해외유입 학술연구용역사업최종결과보고서 및 법정 기생충질환의 해외유입및법정기생충질환의고감도및첨단진단표준화 Standardization of highly sensitive and advanced diagnostic methods for imported parasitic diseases 고감도 및 주관연구기관 : 서울대학교산학협력단 주의 ( 주의내용기재 ) ( 글 14 point 고딕체 ) 첨단 진단 표준화 2 0 1 0 질병관리본부 질병관리본부
주의내용 주 의 1. 이보고서는질병관리본부에서시행한학술연구용역사업의최종결 과보고서입니다. 2. 이보고서내용을발표할때에는반드시질병관리본부에서시행한 학술연구용역사업의연구결과임을밝혀야합니다. 3. 국가과학기술기밀유지에필요한내용은대외적으로발표또는공개 하여서는아니됩니다.
학술연구용역사업최종결과보고서 과제번호 800-2010023 과제명 주관연구기관 국문 영문 해외유입및법정기생충질환의고감도및첨단진단표준화 Standardization of highly sensitive and advanced diagnostic methods for imported parasitic diseases 기관명소재지대표 서울대학교산학협력단서울시관악구신림동산 56-1 신희영 성명소속및부서전공 주관연구 책임자 홍성태 ( 洪性台 ) 서울대학교의과대학 기생충학 연락처 이메일 02-740-8343 hst@snu.ac.kr 연구비 142,500 천원 연구기간 2010. 2. 8-2010. 12. 7 17 명총참여연구원 ( 책임연구원 : 5 명, 연구원 : 12명, ) 2010년도학술연구용역사업에의하여수행중인학술연구용역과제의최종 결과보고서를붙임과같이제출합니다. 붙임 : 1. 최종결과보고서 20 부. 2. 전자파일 CD 2 매. 2010 년 12 월 1 일 주관연구책임자홍성태 ( 인또는서명 ) 주관연구기관장 ( 직인 ) 질병관리본부장귀하
목 차 Ⅰ. 연구개발결과요약문 ( 한글 ) 해외유입및법정기생충질환의고감도및첨단진단표준화 ---------------------1 ( 영문 ) Standardization of highly sensitive and advanced diagnostic--------------------2 methods for imported parasitic diseases Ⅱ. 제 1 세부연구개발과제연구결과제 1 장제 1 세부연구개발과제의최종연구개발목표 ------------------------------------3 제 2 장제 1 세부연구개발과제의연구대상및방법 -------------------------------------5 제 3 장. 제 1 세부연구개발과제의최종연구개발결과 -----------------------------------7 제 4 장제 1 세부연구개발과제의연구결과고찰및결론 --------------------------------13 제 5 장제 1 세부연구개발과제의연구성과 ------------------------------------------ 14 제 6 장참고문헌 ------------------------------------------------------------ 15 제 7 장첨부서류 ------------------------------------------------------------ 17 Ⅲ. 제 2 세부연구개발과제연구결과제 1 장제 2 세부연구개발과제의최종연구개발목표 ---------------------------------- 18 제 2 장제 2 세부연구개발과제의연구대상및방법 ------------------------------------ 21 제 3 장. 제 2 세부연구개발과제의최종연구개발결과 ---------------------------------- 22 제 4 장제 2 세부연구개발과제의연구결과고찰및결론 -------------------------------- 32 제 5 장제 2 세부연구개발과제의연구성과 ------------------------------------------ 36 제 6 장참고문헌 ------------------------------------------------------------ 37 제 7 장첨부서류 ------------------------------------------------------------ 40 Ⅳ. 제 3 세부연구개발과제연구결과제 1 장제 3 세부연구개발과제의최종연구개발목표 -----------------------------------48 제 2 장제 3 세부연구개발과제의연구대상및방법 ------------------------------------ 50 제 3 장. 제 3 세부연구개발과제의최종연구개발결과 ---------------------------------- 52 제 4 장제 3 세부연구개발과제의연구결과고찰및결론 -------------------------------- 61 제 5 장제 3 세부연구개발과제의연구성과 ------------------------------------------- 62 제 6 장참고문헌 ------------------------------------------------------------- 63 Ⅴ. 