were 9.75±3.80 mol/l, 7.72±3.36 mol/l, respectively. Plasma homocysteine levels according to sex by FPIA were mol/l for male, 7.71 mol/l for female, and those by HPLC were 9.47 mol/l for male, 5.98 mol/l for female, respectively. Intra-assay coefficient variations (CVs) of low, medium, and high concentration by FPIA are 1.83%, 0.47%, and 1.66%, and those by HPLC are 5.53%, 5.37%, and 4.56%, respectively. Inter-assay CVs of low, medium, and high concentration by FPIA are 2.28%, 1.44%, and 1.29%, and by HPLC are 7.23%, 5.54%, and 4.95%, respectively. Conclusions : Plasma homocysteine levels from male were significantly higher than female in Korean. Plasma homocysteine levels were increased according to increment of age. FPIA was more convenient, automatic, rapid, and reproducible than HPLC and also excellently correlated with HPLC. It is concluded that FPIA will potentially benefit for quantifying homocysteine in clinical laboratories. (Korean J Clin Pathol 1999; 19: 510-5) Key words : Homocysteine, High performanc liquid chromatography (HPLC), Fluorescence polarization immunoassay (FPIA) 접수 : 1999년 5월 26일접수번호 : KJCP1297 수정본접수 : 1999년 8월 5일교신저자 : 배수환우 인천광역시중구신흥동 3가 인하대학교의과대학임상병리과학교실전화 : , Fax: * 본연구는 1998년도인하대학교교내연구비지원에의하여이루어졌음. 서론호모시스틴 (homocysteine) 은유황기를가진아미노산으로메티오닌의체내대사과정에서발생되는중간대사산물로생산되었다가피리독살-5-인산이나시스타티온베타합성효소에의해다시메티오닌으로전환된다. 호모시스틴의임상적의의는 1969년 510

2 혈장호모시스틴측정방법의비교평가 511 McCully[1] 에의해처음으로혈장내농도상승이혈관질환과연관성이있다고알려졌으며이후에도최근에많은의학자들 [2-4] 에의하여혈중호모시스틴의상승은흡연이나콜레스테롤과마찬가지로심혈관질환을포함한폐색성혈관질환의위험인자로인식되고있다. 이를검사함으로써엽산이나코발라민결핍으로인하여유발되는과호모시스틴혈증또는호모시스틴요증을일으키는유전성대사질환을진단하고추적하는데유용하다고알려져있다. 호모시스틴대사에필요한비타민조요소 ( 엽산, 비타민 B12와비타민 B6) 의영양결핍이과호모시스틴혈증을촉진시킬수도있다. 필수조요소인비타민 B12와 cosubstrate인엽산의영양결핍환자들에서심하게상승된호모시스틴농도가관찰되며정상인들에서는혈청비타민 B12, 엽산, 비타민 B6 농도와혈장호모시스틴농도사이에역상관성이관찰되었다 [5]. 또한호모시스틴대사가여러질환과약제에의해서도영향을받게되는데크레아티닌상승과함께만성신부전시에두드러지게상승하며, 흔히정상치의 4 배까지도보고되고있으며 [6, 7], 갑상선기능저하증과도연관이있는것으로알려져있다 [4]. 또한과호모시스틴혈증이악성빈혈환자에서발견되므로, 이질환의진단에도움이된다고하며유방암, 난소암, 췌장암을포함한여러종류의암과연관성이있고, 특히급성임파구성백혈병의경우혈장호모시스틴이두드러지게상승되었다가화학요법치료후극적으로농도가감소한다 [2]. 호모시스틴에관한임상연구들의대다수는호모시스테인, 호모시스테인티오락톤, 유리호모시스테인, 단백질에결합된호모시스테인을포함한혼합된디설피드와호모시스테인을포괄하는혈장내총호모시스틴의측정이다 [8]. 단백질에결합된 ( 즉, disulfide-linked) 호모시스틴이총호모시스틴의 70-80% 이다. 측정법에는방사선효소측정법 (1985)[9], 가스크로마토그래피-질량분광법 (1987)[10], 형광검출법에의한 HPLC (1989)[11-12], 전기화학검출법에의한 HPLC (1989)[13-16], 자동화된이온교환크로마토그래피 (1989)[12], HPLC & thiol-specific post column derivatization (1993)[17-19] 등이있으며최근에형광편광면역측정법 (fluorescence polarization immunoassay; FPIA) 이개발되었다. Alfthan 등 [20] 에의하면각나라마다혈중호모시스틴의농도가유의한차이를보이며이는각나라의심혈관계사망률과유의한상관성이있다고보고하였다. 