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J. Fd Hyg. Safety Vol. 26, No. 3, pp. 214~221 (2011) Journal of Food Hygiene and Safety Available online at http://www.foodhygiene.or.kr HPLC 를이용한사료중 Deoxynivalenol, Zearalenone 의분석과오염도조사 김동호 * 최규일 홍경숙 김현정 송영진 강승훈 장한섭 조현정 한계수 국립농산물품질관리원시험연구소 Analysis and Survey for Contamination of Deoxynivalenol and Zearalenone in Feed by High Performance Liquid Chromatography Dong-Ho Kim*, Kyu-Il Choi, Kyung-Suk Hong, Hyun-Jung Kim, Han-Sub Jang, Hyun-Jung Cho, and Gye-Su Han National Agricultural Products Quality Management Service, Seoul Korea (Received May 17, 2011/Revised June 21, 2011/Accepted July 9, 2011) ABSTRACT - Deoxynivalenol () and zearalenone () are mainly contaminated mycotoxins in feeds. The study was carried out to analyze and survey the contamination of and in one hundred thirteen samples of feeds. After cleaning all samples with immunoaffinity column, the mycotoxins were analysed by using high performance liquid chromatography/fluorescence with diode array detector (HPLC /FLD with DAD). The average recoveries of were 88.76 and 95.40% at the levels of 200 and 1,000 µg/kg and 87.09 and 98.40% of were recovered at the levels of 100 and 500 µg/kg, respectively. The limit of detection (LOD) were 6.0 and 3.0 µg/kg for and, respectively. The average concentrations of were 372.1, 324.0 and 990.9 µg/kg in chicken, pig and cattle feed, respectively. Those of were 76.1, 43.7 and 196.2 µg/kg for them, individually. Key words: Mycotoxin, feed, deoxynivalenol, zearalenone 곰팡이독소 (mycotoxin) 는곰팡이에의해서발생되는 2차대사산물이다 1,8,18-19). 수많은곰팡이유래 2차대사산물에대한연구가이루어져현재까지아플라톡신 (Aflatoxin, AFs), 오크라톡신 (Ochratoxin A, OTA), 푸모니신 (Fumonisin, FUM), 데옥시니발레놀 (Deoxynivalenol, ), 제랄레논 (Zearalenone, ) 등약 400여종의곰팡이독소가밝혀졌다 3,8). 곰팡이독소는곡류, 두류, 서류같은농작물에서생산, 수확, 저장과정중주로발생하고, 열에매우안정하여가공과정에서도잘파괴되지않는다. 사료는옥수수, 보리등곡류와옥수수글루텐, 단백피, 대두박등곡류부산물을주원료로만들어진다. 일반적으로식품이나식품가공용보다저급한원료를사용하게되기때문에곰팡이독소에노출될우려가크다. 또한, 최근기후온난화로식물의생산환경이곰팡이가번식하기좋은고온다습한조건으로변화되고있고, 옥수수등곡물의에너지화에따른가격상승으로곰팡이독소에오염된농산물이식품및사료원료로사용될가능성이높아지고있다. 