제 4 세부연구개발과제연구결과제 1 장제 4 세부연구개발과제의최종연구개발목표 -----------------------------------64 제 2 장제 4 세부연구개발과제의연구대상및방법 ------------------------------------ 67 제 3 장. 제 4 세부연구개발과제의최종연구개발결과 ---------------------------------- 68 제 4 장제 4 세부연구개발과제의연구결과고찰및결론 -------------------------------- 74 제 5 장제 4 세부연구개발과제의연구성과 ------------------------------------------- 75 제 6 장참고문헌 ------------------------------------------------------------- 76 제 7 장첨부서류 ------------------------------------------------------------- 79 Ⅵ. 해외유입기생충진단표준화를위한프로토콜 --------------------------80
최종결과보고서요약문 과제명 중심단어 주관연구기관 주관연구책임자 연구기간 1
Title of Project Key Words Institute Project Period Lab ELISA using crude extracts, ELISA kits for sale, Latex agglutination kit and rapid diagnostic kit (RDT) were compared for the sandardized diagnostic method, which showed relatively similar specificity and sensitivity among the kits tried. Therefore it is recommended that the choice of method depend on the cost of kits, easiness for the procedure, and the necessity of skilled technician. RDT kit using SAG1 is recommended, but more advances in sensitivity by adding GRA2, showed highly antigenic propertiy in this study, is needed for the kit. 2
학술연구용역사업연구결과 제 1 세부과제 포충증의표준진단법확립및효능검증 Standardization of serodiagnosis for Echinococcosis 3
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Fig. 2. Absorbances of echinococcosis patients and normal controls by ELISA. 11
Table 2. 12
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5.1 활용성과 과제명 과제책임자 홍성태, 배영미 / 서울대의과대학 / 기생충학 번호논문제목저자명저널명집 ( 권 ) 페이지 Impact factor 1 2 국내 / 국외 SCI여부 번호발표제목발표형태발표자학회명연월일발표지 1 2 포스터 김연, 배영미, 최민호, 홍성태 APCPZ 2010. 10. 27. 국내 / 국제 국제 번호출원 / 등록 1 2 특허명출원 ( 등록 ) 인출원 ( 등록 ) 국출원 ( 등록 ) 번호 IPC 분류 기타관련정책에활용예를구체적으로기술함. 이표준화된방법으로현재임상에서포충증을의심하는환자가발생하면진단을지원하고있다. 또한우즈베 키스탄에도혈청진단이가능하도록국립병원에시스템을설치하여주고정도관리를하고있다. 언론홍보및대국민교육내용, 일자등을간략히기술함. 14
임상시험, 관련 DB 구축, 워크샾또는심포지움개최등의경우구체적으로기술함. 5.2 활용계획 이시스템을이용한혈청진단시스템을다른기생충항원과공통으로시행하는다항원혈청진단에적 용할계획이다. 처음선정시와비교하여변경된내용을명시 15
학술대회에서발표한포스터 : 1 건 16
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제 2 세부과제 유극악구충증의표준진단법확립및효능검증 Standardization of highly sensitive and advanced diagnostic methods for gnathostomiasis 18
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내용 비율 진척도 (%) 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 비고 1 악구충증유행지에대한정보파악 2 특징적인임상증상및병리학적소견정리 3 충체의형태학적특징파악 4 생검충체단면의특징적인소견정리 5 악구충성충및유충확보 6 악구충항원준비 7 감염환자및대조군혈청확보 8 면역블럿 악구충특이항원단백질확보 9 보고서작성및표준진단매뉴얼작성 20
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명 학 27
