(51) Int. Cl. (19) 대한민국특허청(KR) (12) 공개특허공보(A) A61K 39/00 (2006.01) A61K 38/04 (2006.01) (21) 출원번호 10-2007-7020251 (22) 출원일자 2007년09월04일 심사청구일자 없음 번역문제출일자 2007년09월04일 (86) 국제출원번호 PCT/DK2006/000061 국제출원일자 2006년02월03일 (87) 국제공개번호 WO 2006/081826 국제공개일자 (30) 우선권주장 2006년08월10일 60/650,751 2005년02월07일 미국(US) PA 2005 00173 2005년02월04일 덴마크(DK) (11) 공개번호 10-2007-0108536 (43) 공개일자 2007년11월12일 (71) 출원인 수르벡 에이피에스 덴마크 디케이-1826 프레데릭스베르그 씨. 알함브 라바이 3 (72) 발명자 안데르센 마스 할드 덴마크 디케이-2850 네룸 헤근스바이 61 (74) 대리인 박장원 전체 청구항 수 : 총 75 항 (54) 서바이빈 펩티드 백신 (57) 요 약 본 발명은 1개 이상의 서바이빈 폴리펩티드 단편을 포함하는 치료 백신에 관한 것이다. 상기 백신은 암 등의 예 방, 개선 및/또는 치료용으로 사용될 수 있다. 또한, 본 발명은 조합 치료 방법에 관한 것이다. - 1 -
특허청구의 범위 청구항 1 i. 1개 이상의 서바이빈 펩티드 또는 서바이빈 펩티드 변이체: 여기서, 상기 펩티드 변이체의 서열은 전체 길이 에 걸쳐서 SEQ ID NO: 23의 연속적인 아미노산 서열과 85% 이상 동일한 것임, 및 ii. 유중수 에멀젼용으로 배합되고, 광유 및 계면 활성제를 포함하며, 상기 계면 활성제를 14.5 부피% 이하로 함유하는 애주번트 를 포함하는 약제용 백신 조성물. 청구항 2 제1항에 있어서, 상기 애주번트는 상기 계면 활성제를 5 14 부피%로 함유하는 것인 백신 조성물. 청구항 3 제1항 내지 제2항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 계면 활성제의 점도는 200 400 mpas인 것인 백신 조성물. 청구항 4 제1항 내지 제3항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 애주번트는 계면 활성 만니드 올레에이트(surfactant mannide oleate)를 포함하는 것인 백신 조성물. 청구항 5 제1항 내지 제4항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 백신은 인간에 대한 투여용인 것인 백신 조성물. 청구항 6 제1항 내지 제5항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 애주번트는 Montanide ISA 애주번트인 것인 백신 조성물. 청구항 7 제1항 내지 제6항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 애주번트는 Montanide ISA 51 또는 Montanide ISA 720인 것인 백신 조성물. 청구항 8 제1항 내지 제7항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 애주번트는 Montanide ISA 51인 것인 백신 조성물. 청구항 9 제1항 내지 제8항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 1개 이상의 서바이빈 펩티드 또는 서바이빈 펩티드 변이체 는 5개 이상의 아미노산 잔기 및 20개 이하의 아미노산 잔기로 이루어지는 것인 백신 조성물. 청구항 10 제1항 내지 제9항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 백신 조성물은, SEQ ID NO: 23의 연속적인 아미노산 서열 과 비교하여 아미노산이 1개 또는 2개 치환된, 7 20개의 연속적인 아미노산으로 이루어지는 서바이빈 펩티드 변이체를 포함하는 것인 백신 조성물. 청구항 11 제1항 내지 제10항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 백신 조성물은, SEQ ID NO: 23의 연속적인 아미노산 서열 과 비교하여 아미노산이 1개 치환된, 7 12개의 연속적인 아미노산으로 이루어지는 서바이빈 펩티드 변이체를 포함하는 것인 백신 조성물. 청구항 12 제1항 내지 제11항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 1개 이상의 서바이빈 펩티드 또는 서바이빈 펩티드 변이 - 2 -
체는 9개 또는 10개의 아미노산 잔기로 이루어지는 것인 백신 조성물. 청구항 13 제1항 내지 제12항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 1개 이상의 서바이빈 펩티드 변이체(들)의 펩티드 서열은, 1개 이상의 아미노산 잔기의 치환, 결실 또는 첨가에 의하여 고유 서바이빈 서열로부터 유도되어 질 수 있는 것으로서, 이에 의해서 주어진 HLA 분자에 대한 앵커 잔기 모티브를 가지는 펩티드가 얻어지는 것인 백신 조성물. 청구항 14 제1항 내지 제12항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 1개 이상의 서바이빈 펩티드 또는 서바이빈 펩티드 변이 체는, HLA-A1, HLA-A2, HLA-A3, HLA-A11 및 HLA-A24, HLA-B7, HLA-B8, HLA-B15, HLA-B27, HLA-B35, HLA-B44, HLA-B51 및 HLA-B58, HLA-Cw1, HLA-Cw2, HLA-Cw3, HLA-Cw4, HLA-Cw5, HLA-Cw6, HLA-Cw7 및 HLA-Cw16으로 이루 어지는 HLA 클래스 I 분자들 중 1개 이상으로 한정되는 것인 백신 조성물. 청구항 15 제1항 내지 제13항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 1개 이상의 서바이빈 펩티드 또는 서바이빈 펩티드 변이 체는 HLA-A1, HLA-A2, HLA-B7 및 HLA-B35로 이루어지는 HLA 클래스 I 분자들 중 1개 이상으로 한정되는 것인 백신 조성물. 청구항 16 제14항에 있어서, 상기 1개 이상의 서바이빈 펩티드 또는 서바이빈 펩티드 변이체는 HLA-A1로 한정되는 것인 백 신 조성물. 청구항 17 제14항에 있어서, 상기 1개 이상의 서바이빈 펩티드 또는 서바이빈 펩티드 변이체는 HLA-A2로 한정되는 것인 백 신 조성물. 청구항 18 제14항에 있어서, 상기 1개 이상의 서바이빈 펩티드 또는 서바이빈 펩티드 변이체는 HLA-B7로 한정되는 것인 백 신 조성물. 청구항 19 제14항에 있어서, 상기 1개 이상의 서바이빈 펩티드 또는 서바이빈 펩티드 변이체는 HLA-B35로 한정되는 것인 백신 조성물. 청구항 20 제1항 내지 제19항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 1개 이상의 서바이빈 펩티드 변이체는, 아미노산 잔기가 50개 이하이고, FTELTLGEF (SEQ ID NO: 16), LMLGEFLKL (SEQ ID NO: 5), EPDLAQCFY (SEQ ID NO: 9), APPAWQPFL (SEQ ID NO: 13) 및 RPPAWQPFL (SEQ ID NO: 14)로 이루어지는 군에서 선택되는 펩티드를 포함하는 것인 백신 조성물. 청구항 21 제1항 내지 제20항 중 어느 하나의 항에 있어서, 1개 이상의 서바이빈 펩티드 변이체는 FTELTLGEF (SEQ ID NO: 16), LMLGEFLKL (SEQ ID NO: 5), EPDLAQCFY (SEQ ID NO: 9), APPAWQPFL (SEQ ID NO: 13) 및 RPPAWQPFL (SEQ ID NO: 14)로 이루어지는 군에서 선택되는 것인 백신 조성물. 청구항 22 APPAWQPFL (SEQ ID NO: 13) 및 RPPAWQPFL (SEQ ID NO: 14)로 이루어지는 군에서 선택되는 펩티드를 포함하고, HLA-B7과 결합할 수 있으며, 아미노산 잔기가 50개 이하인 서바이빈 펩티드 변이체. - 3 -
청구항 23 제22항에 있어서, 상기 펩티드는 APPAWQPFL (SEQ ID NO: 13)인 것인 서바이빈 펩티드 변이체. 청구항 24 제22항에 있어서, 상기 펩티드는 RPPAWQPFL (SEQ ID NO: 14)인 것인 서바이빈 펩티드 변이체. 청구항 25 1개 이상의 서바이빈 펩티드 또는 펩티드 변이체를 포함하는 백신 조성물로서, 상기 펩티드 변이체의 서열은 전 체 길이에 걸쳐서 SEQ ID NO: 23의 연속적인 아미노산 서열과 85% 이상 동일하고, 상기 조성물은 i. HLA-B7 결합 펩티드 및/또는 HLA-A1 및 HLA-A2 한정 펩티드 및/또는 HLA-A1 및 HLA-B35 한정 펩티드와, ii. 애주번트 를 포함하는 것인 백신 조성물. 청구항 26 제25항에 있어서, 상기 서바이빈 변이체는 50개 이하의 아미노산으로 이루어지고, i. 펩티드 APPAWQPFL (SEQ ID NO: 13) 및/또는 펩티드 RPPAWQPFL (SEQ ID NO: 14) 및/또는 펩티드 FTELTLGEF (SEQ ID NO: 16) 및 LMLGEFLKL (SEQ ID NO: 5) 및/또는 펩티드 FTELTLGEF (SEQ ID NO: 16) 및 EPDLAQCFY (SEQ ID NO: 9) 및/또는 펩티드 LMLGEFLKL (SEQ ID NO: 5) 및 EPDLAQCFY (SEQ ID NO: 9)와, ii. 애주번트 를 포함하는 것인 백신 조성물. 청구항 27 a) i. 1개 이상의 펩티드 또는 펩티드 변이체는 HLA-A1 결합 펩티드의 군에서 선택되며, ii. 1개 이상의 펩티드 또는 펩티드 변이체는 HLA-A2 결합 펩티드의 군에서 선택되고, iii. 1개 이상의 펩티드 또는 펩티드 변이체는 HLA-B35 결합 펩티드의 군에서 선택되는 것인, 3개 이상의 서바이빈 펩티드 또는 서열이 전체 길이에 걸쳐서 SEQ ID NO: 23의 연속적인 아미노산 서열과 85% 이상 동일한 서바이빈 펩티드 변이체와, b) 애주번트 를 포함하는 것인 백신 조성물. 청구항 28 i. 1개 이상의 서바이빈 펩티드 또는 서열이 전체 길이에 걸쳐서 SEQ ID NO: 23의 연속적인 아미노산 서열과 85% 이상 동일한 서바이빈 펩티드 변이체와, ii. 애주번트 를 포함하고, 환자의 종양 기질(tumor stroma)에서 항원 특이적 T 세포의 침윤(infiltration)을 유도할 수 있는 것인 약제용 백신 조성물. - 4 -
청구항 29 제28항에 있어서, 혈관형성을 억제할 수 있는 것인 백신 조성물. 청구항 30 제29항에 있어서, 상기 HLA-A1 결합 펩티드는 FTELTLGEF (SEQ ID NO: 16)인 것인 백신 조성물. 청구항 31 제29항에 있어서, 상기 HLA-A2 결합 펩티드는 LMLGEFLKL (SEQ ID NO: 5)인 것인 백신 조성물. 청구항 32 제29항에 있어서, 상기 HLA-B35 결합 펩티드는 EPDLAQCFY (SEQ ID NO: 9)인 것인 백신 조성물. 청구항 33 제29항에 있어서, 펩티드 FTELTLGEF (SEQ ID NO: 16), LMLGEFLKL (SEQ ID NO: 5) 및 EPDLAQCFY (SEQ ID NO: 9)를 포함하는 것인 백신 조성물. 청구항 34 c) xv. 1개 이상의 펩티드 또는 펩티드 변이체는 HLA-A1 결합 펩티드의 군에서 선택되며, xvi. 1개 이상의 펩티드 또는 펩티드 변이체는 HLA-A2 결합 펩티드의 군에서 선택되고, xvii. 1개 이상의 펩티드 또는 펩티드 변이체는 HLA-A3 결합 펩티드의 군에서 선택되며, xviii. 1개 이상의 펩티드 또는 펩티드 변이체는 HLA-A24 결합 펩티드의 군에서 선택되고, xix. 1개 이상의 펩티드 또는 펩티드 변이체는 HLA-A11 결합 펩티드의 군에서 선택되며, xx. 1개 이상의 펩티드 또는 펩티드 변이체는 HLA-B35 결합 펩티드의 군에서 선택되고, xxi. 1개 이상의 펩티드 또는 펩티드 변이체는 HLA-B7 결합 펩티드의 군에서 선택되는 것인 7개 이상의 서바이빈 펩티드 또는 서열이 전체 길이에 걸쳐서 SEQ ID NO: 23의 연속적인 아미노산 서열과 85% 이상 동일한 서바이빈 펩티드 변이체와, d) 애주번트 를 포함하는 것인 백신 조성물. 청구항 35 제34항에 있어서, 상기 HLA-A1 결합 펩티드는 FTELTLGEF (SEQ ID NO: 16)이고, 상기 HLA-A2 결합 펩티드는 LMLGEFLKL (SEQ ID NO: 5)이며, 상기 HLA-A3 결합 펩티드는 RISTFKNWPK (SEQ ID NO: 20)이고, 상기 HLA-A24 결 합 펩티드는 STFKNWPFL (SEQ ID NO: 41)이며, 상기 HLA-A11 결합 펩티드는 DLAQCFFCFK (SEQ ID NO: 19)이고, 상기 HLA-B35 결합 펩티드는 EPDLAQCFY (SEQ ID NO: 9)이며, 상기 HLA-B7 결합 펩티드는 LPPAWQPFL (SEQ ID NO: 10)인 것인 백신 조성물. 청구항 36 제34항 내지 제35항 중 어느 하나의 항에 있어서, 70개 이하의 아미노산으로 이루어지는 것인 백신 조성물. 청구항 37 제34항에 있어서, i. HLA-B44 결합 펩티드의 군에서 선택되는 1개 이상의 펩티드 또는 펩티드 변이체 및/또는 ii. HLA-B27 결합 펩티드의 군에서 선택되는 1개 이상의 펩티드 또는 펩티드 변이체 및/또는 iii. HLA-B51 결합 펩티드의 군에서 선택되는 1개 이상의 펩티드 또는 펩티드 변이체 - 5 -
를 더 포함하는 것인 백신 조성물. 청구항 38 제37항에 있어서, 상기 HLA-B44 결합 펩티드는 KETNNKKKEY (SEQ ID NO: 42)이고, 상기 HLA-B27 결합 펩티드는 ERMAEAGFI (SEQ ID NO: 43)이며, 상기 HLA-B51 결합 펩티드는 RAIEQLAAM (SEQ ID NO: 44)인 것인 백신 조성물. 청구항 39 제37항 또는 제38항에 있어서, 100개 이하의 아미노산으로 이루어지는 것인 백신 조성물. 청구항 40 제34항, 제37항 또는 제38항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 HLA-A11 결합 펩티드는 DLAQCFFCFK (SEQ ID NO: 19), DVAQCFFCFK (SEQ ID NO: 45), DFAQCFFCFK (SEQ ID NO: 46) 또는 DIAQCFFCFK (SEQ ID NO: 47)로 이루 어지는 군에서 선택되는 것인 백신 조성물. 청구항 41 제1항 내지 제22항 및 제25항 내지 제40항 중 어느 하나의 항에 있어서, ML-IAP, BCL-2, BCL-X, MCL-1 또는 TRAG-3 펩티드 또는 HLA 클래스 I 분자와 결합할 수 있는 이들의 펩티드 변이체로 이루어지는 군에서 선택되는 1개 이상의 펩티드 또는 펩티드 변이체를 더 포함하는 것인 백신 조성물. 청구항 42 i. a) 서바이빈 폴리펩티드 (SEQ ID NO: 23), b) SEQ ID NO: 23의 5개 이상의 연속적인 아미노산으로 이루어지는 서바이빈 펩티드 또는 c) 7개 이상의 아미노산으로 이루어지는 서바이빈 펩티드 변이체로서, 상기 펩티드 변이체의 서열이 전체 길 이에 걸쳐서 SEQ ID NO: 23의 연속적인 아미노산 서열과 85% 이상 동일한 것인 서바이빈 펩티드 변이체 를 암호화하는 핵산과, ii. 애주번트 를 포함하는 백신 조성물. 청구항 43 제1항 내지 제21항 및 제25항 내지 제42항에 있어서, 제2 활성 성분을 포함하는 것인 백신 조성물. 청구항 44 제43항에 있어서, 상기 제2 활성 성분은 항암 약제인 것인 백신 조성물. 청구항 45 제43항에 있어서, 상기 제2 활성 성분은 화학요법제인 것인 백신 조성물. 청구항 46 제43항에 있어서, 상기 제2 활성 성분은 혈관형성 억제제인 것인 백신 조성물. 청구항 47 전술한 항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 백신 조성물은 환자에게 강한 특이적 세포독성 T 세포 반응을 일 으킬 수 있고, 백신 조성물의 투여 후에 ELISPOT 분석에 의해서 측정되는 강한 특이적 T 세포 반응이 10 4 PBMC 세포에 대하여 펩티드 특이점이 50개 이상인 것인 백신 조성물. 청구항 48 전술한 항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 백신 조성물은 환자의 종양 기질에서 항원 특이적 T 세포의 침윤 - 6 -
을 유도할 수 있는 것인 백신 조성물. 청구항 49 전술한 항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 백신 조성물은 환자에게서 혈관형성 억제를 할 수 있는 것인 백신 조성물. 청구항 50 전술한 항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 백신 조성물은 환자에게서 임상 반응을 일으킬 수 있고, 상기 임 상 반응은 진행정지(stable disease), 부분관해(partial response) 또는 완전관해(complete remission)인 것을 특징으로 하는 것인 백신 조성물. 청구항 51 전술한 항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 백신 조성물은 환자에게서 임상 반응을 일으킬 수 있고, 상기 임 상 반응은 표적 병변의 최장 직경의 합의 감소를 특징으로 하는 것인 백신 조성물. 청구항 52 전술한 항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 백신 조성물은 환자에게서 임상 반응을 일으킬 수 있고, 상기 임 상 반응은 완전관해인 것을 특징으로 하는 것인 백신 조성물. 청구항 53 1개 이상의 서바이빈 펩티드 또는 서바이빈 펩티드 변이체와 애주번트를 포함하는 백신 조성물의 용도로서, 상 기 조성물은 환자에게서 강한 특이적 세포독성 T 세포 반응을 일으킬 수 있고, 백신 조성물의 투여 후 ELISPOT 분석에 의하여 측정할 때 강한 특이적 T 세포 반응은 10 4 개의 PBMC 세포당 펩티드 특이점이 50개가 넘는 것인, 암치료용 약제의 제조를 위한 백신 조성물의 용도. 청구항 54 암 치료용 약제의 제조를 위한 제1항 내지 제21항 및 제25항 내지 제52항 중 어느 하나의 항 기재의 백신 조성 물의 용도. 청구항 55 제54항에 있어서, 상기 암은 악성 흑색종, 췌장암, 자궁경부암 또는 결장암인 것인 용도. 청구항 56 제53항 내지 제55항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 약제는 혈관형성 억제용인 것인 백신 조성물의 용도. 청구항 57 a) i. 1개 이상의 서바이빈 펩티드 또는 서열이 전체 길이에 걸쳐서 SEQ ID NO: 23의 연속적인 아미노산 서열과 85% 이상 동일한 서바이빈 펩티드 변이체와, ii. 애주번트 를 포함하는 백신 조성물과, b) 제2 약제 를 포함하는 키트 인 파트(kit in parts). 청구항 58 제57항에 있어서, 상기 제2 약제는 화학요법제를 포함하는 것인 키트 인 파트. 청구항 59-7 -
제57항에 있어서, 상기 제2 약제는 혈관형성 억제제를 포함하는 것인 키트 인 파트. 청구항 60 제57항 내지 제59항에 있어서, 상기 백신 및 약제는 동시, 분리 또는 연속 투여용인 것인 키트 인 파트. 청구항 61 a) 제1항 내지 제21항 및 제25항 내지 제52항 기재의 백신 조성물을 제공하는 단계와, b) 상기 백신 조성물을 환자에게 투여하는 단계 - 상기 백신 조성물은 두 번 이상 투여하여도 좋다; 및 c) 그에 따라 환자에게 상기 백신 조성물의 투여 후 ELISPOT 분석에 의해 측정할 때 10 4 개의 PBMC 세포당 펩티 드 특이점이 50개가 넘는 강한 특이적 T 세포 반응을 자극하는 단계와, d) 환자에게서 강한 특이적 T 세포 반응을 얻는 단계 를 포함하는 환자에게서 서바이빈에 대한 강한 특이적 T 세포 반응을 자극하는 방법. 청구항 62 a) 제1항 내지 제21항 및 제25항 내지 제52항 기재의 백신 조성물을 제공하는 단계와, b) 상기 백신 조성물을 환자에게 투여하는 단계 - 상기 백신 조성물은 두 번 이상 투여하여도 좋다; 를 포함하는 질병의 치료 또는 예방 방법. 청구항 63 a) 제1항 내지 제21항 및 제25항 내지 제52항 기재의 백신 조성물을 제공하는 단계와, b) 상기 백신 조성물을 환자에게 투여하는 단계 - 상기 백신 조성물은 두 번 이상 투여하여도 좋다; 및 c) 그에 따라 환자에게 상기 백신 조성물의 투여 후 ELISPOT 분석에 의해 측정할 때 10 4 개의 PBMC 세포당 펩티 드 특이점이 50개가 넘는 강한 특이적 T 세포 반응을 자극하는 단계와, d) 환자에게서 임상 반응을 얻는 단계 를 포함하는 질병의 치료 또는 예방 방법. 청구항 64 제61항 내지 제63항 중 어느 하나의 항에 있어서, 백신 조성물의 투여 후 ELISPOT 분석에 의해 측정할 때, 상기 강한 특이적 T 세포 반응은 10 4 개의 PBMC 세포당 펩티드 특이점이 250개가 넘는 것인 방법. 청구항 65 제61항 내지 제64항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 질병은 암인 것인 방법. 청구항 66 제65항에 있어서, 상기 암은 악성 흑색종, 췌장암, 자궁경부암 및 결장암으로 이루어지는 군에서 선택되는 것인 방법. 청구항 67 제65항 내지 제66항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 백신 조성물의 투여가 진행정지, 부분관해 또는 완전관 해를 가져오는 것인 방법. 청구항 68 제67항에 있어서, 상기 백신 조성물의 투여가 표적 병변의 최장 직경의 합을 감소시키는 결과를 가져오는 것인 방법. - 8 -
청구항 69 a) 제1항 내지 제21항 및 제25항 내지 제52항 기재의 백신 조성물을 제공하는 단계와, b) 상기 백신을 환자에게 투여하는 단계 를 포함하는 환자의 종양 기질 내에 항원 특이적 T 세포의 침윤을 유도하는 방법. 청구항 70 a) 제1항 내지 제21항 및 제25항 내지 제52항 기재의 백신 조성물을 제공하는 단계와, b) 환자에게 상기 백신 조성물을 투여하는 단계 를 포함하는 혈관형성을 억제하는 방법. 청구항 71 a) 제1항 내지 제21항 및 제25항 및 제52항 기재의 백신 조성물과, b) 제2 약제 를 동시에, 연속하여 또는 임의의 순서로 분리하여 투여하는 것을 포함하는 조합 치료 방법. 청구항 72 제71항에 있어서, 상기 제2 약제는 항암제인 것인 조합 치료 방법. 청구항 73 제71항에 있어서, 상기 제2 약제는 화학요법제인 것인 조합 치료 방법. 청구항 74 제71항에 있어서, 상기 제2 약제는 혈관형성 억제제인 것인 조합 치료 방법. 청구항 75 활성 성분으로서 1개 이상의 서바이빈 펩티드 또는 서바이빈 펩티드 변이체 및 애주번트를 포함하는 백신 조성 물을 포함하는 암치료용 약제. 명 세 서 <1> 기 술 분 야 본 발명은 1종 이상의 서바이빈(survivin) 폴리펩티드 단편을 포함하는 치료 백신에 관한 것이다. 상기 백신은, 예컨대 암의 예방, 개선 및/또는 치료용으로 사용될 수 있다. 본 발명은 또한 조합 치료(combination treatment) 방법에 관한 것이다. <2> <3> 배 경 기 술 포유류 면역 시스템은 외래 또는 이질 물질에 대해 인식하고 반응한다. 상기 시스템의 중요한 일면은 T 세포 반 응이다. 이 반응은 T 세포가, 인간 주조직적합 복합체 (MHC)를 구성하는 인간 백혈구 항원 (HLA)으로서 일컬어 지는 세포 표면 분자와 펩티드의 복합체를 인식하고 이것과 상호작용하는 것이 필요하다. 상기 펩티드는 세포에 의해 가공되고, 또한 HLA/MHC 분자를 제공하는 더 큰 분자로부터 유도된다. T 세포와 HLA/펩티드의 복합체의 상 호작용은 제한적인데, 이는 HLA 분자와 펩티드의 특정 조합에 대해 특이적인 T 세포를 필요로 하기 때문이다. 만약 특이적 T 세포가 존재하지 않는다면, 그 파트너 복합체가 존재한다 하더라도 T 세포 반응은 일어나지 않는 다. 마찬가지로, T 세포가 존재하지만 특이적 복합체가 없다면, 반응은 일어나지 않는다. 인간 종양관련항원 (TAA)으로부터 유도된 펩티드 에피토프가 MHC 분자의 맥락하에서 세포독성 T 림프구 (CTL)에 의해 인식될 수 있다는 것과 전부는 아니라 해도 대부분의 종양이 그러한 항원을 발현한다는 사실은 잘 확립되 어 있다. 따라서, 환자에게 효과적인 항종양 CTL 반응을 생성하기 위해서, 백신 및 입양 T 세포 치료(adoptive - 9 -