이러한환경속에서독소에오염된사료를소, 닭, 돼지 *Correspondence to: Dong-Ho Kim, 560. 3-Ga, Dangsan-Dong, Youngdeungpo-Gu, Seoul, Korea Tel: 82-2-2165-6140, Fax: 82-2-2165-6008 E-mail: anoldmu@naqs.go.kr 등의가축들이섭취하게되면각종질병유발, 생산량감소등을일으키게된다. 또한이러한가축에의해생산된축산물을인간이소비하게될때인간의건강을위협하는요인이된다. 따라서, 세계각국은이러한곰팡이독소에대하여그관리를강화하고있는추세이며, EU나 CODEX에서도공통된규격을도출하고자계속하여노력하고있다 18). 우리나라도사료관리법과식품위생법에따라주요곰팡이독소에대하여최대기준을설정하여관리하고있는상태이다. 과 은 Fusarium. graminearum과 F. culmorum 과같은 7~8종의곰팡이에의해서생산되는독소이며, 일반적으로밀, 보리옥수수같은곡류에서주로발생하고, 푸모니신, 니발레놀등다른푸사리움독소 (Fusarium toxins) 들과같이발생하는경향이있다 1,21). 에노출되면식욕감퇴, 사료거부, 구토증상등이나타나게되며결국증체량감소로이어진다 1,9,20). 낮은농도에서는사료섭취감소같은증상이유발하는반면높은농도에서는구토같은증상이유발된다. 돼지가이러한영향에대하여가장민감하게작용하는것으로알려져있다 1,22). 은포유류에서에스트로겐리셉터 (oestrogen receptor) 로작용하여생식력저하등고에스트로겐증 (hyperoestrogenism) 을나타내게된다 19,21). 암퇘지는동물들중에서가장민감한것으로생각 214

Contamination of mycotoxins in feed 215 되며, 소나닭은돼지에비하여제랄레논에대한반응성이적다고할수있다 1). 이러한독소들의분석을위하여대부분고출상추출 (Solid Phase Extraction SPE) 나면역친화컬럼 (ImmunoAffinity Column, IAC) 를이용한정제를하게되며, GC, GC/MS, LC/ UV, LC/FLD, LC/MS/MS 등을이용하는방법들이있다 19,22). ELISA는일반적으로매우감도가좋으나, 동시에결과의불확실성이다소높은경향이있다 19). 이러한다양한분석법에도불구하고, 사료에서는아직공인분석법이마련되어있지않다. 따라서본연구에서는 HPLC를이용한사료중 과 분석법을정립 검증하여표준분석법으로활용하고자하였다. 비록, 수용성인 과지용성인 의물질특성때문에전처리를동시에할수는없었으나, 기기분석조건은동일한방법을사용하여분석효율을증대시키고자하였다. 또한, 동분석법을이용하여사료중곰팡이독소오염도조사를실시하였으며, 사료에서매우높은오염도를보인 2009년도조사결과와비교분석하였다. 실험재료 재료및방법 시료모두 113점의사료를시료로사용하였다. 배합사료의경우닭사료, 돼지사료, 소사료를사육단계에따라각각 30 점씩준비하였다. 단미사료의경우총 23점을시료로사용하였다. 시약 표준물질은 sigma사의 (200 µg/kg, 2 ml and 5 mg, USA), (200 µg/kg, 2 ml and 5 mg, USA) 을사용하였으며, 전처리용시약은 sigma사의 PBS (phosphate buffered saline, ph 7.4, USA), 인산 (phosporic acid, 85%, USA), merck 사의 HPLC급 acetonitrile (ACN, 4 L, Germany) 와 methanol (MeOH, 4 L, Germany) 을사용하였다. 정제용면역칼럼은 R-Biopharm사의 immunoaffinity column인 PREP (50/ box, Sweden), EASY ZEARALENONE(50/box, Sweden) 을사용하였다. 표준용액 200 µg/ml 농도의, 상용표준물질을 ACN으로희석하여각각 10 µg/ml와 5µg/mL가되도록하였다. 각각의액에서 0.1 ml를취한후증류수 (distilled water, DW) 0.8 ml와혼합하여가장고농도의표준물질을만들었다. 이액 500 ul와 20% ACN 500 ul를정확히분취하여섞은후, 다시이혼합액의 200, 100 ul와희석액 800과 900 ul를각각혼합하여나머지표준용액을조제하였다. 최종검량선 작성용액의농도는 과 이각각 50, 100, 500, 1,000 µg/l 와 25, 50, 250, 500 µg/l이었다. 