두경부 편평세포암에서 p16, Cyclin D1 단백의 발현양상 부 편평세포암에서 p16단백의 표현양상과 임상병기 및 조 4-326(BioGenex, USA), p16은 쥐 단클론 항체인 G17 직분화도에 따른 표현양상의 차이를 알아보고 cyclin D (P

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태경 원
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1 KISEP Head and Neck Korean J Otolaryngol 1998;417: 두경부편평세포암에서 p16, Cyclin D1 단백의발현양상 김상현 박숙아 오영석 Expression of p16 Protein and Cyclin D1 Protein in Head and Neck Squamous Cell Carcinomas Sang Hyun Kim, MD, Suk Ah Park, MD and Young Suk Oh, MD Department of Otolaryngology, National Medical Center, Seoul, Korea ABSTRACT Background and ObjectivesThe p16, cyclin D1, their partners Cdk4/Cdk6, and prb constitute a G1 regulatory pathway commomly targeted in tumorigenesis. Genetical, immunochemical, and functional analyses show abnormalities of this pathway in various tumors including head and neck squmaous cell carcinoma. To investigate the clinicopathologic meanings of p16 protein and the relationship between p16 and cyclin D1 in head and neck squmous cell carcinoma. Materal and Method Formalin-fixed paraffin-embeded tumor materials that were obtained from 37 patient with head and neck squmaous cell carcinoma were analyzed by immunohistochemical staining method using antiserum that were directed against p16 and cyclin D1. Results1 Deletion of p16 was found in /37 of the patients with head and neck squamous cell carcinoma. The deletion was not associated with the clinicopathologic parameters eg. T and N stages, cell differentiation. 2 Deletion of p16 protein and overexpression of cyclin D1 were identified in 76 28/37 of the patients with head and neck squmaous cell carcinoma. But deletion of p16 was not affected by the overexpression of cyclin D1 in head and neck squmaous cell carcinoma. ConclusionDeletion of p16 and overexpression of cyclin D1 were identified in head and neck squmaous cell carcinoma. These may abrogate the G1 regulatory pathway. These data suggested that combination of these abnormalities may be important in head and neck turmorigenesis. Korean J Otolaryngol 1998;417: KEY WORDSp16 Cyclin D1 Head and neck squmaous cell carcinoma. 901

두경부 편평세포암에서 p16, Cyclin D1 단백의 발현양상 부 편평세포암에서 p16단백의 표현양상과 임상병기 및 조 4-326(BioGenex, USA), p16은 쥐 단클론 항체인 G17 직분화도에 따른 표현양상의 차이를 알아보고 cyclin D1 5-405(PharMingen, USA)를 사용하였으며 염색은 DAKO 단백표현과의 관계를

재료 및 방법 면역조직화학적 염색 파라핀 포매조직 슬라이드를 xylene으로 탈파라핀화시 재료 키고 100%, 90%, 80%, 70% 알콜로 함수과정을 거친 후 연구에 이용된 조직은 1986년 1월부터 1994년 10월까 전자레인지로 15분간 처리 후 메탄올 과산화수소액으로 내 지 국립의료원 이비인후과에서 두경부 편평세포암으로 진 인성 과산화효소를