T cell therapy) 등의 전략으로 이들 TAA를 목표로 하여 활발한 임상적 노력이 진행중이다. <4> <5> <6> <7> <8> <9> <10> <11> 그러나, 항원 상실 변이체(antigen loss variant)의 면역선택은 임상 종양학에서 공지의 대부분의 CTL 에피토프 의 치료제로서의 잠재능력에 대한 심각한 장애물이 될 수 있고, 항원 결핍 돌연변이 종양의 선택은 암의 성장에 역할을 하지 않는 항원을 표적화할 때 잘 인식된 치료 전략에서의 한계이다. 그 이유는 대부분의 특징지어진 펩티드들이 종양 세포의 생존에 필수적인 것이 아닌 폴리펩티드에서 유래되 것 이기 때문이다. 따라서, 백신접종 등의 치료 수단에 의하여 이들 펩티드 항원에 대해 강력한 CTL 반응이 유도된 다면, 표적 항원의 발현이 부족한 종양 세포라도 높은 면역 반응을 매우 잘 나오게 할 것이다. 보다 효율적인 치료 백신 및 개선된 암 치료법이 요구된다. T 세포가 세포 이상을 인식하는 것에 의한 메커니즘은 암에서도 역시 관련되어 있다. WO92/20356에서, 차례로 세포 표면에서 발현되는 펩티드로 가공되는 유전자 군이 기재되고 있고, 이는 특정 CTL에 의해서 종양 세포의 용해를 이끌 수 있다. 이들 유전자는 MAGE 군이라고 지칭되고, "종양 거부 항원 전구체(tumor rejection antigen precursors)" 또는 "TRAP" 분자에 대한 코드라고도 불리어 지기도 하며, 이들로부터 유도된 펩티드는 "종양 거부 항원(tumor rejection antigens)" 또는 "TRAs"라고 불리어진다. 그러나, 전부는 아니지만 대부분의 종양이 항원성이라는 것이 일반적으로 받아들여지지만, 종양 진행이 면역계 에 의하여 용이하게 조절된다는 의미에서는 단지 일부만이 진정한 면역원성인 것이다. 이를 극복하기 위하여, 몇몇 면역요법적인 시도가 TAA-유래 펩티드로의 백신접종을 사용하여 개시된바 있다. CTL 한정 TAA의 최대 개수가 특징지어진 종양인, 흑색종의 경우, 항원에 대한 강력한 CTL 반응이 백신접종으로 유래 되었고, 몇몇 환자들은 그들의 병의 완전관해를 경험하였다. 그러나, 이들 백신 접종 시도에서 사용된 펩 티드 에피토프의 대부분은 멜라닌 세포에 특이적이고, 이들 펩티드는 멜라닌 세포 기원이 아닌 종양에 대해서 적용할 수 없다. 더욱이, 이들 TAA의 발현은 상이한 환자로부터의 종양들 사이에서 비균질적이고, 한 명의 환자 로부터 얻어진 전이암들 사이에서도 변할 수 있다. 그러나, 최근 2년 동안, 많은 상이한 암에서 발현되는 많은 종양 특이적 펩티드 항원, 즉 HER-2, Muc-1 및 텔로머라제가 동정되어왔다. 또한, 적절한 조작에 의해서 종양에 존재하는 종양 항원이 면역계에 노출될 수 있다는 것이 알려졌다. 연구들은 면역 반응의 CD8+ CTL 팔(arm)이, 단독으로 또는 CD4+ Th 세포와의 조합으로, 적응 면역 반응의 1차 항종양 효 과기 팔을 구성한다는 것을 보여주었다. 현재까지, 면역 반응의 CTL 팔에 초점이 주로 맞추어져 있었다. 그러나, 특히 유도 단계에서 또는 생체 내 CTL 반응의 연장에서, CD4 T 세포 반응이 종양 거부에 있어서 중요한 역할을 한다는 것은 더 명백하게 되고 있다. 따라서, 효율적인 종양 백신 프로토콜로의 클래스 I 제한 종양 항 원의 편입이 백신의 효율성을 증가시킬 수도 있다. 세포자멸사(apoptosis)는 세포 자살의 유전적 프로그램이고, 세포자멸사의 억제는 형질전환 돌연변이의 축적을 선호하는 세포의 수명을 연장하는 것에 의한 암의 형성과 관련이 있는 중요한 메커니즘으로 제안되어 왔다. 서 바이빈은 최근에 동정된 세포자멸사 단백질의 억제제(inhibitors of apoptosis proteins, IAPs) 군의 일원이다. 약 4백만 개의 전사체의 전체적인 유전자 발현 분석에서, 서바이빈은 정상조직이 아닌 많은 종류의 암에서 변함없이 업 조절된 상위 유전자(top gene) 중의 하나로서 확인되었다. 서바이빈은 과발현하는 고형암 (solid malignancies)으로는 폐, 결장, 유방, 췌장 및 전립선암뿐만 아니라 조혈 악성 종양을 들 수 있다. 또한, 일련의 흑색종(melanoma) 및 비흑색종(non-melanoma) 피부암은 변함없이 서바이빈 양성인 것으로 보고되 어왔다. 대부분의 인간의 암에서 서바이빈의 과발현은 종양 진행에서 세포자멸사 억제의 일반적인 역할, 즉 결 장직장암 및 방광암뿐만 아니라 신경모세포종의 경우에 있어서 서바이빈의 발현이 좋지않은 예후와 관련되어 있 다는 관찰에 의해 실증된 개념을 제시한다. 서바이빈은 다른 세포자멸사 억제제로서 종양 혈관형성 동안 내피세 포에서 발현되고, 혈관형성 동안 서바이빈의 안티센스 표적이 내피세포의 세포자멸사를 일으키고, 이는 시험관 내에서 모세관유사 관(capillary-like vessels)의 재빠른 붕괴를 촉진한다. 이와 대조적으로, 서바이빈은 보통 의 성인 조직에서는 찾을 수 없다. 서바이빈이 대부분의 인간의 암에서 과발현되고, 그 기능의 억제가 세포자멸 사의 증가를 가져오기 때문에, 이러한 단백질은 치료적인 CTL 반응에 대한 표적이 될 수 있다. 서바이빈 단백질 과 그의 잠재적인 진단 및 치료 용도가 본 명세서에 참조 통합되는 US 6,245,523에 개시되어 있다. 서바이빈은 단일 BIR와, RING 핑거 대신에 고도로 하전된 카르복시 말단 나선 영역을 함유하는 16.5 kda의 세포질 단백질이 고, B 세포 전구체에서 전달될 때, 성장인자 (IL-3)의 회수(withdrawal)에 의하여 유도되는 세포자멸사를 억제 한다. 서바이빈을 암호화하는 유전자는 작동 세포 프로테아제 수용체-1(Effector Cell Protease Receptor-1, EPR-1)의 서열과 거의 동일하지만, 반대 방향으로 배향되므로, 머리머리 배위(head-to-head configuration)에서 - 10 -
복제된 두 개의 분리 유전자의 존재를 제안한다. 따라서, 서바이빈은 안티센스 EPR-1 산물로서 설명될 수 있다. 두 개의 유전자의 반대 배향 때문에, 암호화된 단백질에서의 아미노산 서열이 상이하다. <12> <13> <14> 기능적으로, 그의 천연 안티센스 EPR-1 전사물에 의한 업 조절(up-regulating)에 의한 서바이빈 발현의 억제는 대규모의 세포자멸사 및 세포 성장의 저하를 가져온다. US 6,245.523은 정제 서바이빈의 분리를 개시하고 있고, 서바이빈 단백질을 암호화하는 핵산과, 서바이빈에 결 합하는 항체 및 기타의 분자를 제공하고 있다. 또한, US 6,245,523은 서바이빈 단백질 및 아미노산 잔기가 공개 되어 있는 서바이빈 서열의 N-말단 또는 C-말단에 삽입된 또는 내부에 삽입된 서바이빈 단백질의 변이체의, 항 세포자멸사(anti-apoptotically) 활성 단편을 개시하고 있다. 이러한 펩티드가 세포자멸사를 위해 요구되는 중 요한 기능적인 잔기, 즉 67번 위치에서 Trp, 73번 위치에서 Pro 및 84번 위치에서 Cys를 함유하여야 한다는 것 이 구체적으로 개시되어 있다. 서바이빈 펩티드를 가진 수지상 세포로의 백신접종을 사용하여 ELISPOT 분석으로 측정할 때, 약한 특이적 T 세 포 반응이 일어날 수 있다는 것이 이미 개시된 바 있다 (WO2004/067023 및 Otto, K. et al., J. Vaccine (2004)). 반응은 10 4 개 세포에 대하여 30 미만이었고, 이어지는 임상 결과의 평가는 진행(progressive diseas e)으로 나타났다. 따라서, 이러한 백신은 유용성이 단지 매우 제한적이다. 따라서, 매우 강한 특이적 T 세포 반 응을 유도할 수 있고, 특히 질병의 진행이 억제되는 임상 반응을 유도할 수 있는 백신의 개발에 주된 관심이 있 다. <15> <16> <17> 발명의 상세한 설명 본 특허 출원에서 언급되는 모든 특허 및 비특허 참조 문헌들은 그 전부가 본 명세서에 참조 통합된다. 발명의 요약 본 발명은, 서바이빈 단백질로부터 유래된 MHC 클래스 I 제한 펩티드가 MHC 클래스 I HLA 분자와 결합할 수 있 음으로 해서, 광범위한 종류의 암으로 고통받는 환자에게서 생체 외(ex vivo) 및 원위치(in situ) CTL 면역 반 응을 모두 일으킬 수 있다는 발견에 기초한다. 치료에의 사용에 앞서, 임상 결과와 함께 면역 반응을 분석하여 암 치료용 백신 조성물의 유용성을 평가하는 것이 필수적이다. 면역접종 후 특이적 T 세포 반응이 일어난다면 백신으로 유용한 잠재적인 항원에 대한 유용한 지표가 될 수 있다. 예컨대, 10 4 개의 PBMC에 대하여 INF-γ 방출 세포가 50개 이상인 것과 같은, 매우 강한 T 세포 반응을 일으킬 수 있는 백신 조성물이 바람직한데, 이는 이러 한 강력한 T 세포 반응이 암 치료에 이 백신 조성물을 이용할 수 있는 성공가능성을 높여주기 때문이다. 본 발 명은 부분적인 또는 완전한 종양 퇴행(regression)을 유도할 수 있는 특유의 효과적인 백신 조성물을 개시하고 있다. 이들 발견은, 서바이빈이 종양 세포에 의해 보편적으로 발현된다는 사실에 근거할 때, 암을 통제하는데 일반적으로 적용할 수 있는, 신규의 치료 접근법에 대한 길을 열어준다는 것이 분명하다. <18> <19> <20> <21> <22> <23> 본 명세서에 기재된 백신 조성물 또는 면역원성 조성물은, 펩티드가 종양 (neoplasia)과 싸울 수 있는 CTL 반응 을 일으키므로, 약학적 조성물에 적격이다. 따라서 상기 백신 조성물은 치료용 백신, 또는 치료 또는 약학적 조 성물로서 적격이다. 한 가지 측면에서, 본 발명은 1개 이상의 서바이빈 펩티드 또는 서열이 전체 길이에 걸쳐서 SEQ ID NO: 23의 연 속적인 아미노산 서열과 85% 이상 동일한 서바이빈 펩티드 변이체와, 유중수 에멀젼용으로 배합되고 광유 및 계 면 활성제를 포함하며 상기 계면 활성제를 14.5 부피% 이하로 함유하는 애주번트를 포함하는, 약제(medicamen t)용 백신 조성물에 관한 것이다. 본 발명의 한 가지 측면은, APPAWQPFL (SEQ ID NO: 13) 및 RPPAWQPFL (SEQ ID NO: 14)으로 이루어지는 군에서 선택되는 펩티드를 포함하고, HLA-B7과 결합할 수 있으며, 아미노산 잔기가 50개 이하인 서바이빈 펩티드 변이 체에 관한 것이다. 본 발명의 한 가지 측면은, 1개 이상의 서바이빈 펩티드 또는 펩티드 변이체를 포함하는 백신 조성물로서, 상기 펩티드 변이체의 서열은 전체 길이에 걸쳐서 SEQ ID NO: 23의 연속적인 아미노산 서열과 85% 이상 동일하고, 상 기 조성물은, i. HLA-B7 결합 펩티드 및/또는 HLA-A1 및 HLA-A2 제한 펩티드 및/또는 - 11 -
<24> <25> <26> <27> <28> <29> <30> <31> <32> <33> <34> <35> <36> <37> <38> <39> <40> <41> <42> <43> <44> <45> <46> <47> <48> <49> HLA-A1 및 HLA-B35 제한 펩티드와, ii. 애주번트 를 포함하는 백신 조성물에 관한 것이다. 본 발명의 한 가지 측면은, i. 1개 이상의 펩티드 또는 펩티드 변이체는 HLA-A1 결합 펩티드의 군에서 선택되며, ii. 1개 이상의 펩티드 또는 펩티드 변이체는 HLA-A2 결합 펩티드의 군에서 선택되고, iii. 1개 이상의 펩티드 또는 펩티드 변이체는 HLA-B35 결합 펩티드의 군에서 선택되는 것인, 3개 이상의 서바이빈 펩티드 또는 서열이 전체 길이에 걸쳐서 SEQ ID NO: 23의 연속적인 아미노산 서열과 85% 이상 동일한 서바이빈 펩티드 변이체와, 애주번트를 포함하는 백신 조성물에 관한 것이다. 본 발명의 또 다른 측면은 7개 이상의 서바이빈 펩티드 또는 서바이빈 펩티드 변이체 및 애주번트를 포함하는 백신 조성물로서, 상기 펩티드 변이체의 서열은 전체 길이에 걸쳐서 SEQ ID NO: 23의 연속적인 아미노산 서열과 85% 이상 동일하고, i. 1개 이상의 펩티드 또는 펩티드 변이체는 HLA-A1 결합 펩티드의 군 중에서 선택되며, ii. 1개 이상의 펩티드 또는 펩티드 변이체는 HLA-A2 결합 펩티드의 군 중에서 선택되고, iii. 1개 이상의 펩티드 또는 펩티드 변이체는 HLA-A3 결합 펩티드의 군 중에서 선택되며, iv. 1개 이상의 펩티드 또는 펩티드 변이체는 HLA-A24 결합 펩티드의 군 중에서 선택되고, v. 1개 이상의 펩티드 또는 펩티드 변이체는 HLA-A11 결합 펩티드의 군 중에서 선택되며, vi. 1개 이상의 펩티드 또는 펩티드 변이체는 HLA-B35 결합 펩티드의 군 중에서 선택되고, vii. 1개 이상의 펩티드 또는 펩티드 변이체는 HLA-B7 결합 펩티드의 군 중에서 선택되는 것인 백신 조성물에 관한 것이다. 고형 종양의 발달은 혈관의 생성에 의존한다. 따라서 혈관형성의 억제는 고형 종양의 발달을 막을 수 있다. 종 양 혈관형성 동안의 내피 세포(endothelia cell)에서의 서바이빈, bcl-2 및 Mcl-1의 발현은, 본 명세서에 기재 된 것과 같은 펩티드를 사용한 백신접종(veccination)이 항혈관형성 효과(anti-angiogenic effect)를 가질 수 있다는 것을 시사한다. 본 발명의 한 가지 측면은 1개 이상의 서바이빈 펩티드 또는 펩티드 변이체와 애주번트를 포함하는 약제용 백신 으로서, 상기 펩티드 변이체의 서열은 전체 길이에 걸쳐서 SEQ ID NO: 23의 연속적인 아미노산 서열과 85% 이상 동일하고, 환자에게 종양 기질 중에 항원 특이적 T 세포의 침윤을 유도할 수 있는 것인 백신에 관한 것이다. 또 한 가지 측면에서, 본 발명은 i. a) 서바이빈 폴리펩티드 (SEQ ID NO: 23), b) 서바이빈 펩티드 또는 c) 서열이 전체 길이에 걸쳐서 SEQ ID NO: 23의 연속적인 아미노산 서열과 85% 이상 동일한 서바이빈 펩티드 변이체 를 암호화하는 핵산과, ii. 애주번트 를 포함하는 백신 조성물에 관한 것이다. 본 발명의 한 가지 측면은, 환자에게 매우 강한 특이적 세포독성 T 세포 반응을 일으킬 수 있는, 1개 이상의 서 바이빈 펩티드 또는 서바이빈 펩티드 변이체와, 애주번트를 포함하는 백신 조성물의 약제의 제조를 위한 용도에 관한 것이다. 매우 강한 특이적 T 세포 반응이 더 높은 비율의 양호한 임상 반응과 상응할 수 있기 때문에 이것 은 적절하다. 이와 관련하여, 매우 강한 특이적 T 세포 반응은, 백신 조성물의 투여 전과 후에 ELISPOT 분석으 - 12 -
로 측정할 때 10 4 PBMC 세포에 대하여 펩티드 특이점(specific spots)이 50개 이상인 반응과 같은 것이다. <50> <51> <52> <53> <54> <55> <56> <57> <58> <59> <60> <61> <62> <63> <64> <65> <66> <67> <68> <69> <70> <71> <72> <73> <74> <75> <76> <77> <78> <79> <80> 본 발명의 한 가지 측면은 i. a) 1개 이상의 서바이빈 펩티드 또는 서열이 전체 길이에 걸쳐서 SEQ ID NO: 23의 연속적인 아미노산 서열과 85% 이상 동일한 서바이빈 펩티드 변이체와, b) 애주번트 를 포함하는 백신 조성물과, ii. 제2 약제 를 포함하는 키트 인 파트(kit in parts)에 관한 것이다. 본 발명의 한 가지 측면은, a) 본 발명에 따른 백신 조성물을 제공하는 단계, b) 두번 이상 투여하여도 좋은 상기 백신 조성물을 환자에게 투여하는 단계, c) 이에 따라, 환자에게 백신 조성물의 투여 전과 후에 ELISPOT에 의해 측정할 때 10 4 PBMC 세포에 대하여 펩티 드 특이점이 50개 이상인 강한 특이적 T 세포 반응을 자극하는 단계 및 d) 환자에게 강한 특이적 T 세포 반응을 얻는 단계 를 포함하는, 환자에게서 서바이빈에 대한 강한 특이적 T 세포 반응을 자극하는 방법을 설명한다. 본 발명의 한 가지 측면은, a) 본 발명에 따른 백신 조성물을 제공하는 단계, b) 두번 이상 투여하여도 좋은 상기 백신 조성물을 환자에게 투여하는 단계 를 포함하는 질병의 치료 또는 예방 방법에 관한 것이다. 본 발명의 한 가지 측면은, a) 본 발명에 따른 백신 조성물을 제공하는 단계, b) 두번 이상 투여하여도 좋은 상기 백신 조성물을 환자에게 투여하는 단계, c) 이에 따라, 환자에게 백신 조성물의 투여 전과 후에 ELISPOT에 의해 측정할 때 10 4 PBMC 세포에 대하여 펩티 드 특이점이 50개 이상인 강한 특이적 T 세포 반응을 자극하는 단계 및 d) 환자에게 임상 반응을 얻는 단계 를 포함하는 질병의 치료 또는 예방 방법에 관한 것이다. 본 발명의 특정 측면은, a) 본 발명에 따른 백신을 제공하는 단계, b) 상기 백신 조성물을 환자에게 투여하는 단계, c) 종양 기질 중에 항원 특이적 T 세포의 침윤 또는 혈관형성의 억제를 얻는 단계 를 포함하는, 환자에게 종양 기질 중에 항원 특이적 T 세포의 침윤을 유도하거나 또는 환자에게 혈관형성을 억 제하는 방법에 관한 것이다. 본 발명의 한 가지 측면은, a) 본 발명에 따른 백신 조성물 및 b) 제2 약제 를 동시, 연속 및 임의의 순서로 분리 투여하는 것을 포함하는 조합 치료 방법에 관한 것이다. - 13 -
<81> <82> <83> <84> 정의: AA: "아미노산"을 참조. 애주번트(Adjuvant): 백신 애주번트는 항원에 대한 특정 면역 반응을 증가시키는 성분이다. 아미노산: 적어도 1개의 측쇄 또는 작용기를 포함하고, 탄소 원자 또는 탄소 원자의 사슬을 포함하는 중심부에 의해 분리되며, 아미노 말단부 (NH 2 )와 카르복시 말단부 (COOH)를 포함하여 이루어진다. NH 2 는 아미노산 또는 펩 티드의 아미노 말단에 존재하는 아미노기를 말하고, COOH는 아미노산 또는 펩티드의 카르복시 말단에 존재하는 카르복시기를 말한다. 아미노산이라는 일반적인 명칭은 천연 및 비천연 아미노산 모두를 포함한다. J. Biol. Chem., 243: 3552-59 (1969)에서 열거되고, 37 C.F.R., section 1.822(b)(2)에서 채택된 표준 명명법의 천연 아미노산은 다음의 표 1에 열거된 아미노산의 군에 속한다. 비천연 아미노산은 표 1에 열거되지 않은 것이다. 비천연 아미노산의 예는, 예컨대 37 C.F.R. section 1.822(b) (4)에서 열거된 것이 있고, 이는 모두 본 명세서 에 참조 통합된다. 본 명세서에서 설명되는 아미노산 잔기는 "D" 또는 "L" 이성질체 형태로 있을 수 있다. <85> 표 1 기호 아미노산 1 글자 3 글자 Y Tyr 티로신 G Gly 글리신 F Phe 페닐알라닌 M Met 메티오닌 A Ala 알라닌 S Ser 세린 I Ile 이소루신 L Leu 루신 T Thr 트레오닌 V Val 발린 P Pro 프롤린 K Lys 리신 H His 히스티딘 Q Gln 글루타민 E Glu 글루탐산 W Trp 트립토판 R Arg 아르기닌 D Asp 아스파르트산 N Asn 아스파라긴 C Cys 시스테인 천연 아미노산과 이들 각각의 부호 <86> <87> <88> <89> 아미노산 잔기: "아미노산 잔기"라는 용어는 1개 이상의 다른 화학종, 예컨대 2개, 예컨대 3개, 예컨대 3개 초 과의 다른 화학종과 반응된, 아미노산과, 표준 아미노산, 비표준 아미노산 또는 슈도아미노산(pseudo-amino acids) 중의 것을 포함하는 것을 의미한다. 특히, 아미노산 잔기는 유리 카르복실기에 위치하는 아실 결합 및/ 또는 아민 결합 및/또는 유리 아민기에 위치하는 아미드 결합을 포함할 수 있다. 또한, 반응한 아미노산 잔기는 아미드 결합 대신 에스테르 또는 티오에스테르 결합을 포함할 수 있다. 항체: 면역글로불린 분자 및 면역글로불린 분자의 활성 부분이다. 예를 들어 항체는 온전한 면역글로불린 분자 또는 면역 활성을 유지하는 이들의 단편이다. 항원: 항체에 의해 인식되는 분자이다. 일반적으로 펩티드, 폴리펩티드 또는 다합(multimeric) 폴리펩티드이다. 좋기로는 항원은 면역 반응을 일으킬 수 있다. A.P.I. 그래비티(gravity): 석유 산업에서 사용되는 용어로서, API (미국 석유 협회)에 의해 결정된 값에 따라 - 14 -
석유 액체의 상대적인 밀도를 표현하는 것이다. API 그래비티는 API 도(degree)로 눈금을 매긴 액체 비중계 장 치에 의해 측정된다. <90> <91> <92> <93> <94> <95> <96> <97> <98> <99> <100> <101> <102> <103> <104> <105> <106> <107> <108> <109> CTL: 세포독성 T 림프구. T 세포 수용체와 함께 CD8을 발현하는 T 세포군의 하부군이고, 따라서 클래스 I 분자 에 의해 나타나는 항원에 반응할 수 있다. 에멀젼: 제1 액체와 섞이지 않는 제2 액체 중에서의, 제1 액체의 작은 구체(small globules)의 현탁액. 유화제(emulsifier): 에멀젼의 형성을 촉진하는 표면 활성제. HLA: MHC라고도 불리는 인간백혈구항원(human leukocyte antigen). 3개의 상이한 MHC 클래스 I 분자, 즉 HLA- A, HLA-B 및 HLA-C가 인체에서 합성된다. 인간 MHC 클래스 II 분자는 HLA-D로 지칭된다. 면역글로불린: IgG, IgM, IgA, IgE 및 IgD를 포함하는 혈청 항체. 분리된(isolated): 이 용어는 천연의 환경에서의 성분으로부터 동정 및 분리 및/또는 회수된, 본 명세서에서 개 시되는 다양한 분비촉진물질(secretagogues), 폴리펩티드 및 뉴클레오티드를 설명하기 위해서 사용된다. 천연 환경의 오염 성분은 폴리펩티드의 진단 또는 치료적 사용을 통상적으로 방해할 수 있는 물질이고, 효소, 호르몬 및 기타의 단백질유사 또는 비( 非 )단백질유사 용질을 포함할 수 있다. 양호한 구체적인 예에서, 폴리펩티드는 정제될 것이다. 리간드: 1개 이상의 동족(cognate) 수용체와 특이적으로 결합할 수 있는, 예컨대 펩티드 등의 분자. 예를 들어 항원은 그의 동족 항체에 대한 리간드이다. MHC: HLA라고도 부르는 주조직적합 복합체. MHC의 2개의 주된 서브클래스, 즉 클래스 I 및 클래스 II가 존재한 다. 광유: 식물 및 동물 유래의 오일과 반대되는, 석유 등의 광원(mineral source)로부터 유래된 오일. 다양한 조성 의 탄화수소 혼합물. Montanide ISA (Montanide 불완전 셉픽 애주번트): 유중수 에멀전용으로 배합된 유성 애주번트. Montanide ISA 애주번트는 대사되지 않는 및/또는 대사가능한 오일이 계면 활성제와 결합된 오일/계면 활성 기재 애주번트의 군이다 (벨기에, 셉픽사로부터 구득). PBMC: 말초 혈액 단핵세포. PBL: 말초 혈액 백혈구 펩티드: 서열로 정의할 수 있고, 아미드 결합으로 연결된 다수의 공유결합적으로 결합된 아미노산 잔기. 이 용 어는 올리고펩티드 및 폴리펩티드와 유사하게 사용된다. 천연 및/또는 비천연 아미노산이 펩티드 결합에 의하여 또는 비( 非 )펩티드 결합에 의하여 연결될 수 있다. 또한, 펩티드라는 용어는, 당해 기술분야에서 공지의 화학적 반응 또는 효소 촉매 반응에 의해 도입되는 번역 후 변형체(post-translational modifications)를 포함한다. 표면 장력: 표면 장력은 표면적을 증가시키는데 필요한 에너지이다. 액체 분자 사이의 응집력이 표면 장력을 만 들고, 액체 표면의 분자들은 서로 강하게 응집한다. 계면 활성제: 계면 활성제가 용해된 액체의 표면 장력을 줄일 수 있는 표면 활성 제제. 계면 활성제는 친수성인 극성기와, 소수성인 및 종종 지방사슬로 구성되는 비극성기를 함유하는 화합물이다. TAA: 종양 관련 항원 발명의 상세한 설명 본 발명은 이하에서 설명하는 것과 같은 서바이빈 펩티드 및 서바이빈 펩티드 변이체를 포함하는 백신 조성물에 관한 것이다. 백신 조성물 본 발명에 따른 백신 조성물은, 좋기로는 인간에게 투여가능한 것인, 예컨대 1개 이상의 약학적으로 허용가능한 부형제 또는 담체와 활성제(active agent)의 혼합에 의한 것 등의 공지의 방법에 따라 배합될 수 있다. 이러한 부형제, 담체 및 배합 방법의 예는, 예컨대 Remington's Pharmaceutical Sciences (Maack Publishing Co, Easton, PA) 등의 문헌에서 찾을 수 있다. 효과적인 투여에 적합한 약학적으로 허용가능한 조성물을 배합하기 - 15 -