기기및장치, 의 HPLC 정량분석을위하여 agilent 1100 series (G1322 degasser, G1312A quaternary pump, binary pump, G1313A autosampler, G1316A column oven, G1321A fluorescence detector) 를사용하였다. 시료분쇄및추출을위하여시료분쇄기 (perten, Sweden), homogenizer (OMNI, USA) 를사용하였으며, 농축을위하여질소농축기 ( 창명, KOR) 를사용하였다. 기타장비로는화학천칭 (sartorius, USA), 원심분리기 ( 한일, Korea), 시험관교반기, vacuum system (agilent, USA), Mili-Q RiOs/Elix water purification system (Millipore, USA) 등을사용하였다. 실험방법 전처리 데옥시니발레놀 (Deoxynivalenol, ) 잘분쇄된시료 20 g에 DW 100 ml를넣고, homogenizer 를 10,000 rpm으로 2분간회전하여 을추출하였다. 여과지 (Whatman No. 4) 를이용하여추출액을여과한후여과액 3mL을취하여 immunoaffinity column 에유속이 2~3 ml/ min되도록통과시켰다. 5 ml DW로 column을세척한후 Sampling 20 g Adding 120 ml DW Blending (10,000 rpm, 2 min) Filtering (No. 4) Loading 3 ml filtered extracts Washing with 5 ml DW Elute analytes with MeOH 3 ml Evaporate (under N2, 50 o C) Reconstitute with 1 ml 20% ACN Filtering Inject into HPLC/DAD Fig. 1. Flow sheet for analysis.

216 Dong-Ho Kim, Kyu-Il Choi, Kyung-Suk Hong, Hyun-Jung Kim, Han-Sub Jang, Hyun-Jung Cho, and Gye-Su Han Sampling 25 g Adding 125 ml 75% ACN Blending (10,000 rpm, 2 min) Filtering (No. 4) 20 ml Extract + 80 ml PBS Refilter (No. 6) Loading 25 ml diluted extract to IAC Washing with 20 ml PBS Elute analytes with MeOH 3 ml Evaporate (under N2, 50 o C) Reconstitute with 1 ml 20% ACN Filtering Inject into HPLC/FLD Fig. 2. Flow sheet for analysis. 3mL MeOH로 backflushing을 3회실시하면서중력에의해 을용출시켰다. 이어서, 이액을 50 o C에서질소로건고시켰으며, ACN:DW = 20:80 1 ml로다시녹여시액으로사용하였다. 분석흐름도는 Fig. 1과같다. 제랄레논 (Zearalenone, ) 잘분쇄된시료 25 g에추출액 (ACN:DW = 75:25) 125 ml 를넣고, homoginizer를 10,000 rpm으로 2분간회전하여 을추출하였다. 여과지 (Whatman No. 4) 를이용하여추출액을여과한후 20 ml을취하여 80 ml의 PBS 액과혼합하였다. 이혼합액을다시한번여과하고그중 25 ml을 immunoaffinity column에유속이 2~3 ml/min되도록통과시켰다. 20 ml PBS 액으로 column을세척한후 3mL MeOH 로 backflushing을 3회실시하면서중력에의해 을용출시켰다. 이어서, 이액을 50 o C에서질소로건고시켰으며, ACN:DW = 20:80 1 ml로다시녹여시액으로사용하였다. 분석흐름도는 Fig. 2과같다. Table 1. Conditions of mobile phase Time A (DW) B (ACN) 0 88 12 6 88 12 10 20 80 14 20 80 16 88 12 20 88 12 column (C18, 5 µm) 을사용하였고, 30 o C에서 20분간분석하였다. ACN과 DW를이동상으로하여구배조건 (gradient) 을사용하였고 (Table 1), 유속은 1.0 ml/min로설정하였다. 