하나로지적되고있지만아직까지그기전은 거하고함수한다음에 1 % aqueous uranyl niσate 분명하지않다. 그러나최근에는 H pylo매가만 에 3분간방치하고수세한후 절편을 10% 성소화기질환의원인중하나로규명되어졌으 silver nitrate 에 넣고 microwa

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병준 임
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1 임앙병리검마과악외 711 : 깨 132 뀐머 13 보, , Genta 염색을이용한위점막장형화생부위의 Helicobacter pylori~ 검출 충북대학교병원병리과 임상병라과대전보건대학임상병리과 ** 김천대학임상병리과 *** 이광주 황석연이명환 ** 김성인 *** Detection of Helicobacter pylori to Areas of Gastric Intestinal Metaplasia by the Genta stain Lee, Kwang Ju., Hwang, Seock Yeon*., Lee, Myung Hwan**., Kim., SlUlg, In*** De[X1rtment cf Pathology and CI띠iml Pathology ~ α따ngb띠 {Nαt'l 다1iv. Hospital, α1eon밍 U, Korea De[X1rtment cf αiniml Pathology, Taζ;on Health Sciences College, Taξ;on, Korea ** De[X1rtment cf αiniml Pathology, Kimcheon Health Sciences College, Kimcheon, Korea*** Infection with Helicobacter pylori is the most important cause of chronic active gastritis. One mean of evolution of chronic active gastritis is the development of atrophic gastritis, a condition almost universally associated with extensive intestinal metaplasia. The study was conducted on 69 gastric biopsy specimens with intestinal metaplasia. S1ide from each specimens were stained using the Genta stain to identify the detection of bacteria and types of intestinal metaplasia. In 56 (81 %) of 96 patients, incompletε intestinal metaplasia was found. In 9 (16%) of 56 patients with incomplete intestinal metaplasia.but in all of the intestinal metaplasia H. pylori was not detection in the area of intestinal metaplasia. The common subtype of intestinal metaplasia was incomplete metaplasia. Although in small case, H. pylori was detection only to the area of the incomplete type of intestinal metaplasia. Key Words: Incomplete intestinal metaplasia, Helicobacter pylori, Genta stain 1. 서를 - Helicobacter pylori (H pylo 띠는 1983 년뼈 rshall 된이후만성위염및소화성궤양, 위암등과 H. pylori 와의관련성을규명하기위한연구가 지금도계속진행중이며, 현재로서는 H. pylori 등 (Marshall et al., 1983) 에의하여분리동정가소화기질환과의연관성에대하여원인중의 287