위해서, 본 발명에 따른 이러한 조성물은 본 명세서에서 설명하는 서바이빈 폴리팹티드, 서바이빈 펩티드 또는 서바이빈 펩티드 변이체을 효과적인 양으로 함유할 것이다. <110> <111> <112> <113> <114> <115> <116> <117> <118> <119> <120> <121> 본 발명에 따른 백신 조성물은 치료적 유효량으로 개인에게 투여될 수 있다. 이러한 유효량은 개인적인 조건, 몸무게, 성별 및 나이 등의 다양한 인자에 따라서 변화될 수 있다. 기타의 인자로 투여의 방식이 포함된다. 다음에서, 백신 조성물은, 예컨대 상기 조성물, 특히 표적 병변에 임상 반응을 유도할 수 있는 백신 조성물의 투여에 따른 강한 특이적 세포독성 T 세포 반응 등의 환자에게서의 면역 반응의 자극을 포함하는, 치료용으로 유용한 조성물을 포함하는 것을 의미한다. 본 발명의 백신 조성물은 임의의 전신 또는 국부 독성 반응 또는 기 타의 부작용을 유도하지 않는다는 점을 더욱 고려한다. 백신 또는 면역원성 조성물을 얻기 위해서 본 명세서에서 설명하는 비교적 작은 서바이빈 펩티드 및 서바이빈 펩티드 변이체 분자를, 예컨대 애주번트, 면역자극 성분 및/또는 담체 등의 다양한 물질과 결합시키는 것이 필 요할 것이다. 애주번트는 특이적 면역 반응을 강화시키기 위해 백신 조성물에 포함된다. 따라서, 항원과 결합될 때, 강한 특이적 세포독성 T 세포 반응을 유도할 수 있는 백신 조성물을 만들고, 가장 중요하게는 표적 병변에 임상 반응을 가져오는 애주번트를 동정하는 것이 특히 중요하다. 애주번트 많은 수의 애주번트가 생쥐, 쥐 및 토끼 등의 실험 동물에서 항체를 생산하는 데 사용되고 설명되어 왔다. 이러 한 설정에서, 부작용에 대한 내성이 주 목표가 강한 항체 반응을 얻는 것인 경우에 비해 다소 높았다. 약학적인 용도, 특히 인간용으로서의 승인 및 사용에 있어서, 애주번트를 포함하는 백신 조성물의 성분이 잘 특 징지어지는 것이 필요하다. 또한 조성물이 육아종, 농양 또는 열 등의 임의의 부작용에 대한 최소한의 위험을 가지는 것이 필요하다. 양호한 구체적인 예에서, 백신 조성물은 인간 환자에게 투여하는데 적합한 것이고, 따라서 양호한 애주번트는 인간 환자에게 투여하는데 적합한 것이다. 애주번트의 선택은 소망하는 면역 반응형, B 세포 및/또는 T 세포 활성화를 자극할 수 있는 능력에 의해 더 선 택되고, 백신 조성물은 관련 림프 조직에서의 분포 및 존재를 최적화되도록 배합될 수 있다. 최근에는, 항원성 펩티드를 가지는 적절한 항원 발현 세포의 충전을 포함하는 방법이, 암에 대한 직접적인 면역 반응을 마운팅하는 고도로 효율적인 방법으로서 제안되어 왔다. 이러한 방법은 환자로부터의 APC (PBL) 또는 APC 전구체 세포의 동정 및 항원성 펩티드를 가지는 이들의 충전과 관련이 있다. 그 대신에 수지상 세포가 사용 및 시험관 내(in vitro)에서 분화 및 환자에게의 주입에 앞서 항원성 펩티드로 충전될 수 있다. 이러한 방법은 매우 복잡하고, 시간이 많이 걸린다. 세포 배양의 사용은 이를 특별한 조제 및 저장 장치를 필요로 하는 매우 용통성이 없는 백신 조성물로 만든다. 본 발명은 조제 및/또는 저장이 용이한 백신 조성물을 동정하는 것을 목 표로 하였다. 치료용 백신에 유용한 애주번트로는 금속 염, 예컨대 알루미늄 히드록시드 및 알루미늄 또는 칼슘 포스페이트 겔, 오일 에멀젼 및 계면 활성제 기재 제형, 예컨대 MF59 (미세유동화(microfluidised) 세제 안정화 수중유 에 멀젼), QS21 (정제 사포닌), AS02 (SBAS2, 수중유 에멀젼 + 모노포스포릴 리피드 A (MPL) + QS21), Montanide ISA 51 및 ISA-720 (안정화 유중수 에멀젼), 애주번트 65 (땅콩유, 만니드 모노올레에이트 및 알루미늄 모노스 테아레이트 함유), RIBI (이뮤노켐 리서치 인크(ImmunoChem Research Inc.), 해밀턴, 유타), 입상 애주번트, 에컨대 비로좀 (인플루엔자 헤마글루티닌이 혼입된 단층(unilamellar) 리포좀 비히클), AS04 (MPL을 가지는 Al 염), ISCOMS (사포닌 및 리피드 (예컨대, 콜레스테롤)의 구조화된 복합체), 폴리락틱 코글리콜리드 (PLG), 미생 물 유도체 (천연 및 합성), 예컨대 모노포스포릴 리피드 A (MPL), 데톡스(Detox) (MPL + M. 플레이(M. Phlei) 세포 벽 골격), AGP (RC-529 (합성 아실화 모노사카라이드)), DC_chol (리포좀 속으로 스스로 조직화될 수 있는 지질성 면역자극물질), OM-174 (리피드 A 유도체), CpG 모티프 (면역자극 CpG 모티프를 함유하는 합성 올리고뉴 클레오티드), 비독성 애주번트 효과를 가지는 변형된 세균성 독소, LT 및 CT, 내인성 인간 면역조절 물질, 예컨 대 hgm-csf 또는 hil-12 또는 이뮤다프틴(Immudaptin) (C3d 직렬 어레이), 불활성 비히클, 예컨대 금 입자 등 을 들 수 있다. QS-21 및 Montanide ISA-51 애주번트는 멸균, 일회용 바이알로 제공된다. 한 가지 구체적인 예에서, 백신 조성물은 다음에 설명할 애주번트 및 서바이빈 펩티드 또는 서바이빈 펩티드 변 이체를 포함한다. 양호한 구체적인 예에서, 애주번트는 Montanide ISA-51, Montanide ISA 50, Montanide ISA - 16 -
70, Montanide ISA 206, Montanide ISA 708, Montanide ISA-720, Montanide ISA 763A, Montanide ISA 207, Montanide ISA 264, Montanide ISA 27, Montanide ISA 35, Montanide ISA 740, Montanide ISA 773, Montanide ISA 266, Montanide ISA 267, Montanide ISA 28, Montanide ISA 51F, Montanide ISA 016D 및 Montanide IMS를 포함하는, 몬타니드 불완전 셉픽 애주번트 (Montanide Incomplete Seppic Adjuvant, ISA) (Seppic, 벨기에)일 수 있다. 상기 마지막 3개는 아직 인간에게 사용이 허가되지 않았지만, 본 발명에 따른 백신 조성물용으로 잠재 적으로 유용하다. <122> <123> <124> <125> <126> <127> <128> <129> <130> <131> <132> <133> Montanide ISA-51 및 Montanide ISA-720은 특히 인간에 대해 사용하기 위한 것으로서 양호하며, 에멀젼으로 투 여되어야만 하는 오일 기재 애주번트이다 (이하 참조). 일부 구체적인 예에서, 백신 조성물은 1개 이상의 추가적인 면역자극 성분을 더 포함할 수 있다. 이들은 뮤라밀 디펩티드 (MDP), 예컨대 N-아세틸-뮤라밀-L-알라닐-D-이소글루타민 (ala-mdp), N-아세틸-뮤라밀-L-트레오닐- D-이소글루타민 (thr-mdp), N-아세틸-노르-뮤라밀-L-알라닐-D-이소글루타민 (CGP 11637, nor-mdp) 및 N-아세틸 -뮤라밀-L-알라닐-D-이소글루타미닐-L-알라닌-2-(1'-2'-디팔미토일-sn-글리세로-3-히드록시포스포릴옥시)-에틸 아민 (CGP 19835A, MTP-PE), 디메틸글리신, 투프트신(tuftsin) 및 트레할로스 디미콜레이트, 모노포스포릴-리피 드 A (MPL) 및 예컨대 N-포르밀-Met-Leu-Phe 등의 트리펩티드 함유 포르밀-메티오닌을 포함하지만 이에 한정되 는 것은 아니다. 이러한 화합물은, 예컨대 시그마 케미칼 컴퍼니(Sigma Chemical Co., 세인트루이스, 미주리) 및 RIBI 이뮤노켐 리서치 인크(RIBI ImmunoChem Research, Inc., 해밀턴, 몬타나)에서 시판중이다. 애주번트와 별개로 담체가 존재할 수 있다. 담체의 기능은, 예컨대 특히 서바이빈 단편의 분자량을 증가시켜 이 들의 활성 또는 면역원성을 증가시키는 것, 안정성의 부여, 생물학적 활성 증가, 또는 혈청 반감기의 증가 등일 수 있다. 담체는 당업자에게 공지의 임의의 적적한 담체일 수 있다. 담체 단백질은 키홀 림펫 헤모시아닌, 혈청 단백질, 예컨대 트란스페린, 소 혈청 알부민, 인간 혈청 알부민, 티로글로불린 또는 난알부민, 면역글로불린, 또는 호르몬, 예컨대 인슐린 또는 팔미트산일 수 있지만 이에 한정되는 것은 아니다. 인간의 면역에 있어서, 담 체는 인간에게 허용되고 안전한 생리학적으로 허용가능한 담체이어야 한다. 그러나, 파상풍 톡소이드 및/또는 디프테리아 톡소이드가 본 발명의 한 가지 구체적인 예에서 적절한 담체이다. 그 대신에, 담체는 예컨대 세파로 스 등의 덱스트란일 수 있다. 백신의 기초 오일 에멀전 및 계면 활성제는 유중수, 수중유 및 수중유중수 제형으로 분류될 수 있다. 수중유 제형에서 사용되는 애주번트는 광유 및/또는 비광유 및 계면 활성제/유화제일 수 있다. 애주번트는 백신 제형을 제공하는 수성 항원 조성물로 혼합된다. 본 발명에 따른 오일은 대사가능(metabolisable) 오일 또는 대사가능 하지 않은 오일 또는 대사가능 오일과 대 사가능 하지 않은 오일의 혼합물일 수 있다. 비광유는 빠르게 대사되고 주입 위치에서 제거되므로, 부작용이 거 의 없지만, 이어지는 면역 반응도 동일하게 작고, 반면 광유는 단지 부분적으로만 대사되고, 양호한 면역 반응 과 더불어 원하지 않는 효과를 유도할 높은 위험이 있다. 백신의 수성상의 첨가에 앞서, 오일을 만니드 모노-올레이트 등의 유화제와 미리 혼합하고, 콜로이드 밀(mill) 또는 연속 기계적 또는 플로우 초음파 유화기의 사용에 의해 유화시키는 것이 좋다. 보다 복잡한 이중 에멀젼 (수/유/수)은 소량의 Tween 80을 함유하는 수성상 중에서 한번 더 유화시킴으로써 제 조될 수 있다. 대안적인 '바로 사용할 수 있는(ready-to-use)' 오일 애주번트의 도입 이래로 최근 수년에 걸쳐서 상당한 진보 가 이루어져 왔다. 예를 들어, 옥타데세노산(octadecenoic acid)과 안히드로만니톨의 에스테르를 함유하는 오일 은, 복잡한 유화 장치의 필요 없이, 안정하고 동시에 점도가 낮은, 이중 또는 혼합된 에멀젼 (수/유/수)을 용이 하게 만든다. 한 가지 구체적인 예에서, 양호한 애주번트는 유중수 백신 제형용이다. 한 가지 구체적인 예에서, 양호한 오일 성분은 비광유일 수 있다. 양호한 구체적인 예에서, 애주번트는, 예컨대 Montanide ISA 708, Montanide ISA-720, Montanide ISA 763A, Montanide ISA 207, Montanide ISA 264, Montanide ISA 27 및 Montanide ISA 35 등의 Montanide ISA (불완전 셉픽 애주번트)기재의 비광유로 이루어지 는 군에서 선택된다. 그 대신에, 애주번트는 비광유 및/또는 광유를 포함할 수 있다. 따라서 양호한 구체적인 예에서, 애주번트는 비 광유 및/또는 예컨대 Montanide ISA 740, Montanide ISA 773, Montanide ISA 266, Montanide ISA 267, - 17 -
Montanide ISA 28 및 Montanide IMS 등의 Montanide ISA (불완전 셉픽 애주번트) 기재의 광유로 이루어지는 군 에서 선택된다. 여기서 상기 마지막 Montanide IMS는 인간에게의 사용을 위한 허가를 아직 받지 못하였다. <134> <135> <136> <137> <138> <139> <140> <141> <142> <143> <144> <145> <146> <147> <148> <149> <150> <151> <152> <153> 가장 양호한 구체적인 예에서, 오일 성분은 광유이다. 양호한 구체적인 예에서, 애주번트는, 예컨대 Montanide ISA 50, Montanide ISA-51, Montanide ISA 70, Montanide ISA 206과, Montanide ISA 51F 및 Montanide ISA 016D 등의 Montanide ISA (불완전 셉픽 애주번트 (셉픽, 벨기에)) 기재의 광유로 이루어지는 군에서 선택된다. 여기서 상기 마지막 2개 (Montanide ISA 51F 및 Montanide ISA 016D)는 인간에게의 사용을 위한 허가를 아직 받지 못하였다. 광유의 조성, 예컨대 탄소 사슬의 길이가 애주번트의 효율성에 영향을 미치는데, 짧은 사슬은 강한 면역 반응을 유도하지만, 국부적인 부작용을 가져오고, 반면 긴 사슬을 사용한 경우의 반응은 약하지만 두드러진 부작용은 없다. 따라서 광유는 잘 특징지어지고, 길고 짧은 탄소 사슬의 균형잡힌 조성을 가져야 한다. 사슬 길이가 C14 미만인 탄화수소가 8% 미만, 또는 예컨대 7% 미만, 또는 예컨대 6% 미만인 것이 좋고, 5% 미만인 것이 가장 좋 다. 광유는 불포화 또는 방향족 탄화수소를 함유하지 않는 것이 좋다. 오일 성분은 A.P.I. 그래비티가 32 40, 또는 예컨대 35 37 및 특히 예컨대 36.2-36.8인 것이 좋다. 더욱이, 광유는 25 에서의 비중이 0.82 0.84 또는 예 컨대 0.83 0.84인 것이 양호하고, 25 에서의 비중이 0.834 0.838인 것이 더욱 양호하다. 37.8 (100 F)에서의 점도가 55 65 SSU인 광유가 양호하고, 더 좋기로는 점도가 27 61인 광유가 사용되며, 37.8 (100 F)에서의 점도가 59 61 SSU인 광유가 특히 양호하다. 광유는 2 에서의 굴절율이 1.2 1.6, 또는 예컨대 1.3 1.6 또는 예컨대 1.4 1.5인 것이 양호하고, 1.458 1.463인 것이 가장 좋다. 다음의 특징 중 1개 이상이 있는 광유가 또한 양호하다. a) 최소 산 시험(minimum acid test) 보다 좋음, b) 360 nm 형광에 대한 음성, c) 가시 현탁 물질(visible suspended matter)에 대한 음성, d) 최소 ASTM 플래쉬 포인트가 295 F, e) 가벼운 광유(light mineral oil) 및 자외선 흡수에 대한 모든 RN 요구를 따름. 광유는 제약용 등급(pharmaceutical grade)이어야 한다. Drakeol 6 VR (Penreco, 텍사스)은 불포화 또는 방향족 탄화수소를 함유하지 않고, A.P.I. 그래비티가 36.2 36.8, 25 에서의 비중이 0.834 0.838, 37.8 (100 F)에서의 점도가 59 61 SSU 또는 10.0 10.6 센티스토크, 25 에서의 굴절률이 1.458.463이고, 최소 산 시험보다 좋으며, 360 nm 형광에 대한 음성이고, 가시 현탁 물질에 대한 음성이며, ASTM 붇기 시험(ASTM pour test) 수치가 0 15 F이고, 최소 ASTM 플래쉬 포인 트가 295 F이며, 가벼운 광유 및 자외선 흡수에 대한 모든 RN 요구를 따른다. 5% 미만의 광유는 짧은 사슬을 가 지는 탄화수소로 구성된다. 가장 양호한 구체적인 예에서, 광유는 Drakeol 6 VR이다. 계면 활성제 애주번트의 표면 장력이 계면 활성제에 의해서 조절될 수 있고, 그에 따라 애주번트 및 백신 제형의 점도에 영 향을 줄 수 있다. 계면 활성제의 독성 효과는 지방산의 잔류 수준에 상응하므로, 지방산의 수준이 낮은 고품질 의 계면 활성제가 필요하다. 계면 활성제는 제약용 등급이어야만 한다. 본 발명에 따른 애주번트는 계면 활성제를 포함할 수 있다. 구체적인 예에서, 애주번트는 광유 및 계면 활성제를 포함하는 유중수 에멀전용으로 배합되는데, 여기서 상기 애주번트는 상기 계면 활성제를 14.5 부피% 이하로 포함한다. 본 발명의 하나의 측면은, i. 1개 이상의 서바이빈 펩티드 또는 서열이 전체 길이에 걸쳐서 SEQ ID NO: 23의 연속적인 아미노산 서열과 - 18 -
85% 이상 동일한 서바이빈 펩티드 변이체와, <154> <155> <156> <157> <158> <159> <160> <161> <162> <163> <164> <165> <166> <167> <168> <169> <170> <171> <172> <173> ii. 광유 및 계면 활성제를 포함하고, 유중수 에멀전용으로 배합된 애주번트로서, 상기 애주번트는 상기 계면 활성제를 14.5 부피% 이하로 포함하는 것인 애주번트 를 포함하는 약제용 백신 조성물에 관한 것이다. 더 구체적인 예에서, 애주번트는 상기 계면 활성제를 2 14 부피%, 예컨대 상기 계면 활성제를 5 14 부피%, 예 컨대 상기 계면 활성제를 6 13 부피%, 예컨대 상기 계면 활성제를 7 12 부피% 또는 예컨대 상기 계면 활성제 를 8 12 부피%로 포함한다. 계면 활성제의 주된 지방산 종은 조성물의 65 88%를 구성하는 C18'인 것이 좋다. 계면 활성제는 오일, 예컨대 최대 산가(acid value)가 1인 지질 액체인 것이 더욱 좋다. 계면 활성제는 비누화값(saponification value)이 150 190, 또는 예컨대 160 170, 또는 예컨대 162 175인 것이 더욱더 좋고, 가장 좋은 비누화값은 164 172이다. 계면 활성제는 하이드록실값(hydroxyl value)이 70 120, 또는 예컨대 80 110, 또는 예컨대 80 110, 85 105 인 것이 더욱더 좋고, 가장 좋은 하이드록실값은 89 100이다. 계면 활성제는 요오드값(iodine value)이 40 100, 또는 예컨대 50 90, 또는 예컨대 60 80, 또는 예컨대 65 78인 것이 더욱더 좋고, 가장 좋은 요오드값은 67 75이다. 계면 활성제는 중금속값(heavy metal value)이 40 ppm 미만, 또는 예컨대 30 ppm, 또는 예컨대 25 ppm, 또는 예컨대 22 ppm인 것이 더욱더 좋고, 가장 좋은 중금속값은 20 ppm 미만이다. 계면 활성제는 최대 함수율(maximum water content)이 50%, 또는 예컨대 45%, 또는 예컨대 40%, 또는 예컨대 37%인 것이 더욱더 좋고, 가장 좋은 최대 함수율은 0.35%이다. 계면 활성제는 25 에서의 점도가 예컨대 200 400 mpas, 또는 예컨대 225 375 mpas, 또는 예컨대 250 350 mpas, 또는 예컨대 275 325 mpas인 것이 더욱더 좋고, 가장 좋은 25 에서의 점도는 약 300 mpas이다. 양호한 구체적인 예에서, 계면 활성제는 무수( 無 水 ) 만니톨 옥타데세노에이트라고도 알려진 만니드 올레에이트 (mannide oleate)이다. Montanide 80은 주요 지방산 종이 조성물의 65 88%를 구성하는 C18'인 올레산을 기재로 한다 (다양한 지방산이 분포). 오일은 최대 산가가 1이고, 비누화값이 164 172이며, 하이드록실값이 89 100이고, 요오드값이 67 75이며, 최 대 과산화물가(peroxide value)가 2이고, 중금속값이 20 ppm 미만이며, 최대 함수율이 0.35%이고, 최대 색값 (colour value)이 9이며, 25 에서의 점도가 약 300 mpas인 지질 액체이다. 가장 양호한 구체적인 예에서, 애주번트는 계면 활성제 만니드 올레에이트, Montanide 80 (셉픽, 벨기에)을 포 함한다. 더욱 양호한 구체적인 예에서, 애주번트는 광유 Drakeol 6VR 및 계면 활성제 만니드 올레에이트 (Montanide 8 0)를 포함한다. 바람직한 구체적인 예에서, 애주번트는 광유 Drakeol 6VR 및 계면 활성제 만니드 올레에이트를 포함하고, 여기 서 상기 애주번트는 14.5% 이하의 계면 활성 무수 만니톨 옥타데세노에이트 (Montanide 80)를 포함한다. 더욱 양호한 구체적인 예에서, 애주번트는 상기 계면 활성 무수 만니톨 옥타데세노에이트 2 14 부피%, 예컨대 상기 계면 활성 무수 만니톨 옥타데세노에이트 5 14 부피%, 예컨대 상기 계면 활성 무수 만니톨 옥타데세노에 이트 6 13 부피%, 예컨대 상기 계면 활성 무수 만니톨 옥타데세노에이트 7 12 부피%, 또는 예컨대 상기 계면 활성 무수 만니톨 옥타데세노에이트 8 12 부피%를 포함한다. 구체적인 예에서, 애주번트는 20 에서의 밀도가 약 0.7 1.0 또는 0.8 0.9 또는 좋기로는 약 0.85인 투명한 노란색 액체이다. 구체적인 예에서, 애주번트는 20 에서의 점도가 500 mpas 미만, 예컨대 250 mpas 미만 또는 예컨대 25 150 mpas 또는 좋기로는 약 150 mpas이다. - 19 -
<174> <175> <176> <177> <178> <179> <180> <181> 구체적인 예에서, 애주번트는 최대 산가가 0.5이다. 구체적인 예에서, 애주번트는 비누화값이 10 40, 예컨대 12 30, 예컨대 14 25, 또는 좋기로는 16 20이다. 구체적인 예에서, 애주번트는 하이드록실값이 5 20, 또는 예컨대 6 18, 또는 예컨대 7 15, 또는 좋기로는 9 13이다. 구체적인 예에서, 애주번트는 최대 과산화물가가 5 또는 4 또는 3 또는 좋기로는 2이다. 구체적인 예에서, 애주번트는 요오드값이 1 20, 예컨대 2 15, 예컨대 3 12 또는 좋기로는 예컨대 5 9이다. 구체적인 예에서, 애주번트는 최대 함수율이 2%, 예컨대 1.5%, 예컨대 1% 또는 예컨대 좋기로는 0.5%이다. 구체적인 예에서, 애주번트는 25 에서의 굴절률이 1.450 1.470 또는 1.455 1.465 또는 좋기로는 1.461 1.463이다. 구체적인 예에서, 애주번트와 염류의 50:50 혼합물의 전도율(conductivity)이 20 μscm -1 미만, 15 μscm -1, 12 μscm -1 또는 좋기로는 10 μscm -1 미만이다. <182> <183> <184> <185> <186> <187> <188> <189> <190> <191> <192> <193> <194> Montanide ISA 51은 광유 용액 (Drakeol 6 VR) 중에 만니드 올레에이트 (Montanide 80)를 함유한다. Montanide ISA 51은 약 8 12%의 무수 만니톨 옥타데세노에이트 및 약 88 92%의 광유를 함유한다. Montanide ISA 51은 20 에서의 밀도가 약 0.85이고, 20 에서의 점도가 약 50 mpas인 투명한 노란색 액체이다. Montanide ISA 51 은 최대 산가가 0.5, 비누화값이 16 20, 하이드록실값이 9 13, 최대 과산화물가가 2, 요오드값이 5 9, 최대 함수율이 0.5%, 25 에서의 굴절율이 1.455 1.465 또는 좋기로는 1.461 1.463인 것을 특징으로 한다. Montanide ISA 51과 염류의 50:50 혼합물의 전도율은 10 μscm -1 미만이다. 더욱 양호한 구체적인 예에서, 애주번트는 Montanide 불완전 셉픽 애주번트이다. 가장 양호한 구체적인 예에서, 백신 조성물은 i. 1개 이상의 서바이빈 펩티드 또는 서열이 전체 길이에 걸쳐서 SEQ ID NO: 23의 연속적인 아미노산 서열과 85% 이상 동일한 서바이빈 펩티드 변이체와, ii. 광유 및 계면 활성제를 포함하고, 유중수 에멀젼용으로 배합되며, 상기 계면 활성제를 14.5% 이하로 포함하 는 Montanide ISA 51인 애주번트 를 포함한다. 서바이빈 펩티드 또는 펩티드 변이체 면역요법의 이상적인 표적은 정상 조직에서는 발현되지 않고(silenced), 암 세포에서는 과발현되며, 종양 세포 의 생존과 진행에 직접적으로 관련이 있는 유전자 산물이다. 서바이빈은 잠재적으로 이러한 특성들을 만족하는 데, 이는 서바이빈이 세포 분열의 조절에 관련이 된다는 점 이외에도 세포자멸사를 억제하기 때문이다. 따라서, 서바이빈은 세포의 생리학적 죽음을 방지하여서, 세포의 생존을 연장시킨다. 서바이빈은, RING 핑거(finger) 대신에 고도로 하전된(charged) 카르복시 말단 나선 구역 및 단일 BIR을 함유하 는 16.5 kda의 세포질 단백질이다. 암호화 서열은 스톱 코돈을 포함하는 429 뉴클레오티드 길이 (SEQ ID NO: 22)이고, 암호화된 단백질 서바이빈은 142 아미노산 길이 (SEQ ID NO: 23)이다. 본 발명은 1개 이상의 서바이빈 펩티드 또는 서바이빈 펩티드 변이체를 포함하는 백신 조성물에 관한 것이다. 구체적인 예에서, 1개 이상의 서바이빈 펩티드 또는 서바이빈 펩티드 변이체는 142개 아미노산 잔기로 이루어지 는 전체 길이의 서바이빈 폴리펩티드 (SEQ ID NO: 23)를 포함한다. 1개 이상의 서바이빈 펩티드 또는 서바이빈 펩티드 변이체는 좋기로는 5개 이상의 아미노산 잔기를 포함하고, 더욱 좋기로는 7개 이상의 아미노산 잔기, 8개 이상의 아미노산 잔기, 9개 이상의 아미노산 잔기, 10개 이상의 아미노산 잔기, 11개 이상의 아미노산 잔기, 12개 이상의 아미노산 잔기, 14개 이상의 아미노산 잔기, 16개 이 상의 아미노산 잔기, 18개 이상의 아미노산 잔기, 또는 20개 이상의 아미노산 잔기를 포함한다. 구체적인 예에서, 1개 이상의 서바이빈 펩티드 또는 서바이빈 펩티드 변이체는 142개 이하의 아미노산 잔기 또 는 예컨대 120개 이하의 아미노산 잔기, 또는 예컨대 100개 이하의 아미노산 잔기, 좋기로는 80개 이하의 아미 - 20 -