주입량은 50 µl로하였으며, 과 의분석을위하여흡광검출기 (diode array detector, DAD, 220 nm) 와형광검출기 (fluorescence detector, FLD, Ex = 275 nm, Em = 450 nm) 를각각사용하였다. 이때 의머무름시간은대략 6.7 분정도이었으며, 의머무름시간은대략 14분정도이었다. 과 의분석시이동상을달리하여따로따로단성분분석할수도있다. 이때 은이동상조건을 85% 혹은 88% ACN으로하여분석시간을 10분정도로하여분석할수있다. 이때많은양의시료를분석할때에는컬럼에오염물질이충분히제거될수있도록하는조치가필요하다. 은 60% ACN을이동상조건으로하여분석하는등필요에따라다양한조건으로분석가능하다. 본실험에서는 과 의동시분석법을사용하였으며, 전체분석시간이 20분이며또한기기의 autosampler기능을사용했을때 시료와 시료의일정량을취하여혼합한후한번에분석가능하도록기기조건을설정할수있다. 비록전처리방법이같지않아완전한동시분석법은아니나하나의분석조건으로두성분을분석하고, 자연스럽게컬럼세척을할수있으며, 위에서설명하였듯이두시료를동시에분석할수도있는장점이있다. 이동상조건과크로마토그램은다음과같다. 회수율실험 과 의회수율실험을위하여독소가오염되지 기기분석조건 과 분석을위하여 ZORBAX 80Å Extend-C18 column (reversed-phased column, 4.6 250 mm, 5 µm) 과 guard Fig. 3. Chromatogram of STD (: 1,000 µg/kg, : 500 µg/kg).

Contamination of mycotoxins in feed 217 않은시료가필요하나, 일반배합사료에서는그러한사료를찾기가힘들다. 그래서비교적오염이덜된닭사료를선정하여 5회분석하여평균을구했다. 이시료에 과 을각각 200과 1,000, 100과 500 µg/kg 수준이되도록표준물질을가한후앞의방법에따라 5회반복하여측정하였다. 나중에측정값에서 blank값을뺀후회수율계산에사용하였다. 검출한계및정량한계측정 과 의검출한계는 signal/noise (S/N) 비율이 3:1 기준으로측정하였으며정량한계는 S/N 비율이 10:1 기준으로측정하였다. 검량과계산준비된표준용액을 HPLC에주입하여, DAD와 FLD로검출하였고, 각각의농도에따른피크의면적을그래프로계산함으로써검량선을작성하였다. 결과 분석법검증 과 의검량선작성을위하여각각의표준품을 50, 100, 500, 1,000 µg/l과 25, 50, 250, 500 µg/l의농도로희석하여사용하였다. 각각의독소양에대한 peak 의면적으로검량선을작성하였으며 (Fig. 4), 검량식은 과 이각각 y = 0.0714x + 0.1282와 y = 0.053x + 0.035이었다. 결정계수 (R 2 ) 는모두 0.9999 이었다. 의회수율은 200과 1000 µg/kg 수준에서 95.4와 88.8% 이었으며, 상대표준편차 (%RSD) 는 4.0과 1.4% 이었다. 은 100과 500 µg/kg 수준에서회수율과상대표준편차 (%RSD) 가각각 87.1과 98.4%, 9.1과 2.8% 로나타났다. 자세한결과는 Table 2와같다. 피크의넓이가 S/N = 3일때를기준으로검출한계를설정하였고 S/N = 10일때를기준으로정량한계를설정하였다. 의경우정성한계 6.0 µg/kg, 정량한계 20.0 µg/kg 이었다. 은각각 3.0 µg/kg 과 10.0 µg/kg 의검출, 정량한계를나타내었다. Fig. 4. Calibration curve (a:, b: ). Table 2. Accuracy and precision of and determined in fortified feed at two concentrations Toxins (n=3) (n=3) 오염도조사결과 배합사료 Level (µg/kg) Average recovery (%) Results(µg/kg) ±SD %RSD 200 95.4 190.8 ± 7.7 4.0 1000 88.8 887.6 ± 12.4 1.4 100 87.1 87.1 ± 7.9 9.1 500 98.4 492.0 ± 13.8 2.8 닭사료의경우 2009년도에 과 이평균 212.3과 31.2 µg/kg의오염수준을보인것에비하여 1) 2010년에는 372.1과 76.1 µg/kg으로거의 2배정도의오염정도를나타내었다. 