즉, 핀란드와북아일랜드에서는혈장평균호모시스틴농도와심혈관계질환으로인한사망률이가장높았으며, 스페인, 프랑스, 일본등은두가지지수가함께낮았다. 본연구에서는현재혈장호모시스틴측정법중표준방법으로널리사용되는 HPLC법중검체전처리과정을간소화한 Bio- Rad Homocysteine 키트와최근에국내에도입된 FPIA법인 IMx homocysteine assay (IMx, Abbott Laboratories, IL, USA) 키트에대하여각각의정밀도와유용성및두방법간의상관성을비교하고한국성인의혈중호모시스틴의분포를조사하여심근경색증을포함한폐색성혈관질환과여러질환의예방과치료에응용될수있는지침을마련하고자하였다. 대상및방법 1. 대상 1998년 10월에인하대학교병원건강증진센터에내원한성인중에서무작위로선택된 100명을대상으로하였다. 남자 50명, 여자 50명이었으며나이는 30-68세의범위로평균 45.6세이었다. 이중 30세에서 39세는 36명으로남녀각각 17명과 19명이었으며, 40세에서 49세는 26명으로남녀각각 14명과 12명이었으며, 50세이상은 38명으로남녀각각 19명과 19명이었다. 2. 방법 1) FPIA법을이용한혈장호모시스틴의측정검체채취및보관은공복상태에서 K3 EDTA관 (Becton Dickinson VACUTAINER systems, NJ, USA) 에채혈하였고채혈후즉시 4 에서 1,000 g로 10분간원심분리하였다. 혈장은바로측정하지못할때는 -80 에냉동보관하였다. IMx Analyzer를사용한분석은 IMx Homocysteine assay (Abbott Laboratories, IL, USA) 를사용하였다. 이를간략히기술하면다음과같다. 6개의보정물질 (calibrator) 을중복되게사용하여반응 well상에서보정곡선 (calibration curve) 을만들기위해시료컵에넣으면자동화된분석기가다음의과정으로연속적인검사를시행하였다. 보정물질 25 L, 아데노신과디티오트레이톨 (dithiothreitol; DTT) 의혼합용액 25 L, S-adenosyl-L-homocysteine hydrolase 60 L, line 완충액 70 L가반응 well상에서혼합되어지고이혼합물들은 34 에서 30분간배양시켰다. 이혼합물 23 L과쥐단일클론항체용액 65 L을반응큐벳에옮긴후 line 완충액 1 ml로희석하였다. 10분간배양된후 background reading이이루어지며, 마이크로프로세서가편광을계산하고 background에대하여수정한값을계산한후 4가지지표산정곡선공식 (4-parameter logistic curve formula) 를사용하여 6개의점들로부터보정곡선을만들어내며, 이마이크로프로세서에저장된곡선을이용하여검체들의호모시스틴농도를계산하였다. 2) HPLC를이용한혈장호모시스틴의측정검체채취및보관은 FPIA법과동일하게시행하였으며검체처리는환자의혈장, 혈청보정물질, 대조물질각각 50 L에내부표준물질 100 L, 환원물질인 trialkylphosphine 50 L, 유도화물질인 4-(aminosulfonyl)-7-fluorobenzo-2-oxa-1, 3- diazole (ABD-F) 100 L를첨가한용액을 1.5 ml관에넣은후보텍스교반기로 3초간혼합하였다. 50 항온수조에서 5분간배양후 4 냉장고에서 5분동안냉장한후침전물질인삼염화아세트산 100 L를첨가한다음보텍스교반기 (vortex mixer) 로 3초간혼합하였다. 10,000 g에서 5분간원심분리한후

3 512 강문수 최종원 남정현외 5 인 상청액을 1.5 ml autosampler tube에옮겨분석에이용하였다. HPLC 시스템은 Model ACCLAIM Biogenic Amines Testing System (Model 1340c electrochemical detector, solvent delivery system, system interface, Bio-Rad Laboratories, CA, USA), 20 L sample loop를부착한 model AS-100T automatic sampling system (Bio-Rad Laboratories, CA, USA) 과역칼럼 ( 역상, 70 mm 3.2 mm) 을장착하였다. 