노산 잔기 또는 예컨대 50개 이하의 아미노산 잔기로 이루어지는 것이 양호하고, 더욱 좋기로는 20개 이하의 아 미노산 잔기, 예컨대 18개 이하, 예컨대 16개 이하, 예컨대 14개 이하, 예컨대 12개 이하, 예컨대 11개 이하, 예컨대 10개 이하의 아미노산 잔기로 이루어지는 것이다. <195> <196> <197> <198> <199> <200> <201> <202> <203> 구체적인 예에서, 백신 조성물은, 5개 이상의 아미노산 잔기 및 SEQ ID NO: 23의 20개 이하의 연속적인 아미노 산 잔기로 이루어지는, 1개 이상의 펩티드 또는 펩티드 변이체를 포함한다. 구체적인 예에서, 1개 이상의 서바이빈 펩티드 또는 서바이빈 펩티드 변이체는 SEQ ID NO 23의 142개 이하의 연 속적인 아미노산 잔기 또는 예컨대 120개 이하의 연속적인 아미노산 잔기, 또는 예컨대 100개 이하의 연속적인 아미노산 잔기 및 좋기로는 80개 이하의 연속적인 아미노산 잔기 또는 예컨대 50개 이하의 연속적인 아미노산 잔기로 이루어지는 것이 더욱 양호하며, 더 좋기로는 SEQ ID NO 23의 20개 이하의 연속적인 아미노산 잔기, 예 컨대 18개 이하의 연속적인 아미노산 잔기, 예컨대 16개 이하의 연속적인 아미노산 잔기, 예컨대 14개 이하의 연속적인 아미노산 잔기, 예컨대 12개 이하의 연속적인 아미노산 잔기, 예컨대 11개 이하의 연속적인 아미노산 잔기, 예컨대 10개 이하의 연속적인 아미노산 잔기로 이루어지는 것이다. 특정의 구체적인 예에서, 펩티드는, 각각 SEQ ID NO: 23의 7, 8, 9, 10, 11개의 연속적인 아미노산 잔기로 구성 되는, 헵타펩티드, 옥타펩티드, 노나펩티드, 데카펩티드 또는 운데카펩티드로 이루어진다. 또한 본 발명은, 본 명세서에서 개시하고 있는 것과 같이 서바이빈 펩티드의 변이체 및 기능적 등가물 (functional equivalent)을 포함한다. 본 명세서에서 사용되는 "기능적 등가물"이라는 용어는 문제되는 서열의 예정된 단편(predetermined fragment)에 상응하는 기능성(functionality)을 언급하기 위한 수단으로서 사용된 다. 기능적 등가는, 예컨대 HLA 클래스 I 분자에 대한 유사한 결합 친화력, 또는 ELISPOT 분석에 의해 증명되는 유사한 역가(potency)에 의해 성립된다. 본 명세서에서 설명하고 있는 것과 같은 서바이빈 유래 펩티드의 기능적 등가물 또는 변이체는, 삽입, 결실 및 보존적 치환을 포함하는 치환의 수와 범위에 있어서, 양호한 예정된 서열로부터 점차적으로 상이하게 되는 아미 노산 서열을 나타낸다는 것이 이해될 것이다. 이러한 차이는 양호한 예정된 서열과 서바이빈 유래 변이체 또는 서바이빈 유래 기능적 등가물 사이의 동일성의 감소로서 측정될 수 있다. 아미노산 서열들 간의 동일성은 당해 기술분야에 잘 알려진 알고리즘을 사용하여 계산될 수 있다. 연속적인 서 바이빈 유래 아미노산 잔기를 포함하거나 또는 이로 이루어지는 단편들과 상동성을 공유하는 단편은, 좋기로는 이들이 예정된 서바이빈 유래 펩티드와 전체 길이에 걸쳐서 예컨대 75% 이상, 예컨대 80% 이상, 예컨대 85% 이 상, 예컨대 88% 이상, 90% 이상, 예컨대 94% 이상, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 경우 본 발명의 범위 내에 속하는 것으로 고려된다. 본 발명에 따른 백신 조성물은 1개 이상의 서바이빈 펩티드, 또는 서열이 전체 길이에 걸쳐서 SEQ ID NO: 23의 연속적인 아미노산 서열과 85% 이상 동일한 서바이빈 펩티드 변이체를 포함한다. 본 발명에 따른 펩티드 변이체의 예로는, 펩티드 변이체가 서바이빈 서열 "LTLGEFLKL"과 8/9 * 100% (89%) 동일 한 펩티드 LLLGEFLKL (서바이빈 96-104 L2,) (SEQ ID NO: 4)을 들 수 있다. 펩티드 변이체를 설명하기 위해 상기 사용된 명명법은 본 출원 전체에 걸쳐서 사용된다. 숫자에 이어지는 문자, 예컨대 L2는, 주어진 펩티드의 2번 위치에 존재할 아미노산을 치환한, 변이 아미노산 (L)을 지칭한다. 주어진 펩티드는 한 개의 숫자 또는 두 개의 숫자에 의해 표시될 수 있는데, 첫 번째 숫자는 전체 길이의 서바이빈 서 열에 있어서 펩티드의 첫 번째 아미노산의 번호를 지칭하고 (서바이빈 96 또는 Sur96은 서바이빈의 96번 잔기로 시작한다), 두 번째 숫자는 서바이빈에 있어서 펩티드의 마지막 잔기를 말한다. <204> <205> 펩티드 변이체는, 예컨대 US 6,245,523 (본 명세서에서는 SEQ ID NO: 23)에서 기재하고 있는 것과 같은 공지의 서바이빈 서열로부터 유래될 수 있다. 특정 HLA 분자와 결합할 수 있는 능력을 잠재적으로 가지는 펩티드는 주어진 특정의 HLA 분자에 결합하여, 펩티 드 중의 특정 위치에서의 우세한 몇몇 관련된 아미노산을 나타내는 공지의 서열을 정렬(alignment)시킴으로써 선택할 수 있다. 또한 이러한 우세한 아미노산 잔기는 본 명세서에서 "앵커 잔기(anchor residue)" 또는 "앵커 잔기 모티프(motif)"라고 언급된다. 접근가능한 데이터베이스에서 찾을 수 있는 다음의 공지의 서열 데이터에 기초한 이러한 상대적으로 단순한 과정에 의해서, 특정 HLA 분자에 결합할 것 같은, 펩티드가 서바이빈 단백질 분자로부터 유도될 수 있다. HLA 분자 범위에 대한 이러한 분석의 대표적인 예를 다음의 표 2에 나타낸다. - 21 -
표 2 <206> - 22 -
<207> <208> <209> <210> <211> <212> <213> <214> <215> <216> <217> 따라서, 예를 들어, HLA-A1에 잠재적으로 결합할 수 있는 노나펩티드는 다음의 서열 중의 하나일 수 있다. Xaa- T-D-Xaa-Xaa-Xaa-L-Xaa-Y, Xaa-T-E-Xaa-Xaa-Xaa-L-Xaa-Y, Xaa-S-D-Xaa-Xaa-Xaa-L-Xaa-Y 또는 Xaa-S-E-Xaa- Xaa-Xaa-L-Xaa-Y (Xaa는 임의의 아미노산 잔기를 나타낸다). 이와 유사한 방식으로, 임의의 다른 HLA 분자에 결 합할 수 있는 능력이 잠재적으로 있는 서열을 디자인할 수 있다. 당업자라면 주어진 HLA 분자에 대한 추가의 "앵커 잔기 모티프"를 확인할 수 있을 것이라는 점이 이해될 것이다. 따라서, 본 발명에 따른 펩티드 변이체는 각각의 특정 HLA에 대한 표 2에서 열거된 임의의 아미노산 잔기를 포 함하는 서열을 함유하는 펩티드를 포함한다. 그 대신에, 서바이빈의 연속적인 아미노산 서열에 대한, 펩티드에서의 치환의 수를 비교하는 것에 의하여 직접 적으로 차이가 측정될 수도 있다. 따라서, 구체적인 예에서, 백신 조성물은, SEQ ID NO: 23의 연속적인 아미노 산 서열과 비교하여 1개 또는 2개의 아미노산의 치환을 포함하는, 7 20개의 연속적인 아미노산으로 이루어지는 서바이빈 펩티드 변이체를 포함한다. 더욱 양호한 구체적인 예에서, 백신 조성물은, SEQ ID NO: 23의 연속적인 아미노산 서열과 비교하여 1개의 아미노산의 치환을 포함하는, 7 12개의 연속적인 아미노산으로 이루어지는 서 바이빈 펩티드 변이체를 포함한다. MHC 클래스 I 분자의 결합 홈(groove)은 9개 또는 10개 아미노산의 펩티드에 완벽하게 적합하다. 더욱 양호한 구체적인 예에서, 백신 조성물은 9개 또는 10개 아미노산 잔기로 이루어지는 1개 이상의 서바이빈 펩티드 또는 서바이빈 펩티드 변이체를 포함한다. 선택된 서바이빈 단백질의 서열에 기초하여, 1개 이상의 서바이빈 펩티드 또는 서바이빈 펩티드 변이체가, 전술 한 바와 같은 적절한 크기의 펩티드를 만드는, 서바이빈 출발 물질에 대한 모든 적절한 화학적 또는 효소적 처 리에 의해서 유도될 수 있거나, 또는 당업자에게 잘 알려진 통상의 펩티드 합성 과정에 의해 합성될 수 있다 본 발명의 펩티드는 서바이빈 단백질의 고유의 서열인 서바이빈 단백질로부터 유도된 서열을 가질 수 있다. 그 러나, 임의의 주어진 HLA 분자에 대해 고도의 친화력이 있는 펩티드는 이러한 고유의 서열로부터 1개 이상의 아 미노산 잔기의 치환, 결실 또는 첨가에 의한 서열의 변화에 의해서, 예컨대 주어진 HLA 분자에 관해서 앵커 잔 기 모티프가 동일하게 된 전술한 과정에 기초한 것 (표 2 참조)에 의해서, 유도될 수 있다. 따라서, 구체적인 예에서, 백신 조성물은 1개 이상의 서바이빈 펩티드 또는 펩티드 변이체를 포함한다. 여기서 서바이빈 펩티드 변이체(들)의 서열은 1개 이상의 아미노산 잔기의 치환, 결실 또는 첨가에 의해서 고유의 서열 로부터 유도될 수 있고, 이에 의하여 주어진 HLA 분자에 대한 앵커 잔기 모티프를 가지는 펩티드가 얻어진다. 따라서, 서바이빈 유래 펩티드의 면역원성을 증가시키기 위해서, TCR 접촉 잔기가 아닌, 앵커 위치에 아미노산 치환을 도입시킴으로서, HLA 클래스 I 분자와 결합하는 펩티드를 증가시킬 수 있다. 이것은 더욱 면역원성인 에피토프를 만들어 내었다. 예컨대, 이는 암 반응성 CTL을 유도하는 능력을 강화시켰고, 임상적으로 의미 있는 CTL 반응을 유도하는데 더욱 적합한 것으로 입증되었다. 그러나 중요한 점은, 표적 암 세포가 세포 표면에 고유의 서바이빈 유래 펩티드를 단지 발현하여 제공한다는 것이다. 이러한 - 23 -
측면에서, 변형된 서바이빈 유래 펩티드에 대해서 특이적인 치료 유래 CTL이 고유의 유사체(native analogue)와 교차반응한다는 점이 결정적으로 중요하다. <218> <219> <220> <221> <222> <223> <224> 한 가지 구체적인 예에서, 1개 이상의 서바이빈 펩티드 또는 서바이빈 펩티드 변이체는, HLA-A1, HLA-A2, HLA- A3, HLA-A11, HLA-A23, HLA-A24, HLA-A25, HLA-A26, HLA-A28, HLA-A29, HLA-A30, HLA-A31, HLA-A32, HLA-A33, HLA-A34, HLA-A66, HLA-A68, HLA-A69, HLA-A74, HLA-B5, HLA-B7, HLA-B8, HLA-B14, HLA-B15 B62), HLA-B17, HLA-B27, HLA-B35, HLA-B37, HLA-B38, HLA-B39, HLA-B40 (B60,61), HLA-B42, HLA-B44, HLA-B46, HLA-B48, HLA-B51, HLA-B52, HLA-B53, HLA-B54, HLA-B55, HLA-B56, HLA-B57, HLA-B58, HLA-B67, HLA-B73, HLA-Cw1 HLA- Cw2, HLA-Cw3, HLA-Cw4, HLA-Cw6, HLA-Cw6으로 이루어지는 군에서 선택되는 1개 이상의 MHC 클래스 I 분자로 한정되어 있다. 따라서, 또 다른 구체적인 예에서, 1개 이상의 펩티드(들)는 HLA-A1, HLA-A2, HLA-A3, HLA-A11, HLA-A24, HLA- B7, HLA-B35, HLA-B44, HLA-B8, HLA-B15, HLA-B27 and HLA-B51, HLA-Cw1, HLA-Cw2, HLA-Cw3, HLA-Cw4, HLA- Cw5, HLA-Cw6, HLA-Cw7 및 HLA-Cw16으로 이루어지는 군에서 선택되는 1개 이상의 MHC 클래스 I 분자로 한정되 어 있다. 특히 양호한 구체적인 예에서, 1개 이상의 펩티드(들)은 HLA-A1, HLA-A2, HLA-B7 및 HLA-B35로 이루어지는 군에 서 선택되는 1개 이상의 MHC 클래스 I 분자로 한정되어 있다. 개개의 펩티드의 효율성은 개체에 따라 달라질 수 있으므로, 본 발명에 따른 백신은, 조직 특이성이 동일한 펩 티드들은 2개 이상 포함할 수 있다. 따라서, 구체적인 예에서, 2개 이상의 서바이빈 펩티드 또는 서바이빈 펩티 드 변이체는 HLA-A1, HLA-A2, HLA-A3, HLA-A11, HLA-A23, HLA-A24, HLA-A25, HLA-A26, HLA-A28, HLA-A29, HLA-A30, HLA-A31, HLA-A32, HLA-A33, HLA-A34, HLA-A66, HLA-A68, HLA-A69, HLA-A74, HLA-B5, HLA-B7, HLA- B8, HLA-B14, HLA-B15 B62), HLA-B17, HLA-B27, HLA-B35, HLA-B37, HLA-B38, HLA-B39, HLA-B40 (B60,61), HLA-B42, HLA-B44, HLA-B46, HLA-B48, HLA-B51, HLA-B52, HLA-B53, HLA-B54, HLA-B55, HLA-B56, HLA-B57, HLA-B58, HLA-B67, HLA-B73, HLA-Cw1 HLA-Cw2, HLA-Cw3, HLA-Cw4, HLA-Cw6, HLA-Cw6으로 이루어지는 군에서 선 택되는 MHC 클래스 I HLA 분자로 한정되어 있다. 또 다른 구체적인 예에서, 1개 이상의 서바이빈 펩티드 또는 서바이빈 펩티드 변이체는 HLA-A1, HLA-A2, HLA- A3,HLA-A9, HLA-A 10, HLA-A 11, HLR-Aw 19, HLA-A23 (9),HLA-A24 (9), HLA-A25 (10), HLA-A26(10), HLA-A28, HLA-A29(w19),HLA-A30 (w19), HLA-A31 (w19), HLA-A32 (wl9), HLA-Aw33(w19), HLA-Aw34(10), HLA-Aw36, HLA- Aw43, HLA-Aw66 (10), HLA-Aw68(28), HLA-A69 (28)로 이루어지는 군에서 선택되는 1개 이상의 MHC 클래스 I HLA-A 분자로 한정되어 있다. 본 명세서 전체에서, 단지 첫 번째 숫자 표시(primary numeric designation)만을 사용하는 더 단순한 표시를 사용할 수 있는 데, 예컨대 각각 HLA-Awl9 및 HLA-A24 (9) 대신에 HLA-A19 또는 HLA-A24로 표시할 수 있다. 특정 구체적인 예에서, 1개 이상의 서바이빈 펩티드 또는 서바이빈 펩티드 변이체는 HLA-A1, HLA-A2, HLA-A3, HLA-A11 및 HLA-A24로 이루어지는 군에서 선택되는 MHC 클래스 I HLA 종으로 한정되 어 있다. 구체적인 예에서, 1개 이상의 서바이빈 펩티드 또는 서바이빈 펩티드 변이체는 HLA-A1로 한정되어 있다. 구체적인 예에서, 1개 이상의 서바이빈 펩티드 또는 서바이빈 펩티드 변이체는, MAEAGFIHY (SEQ ID NO: 17) (서 바이빈 38-46 Y9, 9번 위치에서의 "C"가 "Y"로 치환된 서바이빈 38-46 ), PTENEPDLAY (SEQ ID NO: 18) (서비아빈 47-56Y10, 10번 위치에서의 "Q"가 "Y"로 치환된 survivin 47-56 ), QFEELTLGEF (SEQ ID NO: 15) (서바이빈 92-101 ) 및 FTELTLGEF (SEQ ID NO: 16) (서바이빈 93-101 T2, 2번 위치에서 "E"가 "T"로 치환된 서바이빈 93-101 )로 이루어지는 군 에서 선택되는 서열을 가지는 HLA-A1 한정 펩티드이다. 괄호 안의 명칭은 US6,245,523에 개시되어 있는 것과 같 은 서바이빈 단백질에서 잔기의 위치와, 펩티드에서의 아미노산의 변경을 나타낸다. <225> <226> 구체적인 예에서, 1개 이상의 서바이빈 펩티드 또는 서바이빈 펩티드 변이체는 HLA-A2로 한정되어 있다. 더욱 구체적인 예에서, 1개 이상의 서바이빈 펩티드 또는 서바이빈 펩티드 변이체는, FLKLDRERA (서바이빈 101-109) (SEQ ID NO: 1), TLPPAWQPFL (서바이빈 5-14 ) (SEQ ID NO: 2), ELTLGEFLKL (서바이빈 95-104 ) (SEQ ID NO: 3), LLLGEFLKL (서바이빈 96-104 L2, 2번 위치에서 "T"가 "L"로 치환된 서바이빈 96-104 ) (SEQ ID NO: 4) 및 LMLGEFLKL 서 바이빈 96-104 M2 (2번 위치에서 "T"가 "M"으로 치환된 서바이빈 96-104 ) (SEQ ID NO: 5)로 이루어지는 군에서 선택되 는 서열을 가지는 HLA-A2 한정 서바이빈 유래 펩티드이다. - 24 -
<227> 1개 이상의 서바이빈 펩티드 또는 서바이빈 펩티드 변이체는, 또한 예컨대 RISTFKNWPK (Sur18K10) 10번 위치에 서 "F"가 "K"로 변경된 서바이빈 18-27, (SEQ ID NO: 20) 등의 HLA-A3 한정 펩티드, 및/또는 예컨대 DLAQCFFCFK (서바이빈 53-62 ) (SEQ ID NO: 19), DVAQCFFCFK (Sur53/V2) (SEQ ID NO: 45), DFAQCFFCFK (Sur53/F2) (SEQ ID NO: 46), DIAQCFFCFK (Sur53/I2) (SEQ ID NO: 47) 등의 HLA-A11 한정 펩티드, 및/또는 예컨대 RISTFKNWPFL (서 바이빈 18-28 ) (SEQ ID NO: 21) 등의 HLA-A2 한정 펩티드, 및/또는 STFKNWPFL (Sur20-28) (SEQ ID NO : 41) 또는 2번 위치에서 "T"가 "Y"로 변경된 SYFKNWPFL (Sur20-28/Y2) (SEQ ID NO: 48) 등의 HLA-A24 한정 펩티드일 수 있다. <228> <229> <230> <231> 더욱더 구체적인 예에서, 1개 이상의 서바이빈 펩티드 또는 서바이빈 펩티드 변이체는, HLA-B5, HLA-B7, HLA- B8, HLA-B12, HLA-B13, HLA-B14, HLA-B15, HLA-B16, HLA-B17, HLA-B118, HLA-B21, HLA-Bw22, HLA-B27, HLA- B35, HLA-B37, HLA-B38, HLA-B39, HLA-B40, HLA-Bw41, HLA-Bw42, HLA-B44, HLA-B45, HLA-Bw46 및 HLA-Bw47 중 의 임의의 하나를 포함하는 MHC 클래스 I HLA-B 분자에 한정되어 있다. 구체적인 예에서, 1개 이상의 서바이빈 펩티드 또는 서바이빈 펩티드 변이체가 결합할 수 있는 MHC 클래스 I HLA-B 종은, HLA-B7, HLA-B8, HLA-B15, HLA-B27, HLA-B35, HLA-B44, HLA-B51 및 HLA-B58로 이루어지는 군에서 선택된다. 더욱 양호한 구체적인 예에서, 1개 이상의 서바이빈 펩티드 또는 서바이빈 펩티드 변이체는 HLA-B7 또는 HLA- B35에 한정되어 있다. 구체적인 예에서, 1개 이상의 서바이빈 펩티드 또는 서바이빈 펩티드 변이체는 HLA-B7에 한정되어 있다. 더욱 구체적인 예에서, 1개 이상의 서바이빈 펩티드 또는 서바이빈 펩티드 변이체는, LPPAWQPFL (서바이빈 6-14 ) (SEQ ID NO: 10), QPFLKDHRI (서바이빈 11-19 ) (SEQ ID NO: 11), CPTENEPDL (서바이빈 51-59 ) (SEQ ID NO: 6), TPERMAEAGF (서바이빈 34-43 ) (SEQ ID NO: 12), APPAWQPFL (서바이빈 6-14 A1) (SEQ ID NO: 13), RPPAWQPFL (서바이 빈 6-14 R1) (SEQ ID NO: 14), RAIEQLAAM (Sur133-141) (SEQ ID NO: 44), TAKKVRRAI (Sur127-135) (SEQ ID NO: 49), RPIEQLAAM (Sur133P2) (SEQ ID NO: 50) 또는 TPKKVRRAI (Sur127P2) (SEQ ID NO: 51) 중에서 선택되는 서 열을 가지는 HLA-B7 결합 서바이빈 유래 펩티드이다. APPAWQPFL (SEQ ID NO: 13)은 펩티드의 1번 위치에서 " L"을 "A"로 치환시켜서 서바이빈 6-14 로부터 유래된 서열이고, RPPAWQPFL (SEQ ID NO: 14)은 펩티드의 1번 위치에 서 "L"을 "R"로 치환시켜서 서바이빈 6-14 로부터 유래된 서열이다. <232> 구체적인 예에서, 1개 이상의 서바이빈 펩티드 또는 서바이빈 펩티드 변이체는 HLA-B35로 한정된다. 더 구체적 인 예에서, 1개 이상의 서바이빈 펩티드 또는 서바이빈 펩티드 변이체는 CPTENEPDL (서바이빈 46-54 ) (SEQ ID NO: 6), EPDLAQCFF(서바이빈 51-59 ) (SEQ ID NO: 7), CPTENEPDY (서바이빈 46-54 Y9) (SEQ ID N0: 8) 및 EPDLAQCFY (서바 이빈 5l-59 Y9) (SEQ ID NO: 9) 중에서 선택되는 서열을 가지는 HLA B35 제한 서바이빈 유래 펩티드이다. 괄호 안 의 숫자는 US6,245,523에서 개시되고 있는 것과 같은 서바이빈 단백질에서 잔기의 위치를 나타낸다. CPTENEPDY (SEQ ID NO: 8)는 펩티드의 C 말단에서의 "L"이 "Y"로 치환된 서바이빈 46-54 에서 유래된 서열이다. EPDLAQCFY (SEQ ID NO: 9)는 C 말단에서의 "F" 잔기가 "Y"로 치환된 서바이빈 5l-59 에서 유래된 서열이다. <233> <234> <235> <236> <237> 구체적인 예에서, 1개 이상의 서바이빈 펩티드 또는 서바이빈 펩티드 변이체는 HLA-B51에 제한된다. 구체적으로, RAIEQLAAM (Sur133-141) (SEQ ID NO: 44) 서열을 가지는 서바이빈 펩티드는 HLA-B51 제한 서바이 빈 유래 펩티드이다. 이러한 펩티드는 또한 HLA-B7에 제한된다. 특정 구체적인 예에서, 1개 이상의 서바이빈 펩티드 또는 서바이빈 펩티드 변이체는 HLA-B27로 한정된다. 더욱 구체적인 예에서, 1개 이상의 서바이빈 펩티드 또는 서바이빈 펩티드 변이체는, ERMAEAGFI (Sur36-44) (SEQ ID NO: 43), ERAKNKIAK (Sur107-115) (SEQ ID NO: 52), DRERAKNKI (Sur105-113) (SEQ ID NO: 53), KEFEETAKK (Sur122-130) (SEQ ID NO: 54), ERMAEAGFL (Sur36/L9) (SEQ ID NO: 55), ERMAEAGFF (Sur36/F9) (SEQ ID NO: 56), ERMAEAGFR (Sur36/R9) (SEQ ID NO: 57), ERMAEAGFK (Sur36/K9) (SEQ ID NO: 58) 또는 KRFEETAKK (Sur122/R2) (SEQ ID NO: 59) 중에서 선택되는 서열을 가진 HLA-B27 한정 서바이빈 유래 펩티드이다. 특정 구체적인 예에서, 1개 이상의 서바이빈 펩티드 또는 서바이빈 펩티드 변이체는 HLA-B44로 한정된다. 더욱 구체적엔 예에서, 1개 이상의 서바이빈 펩티드 또는 서바이빈 펩티드 변이체는, KETNNKKKEY (Sur115Y10) - 25 -