세계곡물가상승에따라2010년도가전년도에비하 Table 3. Incidence and levels of mycotoxins in compound feed Toxin Feed Sample number Average(µg/kg) Maxium(µg/kg) Contamination rate(%) Chicken 40 30 212.3 372.1 908.0 938.7 100 100 Pig 40 30 207.8 324.0 1566.0 1128.8 100 100 Cattle 60 30 812.1 990.9 2940.0 1941.2 100 100 Chicken 40 30 31.2 76.1 141.8 556.6 100 100 Pig 40 30 35.6 43.7 262.0 175.8 100 100 Cattle 60 30 147.2 196.2 558.0 608.0 100 100

218 Dong-Ho Kim, Kyu-Il Choi, Kyung-Suk Hong, Hyun-Jung Kim, Han-Sub Jang, Hyun-Jung Cho, and Gye-Su Han 여저급의원료가사용되고있음을예측할수있었으며, 역시모든시료에서오염이확인되었다. 돼지사료의경우 2009 년도에 과 이평균 207.8과 35.6 µg/kg의오염수준을보인것에비하여 2010년에는 324.0과 43.7 µg/kg의오염수준을나타내어닭사료와비슷한경향을나타내었다. 소사료의경우 2009년도에 과 이각각 812.1과 147.2 µg/kg의오염상태를보인것에비하여 2010년에는평균990.9과 196.2 µg/kg으로역시닭사료나돼지사료처럼 2010년도의유통사료가전년도에비하여상대적으로높은곰팡이독소오염도를나타내었다. 자세한분석결과는 Table 3과같다. 소사료 총 30점의소사료에대하여오염도조사를실시하였다. 사료의종류에따라서 9종으로구분하여분석을실시하였 다. 임신우사료와비임신우사료와의오염도관계, 비육용사료와젖소용사료와의독소오염도관계를살펴보았다. 2009년도에는임신우사료에서다소높은값을나타내었으나 1), 2010년에는반대로더낮은분석값을나타내어, 어떤상관관계를찾을수없었다. 젖소용사료가두해모두비육용사료에비하여낮은수치의독소가확인되었으며, 미국등일부국가에서비육용사료와젖소사료를구분하여허용기준치를설정하고있는점을주목하여야한다. 가장높은오염도를나타낸그룹은큰소비육전기용사료로써 과 이평균 1598.9와 471.4 µg/kg으로 2009년의 687.9 와 104.2 µg/kg와비교하여볼때상당히높은값을나타내었다. 자세한조사결과는 Table 4와같다. 돼지사료 돼지사료의경우임신돼지용사료에서 이 486.0 µg/ Table 4. Incidence and levels of mycotoxins in cattle feed Toxin Feed Sample number Average (µg/kg) Maxium (µg/kg) Contamination rate (%) Beef cattle, pregnant 14 7 1173.5 914.4 2940.0 1941.2 100 100 Dairy cow, pregnant - 3-749.7-914.3-100 Cattle, fatting, early 9 2 687.9 1598.9 1504.0 1769.1 100 100 Cattle, fatting, middle - 3-1121.7-1941.2-100 Cattle, fatting, last 9 4 1020.5 1004.8 2840.0 1696.5 100 100 Dairy cow, early 10 2 445.8 735.6 1294.0 851.4 100 100 Dairy cow, middle 5 2 851.2 1093.5 1296.0 1346.3 100 100 Dairy calf, middle 4 3 446.2 1078.0 1104.0 1502.7 100 100 Dairy calf, last 4 4 991.0 724.7 2420.0 1030.9 100 100 Beef cattle, pregnant 14 7 223.1 