2 하나로지적되고있지만아직까지그기전은 거하고함수한다음에 1 % aqueous uranyl niσate 분명하지않다. 그러나최근에는 H pylo매가만 에 3분간방치하고수세한후 절편을 10% 성소화기질환의원인중하나로규명되어졌으 silver nitrate 에 넣고 microwave oven에서 끓기 며, 이러한기전은만성활동성위축성위염이 전까지열을가한다음증류수로세번수세하 장형화생으로발전하게되고이들불완전한장 였다. 이후절편을 95% 와 100% 의 알코올에서 형화생이위의이형성을거쳐위암으로발전하 탈수한후 2.5% 맹m mastic 에 5분간방치한다 는것으로알려져있다 (Correa, 1988). 한편 H 음공기중에서 1 분간말린후에다시증류수로 pylori는장형화생부위에서 잘관찰되지 않는 두번수세처리 한후 reducing solution (10 ml 다는보고가있었으나 (Craanen et al" 1994), of 2.5% gum mastic, 25 ml of 2% hydroquinone, 그러나최근한국사람에있어서 Genta 염색에 5 ml of absolute alcoh이, 2.5 ml of 0.04% silver 의하여 불완전장형화생지역에서 많은수의 nitrate) 에담구어 45 0 C 수조에서 10분에서 15 분 H. pylori를관찰하였다는보고 (Genta et al., 간방치하였다. 이때 H. pylori가검거나암갈 1996, Huang et al., 1998) 와함께혈청학적양 색이고 주변이 노란색으로 변할 때 절편을 상과위암과의밀접한관계가있다는주장이 reducing solution에서 꺼내어 물로닦은다음 보고되고있다 (Correa, 1992). 이에 저자등은 절편을 alcian blue ph 2.5 에서 10분간염색한 내시경을통하여장형화생이의심되는환자에 후흐르는수돗물로닦고 Harris hematoxylin 에 게서 Genta 염색을통하여 H pylori의감염이 5분간염색한다음에다시흐르는물에수세를위염과위궤양그리고위암으로전이되는기전한다음암모니아수 2.5% 에서청색이나타날에대한예비연구로완전장형화생부위와불때까지닦은후다시흐르는수돗물로닦는다. 완전장형화생부위에서 H pylori 의검출빈도를마지막으로절편을 eosin에 5분간염색하고다 알아보고자하였다. 시수돗물로닦은뒤에 95%, 100% 알코올에 차례로담구어탈수한다음에자 rlene 으로세번 II. 재료및발법 닦은후에봉입하여겸경하였다. 1. 대상 1998 년 2월부터 1998년 10월까지 충북대학 교병원에내원환자들중내시경검사시육안적 으로장형화생이의심되는 82 명의환자중에서 조직검사상장형화생으로진단된 69명의환자 를대상으로하였다. 2. 실험방법 1) Genta 염색및조직표본제작 위 내시경생검조직을 10% 완충포르말린 용액에서고정한뒤에파라핀포매한조직을 4 따l 두께로박절한다음절편에서파라핀을제 2) 조직병리학적방법 Genta 염색을시행한후조직학적으로장형화생을 2가지로즉완전장형화생과불완전장형화생으로분류하였다. 완전장형화생은상피가쇄자연 (brush border) 을뚜렷하게형성하는흡수세포로이루어져있고흡수세포사이에배상세포와와 (fovea) 의기저부에서 Paneth 세포가보이는것을완전장형세포라고하고, 불완전장형화생의상피세포는세포질에 mucin을갖고있으며, 이러한상피세포사이로배세포가존재하며, 흡수세포와 Paneth 세포는없거나가끔씩나타나기도한다고보고하였다 (Dixon et al., 1996). 288

m. 결 과 pylori가위암의직접적인원인이라고발표하였지만반대로 H. pylo디가위암의직접적인원인 조직학적으로장형화생이확인된환자는 69 이 아니라는의견또한꾸준히제시되고있다 명이었으며, 이들의 성별분포는남자가 56 명 (Crespi and Citarda, 1996). 위축성위염이나장 여자가 13 명이었다.

pylori 의 검출의빈도는 람에게서는질병이발생하지않으나일부에서 불완전장형화생이 16% (9/56) 이었고 (Fig. 1. 는십이지장궤양, 위궤양또는위암에 이완되 A) 완전장형화생에서는 H. pylori를검출할수 는현상을설명하기위하여 H. pylori의 병독성 가없었다 (Fig. 1. B). 에 의한차이일것이라는의견도제시되고있 N.

위암의발생에는여러막에머물러있으면서 Interleukin-8, Interleukin-1 단계에서 H.