형광검출기의적절한파장을선택하기위하여분광형광측정기는 Model Linear FLUOR LC304 (Linear Instruments Corporation, Nevada, USA) 를사용하였다. HPLC 시스템운용은 IBM 호환컴퓨터와마이크로소프트사의도스환경하에서 Chrom-Line, Clinical HPLC Software, version 3.20a (Bio-Rad Laboratories, CA, USA) 을사용하였는데, 시스템환경조절, 검체의운반 (loading) 및 isocratic system으로검체의분사 (injection), 형광검출, 자료분석및결과보고등전과정을자동으로수행하도록프로그래밍하였다. HPLC 이동상으로 HPLC 메틸알콜함유완충액 (Bio-Rad Laboratories, CA, USA) 을이용하였는데유속은 0.5 ml/min로하였다. 형광검출기의여기및발광파장은각각 385 nm와 515 nm이었다. 3. 통계처리재현성과나이와성에따른호모시스틴의차이에대한결과들은 mean±sd 또는변이계수 ( 이하 CVs) 으로나타내었으며, FPIA법과 HPLC법간의혈장호모시스틴의농도차이와한국성인의남녀에따른농도차이의통계적의의는 SAS system for Windows version 6.12를사용하여각각 paired t-test와 Student t-test로분석하였다. Table 1. Comparison of plasma homocysteine concentration in 100 Korean healthy adults between fluorescence polarization immunoassay (FPIA) and high performance liquid chromatography (HPLC) Method Homocysteine concentration (Mean±SD, mol/l) P FPIA 9.75±3.80 HPLC 7.72±3.36 *FPIA vs HPLC, homocyst(e)ine values assessed by paired t-test. Abbreviations: SD, standard deviation; P, probability. < 0.01* Table 2. Comparison of plasma homocysteine concentration according to sex by FPIA and HPLC Method Group N Method Age N Homocysteine concentration ( mol/l) Mean±SD Homocysteine concentration ( mol/l) Mean±SD Range FPIA M ± < 0.01* F ± HPLC M ± < 0.01* F ± *Male vs female, homocysteine values assessed by Student t-test. Abbreviations: see Table 1. Table 3. Comparison of plasma homocysteine concentration according to age by FPIA and HPLC Range FPIA ± ± ~ ± HPLC ± ± ~ ± P Abbreviations: see Table 1. 결 과 1. 정상인에서혈장내호모시스틴의평균농도의 FPIA 법과 HPLC 법간의비교 100명을대상으로한한국성인의혈장내호모시스틴의농도는 FPIA법으로 9.75±3.80 mol/l로측정되었으며 HPLC법으로는 7.72±3.36 mol/l로측정되었으며 (Table 1) 두방법간에는유의한농도차이를보였다 (P <0.01). 2. 성별과연령에따른혈장내호모시스틴의농도변화 각각 50명의남녀를대상으로한성별에따른혈장내호모시스틴의농도는 FPIA법에서남녀각각 11.79±4.04 mol/l, 7.71 ±2.07 mol/l, HPLC법에서남녀각각 9.47±3.72 mol/l, 5.98±1.65 mol/l로두방법모두에서남자에서여자보다유의 하게높은결과를보였다 (P < 0.01)(Table 2). 또한연령의상승에따른 FPIA법과 HPLC법의혈중내호모시스틴의평균농도의변화는두방법모두 30대에서 40대, 50대이상의고연령군으로갈수록상승하는경향을보였다 (Table 3). 3. FPIA법과 HPLC법간의재현성비교검사중변이계수는저농도, 중농도, 고농도의 3개의검체를 5 번중복검사하였으며, 검사일간변이계수는저농도, 중농도, 고농도의 3개의검체를 5일에걸쳐서중복검사함으로써얻어졌다. FPIA법의저농도군, 중간농도군과고농도군검체검사중정밀도 (within-run CV) 는각각 1.83%, 0.47%, 1.66% 였고검사일간정밀도 (between-day CV) 는각각 2.28%, 1.44%, 1.29% 였다. HPLC법의저농도군, 중간농도군과고농도군검체검사중정밀도는각각 5.53%, 5.37%, 4.56% 였고검사일간정밀도는각