160.6 558.0 559.4 100 100 Dairy cow, pregnant - 3-122.1-185.7-100 Cattle, fatting, early 9 2 104.2 471.4 179.4 608.0 100 100 Cattle, fatting, middle - 3-223.4-353.3-100 Cattle, fatting, last 9 4 212.0 191.8 478.0 332.6 100 100 Dairy cow, early 10 2 72.1 114.6 149.8 122.0 100 100 Dairy cow, middle 5 2 166.6 297.0 193.8 480.2 100 100 Dairy calf, middle 4 3 79.0 231.2 159.6 397.6 100 100 Dairy calf, last 4 4 118.7 124.6 142.4 225.3 100 100 Table 5. Incidence and levels of mycotoxins in pig feed Toxin Feed Sample number Average (µg/kg) Maxium (µg/kg) Contamination rate(%) Pregnant 10 10 364.9 486.0 1566.0 1128.8 100 100 Fatting, early 5 5 156.0 234.5 472.0 359.4 100 100 Fatting, last 5 5 227.5 267.4 366.0 487.1 100 100 Piglet over 5 kg 5 5 139.7 288.1 360.0 383.0 100 100 Lactating 5 5 251.2 182.1 556.0 268.9 100 100 Pregnant 10 10 56.7 42.3 262.0 57.7 100 100 Fatting, early 5 5 28.4 32.6 79.6 50.5 100 100 Fatting, last 5 5 41.1 90.0 63.0 175.8 100 100 Piglet over 5 kg 5 5 24.3 21.0 68.0 25.7 100 100 Lactating 5 5 44.1 76.0 81.4 175.8 100 100

Contamination of mycotoxins in feed 219 kg로가장높은오염수치를나타내었다. 나머지사료들은 182.1~288.1 µg/kg으로임신돼지와는상당한차이를보였다. 은육성돈후기용사료, 포유돼지용사료, 임신돼지용사료순으로오염되어있었다. 임신돼지사료의경우 과 의평균합이 500 µg/kg가넘고, 이최대 1128.8 µg/kg의수치를보이는시료도확인되었다. 닭사료 닭사료의경우도 Table 6에서보듯이전년도에비하여 2010년도에상대적으로높은수준의오염도를나타내었다. 은 2009년도에산란용사료에서 207.9~437.6 µg/kg의오염수준을보인데비하여 2010년에는 427.5~485.5 µg/kg 정도의오염수준을나타내었다. 육계사료에서는육계전기용사료의경우 2009년도에 116.0 µg/kg의오염도를보인데비하여 2010년도에 361.1 µg/kg로 3배정도높은오염도를보였다. 육계후기용사료는 188.6과 186.3 µg/kg으로비슷한오염정도를나타내였다. 의경우도 과마찬가지 로 2010년도사료에서높은오염수치를나타내었으며, 특히산란초기사료에서높았다. 사료종류에따라서는산란용사료가육계사료보다더높은곰팡이독소오염도를나타내었다. 두해모두 2배정도산란용사료가더높은결과를나타내었으며, 이 938.7 µg/kg, 이 556.6 µg/kg로동시에높게검출되는시료도확인되었다. 단미사료 옥수수의경우 2009년에 과 이평균 70.1과 9.2 µg/kg의오염수준을나타내었고, 2010년에는각각 224.6 과 77.8 µg/kg의오염수준을나타내어상대적으로전년보다독소오염이심한옥수수가사료원료로사용됐음을확인할수있었다. 단백피의경우 2009년도에 과 이각각 4551.1과 812.1 µg/kg의평균오염수준을나타낸데비하여이번에는 3150.4와 308.5 µg/kg의오염수준을나타내었 다. 