3 m. 결 과 pylori가위암의직접적인원인이라고발표하였지만반대로 H. pylo디가위암의직접적인원인 조직학적으로장형화생이확인된환자는 69 이 아니라는의견또한꾸준히제시되고있다 명이었으며, 이들의 성별분포는남자가 56 명 (Crespi and Citarda, 1996). 위축성위염이나장 여자가 13 명이었다. 69 명의대상환자중불완 형화생 (intestinal metaplasia) 은흔히위암의전 전장형화생이 56명이고완전장형화생은 13 명 구병변으로알려지고있으나 (Correa, 1988), 이었다. Genta 염색시 69명의대상환자중장 반대로 H. pylori에 감염되더라도대부분의사 형화생부위내에서 H. pylori 의 검출의빈도는 람에게서는질병이발생하지않으나일부에서 불완전장형화생이 16% (9/56) 이었고 (Fig. 1. 는십이지장궤양, 위궤양또는위암에 이완되 A) 완전장형화생에서는 H. pylori를검출할수 는현상을설명하기위하여 H. pylori의 병독성 가없었다 (Fig. 1. B). 에 의한차이일것이라는의견도제시되고있 N. 고화으나아직까지일치하는결과는없다고보고하를였다 (Webb et al., 196θ. H pylori는전정부또는전정부와체부를침범하는만성활동성위 위암은전세계적으로호발하는악성종양염의 95%, 휴식기위염의 65% 에서 H pylori가중의하나이며, 최근들어위암의발현율과진관찰되며, H pylori는비침습성세균으로위점단율이증가하고있다. 위암의발생에는여러막에머물러있으면서 Interleukin-8, Interleukin-1 단계에서 H. pylori, 고염식, 담즙의역류, N 등을분비하고다형핵백혈구와단핵구의수명 Nitroso compound 같은여러원인이작용할것을연장시키며, 이들세포들의다른전염증성으로생각되며, 대부분의위암환자에서암형효현제 (proinflammatory agonist) 에대한반응을성의단계로만성위염을거쳐위의위축, 장증강시켜염증반응이증폭되어위염을유발하형화생, 위의이형성을거쳐위암으로발생한는것으로알려져있다 (Marshall et al., 1983). 다고알려져있다 (Corea, 1992). IARC (International Agency for Research on Cancer) 에서는 H. 켜위점막의상피세포의돌연변이의또한염증성위점막의상피세포재생을촉진시원인이 Fig. 1. (A) πle Genta stain cannot reveal any other H. pylori bacilli on the intestinal metaplastic epithelium. (B) Genta stain reveals many silver stained H pylori on the intestinal metaplastic epithelium veη well. 289

4 되며, 또한위암에서흔히발견되는 p53 돌연확인하였다는점과 H. pylori 가위점막에떠다 변이유전자를만드는것으로알려진 nitric 니는것뿐만아니라와 (fovea) 의갚숙한곳과 oxide 에영향을주어위암형성에한역할을배상세포내부및점액질내에서도관찰되었으 하는것으로생각되어져있다 (Cr 뻐 len et al., 며, 특히불완전한장형화생에서만 H. pylori 를 1998). H. pylori 는장형화생주위의염증병변관찰하였다는것이며, 불완전장형화생은쇄자 에서는많은수가관찰되나장형화생부위나 암발생의부위에서는거의발견되지않았다. 이러한이유로장형화생부위에서는 H. pylori 연이없으며, 다양한종류의 sulfomucin 생성세 포를포함하고있어 H. pylori 가살기에적합한 환경을만들고있는반면, 완전장형화생은성 가살기에부적합한환경을만들며, 또한위숙한배상세포와잘구분된쇄자연을특정으로 점액질의흐름에의해서씻겨서나간다는보고 하며, sialomucin 을분비하므로 H. pylori 가부착 가있었다 (Genta, 1995). 이러한 H. pylori 의검하지못하도록한다고생각되며, 이러한여러 출을확인하기위한방법으로 Hematoxylin & 가지사실을통하여볼때불완전장형화생은 Eosine (H&E) 염색과 Gimsa 염색,Gram 염색위암으로의전이에있어서 H. pylori 가기존의 방법이있는데 H&E 염색은 H. pylori 가잘염 색되지않으며, 배상세포가빈공간의원형으 여러보고와마찬가지로일정부분의역할을할 것으로생각되며. 향후연구에서는 H. pylori 와 로염색되어 H. pylori 와배상세포등위점막장형화생과의관계를규명하기위하여 H. pylori 과의관계를알수가없고 Gimsa 염색과 Gram 의검출이확인된좀더많은환자를대상으로 염색은 H. pylori 가염색은되지만위점막의주기적인생검과이들환자에게서불완전장형 형태와배상세포의구조가대조염색에서보이 화생으로발전하는지의여부를추적, 관찰하는 지않는단점을가지고있어, 장형화생지역에것이필요하다고하겠다. 서 H. pylori 를관찰하기어렵고 (Genta and Graham, 1994), 그외에면역조직화학염색법이 있으나이는 H. pylori 를발견하는데는좋은방 법으로알려져있으나비용이고가여서보편적 으로사용하기는어렵다는단점을가지고있다 (Morin et al., 1991). 최근 Genta 등은이러한단점을보완하기위 하여정상점막, 장형화생점막그리고 H. pylori V 켜 를흩 로 장형화생부위에서 H. pylori 의 검출율을확 인하기위하여본연구를시행하게되었으며, 조직학적으로장형화생이확인된 69 명을대상 으로각환자의조직슬라이드에 Genta 염색을 시행하여불완전또는완전장형화생으로분류 를동시에관찰할수있는 3 중염색법을개발하였으며, 각각의 H. pylori 의검출빈도를확 하였으며, 특히 Genta 염색에서는 ph 2.5 의인하였다. 69 명의대상환자중장형화생부위 alcian blue 염색에의해배상세포가하늘색으내에서불완전장형화생이 16% ( 아 56) 이었고 로염색되어 H. pylori 와위점막세포들의형태완전장형화생에서는 H. pylori 를검출할수가 를동시에관찰할수있다고보고하였다 (Genta 없었다. 환자의예는적었지만불완전장형화 et al., 1996). 본연구에서도 Genta 염색을시행생에서 H. pylori 의검출이되었음을확인할 하여 H. pylori 와위점막세포, 특히장형화생스이어다! λλλλ-1 세포와의연관관계를볼수있었다. 본연구 에서는이제까지보고된연구와는다르게 (Genta et al., 1994) 불완전장형화생에서 H. pylori 를 290