(SEQ ID NO: 42), KETNNKKKEF (Sur115-124) (SEQ ID NO: 60), EELTLGEFL (Sur94-102) (SEQ ID NO: 61) 또는 EELTLGEFY (Sur94Y9) (SEQ ID NO: 62) 중에서 선택되는 서열을 가진 HLA-B44 한정 서바이빈 유래 펩티드이다. <238> <239> <240> <241> <242> <243> <244> <245> <246> <247> <248> 구체적인 예에서, 1개 이상의 서바이빈 펩티드 또는 서바이빈 펩티드 변이체는 HLA-B8로 한정된다. 더욱 구체적인 예에서, 1개 이상의 서바이빈 펩티드 또는 서바이빈 펩티드 변이체는, ISTFKNWPFL (Sur19-28) (SEQ ID NO: 63), ISKFKNWPFL (Sur19/K3) (SEQ ID NO: 64), LSVKKQFEEL (Sur87-96) (SEQ ID NO: 65), LSKKKQFEEL (Sur87/K3) (SEQ ID NO: 66), RAKNKIAKET (Sur108-117) (SEQ ID NO: 67), RAKNKIAKEL (Sur108/L10) (SEQ ID NO: 68), NNKKKEFEET (Sur118) (SEQ ID NO: 69), NNKKKEFEEL (Sur118/L10) (SEQ ID NO: 70), QPKLKDHRI (Sur11/K3) (SEQ ID NO: 71), FLKDHRIST (Sur13) (SEQ ID NO: 72), FLKDKRIST (Sur13/K5) (SEQ ID NO: 73), FLKDHRISL (Sur13/L9) (SEQ ID NO: 74), AFLSVKKQF (Sur85) (SEQ ID NO: 75), AFLSVKKQF (Sur85/K3) (SEQ ID NO: 76), AFLSKKKQF (Sur85/K5) (SEQ ID NO: 77), AFLSVKKQL (Sur85/L9) (SEQ ID NO: 78), FLSVKKQFE (Sur86) (SEQ ID NO: 79), FLSVKKQFL (Sur86/L9) (SEQ ID NO: 80), FLKVKKQFE (Sur86/K3) (SEQ ID NO: 81), SVKKQFEEL (Sur88) (SEQ ID NO: 82), SVKKKFEEL (Sur88/K5) (SEQ ID NO: 83), FLKLKRERA (Sur101/K5) (SEQ ID NO: 84), FLKLDRERL (Sur101/L9) (SEQ ID NO: 85), TAKKKRRAI (Sur127/K5) (SEQ ID NO: 86) 또는 TAKKVRRAL (Sur127/L9) (SEQ ID NO: 87), 또는 TAKKVRRAI (Sur127) (SEQ ID NO: 49), FLKLDRERA (Sur101) (SEQ ID NO: 1) 또는 QPFLKDHRI (Sur11) (SEQ ID NO: 11) 중에서 선택되는 서열을 가진 HLA-B8 한정 서바이빈 유래 펩티드이다. 구체적인 예에서, 1개 이상의 서바이빈 펩티드 또는 서바이빈 펩티드 변이체는 HLA-B15로 한정된다. 더욱 구체적인 예에서, 1개 이상의 서바이빈 펩티드 또는 서바이빈 펩티드 변이체는, TLPPAWQPF (Sur5) (SEQ ID NO: 88), TLPPAWQPY (Sur5/Y9) (SEQ ID NO: 89), WQPFLKDHRI (Sur10) (SEQ ID NO: 90), WQPFLKDHRY (Sur10/Y9) (SEQ ID NO: 91), FLKDHRISTF (Sur13) (SEQ ID NO: 92), FLKDHRISTY (Sur13/Y9) (SEQ ID NO: 93), RISTFKNWPF (Sur18) (SEQ ID NO: 94), RLSTFKNWPF (Sur18/L2) (SEQ ID NO: 95), DLAQCFFCF (Sur53) (SEQ ID NO: 96), DLAQCFFCY (Sur53/Y9) (SEQ ID NO: 97), ISTFKNWPF (Sur19) (SEQ ID NO: 98), IQTFKNWPF (Sur19/Q2) (SEQ ID NO: 99), ILTFKNWPF (Sur19/L2) (SEQ ID NO: 100), RMAEAGFIY (Sur37/Y9) (SEQ ID NO: 101), RMAEAGFIF (Sur37/F9) (SEQ ID NO: 102), RLAEAGFIY (Sur37/L2Y9) (SEQ ID NO: 103), KKHSSGCAF (Sur78) (SEQ ID NO: 104), KQHSSGCAF (Sur78/Q2) (SEQ ID NO: 105), KLHSSGCAF (Sur78/L2) (SEQ ID NO: 106), RAIEQLAAY (Sur133/Y9) (SEQ ID NO: 107) 또는 RLIEQLAAM (Sur133/L2) (SEQ ID NO: 108) 또는 RAIEQLAAM (Sur133) (SEQ ID NO: 44) 중에서 선택되는 서열을 가진 HLA-B15 한정 서바이빈 유래 펩티드이다. 구체적인 예에서, 1개 이상의 서바이빈 펩티드 또는 서바이빈 펩티드 변이체는 HLA-B58로 한정된다. 더욱 구체적인 예에서, 1개 이상의 서바이빈 펩티드 또는 서바이빈 펩티드 변이체는, PTLPPAWQPF Sur5 (SEQ ID NO: 109), CTPERMAEAGF (Sur33) (SEQ ID NO: 110), ETNNKKKEF (Sur116) (SEQ ID NO: 111), ISTFKNWPF (Sur19) (SEQ ID NO: 98), GAPTLPPAW (Sur2) (SEQ ID NO: 112) 또는 CAFLSVKKQF (Sur84) (SEQ ID NO: 113) 중에서 선 택되는 서열을 가지는 HLA-B58 한정 서바이빈 유래 펩티드이다. 더욱 유용한 구체적인 예에서, 1개 이상의 서바이빈 펩티드 또는 서바이빈 펩티드 변이체는 HLA-Cw1, HLA-Cw2, HLA-Cw3, HLA-Cw4, HLA-Cw5, HLA-Cw6, HLA-Cw7 및 HLA-Cw16으로 이루어지는 군에서 선택되는 MHC 클래스 I HLA-C 분자로 한정되는 펩티드이다. 더욱이, 본 발명의 펩티드의 번역 후 변형(post-translational modification)을 수행하는 것이 유리할 수 있다. 따라서, 구체적인 예에서, 1개 이상의 서바이빈 펩티드 또는 서바이빈 펩티드 변이체는 1개 이상의 번역 후 변 형을 포함하는 펩티드이다. 펩티드는 모든 종류의 변형을 포함할 수 있다. 아미드의 카르복실산으로의 전환에서부터, 다중 복합체 올리고당 류의 결합에 이르기까지 크기 및 복잡성에 걸쳐서, 이제까지 약 200개의 구조적으로 상이한 공유결합적인 변형 이 확인되어왔다. 이러한 변형은 포스포릴화, 아세틸화, 유비퀴네이션(ubiquination), 리피드화(lipidation) (아세틸화, 프레닐화, 파르네실화, 게라닐화, 팔미토일화, 미리스토일화), 메틸화, 카르복실화, 술퍼네이션 (sulfunation) 및 O- 또는 N-글리코실화를 포함한다. 유방암종 MCF-7 또는 자궁경부암종 헬라 세포(cervical carcinoma HeLa cell)를 아드리마이신, 탁솔 또는 UVB 등의 항암제에 대해 노출시키자, 서바이빈 발현이 4 5 배 증가된 것으로 보고되었다. - 26 -
<249> <250> <251> <252> <253> <254> <255> <256> <257> <258> <259> 항암 치료 후의 서바이빈 수준의 변화는 서바이빈 mrna 발현의 조절에 관련된 것이 아니고, 드 노보(de novo) 유전자 전사와는 무관하다. 환언하면, 사이클린 의존 키나아제 억제제 플라보피리돌(flavopiridol)에 의한 Thr34 상의 서바이빈 포스포릴화의 억제가 서바이빈 발현의 손실을 이끌었고, Ala 돌연변이체에 대한 포스포릴 화될 수 없는 서바이빈Thr34는 야생형 서바이빈과 비교하여, 가속된 제거율(clearance)을 나타내었다. Thr34 상의 서바이빈 포스포릴화의 서열 절제(sequential ablation)는 생체 내(in vivo) 유방암 이종이식 (xenograft) 모델에서, p53과 독립적으로 항암제에 의해 유도된 종양 세포의 세포자멸사를 촉진시키고, 독성이 없이 종양 성장을 억제하였다. 이들 데이터는 Thr34 포스포릴화가 종양 세포내의 서바이빈 수준을 결정적으로 조절하고, p34 키나아제 활성의 서열 절제가 서바이빈 생육성(viability) 체크포인트를 제거할 수 있으며 종양 세포에서의 세포자멸사를 촉진시 킬 수 있다는 것을 제안한다. 따라서, 본 발명의 서바이빈 및 서바이빈 유래 펩티드는 포스포릴화 펩티드를 포함한다는 것이 고려된다. 천연 (native) 서바이빈 포스포펩티드 항원은 포스포릴화 위치 Thr34 주변의 MHC 펩티드 결합 모티프의 존재를 탐색 하는 것에 의해서 확인될 수 있다. 따라서, 가능한 서바이빈 유래 포스포펩티드 서열은 TPERMAEAGF (SEQ ID NO: 114), 잠정적인 HLA-B35 및/또는 HLA-B7 및/또는 HLA-B51 한정 펩티드 항원을 포함한다. 여기에 포함되는 추가 적인 천연 포스포펩티드는 HLA-A2: CACTPERMA (SEQ ID NO:115 ), 및 CTPERMAEA (SEQ ID NO: 116),; HLA-A3: FLEGCACTP (SEQ ID NO: 117),; HLA-B7/HLA-B35/HLA-B51: WPFLEGCACT (SEQ ID NO: 118)를 포함한다 (포스포릴 화 Thr 잔기를 볼드체로 표시함). 인종 집단별로 다수 비율을 차지하는 HLA 분자들이 서로 다르다는 것이 잘 알려져 있다. 따라서, 본 발명의 방 법에 따라 치료될 수 있는 환자 군(cohort)을 확장하기 위하여, 수 개의 HLA 클래스 I 분자에 한정된 펩티드 에 피토프를 동정할 필요가 있다. 서로 다른 HLA 한정 요소를 이용하여 다중 서바이빈 에피토프를 특징화시킴으로써 이러한 표적 항원의 임상적 잠재능력이 두 가지 중요한 방식으로 확장된다. (i) 서바이빈 유래 펩티드 기재의 면역요법에 대한 적격의 환자의 수를 증가시킨다. HLA-A2 항원은 약 50%의 백 인 집단 및 아시아인 집단에서 발현되고, HLA-A1 및 HLA-A3 항원은 약 25%의 백인 집단 및 5%의 아시아인 집단 에서 모두 발현되며, 반면, HLA-A11 항원은 약 15%의 백인 집단 및 30%의 아시아인 집단에 의해 발현된다. 비록 이들 숫자는 공동발현(co-expression) 때문에 합계될 수는 없지만, 이들의 다중성에 의하여 제한된 펩티드의 조 합은 확실히 대부분의 암 환자를 포함할 것이다. (ii) 각각의 환자에 있어서 일부 제한 요소의 총체적인 표적화 는 HLA 대립형질 상실에 의한 면역 이탈의 위험을 감소시키는 경향이 있다. 단일 HLA 대립 형질의 상실은 암세 포를 설명하는 MHC 변경의 중요한 요소인 반면, 클래스 I 발현의 총 손실은 그다지 빈번한 사건은 아니다. 따라 서, 상이한 HLA 대립형질로 한정된 서바이빈 에피토프를 동정함으로써, 대립형질이 겹치는 환자에 있어서 1개 이상의 HLA 분자를 목표로 하는 것이 가능해졌다. 비록 백신 조성물용에 사용하기 위한 많은 잠재적인 펩티드를 예상할 수 있지만, 유용한 반응을 얻을 수 있는 펩티드 및 백신 조성물의 실제 확인은 다중적인 변수의 시험을 필요로 한다. 본 발명은 특히 효과적인 백신 조 성물을 설명한다. 본 발명에 따른 백신 조성물은 서바이빈 펩티드 및 서바이빈 펩티드 변이체를 포함한다. 현재의 양호한 다중에피토프 백신의 예로는 해당 환자의 조직 유형에 따른 서바이빈 유래 펩티드 에피토프의 " 테일러 메이드" 조합을 포함하는데, 예컨대, HLA-1, HLA-A2, HLA-A3 및 HLA-B35 표현형을 가지는 환자에게는 다 음의 펩티드, ELTLGEFLKL(survivin95-104) (SEQ ID NO: 3), LMLGEFLKL survivin96-104m2 (SEQ ID NO: 5), CPTENEPDY (survivin46-54y9) (SEQ ID N0: 8) 및 EPDLAQCFY (survivin5l-59y9) (SEQ ID NO: 9) 및/또는 RISTFKNWPK (Sur18K10) (SEQ ID NO: 20)를 포함하는 백신으로 백신접종할 수 있다. 그 대신에, 에피토프는 해당 집단에서의 다양한 HLA 표현형에 대한 우점성을 기준으로 선택될 수도 있다. 예를 들면, HLA-A2는 백인 집단에서 가장 우세한 표현형이고, 따라서 HLA-A2와 결합하는 펩티드는 이 집단에서 높은 비율로 활성일 것이다. 그러나, 본 발명에 따른 백신 조성물은 또한 2개 이상의 서바이빈 펩티드 또는 서바이빈 펩티드 변이체의 조합 도 함유할 수 있고, 그 각각이 상이한 HLA 분자와 특이적으로 상호작용하므로, 표적 집단에서 더 높은 비율로 활성적일 것이다. 따라서, 예를 들어, 백신 조성물은, 예컨대 HLA-A2 및 HLA-B35와 같이, 예컨대 표적 집단의 우세한 HLA 표현형에 상응하는 HLA-A 및 HLA-B 분자를 비롯하여, HLA-A 분자에 제한된 펩티드와 HLA-B 분자에 - 27 -
제한된 펩티드의 조합을 함유할 수 있다. 더욱이, 백신 조성물은 HLA-C 분자에 제한된 펩티드를 포함하여도 좋 다. 본 발명에 따른 기타의 조합으로는 HLA-A1 및 HLA-A2에 제한된 펩티드 또는 HLA-A1 및 HLA-B35에 제한된 펩 티드를 포함한다. 더욱이, 상이한 특이성을 가지는 3개 펩티드가 사용될 수 있고, 이러한 조합으로는 HLA-A1, HLA-A2 및 HLA-B35에 제한된 펩티드의 조합이 있다. <260> <261> 백신 조성물에는 하나의 HLA-B7 제한 펩티드 또는 예컨대 HLA-A1 및 HLA-A2 결합 펩티드 또는 예컨대 HLA-A1 및 HLA-B35 결합 펩티드 등의 2개의 펩티드를 포함하는 것이 유리할 수 있다. 본 발명의 한 가지 측면은, 예컨대 LPPAWQPFL (서바이빈 6-14 ) (SEQ ID NO: 10), QPFLKDHRI (서바이빈 11-19 ) (SEQ ID NO: 11), CPTENEPDL (서바이빈 51-59 ) (SEQ ID NO: 6), TPERMAEAGF (서바이빈 34-43 ) (SEQ ID NO: 12), APPAWQPFL (서바이빈 6-14 A1) (SEQ ID NO: 13) 또는 RPPAWQPFL (서바이빈 6-14 R1) (SEQ ID NO: 14) 등의 HLA-B7 제 한 펩티드에 관한 것이다. <262> 구체적인 예에서, HLA-B7 제한 펩티드는 APPAWQPFL (서바이빈 6-14 A1) (SEQ ID NO: 13) 또는 RPPAWQPFL (서바이빈 6-14R1) (SEQ ID NO: 14)이다. 더 구체적인 예에서, HLA-B7 제한 펩티드는 APPAWQPFL (서바이빈 6-14 A1) (SEQ ID NO: 13)이고, 상이한 더 구체적인 예에서, HLA-B7 제한 펩티드는 RPPAWQPFL (서바이빈 6-14 R1) (SEQ ID NO: 14)이 다. <263> <264> <265> <266> <267> <268> <269> <270> <271> <272> <273> <274> <275> <276> <277> <278> <279> <280> <281> 본 발명의 한 가지 측면은 1개 이상의 서바이빈 펩티드 또는 펩티드 변이체를 포함하는 백신 조성물로서, 상기 펩티드 변이체의 서열은 전체 길이에 걸쳐서 SEQ ID NO: 23의 연속적인 아미노산 서열과 85% 이상 동일하며, 상기 조성물은 i. HLA-B7 결합 펩티드 및/또는 HLA-A1 및 HLA-A2 제한 펩티드 및/또는 HLA-A1 및 HLA-B35 제한 펩티드와, ii. Montanide ISA 51 등의 전술한 임의의 애주번트 를 포함하는 것인 백신 조성물에 관한 것이다. 양호한 구체적인 예에서, 백신 조성물은, i. APPAWQPFL (SEQ ID NO: 13)을 포함하고, 15개 이하, 좋기로는 10개의 아미노산으로 구성되는 펩티드 및/또는 RPPAWQPFL (SEQ ID NO: 14)을 포함하고, 15개 이하, 좋기로는 10개의 아미노산으로 구성되는 펩티드 및/또는 FTELTLGEF (SEQ ID NO: 16)를 포함하고, 15개 이하, 좋기로는 10개의 아미노산으로 구성되는 펩티드 및 LMLGEFLKL (SEQ ID NO: 5)을 포함하고, 15개 이하, 좋기로는 10개의 아미노산으로 구성되는 펩티드 및/또는 FTELTLGEF (SEQ ID NO: 16)를 포함하고, 15개 이하, 좋기로는 10개의 아미노산으로 구성되는 펩티드 및 EPDLAQCFY (SEQ ID NO: 9)를 포함하고, 15개 이하, 좋기로는 10개의 아미노산으로 구성되는 펩티드 및/또는 LMLGEFLKL (SEQ ID NO: 5)을 포함하고, 15개 이하, 좋기로는 10개의 아미노산으로 구성되는 펩티드 및 EPDLAQCFY (SEQ ID NO: 9)를 포함하고, 15개 이하, 좋기로는 10개의 아미노산으로 구성되는 펩티드와, ii. 예컨대 Montanide ISA 51 등의 전술한 임의의 애주번트 를 포함한다. 백신 조성물이 3개 이상의 서바이빈 펩티드 또는 서바이빈 펩티드 변이체를 포함하는 것이고, 특히 이들 펩티드 가 상이한 HLA 분자에 제한되는 것이라면, 백신 조성물의 효능을 더욱 개선시킬 수 있다. 구체적인 예에서, 백신 조성물은 a) 3개 이상의 서바이빈 펩티드 또는 서바이빈 펩티드 변이체로서, 상기 펩티드 변이체의 서열은 전체 길이에 걸쳐서 SEQ ID NO: 23의 연속적인 아미노산 서열과 85% 이상 동일한 것이고, i. 1개 이상의 펩티드 또는 펩티드 변이체는 HLA-A1 결합 펩티드 군에서 선택되며, - 28 -
<282> <283> <284> <285> <286> <287> <288> <289> <290> <291> <292> <293> <294> <295> <296> <297> <298> <299> <300> <301> <302> <303> <304> <305> <306> <307> ii. 1개 이상의 펩티드 또는 펩티드 변이체는 HLA-A2 결합 펩티드 군에서 선택되고, iii. 1개 이상의 펩티드 또는 펩티드 변이체는 HLA-B35 결합 펩티드 군에서 선택되는 것과, b) Montanide ISA 51 등의 전술한 임의의 애주번트 를 포함한다. 구체적인 예에서, HLA-A1 결합 펩티드, HLA-A2 결합 펩티드 및/또는 HLA-B35 결합 펩티드는 15개 이하, 예컨대 14, 13, 12, 11개 이하의 아미노산으로 구성되는 것이 좋고, 10개 이하의 아미노산으로 구성되는 것이 가장 좋 다. 구체적인 예에서, 백신 조성물은 HLA-A1 제한 펩티드 FTELTLGEF (SEQ ID NO: 16)를 포함한다. 다른 구체적인 예 에서, 백신 조성물은 HLA-A2 결합 펩티드 LMLGEFLKL (SEQ ID NO: 5)을 포함하며, 또 다른 구체적인 예에서, HLA-B35 결합 펩티드 EPDLAQCFY (SEQ ID NO: 9)를 포함한다. 가장 구체적인 예에서, 백신 조성물은 HLA-A1 제한 펩티드 FTELTLGEF (SEQ ID NO: 16), HLA-A2 결합 펩티드 LMLGEFLKL (SEQ ID NO: 5) 및 HLA-B35 결합 펩티드 EPDLAQCFY (SEQ ID NO: 9)를 포함한다. 구체적인 예에서, 전술한 HLA-A1 결합 펩티드, HLA-A2 결합 펩티드, 및/또는 HLA-B35 결합 펩티드는 15개 이하, 예컨대 14, 13, 12, 11개 이하의 아미노산으로 구성되는 것이 좋고, 10개 이하의 아미노산으로 구성되는 것이 가장 좋다. 백신 조성물이 7개 이상의 서바이빈 펩티드 또는 서바이빈 펩티드 변이체를 포함하는 것이고, 특히 이들 펩티드 가 상이한 HLA 분자에 제한되는 것이라면, 백신 조성물의 효능을 더욱 개선시킬 수 있다. 구체적인 예에서, 백신 조성물은 a) 7개 이상의 서바이빈 펩티드 또는 서바이빈 펩티드 변이체로서, 상기 펩티드 변이체의 서열은 전체 길이에 걸쳐서 SEQ ID NO: 23의 연속적인 아미노산 서열과 85% 이상 동일한 것이고, viii. 1개 이상의 펩티드 또는 펩티드 변이체는 HLA-A1 결합 펩티드 군에서 선택되며, ix. 1개 이상의 펩티드 또는 펩티드 변이체는 HLA-A2 결합 펩티드 군에서 선택되고, x. 1개 이상의 펩티드 또는 펩티드 변이체는 HLA-A3 결합 펩티드 군에서 선택되며, xi. 1개 이상의 펩티드 또는 펩티드 변이체는 HLA-A24 결합 펩티드 군에서 선택되고, xii. 1개 이상의 펩티드 또는 펩티드 변이체는 HLA-A11 결합 펩티드 군에서 선택되며, xiii. 1개 이상의 펩티드 또는 펩티드 변이체는 HLA-B35 결합 펩티드 군에서 선택되고, xiv. 1개 이상의 펩티드 또는 펩티드 변이체는 HLA-B7 결합 펩티드 군에서 선택되는 것과, b) Montanide ISA 51 등의 전술한 임의의 애주번트 를 포함한다. 구체적인 예에서, 전술한 HLA-A1, HLA-A2, HLA-A3, HLA-A24, HLA-A11, HLA-B35 및/또는 HLA-B7 결합 펩티드는 15개 이하, 예컨대 14, 13, 12, 11개 이하의 아미노산으로 구성되는 것이 좋고, 10개 이하의 아미노산으로 구성 되는 것이 가장 좋다. 양호한 구체적인 예에서, 백신 조성물은 HLA-A1 결합 펩티드 FTELTLGEF (SEQ ID NO: 16), HLA-A2 결합 펩티드 LMLGEFLKL (SEQ ID NO: 5), HLA-A3 결합 펩티드 RISTFKNWPK (SEQ ID NO: 20), HLA-A24 결합 펩티드 STFKNWPFL (SEQ ID NO: 41), HLA-A11 결합 펩티드 DLAQCFFCFK (SEQ ID NO: 19), HLA-B35 결합 펩티드 EPDLAQCFY (SEQ ID NO: 9) 및 HLA-B7 결합 펩티드 LPPAWQPFL (SEQ ID NO: 10) 및 Montanide ISA 51 등의 애주번트를 포함한다. 더욱 양호한 구체적인 예에서, 백신 조성물은, i. HLA-B44 결합 펩티드 군에서 선택되는 1개 이상의 펩티드 또는 펩티드 변이체 및/또는 ii. HLA-B27 결합 펩티드 군에서 선택되는 1개 이상의 펩티드 또는 펩티드 변이체 및/또는 iii. HLA-B51 결합 펩티드 군에서 선택되는 1개 이상의 펩티드 또는 펩티드 변이체를 추가적으로 포함한다. - 29 -
<308> <309> <310> <311> <312> <313> <314> <315> <316> 특히 양호한 구체적인 예에서, 백신 조성물은 HLA-A1 결합 펩티드 FTELTLGEF (SEQ ID NO: 16), HLA-A2 결합 펩 티드 LMLGEFLKL (SEQ ID NO: 5), HLA-A3 결합 펩티드 RISTFKNWPK (SEQ ID NO: 20), HLA-A24 결합 펩티드 STFKNWPFL (SEQ ID NO: 41), HLA-A11 결합 펩티드 DLAQCFFCFK (SEQ ID NO: 19), HLA-B35 결합 펩티드 EPDLAQCFY (SEQ ID NO: 9) 및 HLA-B7 결합 펩티드 LPPAWQPFL (SEQ ID NO: 10)를 포함하고, 임의의 1개 이상의 HLA-B44 결합 펩티드는 KETNNKKKEY (SEQ ID NO: 42)이고, HLA-B27 결합 펩티드는 ERMAEAGFI (SEQ ID NO: 43)이 며, HLA-B51 결합 펩티드는 RAIEQLAAM (SEQ ID NO: 44)이고, Montanide ISA 51 등의 애주번트를 포함한다. 상기 구체적인 예 중 어느 하나에서, HLA-A11 결합 펩티드는 DLAQCFFCFK (SEQ ID NO: 19), DVAQCFFCFK (SEQ ID NO: 45), DFAQCFFCFK (SEQ ID NO: 46) 또는 DIAQCFFCFK (SEQ ID NO: 47)로 이루어지는 군에서 선택될 수 있다. 전술한 어떠한 구체적인 예에서는, 펩티드 수에 최대 13, 예켠대 12, 예컨대 11, 또는 10 또는 9를 곱한 수가 그 백신을 구성하는 아미노산의 최대 개수인 것이 좋다. 예를 들어, 백신이 5개의 펩티드를 포함하는 경우, 백 신은 최대 65, 예컨대 60, 예컨대 55, 예컨대 50 또는 40개의 아미노산으로 구성되는 것이 좋다. 본 발명에 따른 백신 조성물에서의 사용을 위한 서바이빈 펩티드 또는 서바이빈 펩티드 변이체를 선택하기 위해 서, HLA 클래스 I 분자와 결합하는 서바이빈 펩티드 및 펩티드 변이체의 능력이 평가될 수 있다. 더욱이, 암 환 자의 PBL 집단에서 INF-γ 생산 세포을 이끌어내는 서바이빈 펩티드 또는 서바이빈 펩티드 변이체의 능력이 평 가될 수 있다. 이들 측정법은 백신 조성물에서의 사용을 위한 서바이빈 펩티드 또는 서바이빈 펩티드 변이체의 유용성에 대한 척도가 될 수 있지만, 서바이빈 펩티드 또는 서바이빈 펩티드 변이체를 포함하는 백신 조성물의 투여에 따라 암 환자에게 강한 특이적 T 세포 반응을 유도할 수 있는 것이 좋다. 더욱이, 백신 조성물의 투여가 본 명세서의 표적 병변의 평가와 관련한 부분에서 기재하고 있는 것과 같이 특징 지어지는 임상 반응을 유도하는 것이 좋다. 임상 반응은 적어도 진행정지(stable disease) (표적 병변의 최장 직경의 함이 20% 이하로 증가), 더 좋기로는 표적 병변의 최장 직경의 합의 감소, 예컨대 부분관해(partial respose), 또는 가장 좋기로는 완전관해 (complete regression)로서 특징지어질 수 있다. 백신 조성물은 1개 이상의 서바이빈 펩티드(들) 또는 펩티드 변이체(들)을 포함하는 것으로서, 1개 이상의 서바 이빈 펩티드(들) 또는 펩티드 변이체(들)은 HLA 클래스 I 분자에 제한되고, 제한 펩티드 또는 펩티드 변이체는 다음의 특징 중 적어도 1개의 특징을 가진다. (i) WO 2004/067023에서 기재된 바와 같은 어셈블리 결합 분석(assembly binding assay)에 의해 측정시, 클래 스 I HLA 분자의 1/2 최대 회수 (C 50 값)가 가능한 펩티드의 양에 의해서 측정되는 친화도가 50 μm 이하인 친화 <317> 도로, 클래스 I HLA 분자에 결합할 수 있음, (ii) ELISPOT 분석에 의해 측정할 때 (WO 2004/067023에서 기재하고 있는 것처럼) 10 4 빈도로 암 환자의 PBL 집단에서 INF-γ 생산 세포를 이끌어낼 수 있음. PBL에 대하여 1 이상의 <318> 어셈블리 결합 분석은 상기 친화도로 주어진 HLA 대립형질 분자에 결합하는 능력으로 후보 펩티드를 스크리닝하 는 간단한 수단을 제공한다. 양호한 구체적인 예에서, 1개 이상의 서바이빈 펩티드 또는 서바이빈 펩티드 변이 체는, 30 μm 이하예컨대 20 μm 이하, 예컨대 10 μm 이하, 5 μm 이하 및 2 μm 이하 또는 1 μm 이하의 C 50 값을 가진다. 선택된 펩티드의 C 50 값을 WO 2004/067023의 표 4에서 나타내고 있다. <319> 본 발명에 따른 백신 조성물에 사용하기 위한 1개 이상의 서바이빈 펩티드 또는 서바이빈 펩티드 변이체의 특징 은 INF-γ 생산 응답 T 세포, 즉 PBL 집단에서의 특정 펩티드 또는 암 환자의 종양 세포 (표적 세포)를 특이적 으로 인식하는 세포독성 T 세포 (CTL)를 인식하거나 또는 이끌어내는 능력이다. 이러한 활성은 환자로부터의 대 상 PBL 또는 종양 세포에 의해 WO2004/067023에서 설명하고 있고 본 명세서에 참조통합된 ELISPOT 분석에서 용 이하게 측정된다. 분석에 앞서, 시험될 펩티드와 세포를 접촉시키는 것에 의해 분석되는 PBL 집단 또는 종양 세 포를 자극하는 것이 유리할 수 있다. 좋기로는, 펩티드는 본 명세서에서 사용되는 ELISPOT 분석에 의해 측정될 때, 10 4 PBL에 대하여 1 이상의 빈도로 INF-γ 생산 T 세포를 이끌어내거나 또는 인식할 수 있다. 더 좋기로는 빈도는 10 4 PBL에 대하여 5 이상이고, 가장 좋기로는 10 4 PBL에 대하여 10 이상, 예컨대 10 4 PBL에 대하여 50 또 는 100이다. 특히 구체적인 예에서는, 빈도는 10 4 PBL에 대하여 200 이상 또는 예컨대 10 4 PBL에 대하여 250 이 - 30 -