2 두경부 편평세포암에서 p16, Cyclin D1 단백의 발현양상 부 편평세포암에서 p16단백의 표현양상과 임상병기 및 조 4-326(BioGenex, USA), p16은 쥐 단클론 항체인 G17 직분화도에 따른 표현양상의 차이를 알아보고 cyclin D (PharMingen, USA)를 사용하였으며 염색은 DAKO 단백표현과의 관계를 알아봄으로써 두경부 편평세포암에서 LSAB Kit와 발색제로 3,3-diaminobenzidine tetrahy- p16 단백과 cyclin D1 단백의 역할을 알아보고자 하였다. drochloride(dab)를 사용하였다. 재료 및 방법 면역조직화학적 염색 파라핀 포매조직 슬라이드를 xylene으로 탈파라핀화시 재료 키고 100%, 90%, 80%, 70% 알콜로 함수과정을 거친 후 연구에 이용된 조직은 1986년 1월부터 1994년 10월까 전자레인지로 15분간 처리 후 메탄올 과산화수소액으로 내 지 국립의료원 이비인후과에서 두경부 편평세포암으로 진 인성 과산화효소를 억제시켰다. Cyclin D1은 1 30으로 단받은 37례의 파라핀 포매조직을 이용하였다. 희석하여 30분간, p16은 1 100으로 희석하여 실온에서 발생부위별로 후두암이 23례, 하인두암이 6례, 설암이 2시간 반응 시킨후 biotinylated anti-rabbit, anti-mouse 8례였으며 성별은 남자 32명, 여자 5명, 평균연령은 58세 immunoglobulin을 각각 10분, 30분간 반응시킨후 세척하 였다. 고 streptavidin과 반응시킨후 발색제인 DAB로 반응시켜 세척후, Meyer-Hematoxylin으로 대조염색후 봉입하였다. 방법 면역조직화학적 판정 및 통계분석 시약 실험에 이용한 cyclin D1 항체는 쥐 단클론 항체인 G12 면역조직화학적 방법으로 염색한 조직표본의 현미경적 관 찰은 조직편의 중심부에서 관찰하여 암세포의 핵의 황갈색 Fig. 1. Strong nuclear (arrow) and less intense cytoplsmic staining was seen in the normal cell (A) and in the cancer cell (B) (positive p16 immunohisto chemical staining A, 200 tongue B, 400 larynx). 902 Korean J Otolaryngol 1998;41(7):

대상환자의 임상적 병기 및 Hematoxylin-Eosin 염색조 직표본의 분화도의 분류는 미국 암학회 분류(Classificat- T 병기, 림프절 전이, 병리학적 분화도와 p16단백 음성 표현과의 관계 ion of American Joint Commitee on Cancer, 1988)을 사 T 병기에 따른 종양 증례수와 p16 단백의 음성률은 제

3 김상현 외 의 과립이 p16의 경우 배경보다 강한 경우를 양성으로(Fig. cyclin D1 단백의 과발현과 동시에 p16 단백의 소실을 보 1),2) cyclin D1의 경우 암세포의 10%이상에서 관찰되는 인 례는 9례로 24.4%에서 관찰되었다(Table 2). 6) 경우를 양성으로 판정하였다(Fig. 2). 대상환자의 임상적 병기 및 Hematoxylin-Eosin 염색조 직표본의 분화도의 분류는 미국 암학회 분류(Classificat- T 병기, 림프절 전이, 병리학적 분화도와 p16단백 음성 표현과의 관계 ion of American Joint Commitee on Cancer, 1988)을 사 T 병기에 따른 종양 증례수와 p16 단백의 음성률은 제 용하였으며 통계처리는 개인용 컴퓨터의 SAS program(fi- 1기는 4례중 50%, 제2기는 10례중 70%, 제3기는 13례 sher s extract test, Chi-Square test)을 이용하였다. 중 69.3%, 제4기는 10례중 70%로 병기의 증가와 p16단 백의 음성률 사이에서 통계학적 의의는 찾을 수 없었다. 결 과 림프절 전이가 있었던 21례중 p16 단백의 음성률은 61. 9%, 림프절전이가 없었던 16례중 p16 단백의 음성률은 7 p16 단백과 cyclin D1단백의 표현률 총 37례중 p16 음성반응은 67.6%, cyclin D1 양성반응은 Table 1. Expression of p16 and cyclin D1 in head and neck squamous cell carcinoma according to subsites p16 (-)(%) 32.4%로 각 부위에 따른 통계학적 차이는 없었다(Table 1). Hypopharynx p16 단백 표현률에 대한 cyclin D1 단백의 표현률 Cyclin D1 단백의 과발현을 보이거나 p16 단백의 소실 을 보인 례는 총 37례중 28례로 76%에서 관찰되었으며, 4/ 6 (66.6) Cyclin D1 (+)(%) 2/ 6 (33.3) Larynx 16/23 (69.6) 8/23 (34.8) Tongue 5/ 8 (62.5) 2/ 8 (25.0) Total (P>0.05) 25/37 (67.6) 12/37 (32.4) Fig. 2. Strong nuclear staining (arrow) in the most cancer cell (positive cyclin D1 immunohisto chemical staining A, 200 tongue B, 400 hypopharynx). 903