4 혈장호모시스틴측정방법의비교평가 513 Table 4. Comparison of reproducibility between FPIA and HPLC Method Conc. (mean±sd, FPIA Low (4.40±0.09) Med (9.39±0.29) High (19.54±0.27) HPLC Low (4.85±0.37) Med (9.21±0.49) High (21.12±0.99) Abbreviations: see Table 1. Ratio mol/l) CV (%) Within-run (n=5) Between-run (n=5) CYSTEINE FPIA ( mol/l) y=1.05x+1.64 (r=0.93) HPLC ( mol/l) Fig. 2. Correlation between fluorescence polarization immunoassay and high performance liquid chromatography. GLUTHATIONE minutes Fig. 1. An example of determination of homocysteine in human plasma with high performance liquid chromatography. 각 7.23%, 5.54%, 4.95% 였으며 (Table 4), 재현성은한검체를 10회반복검사하여평균정체시간 3.92분, 표준편차 ± 0.03분, 변이계수 0.74% 이었다 (Fig. 1). 또한, 호모시스틴이외의시스테인, 시스테이닐글리신, 글루타티온같은다른 thiol 함유 peak들도정확한재현성을갖으며확실하게분리되었다. 4. 두검사법간의상관성 100개의혈장검체에대한 FPIA법 (y) 과 HPLC법 (x) 에따른호모시스틴농도결과에대한회귀방정식은 y=1.05x+1.64 (r=0.93) 로두방법간에는우수한상관관계를보였다 (Fig. 2). 고 찰 IS HOMOCYSTEINE CYS-GLY 정상총혈장호모시스틴농도는검사기관마다다소차이가 있지만공복상태에서 5-15 mol/l이다 [21, 22]. 검사기관마다의차이는다른검사방법, 검체처리과정의차이또는혈장과혈청에영향을미치는다양한요소들에영향을받는대상자의선택등에의한것일수도있다. 총혈장호모시스틴은나이가많을수록, 여성에서폐경후에증가한다 [23]. 또한임신시에는 30-50% 감소하며, 출산후 2-4일이내에정상화된다 [24]. Jacobsen 등 [22] 의형광검출법에의한 HPLC법을이용한연구에의하면남자와여자에서혈장호모시스틴의농도범위는각각 mol/l과 mol/l로남자가유의하게높게측정되었다 (P =0.002). 본연구에서는 Bio-Rad Homocysteine법을이용하여측정한결과혈장호모시스틴의농도범위는남자와여자에서각각 mol/l과 mol/l이었으며, FPIA 법의농도범위는남녀각각 mol/l과 mol/l로측정되었으며총 100명의성인을대상으로한농도 ( 평균 ± 표준편차 ) 는 HPLC법과 FPIA법각각 7.72±3.36 mol/l 와 9.75±3.80 mol/l로두방법의호모시스틴농도간에는통계적으로유의한차이를보였으며 (P < 0.01), 또한두측정법모두에서 Jacobsen의연구에서와같이호모시스틴농도가남자에서통계적으로유의하게높았으며 (P < 0.01), 연령에따른변화는 30 세의연령대에비해고연령의남녀모두에서호모시스틴농도가상승하는경향을보였다. 혈장에서호모시스틴은약 70% 가알부민에결합된디설피드로서존재하며단지소량이유리호모시스틴으로서존재한다. 이런소량의유리호모시스틴은진단적인측면에서의미가없으며혈장에서저장시에단백질분자들에결합되어있으므로측정되지않는다. 통상적인아미노산분석방법은유리아미노산들을측정하지만경도의과호모시스틴혈증의측정에는적당하지않다. 호모시스틴측정에있어가장널리사용되는방법인 HPLC는 postcolumn ninhydrin derivatization과가시영역에서분광광도검출

5 514 강문수 최종원 남정현외 5 인 법 [25, 26], 전기화학검출법 [16] 또는 precolumn derivatization 과형광분광검출법 [11, 12] 같은다른검출법들과결합할수도있다. 그러나흔히사용되는 post-column ninhydrin derivatization 방법은유리또는총호모시스틴의혈장내농도측정의믿을만한방법은아니며 [27] 또한대부분의방법들은유도화과정이나간섭을필요로하는 gradient system을필요로하기때문에임상검사에서사용하기에는어렵다. Gradient system은 isocratic system과비교해볼때 10분이상의 running time을필요로하며불규칙한결과를초래하기쉽다. 본연구에서는전처치를간소화시킨 Bio-Rad Homocysteine 키트와 isocratic system을이용한 HPLC법을사용하여기존에사용되던 HPLC법들에비하여 running time이 6분으로짧은시간에검사를수행할수있었으며저, 중, 고농도의검사내변이계수는 5.53%, 5.37%, 4.56% 와검사간변이계수는 7.23%, 5.54%, 4.95% 로비교적낮았다. Shipchandler 등 [28] 의연구결과에의하면 IMx를사용한 FPIA법과 4가지크로마토그래피방법 (HPLC method with thiol-specific electrochemical detection, thiol-specific HPLC monobromobimane derivatization method in plasma, 4, 4 - dithiopyridine postcolumn derivatization method, 가스크로마토그래피-질량분광법 ) 과비교해볼때상관계수는 0.980에서 0.997에이르며, 기울기는 1.030에서 1.493이었으며, 검사간, 검사내변이계수는상대적으로 0.0% 에서 8.0% 와 0.0% 에서 6.4% 이었다. 