상이다. <320> <321> <322> <323> <324> <325> <326> MART-1 및 gp100 펩티드 등의 흑색종 특이적 항원에 응답한 IFN-γ의 생산이 암 환자에게 상기 펩티드를 백신 접종하여 증명되어 왔다. 그러나, 임상 반응과 중요한 상관성은 관찰되지 않았다 (Hersey, P. et al., Cancer Immunol. Immunother. 2004, Sep. 21). 따라서, 다음의 생체 내에서 기능의 잠정적인 면역원 평가를 확인하는 것이 좋다. 예컨대 백신접종의 전과 후에 INF-γ에 대한 ELISPOT 분석으로 측정되는 매우 강한 특이적 세포독성 T 세포 반 응의 유도와 같은, 매우 강한 면역 반응을 일으킬 수 있는 1개 이상의 서바이빈 펩티드(들) 또는 팹티드 변이체 (들)을 포함하는 백신 조성물이 매우 양호하다. 이러한 분석은, 백신 조성물의 투여 전과 후에 얻어지는 PBMC를 분석하는 것에 의하여, 예컨대 실시예 1에서 기 재하고 있는 것과 같은 ELISPOT 분석에 의하여, 백신 조성물에서 사용되는 면역원에 대한 반응성에 대한 환자에 게서의 세포독성 T 세포 반응을 테스트하는 것을 포함한다. 종래 기술에서 백신 조성물에서 수지상 세포의 사용은 오일 기재 애주번트에 비해서 높은 효율을 나타내었다 (Schreurs MW et all, Cancer Res. 2000 Dec 15;60(24):6995-7001) 따라서 수지상세포는 현재 양호한 애주번트 이다. 실시예 1에서 설명되는 임상 시험 과정의 놀라운 결과는 본 발명에 따른 백신 조성물의 투여가 놀랄만큼 높은 수의 특이적 INF-γ 방출 세포를 유도할 수 있었다는 것을 보여주었다. 본 발명에 따른 백신 조성물의 투여가 환자에게서, 10 4 PBMC 세포에 대하여 50개 초과, 또는 예컨대 10 4 PBMC 세 포에 대하여 100개 초과, 또는 10 4 PBMC 세포에 대하여 150개 초과, 또는 10 4 PBMC 세포에 대하여 200개 초과인 INF-γ 방출 세포의 수로 측정되는 강한 특이적 T 세포 반응을 유도할 수 있다. INF-γ 방출 세포의 개수에 의 해 측정되는 특이적 T 세포 반응이 10 4 PBMC 세포에 대하여 200개 초과인 것이 가장 좋다. <327> <328> <329> <330> <331> <332> <333> ELISPOT에 의해 측정되는 특이적 T 세포 반응은, 예컨대 백신 접종의 횟수 및 백신 조성물의 투여 시기와 같이, 채용되는 투여 방식에 의존할 수 있다 (치료에 관한 설명을 참조). 구체적인 예에서 강한 특이적 세포독성 T 세 포 반응은 12 개월 후, 또는 예컨대 10 개월 후, 예컨대 8 개월 후에 탐지될 수 있다. 양호한 구체적인 예에서, 특이적 세포독성 T 세포 반응은 6 개월 후에 탐지될 수 있다. 가장 양호한 구체적인 예에서, 특이적 세포독성 T 세포 반응은 4 또는 3 개월 후에 탐지될 수 있다. 또한, 혈관형성의 억제가 고형 종양의 발달에 대한 깊은 효과를 가지기 때문에, 펩티드의 항혈관형성 효과를 평 가하는 것이 적절할 수 있다. 잠재적인 항혈관형성 효과의 지표는 항원 특이적 T 세포로의 종양 기질(stroma)의 침윤(infiltration)이다. 종 양 기질 중의 항원 특이적 T 세포의 존재는 실시예 2에서 설명하고 있는 조직 염색의 방법을 사용하여 시험될 수 있고, 이에 의하여 암 환자의 종양 병변 중의 항원 특이적 T 세포는 생체 내에서 다합(multimerised) 펩티드 /HLA 복합체를 사용하여 측정된다. 항원 특이적 T 세포는, 좋기로는 HLA 클래스 I 분자와의 복합체에서, 본 발 명에 따른 서바이빈 펩티드 또는 서바이빈 펩티드 변이체를 인식할 수 있다. 본 발명에 따른 백신 조성물의 투여는, 예컨대 종양 기질 중의 서바이빈 특이적 T 세포와 같이, 종양 기질 중에 항원 특이적 T 세포의 침윤을 유도할 수 있는 것이 좋다. 백신 조성물의 평가는 투여에 따른 임상 반응을 일으키는데 있어서의 백신 조성물의 능력을 조사하는 것을 더 포함한다. 암의 치료와 관련하여, 임상 반응은 본 명세서의 표적 병변의 평가와 관련한 부분에서 기재하고 있는 것과 같이, 고형 종양에서의 반응 평가 기준(Response Evaluation Criteria in Solid Tumors; RECIST)을 사용 하여 측정할 수 있다. 구체적인 예에서, 본 발명에 따른 백신 조성물은, 진행정지, 부분관해 또는 완전관해로 불리는, 표적 병변의 최 장 직경의 합의 20% 이하로의 증가에 의해 특징지어지는, 임상 반응을 일으킬 수 있다. 따라서, 본 발명에 따른 백신 조성물에서 잠재적으로 사용될 수 있는 펩티드 변이체를 확인하는 단순한 접근 방 법은 다음의 단계, 즉 특정 HLA 분자, 예컨대 주어진 집단에서 높은 비율로 발생하는 것을 선택하는 단계, 서바 이빈 단백질 중의 "앵커 잔기 모티프"를 동정하기 위하여 전술한 것과 같은 정렬분석을 수행하는 단계, 1개 이 상의 동정된 앵커 잔기를 포함하는 적절한 크기의 펩티드를 분리 또는 제조하는 단계 및 (i) 본 명세서에 기재 - 31 -
된 것과 같은 조합 분석을 사용하여 특정 HLA 분자에 결합하는 능력 및/또는 (ii) WO2004/067023에서 기재하고 있는 것과 같은 ELISPOT 분석에 의해 측정될 때 10 4 PBL에 대하여 1 이상의 빈도로, 암 환자로부터의 PBL 집단 에서 INF-γ 생산 세포를 이끌어내는 펩티드의 능력에 대하여 결과적인 펩티드를 테스트하는 단계를 포함한다. <334> <335> <336> <337> <338> <339> <340> <341> <342> <343> <344> <345> <346> 동정된 펩티드 또는 펩티드 변이체가 본 발명에 따른 백신 조성물에 유용한지 여부를 증명하기 위하여, 상기 펩 티드를 포함하는 백신 조성물의, 예컨대 강한 특이적 세포독성 T 세포 반응의 유도 등의 면역 반응을 일으키는 능력을 (본 명세서의 실시예 1에서 기재하고 있는 것처럼) 백신접종 전과 후에 INF-γ에 대한 ELISPOT 분석에 의해 측정할 수 있다. WO2004/067023에서, HLA/펩티드 복합체에 의해서 동정된 서바이빈 반응성 세포가 표적 세포를 용균시키는 기능 적 능력을 가지는 것을 보여주었다. 더욱이, 서바이빈 펩티드 및 서바이빈 펩티드 변이체를 사용하는 수지상 세포 백신이 암 환자로부터의 PBL 집단 및 암 세포주에서 약한 면역 반응을 일으킬 수 있다는 것도 증명되었지만, 암 환자에게서의 임상 반응은 진행 (progressive disease)인 것으로 보고되었기 때문에 대단하지 않은(modest) 정도였다. 특이적 면역 반응은 집단 중의 PBMC의 총 개수 또는 CD8 + 세포의 개수와 관련하여 평가될 수 있다. 후자의 평가 의 참조가 WO 2004/067023에서 사용된 반면, 본 명세서에서는 PBM 세포의 총 개수의 참조를 사용하여 결과를 기 재하였다. WO 2004/067023의 도 17에 기재된 결과가 동일한 참조를 사용하였다면, 반응성 세포의 개수는 10 4 PBMC 세포에 대하여 8 30개가 될 것이다. 면역 반응의 강도는 잠재적인 면역원의 평가에 있어서 중요한 변수이므로, 이러한 분석은 백신 조성물을 평가하 는 강력한 도구이다. 본 발명에 있어서, 암 환자에게 투여에 따른 강한 특이적 T 세포 반응을 자극하는 능력은 중요한 특징이다. 상기 반응은 백신 조성물로의 면역화의 전과 후에 PBMC의 집단에서 INF-γ 생산 세포의 수에 의해 측정될 수도 있다. 본 발명의 구체적인 예에서, 백신 조성물은 암 환자에게 강한 특이적 T 세포 반응을 자 극할 수 있고, 여기서 투여 후에 ELISPOT 분석에 의해 측정되는 강한 T 세포 반응은 10 4 PBL 세포에 대하여 펩 티드 특이점이 50 초과, 예컨대 100 초과, 예컨대 150 초과, 예컨대 200 초과, 예컨대 225 초과, 또는 예컨대 250 초과인 것이다. 항혈관형성 효과를 일으킬 수 있는 백신 조성물은 종양 성장의 억제에 매우 효과적인 것으로 믿어지므로, 이론 에 의하여 한정됨이 없이, 유용한 펩티드를 선택하는데 항혈관형성 효과의 평가를 이용할 수 있다. 서바이빈에 대하여 강한 특이적 T 세포 반응을 일으킬 수 있는 펩티드(들)과 조합되는 경우, 이러한 펩티드 (들)을 포함하는 백신 조성물은 양호한 임상 반응을 유도할 가능성이 매우 높을 것으로 기대된다. 본 발명의 한 측면은 1개 이상의 서바이빈 펩티드 또는 서열이 전체 길이에 걸쳐서 SEQ ID NO: 23의 연속적인 아미노산 서열과 85% 이상 동일한 펩티드 변이체(들)와, 환자의 종양 기질 중에 항원 특이적 T 세포의 침윤을 유도할 수 있는 애주번트를 포함하는 백신 조성물에 관한 것이다. 양호한 구체적인 예에서, 백신 조성물은 환자의 혈관형성을 억제할 수 있다. 표적 병변에서의 효과를 평가하는 것 또한 필수적이므로, 백신 조성물의 투여 후의 임상 반응은 본 명세서의 표 적 병변의 평가에 관한 부분에서 기재하고 있는 것처럼 평가되어야 한다. 백신 조성물은, 실시예 1에 나타나 있 는 것처럼, 표적 병변의 최장 직경의 합에서 20% 이하의 증가에 의해서 특징지어지는, 진행정지, 부분관해 또는 완전관해로 불리는 임상 반응을 일으킬 수 있는 것이 좋다 표적 병변의 최장 직경의 합의 감소는 더욱 좋고 (부 분관해), 가장 좋은 반응은 완전관해(complate remission)이다. 서바이빈 펩티드 또는 서바이빈 펩티드 변이체는, 이들이 HLA 분자에 결합하는 능력 이외에, 세포 표면에 HLA와 펩티드의 복합체를 형성시킬 수 있고, 이렇게 형성된 복합체는 에피토프로서 또는 세포용해 T 세포에 대한 표적 으로서 작용하는 것으로 여겨진다. 서바이빈 펩티드 또는 서바이빈 펩티드 변이체가 다른 종류의 면역 반응, 예 컨대 복합체에 대한 항체의 생산 및/또는 지연형 과민 (DTH) 반응을 가져오는 B 세포 반응을 일으킬 수 있다는 것이 가능하다. 후자의 면역 반응 종류는 본 발명의 백신 조성물의 주입 자리에서의 발적 및 촉지성(palpable) 경화로서 정의된 다. 면역화(immunisation)의 가능한 부작용은 전신 또는 국부 독성일 수 있다. 혈관 변형(vascular alteration), - 32 -
예컨대 혈관염 또는 상처 치유 부전(impaired wound healing)이 부작용이 될 수 있다. 헤모글로빈, 백혈구 및 혈소판뿐만 아니라 락트산 탈수소효소, 크레아티닌 및 콜린에스테라제의 변형이 기타의 원하지 않은 효과이다. <347> <348> <349> <350> <351> <352> <353> <354> <355> 본 발명의 구체적인 예에서, 백신 조성물의 투여는 혈관 변형이 없다. 제2의 구체적인 예에서, 백신 조성물의 투여는 상처 치유 부전(impaired wound healing)을 유도하지 않는다. 따라서 본 발명의 가장 바람직한 구체적인 예에서, 백신 조성물의 투여는 기본적으로 부작용이 없다. 특히 부작 용의 관련성은 질병의 심각성과 관련하여 평가되어야만 한다. 더욱이, 전술한 바와 같이, 종양이 일반적으로 클래스 II MHC를 발현하지 않는다는 사실에도 불구하고, 종양 특 이적 T 핼퍼(helper) 세포 면역 (즉, 클래스 II MHC 제한 에피토프의 백신접종)을 일으키는데 대한 관심이 고조 되어 왔다. 이것은, 백신 유도 항종양 반응의 유도 및 효능이 많은 경우에 있어서 종양 특이적 CD4 양성 Th 세 포의 협동을 필요로 한다는 최근의 발견에 기초한다. 따라서, 더 복잡한 조성물을 가지는 백신의 개발을 이끄는 중요 인자는, 예컨대 신중하게 선택된 CTL 및 Th 세 포 에피토프의 집합을 포함하거나 또는 암호화하는 백신을 디자인하는 것에 의한, 다중 종양 항원을 표적으로 하고자 하는 요구이다. 다중 에피토프 백신 다중 에피토프 백신은, 종양단백질(oncoprotein)과 같은 잠재적으로 유해한 많은 단백질 (을 암호화하는 유전자)를 도입시킬 필요없이, 수개의 상이한 항원으로부터 유래되는 에피토프들에 대한 면역을 일으키는 효율 적인 방법이 된다는 것이 분명하다. 또한, 이러한 백신은 서브도미넌트(subdominant) 및 잠재 T 세포 에피토프 에 대한 면역의 선택적인 도입을 가능하게 하는 데, 이는 보통의 조직에서 현저하게 존재하는 에피토프 있어서 내성이 존재할 수 있는 종양 관련 자가항원의 경우에 특히 중요할 수 있다. 에피토프 백신에 관한 몇몇 문제점으로 항원 제공 세포가 특정 에피토프의 제공에 실패하는 것을 들 수 있다. 특히 종양 세포에 발현되는 항원은 항원 제공 세포의 면역프로테아좀(immunoproteasome)과 대부분의 종양 세포 에서 나타나는 '구성(constitutive)' 프로테오좀 사이의 기능적 차이에 기인하여 상이하게 나타날 수 있다. 따라서, 백신 조성물에 적합한 펩티드의 동정은 백신 조성물의 항원과 애주번트 성분 모두를 포함하는 백신 조 성물 중에 포함될 수 있는 상이한 화합물의 효능을 평가하는 실험 연구에 기초한 테스트와 선택을 포함한다. 따라서, 추가적인 측면에서, 본 발명은 1개 이상의 서바이빈 펩티드 또는 서바이빈 펩티드 변이체를 단독으로, 또는 다른 단백질 또는 펩티드 단편과 적절하게 조합하여 포함하는 백신 조성물을 제공한다. 구체적인 예에서, 이러한 다른 단백질 또는 펩티드 단편은 세포자멸사의 조절에 관련된 단백질 또는 이들의 펩티드 단편을 포함하 지만 이에 한정되는 것은 아니다. 이러한 단백질의 적절한 예로는 Bcl-2 단백질군, 예컨대 Bcl-2 단백질, Bcl- X L 단백질, Bcl-w 단백질, Mcl-1 단백질, TRAG-3 단백질 및 이들 단백질 중 임의의 단백질로부터 유래되는 펩티 드 단편 중에서 선택될 수 있다. 기타의 알려진 세포자멸사 억제제는 세포자멸사 단백질 억제제 (IAP)군, 예컨 대 X-IAP, C-IAP1 및 C-IAP2를 포함하는데, 이들 단백질은 모두 상대적으로 편재하도록(ubiquitously) 발현되는 반면, 세포자멸사 억제제 폴리펩티드 ML-IAP는 다소 선택적으로 발현하고, 흑색종에서 주로 탐지된다. 따라서, 특이적 T 세포 반응, 즉, 세포독성 T 세포 반응 또는 헬퍼(helper) T 세포 반응을 일으킬 수 있는 ML-IAP의 단 편은 필요에 따라 본 발명의 백신 조성물에 포함되어도 좋다. <356> <357> <358> <359> ML-IAP의 유용한 펩티드 단편은 ML-IAP245 (RLQEERTCKV) (SEQ ID NO: 24),ML-IAP280 (QLCPICRAPV) (SEQ ID NO: 25),ML-IAP90 (RLASFYDWPL) (SEQ ID NO: 26),ML-IAP154 (LLRSKGRDFV) (SEQ ID NO: 27), ML-IAP230 (VLEPPGARDV) (SEQ ID NO: 28), ML-IAP98 (PLTAEVPPEL) (SEQ ID NO: 29), ML-IAP34 (SLGSPVLGL) (SEQ ID NO: 30), ML-IAP54 (QILGQLRPL) (SEQ ID NO: 31), ML-IAP99 (LTAEVPPEL) (SEQ ID NO: 32),ML-IAP83 (GMGSEELRL) (SEQ ID NO: 33) 및 ML-IAP200 (ELPTPRREV) (SEQ ID NO: 34)을 포함한다. 더욱이 본 발명의 약학적 조성물은 유리하게는 서바이빈 단백질에 속하거나 유래하는 것이 아닌 단백질 또는 펩 티드 단편 중에서 선택되는 1개 이상의 추가적인 면역원성 단백질 또는 그의 펩티드 단편을 포함하여도 좋다. 구체적인 예에서, 면역원성 단백질 또는 그의 펩티드 단편은 앞에서 그리고 PCT/DK2004/000799에서 설명하고 있 는 Bcl-2 단백질군으로부터 유래된다. 추가적인 면역원성 Bcl-2 유래 펩티드는 Bcl172 (NIALWMTEYL) (SEQ ID NO: 35), Bcl180 (YLNRHLHTWI) (SEQ ID NO: 36), Bcl208 (PLFDFSWLSL) (SEQ ID NO: 37) 및 Bcl214 (WLSLKTLLSL) (SEQ ID NO: 38), Bcl218-33 -
(KTLLSLALV) (SEQ ID NO: 39) 및 Bcl80 (AAAGPALSPV) (SEQ ID NO: 40) 중에서 선택되는 서열을 가지는 HLA-A2 제한 펩티드이다. <360> <361> <362> <363> <364> <365> <366> <367> <368> <369> <370> <371> <372> <373> <374> <375> 본 발명의 하나의 구체적인 예는 ML-IAP, BCL-2, BCL-X, MCL-1 또는 TRAG-3 펩티드 (PCT/DK2004/000798에서 기 재하고 있음) 또는 HLA 클래스 I 분자와 결합할 수 있는 이들의 펩티드 변이체로 이루어지는 군에서 선택되는 1 개 이상의 펩티드 또는 펩티드 변이체를 더 포함하는 백신 조성물에 관한 것이다. 또한, 본 발명의 조성물은 앞에서 정의한 것과 같은 클래스 I 한정 에피토프 및/또는 클래스 II 한정 에피토프 를 포함하는 다중에피토프 백신으로서 제공될 수 있다. 투여량 본 발명의 유용한 백신 조성물은 면역학적 유효량의 서바이빈 펩티드 또는 서바이빈 펩티드 변이체를 포함한다 는 것이 고려된다. 백신 조성물 중의 서바이빈 펩티드 또는 서바이빈 펩티드 변이체의 양은 특정의 응용 분야에 따라 변할 수 있다. 그러나, 면역원의 단일 투여량은 좋기로는 약 10 μg 약 5000 μg 사이, 더 좋기로는 약 25 μg 약 2500 μg, 또는 예컨대 약 50 μg 약 1000 μg, 또는 예컨대 약 50 μg 약 500 μg, 또는 예컨대 약 50 μg 약 250 μg, 또는 예컨대 약 50 μg 약 200 μg, 또는 예컨대 약 75 μg 약 150 μg이다. 양호한 구체적인 예에서, 면역원의 투여량은 약 75 μg 약 150 μg이다. 가장 양호한 구체적인 예에서, 투여량은 약 100 μg이 다. 투여 투여의 방식은 피부내, 피하 및 정맥내 투여, 서방성(time release) 제형의 이식 등을 포함한다. 당해 기술분야 에 알려진 임의의 모든 투여형이 여기에 포함된다. 피하 투여, 특히 깊은 피하 투여가 양호하다. 본 발명에 따 른 백신 조성물이 배출 림프절(draining lymph node)의 인접한 근처에서 번갈아서 말단(extremities)으로 투여 되는 것이 더욱 양호하다. 또한, 주입가능한 면역원성 펩티드 조성물로 제형화하는데 적절한 당해 기술분야에서 공지의 임의의 모든 종래 의 투여형이 포함되고, 필요에 따라 종래의 약학적으로 허용가능한 담체, 희석제, 보존제, 애주번트, 완충성분 등을 함유하는, 예컨대 동결건조형 및 용액, 현탁액 또는 에멀젼형 등을 포함한다. 본 발명의 조성물의 면역 효과는 당업자에게 알려져 있고 WO 2004067023의 실시예에서 기재하고 있는 몇 가지 접근법을 사용하여 측정될 수 있다. 백신 조성물에 의해 자극된 CTL 반응을 측정하는 방법의 예를 WO97/28816에 서 개시하고 있다. 또한 성공적인 면역 반응은 면역화 후의 지연형 과민 (Delayed Type Hypersensitivity, DTH) 반응의 발생에 의해 및/또는 백신 조성물의 펩티드(들)을 특이적으로 인식하는 항체의 탐지에 의해 측증될 수 있다. 양호한 구체적인 예에서, 본 발명의 약학적 조성물은 암에 대한 면역 반응을 일으킬 수 있는 면역원성 조성물 또는 백신이다. 본 명세서에서 사용되는, "면역원성 조성물 또는 백신"이라는 표현은 암 세포에 대해서 적어도 1 종류의 면역 반응을 일으키는 조성물을 말한다. 따라서, 그러한 면역 반응은 전술한 임의의 종류일 수 있다: 세포 표면에 발 현되는 HLA/펩티드 복합체를 인식할 수 있는, CTL이 생성되어 세포 용해를 일으키는 CTL 반응, 즉, 백신접종된 환자에서 암 세포에 대하여 세포독성 효과를 가지는 작동(effector) T 세포의 생산을 일으키는 백신; 항암 항체 를 생산하게 하는 B 세포 반응; 및/또는 DTH형의 면역 반응. 핵산 백신 본 발명에 따른 백신 조성물은 서바이빈 폴리펩티드 (SEQ ID NO: 23), 이들의 펩티드 단편 또는 이들의 서바이 빈 펩티드 변이체를 암호화하는 핵산을 포함할 수 있다. 따라서 상기 핵산은 전술한 단백질 및 펩티드 단편 중 하나를 암호화할 수 있다. 핵산은 예컨대 DNA, RNA, LNA, HNA, PNA일 수 있고, 좋기로는 핵산은 DNA 또는 RNA이 다. 구체적인 예에서, 본 발명은 i. a) 서바이빈 폴리펩티드 (SEQ ID NO: 23), b) 서바이빈 펩티드 또는 - 34 -
