KISEP Head and Neck Korean J Otolaryngol 1998;417:901-905 두경부편평세포암에서 p16, Cyclin D1 단백의발현양상 김상현 박숙아 오영석 Expression of p16 Protein and Cyclin D1 Protein in Head and Neck Squamous Cell Carcinomas Sang Hyun Kim, MD, Suk Ah Park, MD and Young Suk Oh, MD Department of Otolaryngology, National Medical Center, Seoul, Korea ABSTRACT Background and ObjectivesThe p16, cyclin D1, their partners Cdk4/Cdk6, and prb constitute a G1 regulatory pathway commomly targeted in tumorigenesis. Genetical, immunochemical, and functional analyses show abnormalities of this pathway in various tumors including head and neck squmaous cell carcinoma. To investigate the clinicopathologic meanings of p16 protein and the relationship between p16 and cyclin D1 in head and neck squmous cell carcinoma. Materal and Method Formalin-fixed paraffin-embeded tumor materials that were obtained from 37 patient with head and neck squmaous cell carcinoma were analyzed by immunohistochemical staining method using antiserum that were directed against p16 and cyclin D1. Results1 Deletion of p16 was found in 67.6 25/37 of the patients with head and neck squamous cell carcinoma. The deletion was not associated with the clinicopathologic parameters eg. T and N stages, cell differentiation. 2 Deletion of p16 protein and overexpression of cyclin D1 were identified in 76 28/37 of the patients with head and neck squmaous cell carcinoma. But deletion of p16 was not affected by the overexpression of cyclin D1 in head and neck squmaous cell carcinoma. ConclusionDeletion of p16 and overexpression of cyclin D1 were identified in head and neck squmaous cell carcinoma. These may abrogate the G1 regulatory pathway. These data suggested that combination of these abnormalities may be important in head and neck turmorigenesis. Korean J Otolaryngol 1998;417:901-905 KEY WORDSp16 Cyclin D1 Head and neck squmaous cell carcinoma. 901
두경부 편평세포암에서 p16, Cyclin D1 단백의 발현양상 부 편평세포암에서 p16단백의 표현양상과 임상병기 및 조 4-326(BioGenex, USA), p16은 쥐 단클론 항체인 G17 직분화도에 따른 표현양상의 차이를 알아보고 cyclin D1 5-405(PharMingen, USA)를 사용하였으며 염색은 DAKO 단백표현과의 관계를 알아봄으로써 두경부 편평세포암에서 LSAB Kit와 발색제로 3,3-diaminobenzidine tetrahy- p16 단백과 cyclin D1 단백의 역할을 알아보고자 하였다. drochloride(dab)를 사용하였다. 재료 및 방법 면역조직화학적 염색 파라핀 포매조직 슬라이드를 xylene으로 탈파라핀화시 재료 키고 100%, 90%, 80%, 70% 알콜로 함수과정을 거친 후 연구에 이용된 조직은 1986년 1월부터 1994년 10월까 전자레인지로 15분간 처리 후 메탄올 과산화수소액으로 내 지 국립의료원 이비인후과에서 두경부 편평세포암으로 진 인성 과산화효소를 억제시켰다. Cyclin D1은 1 30으로 단받은 37례의 파라핀 포매조직을 이용하였다. 희석하여 30분간, p16은 1 100으로 희석하여 실온에서 발생부위별로 후두암이 23례, 하인두암이 6례, 설암이 2시간 반응 시킨후 biotinylated anti-rabbit, anti-mouse 8례였으며 성별은 남자 32명, 여자 5명, 평균연령은 58세 immunoglobulin을 각각 10분, 30분간 반응시킨후 세척하 였다. 