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neuroangiostrongyliasis( 및 baylisascariasis( 너구리회충감염 ) 등의소견과비교한바있다. 24-kDa의유충특이항원이특이도와민감도가높기때문에광범위하게사용되어왔으며선별검사 (screen test) 로는면역글로불린 검출효소면역법 (ELISA) 이적용되어왔다. 33
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제 5 장제 2 세부연구개발과제의연구성과 5.1 활용성과 과제명유극악구충증의표준진단법확립및효능검증 과제책임자 손운목 / 경상대학교의학전문대학원 / 기생충학 번호논문제목저자명저널명집 ( 권 ) 페이지 Impact factor 1 2 국내 / 국외 SCI여부 번호발표제목발표형태발표자학회명연월일발표지 1 2 국내 / 국제 번호출원 / 등록 1 2 특허명출원 ( 등록 ) 인출원 ( 등록 ) 국출원 ( 등록 ) 번호 IPC 분류 기타관련정책에활용예를구체적으로기술함. 타연구및차기연구에활용된예를구체적으로기술함. 36
언론홍보및대국민교육내용, 일자등을간략히기술함. 임상시험, 관련 DB 구축, 워크샾또는심포지움개최등의경우구체적으로기술함. 5.2 활용계획 37
J Neuroparasitol 1: 1-14, 2010. 38
제 7 장첨부서류 학술대회에서발표한포스터및구연슬라이드유인물 : 2 건 39
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제 3 세부과제 톡소포자충증의표준진단법확립및효능검증 Standardization of highly sensitive and advanced diagnostic methods for toxoplasmosis 1.1 목표 48
1.2 목표달성도 우리는국내의실험실에서개발하여사용하고있는방법과해외에서사용하고있는톡소포자충진단제품들을분석하고톡소포자충감염진단을신속하고정확하게검사해낼수있는최적진단방법을개발하고자하였다. 1.3 국내 외기술개발현황 49
제 2 장제 3 세부연구개발과제의연구대상및방법. 50
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제 3 장제 3 세부연구개발과제의최종연구개발결과 52
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) IBL, CALBIOTECH Toxoplasma IgG ELISA ELISA중에서는비교적빠른시간에검사가이루어지고나, 양성환자들의항체가의차이가잘나타나지않은채양성과음성의판단이쉬우나, 음성혈청에서도일단발색이이루어져이루어져위양성으로판단될가능성이높다. Abnova Toxoplasma IgG ELISA 비교적빠른시간에검사가이루어지며민감도가높다. 그러나 IBL 제품에서와같이양성혈청의항체가의차이가잘나타나지않으며, 위양성으로판명될가능성이높다. ATLAS TOXO Latex kit 검사 sample의수가적을때적용하기쉬우며, 반응시간이짧아빠른시간내에확인할수있다. 또한 IgG는물론 IgM 항체와도응집반응이일어나항체의검출민감도를높일수있다. 그러나검사하고자하는시료의수가많을때부적당하며응집반응의판단때많은경험과주의를요한다. 5) B회사 Toxoplasma RDT kit 반응시간이 ELISA와는비교가안될수준으로신속하며, 검사과정이간단하여검사가쉬우며, 민감도와특이도가높다. SAG1에대한항체가가낮은양성환자의검사가어려워추가적인항원이필요하다. Fig. 2. ATLAS TOXO latex kit 의적용예 ( 좌 ) 와 B 회사 Toxoplasma RDT kit 의적용예 ( 우 ). Serum ELISA Western blot IBL-Ab Abnova Latex RDT Group SAG1 GRA2 GRA4 GRA6 1-265 0.24 ν 1.418 1.858 ν 2-21 0.20 ν 1.245 1.631 ν 2-73 0.24 ν 1.223 1.423 ν ν 55
2-238 0.2 1.207 1.428 ν 2-267 0.2 ν 1.329 1.591 ν 3-74 0.23 ν 1.465 1.800 ν ν 3-252 0.22 1.422 1.925 ν 3-315 0.22 ν ν 1.354 1.576 ν ν 3-345 0.24 ν ν ν 1.734 1.993 ν ν 3-353 0.23 ν ν 1.636 1.998 ν ν 3-398 0.22 ν ν ν 1.658 2.126 ν ν 4-17 0.24 ν ν 1.525 1.917 ν ν 4-163 0.21 ν ν 1.315 ND ν ν 4-166 0.23 ν 1.217 ND ν ν 5-9 0.23 1.534 ND ν ν 5-95 0.23 1.456 ND ν 6-130 0.2 ν ν 1.568 ND ν ν 6-154 0.23 ν ν ν 1.706 ND ν ν 6-189 0.23 ν 1.312 ND ν ν 6-265 0.23 ν 1.543 ND ν ν 7-150 0.22 ν ν 1.445 ND ν ν 8-111 0.22 ν ν 1.683 ND ν 8-147 0.23 ν ν 1.500 ND ν ν 8-150 0.19 ν ν 1.449 ND ν II 1-102 1.18 ν ν 2.054 2.389 ν ν 1-131 1.54 ν ν ν 2.050 