<376> <377> <378> <379> <380> <381> <382> <383> <384> <385> <386> <387> <388> <389> <390> <391> c) 서바이빈 펩티드 변이체 를 암호화하는 핵산 및 ii. 전술한 임의의 애주번트 를 포함하는 백신 조성물에 관한 것이다. 본 발명의 핵산은, 예컨대 발현 벡터 등의 임의의 적절한 벡터 내에 포함될 수 있다. 수많은 벡터가 이용될 수 있고, 당업자는 특정 목적에 있어서 유용한 벡터를 선택할 수 있을 것이다. 벡터는, 예컨대 플라스미드, 코스미 드, 바이러스입자 또는 인공 크로모좀의 형태일 수 있다. 적절한 핵산 서열은 다양한 절차에 의해 벡터내로 삽 입될 수 있는데, 예컨대 DNA는 당해 기술 분야에 알려진 기술을 사용하여 적절한 제한 엔도뉴클리에이즈 위치 (들)로 삽입될 수 있다. 벡터는 본 발명에 따른 핵산 서열 이외에, 단일 서열, 복제 기점, 1개 이상의 표지 유 전자, 인핸서 요소(enhancer element), 프로모터 및 전사종결서열 중 1개 이상을 더 포함할 수 있다. 또한, 벡 터는 추가적인 서열을 포함할 수 있다. 1개 이상의 이러한 요소를 함유하는 적적한 벡터의 제조는 당업자에게 공지의 표준 연결(ligation) 기술을 사용한다. 벡터는 좋기로는 발현 벡터이고, 적절한 세포에서 이들의 발현을 지시하는 조절 핵산 서열과 작동가능하게 연결된 핵산을 포함한다. 본 발명의 범위 안에서, 상기 조절 핵산 서열은 포유동물 세포, 좋기로는 인간 세포 중에서, 더 좋기로는 항원 제공 세포 중에서 일반적으로 직접적인 발현을 할 수 있어야한다. 양호한 하나의 구체적인 예에서, 벡터는 바이러스 벡터이다. 상기 바이러스 벡터는 서바이빈 또는 그 펩티드 단 편을 암호화하는 핵산 이외에, T 세포 자극성 폴리펩티드를 암호화하는 제2 핵산 서열을 포함할 수 있다. T 세 포 자극성 폴리펩티드는 B7.1, ICAM-1 및 LFA-3으로 구성되는 군에서 선택되는 것이 좋다. 또한, 벡터는, 예컨대 약독화(attenuated) 세균성 벡터 등의 세균성 벡터일 수 있다. 약독화 세균성 벡터는 감 염 및 존속 위치에서 지속성 점막 면역 반응을 유도하기 위해서 사용될 수 있다. 상이한 재조합 세균이 벡터로 서 사용될 수 있는 데, 예컨대 세균성 벡터는 살모넬라(Salmonella), 락토코커스(Lactococcus) 및 리스테리아 (Listeria)로 구성되는 군에서 선택될 수 있다. 일반적으로, 이종 항원 HPV16 L1 또는 E7에 대한 면역의 유도는, 생쥐에서 종양 퇴행 및 강한 CTL 유도로서 나타날 수 있다. 제약 약제(Pharmaceutical medicament) 본 발명의 한 가지 측면은 약제 제조용의 본 발명에 따른 백신 조성물에 관한 것이다. 구체적인 예에서, 약제는 암의 치료용이다. 구체적인 예에서, 본 발명에 따른 약제는 피하 투여용이고, 따라서 약제는 용액 또는 현탁액으로 조성되거나, 또는 투여 전에 현탁시켜 사용하는 동결 건조 제품으로서 제형될 수 있다. 본 발명은 또한 활성 성분으로서 1개 이상의 서바이빈 펩티드 또는 서바이빈 펩티드 변이체 및 애주번트를 함유 하는 백신 조성물을 포함하는 암 치료용 약제에 관한 것이다. 치료 서바이빈 분자는 많은 암 질병의 집단에서 조절되지 않는다(deregulated)는 것이 발견되어 왔다. 서바아빈 펩티 드 또는 서바이빈 펩티드 변이체를 포함하는 백신 조성물은 암 등의 임상 조건의 치료용으로 사용될 수 있다. 본 발명에서, 치료는 증상의 감소 및 질병의 진행의 억제를 포함하고, 따라서 본 명세서의 다음에서 설명되는 임상 반응을 가져온다. 본 발명에 따른 백신 조성물은 1번 이상, 예컨대 2번, 3번, 4번, 5번, 또는 예컨대 6번 이상, 예컨대 7번 이상, 예컨대 10번 이상, 예컨대 15번 이상 투여될 수 있다. 본 발명의 백신 조성물을 사용하여 치료되는 질병은 재발 성 또는 만성일 수 있고, 따라서 증상을 최소화하기 위해서 및 병의 진행 또는 재발을 억제하기 위해서, 치료는 정기적인 간격으로 장기간 동안 계속될 수 있다. 예를 들어, 치료된 질병이 암일 수 있고, 치료는 임상 반응이 완전관해 또는 진행정지가 될 때까지 또는 그러한 동안, 또는 환자의 일생동안 계속 될 수 있다. 백신 조성물은, 1 개월 이상 동안, 예컨대 2 개월 이상, 예컨대 3 개월 이상, 예컨대 5 개월 이상, 예컨대 8 개 월 이상, 예컨대 12 개월 이상, 예컨대 20 개월 이상 동안, 예컨대 매 14일 마다 한번 투여될 수 있다. 백신 조 성물은 환자의 일생동안 정기적인 간격으로 투여될 수 있다. 백신 조성물은 병이 재발할 때 또는 병의 진행이 탐지될 때 투여될 수 있다. - 35 -
<392> <393> <394> <395> <396> <397> <398> <399> <400> <401> <402> <403> <404> <405> <406> <407> <408> <409> 구체적인 예에서, 본 발명은 환자에게 서바이빈에 대한 강한 특이적 T 세포 반응을 자극하는 방법에 관한 것인 데, 상기 방법은 a) 본 발명에 따른 백신 조성물을 제공하는 단계, b) 환자에게 상기 백신 조성물 투여하는 단계로서, 상기 백신 조성물은 두번 이상 투여될 수 있는 것인 단계 및 c) 이에 따라, 환자에게 강한 특이적 T 세포 반응을 자극하는 단계로서, 상기 특이적 T 세포 반응은 백신 조성 물의 투여 전과 후에 ELISPOT 분석에 의해 측정할 때, 10 4 PBMC 세포에 대하여 펩티드 특이점이 50 이상인 것인 단계 를 포함하는 것이다. 구체적인 예에서, 백신 조성물의 투여 전과 후에 ELISPOT 분석으로 측정할 때, 강한 특이적 T 세포 반응은 10 4 PBMC 세포에 대하여 펩티드 특이점이 200개 이상이다. 더 구체적인 예에서, 본 발명에 따른 방법은 상기 백신 조성물을 1개월 마다 한번 투여하는 것을 포함할 수 있 다. 상이한 양호한 구체적인 예에서, 백신 조성물은 매 2 개월마다 한번씩 투여된다. 구체적인 예에서, 본 발명은, a) 전술한 임의의 펩티드 및 필요에 따라 전술한 임의의 애주번트를 포함하는 백신 조성물을 제공하는 단계, b) 상기 백신 조성물을 환자에게 투여하는 단계로서, 상기 백신 조성물은 두번 이상 투여될 수 있는 것인 단계 및 c) 그에 따라 환자에게 강한 특이적 T 세포 반응을 자극시키는 단계로서, 그 강한 특이적 T 세포 반응은 백신 조성물의 투여의 전과 후에 ELISPOT 분석에 의해 측정할 때, 10 4 PBMC 세포에 대하여 펩티드 특이점이 50개를 초과하는 것인 단계, d) 환자에게서 임상 반응을 얻는 단계 를 포함하는 질병의 치료 또는 예방 방법에 관한 것이다. 임상 반응은 아래의 표적 병변의 평가와 관련한 명세서의 부분에서 설명되는 것과 같이 평가된다. 양호한 구체적인 예에서, 백신 조성물은 임상 조건의 치료용이다. 본 발명의 양호한 구체적인 예에서, 임상 조건은 암이다. "암 (cancer)"이라는 용어는 모든 암, 종양성 및 전종 양성 질환을 포함하는 것을 의미하도록 여기서 사용된다. 예를 들어, 상기 암은 결장 암종, 유방암, 췌장암, 난소암, 전립선암, 섬유육종, 점액육종, 지방육종, 연골육종, 골육종, 척삭종, 혈관육종, 내피육종, 림프관육종, 림프관내피육종, 윤활막종, 중피종, 유윙육종 (Ewing's sarcoma), 평활근육종, 횡문근육종, 편평세포암종, 기저세포암종, 선암종, 한선암종, 피지선암종, 유 두상암종, 유두상 선암종, 낭생암종, 속질암종, 기관지유래암종, 신세포암종, 간암, 담관암종, 융모막암종, 고 환종, 배아암종, 윌름종양, 자궁경부암, 고환종양, 폐암종, 소세포폐암종, 방광암종, 상피내암종, 교모세포종, 신경종(neuronomas), 머리인두종(craniopharingiomas), 신경집종(schwannomas), 신경아교종, 성상세포종, 수모 세포종, 두개인두종, 뇌실막세포종, 송과체종, 혈관모세포종, 청신경종(acoustic neuroama), 희소돌기아교세포 종, 수막종, 흑색종, 신경모세포종, 망막모세포종, 백혈병 및 림프종, 급성 림프구성 백혈병 및 급성 골수성 진 성적혈구증가증(acute myelocytic polycythemia vera), 다발골수종, 발덴스트롬 마크로글로불린혈증, 및 중쇄병, 급성 비림프구성 백혈병, 만성 림프구성 백혈병, 만성 골수 백혈병, 호지킨병, 비호지킨 림프종, 직장 암, 요로암(urinary cancers), 자궁암, 구강암, 피부암, 위암, 뇌종양, 간암, 후두암, 식도암, 유암(mammary tumors), 소아 널 급성 림프 백혈병(childhood-null acute lymphoid leukemia, ALL), 흉선 ALL, B 세포 ALL, 급성 골수성 백혈병, 골수단핵구백혈병(myelomonocytoid leukemia), 급성 거핵구백혈병, 버킷림프종, 급성 골수 성 백혈병, 만성 골수성 백혈병, 및 T 세포 백혈병, 소 및 대 비소세포 폐 암종(small and large non-small cell lung carcinoma), 급성 과립구성 백혈병, 생식세포 종양, 자궁내막암, 위암, 두경부암(cancer of the head and neck), 만성 림프 백혈병, 모발상세포 백혈병 및 갑상선암으로 이루어지는 군에서 선택되는 것일 수 - 36 -
있다. <410> <411> <412> <413> <414> <415> <416> <417> <418> <419> <420> <421> <422> <423> <424> <425> <426> 구체적인 예에서, 본 발명에 따른 백신 조성물은 악성흑색종, 췌장암, 자궁경부암 또는 결장암으로 이루어지는 군에서 선택되는 암의 치료용이다. 양호한 구체적인 예에서, 본 발명에 따른 백신 조성물은 악성흑색종 및 췌장암의 치료용이다. 본 발명의 한 가지 측면은, a) 본 발명에 따른 백신 조성물을 제공하는 단계, b) 상기 백신 조성물을 환자에게 투여하는 단계 를 포함하는 혈관생성 억제 방법에 관한 것이다. 치료를 필요로 하는 환자는 임의의 개체, 좋기로는 인간일 수 있다. 펩티드는 일반적으로 상이한 HLA 분자에 대 하여 상이한 친화도를 가질 것이다. 따라서, 백신 조성물 또는 약학적 조성물이 서바이빈 펩티드를 포함하는 본 발명의 구체적인 예에서, 대상 환자에게 투여될 수 있는 백신 조성물 또는 약학적 조성물은 특정 개인의 HLA 분 자와 결합할 수 있는 1개 이상의 펩티드를 포함하게 되는 것이 좋다. 조합 치료 본 발명은 또한 조합 치료용 약학적 조성물 및 키트 오브 파트(kit-of-parts)에 관한 것이다. 본 명세서에서 사용되는 조합 치료는 1개가 넘는 상이한 약제로의 치료를 필요로 하는 환자의 치료를 뜻한다. 따라서, 조합 치료는 한 가지 측면에서, 전술한 백신 조성물과 제2 약제를 포함하는, 약학적 조성물 또는 키트 오브 파트의 투여에 관한 것이다. 제2 약제는, 예컨대 화학요법제 또는 혈관형성 억제제 등의, 본 명세서의 다 음에 기재되어 있는 임의의 약제일 수 있다. 특히, 조합 치료는 i) 본 발명에 따른 서바이빈 펩티드 또는 서바이빈 펩티드 변이체, ii) 본 발명에 따른 백신 조성물 중 1개 이상과 조합하여, 화학요법제 및/또는 면역치료제를 환자에게 투여하는 것을 포함할 수 있다. 그 러나, 조합 치료는 또한 방사선요법, 유전자요법 및/또는 수술을 포함한다. 본 발명의 한 가지 측면은, i) 본 발명에 따른 백신 조성물 및 ii) 제2 약제 의 동시, 연속 또는 임의의 순서로의 분리 투여를 포함하는 조합 치료 방법에 관한 것이다. 양호한 구체적인 예에서, 제2 약제는 화학요법제이다. 화학요법제는, 예컨대 메토트렉세이트, 빈크리스틴, 아드리아마이신, 시스플라틴, 당 함유 없는 클로로에틸니트 로소우레아(non-sugar containing chloroethylnitrosoureas), 5-플루오로우라실, 미토마이신 C, 블레오마이신, 독소루비신, 다카바진, 탁솔(Taxol), 프라질린(fragyline), 메그라민 GLA, 발루비신, 카르무스테인 (carmustaine) 및 폴리페르포산, MM1270, BAY 12-9566, RAS 파메실 트란스퍼라제 억제제, 파메실 트란스퍼라제 억제제, MMP, MTA/LY231514, LY264618/로메텍솔, 글라몰렉(Glamolec), CI-994, TNP-470, 히캄틴(Hycamtin)/토 포테칸(Topotecan), PKC412, 발스포다르(Valspodar)/PSC833, 노반트론(Novantrone)/미트록산트론 (Mitroxantrone), 메타렛(Metaret)/수라민(Suramin), 바티마스탯(Batimastat), E7070, BCH-4556, CS-682, 9- AC, AG3340, AG3433, 인셀(Incel)/VX-710, VX-853, ZD0101, ISI641, ODN 698, TA 2516/마르미스텟 (Marmistat), BB2516/마르미스텟(Marmistat), CDP 845, D2163, PD183805, DX8951f, 레모날(Lemonal) DP 2202, FK 317, 피시바닐(Picibanil)/OK-432, AD 32/발루비신(Valrubicin), 메타스트론(Metastron)/스트론튬 유도체, 테모달(Temodal)/테모졸로미드(Temozolomide), 에바셋(Evacet)/리포조말 독소루비신, 예우탁산(Yewtaxan)/플락 리탁셀(Placlitaxel), 탁솔/팍리탁셀(Paclitaxel), 제로드(Xeload)/카페시타빈(Capecitabine), 푸르툴론 (Furtulon)/독시플루리딘(Doxifluridine), 시클로팍스(Cyclopax)/경구 팍리탁셀, 경구 탁소이드, SPU-077/시스 플라딘(Cisplatin), HMR 1275/플라보피리돌(Flavopiridol), CP-358 (774)/EGFR, CP-609 (754)/RAS 종양유전자 억제제, BMS-182751/경구 플레니넘, UFT(테가푸르(Tegafur)/우라실), 에르가미졸/레바미졸, 에닐우라실 /776C85/5FU 인핸서, 캄포/레바미졸, 캄프토사르/이리노테칸, 투모덱스/랄리트렉세드(Ralitrexed), 류스타틴/클 라드리빈, 팍스엑스(Paxex)/팍리탁셀(Paclitaxel), 독실(Doxil)/리포좀성 독소루비신, 카에릭스(Caelyx)/리포좀 성 독소루비신, 플루다라(Fludara)/플루다라빈(Fludarabine), 파마루비신(Pharmarubicin)/에피루비신, 데포시 - 37 -
트(DepoCyt), ZD1839, LU 79553/비스-나프탈이미드, LU 103793/돌라스타인(Dolastain), 카에틱스(Caetyx)/리포 좀성 독소루비신, 겜자르(Gemzar)/겜시타빈(Gemcitabine), ZD 0473/아노르메드(Anormed), YM 116, 로딘 시드 (lodine seeds), CDK4 및 CDK2 억제제, PARP 억제제, D4809/덱시포사미드(Dexifosamide), 이페스(Ifes)/메스넥 스(Mesnex)/이포사미드(Ifosamide), 부몬(Vumon)/테니포시드(Teniposide), 파라플라틴(Paraplatin)/카르보플라 틴, 플란티놀(Plantinol)/시스플라틴, 베페시드(Vepeside)/에토포시드(Etoposide), ZD 9331, 탁소테레 (Taxotere)/독세탁셀(Docetaxel), 구아닌 아라비노시드의 전구약물, 탁산 아날로그(Taxane Analog), 니트로소 우레아, 멜페란 및 시클로포스파미드 등의 알킬화제, 아미노글루테티미드(Aminoglutethimide), 아스파라기나아 제, 부설판(Busulfan), 카르보플라틴, 크로롬부실(Chlorombucil), 시타라빈 HCl, 닥티노마이신, 다우노루비신 HCl, 에스트라무스틴 포스페이트 소디움, 에토포시드 (VP16-213), 플록스우리딘, 플루오로우라실 (5-FU), 플루 타미드, 히드록시우레아 (히드록시카바미드), 이포스파미드(Ifosfamide), 인터페론 α-2a, α-2b, 류프롤리드 아세테이트 (LHRH-방출 인자 유사체), 로무스틴 (CCNU), 메클로레타민 HCl (질소 머스타드), 메르캅토퓨린, 메 스나(Mesna), 미토탄 (o.p'-ddd), 미톡산트론 HCl, 옥트레오티드(Octreotide), 플리카마이신, 프로카바진 HCl, 스트렙토조신, 타목시펜 시트레이트, 티오구아닌, 티오테파, 빈블라스틴 술페이트, 암사크린 (m-amsa), 아자시 티딘, 에리트로포이에틴(Erthropoietin), 헥사메틸멜라민 (HMM), 인터루킨 2, 미토구아존 (메틸-GAG; 메틸 글리 옥살 비스-구아닐히드라존; MGBG), 펜토스타틴 (2'데옥시코포르마이신), 세무스틴 (메틸-CCNU), 테니포시드 (VM-26) 및 빈데신 술페이트 등일 수 있다. 더욱이, 화학요법제는 US 6,482,843 컬럼 13 18의 표 3에서 기재하 고 있는 화학요법제 중의 하나이어도 좋다. <427> <428> <429> <430> <431> <432> <433> 또한 본 발명의 치료 조성물 또는 백신 조성물은 다른 항암 전략과 조합하여 사용될 수 있고, 이러한 조합 치료 는 종양의 성장 및 전이를 억제 및/또는 제거하는데 효과적이다. 본 발명의 방법은 방사선, 수술, 유전자요법 및 화학요법을 비제한적으로 포함하는 기타의 치료 기법과 함께 유리하게 사용될 수 있다. 서바이빈은 혈관 생성 도중에 내피 세포에서 고도로 발현되고, 혈관 내피 성장 인자(VEGF)의 세포보호 효과와 관련될 수 있으며, 따라서 서바이빈 발현 세포를 표적으로 하는 것은 직접적으로 암 세포를 표적으로 할 수 있 고, 더욱이 혈관생성의 억제에 의해 종양 성장을 예방할 수 있다. 항혈관형성 효과는 본 발명에 따른 백신으로의 치료와 혈관형성 억제제로의 치료의 결합에 의해 강화될 수 있다. 항혈관형성 치료는 종양 혈관계를 표적으로 하고, 특정 크기 이상으로의 종양 성장을 방지하기 때문에, 양호한 구체적인 예에서, 제2 약제는 혈관형성 억제제이다. 혈관형성 억제제는, 예컨대 BMS-275291, 달테파린 (Fragmin ), 수라민, 2-메톡시에스트라디올 (2-ME), 탈리도 미드, CC-5013 (탈리도미드 유사체), 콤브레타스타틴 A4 포스페이트, LY317615 (단백질 키나아제 C β 억제제), 콩 이소플라본 (겐니스테인; 콩 단백질 분리물), AE-941 (Neovastat ; GW786034), 항-VEGF 항체 (베바시주마 브; Avastin ), 인터페론 α, PTK787/ZK 222584, VEGF-Trap, ZD6474, EMD 121974, 카르복시아미도트리아졸 (CAI), 셀레콕시브 (Celebrex ), 할로푸기논 히드로브로미드 (Tempostatin ), AdPEDF, 마쿠젠(Macugen), 트 립토파닐-tRNA 합성효소 (TrpRS), 루파브(rhufab) V2 (아카 루센티스), 스쿠알라민, 레타안(Retaane) 15 mg (저장 현탁액으로 아넥코르타브 아세테이트) 및 인터루킨-12 등을 포함할 수 있지만, 이에 한정되는 것은 아니 다. "조합 치료"는 일반적으로 유전자요법이라고 불리는, 적절한 세포 속으로의 이종 핵산의 도입을 포함한다. 예를 들어, 유전자요법은 종양 세포 내로 종양 억제 유전자 또는 세포자멸사 촉진 유전자를 도입시키는 것을 포함할 수 있다. 그 대신에, 종양유전자의 발현을 억제하는 핵산 서열 또는 세포자멸사 억제 유전자가 종양 세포에 도 입될 수 있다. 더욱이, 화학요법제에 민감한 종양세포를 부여할 수 있는 효소를 암호화하는 유전자가 도입될 수 있다. 따라서, 하나의 구체적인 예에서 본 발명은 전구약물, 즉 비독성 화합물을 독성 화합물로 효소적인 전환 이 가능한 단백질을 암호화하는, 유전자 벡터의 도입에 의해서 암을 치료하는 단계를 포함하는 방법을 제공한다. 본 발명의 방법에서, 치료 핵산 서열은, 단독으로 또는 다른 약물의 존재하에서 세포를 죽음에 이르 게 하는 생성물을 암호화하는 핵산이다. 이러한 치료 핵산의 대표적인 예는 단순포진바이러스의 티미딘 키나아 제를 암호화하는 것이다. 추가적인 예로는 수두대상포진바이러스의 티미딘 키나제 및 5-플루오로시토신을 매우 독성 화합물인 5-플루오로우라실로 전환시킬 수 있는 세균성 유전자 시토신 데아미네이즈가 있다. 표적 병변의 평가 치료에 대한 반응은, 표적 병변의 최장 직경의 측정치를 참작하여, 암 치료 결과 보고용 오리지날 WHO 핸드북 (세계 보건 기구 옵셋 공보 No 48; 1979)에서 기재하고 있는 RECIST (고형 종양에서의 반응 평가 기준) 기준을 사용하여 측정된다 (Therasse P et al. J. Natl. Cancer Inst. 2000 Feb 2;92(3): 205-16). 반응은 완전관해 - 38 -
(complete response), 부분관해(partial response), 진행(progressive disease) 및 진행정지(stable disease) 로 나누어진다. 완전관해는 모든 표적 병변이 사라진 것이며, 반면 부분관해는 표적 병변의 최장 직경의 합이 30% 이상 감소된 것을 말한다. 진행은 표적 병변의 최장 직경의 합의 20% 이상의 증가를 말한다. 진행정지는 상 기한 바에 중에 어디에도 해당하지 않는 경우를 말한다. 완전관해 또는 부분관해의 지속기간은 측정기준에 처음 으로 부합되는 시점부터 재발 또는 진행이 증명된 최초의 날짜까지로 측정되어야 한다. 효과는 좋기로는 적어도 1명의 환자에게서 관찰된다. <434> <435> <436> <437> <438> <439> <440> <441> <442> <443> <444> <445> <446> <447> <448> <449> <450> 부분관해는 표적 병변의 최장 직경의 합의 30% 이상 감소가 관찰되는 반응을 말한다. 반응은, 표적 병변의 최장 직경의 합의 감소가 적어도 각각 40%, 50%, 60%, 70%, 80% 또는 90% 감소가 관찰되는 치료와 관련하여, 40%의 부분관해, 또는 50%의 부분관해, 또는 60%의 부분관해, 또는 70%의 부분관해, 또는 80%의 부분관해, 또는 90%의 부분관해의 부분군으로 더 나눌 수 있다. 구체적인 예에서, 본 발명에 따른 백신 조성물은 암 치료용이고, 이에 의해서 30% 이상의 부분관해가 얻어진다. 구체적인 예에서, 본 발명에 따른 백신 조성물의 투여 단계를 포함하는 방법은 암 치료용이고, 이에 의해서, 40% 이상, 예컨대 50% 이상, 예컨대 60% 이상, 예컨대 70% 이상, 예컨대 80% 이상 또는 예컨대 90% 이상의 부분 관해가 얻어진다. 진행정지는 표적 병변의 최장 직경의 합이 30% 이하로 감소되는 반응을 말하며, 또한 표정 병변의 최장 직경의 합이 20% 이하로 증가되는 반응을 포함한다. 이러한 종류의 반응은 표적 병변의 최장 직경의 합이 30% 이하, 예 컨대 25% 이하, 예컨대 20% 이하, 예컨대 15% 이하, 예컨대 10% 이하 또는 예컨대 5% 이하로 감소한 반응으로 세분될 수 있고, 표적 병변의 최장 직경의 합이 20% 이하, 예컨대 15% 이하, 예컨대 10% 이하 또는 5% 이하로 증가된 부분군으로 세분될 수 있다. 또한, 표적 병변의 최장 직경의 합이 1% 이하, 예컨대 3% 또는 예컨대 5% 이하로 감소 또는 증가되는 것인 부분군이 포함된다. 진행은 표적 병변의 최장 직경의 합이 20% 이상 증가하는 것을 나타낸다. 이러한 종류의 반응은 표적 병변의 최 장 직경의 합이 25% 이하, 예컨대 30% 이하, 예컨대 35% 이하, 예컨대 40% 이하, 예컨대 45% 이하 또는 예컨대 50% 이하로 증가된 반응으로 세분될 수 있다. 본 발명에서, 표적 병변의 최장 직경의 합이 30% 이하로 증가된 진행인 반응을 이끄는 치료는, 만약 진단에서 50%의 증가를 예상하였다면, 긍정적인 결과로서 고려될 수 있다. 따라서, 구체적인 예는 진행을 특징으로 하는 반응인 치료 및 표적 병변의 최장 직경의 합이 25% 이하, 예컨대 30% 이하, 예컨대 35% 이하, 예컨대 40% 이하, 예컨대 45% 이하 또는 예컨대 50% 이하로 증가된 치료를 포함한 다. 본 발명의 구체적인 예는 a) 본 발명에 따른 백신 조성물을 제공하는 단계, b) 상기 백신을 환자에게 투여하는 단계, c) 암 치료용 및 d) 상기 백신 조성물의 투여가, 표적 병변의 최장 직경의 합의 20% 이하의 증가로 특징지어지는, 진행정지, 부 분관해 또는 완전관해를 가져오는 것 을 포함하는 병의 치료 또는 예방 방법에 관한 것이다. 실시예 1에 기재된 데이터는 질병이 상당히 진행되어, 이미 많이 치료된 환자들의 경우에도, 조사된 모든 환자 의 순환 림프구의 풀(pool)에서 매우 강한 서바이빈 특이적 T 세포 반응이 늘어났음을 보여준다. 실시예 1, 표 3에서 나타나듯이, 두 명의 환자 JUSC 및 OTSC는 완전관해가 되었고, 반면 일부 경우에서는 진행 정지가 관찰되었고, 1명의 환자에게서는 부분관해가 나타났다. 키트 오브 파트(Kit of parts) 조합 치료는 1개 이상의 약제 중에 배합된 2개 이상의 활성 성분의 분리, 연속 또는 동시 투여에 관한 것이다. 편리한 사용을 위해서, 상기 약제는 단일 조합 제품 또는 키트 오브 파트 중에 포함될 수 있다. 본 발명의 한 가지 측면은 a) i. 1개 이상의 서바이빈 펩티드 또는 그 서열이 전체 길이에 걸쳐서 SEQ ID NO: 23의 연속적인 아미노산 서 - 39 -