고 streptavidin과 반응시킨후 발색제인 DAB로 반응시켜 세척후, Meyer-Hematoxylin으로 대조염색후 봉입하였다. 방법 면역조직화학적 판정 및 통계분석 시약 실험에 이용한 cyclin D1 항체는 쥐 단클론 항체인 G12 면역조직화학적 방법으로 염색한 조직표본의 현미경적 관 찰은 조직편의 중심부에서 관찰하여 암세포의 핵의 황갈색 Fig. 1. Strong nuclear (arrow) and less intense cytoplsmic staining was seen in the normal cell (A) and in the cancer cell (B) (positive p16 immunohisto chemical staining A, 200 tongue B, 400 larynx). 902 Korean J Otolaryngol 1998;41(7):901-905
김상현 외 의 과립이 p16의 경우 배경보다 강한 경우를 양성으로(Fig. cyclin D1 단백의 과발현과 동시에 p16 단백의 소실을 보 1),2) cyclin D1의 경우 암세포의 10%이상에서 관찰되는 인 례는 9례로 24.4%에서 관찰되었다(Table 2). 6) 경우를 양성으로 판정하였다(Fig. 2). 대상환자의 임상적 병기 및 Hematoxylin-Eosin 염색조 직표본의 분화도의 분류는 미국 암학회 분류(Classificat- T 병기, 림프절 전이, 병리학적 분화도와 p16단백 음성 표현과의 관계 ion of American Joint Commitee on Cancer, 1988)을 사 T 병기에 따른 종양 증례수와 p16 단백의 음성률은 제 용하였으며 통계처리는 개인용 컴퓨터의 SAS program(fi- 1기는 4례중 50%, 제2기는 10례중 70%, 제3기는 13례 sher s extract test, Chi-Square test)을 이용하였다. 중 69.3%, 제4기는 10례중 70%로 병기의 증가와 p16단 백의 음성률 사이에서 통계학적 의의는 찾을 수 없었다. 결 과 림프절 전이가 있었던 21례중 p16 단백의 음성률은 61. 9%, 림프절전이가 없었던 16례중 p16 단백의 음성률은 7 p16 단백과 cyclin D1단백의 표현률 총 37례중 p16 음성반응은 67.6%, cyclin D1 양성반응은 Table 1. Expression of p16 and cyclin D1 in head and neck squamous cell carcinoma according to subsites p16 (-)(%) 32.4%로 각 부위에 따른 통계학적 차이는 없었다(Table 1). Hypopharynx p16 단백 표현률에 대한 cyclin D1 단백의 표현률 Cyclin D1 단백의 과발현을 보이거나 p16 단백의 소실 을 보인 례는 총 37례중 28례로 76%에서 관찰되었으며, 4/ 6 (66.6) Cyclin D1 (+)(%) 2/ 6 (33.3) Larynx 16/23 (69.6) 8/23 (34.8) Tongue 5/ 8 (62.5) 2/ 8 (25.0) Total (P>0.05) 25/37 (67.6) 12/37 (32.4) Fig. 2. Strong nuclear staining (arrow) in the most cancer cell (positive cyclin D1 immunohisto chemical staining A, 200 tongue B, 400 hypopharynx). 903
Table 2. Expression of cyclin D1 protein according to expression of p16 protein 904 CyclinD1 CyclinD1 Total p16 9 75 16 64 25 p16 3 25 9 36 12 Total 12 25 37 P0.05 Table 3. Relationship between p16 expression and T stage, lymph node metastasis, and histologic features in HNSCC T-stage p16 p16 p value T1 2 2 T2 7 3 T3 9 4 T4 7 3 N-stage N0 12 4 N13 13 8 Histologic differentiation Well 11 7 Moderate 11 4 Poor 3 1 P0.05 P0.05 P0.05 Table 4. Expression of p16 protein and cyclin D1 protein according to clinical stage in head and neck squamous cell carcinoma Clinical stage p16 p16 or p16 cyclind1 % cyclind1 % cyclind1 % 0 0.00 1 2.70 0 0.00 0 0.00 2 6.20 1 1.82 111.11 1232.45 3 5.45 888.89 2259.45 5 9.09 Total 9 37 916.36 P0.05 Korean J Otolaryngol 1998;417:901-905
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