2.377 ν ν 1-147 0.9 ν ν ν 2.040 2.558 ν ν 1-160 1.09 ν ν ν 2.059 2.462 ν ν 1-170 1.05 ν ν ν ν 2.029 2.435 ν ν 2-63 1.42 ν v v v 1.991 2.401 ν ν 2-81 1.39 v v 1.987 2.241 ν ν 2-100 1.49 v 2.021 2.384 ν ν 2-109 1.04 v v v v 1.929 2.196 ν ν 2-123 1.53 v v v 1.875 2.075 ν ν 2-126 1.06 v v 1.958 2.303 ν ν 2-150 1.24 v v 2.026 2.327 ν ν 2-174 0.75 ν ν 1.869 2.116 ν ν 2-301 1.26 ν 1.996 2.384 ν ν 2-304 1.13 ν ν ν 1.962 2.296 ν ν 2-327 0.75 ν ν 1.862 2.157 ν ν 2-383 1.63 ν 1.955 2.390 ν ν 3-6 0.83 ν ν 1.950 2.227 ν ν 56
3-36 0.74 ν ν ν 1.981 2.392 ν ν 3-66 0.76 ν 1.981 2.275 ν ν 3-263 0.60 ν ν 1.911 1.999 ν ν 3-266 0.9 ν ν ν 2.051 2.457 ν ν 3-268 0.79 1.972 2.175 ν ν 4-104 1.02 ν ν ν 2.044 2.399 ν ν III 1-83 1.25 ν ν ν ν 1.987 2.374 ν ν 2-178 1.04 ν ν ν 2.021 2.469 ν ν 2-183 0.72 ν ν 1.970 2.170 ν ν 2-241 1.26 ν ν ν ν 2.056 2.351 ν ν 2-274 1.01 ν ν 1.950 2.290 ν ν 2-290 1.4 ν 1.891 2.107 ν ν 2-312 1.51 ν ν 2.036 2.475 ν ν 3-20 1.19 ν ν 2.032 2.504 ν ν 3-49 0.71 ν ν 1.929 2.265 ν ν 3-68 0.98 ν ν ν 1.936 2.208 ν ν 4-10 0.83 ν ν ν 2.041 2.398 ν ν 4-26 0.65 ν 2.001 2.176 ν ν 4-128 1.14 ν ν ν 1.930 2.297 ν ν 4-135 1.07 ν ν 1.969 2.427 ν ν 5-88 0.67 ν 1.958 2.257 ν ν 5-127 1.22 ν ν 2.030 2.462 ν ν 6-51 0.75 ν ν 2.004 2.481 ν ν 6-147 0.75 ν 1.915 2.268 ν ν 6-395 1.42 ν ν 1.998 2.323 ν ν 7-81 1.57 ν ν ν ν 2.076 2.498 ν ν 7-157 1.24 ν ν ν 2.067 2.279 ν ν 7-221 0.81 ν ν ν 2.051 2.209 ν ν 7-251 1.57 ν ν ν ν 2.104 2.377 ν ν 8-77 1.52 v v v v 2.113 2.373 ν ν IV 1-103 0.47 ν 1.790 1.864 ν ν 1-198 0.35 ν ν 1.654 1.579 ν 1-202 0.6 ν ν 1.796 1.855 ν ν 2-2 0.73 ν 1.951 2.106 ν ν 2-69 0.35 ν 1.381 1.628 ν ν 2-79 0.69 ν ν 1.587 1.762 ν ν 2-248 0.33 ν 1.477 1.683 ν ν 2-286 0.46 ν ν 1.657 1.749 ν ν 2-329 0.3 1.224 1.288 ν 57
3-55 0.27 1.462 1.662 ν 3-57 0.54 1.961 2.108 ν ν 3-295 0.47 ν 1.858 2.025 ν ν 3-298 0.61 ν ν ν ν 1.976 2.129 ν ν 3-319 0.34 ν ν 1.733 1.650 ν 3-323 0.27 ν 1.388 1.394 ν 3-330 0.31 ν 1.714 1.663 ν 3-356 0.5 ν ν ν ν 1.957 2.050 ν ν 3-363 0.5 ν ν 1.957 2.041 ν ν 3-378 0.39 1.698 1.796 ν 3-381 0.32 ν 1.755 1.870 ν 4-29 0.4 ν 1.843 2.129 ν 4-59 0.39 ν 1.866 1.952 ν ν 4-110 0.29 ν ν 1.712 1.710 ν 4-126 0.5 ν 1.969 1.910 ν ν V 1-89 0.25 ν 1.291 1.563 ν 1-252 0.56 ν 1.751 1.821 ν ν 2-86 0.73 ν ν 1.763 1.867 ν ν 2-99 0.64 ν ν 1.633 1.736 ν ν 2-102 0.48 ν ν 1.222 1.641 ν ν 2-143 0.43 1.392 1.511 ν ν 2-186 0.34 1.391 1.347 ν ν 2-296 0.31 ν 1.318 1.684 ν 2-341 0.75 ν ν 1.275 1.772 ν ν 2-345 0.61 1.594 1.579 ν ν 2-361 0.36 ν 1.386 1.523 ν 3-2 0.26 1.358 1.324 ν 3-24 0.29 1.632 2.076 ν 3-48 0.4 ν ν 1.773 2.245 ν ν 3-63 0.26 1.529 2.082 ν 3-131 0.45 ν 1.971 2.226 ν ν 3-147 0.37 ν 1.801 2.009 ν ν 3-199 0.26 ν 1.576 1.760 ν ν 3-238 0.34 ν 1.746 1.862 ν 3-272 0.26 1.787 1.988 ν 3-289 0.37 ν 1.752 1.956 ν 3-306 0.3 ν 1.040 1.413 ν ν 4-55 0.3 1.492 1.972 ν 4-100 0.38 ν 1.719 1.930 ν ν 58