또한시스테인과메티오닌에대한교차반응성은거의발견되지않았으며, 60분안에 20검사가수행되었으며저장된보정곡선이 2주동안안정되어있기때문에자주장비를보정하는번거러움을피할수있었다. 또한김등 [29] 연구의 FPIA법의 5일간의반복검사의검사간정밀도는고농도와저농도의관리물질에서변이계수가각각 2.3%, 4.0% 였다. 또한홍등 [30] 도같은방법에서의검사내정밀도가저, 중, 고농도에서각각 2.8%, 1.5%, 0.7%, 검사간정밀도가각각 1.1%, 1.6%, 1.2% 이었다. 본연구에서는 Bio-Rad 를이용한 HPLC법과비교해볼때상관계수가 0.93, 기울기는 1.05로상관성이우수하였으며, 검사간, 검사내변이계수는상대적으로각각 1.29% 에서 2.28% 와 0.47% 에서 1.83% 로 HPLC방법보다재현성이우수하였으며또한전처치가필요없는완전자동화된방법으로신속하고간편하게 60분동안에 20검체의검사를수행할수있었다. 그러나, 이전에언급했던 FPIA법과 HPLC법간의농도차이나기울기차이는검사방법에서기인한것보다두가지방법에서각기다른제조사의 calibrator 를사용한것이원인일가능성이있으며, HPLC법과 FPIA법의비교에서다른제조사의 calibrator를사용한경우 의기울기차이를보고하였으며 [28], 김등 [29] 의국내보고에서도기울기는 1.392였으며, 크로마토그래피법들사이에서도 의기울기차이를보였다 [21]. 결론적으로한국성인의호모시스틴의농도는 HPLC로측정시 7.72±3.36 mol/l, FPIA로측정시 9.75±3.80 mol/l이었으며남자에있어서여자보다유의하게높았으며 (P < 0.01), 나이 증가에따라증가하는경향을보였으며, Bio-Rad Homocysteine kit을이용한 HPLC법은전처리과정을간소화하여기존의 HPLC법보다검사기간이단축된측정법이지만 FPIA법은 HPLC법에비해재현성이더욱우수하며자동화된간편하고빠른측정방법이며, 표준방법인 HPLC법과의상관성이우수하여기존의다른측정법을대신할유용한검사법이라고생각된다. 요약배경 : 본연구에서는고속액체크로마토그래피법과형광편광면역측정법을이용하여혈장내호모시스틴의농도를측정하여두검사법의두방법의정밀도와상관성을비교하고한국성인에있어서혈장내호모시스틴의농도분포를알아보고자하였다. 방법 : 1998년 10월한달동안인하대학교병원의건강검진센터에내원한성인중무작위로선택된남녀 100명을대상으로하였다. 혈장내호모시스틴농도는고속액체크로마토그래피법의경우 Bio-Rad Homocysteine 키트를이용한고속액체크로마토그래피 (ACCLAIM Biogenic Amines Testing System Bio-Rad Laboratories, CA, USA) 로측정하고형광편광면역측정법은 IMx homocysteine assay (Abbott Laboratories, IL, USA) 를이용한 IMx 분석장치로분석하였다. 결과 : 한국성인의혈장내호모시스틴의농도 ( 평균 ± 표준편차 ) 는형광편광면역측정법과고속액체크로마토그래피법각각에서 9.75±3.80 mol/l, 7.72±3.36 mol/l이었으며, 성별로는형광편광면역측정법에서남자 11.79±8.08 mol/l, 여자 7.71± 4.14 mol/l, 고속액체크로마토그래피법에서남자 9.47±7.44 mol/l, 여자 5.98±3.30 mol/l로남자에서유의하게높았다 (P < 0.01). 검사내정밀도는형광편광면역측정법의저, 중, 고농도에서의변이계수는각각 1.83%, 0.47%, 1.66% 이었으며고속액체크로마토그래피법에서는각각 5.53%, 5.37%, 4.56% 이었다. 검사간정밀도는형광편광면역측정법의저, 중, 고농도에서의변이계수는각각 2.28%, 1.44%, 1.29% 이었으며고속액체크로마토그래피법에서는각각 7.23%, 5.54%, 4.95% 이었다. 결론 : 한국성인의호모시스틴의평균농도는남자에있어서여자보다유의하게높았으며 (P < 0.01), 나이증가에따라증가하는경향을보였으며, 형광편광면역측정법은고속액체크로마토그래피법에비해재현성이더욱우수하며자동화된간편하고빠른측정방법이며, 표준방법인고속액체크로마토그래피법과의상관성이우수하여기존의다른측정법을대신할유용한검사방법이라고생각된다. 참고문헌 1. McCully KS. Vascular pathology of homocysteinemia: implications for