역시항상높은오염도를나타내고있었으나, 은 Table 6. Incidence and levels of mycotoxins in chicken feed Toxin Feed Sample number Average (µg/kg) Maxium (µg/kg) Contamination rate(%) Chick, laying, young 3 3 207.9 427.5 314.0 560.3 100 100 Chick, laying, middle 4 7 403.5 485.5 908.0 724.1 100 100 Laying, early 5 6 437.6 441.3 664.0 938.7 100 100 Fatting, early 12 7 116.0 361.1 220.0 610.9 100 100 Fatting, last 12 7 188.6 186.5 304.0 234.6 100 100 breeding 4-102.5-119.2-100 - Chick, laying, young 3 3 23.3 67.3 56.0 117.4 100 100 Chick, laying, middle 4 7 39.0 63.6 65.6 118.1 100 100 Laying, early 5 6 93.7 150.0 141.8 556.6 100 100 Fatting, early 12 7 20.7 72.2 66.8 184.3 100 100 Fatting, last 12 7 23.4 33.0 45.4 46.0 100 100 breeding 4-6.2-8.2-100 - Table 7. Incidence and levels of mycotoxins in components Toxin Feed Sample number Average (µg/kg) Maxium (µg/kg) Contamination rate(%) Corn 7 4* 70.1 224.6 214.0 329.8 85.7 100 Corn gluten feed 9 5** 4551.1 3150.4 8480.0 5541.2 100 100 Corn germs meal 4 4 350.3 37.8 656.0 209.8 100 100 Corn gluten 10 5 69.3 207.3 170.8 1184.8 100 60 Distillers grains (Corn distillers grains) 2 5 (3) 335.0 721.5 (2405.0) 670.0 2881.6 (2881.6) 50 60 (100) Corn 7 4* 9.2 77.8 25.2 277.3 100 100 Corn gluten feed 9 5** 812.2 308.5 1072.0 519.7 100 100 Corn germs meal 4 4 455.2 116.9 872.0 187.2 100 100 Corn gluten 10 5 75.2 510.8 284.0 1329.9 100 100 Distillers grains (Corn distillers grains) 2 5 (3) 95.4 163.1 (264.4) 190.8 374.0 (374.0) 50 80 (100) *:Imported from USA **:Imported from china

220 Dong-Ho Kim, Kyu-Il Choi, Kyung-Suk Hong, Hyun-Jung Kim, Han-Sub Jang, Hyun-Jung Cho, and Gye-Su Han 2009년에비하여상당히낮은수치를나타내었다. 이것은두해모두중국산수입단백피이었음에도불구하고, 2009 년도에는독소고오염배합사료제조회사에서직접수거한단백피시료이었고 1), 2010년도에사용한시료는사료검정을위하여각지방자치단체에서무작위로수거된시료이기때문인것으로생각된다. 2009년도의경우옥수수와단백피와의독소오염수준이현격히차이가나기때문에옥수수에오염되어있던독소가단백피로농축되어고농도의독소오염단백피가생성된다고판단하기에그근거가부족하였으나, 2010년의경우옥수수에서 Table 7과같은오염도를보임에따라단백피의독소오염을설명할수있다. 옥수수글루텐의경우 2009년에 과 이평균 69.3 와 75.2 µg/kg의오염수준을나타내었으며, 2010년도에는 207.3와 510.8 µg/kg의오염수준을나타내어역시 2010년도에더높은오염도를나타내었다. 또한대부분의시료에서 이 보다높은오염도를보이는것이일반적인데옥수수글루텐에서는 이 보다상당히높게검출되었다. 옥수수배아박은 2009년도에 과 이 69.3 과 75.2 µg/kg, 2010년에 37.8과 116.9 µg/kg의수치를보였으며, 옥수수글루텐과마찬가지로 이 보다높은값을나타내었다 1). 