4 Table 2. Expression of cyclin D1 protein according to expression of p16 protein 904 CyclinD1 CyclinD1 Total p p Total P0.05 Table 3. Relationship between p16 expression and T stage, lymph node metastasis, and histologic features in HNSCC T-stage p16 p16 p value T1 2 2 T2 7 3 T3 9 4 T4 7 3 N-stage N N Histologic differentiation Well 11 7 Moderate 11 4 Poor 3 1 P0.05 P0.05 P0.05 Table 4. Expression of p16 protein and cyclin D1 protein according to clinical stage in head and neck squamous cell carcinoma Clinical stage p16 p16 or p16 cyclind1 % cyclind1 % cyclind1 % Total P0.05 Korean J Otolaryngol 1998;417:

5 REFERENCES 1) Jirina B, Jiri L, Per G, Jan A, Alexei FK, Jesper Z, et al. The p16- cyclin D/Cdk4-pRb pathway as a functional unit frequently altered in melanoma pathogenesis. Cancer Res ) Jadayeo DM, Lukas J, nacheva E, Barkova J, Stranks G, Lens D, et al. Potential role for concurrent abnormalities of the cyclin d1, p16 and p15 genes in certain B cell non-hodgkins lymphomas. Functional study in a cell line. Leukemia ) Serrano M, Gomez E, Depinho R, Brach D, Bar D. Inhibition of ras-induced proliferation and cellular transformation by p16. Science ) Berenson J, Koge H, Yang J. Frequent amplification of the bcl-1 locus in pooly differentiated squmaous cell carcinoma of lung. The lung cancer study group. Oncogene ) Kitaganawa Y, Ueda M, Ando N. Significance of int-2/hst-1 al squmaous carcinoma. Cancer Res ) Kim SH, Chung DH. Expression of cyclin D1 protein in head and neck squamous cell carcinomas. Korean J Otolaryngol ) Loughran O, Malliri A, Owens D, Gallimore PH, Stanley MA, Ozanne B, et al. Association of CDKN2A/p16 with human head and neck keratinicyte replicative senescence Relationship of dysfunction to immortality and neoplasia. Oncogene ) Joseph G, Robert A, Kratzke, Gloria A, Niehans, Clint E, et al. Immunohistochemical detection of the cyclin kinase inhibitor 2/multiple tumor suppressor gene 1 CDKN2/MTS1 product p16 in archial human solid tumor Correlation with retinoblastoma protein expression. Cancer Res ) Andres JP, Klein S, Edward R, Sauter, Marianna S, Shinichiro M, et al. Higher frequency of alteration in the p16/cdkn2 gene in squmaous cell carcinoma cell lines than in primary tumors of the head and neck. Cancer Res ) Joseph C, Peter VD, William W. Genetic progression for head and neck cancer Implication for field cancerization. Cancer Res ) Jiang W, Kahn SM, Zhou P. Overexpression of the cyclin D1 in rat fibroblasts cause abnormalities in growth control, cell cycle progression and gene expression. Oncogene ) Quelle DE, Ashmun RA, Shurtleff SA. Overexpression of mouse D-type cyclins accelerates G1 phase in rodent fibroblast. Genes Dev ) Goodrich DW, Chen Y, Scully P. Expression of the retinoblastoma gene product in bladder carcinoma cells associates with a low frequency tumor formation. Cancer Res ) Lee EY, To H, Shew TY. Inactivation of the retinoblastoma susceptibility gene in human breast cancers. Science

Jkbcs016(92-97).hwp

Jkbcs016(92-97).hwp Expression of bcl-2 and Apoptosis and Its Relationship to Clinicopathological Prognostic Factors in Breast Cancer - A Study with Long Term Follow-up correlated with the survival rate.(journal of Korean