6 혈장호모시스틴측정방법의비교평가 515 the pathogenesis of arteriosclerosis. Am J Pathol 1969; 56: Mayer EL, Jacobsen DW, Robinson K. Homocysteine and coronary atherosclerosis. J Am Coll Cardiol 1996; 27: Kang SS, Wong PW, Malinow MR. Hyperhomocyst(e)inemia as a risk factor for occlusive vascular disease. Annu Rev Nutr 1992; 12: McCully KS. Homocysteine and vascular disease. Nat Med 1996; 2: Selhub J, Jacques PF, Wilson PW, Rush D, Rosenberg IH. Vitamin status and intake as primary determinants of homocysteinemia in an eldery population. JAMA 1993; 270: Wilcken DE and Gupta VJ. Sulphr containing amino acids in chronic renal failure with particular reference to homocystine and cysteine-homocysteine mixed disulphide. Eur J Clin Invest 1979; 9: Chauveau P, Chadefaux B, Coude M, Aupetit J, Hannedouche T, Kamoun P, et al. Hyperhomocysteinemia, a risk factor for atherosclerosis in chronic uremic patients. Kidney Int Suppl 1993; 41: S Ueland PM. Homocysteine species as components of plasma redox thiol status. Clin Chem 1995; 41: Refsum H, Helland S, Ueland PM. Radioenzymic determination of homocysteine in plasma and urine. Clin Chem 1985; 31: Stabler SP, Marcell PD, Podell ER, Allen RH, Savage DG, Lindenbaum J. Elevation of total homocysteine in the serum of patients with cobalamin of folate deficiency detected by capillary gas chromatographymass spectrometry. J Clin Invest 1988; 81: Refsum H, Ueland PM, Svardal AM. Fully automated fluorescence assay for determining total homocysteine in plasma. Clin Chem 1989; 35: Araki A and Sako Y. Determination of free and total homocysteine in human plasma by high-performance liquid chromatography with fluorescence detection. J Chromatogr 1987; 422: Saetre R and Rabenstein DL. Determination of cysteine in plasma and urine and homocysteine in plasma high-pressure liquid chromatography. Anal Biochem 1978; 90: Thomson SB and Tucker DJ. Analysis of homocysteine in human urine using high-performance liquid chromatography with electrochemical detection. J Chromatogr 1986; 382: Rabenstein DL and Yamashita GT. Determination of homocysteine, penicillamine, and their symmetrical and mixed disulfides by liquid chromatography with electrochemical detection. Anal Biochem 1989; 180: Malinow MR, Kang SS, Taylor LM, Wong PW, Coull B, Inahara T, et al. Prevalence of hyperhomocyst(e)inemia in patients with peripheral arterial occlusive disease. Circulation 1989; 79: Velury S and Howell SB. Measurement of plasma thiols after derivatization with monobromobimane. J Chromatogr 1988; 