주정박의경우원료별로구분하여 5점을분석하였다. 그결과현미등다른곡류를이용한주정박에서는독소가검출되지않거나아주낮은수준으로검출되는반면에옥수수주정박에서는 과 이각각 2,405.03과 264.42 µg/kg의평균오염도를나타내었다. 각각의단미사료에대한자세한분석결과는 Table 7과같다. 고찰 2009년도에이어 2010년도에사료중곰팡이독소오염도조사를계속하였다. 곰팡이독소중 2009년도에많이오염된것으로확인된 과 에대하여오염도조사를계속하였으며, 사료관리법에유해물질로지정될것에대비하여공정법으로사용할수있는분석법을정립하고검증하였다. 면역친화컬럼 (IAC) 을이용하여정제하였으며, HPLC/DAD 와 FLD로분석하였다. 비록정제방법이다르나, 같은기기조건으로분석할수있도록하여 과 을동시에분석하여야할경우편리하게이용할수있도록하였다. 오염도조사결과닭사료, 돼지사료, 소사료에서 과 이각각 372.1, 324.0, 990.9 µg/kg와 76.1, 43.7, 196.2 µg/kg의평균오염도를나타내었다. 닭이나돼지사료의경우산란계나임신돼지용에서보다높은독소오염을나타냄에따라산란과계란으로의전이, 임신및출산에미치는영향등에대하여자세히살펴볼필요가있다. 소사료는다른축종에비하여보통 2~3배높 은수준으로검출되고있으나, 푸사리움독소의감수성은돼지에서가장높고, 외국 (EU, 미국, 캐나다, 일본 ) 의 관리기준 ( 돼지사료 : 1,000 µg/kg, 소사료와닭사료 : 5,000 µg/ kg) 이나 관리기준 ( 돼지사료 : 250 µg/kg, 소사료 : 500~ 1,000 µg/kg) 과비교하여볼때위험한수준은아니었다. 그러나, 이러한결과는 2009년도의분석값과비교했을때상당히높은수준으로, 2010년도에곰팡이독소가많이오염된저급농산물이사료원료로사용되었다고생각할수있었다. 또한, 이러한배합사료의오염은대부분옥수수와그부산물로만들어지는단미사료에기인하는것으로단백피, 옥수수배아박, 옥수수주정박등이주요한오염원임을확인할수있었다. 이러한곰팡이독소에대하여우리나라를포함한세계각국은계속해서그관리를강화해나가고있는추세이나아직관련자료는충분치않으며, 소비자들은항상곰팡이독소노출의위험에빠져있다. 따라서다양한시료및독소에대한광범위한오염실태조사및독성평가, 분석법개발등다각적인연구를통하여사료및식품에대한안전성을확보하여야할것이다. 요약 2010년유통사료 113점에대하여곰팡이독소오염도조사를실시하였다. 면역친화컬럼 (IAC) 을이용하여각각정제하였으며, HPLC/ DAD와 FLD를연결하여동시분석하였다. 은 200과 1,000 µg/kg수준에서각각 95.40과 88.76% 의회수율과 4.03 과 1.40% 의상대표준편차 (%RSD) 를나타내었다. 은 100과 500 µg/kg 수준에서각각 87.09과 98.40% 의회수율과 9.01과 2.81% 의상대표준편차 (%RSD) 를나타내었다. 배합사료인닭사료, 돼지사료, 소사료에서 과 이각각 372.1, 324.0, 990.9 µg/kg와 76.1, 43.7, 196.2 µg/kg 의평균오염도를보여 2009년도조사결과보다높은오염수준을나타내었다. 옥수수, 단백피, 주정박, 옥수수배아박, 옥수수글루텐에서는 과 이각각 224.6, 3150.4, 721.5, 37.8, 207.3 µg/kg와 77.8, 308.5, 163.1, 116.9, 510.8 µg/kg로나타남에따라역시배합사료에곰팡이독소를오염시키는주원인물질로확인되었다. 참고문헌 1. Kim, D.H., Kim, H.J., Jang H.S., Kim, Y.M., Choi, H.B., Ahn, J.S.: Simultaneous Analysis and Contamination of Nivalenol, Deoxynivalenol, T-2 toxin and Zearalenone in Feed. J. Fd Hyg. Safety, 26(1), 1-11 (2011). 2. Ahn, J., Kim, D., Kim, H., Jahng, K.Y.: Quantitative determination of mycotoxins in urine by LC-MS/MS. Food Addit. Contam., 27(12), 1674-82 (2010).

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