5 칩고문흰 1. Correa P. αrronic gastritis; A c1inico뼈 thologica1 c1assification. Am J Gastroenterol 83: , Correa P. Hwnan gastric carcinogenesis. Cancer Res 52: , Craanen ME, Blok P, Dekker W, Ferwerda J, Tytgat GN. Subtypes of intestinal metaplasia and H. pylori. Gut 33: , Craanen ME, Blok P, Dekker W, Tytgat GN. Helicobacter pylori and gastric cancer. Gut 35: , Crespi M, Citarda F. Helicobacter pylori and gasσic cancer: an overrated risk? Scand J Gαstroenterol 31: , Dixon MF, Genta RM, Yardley JH, Abad MM. Classification and granding of gastritis. The update Sydney system. Am J Surg Pathol 20: , Genta RM, Graham DY. con뼈rision of bi야 )sy sites for the histopathologic diagonosis Helicobacter pylori: A t야 )()graphic study of H. pylori density and distribution. Gastrointest Endosc 40: , Genta RM. Helicobacter pylori as a promoter of intestinal metaplasia and gastric cancer: an alluring hypothesis in search of evidence. Eur J Gastroenterol Hepatol 7:25-31, Genta RM, Gurer IE, Graham DY, Krishan B, Segura AM, Gutierrez 0, Jong GK, Burchette JL. Adherence of Helicobacter pylori to area of incomplete intestinal metaplasia in the gasσic mucosa. G 없 roenterolo 없 111:12 빠 1211, 뻐뻐19 IQ, Sridhar S, ch얹 1 Y, 뻐mt RH 뾰 :taana1ysis of the relation양np between He/icobacter pylori seropositive and gasσic cancer. Gastroenterology 114: , Marshall BJ, Warren JR. Unidentified curved bacilli on gastric epithelium in activechronic gastritis. Lancet 1: , Morin SG, Van Kruiningen HJ, Berman MM. Immunocytochemical identification of He /icobacter pylori in formalin-fixed gastric biopsies. Mod Pathol 4: , Webb PM, Yu MC, Forman D, Henderson BE, Newell DG, Yuan 1M, Gao YT, Ross RK. An apparent lack of association between Helicobacter pylori infection and risk of gastric cancer in china. lnt J Cancer 67: ,

Jkbcs016(92-97).hwp

Jkbcs016(92-97).hwp Expression of bcl-2 and Apoptosis and Its Relationship to Clinicopathological Prognostic Factors in Breast Cancer - A Study with Long Term Follow-up correlated with the survival rate.(journal of Korean