424: Jacobsen DW, Gatautis VJ, Green R. Determination of plasma homocysteine by high-performance liquid chromatography with fluorescence detection. Anal Biochem 1989; 178: Fahey RC, Newton GL, Dorian R, Kosower EM. Analysis of biological thiols: quantitative determination of thiols at the picomole level based upon derivatization with monobromobimanes and separation by cationexchange chromatography. Anal Biochem 1981; 111: Alfthan G, Aro A, Gey KF. Plasma homocysteine and cardiovascular disease mortality. Lancet 1997; 349: Ueland PM, Refsum H, Stabler SP, Malinow MR, Andersson A, Allen RH. Total homocysteine in plasma or serum: methods and clinical applications. Clin Chem 1993; 39: Jacobsen DW, Gatautis VJ, Green R, Robinson K, Savon SR, Secic M, et al. Rapid HPLC determination of total homocysteine and other thiols in serum and plasma: sex differences and correlation with cobalamin and folate concentrations in healthy subjects. Clin Chem 1994; 40: Andersson A, Brattstrom L, Israelsson B, Isaksson A, Hamfelt A, Hultberg B. Plasma homocysteine before and after methionine loading with regard to age, gender, and menopausal status. Eur J Clin Invest 1992; 22: Andersson A, Hultberg B, Brattstrom L, Isaksson A. Decreased serum homocyst(e)ine in pregnancy. Eur J Clin Chem Clin Biochem 1992; 30: Wiley VC, Dudman NP, Wilcken DE. Free and protein-bound homocysteine and cysteine in cystathionine beta-synthase deficiency: interrelations during short- and long-term changes in plasma concentrations. Metabolism 1989; 38: Andersson A, Brattstrom L, Isaksson A, Israelsson B, Hultberg B. Determination of homocysteine in plasma by ion-exchange chromatography. Scand J Clin Lab Invest 1989; 49; Clarke R, Daly L, Robinson K, Naughten E, Cahalane S, Fowler B, et al. Hyperhomocystinemia: an independent risk factor for vascular disease. N Engl J Med 1991; 324: Shipchandler MT and Moore EG. Rapid, Fully Automated Measurement of Plasma Homocyst(e)ine with the Abbot IMx Analyzer. Clin Chem 1995; 41: 김한성, 이영경, 이규만, 정지영. IMx 분석기를이용한 Homocyst (e)ine의측정. 임상병리와정도관리 1998; 20: 홍기숙, 강은숙, 정익모. FPIA법에의한혈장내총 Homocysteine의측정. 대한임상병리학회지 1998; 18: S488.

슬라이드 1

슬라이드 1 ARCHITECT i2000 를이용한 HOMOCYSTEINE 정량분석평가 짂단검사의학과생화학파트이유희 순서 Ⅰ. 서론 1) Homocysteine 의이해및소개 2) 시약교체배경 Ⅱ. 본론 1) 재료및방법 2) 결과 Ⅲ. 고찰 I. 서론 Homocysteine 메티오닌의이화작용 (catabolism) 에의해생성되는황을함유하는아미노산 혈장호모시스테인의수치는다음에영향을받는다.