열과 85% 이상 동일한 것인 서바이빈 펩티드 변이체와, <451> <452> <453> <454> <455> ii. 본 명세서에 기재되어 있는 애주번트를 포함하는 백신 조성물과, b) 제2 약제 를 포함하는 백신 조성물을 포함하는 키트 오브 파트에 관한 것이다. 본 발명에 따른 키트 오브 파트의 암의 치료에 있어서, 약제는 화학요법제일 수 있다. 면역 질환의 치료와 관련 하여서, 약제는 면역요법제일 수 있다. 본 발명에 따른 키트 오브 파트의 구체적인 예에서, 약제는 화학요법제 또는 면역요법제를 포함한다. 양호한 구 체적인 예에서, 약제는 화학요법제를 포함한다. 본 발명에 의하면, 키트 오브 파트에 포함되는 백신 조성물 및 약제는 분리, 연속 또는 동시 투여용이다. 키트 오브 파트는 포함된 약제 및 백신 조성물의 적절한 용법/투여/ 투여량의 정보를 포함하는 기록을 더 포함하여도 좋다. <462> <463> <464> <465> <466> <467> <468> <469> <470> <471> <472> <473> <474> <475> <476> 실 시 예 실시예 1 서바이빈 유래 에피토프 및 애주번트로서 Montanide ISA 51을 포함하는 백신 조성물을 사용한 임상 결과. 다음 에 설명하는 것과 같이 일련의 후기(late stage) 암 환자에게 치료를 수행하였다. 모든 임상 과정은 헬싱키 선언을 준수하였고, 모든 환자에게 치료에 앞서서 사전 동의를 받았다. 임상 연구는 독일의 부르츠부르그 대학(University of Wurzburg) (Studien-Nr. 7/03) 독일 랑겐의 파울 에를리히 연구소 (Paul-Ehrlich-Institute) (Vorlagen-Nr 0899/01)의 윤리 검토 위원회에 의해 승인을 받았다. 환자 이 연구에 참여하는 데 대한 자격을 얻기 위해서는, 환자는 다음의 기준을 만족하여야만 하였다. 측정가능한 전이성 흑색종, 췌장, 결장 또는 자궁경부암 확인된 진행성 질병 적어도 한 번의 표준 치료법의 실패 기대여명이 3개월 이상 지난 4주 동안에 치료를 받지 않았을 것 육안적인 기관 부전 없음(no gross organ failure) 클래스 I 조직형 HLA-A1, -A2 또는 -B35 펩티드 이번 연구에 포함되는 펩티드는 모두 1개 아미노산의 치환에 의해서 서바이빈 펩티드의 변형으로 얻어진 서바이 빈 펩티드 변이체였다. 따라서 더 좋은 앵커 잔기 및 주어진 펩티드의 MHC 분자에 대한 개선된 결합 친화도를 얻었다. 사용된 펩티드는 다음을 포함한다. HLA-A1 한정 에피토프 FTELTLGEF (SEQ ID NO: 16)(서바이빈 93-101 2T, 2번 위치에서의 원래의 글루타민이 트레 오닌으로 치환된 것). <477> HLA-A2 한정 에피토프, LMLGEFLKL (SEQ ID NO: 5)(서바이빈 96-104 2M, 2번 위치에서의 원래의 트레오닌이 메티 오닌으로 치환된 것) <478> HLA-B35 한정 에피토프 EPDLAQCFY (SEQ ID NO: 9)(서바이빈 51-59 9Y, 9번 위치에서의 루신이 티로신으로 치환된 것). - 40 -
<479> <480> <481> <482> <483> 제조사(셉픽, 브뤼셀, 벨기에)의 지시에 따라, HLA-A1, HLA-A2 또는 HLA-B35 한정 서바이빈 펩티드 100 μg을 Montanide ISA51 1 ml과 혼합하였다. 그 혼합물을 배출 림프절에 매우 근방에서 교호 말단(alternating extremities) 속으로 깊은 피하주사에 의하여 투여하였다. 처음 2번의 백신접종은 환자에게 7 일 간격으로 백신 접종하였고, 이어서 추가적인 백신접종은 28 일 간격으로 하였다. 독성, 임상효능 및 면역 반응을 평가하였다. 독성은 이학적 검사/병력, 혈액 검사 및 혈청 화학에 의해서 평가하였다. 이들 검사를 각각의 백신접종에 앞서 서 수행하였다. 임상효능은 치료 시작전과 그 이후 3 개월마다 이학적 검사 및 적절한 영상 연구 (예컨대, CT 스캔, NMR 스캔, 흉부 X선, 초음파 또는 뼈 섬광조영술(bone szintigraphy))로 평가하였다. 면역 반응은 서바이빈 96-104 특이적 IFN-γ 방출을 탐지하기 위하여 PBMC를 사용하여, ELISPOT 분석으로 모니터되 었다. ELISPOT 분석의 민감도를 증가시키기 위해서, 펩티드 10 μm의 존재하에 5% 열불활성화 인간 혈청 및 L- 글루타민 2 mm을 보충한 생체 외(X-vivo) 배지 (Bio Whittaker, Walkersville, 매릴랜드) 중에서 24-웰 플레이 트 (Nunc, 덴마크)에 ml당 1 10 6 개 세포의 농도로 시험관 내(in vitro)에서 PBMC를 한번 자극하였다. 2 일 후 에 40 IU/ml 재조합 인터루킨-2 (IL-2) (Chiron, 라팅겐, 독일)를 첨가하였다. 10일 후, 세포의 반응성을 시험 하였다. 축약하면, 니트로셀룰로오스 바닥 96 웰 플레이트 (MultiScreen MAIP N45, Millipore, Hedehusene, 덴 마크)를 항 IFN-γ 항체 (1-D1K, Mabtech, Nacka, 스웨덴)로 코팅하였다. 10 4 개의 자극자(stimulator) T2 세포 (10 μm 펩티드와 함께 또는 펩티드 없이) 및 상이한 농도의 작동세포(effector cell)를 첨가하기 전에, 웰을 생체 외(X-vivo) 매질로 세척하고, 봉쇄하였다. 이들 플레이트를 밤샘 항온배양시켰다. 다음날, 매질을 버리고, 바이오티닐화 2차 항체 (7-B6-1-바이오틴, Mabtech)의 첨가에 앞서 웰을 세척하였다. 플레이트를 2시간 동안 항 온배양하고, 세척한 후, 아비딘-효소 결합체(conjugate)를 각 웰에 첨가하였다. 플레이트를 RT에서 1 시간동안 항온배양(incubation)하고, 효소 기질 NBT/BCIP (Gibco, Life Technologies)을 각 웰에 첨가한 후, RT에서 5 10분 동안 항온배양하였다. 진한 자주색의 점이 나타날 때까지 수도물로 세척하여 반응을 종료시킨다. 이 점들 을 ImmunoSpot 시리즈 2.0 분석기 (CTL 분석기, LLC, 클리블랜드, 미국)를 사용하여 계수하였고, 펩티드 특이 적 CTL 빈도를 점 형성 세포의 수로부터 계산할 수 있었다. 모든 분석을 각 펩티드 항원에 대해서 3번씩 수행하 였다. <484> <485> 결과 환자의 약칭, 백신접종 횟수 및 임상 반응을 포함하는, 서바이빈 펩티드를 사용하여 얻어진 임상 결과의 개요가 표 3에 요약되어 있다. - 41 -
표 3 <486> <487> <488> <489> <490> <491> <492> 독성: 치료에서 유래된 부작용은 관찰되지 않았다. 주입 위치에서 전신 또는 국부 독성의 징후는 관찰되지 않았다. 혈 관염 또는 상처치유 부전 등의 혈관 변형의 징후에 대해 특별한 주의를 기울였다. 헤모글로빈, 백혈구 및 혈소 판뿐만 아니라 락트산 탈수소효소, 크레아티닌 및 콜린에스테라아제는 백신 치료에 의해서 영향을 받지 않았다 (데이터는 나타내지 않음). 따라서, 혈관 변형에 대한 임상적 및 조직학적 징후가 모두 탐지되지 않았다. 더욱 이, 상처치유 부전, 출혈장애, 심기능장애, 혈관염 또는 염증성 장질환의 징후도 없었다. 따라서, 서바이빈 백 신접종은 통상의 조혈( 造 血 ) 기능을 보유하는 암 환자에게 있어서 견딜만하고 동시에 안전하다. 임상 효능: 다소 좋지않은 예후를 가진 환자군에서 목적하는 임상 반응이 나타났다. 반응은 일부 환자들에게서 내장 전이의 완전한 종양의 퇴행을 포함하였지만, 대부분은 진행정지로 이루어졌다. 피부흑색종 (JuSc) 및 췌장의 선암종 (OtSc)을 가진 것으로 진단된 2명의 환자에서, 이 환자들이 이전의 화학요법 (각각 Temodal 또는 Gemzar )에 서 반응에 실패하였었다는 사실에 불구하고, 각각 완전한 종양의 퇴행이 발생하였다 (표 3)는 사실이 주목할 만 하다. 따라서, 임상 결과는 현저히 높은 반응율 및 임상 효능이 있는 매우 성공적인 완전한 치료임을 증명한다. 서바이빈 특이적 CD8+ T 세포 반응 환자들의 세포독성 T 세포 반응의 반응과정(kinetics)을 추적하였다. 백신접종의 전과 후에 얻은 PBMC를, IFNγ에 대한 ELISPOT으로, 변형 서바이빈 96-104 에피토프에 대한 반응성에 대해 테스트하였다. 모든 테스트된 환자 에게서, 서바이빈 반응성 T 세포가 명백하게 유도되었다. 두 명의 완전관해 환자 OtSc (췌장암 환자) 및 JuSc (흑색종 환자)에 대하여, 백신접종 전과, 백신접종의 개시 후 1개월, 3개월 및 6개월에 PBL을 분석하였다. 환자 OtSc에게서, 백신접종의 시도가 시작된 후 1 개월째에 이미 강한 반응이 나타났다. 이러한 반응은 3 개월 및 6 개월 후에는 더욱 강해졌다. 따라서, 10 4 개에 대하여 600개 이상의 서바이빈 특이적 세포를 탐지할 수 있었다 (도 1). 환자 JuSc에게는, 6 개월 후까지 반응이 탐지되지 않았지만, 6 개월의 시점에서 환자 OtSc에서 만큼 강 한 반응이 나타났다 (도 2). 본 발명자들은 또한, 흑색종 환자 SiSt로부터의 PBL을 백신접종 전과, 백신접종의 시도가 개시된 후 1개월 및 4개월에 분석하였다. 환자 SiSt에게, 백신접종 4 개월 후에 강한 반응 탐지되었다 (도 3). 마지막으로, 두 명의 매우 후기의 흑색종 환자 (AlKa 및 ErEi)로부터의 PBL을 분석하였는데, 이 환자들 은 그 질병으로 죽기 전에 단지 4번의 백신접종을 받을 수 있었다. 이들 환자 모두에게서, 서바이빈 펩티드에 대한 반응이 유도되었다 (데이터를 나타내지 않음). 이 데이터는 질병이 이미 많이 진행되어, 각종 치료를 많이 받은 환자에게서도, 매우 강한 서바이빈 특이적 T 세포 반응이 조사된 모든 환자의 순환 림프구의 풀 내에서 증 - 42 -
가하였음을 증명한다. 따라서, 백신접종된 환자로부터 얻은 PBL의 한 번의 시험관 내 자극 후에, 10 4 개 세포에 대하여 250개 이상의 INF-γ 방출 세포 및 특별한 예의 경우에는 10 4 개 세포에 대하여 600개 이상의 INF-γ 방 출 세포가 탐지되었다. <493> <494> <495> 실시예 2 면역조직화학 염색 바이오티닐화 펩티드/HLA 복합체를 스트렙타비딘-FITC-결합된 덱스트란 분자 (DAKO, Glostrup, 덴마크)와 함께 다합체화시켜서 면역조직화학용 다가 HLA-덱스트란 화합물을 생성한다. 조직 절편을 밤샘 건조한 후, 이어서 차 가운 아세톤에서 5분 동안 고정한다. 실온의 암실에서 다음의 모든 항온배양 단계를 수행한다. (a) 1차 항체 (1:100 희석)를 45분 동안, (b) Cy 3-결합 염소 항마우스 (1:500 희석; 코드 115-165-100; Jackson ImmunoResearch, Dianova로부터 구득, 함부르크, 독일)를 45분 동안 및 (c) 마지막으로, 상기 다합체를 75분 동안 항온배양. 각 단계들 사이에서, 슬라이드를 PBS/BSA 0.1%로 10분 동안 2번 세척한다. 슬라이드를 벡타실드 (vectashield)에 올리고, 동일초점 현미경 (Leica) 하에서 조사할 때까지 냉장고에 넣어 둔다. <456> <457> <458> <459> <460> <461> 도면의 간단한 설명 도 1. 췌장암 환자의 PBL에서 IFN-γ ELISPOT에 의하여 평가된 서바이빈 펩티드 Sur1M2에 대한 면역의 반응속도 론적 분석. 첫 번째 sur1m2/montanide 백신접종 전과, 1, 3 및 6 개월 후에 환자 OTSC로부터 PBMC를 얻었다. T 림프구를 펩티드로 한번 자극시킨 다음, 펩티드 있이 또는 없이 웰당 10 5 세포 농도로 세 번씩 평판배양 하였다. 펩티드 특이점의 평균적인 개수 (첨가된 펩티드가 없는 점을 뺀 후)를 ImmunoSpot 시리즈 2.0 분석기 (CTL 분석기, LLC, 클리블랜드, 미국)를 사용하여 각 환자에 대해서 계산하였다. 도 2. 흑색종 환자의 PBL에서 IFN-γ ELISPOT에 의하여 평가된 서바이빈 펩티드 Sur1M2에 대한 면역의 반응속도 론적 분석. 첫 번째 sur1m2/montanide 백신접종 전과, 1, 3 및 6 개월 후에 환자 JUSC로부터 PBMC를 얻었다. T 림프구를 펩티드로 한번 자극시킨 다음, 펩티드 있이 또는 없이 웰당 10 5 세포 농도로 세 번씩 평판배양 하였다. 펩티드 특이점의 평균적인 개수 (첨가된 펩티드가 없는 점을 뺀 후)를 ImmunoSpot 시리즈 2.0 분석기 (CTL 분석기, LLC, 클리블랜드, 미국)를 사용하여 각 환자에 대해서 계산하였다. 도 3. 흑색종 환자의 PBL에서 IFN-γ ELISPOT에 의하여 평가된 서바이빈 펩티드 Sur1M2에 대한 면역의 반응속도 론적 분석. 첫 번째 sur1m2/montanide 백신접종 전과, 1 및 4 개월 후에 환자 SIST로부터 PBMC를 얻었다. T 림프구를 펩티 드로 한번 자극시킨 다음, 펩티드 있이 또는 없이 웰당 10 5 세포 농도로 세 번씩 평판배양 하였다. 펩티드 특이 점의 평균적인 개수 (첨가된 펩티드가 없는 점을 뺀 후)를 ImmunoSpot 시리즈 2.0 분석기 (CTL 분석기, LLC, 클리블랜드, 미국)를 사용하여 각 환자에 대해서 계산하였다. - 43 -
도면 도면1-44 -
도면2-45 -
도면3 서열목록 <110> Survac ApS <120> Survivin peptide vaccine <130> KP-CH-077570 <150> DK PA 2005 00173 <151> 2005-02-04 <150> US 60/650,751 <151> 2005-02-07 <160> 118 <170> PatentIn version 3.3 <210> 1-46 -
<220> <221> misc_feature <222> (1)..(9) <223> survivin101-109 <400> 1 Phe Leu Lys Leu Asp Arg Glu Arg Ala <210> 2 <211> 10 <220> <221> misc_feature <222> (1)..(10) <223> Survivin5-14 <400> 2 Thr Leu Pro Pro Ala Trp Gln Pro Phe Leu 10 <210> 3 <211> 10 <213> synthetic <220> <221> misc_feature - 47 -
<222> (1)..(10) <223> survivin95-104 <400> 3 Glu Leu Thr Leu Gly Glu Phe Leu Lys Leu 10 <210> 4 <220> <221> misc_feature <222> (1)..(9) <223> survivin96-104l2 <400> 4 Leu Leu Leu Gly Glu Phe Leu Lys Leu <210> 5 <220> <221> misc_feature <222> (1)..(9) <223> survivin96-104m2 <400> 5 Leu Met Leu Gly Glu Phe Leu Lys Leu - 48 -
<210> 6 <220> <221> misc_feature <222> (1)..(9) <223> survivin46-54 <400> 6 Cys Pro Thr Glu Asn Glu Pro Asp Leu <210> 7 <220> <221> misc_feature <222> (1)..(9) <223> SURVIVIN51-59 <400> 7 Glu Pro Asp Leu Ala Gln Cys Phe Phe <210> 8-49 -
<220> <221> misc_feature <222> (1)..(9) <223> SURVIVIN46-54Y9 <400> 8 Cys Pro Thr Glu Asn Glu Pro Asp Tyr <210> 9 <213> Synthetic peptide <220> <221> misc_feature <222> (1)..(9) <223> SURVIVIN51-59Y9 <400> 9 Glu Pro Asp Leu Ala Gln Cys Phe Tyr <210> 10 <220> <221> misc_feature <222> (1)..(9) <223> SURVIVIN6-14 - 50 -
<400> 10 Leu Pro Pro Ala Trp Gln Pro Phe Leu <210> 11 <220> <221> misc_feature <222> (1)..(9) <223> SURVIVIN11-19 <400> 11 Gln Pro Phe Leu Lys Asp His Arg Ile <210> 12 <211> 10 <220> <221> misc_feature <222> (1)..(10) <223> SURVIVIN34-43 <400> 12 Thr Pro Glu Arg Met Ala Glu Ala Gly Phe 10-51 -
<210> 13 <220> <221> misc_feature <222> (1)..(9) <223> SURVIVIN6-14A1 <400> 13 Ala Pro Pro Ala Trp Gln Pro Phe Leu <210> 14 <220> <221> misc_feature <222> (1)..(9) <223> SURVIVIN6-14R1 <400> 14 Arg Pro Pro Ala Trp Gln Pro Phe Leu <210> 15 <211> 10 <220> - 52 -
<221> misc_feature <222> (1)..(10) <223> SURVIVIN92-101 <400> 15 Gln Phe Glu Glu Leu Thr Leu Gly Glu Phe 10 <210> 16 <213> Synthetic peptide <220> <221> misc_feature <222> (1)..(9) <223> SURVIVIN93-101T2 <400> 16 Phe Thr Glu Leu Thr Leu Gly Glu Phe <210> 17 <213> Synthetic peptide <220> <221> misc_feature <222> (1)..(9) <223> SURVIVIN38-46Y9 <400> 17 Met Ala Glu Ala Gly Phe Ile His Tyr - 53 -
<210> 18 <211> 10 <213> Synthetic peptide <220> <221> misc_feature <222> (1)..(10) <223> SURVIVIN47-56Y10 <400> 18 Pro Thr Glu Asn Glu Pro Asp Leu Ala Tyr 10 <210> 19 <211> 10 <220> <221> misc_feature <222> (1)..(10) <223> SURVIVIN53-62 <400> 19 Asp Leu Ala Gln Cys Phe Phe Cys Phe Lys 10 <210> 20 <211> 10-54 -
<213> Synthetic peptide <220> <221> misc_feature <222> (1)..(10) <223> Survivin18-27K10 <400> 20 Arg Ile Ser Thr Phe Lys Asn Trp Pro Lys 10 <210> 21 <211> 11 <220> <221> misc_feature <222> (1)..(11) <223> SURVIVIN18-28 <400> 21 Arg Ile Ser Thr Phe Lys Asn Trp Pro Phe Leu 10 <210> 22 <211> 429 <212> DNA <213> homo sapiens <220> <221> CDS <222> (1)..(426) <400> 22-55 -
atg ggt gcc ccg acg ttg ccc cct gcc tgg cag ccc ttt ctc aag gac 48 Met Gly Ala Pro Thr Leu Pro Pro Ala Trp Gln Pro Phe Leu Lys Asp 10 15 cac cgc atc tct aca ttc aag aac tgg ccc ttc ttg gag ggc tgc gcc 96 His Arg Ile Ser Thr Phe Lys Asn Trp Pro Phe Leu Glu Gly Cys Ala 20 25 30 tgc acc ccg gag cgg atg gcc gag gct ggc ttc atc cac tgc ccc act 144 Cys Thr Pro Glu Arg Met Ala Glu Ala Gly Phe Ile His Cys Pro Thr 35 40 45 gag aac gag cca gac ttg gcc cag tgt ttc ttc tgc ttc aag gag ctg 192 Glu Asn Glu Pro Asp Leu Ala Gln Cys Phe Phe Cys Phe Lys Glu Leu 50 55 60 gaa ggc tgg gag cca gat gac gac ccc ata gag gaa cat aaa aag cat 240 Glu Gly Trp Glu Pro Asp Asp Asp Pro Ile Glu Glu His Lys Lys His 65 70 75 80 tcg tcc ggt tgc gct ttc ctt tct gtc aag aag cag ttt gaa gaa tta 288 Ser Ser Gly Cys Ala Phe Leu Ser Val Lys Lys Gln Phe Glu Glu Leu 85 90 95 acc ctt ggt gaa ttt ttg aaa ctg gac aga gaa aga gcc aag aac aaa 336 Thr Leu Gly Glu Phe Leu Lys Leu Asp Arg Glu Arg Ala Lys Asn Lys 100 105 110 att gca aag gaa acc aac aat aag aag aaa gaa ttt gag gaa act gcg 384 Ile Ala Lys Glu Thr Asn Asn Lys Lys Lys Glu Phe Glu Glu Thr Ala 115 120 125 aag aaa gtg cgc cgt gcc atc gag cag ctg gct gcc atg gat tga 429 Lys Lys Val Arg Arg Ala Ile Glu Gln Leu Ala Ala Met Asp 130 135 140 <210> 23 <211> 142 <213> homo sapiens <400> 23-56 -
Met Gly Ala Pro Thr Leu Pro Pro Ala Trp Gln Pro Phe Leu Lys Asp 10 15 His Arg Ile Ser Thr Phe Lys Asn Trp Pro Phe Leu Glu Gly Cys Ala 20 25 30 Cys Thr Pro Glu Arg Met Ala Glu Ala Gly Phe Ile His Cys Pro Thr 35 40 45 Glu Asn Glu Pro Asp Leu Ala Gln Cys Phe Phe Cys Phe Lys Glu Leu 50 55 60 Glu Gly Trp Glu Pro Asp Asp Asp Pro Ile Glu Glu His Lys Lys His 65 70 75 80 Ser Ser Gly Cys Ala Phe Leu Ser Val Lys Lys Gln Phe Glu Glu Leu 85 90 95 Thr Leu Gly Glu Phe Leu Lys Leu Asp Arg Glu Arg Ala Lys Asn Lys 100 105 110 Ile Ala Lys Glu Thr Asn Asn Lys Lys Lys Glu Phe Glu Glu Thr Ala 115 120 125 Lys Lys Val Arg Arg Ala Ile Glu Gln Leu Ala Ala Met Asp 130 135 140 <210> 24 <211> 10 <213> Homo sapiens <400> 24 Arg Leu Gln Glu Glu Arg Thr Cys Lys Val 10 <210> 25 <211> 10-57 -
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<211> 10 <213> Homo sapiens <400> 29 Pro Leu Thr Ala Glu Val Pro Pro Glu Leu 10 <210> 30 <213> Homo sapiens <400> 30 Ser Leu Gly Ser Pro Val Leu Gly Leu <210> 31 <213> Homo sapiens <400> 31 Gln Ile Leu Gly Gln Leu Arg Pro Leu <210> 32 <213> Homo sapiens <400> 32 Leu Thr Ala Glu Val Pro Pro Glu Leu - 59 -
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Ala Ala Ala Gly Pro Ala Leu Ser Pro Val 10 <210> 41 <220> <221> misc_feature <222> (1)..(9) <223> Sur20-28 <400> 41 Ser Thr Phe Lys Asn Trp Pro Phe Leu <210> 42 <211> 10 <220> <221> misc_feature <222> (1)..(10) <223> Sur115Y10 <400> 42 Lys Glu Thr Asn Asn Lys Lys Lys Glu Tyr 10 <210> 43-62 -
<220> <221> misc_feature <222> (1)..(9) <223> Sur36-44 <400> 43 Glu Arg Met Ala Glu Ala Gly Phe Ile <210> 44 <220> <221> misc_feature <222> (1)..(9) <223> Sur133-141 <400> 44 Arg Ala Ile Glu Gln Leu Ala Ala Met <210> 45 <211> 10 <400> 45 Asp Val Ala Gln Cys Phe Phe Cys Phe Lys 10-63 -
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