VI 1-179 0.41 1.825 2.004 ν 1-186 0.35 ν 1.458 1.679 ν 1-209 0.43 1.718 2.058 ν 2-105 0.38 0.730 0.662 ν 2-106 0.43 0.757 1.130 2-115 0.62 1.468 1.935 ν 2-122 0.39 1.297 1.845 2-144 0.38 0.477 0.405 2-315 0.43 1.661 2.054 ν 3-76 0.31 0.553 1.026 3-140 0.42 ν 1.773 2.059 ν 3-186 0.34 ν 1.415 1.686 ν 3-189 0.36 1.684 1.810 ν 3-197 0.27 1.596 2.029 3-208 0.55 ν ν 1.665 2.151 ν 3-217 0.27 ν 1.578 1.906 3-255 0.27 ν ν 1.470 1.813 4-19 0.33 1.244 1.772 5-64 0.38 ν 1.772 2.129 ν 6-79 0.26 ν ν 1.886 2.206 ν 6-110 0.56 ν 1.971 2.256 ν 6-276 0.59 ν ν 1.485 1.845 ν 6-307 0.34 0.791 1.002 7-272 0.41 ν ν ν ν 1.813 2.281 ν 59
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제 4 장제 3 세부연구개발과제의연구결과고찰및결론 61
제 5 장제 3 세부연구개발과제의연구성과 5.1 활용성과 과제명톡소포자충증의표준진단법확립및효능검증 과제책임자 남호우 / 가톨릭의대 / 기생충학 번호논문제목저자명저널명집 ( 권 ) 페이지 Impact factor 1 2 국내 / 국외 SCI여부 번호발표제목발표형태발표자학회명연월일발표지 1 2 국내 / 국제 번호출원 / 등록 1 2 특허명출원 ( 등록 ) 인출원 ( 등록 ) 국출원 ( 등록 ) 번호 IPC 분류 기타관련정책에활용예를구체적으로기술함. 타연구및차기연구에활용된예를구체적으로기술함. 언론홍보및대국민교육내용, 일자등을간략히기술함. 62
임상시험, 관련 DB 구축, 워크샾또는심포지움개최등의경우구체적으로기술함. 5.2 활용계획 제 6 장참고문헌 제 7 장첨부서류 본학술연구용역사업의성과로기술된게재된학술지논문전체사본 ( 게재허가를받은 경우게재증명서 ) 과산업재산권등록증 ( 또는출원서 ) 사본을반드시첨부할것. 63
제 4 세부과제 충증의표준진단법확립및효능검증 Standardization of highly sensitive and advanced diagnostic methods for toxocariasis 64
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구분월별추진일정 연구내용 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 진척도 연구총괄 / 진단효율성평가충체및 toxocara larvae 확보개회충증의양성혈청확보교차반응을위한다른기생충증혈청확보기존 kit ELISA법시행양성판정기준설정 (cut-off value) 결과정리및보고 100% 100% 100% 100% 100% 100% 100% 추진진도 ( % ) 5 17 25 35 45 55 68 82 95 100 66
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5.1 활용성과 과제명 과제책임자 최민호 / 서울대의과대학 / 기생충학 번호논문제목저자명저널명집 ( 권 ) 페이지 Impact factor 1 2 국내 / 국외 SCI여부 번호발표제목발표형태발표자학회명연월일발표지 1 2 포스터 김연, 배영미, 홍성태, 손운목, 허선, 최민호 기생충학회 2010. 10. 28. 대한기생충 학 52 회 학술대회 초록집 국내 / 국제 국내 번호출원 / 등록 1 2 특허명출원 ( 등록 ) 인출원 ( 등록 ) 국출원 ( 등록 ) 번호 IPC 분류 기타관련정책에활용예를구체적으로기술함. 현재임상에서개회충증을의심하는환자가많아서이들의진단에활용하고있다. 언론홍보및대국민교육내용, 일자등을간략히기술함. 75
임상시험, 관련 DB 구축, 워크샾또는심포지움개최등의경우구체적으로기술함. 5.2 활용계획 처음선정시와비교하여변경된내용을명시 76
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학술대회에서발표한포스터 : 1 건 78
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해외유입기생충표준진단방법 80
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